專利名稱：L－丙氨酰－l－谷氨酰胺二肽的新用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及L-丙氨酰-L-谷氨酰胺二肽的新用途。
背景技術(shù)：
消化性潰瘍主要包括胃潰瘍及十二指腸潰瘍，是一種常見(jiàn)的消化系統(tǒng)慢性病。據(jù)統(tǒng)計(jì)，全世界約有10～20％左右的人群曾患過(guò)該病。雖然目前已有大量的抗消化性潰瘍藥物上市，但上述藥物往往存在療效較差或副作用較大等問(wèn)題。因此，開(kāi)發(fā)新作用類(lèi)型的抗消化性潰瘍藥物具有廣闊的應(yīng)用前景和巨大的市場(chǎng)價(jià)值。
L-丙氨酰-L-谷氨酰胺二肽，亦稱為丙氨酰谷氨酰胺二肽，其分子式為CH3CH(NH2)CONHCH(CH2CH2CONH2)COOH，具有溶解度高、穩(wěn)定性好等特點(diǎn)，中國(guó)發(fā)明專利申請(qǐng)02123369.1公開(kāi)了其的制備方法。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供L-丙氨酰-L-谷氨酰胺二肽的新用途。
本發(fā)明人通過(guò)實(shí)驗(yàn)證實(shí)，不同劑量L-丙氨酰-L-谷氨酰胺二肽對(duì)無(wú)水乙醇所致大鼠胃粘膜損傷及半胱胺所致十二指腸粘膜損傷均有明顯保護(hù)作用，具有抗胃潰瘍及十二指腸潰瘍活性，可以制備成治療消化性潰瘍藥物應(yīng)用于臨床。
需要的時(shí)候，在這些藥物中還可以加入一種或多種藥學(xué)上可接受的載體。所述載體包括藥學(xué)領(lǐng)域常規(guī)的稀釋劑、填充劑、粘合劑、濕潤(rùn)劑、吸收促進(jìn)劑、表面活性劑、吸附載體、潤(rùn)滑劑等，必要時(shí)還可以加入香味劑、甜味劑等。以L-丙氨酰-L-谷氨酰胺二肽為活性成分的治療消化性潰瘍藥物主要通過(guò)口服給藥，可以制成片劑、膠囊、粉劑、顆粒、錠劑、栓劑，或口服液等多種藥物形式。上述各種劑型的藥物均可以按照藥學(xué)領(lǐng)域的常規(guī)方法制備。
本發(fā)明首先建立了經(jīng)典的急性應(yīng)急性潰瘍損傷模型—無(wú)水乙醇致大鼠損傷模型及半胱胺所致十二指腸粘膜損傷模型，觀察了不同劑量L-丙氨酰-L-谷氨酰胺二肽對(duì)無(wú)水乙醇所致大鼠胃粘膜損傷及半胱胺所致十二指腸粘膜損傷的保護(hù)作用，并與谷氨酰胺單體及經(jīng)典的消化性潰瘍治療藥物甲氰咪胍進(jìn)行了比較，證實(shí)L-丙氨酰-L-谷氨酰胺二肽對(duì)消化道潰瘍具有明顯治療作用，同時(shí)兼具使用劑量小、治療效果好等優(yōu)點(diǎn)，因此有可能廣泛應(yīng)用于消化性潰瘍的臨床治療。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例1、抗胃潰瘍實(shí)驗(yàn)1.1實(shí)驗(yàn)方法本實(shí)驗(yàn)所采用的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物為大鼠，在實(shí)驗(yàn)前，將大鼠隨機(jī)分成以下對(duì)照組及實(shí)驗(yàn)組生理鹽水對(duì)照組動(dòng)物在實(shí)驗(yàn)前40h禁食，自由飲水，至給無(wú)水乙醇刺激前2h灌注生理鹽水1ml，隨后給予無(wú)水乙醇；2h后，麻醉處死動(dòng)物，剪開(kāi)腹腔，先結(jié)扎幽門(mén)，隨后將4ml 10％甲醛注入胃內(nèi)，復(fù)行結(jié)扎胃以防甲醛泄漏。作病理實(shí)驗(yàn)時(shí)，沿胃大彎剪開(kāi)胃，觀察胃粘膜的損傷程度；同時(shí)，采用張守仁等(張守仁，崔光建，徐瑞明，et，al.多環(huán)胺化合物HH01抗實(shí)驗(yàn)性大鼠胃潰瘍作用.藥學(xué)學(xué)報(bào)，1995；30(2)103-106.)所建立的實(shí)驗(yàn)方法，以損傷面積為指標(biāo)，觀察不同藥物對(duì)無(wú)水乙醇所致胃粘膜損傷的保護(hù)作用。
丙氨酰谷氨酰胺二肽實(shí)驗(yàn)組給藥劑量范圍為400至1500mg/kg(表1)，胃內(nèi)灌注上述不同劑量丙氨酰谷氨酰胺二肽混旋液1ml，2h后胃內(nèi)灌注無(wú)水乙醇1ml，2h后取胃，余處理方法同對(duì)照組。
谷氨酰胺實(shí)驗(yàn)組給藥劑量范圍為400至1500mg/kg(表1)，給藥方法，給藥時(shí)間等完全等同丙氨酰谷氨酰胺二肽實(shí)驗(yàn)組。
甲氰咪胍組既往文獻(xiàn)報(bào)道甲氰咪胍80或100mg/kg均可顯著對(duì)抗無(wú)水乙醇所致胃粘膜損傷，本實(shí)驗(yàn)選擇100mg/kg作為既定給藥劑量，余處理方法同上述實(shí)驗(yàn)。
1.2實(shí)驗(yàn)結(jié)果從胃標(biāo)本外觀看，生理鹽水對(duì)照組潰瘍表現(xiàn)為普遍粘膜充血、條索狀潰瘍面積大且較深，出血點(diǎn)表現(xiàn)也較大；甲氰咪胍組表現(xiàn)為粘膜充血，水腫較明顯，而出血點(diǎn)及潰瘍均好于生理鹽水組；丙氨酰谷氨酰胺二肽各組表現(xiàn)為胃粘膜較完整，無(wú)出血點(diǎn)，僅有條索狀潰瘍，面積小且表淺，有的僅表現(xiàn)為局部粘膜出現(xiàn)暗斑；對(duì)于谷氨酰胺組，在低劑量時(shí)(400)mg/kg，溶液中已有谷氨酰胺的結(jié)晶析出，表現(xiàn)出較差的溶解性，在此劑量下，谷氨酰胺給藥組胃粘膜表現(xiàn)與生理鹽水對(duì)照組無(wú)明顯差別；當(dāng)給藥濃度增至1000mg/kg時(shí)，可見(jiàn)胃粘膜上的條索狀潰瘍數(shù)及出血點(diǎn)均明顯減少，但整個(gè)粘膜上的充血及水腫尚存；當(dāng)濃度增至1500mg/kg時(shí)，谷氨酰胺溶液中已有大量結(jié)晶析出，在給藥后4h，胃內(nèi)依然可以看見(jiàn)谷氨酰胺單體的結(jié)晶物持續(xù)存在，提示該藥吸收較差，但需要說(shuō)明的是，在此劑量下，谷氨酰胺對(duì)胃粘膜潰瘍表現(xiàn)出了較好的抑制作用。
采用解剖顯微鏡，以出現(xiàn)潰瘍粘膜的面積作為指標(biāo)，觀察上述藥物對(duì)胃粘膜損傷的保護(hù)程度，結(jié)果如表1。由表1可見(jiàn)，陽(yáng)性對(duì)照藥甲氰咪胍可明顯對(duì)抗乙醇所致的胃粘膜損傷，但其對(duì)損傷的抑制率要明顯低于不同劑量的丙氨酰谷氨酰胺二肽組。對(duì)于丙氨酰谷氨酰胺二肽而言，低、中劑量的(400，1000)mg/kg丙氨酰谷氨酰胺二肽即可明顯對(duì)抗乙醇損傷(P＜0.05)，其對(duì)潰瘍的抑制作用要明顯高于同劑量組的谷氨酰胺單體(P＜0.05)；當(dāng)給藥劑量增至1500mg/kg時(shí)，丙氨酰谷氨酰胺二肽幾乎可以完全對(duì)抗乙醇所致胃粘膜損傷(P＜0.05)。對(duì)于谷氨酰胺而言，當(dāng)給藥劑量為400及1000mg/kg時(shí)，該藥不能明顯對(duì)抗乙醇所致胃粘膜損傷；當(dāng)給藥濃度增至1500mg/kg時(shí)，谷氨酰胺組可以顯著對(duì)抗乙醇所致胃粘膜損傷，其對(duì)潰瘍的抑制作用弱于同劑量(1500mg/kg)丙氨酰谷氨酰胺二肽組所起的作用，而與400mg/kg丙氨酰谷氨酰胺二肽所起的作用相當(dāng)。
表1.不同藥物在禁食40h的條件下對(duì)無(wú)水乙醇所致胃粘膜損傷的保護(hù)作用

動(dòng)物在給予乙醇刺激前2.0h預(yù)防給藥，禁食40h*，p＜0.05，與對(duì)照組比較#，p＜0.05，與谷氨酰胺組同劑量比較△，p＜0.05，與甲氰咪胍組比較。
實(shí)施例2、抗十二指腸潰瘍實(shí)驗(yàn)2.1實(shí)驗(yàn)方法大鼠實(shí)驗(yàn)前禁食(不禁水)24h，稱重標(biāo)記后隨機(jī)分成9組，分組及給藥劑量與實(shí)施例1基本相同，詳細(xì)情況見(jiàn)表2。灌藥2h后分別皮下注射10％半胱胺，用量為280mg/kg，然后脫頸法處死大鼠，剖腹，取出十二指腸，觀察十二指腸潰瘍形成情況，并測(cè)量潰瘍大小。此外，新鮮十二指腸標(biāo)本經(jīng)解剖顯微鏡觀察后固定于10％福爾馬林液中，常規(guī)取材，石臘包埋，連續(xù)切片，切片厚5μm，HE染色，光學(xué)顯微鏡觀察潰瘍組織學(xué)形態(tài)及粘膜的損傷情況。
2.2實(shí)驗(yàn)結(jié)果2.2.1正常對(duì)照組正常大鼠十二指腸粘膜表面平整光滑，呈粉紅色，有光澤，可見(jiàn)粘液附著，腸壁厚實(shí)，肌張力較強(qiáng)。光鏡下見(jiàn)粘膜表面絨毛完整，略呈葉狀，固有膜內(nèi)可見(jiàn)少許炎細(xì)胞浸潤(rùn)，腺體、粘膜肌層及肌層均無(wú)異常。
2.2.2生理鹽水對(duì)照組所有20只實(shí)驗(yàn)大鼠均出現(xiàn)明顯的潰瘍，其中8只出現(xiàn)潰瘍穿孔，同時(shí)可見(jiàn)粘膜水腫、糜爛，腸壁變薄，張力減弱。光鏡下見(jiàn)大量腺體破壞，潰瘍均達(dá)粘膜肌層，其表面覆有炎性壞死組織，周?chē)写罅垦准?xì)胞浸潤(rùn)。潰瘍?cè)钕噜徴衬そq毛表面上皮脫落，呈裸絨毛狀態(tài)。
2.2.3甲氰咪胍對(duì)照組20只實(shí)驗(yàn)大鼠中有3只大鼠出現(xiàn)潰瘍，未見(jiàn)穿孔。無(wú)潰瘍形成者多數(shù)有不同程度的粘膜充血、水腫，少數(shù)可見(jiàn)糜爛。光鏡下見(jiàn)炎細(xì)胞浸潤(rùn)，有潰瘍者為重度炎癥，無(wú)潰瘍者有6只中度炎癥，炎細(xì)胞浸潤(rùn)達(dá)粘膜肌層，部分絨毛脫落，腺體破壞。其余均為輕度炎癥，絨毛及腺體損傷多不明顯。
2.2.4谷氨酰胺組低劑量時(shí)(400mg/kg)，所有實(shí)驗(yàn)動(dòng)物均出現(xiàn)明顯潰瘍，同時(shí)可見(jiàn)部分實(shí)驗(yàn)大鼠(7/20)出現(xiàn)穿孔，其表現(xiàn)與生理鹽水對(duì)照組無(wú)明顯差別；當(dāng)給藥濃度增至1000mg/kg時(shí)，出現(xiàn)潰瘍動(dòng)物數(shù)目明顯減少(5/20)，且只有2只動(dòng)物出現(xiàn)明顯潰瘍穿孔，腸粘膜上炎細(xì)胞浸潤(rùn)面積及腺體破壞面積均明顯減少；當(dāng)濃度增至1500mg/kg時(shí)，所有實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中僅有4只出現(xiàn)潰瘍，但未見(jiàn)穿孔；此外，在此劑量下，炎細(xì)胞浸潤(rùn)面積、腺體破壞數(shù)目及炎細(xì)胞浸潤(rùn)深度及明顯減小，對(duì)十二指腸粘膜潰瘍表現(xiàn)出明顯的抑制作用。
2.2.5丙氨酰谷氨酰胺二肽組低劑量(400mg/kg)時(shí)，所有實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中有4只大鼠出現(xiàn)潰瘍，中劑量(1000mg/kg)時(shí)有2只出現(xiàn)潰瘍，高劑量(1500mg/kg)時(shí)無(wú)明顯潰瘍出現(xiàn)，均未見(jiàn)穿孔；此外，隨著給藥劑量的增加，粘膜充血程度及糜爛粘膜面積均明顯減少，光鏡下同時(shí)可見(jiàn)炎細(xì)胞浸潤(rùn)數(shù)目、腺體破壞程度及部分絨毛粘膜表面上皮脫落面積均明顯降低。再有，在低劑量的情況下，腸粘膜受損面積、炎性細(xì)胞浸潤(rùn)程度和深度以及絨毛脫落程度基本與甲氰咪胍組相當(dāng)；而在中、高劑量的情況下，受損腸粘膜的腺體及絨毛則較低劑量組更為完整。
表2.不同藥物在禁食24h的條件下對(duì)半胱胺所致十二指腸粘膜損傷的保護(hù)作用

動(dòng)物在給予半胱胺(280mg/kg)刺激前2.0h預(yù)防給藥，禁食24h*，p＜0.05，與對(duì)照組比較#，p＜0.05，與谷氨酰胺組同劑量比較△，p＜0.05，與甲氰咪胍組比較。
總之，在低劑量下，丙氨酰谷氨酰胺二肽即對(duì)乙醇所致胃潰瘍具明顯抑制作用，高劑量則可幾乎完全對(duì)抗乙醇所致胃粘膜損傷，其對(duì)乙醇所致胃粘膜損傷的抑制作用要強(qiáng)于經(jīng)典的胃粘膜保護(hù)藥甲氰咪胍。對(duì)于谷氨酰胺，在低劑量下，該藥對(duì)乙醇所致潰瘍無(wú)明顯抑制作用；雖然在高劑量下，谷氨酰胺對(duì)胃粘膜損傷具一定抑制作用，但其對(duì)胃粘膜損傷所致的抑制作用要弱于同劑量下的丙氨酰谷氨酰胺二肽組，且表現(xiàn)出較差的溶解性。而在半胱胺所致大鼠十二指腸潰瘍的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型上，我們得到了同樣類(lèi)似的結(jié)論。因此，以上結(jié)果說(shuō)明，丙氨酰谷氨酰胺二肽對(duì)消化性潰瘍的治療作用要明顯強(qiáng)于谷氨酰胺，丙氨酰谷氨酰胺二肽可用于消化性潰瘍的治療。
權(quán)利要求
1.L-丙氨酰-L-谷氨酰胺二肽在制備治療消化性潰瘍藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了L－丙氨酰－L－谷氨酰胺二肽的新用途。本發(fā)明發(fā)明人通過(guò)實(shí)驗(yàn)證實(shí)，不同劑量L－丙氨酰－L－谷氨酰胺二肽對(duì)無(wú)水乙醇所致大鼠胃粘膜損傷及半胱胺所致大鼠十二指腸粘膜損傷均有保護(hù)作用，具有抗消化性潰瘍活性，并具有使用劑量小、治療效果好等優(yōu)點(diǎn)，可以制備為治療消化性潰瘍藥物應(yīng)用于臨床。
文檔編號(hào)A61P1/00GK1730096SQ20051008986
公開(kāi)日2006年2月8日 申請(qǐng)日期2005年8月9日 優(yōu)先權(quán)日2005年8月9日
發(fā)明者林韶輝, 劉烽, 陳定 申請(qǐng)人:北京蘇里曼醫(yī)藥科技有限公司