專利名稱：一種銀杏葉提取物、含有該提取物的注射劑及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種提取物、含有該提取物的注射劑及其制備方法，尤其涉及一種主要含銀杏內(nèi)酯和銀杏總黃酮醇苷的銀杏葉提取物、含有該提取物的中藥注射劑及其制備方法，屬于中藥領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
銀杏葉提取物具有改善心腦血管循環(huán)，治療心腦血管疾病，提供記憶力，清除氧自由基，延緩衰老的作用，具有治療和保健的雙重效果。由銀杏葉經(jīng)提取制備的銀杏葉注射液在臨床中使用多年，取得了很好的效果。其主要活性成分為銀杏總黃酮醇苷和銀杏內(nèi)酯，銀杏內(nèi)酯主要包括銀杏內(nèi)酯A、B、C、M和J等，其中以銀杏內(nèi)酯B活性為最高，銀杏內(nèi)酯A與其具有協(xié)同作用，因此在由銀杏葉提取物制備的各種制劑中，需要提高銀杏內(nèi)酯A與B的含量。
但是，銀杏內(nèi)酯類物質(zhì)在銀杏葉中含量很低，尤其是銀杏內(nèi)酯B的含量更少(CN1124275C)，而且隨著季節(jié)的變化而改變。而銀杏葉提取物中除銀杏內(nèi)酯外，各種銀杏黃酮類物質(zhì)，包括黃酮苷元和黃酮醇苷類物質(zhì)也是重要的活性物質(zhì)。因此，銀杏葉提取物制劑中需要同時提高銀杏內(nèi)酯類物質(zhì)與總黃酮類物質(zhì)的含量。
此外，在由銀杏葉提取物制備的注射液中，不僅需要提高活性成分的含量，而且需要盡量除盡會引起注射疼痛、熱源反應(yīng)等銀杏酚類物質(zhì)、蛋白質(zhì)、鞣質(zhì)等物質(zhì)，即使這些成分含量降至最低。
現(xiàn)有技術(shù)中由很多關(guān)于銀杏葉提取物注射液的報道，例如CN1193753C公開了一種采用新鮮銀杏葉提取物制備的銀杏葉注射液，可以大大提高總黃酮和銀杏內(nèi)酯的含量，但是，由于黃酮類物質(zhì)與黃酮醇苷類物質(zhì)相比，水溶性差，在體內(nèi)難以吸收，因此更需要提高注射液中黃酮醇苷類物質(zhì)的含量，而非僅僅是黃酮類物質(zhì)的含量。CN1517088A公開了一種銀杏葉提取物注射劑，該注射劑是在市售銀杏葉提取物中加入特殊賦形劑泊洛沙姆188使注射劑的pH呈堿性，但是該文獻并未解決注射劑中銀杏內(nèi)酯類物質(zhì)、黃酮醇苷類物質(zhì)含量低的問題，且銀杏酚類物質(zhì)、蛋白質(zhì)、鞣質(zhì)等物質(zhì)含量相對較高，不利于臨床使用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的第一個技術(shù)問題是克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種新的銀杏葉提取物，該銀杏葉提取物不僅總黃酮醇苷類物質(zhì)含量高，而且銀杏內(nèi)酯類物質(zhì)，尤其是銀杏內(nèi)酯A、B和C的含量也高，同時，有效地除盡了提取物中的銀杏酚類物質(zhì)，蛋白質(zhì)、鞣質(zhì)、熱源物質(zhì)等影響療效或引起副作用的雜質(zhì)。
本發(fā)明所要解決的第一個技術(shù)問題是通過以下技術(shù)途徑來實現(xiàn)的一種銀杏葉提取物，其特征在于主要含有以下重量百分比的成分黃酮醇苷18～40％，優(yōu)選為20～36％，更優(yōu)選22～30％，最優(yōu)選為23-25％，最最優(yōu)選為24％；銀杏內(nèi)酯2.5～25％，優(yōu)選為2.8～15％，更優(yōu)選為3.0～12％，最優(yōu)選為3.8～4.2％，最最優(yōu)選為4％；重金屬含量低于9.4ppm；其中，銀杏內(nèi)酯A、B和C的重量比為7～27∶3～20∶4～40，優(yōu)選為7～25∶4～18∶5～36，更優(yōu)選為8～18∶5～16∶8～32，最優(yōu)選為7∶3∶4。
本發(fā)明銀杏葉提取物不僅總黃酮醇苷和銀杏內(nèi)酯(銀杏內(nèi)酯由銀杏內(nèi)酯A(C20H24O9)，銀杏內(nèi)酯B(C20H24O10)和銀杏內(nèi)酯C(C20H24O11)組成)含量高，且含銀杏酚、蛋白質(zhì)、鞣質(zhì)等雜質(zhì)低于20ppm，重金屬含量低于9.4ppm，非常有利于制備成藥物制劑使用，尤其適合用于制備要求極高的注射劑，由于有效成分含量高，含雜質(zhì)低(所含的銀杏酚類物質(zhì)(例如銀杏酸)、蛋白質(zhì)、鞣質(zhì)、熱源物質(zhì)等雜質(zhì)低于20ppm)，由此制備得到的注射劑療效確切，不會引起注射疼痛，也不會引起熱源反應(yīng)。
銀杏內(nèi)酯A、B和C的比例直接影響到臨床治療效果(見表1)，本發(fā)明銀杏葉提取物的銀杏內(nèi)酯A、B和C的比例為7～27∶3～20∶4～40，在此比例范圍內(nèi)，各有效成分的協(xié)同作用能發(fā)揮到最佳，從而使得本發(fā)明銀杏葉提取物所制備的注射液與陽性對照藥物相比具有更好的臨床療效。
表1銀杏葉注射液含銀杏內(nèi)酯A、B和C不同比例的臨床療效試驗對比

*陽性對照藥物金納多注射液批號1591102，生產(chǎn)廠家德國威瑪舒培大藥廠。
本發(fā)明所要解決的第二個技術(shù)問題是提供一種制備上述銀杏葉提取物的方法。
本發(fā)明所要解決的第二個技術(shù)問題是通過以下技術(shù)途徑來實現(xiàn)的一種制備上述銀杏葉提取物的方法，包括以下步驟1)、a.銀杏葉粉碎后，加60～95％乙醇回流提取1-5次，每次回流提取時間1-3小時，每次加入的乙醇量為銀杏葉重量的5-10倍，過濾將濾液濃縮至銀杏葉重量的0.3～0.8倍，冷藏3～24小時；b.刮去浮油，將刮出的浮油，每次加銀杏葉重量的0.03～0.1倍的注射用水，攪拌洗滌1～5次，將洗滌液和濃縮液合并后，加注射用水至銀杏葉重量的1～3倍，冷藏16～84小時，過濾，濾液減壓濃縮至銀杏葉重量的0.2～0.5倍，放至室溫，加85％～95％乙醇，使含醇至80％；c.將醇沉后的溶液依次進行冷藏、過濾和濃縮并重復(fù)進行1～5次；2)、濃縮后的濾液用陽離子樹脂吸附2～8次，控制pH值至1～3，再用陰離子樹脂吸附1～5次，控制pH值至2～5，將吸附液過濾并減壓濃縮至銀杏葉重量的0.2～0.5倍，放至室溫，加85％～95％乙醇使含醇量至80％～84％，冷藏16～84小時，過濾減壓回收乙醇濃縮至銀杏葉重量的0.1～0.5倍，冷藏16-48小時，過濾備用；3)、分離水層與有機層，有機層回收溶劑，水層濃縮后即得銀杏葉提取物。
上述制備方法中，步驟1)中將銀杏葉粉碎后，加入銀杏葉5～10重量倍的60～95％乙醇回流1～5次；過濾將濾液濃縮至銀杏葉重量的0.4～0.5倍，冷藏；將刮出的浮油，每次加銀杏葉0.03～0.06倍重量的注射用水。
通過本發(fā)明方法制備得到銀杏葉提取物不僅總黃酮醇苷和銀杏內(nèi)酯含量高，而且銀杏內(nèi)酯A、B和C的重量比為7～27∶3～20∶4～40；不含銀杏酚類物質(zhì)(例如銀杏酸)、蛋白質(zhì)、鞣質(zhì)、熱源物質(zhì)等雜質(zhì)，重金屬含量不超過9.4ppm(按照中國藥典2000版標(biāo)準進行檢查)。由此制備得到的藥物制劑特別有利于臨床使用，尤其是由此制備的注射液在臨床使用中不會引起注射疼痛，熱源反應(yīng)等。
根據(jù)需要在上述提取物中添加藥用載體通過常規(guī)方法將其制備成相應(yīng)的藥物組合物或藥物制劑，優(yōu)選為注射劑。
本發(fā)明的銀杏葉提取物藥物組合物(特別是注射液)中根據(jù)需要還可以含有各種賦形劑，例如對于注射液可以加入等滲調(diào)節(jié)劑，如氯化鈉或葡萄糖等；增溶劑，例如羥丙基-β-環(huán)糊精；鰲合劑，例如乙二胺四乙酸二鈉或乙二胺四乙酸二鈉鈣等。
本發(fā)明還提供一種含有上述銀杏葉提取物和藥用載體的藥物組合物。
本發(fā)明還提供一種上述銀杏葉提取物在制備治療心血管疾病藥物中的用途。
根據(jù)本發(fā)明，含有上述銀杏葉提取物的藥物組合物優(yōu)選為注射劑，該注射劑可以由上述銀杏葉提取物添加常用藥用載體，按照常規(guī)制劑方法制備得到。
每1ml該注射劑含有總黃酮醇苷0.63～1.4mg，優(yōu)選0.76～1.2mg，更優(yōu)選0.78～0.9mg，最優(yōu)選0.82～0.86mg，最最優(yōu)選為0.84mg；含有銀杏內(nèi)酯0.0875～0.875mg，優(yōu)選0.11～0.525mg，更優(yōu)選0.12～0.42mg，最優(yōu)選0.13～0.15mg，最最優(yōu)選為0.14mg；且銀杏內(nèi)酯A、B和C的重量比為7～27∶3～20∶4～40，優(yōu)選為7～25∶4～18∶5～36，更優(yōu)選8～18∶5～16∶8～32，最優(yōu)選7∶3∶4。且該注射液含銀杏酚類、蛋白質(zhì)、鞣質(zhì)、熱源物質(zhì)等雜質(zhì)低于20ppm，重金屬含量低于10ppm。該注射劑的pH值為4.0～6.5，優(yōu)選為4.5～6.0，更優(yōu)選為4.5～5.8。
另外，本發(fā)明的銀杏葉注射劑可以制備成凍干粉針劑形式，該凍干粉針在注射用水，葡萄糖注射液及氯化鈉注射液等溶劑中可以速溶，不需要使用特殊的溶劑或助溶劑，且溶液澄清，不發(fā)生沉淀。且穩(wěn)定性好，有效期長，儲存運輸方便。
本發(fā)明銀杏葉提取物或注射劑中所含成分的測定方法一、銀杏內(nèi)酯A、B和C的測定方法本發(fā)明中是指銀杏內(nèi)酯A(C20H24O9)，銀杏內(nèi)酯B(C20H24O10)和銀杏內(nèi)酯C(C20H24O11)，其含量測定方法如下方法高效液相色譜法(中國藥典2000版)。
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；甲醇-四氫呋喃-水(20∶10∶75)為流動相；用蒸發(fā)光檢測器檢測。理論塔板數(shù)按銀杏A峰計算不低于5000。
對照品溶液的制備精密稱取銀杏內(nèi)酯A，B，C對照品適量，加丙酮制成每1ml分別含1mg，0.5mg，0.5mg的混合溶液，即得。
供試品溶液的制備精密稱取52.5mg本發(fā)明銀杏葉提取物加蒸餾水溶解制成15ml溶液，或精密量取本發(fā)明注射液15ml，加稀鹽酸調(diào)pH至2，用醋酸乙酯提取4次(20ml，10ml，10ml，10m1)，合并醋酸乙酯液，用20ml的5％醋酸鈉溶液洗滌，分取醋酸乙酯液，醋酸鈉溶液再用10ml醋酸乙酯洗滌，合并醋酸乙酯液及洗滌液，用水洗滌2次，每次20ml，合并醋酸乙酯液，蒸干，殘渣用適量丙酮溶解，并轉(zhuǎn)移至2ml量瓶中，加丙酮稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45μm)過濾，取續(xù)濾液，即得。
測定分別精密吸取對照品溶液和10μl與15μl，供試品溶液10μl，注入液相色譜儀，測定峰面積，以外標(biāo)兩點對數(shù)關(guān)系計算含量，即得。每1ml含銀杏內(nèi)酯以銀杏內(nèi)酯A計不少于0.07mg，以銀杏內(nèi)酯B計不少于0.03mg，以銀杏內(nèi)酯C計不少于0.04mg，三者之和不少于0.14mg。
二、總黃酮醇苷的測定方法本發(fā)明中的總黃酮醇苷主要是指槲皮素苷，山奈酚苷和異鼠李素苷，其測定方法如下方法高效液相色譜法(中國藥典2000年版)色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇-0.4％磷酸溶液(55∶45)為流動相；檢測波長為368nm。理論塔板鼠按槲皮素峰計算不低于2500；分離度按槲皮素與異鼠李素計算，大于1.5。
對制品溶液的制備精密稱取經(jīng)五氧化二磷干燥的槲皮素、山奈素與異鼠李素對照品，加甲醇制成每1ml各含0.03mg，0.03mg，0.02mg的混合溶液，作為對照品溶液(或分別制成每1ml中含槲皮素0.1mg，山奈素0.1mg，異鼠李素0.05mg的儲備液。臨用前精密量取各1ml，混勻)。
供試品溶液的制備精密稱取35mg提取物加水制成10ml溶液，或者精密量取10ml注射液，加甲醇16ml，18％鹽酸6ml，置水浴中加熱回流1.5小時，迅速冷卻至室溫，轉(zhuǎn)移至50ml容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45μm)過濾，取續(xù)濾液，即得。
測定法分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各10μl，注入高效液相色譜儀，測定，分別計算三種黃酮苷元的含量，以下式換算成總黃酮醇苷的含量總黃酮醇苷含量＝(槲皮素含量+山奈素含量+異鼠李素含量)×2.51本發(fā)明提取物含總黃酮醇苷為標(biāo)示量的90.0％-110％。
三、雜質(zhì)的檢測方法1、銀杏酚類以藥材為對照品，通過薄層色譜法(中國藥典2000版)試驗，在硅膠GF254薄層板上，以苯-正己烷-乙醇(5∶3∶1)為展開劑，以5％香草醛硫酸溶液顯色，在與對照藥材相應(yīng)的位置上，本發(fā)明提取物不顯示任何斑點。
2、蛋白質(zhì)取本發(fā)明提取物的1ml水溶液(制法見上述銀杏內(nèi)酯測定)，用1％氫氧化鈉溶液調(diào)pH值至6.5～7.0，加1％鞣酸1-3滴，不出現(xiàn)混濁或沉淀。
3、鞣質(zhì)取本發(fā)明提取物的1ml水溶液，加新鮮配制的含1％雞蛋清的生理鹽水5ml，放置10分鐘，不出現(xiàn)混濁或沉淀。
4、熱源取本發(fā)明產(chǎn)品，按照中國藥典2000版要求，檢查，劑量按家兔體重每1kg注射5ml，完全符合要求。
5、熾灼殘渣精密量取本發(fā)明注射液2ml，按照中國藥典2000版要求檢查，每1ml不超過0.5mg。
6、重金屬將熾灼殘渣項下遺留的殘渣，按照中國藥典2000版要求檢查，含重金屬不超過百萬分之十。
通過上述測定方法對本發(fā)明實施例所制備的銀杏葉注射劑與市售銀杏葉注射液的產(chǎn)品質(zhì)量進行了對比分析，結(jié)果如表2所示。
表2本發(fā)明注射液各成分含量的檢測結(jié)果

*金納多注射液批號1591102，生產(chǎn)廠家德國威瑪舒培大藥廠。
將本發(fā)明產(chǎn)品進行穩(wěn)定性考察，結(jié)果經(jīng)過一年后，本發(fā)明產(chǎn)品有效成分未降低，各種檢查均符合要求。
將本發(fā)明注射液與市售銀杏葉注射液(金納多注射液批號1591102，生產(chǎn)廠家德國威瑪舒培大藥廠)的治療心血管疾病的療效進行了對比分析，其結(jié)果見表3。試驗結(jié)果說明，本發(fā)明銀杏葉注射液的總體療效要明顯高于市售銀杏葉注射液的總體療效，且未發(fā)現(xiàn)明顯不良反應(yīng)，其安全性也明顯優(yōu)于市售銀杏葉注射液。
表3本發(fā)明銀杏葉注射液與金納多注射液的臨床療效試驗結(jié)果對比

本發(fā)明產(chǎn)品經(jīng)動物試驗，證明對血管無刺激性，也未出現(xiàn)過敏反應(yīng)。經(jīng)動物急性毒性試驗證明毒性小，非常有利于臨床使用。
以下通過實施例來進一步描述本發(fā)明的有益效果，應(yīng)該理解的是，這些實施例僅用于例證的目的，決不限制本發(fā)明的范圍。
具體實施例方式
實施例1銀杏葉提取物的制備取干燥銀杏葉1kg，用粉碎機粉碎后，加60％乙醇回流提取兩次，每次回流提取時間1小時，每次加入的乙醇量為銀杏葉重量的5倍，過濾將濾液濃縮至銀杏葉重量的0.3倍，冷藏3小時，刮去浮油，將刮出的浮油，每次加銀杏葉重量的0.03倍的注射用水，攪拌洗滌一次，將洗滌液和濃縮液合并后，加注射用水至銀杏葉重量的1倍，冷藏16小時，過濾，濾液減壓濃縮至銀杏葉重量的0.2倍，放至室溫，加85％乙醇，使含醇至80％，冷藏16小時，過濾，濃縮，上述冷藏、過濾、濃縮過程進行兩次。濾液用陽離子樹脂吸附2次，控制pH1.2，再用陰離子樹脂吸附2次，控制pH2，將吸附液過濾并減壓濃縮至銀杏葉重量的0.5倍，放至室溫，加85％乙醇使含醇量至80％，冷藏16小時，過濾減壓回收乙醇濃縮至銀杏葉重量的0.3倍，冷藏16小時，過濾備用。分離水層與有機層，有機層回收溶劑，水層濃縮后得到銀杏葉提取物。
經(jīng)檢測，本實施例所制備的銀杏葉提取物中各成分的重量百分含量如下黃酮醇苷24％，銀杏內(nèi)酯4.0％(銀杏內(nèi)酯A、B和C的重量比例為7∶3∶4)，重金屬含量8.8ppm。
實施例2銀杏葉提取物的制備取干燥銀杏葉1kg，用粉碎機粉碎后，加70％乙醇回流提取一次，回流提取時間2小時，加入的乙醇量為銀杏葉重量的10倍，過濾將濾液濃縮至銀杏葉重量的0.8倍，冷藏24小時，刮去浮油，將刮出的浮油，加銀杏葉重量的0.1倍的注射用水，攪拌洗滌一次，將洗滌液和濃縮液合并后，加注射用水至銀杏葉重量的3倍，冷藏84小時，過濾，濾液減壓濃縮至銀杏葉重量的0.5倍，放至室溫，加90％乙醇，使含醇至80％，冷藏84小時，過濾，濃縮，上述冷藏、過濾、濃縮過程重復(fù)進行三次。濾液用陽離子樹脂吸附8次，控制pH3，再用陰離子樹脂吸附5次，控制pH5，將吸附液過濾并減壓濃縮至銀杏葉重量的0.2倍，放至室溫，加85％乙醇使含醇量至82％，冷藏36小時，過濾減壓回收乙醇濃縮至銀杏葉重量的0.5倍，冷藏36小時，過濾備用。分離水層與有機層，有機層回收溶劑，水層濃縮后得到銀杏葉提取物。
經(jīng)檢測，本實施例所制備的銀杏葉提取物中各成分含量如下黃酮醇苷18％，銀杏內(nèi)酯2.5％(銀杏內(nèi)酯A、B和C的重量比例為9∶10∶25)，重金屬含量9.1ppm。
實施例3銀杏葉提取物的制備取新鮮銀杏葉1kg，用打漿機粉碎成糊，加80％乙醇回流提取三次，每次回流提取時間2小時，每次加入的乙醇量為銀杏葉重量的8倍，過濾將濾液濃縮至銀杏葉重量的0.4倍，冷藏20小時，刮去浮油，將刮出的浮油，加銀杏葉重量的0.04倍的注射用水，攪拌洗滌一次，將洗滌液和濃縮液合并后，加注射用水至銀杏葉重量的3倍，冷藏72小時，過濾，濾液減壓濃縮至銀杏葉重量的0.5倍，放至室溫，加95％乙醇，使含醇至80％，冷藏48小時，過濾，濃縮，上述冷藏、過濾、濃縮過程進行四次。濾液用陽離子樹脂吸附3次，控制pH1.7，再用陰離子樹脂吸附2次，控制pH3.5，將吸附液過濾并減壓濃縮至銀杏葉重量的0.5倍，放至室溫，加85％乙醇使含醇量至82％，冷藏36小時，過濾減壓回收乙醇濃縮至銀杏葉重量的0.2倍，冷藏48小時，過濾備用。分離水層與有機層，有機層回收溶劑，水層濃縮后得到銀杏葉提取物。
經(jīng)檢測，本實施例所制備的銀杏葉提取物中各成分含量如下黃酮醇苷32％，銀杏內(nèi)酯18％(銀杏內(nèi)酯A、B和C的重量比例為9∶9∶19)，重金屬含量9.1ppm。
實施例4銀杏葉提取物的制備取新鮮銀杏葉1kg，用打漿機粉碎成糊，加70％乙醇回流提取四次，每次回流提取時間3小時，每次加入的乙醇量為銀杏葉重量的8倍，過濾將濾液濃縮至銀杏葉重量的0.5倍，冷藏24小時，刮去浮油，將刮出的浮油，加銀杏葉重量的0.03倍的注射用水，攪拌洗滌一次，將洗滌液和濃縮液合并后，加注射用水至銀杏葉重量的1.5倍，冷藏48小時，過濾，濾液減壓濃縮至銀杏葉重量的0.2倍，放至室溫，加95％乙醇，使含醇至80％，冷藏48小時，過濾，濃縮，上述冷藏、過濾、濃縮過程進行五次。濾液用陽離子樹脂吸附3次，控制pH1.5，再用陰離子樹脂吸附1次，控制pH3.0，將吸附液過濾并減壓濃縮至銀杏葉重量的0.2倍，放至室溫，加95％乙醇使含醇量至82％，冷藏48小時，過濾減壓回收乙醇濃縮至銀杏葉重量的0.1倍，冷藏48小時，過濾備用。分離水層與有機層，有機層回收溶劑，水層濃縮后得到銀杏葉提取物。
經(jīng)檢測，本實施例所制備的銀杏葉提取物中各成分含量如下黃酮醇苷38％，銀杏內(nèi)酯25％(銀杏內(nèi)酯A、B和C的重量比例為26∶20∶40)，重金屬含量9.1ppm。
實施例5銀杏葉提取物注射液的制備取1.75g實施例1所制備的銀杏葉提取物，用500ml注射用水，加入0.5g羥丙基-β-環(huán)糊精和0.4g乙二胺四乙酸鈉攪拌至溶解，加入1g針用活性炭處理，用0.45μm微孔濾膜過濾，濾液補加注射用水至1000ml，滅菌，分裝為2ml/支。
本實施例所制備的注射液的各成分含量的檢測結(jié)果見表1。
實施例6銀杏葉提取物注射液的制備取3.5g實施例3所制備的銀杏葉提取物，用500ml注射用水，加入0.5g羥丙基-β-環(huán)糊精和0.4g乙二胺四乙酸鈉攪拌至溶解，加入1g針用活性炭處理，用0.45μm微孔濾膜過濾，濾液補加注射用水至1000ml，滅菌，分裝為2ml/支。
本實施例所制備的注射液的各成分含量的檢測結(jié)果見表1。
實施例7銀杏葉提取物注射液的制備取3.5g實施例4所制備的銀杏葉提取物，用500ml注射用水，加入0.5g羥丙基-β-環(huán)糊精和0.4g乙二胺四乙酸鈉攪拌至溶解，加入1g針用活性炭處理，用0.45μm微孔濾膜過濾，濾液補加注射用水至1000ml，滅菌，分裝為2ml/支。
本實施例所制備的注射液的各成分含量的檢測結(jié)果見表1。
實施例8銀杏葉提取物凍干注射劑的制備將實施例3所制備的銀杏葉提取物3.5g加注射用水550ml，另取甘露醇20g溶于適量注射用水中，將其加入銀杏葉提取物溶液中混合，補加注射用水至1000ml。過濾，在0～4℃冷藏過夜，冷藏液用0.2μm微孔濾膜過濾，濾液分裝成5ml/支，檢查裝量后凍干，壓蓋，包裝，得銀杏葉提取物凍干注射劑成品。
本實施例所制備的凍干注射劑的各成分含量的檢測結(jié)果見表1。
權(quán)利要求
1.一種銀杏葉提取物，以重量計，該銀杏葉提取物中總黃酮醇苷的含量為18～40％，銀杏內(nèi)酯含量為2.5～25％，重金屬含量低于9.4ppm；其中，銀杏內(nèi)酯A、B和C的重量比為7～27∶3～20∶4～40。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的銀杏葉提取物，其特征在于以重量計總黃酮醇苷的含量為20～36％，銀杏內(nèi)酯含量為2.8～15％；銀杏內(nèi)酯A、B和C的重量比為7～25∶4～18∶5～36。
3.根據(jù)權(quán)利要求2的銀杏葉提取物，其特征在于以重量計總黃酮醇苷的含量為22～30％，銀杏內(nèi)酯含量為3.0～12％；銀杏內(nèi)酯A、B和C的重量比為8～18∶5～16∶8～32。
4.根據(jù)權(quán)利要求3的銀杏葉提取物，其特征在于以重量計總黃酮醇苷的含量為23～25％，銀杏內(nèi)酯含量為3.8～4.2％；銀杏內(nèi)酯A、B和C的重量比為7∶3∶4。
5.根據(jù)權(quán)利要求4的銀杏葉提取物，其特征在于以重量計總黃酮醇苷的含量為24％，銀杏內(nèi)酯含量為4.0％。
6.一種含有銀杏葉提取物的藥物組合物，其特征在于該藥物組合物含有權(quán)利要求1至4中任意一項的銀杏葉提取物和藥用載體。
7.一種銀杏葉提取物注射劑，其特征在于由權(quán)利要求1的銀杏葉提取物按照常規(guī)制劑方法制備得到。
8.按照權(quán)利要求7的銀杏葉提取物注射劑，其特征在于每1ml該注射液含有總黃酮醇苷0.63～1.4mg，含有銀杏內(nèi)酯0.0875～0.875mg，重金屬含量低于9.4ppm，pH值為4.0～6.0；銀杏內(nèi)酯A、B和C的重量比為7～27∶3～20∶4～40。
9.根據(jù)權(quán)利要求8的注射劑，其特征在于每1ml該注射劑含有總黃酮醇苷0.76～1.2mg，含有銀杏內(nèi)酯0.11～0.525mg；銀杏內(nèi)酯A、B和C的重量比為7～25∶4～18∶5～36。
10.根據(jù)權(quán)利要求9的注射劑，其特征在于每1ml該注射劑含有總黃酮醇苷0.78～0.9mg，含有銀杏內(nèi)酯0.12～0.42mg；銀杏內(nèi)酯A、B和C的重量比為8～18∶5～16∶8～32。
11.根據(jù)權(quán)利要求10的注射劑，其特征在于每1ml該注射劑含有總黃酮醇苷0.82～0.86mg，含有銀杏內(nèi)酯0.13～0.15mg；銀杏內(nèi)酯A、B和C的重量比為7∶3∶4。
12.根據(jù)權(quán)利要求11的注射劑，其特征在于每1ml該注射劑含有總黃酮醇苷0.84mg，含有銀杏內(nèi)酯0.14mg。
13.根據(jù)權(quán)利要求8的注射劑，其特征在于該注射劑的pH值為4.5～5.8。
14.根據(jù)權(quán)利要求7至13中任意一項的銀杏葉提取物注射劑，其特征在于所述的注射劑為凍干粉針劑形式。
15.一種制備權(quán)利要求1～5中任意一項銀杏葉提取物的方法，包括以下步驟1)a.銀杏葉粉碎后，加60～95％乙醇回流提取1-5次，每次回流提取時間1～3小時，每次加入的乙醇量為銀杏葉重量的5～10倍，過濾將濾液濃縮至銀杏葉重量的0.3～0.8倍，冷藏3～24小時；b.刮去浮油，將刮出的浮油，每次加銀杏葉重量的0.03～0.1倍的注射用水，攪拌洗滌1～5次，將洗滌液和濃縮液合并后，加注射用水至銀杏葉重量的1～3倍，冷藏16～84小時，過濾，濾液減壓濃縮至銀杏葉重量的0.2～0.5倍，放至室溫，加85％～95％乙醇，使含醇至80％；c.將醇沉后的溶液依次進行冷藏、過濾和濃縮并重復(fù)進行1～5次；2)濃縮后的濾液用陽離子樹脂吸附2～8次，控制pH值至1～3，再用陰離子樹脂吸附1～5次，控制pH值至2～5，將吸附液過濾并減壓濃縮至銀杏葉重量的0.2～0.5倍，放至室溫，加85％～95％乙醇使含醇量至80％～84％，冷藏16～84小時，過濾減壓回收乙醇濃縮至銀杏葉重量的0.1～0.5倍，冷藏16～48小時，過濾備用；3)分離水層與有機層，有機層回收溶劑，水層濃縮后即得銀杏葉提取物。
16.按照權(quán)利要求15的方法，其特征在于步驟1)中將銀杏葉粉碎后，加入銀杏葉5～10倍重量的60～95％乙醇回流1～5次；過濾將濾液濃縮至銀杏葉重量的0.4～0.5倍，冷藏；將刮出的浮油，每次加銀杏葉0.03～0.06倍重量的注射用水。
17.權(quán)利要求1～5所述的任一項銀杏葉提取物在制備治療心血管疾病藥物中的用途。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種新的銀杏葉提取物、含有該提取物的注射劑及其制備方法。該銀杏葉提取物主要含有以下重量百分比的成分黃酮醇苷18～40％，銀杏內(nèi)酯2.5～25％，重金屬含量低于9.4ppm；其中，銀杏內(nèi)酯由下述重量比例的銀杏內(nèi)酯A、B和C組成7～27∶3～20∶4～40。本發(fā)明銀杏葉提取物不僅有效成分含量高，而且所含的銀杏酚類物質(zhì)(例如銀杏酸)、蛋白質(zhì)、鞣質(zhì)、熱源物質(zhì)等雜質(zhì)低于20ppm，由此制備得到的藥物制劑，尤其是注射劑，對心腦血管疾病療效顯著，臨床使用安全，不會產(chǎn)生注射疼痛，熱源反應(yīng)等副作用。
文檔編號A61K127/00GK1899323SQ20051008424
公開日2007年1月24日 申請日期2005年7月18日 優(yōu)先權(quán)日2005年7月18日
發(fā)明者郭東宇 申請人:廈門國宇知識產(chǎn)權(quán)研究有限公司