專利名稱：抗腫瘤化合物真菌環(huán)氧二酯的發(fā)酵基質(zhì)的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種化合物的發(fā)酵基質(zhì)，尤其是涉及一種抗腫瘤化合物真菌環(huán)氧二酯(Mycoepoxydiene)的發(fā)酵基質(zhì)。
背景技術(shù)：
化合物乙酸2-(8-甲基-9-氧雜-雙環(huán)[4.2.1]九-2，4-二烯-7-基)-6-氧-3，6-二氫-2H-吡喃-3-基酯(Mycoepoxydiene，俗稱真菌環(huán)氧二酯)最早見于1999年的報(bào)道(Ping Cai，Andrew T et al.Mycoeoxydiene represents a novel class of fungal metabolites[J].Tetrahedron Letters，1999，401479-1482)，它從一株稀有真菌OS-F66617發(fā)酵液中分離得到，但文獻(xiàn)未報(bào)道其具有抗腫瘤生理活性。林昕、黃耀堅(jiān)等從一株海洋木棲真菌菜豆間座殼菌HLY2菌株分離獲得，該化合物具有抗腫瘤活性，并已申請發(fā)明專利(專利申請?zhí)?00410084809.3)。文獻(xiàn)未見有與本申請專利相同的發(fā)酵培養(yǎng)基配方的報(bào)道。利用液體發(fā)酵培養(yǎng)基，HLY2菌株液體發(fā)酵Mycoepoxydiene產(chǎn)量為40μg/L；利用固體發(fā)酵培養(yǎng)基，Mycoepoxydiene的固體發(fā)酵產(chǎn)量為552μg/L。
菜豆間座殼菌(Diaporhe phaseolorum)分離于福建省漳州市九龍江口浮宮鎮(zhèn)草埔頭村紅樹林生態(tài)區(qū)紅樹植物腐葉，該屬真菌為植物寄生菌(裘緯蕃主編，菌物學(xué)大全，北京科學(xué)出版社，1998)，該菌株在半海水配方PDA(馬鈴薯瓊脂培養(yǎng)基)培養(yǎng)基上，生長良好，菌絲純白，無明顯色素產(chǎn)生，不產(chǎn)孢子，培養(yǎng)10d以后，產(chǎn)生黑色子座。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種用菜豆間座殼菌(Diaporhe phaseolorum)HLY2菌株發(fā)酵真菌代謝Mycoepoxydiene的發(fā)酵基質(zhì)及其發(fā)酵方法。
本發(fā)明所采用的真菌為本申請發(fā)明人從福建省漳州市九龍江口浮宮鎮(zhèn)草埔頭(地名)紅樹林生態(tài)區(qū)的紅樹植物腐葉中分離得到的菌株HLY2，經(jīng)鑒定為菜豆間座殼菌(Diaporhephaseolorum)。該菌株已保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心，登記入冊的保藏編號為CCTCC NOM 204061，保藏的培養(yǎng)物名稱及注明的鑒別特征為菜豆間座殼菌Diaporhephaseolorum，保藏日為2004年9月1日。
本發(fā)明所說的真菌代謝產(chǎn)生的化合物乙酸2-(8-甲基-9-氧雜-雙環(huán)[4.2.1]九-2，4-二烯-7-基)-6-氧-3，6-二氫-2H-吡喃-3-基酯(Mycoepoxydiene)的結(jié)構(gòu)式為
本發(fā)明所說的化合物Mycoepoxydiene的發(fā)酵基質(zhì)的組成及其按質(zhì)量比的含量為馬鈴薯90～110g，葡萄糖90～110g，乳糖28～32g，硫酸氨9～11g，KH2PO40.5mmol，海水150～250ml，水補(bǔ)足1000ml，pH自然。
本發(fā)明所說的化合物Mycoepoxydiene的發(fā)酵基質(zhì)的發(fā)酵方法為將上述培養(yǎng)基滅菌后，接種HLY2菌株，26～30℃通氣攪拌發(fā)酵7～10d，發(fā)酵液經(jīng)過濾，除去菌體，收集發(fā)酵液用等量乙酸乙脂攪拌萃取，萃取6～36h，收集萃取所得的有機(jī)相，45℃減壓濃縮至干即為化合物Mycoepoxydiene的粗提物。
利用本發(fā)明的發(fā)酵培養(yǎng)基，采用常規(guī)的發(fā)酵技術(shù)，發(fā)酵的Mycoepoxydiene產(chǎn)量可達(dá)40mg/L。
具體實(shí)施例方式
以下實(shí)施例將對本發(fā)明作進(jìn)一步的說明。
實(shí)施例1培養(yǎng)基配制培養(yǎng)基的配方為馬鈴薯100g，葡萄糖100g，乳糖30g，硫酸氨10g，KH2O40.5mmol，海水200ml，水補(bǔ)足1000ml，pH自然。
發(fā)酵將上述培養(yǎng)基滅菌后，接種HLY2菌株，30℃發(fā)酵7d。發(fā)酵液經(jīng)過濾，除去菌體，收集發(fā)酵液用等量乙酸乙脂攪拌萃取，萃取6h，收集萃取所得的有機(jī)相，45℃濃縮至干即為本品的粗提物。
實(shí)施例2培養(yǎng)基配制培養(yǎng)基的配方為馬鈴薯90g，葡萄糖110g，乳糖28g，硫酸氨9g，KH2O40.5mmol，海水250ml，水補(bǔ)足1000ml，pH自然。
發(fā)酵將上述培養(yǎng)基滅菌后，接種HLY2菌株，26℃發(fā)酵10d。發(fā)酵液經(jīng)過濾，除去菌體，收集發(fā)酵液用等量乙酸乙脂攪拌萃取，萃取12h，收集萃取所得的有機(jī)相，45℃濃縮至干即為本品的粗提物。
實(shí)施例3培養(yǎng)基配制培養(yǎng)基的配方為馬鈴薯110g，葡萄糖90g，乳糖32g，硫酸氨11g，KH2PO40.5mmol，海水150ml，水補(bǔ)足1000ml，pH自然。
發(fā)酵將上述培養(yǎng)基滅菌后，接種HLY2菌株，28℃發(fā)酵8d。發(fā)酵液經(jīng)過濾，除去菌體，收集發(fā)酵液用等量乙酸乙脂攪拌萃取，萃取24h，收集萃取所得的有機(jī)相，45℃濃縮至干即為本品的粗提物。
權(quán)利要求
1.抗腫瘤化合物真菌環(huán)氧二酯的發(fā)酵基質(zhì)，其特征在于其組成及其按質(zhì)量比的含量為馬鈴薯90～110g，葡萄糖90～110g，乳糖28～32g，硫酸氨9～11g，KH2PO40.5mmol，海水150～250ml，水補(bǔ)足1000ml，pH自然。
2.如權(quán)利要求1所述的抗腫瘤化合物真菌環(huán)氧二酯的發(fā)酵基質(zhì)的發(fā)酵方法，其特征在于將培養(yǎng)基滅菌后，接種HLY2菌株，26～30℃通氣攪拌發(fā)酵7～10d，發(fā)酵液經(jīng)過濾，除去菌體，收集發(fā)酵液用等量乙酸乙脂攪拌萃取，萃取6～36h，收集萃取所得的有機(jī)相，45℃減壓濃縮至干即為化合物真菌環(huán)氧二酯的粗提物。
全文摘要
抗腫瘤化合物真菌環(huán)氧二酯的發(fā)酵基質(zhì)，涉及一種化合物的發(fā)酵基質(zhì)，尤其是涉及一種抗腫瘤化合物真菌環(huán)氧二酯的發(fā)酵基質(zhì)。提供一種用菜豆間座殼菌HLY2菌株發(fā)酵真菌代謝真菌環(huán)氧二酯的發(fā)酵基質(zhì)及發(fā)酵方法。發(fā)酵基質(zhì)的組成及含量為馬鈴薯90～110g，葡萄糖90～110g，乳糖28～32g，硫酸氨9～11g，KH
文檔編號A61P35/00GK1904057SQ20051008567
公開日2007年1月31日 申請日期2005年7月25日 優(yōu)先權(quán)日2005年7月25日
發(fā)明者王若宇, 黃耀堅(jiān), 鄭忠輝, 宋思揚(yáng), 蘇文金, 沈月毛 申請人:廈門大學(xué)