專利名稱：一種小牛血去蛋白提取物凝膠劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及小牛血去蛋白提取物的一種新劑型，特別涉及小牛血去蛋白提取物凝膠劑。
背景技術(shù)：
目前的外用藥物劑型以膏劑和液態(tài)劑型(擦劑和滴眼劑等)為主。液體劑型易流淌，藥物損失大，外用時干燥快，使藥物有效成分失去載體而不易吸收；膏劑的基質(zhì)都是油性物質(zhì)(以凡士林和甘油最為多見)，膏劑雖然釋放藥物緩慢，也不會流淌，但基質(zhì)不易吸收，也不易干燥，使用十分不便。凝膠劑是以卡波母等為基質(zhì)的，外觀清亮透明，流動性小，組織易吸收，作為臨床應用劑型非常受歡迎，呈現(xiàn)逐步取代膏劑的趨勢。
小牛血去蛋白類產(chǎn)品能促進細胞對葡萄糖和氧的攝取與利用。在低血氧以及能量需求增加等情況下，該產(chǎn)品可以促進能量代謝，增加供氧量?？芍委熌X部血液循環(huán)和營養(yǎng)障礙性疾病(缺血性損害、顱腦外傷)所引起的神經(jīng)功能缺損；可治療末稍動脈、靜脈循環(huán)障礙及其引起的動脈血管病，腿部潰瘍；還可治療皮膚燒傷、燙傷、糜爛，放射所致的皮膚、粘膜損傷；愈合傷口(創(chuàng)傷、褥瘡)。
目前小牛血去蛋白類產(chǎn)品主要有水針、膏劑、片劑，沒有凝膠劑，水針和片劑是全身給藥，不能局部應用；膏劑是局部應用劑型，但其基質(zhì)的滲透性差，局部吸收不良。凝膠制劑是近年來開發(fā)成功的新的藥用劑型，應用尚不普遍；目前在小牛血制品領(lǐng)域中從事凝膠制劑開發(fā)大部分尚處在探索階段。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供小牛血去蛋白提取物的一種新劑型凝膠劑，既可以局部應用，也可以克服膏劑滲透性差的缺點。
本發(fā)明所提供的小牛血去蛋白提取物凝膠劑，由包括下述成分的原料制成小牛血去蛋白提取液20-50重量份，卡波姆0.5-1.2重量份，注射用水45-80重量份；所述小牛血去蛋白提取液中固形物的質(zhì)量百分含量為2％-7％。
為了調(diào)節(jié)基質(zhì)的pH值，所述原料還包括0.2-0.5重量份的氫氧化鈉。
所述原料還包括0.05-0.1重量份的抑菌劑。
所述抑菌劑可為羥基苯甲酸乙酯、富馬酸二甲酯或低級脂肪酸酯。
所述羥基苯甲酸乙酯可為對羥基苯甲酸乙酯；所述低級脂肪酸酯可為單甘油酯。
所述小牛血去蛋白提取液可按照專利號為ZL 96120777.9，發(fā)明名稱為“一種提取小牛血去蛋白提取物的方法”中描述的方法制備采1-6個月齡幼牛靜脈血，分離出血清，用乙醇去蛋白，減壓去除乙醇，在余下液體中加入復合蛋白酶水解，離心分離留上清，所述上清用5000道爾頓中空纖維柱超濾截留，收集得到的濾液即為小牛血去蛋白提取液；其中所述的用乙醇去蛋白時乙醇的用量為兩倍于血清體積的質(zhì)量百分含量為96％乙醇；其中所述的減壓去除乙醇為利用真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，37℃，1個大氣壓減壓除乙醇；其中所述的加入復合蛋白酶水解為加入復合蛋白酶水解24小時；其中所述的加入復合蛋白酶水解后離心分離為在10000rpm、4℃，離心30分鐘，留上清。
所述卡波姆可為卡波姆934GE、910、934、934P、940、941、1342等。
本發(fā)明的小牛血去蛋白提取物凝膠劑以卡波姆為基質(zhì)，釋藥快、無油膩性、易涂展、易滲透；氫氧化鈉和卡波姆按一定的比例配比，可以調(diào)節(jié)基質(zhì)的pH值到最佳值，保證凝膠劑使用的舒適性；一定量的抑菌劑可以保證外用劑型的穩(wěn)定性。小牛血去蛋白凝膠劑彌補了注射液和片劑不能局部應用的缺陷，也克服了局部用膏劑滲透性差的不足。本發(fā)明的小牛血去蛋白提取物凝膠劑可用于治療創(chuàng)傷性、炎癥性和營養(yǎng)性角膜、結(jié)膜病變；干眼癥；各種原因引起的潰瘍(如各種腳部潰瘍、x射線潰瘍、褥瘡潰瘍)的初始治療；動脈硬化及/或糖尿病引起的血液循環(huán)嚴重障礙而引起的營養(yǎng)不良性損害以及燒傷、皮膚灼傷。實驗結(jié)果表明本發(fā)明的小牛血去蛋白提取物凝膠劑用于眼角膜潰瘍和燒傷等局部病變，療效顯著，其外觀清亮透明，黏度適中，應用于眼部不會對眼功能造成障礙。
具體實施例方式
下述實施例中的實驗方法，如無特別說明，均為常規(guī)方法。
下述實施例中的百分含量，如無特別說明，均為質(zhì)量百分含量。
實施例1、生產(chǎn)小牛血去蛋白提取液含量為20％的小牛血去蛋白提取物凝膠劑生產(chǎn)1000支小牛血去蛋白提取物凝膠劑(每支20g，含小牛血去蛋白提取液20％，卡波姆0.8％，對羥基苯甲酸乙酯0.1％)。
該小牛血去蛋白提取物凝膠劑的原料組成如下小牛血去蛋白提取液4000g卡波姆(934) 160g氫氧化鈉 64g
對羥基苯甲酸乙酯 20g注射用水 15756g將上述原料制成1000支小牛血去蛋白提取物凝膠劑(每支20g，含20％小牛血去蛋白提取物)，具體方法如下1、制備小牛血去蛋白提取液無菌條件下采1-6個月齡的東北純種黃牛的靜脈血，無菌條件下，4000rpm，4℃，離心15分鐘分離血清，取20L血清，加入40L 96％乙醇，不斷攪拌，靜置60分鐘，使蛋白質(zhì)變性沉淀，然后經(jīng)20000rpm 4℃離心30min，棄沉淀，得到50L上清，利用真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，37℃，1個大氣壓減壓除乙醇，在余下液體中加入6g復合蛋白酶，在37℃水解24小時，在10000rpm、4℃，離心30分鐘，留上清，上清用5000道爾頓中空纖維柱超濾截留，收集得到的濾液即為小牛血去蛋白提取液，得到4000ml(g)小牛血去蛋白提取液。
2、制備小牛血去蛋白提取物凝膠劑(1)器具準備將所有器具(攪拌釜、封尾填充器)洗凈、滅菌。
(2)基質(zhì)制備稱取卡波姆(934)160g，對羥基苯甲酸乙酯20g，加注射用水15756g，氫氧化鈉64g，在攪拌釜中混勻。
(3)基質(zhì)滅菌將基質(zhì)在121℃條件下，高壓滅菌20min。
(4)半成品的制備取小牛血去蛋白提取液4000g，加入無菌基質(zhì)中，充分混勻，用0.1mol/L NaOH或0.1mol/L HCl調(diào)節(jié)至pH值為5.5～8.5。
(5)分裝用封尾軟膏填充器分裝到鋁管中，每支20g。
(6)檢驗、包裝按小牛血去蛋白軟膏成品的質(zhì)量標準進行檢驗，合格者進行包裝成成品。
實施例2、生產(chǎn)小牛血去蛋白提取液含量為50％的小牛血去蛋白提取物凝膠劑生產(chǎn)1000支小牛血去蛋白凝膠劑(每支5g，含小牛血去蛋白提取液50％，卡波姆(934)1％，富馬酸二甲酯的比例為0.05％)該小牛血去蛋白提取物凝膠劑的原料組成如下小牛血去蛋白提取液 2500g卡波姆(934)50g氫氧化鈉 20g富馬酸二甲酯 2.5g注射用水 2427.5g
將上述原料制成1000支小牛血去蛋白提取物凝膠劑(每支5g，含50％小牛血去蛋白提取液)，具體方法如下1、制備小牛血去蛋白提取液無菌條件下采1-6個月齡的東北純種黃牛的靜脈血，無菌條件下，4000rpm，4℃，離心15分鐘分離血清，取12L血清，加入24L 96％乙醇，不斷攪拌，靜置60分鐘，使蛋白質(zhì)變性沉淀，然后經(jīng)20000rpm 4℃離心30min，棄沉淀，得到30L上清，利用真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，37℃，1個大氣壓減壓除乙醇，在余下液體中加入3.6g復合蛋白酶，在37℃水解24小時，在10000rpm、4℃，離心30分鐘，留上清，上清用5000道爾頓中空纖維柱超濾截留，收集得到的濾液即為小牛血去蛋白提取液，得到2500g小牛血去蛋白提取液。
2、制備小牛血去蛋白提取物凝膠劑(1)器具準備將所有器具(攪拌釜、封尾填充器)洗凈、滅菌。
(2)基質(zhì)制備稱取卡波姆(934)50g，富馬酸二甲酯2.5g，加注射用水2427.5g，氫氧化鈉20g，混勻。
(3)基質(zhì)滅菌將基質(zhì)在121℃條件下，高壓滅菌20min。
(4)半成品的制備取小牛血去蛋白提取液2500g，加入無菌基質(zhì)中，充分混勻，用0.1mol/L NaOH或0.1mol/L HCl調(diào)節(jié)至pH值為5.5～8.5。
(5)分裝用封尾軟膏填充器分裝到鋁管中，每支5g。
(6)檢驗、包裝按小牛血去蛋白軟膏成品的質(zhì)量標準進行檢驗，合格者進行包裝成成品。
實施例3、小牛血去蛋白提取物凝膠劑對兔角膜堿燒傷上皮修復的影響實驗藥品小牛血去蛋白提取液含量為20％、50％、70％的小牛血去蛋白提取液凝膠劑，規(guī)格均為5克/支。它們的生產(chǎn)工藝同實施例1，只是原料組成不同，小牛血去蛋白提取液含量為20％的小牛血去蛋白提取物凝膠劑的原料組成為小牛血去蛋白提取液1g/支，卡波姆(934)0.04g/支，氫氧化鈉0.016g/支，對羥基苯甲酸乙酯0.005g/支，注射用水3.939g/支；小牛血去蛋白提取液含量為50％的小牛血去蛋白提取物凝膠劑的原料組成為小牛血去蛋白提取液2.5g/支，卡波姆(934GE)0.05g/支，氫氧化鈉0.02g/支，對羥基苯甲酸乙酯0.0025g/支，注射用水2.4275g/支；小牛血去蛋白提取液含量為70％的小牛血去蛋白提取物凝膠劑的原料組成為小牛血去蛋白提取液3.5g/支，卡波姆(934GE)0.05g/支，氫氧化鈉0.02g/支，對羥基苯甲酸乙酯0.0025g/支，注射用水1.4275g/支。
素高捷療眼膏(幼牛血提取物眼膏)瑞士巴塞而素高大藥廠生產(chǎn)，規(guī)格為20％(小牛血去蛋白提取液含量)，5克/支。
本實驗采用日本大耳白家兔(錦州醫(yī)學院實驗動物中心，合格證號遼實動質(zhì)證字038號)40只，體重為2.5～3.5Kg，雌雄兼用，健康無眼病。用1％地卡因表面麻醉。將浸有0.5mol/L NaOH溶液的直徑為8mm的濾紙片，置角膜表面中央，維持1min取下，用滅菌生理鹽水連續(xù)沖洗2min，制成堿燒傷模型。將每只兔右側(cè)角膜堿燒傷后，將動物隨機均分成5組，即小牛血去蛋白提取物凝膠劑三個實驗組(II、III、IV組)、素高捷療眼膏實驗組(V組)、PBS緩沖液空白對照組(I組)。
I組滴眼劑溶媒(PBS緩沖液)II組20％小牛血去蛋白提取物凝膠劑III組50％小牛血去蛋白提取物凝膠劑IV組70％小牛血去蛋白提取物凝膠劑V組素高捷療眼膏給藥方法每次1滴，每天4次，連續(xù)2周。進行角膜臨床體征評分和計算角膜上皮愈合率。
1、角膜體征評分所有動物分別于第0、1、2、3、5、7、10及14天用裂隙燈檢查各組的角膜體征。參照Ando等的評分標準進行評定①角膜混濁0分角膜透明，無混濁；1分角膜輕度混濁，虹膜紋理可見；2分角膜中度混濁，虹膜紋理不清；3分角膜中度混濁，隱見瞳孔；4分角膜重度混濁，瞳孔不見。
②上皮熒光素染色0分角膜無著色；1分角膜染色面積≤1/4象限；2分角膜染色面積＞1/4但≤1/2象限；
3分角膜染色面積＞1/2但≤3/4象限；4分角膜染色面積≥3/4象限。
凡具有任何一種表現(xiàn)均記分，然后將所得分數(shù)相加即為臨床累計分數(shù)(clinical accumulation score，CAS)。
角膜臨床體征評分結(jié)果如表1所示。
表1 試驗組與對照組角膜臨床累計分數(shù)(X±SD，n＝8)

注a與I組相比P＜0.05b與II組相比P＜0.05c與V組相比P＜0.052、角膜上皮愈合采用熒光染色方法用20％熒光素鈉無菌溶液一滴，滴入兔結(jié)膜囊內(nèi)，使其被動閉眼5min，然后稍停片刻，如果眼內(nèi)仍有較多的染料，可用生理鹽水溶液沖洗除去之，然后用裂隙燈觀察。
分別于傷后0、1、2、3、5、7、10、14天進行裂隙燈檢查，熒光素染色照相，照片經(jīng)計算機圖象分析系統(tǒng)處理，計算其角膜上皮愈合率。

數(shù)據(jù)處理實驗所得數(shù)據(jù)用均值±標準差表示，用t檢驗進行統(tǒng)計分析。
角膜上皮損傷面積如表2，上皮愈合率如表3。
表2 角膜上皮損傷面積(mm2，X±SD)

注a與I組相比P＜0.05b與II組相比P＜0.05；c與V組相比P＜0.05表3 角膜上皮愈合率(％)

結(jié)果表明小牛血去蛋白提取物凝膠劑低、中、高劑量組和素高捷療眼膏組各數(shù)據(jù)角膜累計分數(shù)及角膜上皮損傷面積有顯著下降，與空白對照組相比均有顯著性差異P＜0.05；中、高劑量組的小牛血去蛋白提取物凝膠劑作用明顯高于低劑量組和素高捷療眼膏組，而中、高劑量組小牛血去蛋白提取物凝膠劑之間無顯著性差異。由此表還可以看出，藥物的作用隨時間的延長，作用更為明顯。
小牛血去蛋白提取物凝膠劑的主要成分是小牛血去蛋白提取物，它是由無機離子及氨基酸、小分子肽、核苷酸、低聚糖、脂類等小分子有機物組成。小牛血去蛋白提取物所包含的這些小分子物質(zhì)能改善組織細胞對氧和葡萄糖的攝取及利用，還能促進成纖維細胞和血管內(nèi)皮細胞的游走和增殖，因而能夠促進創(chuàng)傷愈合。
低劑量小牛血去蛋白提取物凝膠劑與對照組和素高捷療眼膏組比較，小牛血去蛋白提取物凝膠劑組上皮愈合率高，顯著高于對照組，與素高捷療眼膏組比較卻無顯著性差異；第3天出現(xiàn)角膜上皮再脫落損傷現(xiàn)象，但小牛血去蛋白提取物凝膠劑組與素高捷療眼膏組和對照組比較損傷程度較輕，脫落范圍小，且中、高劑量組隨時間的延長，角膜上皮愈合率均超過65％，顯著高于低劑量組及素高捷療眼膏組，而對照組的上皮愈合率僅42.8％，且愈合速度慢。
小牛血去蛋白提取物凝膠劑組能顯著促進角膜上皮的修復，提高早期愈合率，在一定程度上延緩或減輕角膜上皮再脫落損傷，而且中濃度療效較佳。
實施例4、小牛血去蛋白提取物凝膠劑對大鼠糖尿病性皮膚潰瘍愈合的影響實驗藥品小牛血去蛋白提取液含量為10％、20％、30％的小牛血去蛋白提取物凝膠劑，規(guī)格均為20克/支。它們的生產(chǎn)工藝同實施例1，只是原料組成不同，小牛血去蛋白提取液含量為10％的小牛血去蛋白提取物凝膠劑的原料組成為小牛血去蛋白提取液2g/支，卡波姆(934GE)0.16g/支，氫氧化鈉0.064g/支，對羥基苯甲酸乙酯0.02g/支，注射用水17.756g/支；小牛血去蛋白提取液含量為20％的小牛血去蛋白提取物凝膠劑的原料組成為小牛血去蛋白提取液4g/支，卡波姆(934GE)0.16g/支，氫氧化鈉0.064g/支，對羥基苯甲酸乙酯0.02g/支，注射用水15.756g/支；小牛血去蛋白提取液含量為30％的小牛血去蛋白提取物凝膠劑的原料組成為小牛血去蛋白提取液6g/支，卡波姆(934GE)0.16g/支，氫氧化鈉0.064g/支，對羥基苯甲酸乙酯0.02g/支，注射用水13.756g/支。
素高捷療眼膏(小牛血去蛋白提取物軟膏)瑞士巴塞而素高大藥廠生產(chǎn)，規(guī)格為10％(小牛血去蛋白提取液含量)，20克/支。
1、制備糖尿病創(chuàng)面模型取3月齡雄性普通級SD大鼠(錦州醫(yī)學院實驗動物中心)，體重200g-250g實驗前12h禁食，定量飲水。實驗當日稱體重，尾靜脈采血和收集尿液，用血糖儀(One touch profile血糖儀Lifescn Inc American)和試紙法分別測定基礎(chǔ)血糖和尿糖，然后，按150mg/kg體重腹腔注射3％四氧嘧啶。1周后當動物血糖濃度大于11mol/L以及尿糖為++++(＞20g/L)時，糖尿病模型復制成功。實驗過程中，對糖尿病動物每日測定其尿糖變化，采用補充注射四氧嘧啶或胰島素(2u/只)的方式維持其血糖在11-16.5mmol/L。
取人工復制的糖尿病大鼠模型，以3％戊巴比妥鈉(25mg/kg)腹腔推注麻醉后，背部剃毛，常規(guī)消毒。在無菌條件下用打孔器在鼠背中部脊柱兩側(cè)各打一圓孔，深至皮下，直徑1.8cm，創(chuàng)面面積2.54cm2。止血后單籠喂養(yǎng)，定量飲水與喂食，得到糖尿病創(chuàng)面模型。
2、實驗分組與治療取糖尿病創(chuàng)面模型鼠40只，均分為五組，I、II、III、IV和V組。取8只健康非糖尿病大鼠，以3％戊巴比妥鈉(25mg/kg)腹腔推注麻醉后，背部剃毛，常規(guī)消毒。在無菌條件下用打孔器在鼠背中部脊柱兩側(cè)各打一圓孔，深至皮下，直徑1.8cm，創(chuàng)面面積2.54cm2。止血后單籠喂養(yǎng)，定量飲水與喂食，得到單純皮膚創(chuàng)面模型，不給藥，作為VI組(非糖尿病對照組)。
I組(空白對照組)創(chuàng)面不涂藥；II組(低劑量實驗組)創(chuàng)面涂布10％小牛血去蛋白提取物凝膠劑；III組(中劑量實驗組)創(chuàng)面涂布20％小牛血去蛋白提取物凝膠劑；IV組(高劑量實驗組)創(chuàng)面涂布30％小牛血去蛋白提取物凝膠劑；V組(陽性對照組)創(chuàng)面涂布素高捷療軟膏；VI組(非糖尿病對照組)創(chuàng)面不涂藥。
每組各8只動物(16個創(chuàng)面)。每日清潔創(chuàng)面，防止感染，各組均采取暴露療法，不予包扎。II-V組于模型造好次日開始用藥，在創(chuàng)面上均勻涂一薄層，厚度為1mm左右，每4小時～6小時換藥一次，連續(xù)給藥14天。于給藥第0、5、10、15天分別記錄各實驗組及對照組的創(chuàng)面面積，采用計算機圖象分析系統(tǒng)進行處理。各組數(shù)據(jù)均用均值±標準差表示，用t檢驗進行統(tǒng)計分析。
各組大鼠的創(chuàng)面愈合情況如表4所示表4 各組大鼠皮膚創(chuàng)面的愈合情況(x±SD，n＝16)

注a與VI組比較P＜0.05，b與VI組比較P＜0.01，c與I組比較P＜0.05，d與I組比較P＜0.01實驗結(jié)果表明，糖尿病大鼠(即空白對照組)的創(chuàng)面愈合速度明顯比非糖尿病大鼠緩慢，在傷后10天非糖尿病大鼠平均殘留創(chuàng)面為0.43cm2，愈合面積約達在83％，而糖尿病大鼠平均殘留創(chuàng)面為1.04cm2(P＜0.01)，愈合面積僅為59％，傷后15天非糖尿病大鼠的創(chuàng)面已完全愈合，而糖尿病大鼠仍存在約0.45cm2的殘余創(chuàng)面未愈合。小牛血去蛋白提取物凝膠劑可使糖尿病大鼠的創(chuàng)面愈合速度加快，在治療2周后，低劑量組殘余創(chuàng)面面積為0.29cm2，較空白對照組明顯縮小(P＜0.05)，中劑量組和高劑量組殘余創(chuàng)面面積分別為0.22cm2和0.20cm2，與空白對照組相比差異具有顯著性意義(P＜0.01)。小牛血去蛋白提取物凝膠劑組與素高捷療軟膏組比較無明顯差異。不同劑量的實驗組相比，相同時間內(nèi)中、高劑量小牛血去蛋白提取物凝膠劑組殘余創(chuàng)面面積相應地比低劑量組為小，但差異無統(tǒng)計學意義。
小牛血去蛋白提取物不僅能提高組織細胞對氧和葡萄糖的攝取及利用，還能促進成纖維細胞和血管內(nèi)皮細胞的游走和增殖，改善微循環(huán)，保護缺血組織，因而能夠促進創(chuàng)傷愈合。本實驗結(jié)果表明，小牛血去蛋白提取物凝膠劑可加速大鼠糖尿病性皮膚潰瘍創(chuàng)面的愈合，明顯縮小創(chuàng)面面積。
實施例5、小牛血去蛋白凝膠劑對兔角膜上皮缺損愈合的影響實驗藥品同實施例3。
采用日本大耳白家兔，體重為2.5～3.5Kg，雌雄兼用，健康無眼病。動物來源錦州醫(yī)學院實驗動物中心(合格證號遼實動質(zhì)證字038號)。
1、動物模型的復制取健康日本大耳白家兔，35％烏拉坦耳靜脈緩注5-8ml，不充分時加乙醚吸入。用開瞼器開打瞼裂，滴2次1％地卡因兩滴，作表面麻醉用直徑為8mm的環(huán)鉆于角膜中部作表層壓痕，1％熒光素染色后用生理鹽水沖洗，顯露環(huán)痕后用柳葉刀刮去環(huán)內(nèi)全部上皮，再熒光素染色呈8mm均勻著色圓盤狀上皮缺損區(qū)，制成兔角膜上皮缺損模型。
2、實驗分組與治療方法取家兔40只，按上述方法將每只家兔的右眼制成角膜上皮缺損模型，隨機分成5組，每組8只，分別滴眼治療。
I組為空白對照組，滴生理鹽水；II組實驗組，用20％小牛血去蛋白提取物凝膠劑；III組實驗組，用50％小牛血去蛋白提取物凝膠劑；IV組實驗組，用70％小牛血去蛋白提取物凝膠劑；V組為陽性對照組，用素高捷療眼膏。
各組給藥方法均為每次1滴，每天4次，至創(chuàng)面愈合。每24小時按如下方法測定角膜上皮損傷愈合面積計算愈合率每日采用熒光染素染色后，用瞳孔測量計測量4個方向熒光素著色區(qū)的長度，取平均值做為創(chuàng)面直徑，按S＝πR2，求出剩余損傷面積；愈合率＝愈合面積/初始損傷面積×100％。實驗所得數(shù)據(jù)用均值±標準差表示，用t檢驗進行統(tǒng)計分析。結(jié)果如表5所示表5 角膜上皮損傷愈合面積和愈合率比較(mm2，X±SD)

a與I組相比P＜0.01；b與II組相比P＜0.01；c與V組相比P＜0.01表明小牛血去蛋白提取物凝膠劑低、中、高劑量組和素高捷療眼膏組的創(chuàng)面愈合面積均快于生理鹽水組，均于傷后第4天完全愈合，平均比空白對照組早1天，差異具有統(tǒng)計學意義。小牛血去蛋白提取物凝膠劑中、高劑量組的創(chuàng)面愈合速度明顯快于低劑量組和素高捷療眼膏組(P＜0.01，而中、高劑量實驗組之間無顯著性差異。
小牛血去蛋白提取物凝膠劑的主要成份是小牛血去蛋白提取物，它是由無機離子及氨基酸、小分子肽、核苷酸、低聚糖、脂類等小分子有機物組成。小牛血去蛋白提取物所包含的這些小分子物質(zhì)能改善組織細胞對氧和葡萄糖的攝取及利用，還能促進成纖維細胞和血管內(nèi)皮細胞的游走和增殖，因而能夠促進創(chuàng)傷愈合。本實驗結(jié)果表明小牛血去蛋白提取物凝膠劑能明顯加快角膜上皮損傷的愈合。
權(quán)利要求
1.小牛血去蛋白提取物凝膠劑，由包括下述成分的原料制成小牛血去蛋白提取液20-50重量份，卡波姆0.5-1.2重量份，注射用水45-80重量份；所述小牛血去蛋白提取液中固形物的質(zhì)量百分含量為2％-7％。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的小牛血去蛋白提取物凝膠劑，其特征在于所述原料還包括氫氧化鈉0.2-0.5重量份。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的小牛血去蛋白提取物凝膠劑，其特征在于所述原料還包括抑菌劑0.05-0.1重量份。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的小牛血去蛋白提取物凝膠劑，其特征在于所述抑菌劑為羥基苯甲酸乙酯、富馬酸二甲酯或低級脂肪酸酯。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的小牛血去蛋白提取物凝膠劑，其特征在于所述羥基苯甲酸乙酯為對羥基苯甲酸乙酯；所述低級脂肪酸酯為單甘油酯。
6.根據(jù)權(quán)利要求1-5中任一所述的小牛血去蛋白提取物凝膠劑，其特征在于所述小牛血去蛋白提取液可按照如下方法制備采1-6個月齡幼牛靜脈血，分離出血清，用乙醇去蛋白，減壓去除乙醇，在余下液體中加入復合蛋白酶水解，離心分離留上清，所述上清用5000道爾頓中空纖維柱超濾截留，收集得到的濾液即為小牛血去蛋白提取液；其中所述的用乙醇去蛋白時乙醇的用量為兩倍于血清體積的質(zhì)量百分含量為96％乙醇；其中所述的減壓去除乙醇為利用真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，37℃，1個大氣壓減壓除乙醇；其中所述的加入復合蛋白酶水解為加入復合蛋白酶水解24小時；其中所述的加入復合蛋白酶水解后離心分離為在10000rpm、4℃，離心30分鐘，留上清。
7.根據(jù)權(quán)利要求1-5中任一所述的小牛血去蛋白提取物凝膠劑，其特征在于所述卡波姆為934GE、910、934、934P、940、941或1342。
全文摘要
本發(fā)明公開了小牛血去蛋白提取物凝膠劑，其目的是提供小牛血去蛋白提取物的一種新劑型。小牛血去蛋白提取物凝膠劑由包括下述成分的原料制成小牛血去蛋白提取液20－50重量份，卡波姆0.5－1.2重量份，注射用水45－80重量份；氫氧化鈉0.2－0.5重量份，抑菌劑0.05－0.1重量份。所述小牛血去蛋白提取液中固形物的質(zhì)量百分含量為2％－7％。該小牛血去蛋白提取物凝膠劑以卡波姆為基質(zhì)，釋藥快、無油膩性、易涂展、易滲透；氫氧化鈉和卡波姆按一定的比例配比，可以調(diào)節(jié)基質(zhì)的pH值到最佳值，保證小牛血去蛋白提取物的活性不丟失；一定量的抑菌劑可以保證外用劑型的穩(wěn)定性。小牛血去蛋白凝膠劑彌補了注射液和片劑不能局部應用的缺陷，也克服了局部用膏劑滲透性差的不足。
文檔編號A61P17/02GK1895275SQ20051008304
公開日2007年1月17日 申請日期2005年7月12日 優(yōu)先權(quán)日2005年7月12日
發(fā)明者王洪新, 于洪儒 申請人:錦州奧鴻藥業(yè)有限責任公司