專利名稱：一種預(yù)防和治療心腦血管疾病的藥物組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種凍干藥物組合物，具體地說，是涉及含有人參提取物和銀杏葉提取物的注射用凍干藥物組合物及其制備方法。
背景技術(shù)：
人參為補(bǔ)益藥，其補(bǔ)氣強(qiáng)身、延年益壽的藥理作用被全世界認(rèn)同，按“氣血同源”、“氣行則血行”、“氣旺則人壽”的中醫(yī)理論，人參早已被用于心腦血管疾病?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)為，人參除補(bǔ)益作用外，作用于心腦血管疾病最關(guān)鍵的作用是清除體內(nèi)自由基，從源頭上瓦解心腦血管病變的基礎(chǔ)?，F(xiàn)代藥理研究表明，銀杏及其有效成分有著廣泛的藥理作用，具有降血脂、抗動(dòng)脈粥樣硬化、改善心腦微循環(huán)等作用(卓斌等，中國藥業(yè)2001年11期67-69頁；唐靈等，華夏醫(yī)學(xué)2001年第3期)。同時(shí)，人們也對(duì)銀杏葉提取物與其他活性物質(zhì)的聯(lián)用進(jìn)行了深入研究，并取得了一定的進(jìn)展(例如，林金華等，時(shí)珍國醫(yī)國藥藥2001年第9期；和CN1262103A等)。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明，銀杏葉提取物對(duì)動(dòng)脈有輕度擴(kuò)張作用，并能減少紅細(xì)胞聚集，抗血小板聚集，降低全血黏度，增加紅細(xì)胞變形能力，增加細(xì)胞壁彈性，從而改善缺血組織的灌注。兩藥復(fù)方具有補(bǔ)氣復(fù)脈，活血化瘀之功效，對(duì)腦血管疾病(包括腦中風(fēng)、中風(fēng)后遺癥、腦缺血、腦栓塞、腦血管痙攣等)和心血管疾病(如冠心病、心絞痛、缺血性休克等)均有極佳的療效，清除自由基和活化細(xì)胞同步進(jìn)行，在解決心腦血管疾患的同時(shí)，給人體注入了抗氧化、抗衰老、抗疲勞、延年益壽的生命活力。
國外有商品名為Gincosan的含銀杏葉提報(bào)物50mg與紅參提取物100mg制成的的膠囊劑上市，國內(nèi)有銀杏達(dá)莫注射液，其每個(gè)劑量單位含銀杏葉提取物40mg和雙嘧達(dá)莫4mg。藥效學(xué)試驗(yàn)證明由單一銀杏葉提取物或銀杏葉提取物與化學(xué)藥劑制成的藥劑活性低于紅參與銀杏葉提取物的復(fù)方藥物活性。然而，國外的Gincosan銀杏紅參提取物口服膠囊，卻具有生物利用度低、血藥濃度低、藥效發(fā)揮作用慢、藥物浪費(fèi)多等缺點(diǎn)，只適用于輕度和慢性病人，不適宜用于重度和急性發(fā)作病人。為有效的解決這個(gè)問題，制劑專家研究開發(fā)了注射液(例如CN200410040007.2和CN200410034050)，提供了一種生物利用度高、血藥濃度高、藥效發(fā)揮作用快、具有更強(qiáng)活性、療效更好的人參銀杏注射液。但是，其提供的制備方法制備的人參、銀杏凍干制劑存在如穩(wěn)定性不佳、溶劑對(duì)病人的刺激性和副作用較大、色澤易變化等問題。
實(shí)驗(yàn)證明銀杏黃酮類化合物一般能溶于水、稀乙醇、乙酸乙酯等極性溶劑中，難溶于乙醚、氯仿和苯中。黃酮類分子中甲氧基、甲基、不飽和烴基增多時(shí)，則降低其在極性溶劑中的溶解度。分子中含有酚性烴基，故一般顯弱酸性，在堿性溶液中，類黃酮易開環(huán)生成查耳酮型結(jié)構(gòu)而多呈黃色或橙色、褐色，在酸性條性下，查耳酮又恢復(fù)為閉環(huán)結(jié)構(gòu)，于是呈原色或顏色消失。如土豆、甘藍(lán)、蘆筍在堿性溶液中烹煮會(huì)變黃。其性質(zhì)表現(xiàn)為溶于強(qiáng)堿時(shí)顏色加深，加酸后又析出沉淀。類黃酮分子中酚性羥基愈多，酸性愈強(qiáng)。7，4’位上有羥基的黃酮，酸性較強(qiáng)，能溶于碳酸鈉或飽和石灰水中，有的能溶于碳酸氫鈉溶液。銀杏內(nèi)酯難溶于水。人參皂苷易溶于甲醇、乙醇、正丁醇等，在酸性條件下易水解。
銀杏葉提取物、人參提取物用現(xiàn)有的凍干制劑處方不能很好地解決澄明度的問題。凍干過程中要求不能使用乙醇等有機(jī)溶劑。對(duì)一般技術(shù)人員而言，人參和銀杏合用為注射用的制劑的質(zhì)量問題很難控制，而且已有的文獻(xiàn)和專利技術(shù)也未公布有效的解決方案。所以，將人參提取物和銀杏提取物制成具有良好穩(wěn)定性和溶解性的復(fù)方注射用藥物具有重要意義。

發(fā)明內(nèi)容
經(jīng)過我們對(duì)制藥工藝的深入的研究，發(fā)現(xiàn)采用一種新型的冷凍干燥工藝可以有效的解決注射用人參、銀杏提取物的澄明度和穩(wěn)定性問題。并經(jīng)過大量實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步完善了本發(fā)明。
本發(fā)明的一個(gè)目的是提供一種含有表面活性劑的人參、銀杏提取物的凍干藥物組合。經(jīng)我們研究表面不含有表面活性劑的人參、銀杏提取物的凍干藥物組合在用注射用水稀釋時(shí)得到黃色混濁液體，但加入大約3％的表面活性劑，經(jīng)冷凍干燥可得穩(wěn)定的凍干制品，在使用時(shí)加入注射用水稀釋即可促進(jìn)活性成分溶解而迅速得到棕黃色液體，大大提高了藥物的澄明度。
本發(fā)明適用的表面活性劑包括但不限于吐溫-20、吐溫-80、聚乙二醇、聚氧乙烯蓖麻油、聚氧乙烯氫化蓖麻油、聚乙烯吡咯烷酮、司盤、卵磷脂、泊洛沙姆以及它們組成的混合體系。優(yōu)選為聚乙二醇400、泊洛沙姆、司盤、卵磷脂以及它們組成的混合體系。
本發(fā)明藥物組合物中還可以加入藥用冷凍干燥賦形劑。所加入的賦形劑選自甘露醇、山梨醇、氯化鈉、葡萄糖、果糖、蔗糖、木糖醇、乳糖以及它們組成的混合物，優(yōu)選為甘露醇。本發(fā)明凍干制劑中還可以加入穩(wěn)定劑，如煙酰胺。
本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中各種成分的重量分?jǐn)?shù)配比如下銀杏葉提取物2-100mg人參提取物 0.4-40mg表面活性劑 1-30mg穩(wěn)定劑 0-50mg凍干賦形劑 10-1000mg本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供一種制備上述人參、銀杏提取物凍干組合物的方法，其中包括以下步驟(1)人參提取物的制備取人參粗粉500g，加5000ml 70％乙醇回流提取三次(第一次浸泡過夜)，每次1小時(shí)，合并三次提取液，濾過，濾液回收乙醇，并濃縮至稠膏每1ml相當(dāng)于原生藥2g的溶液，用10％氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至9.5，加乙醇溶液使含醇量達(dá)90％，取上清液，減壓回收乙醇，濃縮至相當(dāng)于生藥材1∶1，加水稀釋至1000ml，用10％鹽酸溶液調(diào)pH值7左右，冷藏12小時(shí)，濾過，濾液上已處理好的D101大孔吸附樹脂柱(樹脂用量與藥材比為1∶5)，依次用4000ml水和25％乙醇4000ml洗脫，棄去洗脫液，再用70％乙醇溶液4000ml洗脫，收集洗脫液，濾過，回收乙醇，濃縮至每1ml相當(dāng)于原生藥5g的稠膏，用正丁醇100ml萃取三次，注射用水100ml洗二次，轉(zhuǎn)移到潔凈環(huán)境下，于100℃減壓干燥除去正丁醇，即得人參提取物，備用。
(2)銀杏葉提取物的制備取銀杏葉粗粉1kg，加10L50％乙醇溶液回流提取三次，每次1小時(shí)(第一次先浸泡12小時(shí))，合并提取液，回收乙醇，濃縮至稠膏，加乙醇溶液使含醇量達(dá)90％，取上清液，回收乙醇，濃縮至稠膏，70℃減壓干燥，粉碎過100目篩，加2.5L正己烷回流2小時(shí)，回收正己烷，殘?jiān)铀?.8L，用10％鹽酸溶液調(diào)pH值至2，煮沸30分鐘，冷藏過夜，過濾，濾液用10％氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至3.5，上已處理好的ADS-17大孔吸附樹脂柱(樹脂用量與藥材比為1∶8)吸附，分別用注射用水和5％乙醇溶液12L洗脫，棄去洗脫液，再用40％乙醇溶液12L洗脫，洗脫速度為134ml/min，收集洗脫液，回收乙醇，濃縮至稠膏，轉(zhuǎn)移到潔凈環(huán)境下，70℃減壓干燥，得銀杏葉提取物備用。
(3)成品制備工藝取處方量銀杏提取物、人參提取物、甘露醇、聚乙二醇400、80％處方量注射用水溶解；初濾后再用0.2μm微孔濾膜精濾；補(bǔ)足注射用水至全量，測(cè)定含量；分裝；凍干；包裝。
為了檢測(cè)上述工藝所得的凍干制劑受環(huán)境的影響，取樣品分別放置在60℃高溫和4500LX的光照條件下作影響因素試驗(yàn)，于5天和10天取樣檢測(cè)，并于0天相比較，結(jié)果見表。
表 影響因素考察結(jié)果

由以上結(jié)果可知，本工藝穩(wěn)定。
依據(jù)臨床需要，本品采用市售包裝(7ml管制抗生素玻璃瓶，20-D3型藥用丁基橡膠塞，抗生素瓶用鋁塑組合蓋)，采用室溫留樣、加速穩(wěn)定性試驗(yàn)考察的方法，考于室溫條件下及溫度40℃±2℃，相對(duì)濕度75±5％的條件進(jìn)行考察，除生產(chǎn)當(dāng)月取樣考察一次外，分別于1、2、3、6、12月考察一次(其中加速穩(wěn)定性試驗(yàn)考查3個(gè)月)，共取樣五次，按中藥新藥穩(wěn)定性考察項(xiàng)目進(jìn)行考察(其中無菌、溶血、熱原試驗(yàn)僅在0、3、12月進(jìn)行)?？疾?2個(gè)月。穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果表明，三批樣品在考察期限內(nèi)性狀、鑒別、檢查、含量及無菌檢查均符合規(guī)定。
下述內(nèi)容為驗(yàn)證本發(fā)明凍干制劑藥效的主要藥理和毒理學(xué)試驗(yàn)研究結(jié)果(1)對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)的影響人參提取物和銀杏葉提取物的注射用凍干在較大劑量時(shí)對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)具有抑制作用，可抑制小鼠自發(fā)活動(dòng)，對(duì)戊巴比妥鈉閾下催眠劑量有協(xié)同作用，但對(duì)戊巴比妥鈉催眠時(shí)間無明顯影響。
(2)對(duì)心血管系統(tǒng)的影響人參提取物和銀杏葉提取物的注射用凍干在較大劑量時(shí)對(duì)麻醉大鼠心率和平均血壓均無明顯影響。
(3)對(duì)呼吸系統(tǒng)的影響人參提取物和銀杏葉提取物的注射用凍干在較大劑量時(shí)對(duì)麻醉大鼠呼吸頻率和呼吸幅度(深度)亦均無明顯影響。結(jié)果表明人參提取物和銀杏葉提取物的注射用凍干在較大劑量時(shí)，對(duì)心血管系統(tǒng)、呼吸系統(tǒng)均無顯著的毒性影響，但對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)具有一定的抑制作用。
急性毒性試驗(yàn)人參提取物和銀杏葉提取物的注射用凍干對(duì)小鼠以靜脈注射(5g/kg，454倍臨床劑量)、肌肉注射(10g/kg，909倍臨床劑量)、腹腔注射(6.25g/kg，568倍臨床劑量)、口服給藥(25g/kg，2273倍臨床劑量)等給藥途徑的急性毒性試驗(yàn)，結(jié)果表明在觀察7天內(nèi)各組動(dòng)物未見明顯毒性反應(yīng)癥狀，動(dòng)物無死亡。實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)其體重增長較空白對(duì)照組迅速，靜注、肌注、腹腔、口服等四種給藥途徑組動(dòng)物體重，較空白對(duì)照組分別增加14.29％(P＞0.05)、30.65％(P＜0.05)、55.58％(P＜0.05)、-3.90％(P＞0.05)。以上急性毒性試驗(yàn)結(jié)果表明，受試藥物人參提取物和銀杏葉提取物的注射用凍干大劑量多種途徑給藥后，均無明顯毒性作用，靜注、肌注和腹腔三種途徑給藥還具有促進(jìn)動(dòng)物生長，增加體重的補(bǔ)益作用。
大鼠長期毒性試驗(yàn)大鼠長期毒性試驗(yàn)結(jié)果表明，以人參提取物和銀杏葉提取物的注射用凍干高、中、低三種劑量(550、275、137.5mg/kg，分別為成年人臨床每日擬用劑量的50倍、25倍和12.5倍)對(duì)大鼠連續(xù)腹腔注射3個(gè)月，停藥觀察2周，對(duì)大鼠的外觀行為、攝食量(飼料消耗量)和體重增長均未見明顯毒性影響。對(duì)血液學(xué)檢查結(jié)果顯示對(duì)大鼠的造血功能不但無明顯損傷性毒性影響，而且對(duì)大鼠造血功能還具有一定的興奮作用，尤其是增加淋巴細(xì)胞數(shù)較明顯。對(duì)血液生化學(xué)未見明顯毒性影響。大鼠的病理組織學(xué)檢查結(jié)果顯示給藥對(duì)動(dòng)物各種器官不會(huì)導(dǎo)致病理損害性變化。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示人參提取物和銀杏葉提取物的注射用凍干較大劑量(550、275、137.5mg/kg)及較長療程(3個(gè)月)腹腔注射給藥對(duì)動(dòng)物(大鼠)的長期毒性較低，長期注射用藥安全。
犬90天長期毒性試驗(yàn)32只6月齡Beagle犬，按體重、性別分層隨機(jī)分為人參提取物和銀杏葉提取物的注射用凍干大、中、小(660mg/kg、330mg/kg、165mg/kg，分別相當(dāng)于臨床擬定用量的60、30、15倍)劑量組及對(duì)照組，每組8只，雌雄各半。連續(xù)靜脈滴注給藥180天，停藥后觀察21天，90天階段報(bào)告結(jié)果如下人參提取物和銀杏葉提取物的注射用凍干大、中、小劑量給犬靜脈滴注給藥后，全程試驗(yàn)中各犬外觀正常，被毛光澤，活潑，未見異常。給藥前2次，給藥45天，90天，犬小便常規(guī)10項(xiàng)檢查未見異常；外周血象數(shù)據(jù)在正常范圍內(nèi)波動(dòng)，組間比較無顯著差異；對(duì)心電圖P、QRS、T等波寬和振幅均無明顯影響，心律均為竇性；P波、QRS波與主波方向一致，心電圖的波形描記也無明顯異常；血液生化學(xué)檢測(cè)各項(xiàng)指標(biāo)未見異常。組織病理學(xué)檢查結(jié)果顯示各犬各組織均無形態(tài)結(jié)構(gòu)異常。所以，人參提取物和銀杏葉提取物的注射用凍干具有較大的安全性。
過敏性、溶血性和局部刺激性試驗(yàn)通過動(dòng)物試驗(yàn)，研究了受試藥物人參提取物和銀杏葉提取物的注射用凍干的致敏性、溶血性和局部(血管、肌肉)刺激性，結(jié)果表明(1)經(jīng)過豚鼠主動(dòng)全身過敏試驗(yàn)(ASA)和大鼠同種被動(dòng)皮膚過敏試驗(yàn)(PCA)，結(jié)果表明人參提取物和銀杏葉提取物的注射用凍干無致敏作用；(2)人參提取物和銀杏葉提取物的注射用凍干在較高濃度時(shí)，即在3.30、2.64、1.98、1.32、0.66mg/ml時(shí)，無溶血作用；(3)家兔耳緣靜脈連續(xù)3天注射受試藥物人參提取物和銀杏葉提取物的注射用凍干的0.9％氯化鈉溶液(高濃度，為33mg/ml)后，未見對(duì)靜脈血管內(nèi)壁病理性損傷變化；對(duì)家兔股四頭肌內(nèi)注入人參提取物和銀杏葉提取物的注射用凍干的0.9％氯化鈉溶液(濃度為16.5mg/ml)后，未見對(duì)肌肉組織有病理性損傷變化。
以下實(shí)施例旨在進(jìn)一步說明本發(fā)明，并不對(duì)本發(fā)明的范圍加以限制。
實(shí)例1處方(按1000瓶計(jì))銀杏葉 1000g人參500g甘露醇 250g普洛沙姆188 20ml注射用水加至2000ml制成1000瓶(1)人參提取物的制備取人參粗粉500g，加5000ml70％乙醇回流提取三次(第一次浸泡過夜)，每次1小時(shí)，合并三次提取液，濾過，濾液回收乙醇，并濃縮至稠膏每1ml相當(dāng)于原生藥2g的溶液，用10％氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至9.5，加乙醇溶液使含醇量達(dá)90％，取上清液，減壓回收乙醇，濃縮至相當(dāng)于生藥材1∶1，加水稀釋至1000ml，用10％鹽酸溶液調(diào)pH值7左右，冷藏12小時(shí)，濾過，濾液上已處理好的D101大孔吸附樹脂柱(樹脂用量與藥材比為1∶5)，依次用4000ml水和25％乙醇4000ml洗脫，棄去洗脫液，再用70％乙醇溶液4000ml洗脫，收集洗脫液，濾過，回收乙醇，濃縮至每1ml相當(dāng)于原生藥5g的稠膏，用正丁醇100ml萃取三次，注射用水100ml洗二次，轉(zhuǎn)移到潔凈環(huán)境下，于100℃減壓干燥除去正丁醇，即得人參提取物，備用。
(2)銀杏葉提取物的制備取銀杏葉粗粉1kg，加10L50％乙醇溶液回流提取三次，每次1小時(shí)(第一次先浸泡12小時(shí))，合并提取液，回收乙醇，濃縮至稠膏，加乙醇溶液使含醇量達(dá)90％，取上清液，回收乙醇，濃縮至稠膏，70℃減壓干燥，粉碎過100目篩，加2.5L正己烷回流2小時(shí)，回收正己烷，殘?jiān)铀?.8L，用10％鹽酸溶液調(diào)pH值至2，煮沸30分鐘，冷藏過夜，過濾，濾液用10％氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至3.5，上已處理好的ADS-17大孔吸附樹脂柱(樹脂用量與藥材比為1∶8)吸附，分別用注射用水和5％乙醇溶液12L洗脫，棄去洗脫液，再用40％乙醇溶液12L洗脫，洗脫速度為134ml/min，收集洗脫液，回收乙醇，濃縮至稠膏，轉(zhuǎn)移到潔凈環(huán)境下，70℃減壓干燥，得銀杏葉提取物備用。
(3)成品制備工藝在符合GMP生產(chǎn)條件下，取處方量銀杏提取物、人參提取物、甘露醇、泊洛沙姆188、80％處方量注射用水溶解；活性炭脫色，初濾后再用0.2μm微孔濾膜精濾；補(bǔ)足注射用水至全量，測(cè)定含量；分裝；凍干；包裝。
實(shí)例2處方 (按1000瓶計(jì))銀杏葉1000g人參 500g泊洛沙姆188 20ml羥丙基倍他環(huán)糊精 200g注射用水 加至2000ml制成 1000瓶制備方法同上實(shí)例3處方 (按1000瓶計(jì))銀杏葉1000g人參 500g葡萄糖200g泊洛沙姆188 20ml注射用水 加至2000ml制成 1000瓶制備方法同上。
權(quán)利要求
1.一種凍干藥物組合物，其中包括人參提取物、銀杏葉提取物以及表面活性劑。
2.如權(quán)利要求1的組合物，其中表面活性劑選自吐溫-20、吐溫-80、聚乙二醇、聚氧乙烯蓖麻油、聚氧乙烯氫化蓖麻油、聚乙烯吡咯烷酮、泊洛沙姆、司盤、卵磷脂以及它們組成的混合體系。
3.權(quán)利要求1的組合物，其中表面活性劑選自聚乙二醇400、泊洛沙姆以及它們組成的混合體系。
4.如權(quán)利要求1的組合物，還包括穩(wěn)定劑和凍干賦形劑。
5.如權(quán)利要求1-4之一的組合物，其中包括以下重量配比的組分銀杏葉提取物 2-100mg人參提取物0.4-40mg表面活性劑1-30mg穩(wěn)定劑0-50mg凍干賦形劑10-1000mg。
6.如權(quán)利要求5的組合物，銀杏提取物為銀杏黃酮＞24％、銀杏總內(nèi)酯＞6％，銀杏總內(nèi)酯中白果內(nèi)酯＞1％、銀杏內(nèi)酯B＞1％，人參提取物為人參皂甙Rg1和Re的總和＞25％。
7.如權(quán)利要求1-5之一的組合物，為注射用凍干制品。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種人參、銀杏葉有效部位的凍干藥物組合物及其制備方法。本發(fā)明凍干組合物具有良好的溶解性和穩(wěn)定性，適用于作安全、穩(wěn)定的注射劑型。
文檔編號(hào)A61P9/00GK1730008SQ20051008883
公開日2006年2月8日 申請(qǐng)日期2005年8月2日 優(yōu)先權(quán)日2005年8月2日
發(fā)明者孫毅 申請(qǐng)人:孫毅