專利名稱：1－糖代MAVGn的合成、的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及具有優(yōu)良腫瘤顯像、腫瘤治療效果的1-糖代MAVGn的99Tcm和186Re標(biāo)記物的制備及其1-糖代MAVGn分子的合成，因含放射性99Tcm和186Re標(biāo)記物的結(jié)構(gòu)不穩(wěn)定，其結(jié)構(gòu)難以通過波譜學(xué)確定，因此本發(fā)明涉分子和它們放射性99Tcm和186Re標(biāo)記物。因此本發(fā)明還涉及1-糖代MAVGn分子(1)的合成。186Re標(biāo)記的硫唑嘌呤肽分子為腫瘤治療劑，199Tcm標(biāo)記的硫唑嘌呤肽分子為腫瘤顯像劑，其腫瘤顯像能力強(qiáng)于目前非常有前景、正在臨床研究的的199Tcm標(biāo)-ECDG腫瘤顯像劑。
背景技術(shù)：
腫瘤的早期診斷是提高患者治愈率的關(guān)鍵，然而目前的腫瘤診斷藥物缺陷很多，因此優(yōu)良腫瘤顯像劑的研發(fā)勢在必行。糖是生命的物質(zhì)基礎(chǔ)和結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)，是一切生命活動的根本，是理想的信息載體，控制細(xì)胞的分裂與分化，調(diào)節(jié)細(xì)胞的生長與衰老，參與細(xì)胞識別和分子識別。糖分子除了具有自身的生物活性外，還具有很強(qiáng)的靶向性，是一種理想的藥物載體。生物活性基團(tuán)與糖相連，通過二者的協(xié)同作用，一方面提高藥物的靶向性，增加藥物的生物利用度，提高療效，降低藥物毒副作用，另一方面生物活性基團(tuán)也激活了糖的生物活性，增強(qiáng)了糖的藥用價(jià)值。所以，糖可以修飾具有生物活性的物質(zhì)，不僅可以選擇性地靶向給藥，解決藥物治療選擇性差的棘手問題，還可以緩慢釋放藥物作用基團(tuán)，起到控制或緩釋的作用。近10多年來，分子肽不僅是四配位配體的雙功能連接劑，也是目前腫瘤顯像劑研究的熱點(diǎn)。將糖中間體引入到具有生物活性的化合物中已經(jīng)成為藥物研究的重要措施，因?yàn)樗鼈兪侵委熕幬锖突虻奶厥廨d體，是改造生物活性多肽骨架的重要的修飾方式之一。因此我們設(shè)計(jì)合成了1-糖代MAVGn分子，并進(jìn)一步得到放射性99Tcm和186Re標(biāo)記物，發(fā)現(xiàn)了具有優(yōu)良腫瘤顯像能力的腫瘤顯像劑。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明還提供含有本發(fā)明化合物作為配體，該配體可以通過波譜學(xué)確定結(jié)構(gòu)，且與結(jié)構(gòu)式(2)[結(jié)構(gòu)式(2)因放射性不穩(wěn)定難以通過波譜測定]緊密相連的重要部分。

其中R1為H、OH、OAC，R2為OH、H、OAC、 R3為OH、OAC、NHAC，R4為OH、OAC，R5為H、Tr，m為0、1、2，n為0、1、2……20。
其中R1為H、OH、OAC，R2為OH、H、OAC、 R3為OH、OAC、NHAC，R4為OH、OAC，m為0、1、2，n為0、1、2……20，M為99Tcm、186Re。
本發(fā)明還提供制備式(1)、(2)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，絡(luò)合物，和相應(yīng)藥理作用的應(yīng)用。包括以下步驟本發(fā)明的化合物(1)是如下化合物，其中R2為H時(shí)，R1為H、OH、OAC，R3為OH、OAC、NHAC，R4為OH、OAC，R5為H、Tr，m為0、1、2，n為0、1、2……20。
本發(fā)明的化合物(1)是如下化合物，其中R2為OH時(shí)，R1為H、OH、OAC，R3為OH、OAC、NHAC，R4為OH、OAC，R5為H、Tr，m為0、1、2，n為0、1、2……20。
本發(fā)明的化合物(1)是如下化合物，其中R2為OAC時(shí)，R1為H、OH、OAC，R3為OH、OAC、NHAC，R4為OH、OAC，R5為H、Tr，m為0、1、2，n為0、1、2……20。
本發(fā)明的化合物(1)是如下化合物，其中R2為 時(shí)，R1為H、OH、OAC，R3為OH、OAC、NHAC，R4為OH、OAC，R5為H、Tr，m為0、1、2，n為0、1、2……20。
本發(fā)明的化合物(1)是如下化合物，其中R2為 時(shí)，R1為H、OH、OAC，R3為OH、OAC、NHAC，R4為OH、OAC，R5為H、Tr，m為0、1、2，n為0、1、2……20。
本發(fā)明的化合物(1)是如下化合物，其中R2為 時(shí)，R1為H、OH、OAC，R3為OH、OAC、NHAC，R4為OH、OAC，R5為H、Tr，m為0、1、2，n為0、1、2……20。
本發(fā)明的化合物(1)是如下化合物，其中R2為 時(shí)，R1為H、OH、OAC，R3為OH、OAC、NHAC，R4為OH、OAC，R5為H、Tr，m為0、1、2，n為0、1、2……20。
本發(fā)明的化合物(2)是如下化合物，其中M＝99Tcm時(shí)，R1為H、OH、OAC，R2為OH、H、OAC、 R3為OH、OAC、NHAC，R4為OH、OAC、m為0、1、2，n為0、1、2……20，本發(fā)明的化合物(2)是如下化合物，其中M＝186Re時(shí)，R1為H、OH、OAC，R2為OH、H、OAC、 R3為OH、OAC、NHAC，R4為OH、OAC、m為0、1、2，n為0、1、2……20，
本發(fā)明還提供制備式(1)、(2)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽、絡(luò)合物和相應(yīng)藥理作用的應(yīng)用。制備方法包括以下步驟反應(yīng)(a) 上述反應(yīng)(a)，通過先將化合物(a1)的-SH實(shí)施保護(hù)，再將羥基活化成活潑酯(a2)，再在堿性條件下與氨基酸反應(yīng)形成肽鏈(a3)，最后在與甘氨酸二肽反應(yīng)形成小肽配體(a4)制備化合物(a2)的反應(yīng)通常在有機(jī)溶劑(如二氯甲烷，氯仿)中，先將化合物(a1)與等摩爾的三苯基氯化物反應(yīng)生成TrSCH2COOH，此反應(yīng)優(yōu)選在室溫進(jìn)行一個小時(shí)。
生成TrSCH2COOH在常規(guī)的有機(jī)溶劑(如二氯甲烷，氯仿，四氫呋喃)及縮合劑(如DCC)中，與等摩爾的NHS反應(yīng)得化合物(a2)。
此反應(yīng)優(yōu)選在無水四氫呋喃，于零度到室溫反應(yīng)18個小時(shí)。
所得化合物(a2)在堿性條件下(如氫氧化鈉，碳酸鉀，碳酸鈉)，與氨基酸反應(yīng)得化合物(a3)。
此反應(yīng)優(yōu)選在氫氧化鈉水溶液中，控制反應(yīng)溫度50-60度之間，回流兩個小時(shí)。
重復(fù)操作將化合物(a3)經(jīng)羧基活化，最后與甘氨酸二肽反應(yīng)形成小肽配體(a4)。
反應(yīng)(b)通過將糖類化合物(b1)進(jìn)行羥基的保護(hù)形成化合物(b2)，然后轉(zhuǎn)為1位鹵素取代的 糖(b3)，再在有機(jī)溶劑中與疊氮化物反應(yīng)轉(zhuǎn)為相應(yīng)的疊氮糖(b4)，最后還原為氨基糖(b5)。
羥基的保護(hù)包括成酯保護(hù)(如醋酸酐，乙酰氯，碳酸酯，磺酸酯)，成醚保護(hù)(如芐醚，三苯甲醚，二氫吡喃)，縮醛縮酮保護(hù)(如丙酮)。
制得的化合物(b3)在有機(jī)溶劑中(如DMF，THF)與疊氮化物反應(yīng)轉(zhuǎn)為相應(yīng)的疊氮糖(b4)。反應(yīng)優(yōu)選用1摩爾的化合物(b3)與1.5摩爾的疊氮化物在室溫下反應(yīng)12個小時(shí)。
所得化合物(b4)還原為氨基糖(b5)。
還原包括Pd/C，Ph3P/H2反應(yīng)優(yōu)選在有機(jī)溶劑THF中，用Pd/C做還原劑，室溫反應(yīng)3個小時(shí)。
反應(yīng)(c) 通過將糖類化合物(c1)進(jìn)行羥基的保護(hù)形成化合物(c2)，然后轉(zhuǎn)為1位鹵素取代的糖(c3)，再在有機(jī)溶劑中與疊氮化物反應(yīng)轉(zhuǎn)為相應(yīng)的疊氮糖(c4)，最后催化氫化轉(zhuǎn)變位氨基糖(c5)。
羥基的保護(hù)包括成酯保護(hù)(如醋酸酐，乙酰氯，碳酸酯，磺酸酯)，成醚保護(hù)(如芐醚，三苯甲醚，二氫吡喃)，縮醛縮酮保護(hù)(如丙酮)。
制得的化合物(c3)在有機(jī)溶劑中(如DMF，THF)與疊氮化物反應(yīng)轉(zhuǎn)為相應(yīng)的疊氮糖(b4)。反應(yīng)優(yōu)選用1摩爾的化合物(c3)與1.5摩爾的疊氮化物在室溫下反應(yīng)12個小時(shí)。
所得化合物(b4)還原為氨基糖(b5)。
還原包括Pd/C，Ph3P/H2反應(yīng)優(yōu)選在有機(jī)溶劑THF中，用Pd/C做還原劑，室溫反應(yīng)3個小時(shí)。
反應(yīng)(d)
通過將糖類化合物(d1)進(jìn)行羥基的保護(hù)形成化合物(d2)，然后轉(zhuǎn)為6位鹵素取代的糖(d3)，再在有機(jī)溶劑中與疊氮化物反應(yīng)轉(zhuǎn)為相應(yīng)的疊氮糖(d4)，最后催化氫化轉(zhuǎn)變位氨基糖(d5)。
羥基的保護(hù)包括成酯保護(hù)(如醋酸酐，乙酰氯，碳酸酯，磺酸酯)，成醚保護(hù)(如芐醚，三苯甲醚，二氫吡喃)，縮醛縮酮保護(hù)(如丙酮)。
制得的化合物(d3)在有機(jī)溶劑中(如DMF，THF)與疊氮化物反應(yīng)轉(zhuǎn)為相應(yīng)的疊氮糖(d4)。反應(yīng)優(yōu)選用1摩爾的化合物(d3)與1.5摩爾的疊氮化物在室溫下反應(yīng)12個小時(shí)。
所得化合物(b4)還原為氨基糖(b5)。
還原包括Pd/C，Ph3P/H2反應(yīng)優(yōu)選在有機(jī)溶劑THF中，用Pd/C做還原劑，室溫反應(yīng)3個小時(shí)。
反應(yīng)(e) 反應(yīng)(f)
反應(yīng)(g) 反應(yīng)(h) 上述反應(yīng)(e)，(f)，(g)，(h)為在肽縮合劑存在下，氨基糖和小肽配體形成糖代MAGn。肽縮合劑包括BOP和DIPEA，DCC和DMAP反應(yīng)優(yōu)選用縮合劑BOP和DIPEA，反應(yīng)5個小時(shí)。
具體實(shí)施例方式
以下通過實(shí)施例進(jìn)一步說明本發(fā)明，但并不限制本發(fā)明。
實(shí)施例1 Tr-MAVG2-Glu和Tr-MAVG2-Glu(Ace)4下列小肽配體簡稱為 (1)小肽配體的制備羧基的活化在20mL三口燒瓶，裝上配有干燥管的冷凝管和溫度計(jì)，攪拌下加入TrCH2COOH(3mmol)和NHS(3mmol)的無水THF溶液(4mL)，冰鹽浴冷卻至-5～0℃，10min以后，逐漸加入DCC(3mL)的無水THF(3mL)溶液，然后維持-5-0℃反應(yīng)2小時(shí)，有大量白色沉淀生成。繼續(xù)在室溫下攪拌16小時(shí)，停止反應(yīng)。濾掉沉淀，用冷CH2Cl2充分洗滌，旋蒸掉溶劑，得粗產(chǎn)品。在乙酸乙酯中重結(jié)晶，得無色棱狀晶體1.10g，產(chǎn)率91％。m.p.177.5-178.3℃，IR(KBr，cm-1)3070(w)，1790，1745(活潑酯特征峰)；1630，1580，1495，1445。
化合物Tr-MAVG的合成在裝有冷凝管和攪拌裝置的500mL燒瓶中，加入活潑酯(0.012mol)和250mL乙腈，攪拌溶解后緩慢升高溫度。控制在50-60℃間，緩慢加入氨基酸(0.012mol)的0.2MNaOH水溶液，然后回流2h。TLC跟蹤反應(yīng)，原料消失。停止反應(yīng)，溶液成中性。冰浴后用稀H2SO4調(diào)節(jié)PH值約為1，得到白色沉淀。
化合物Tr-MAVG2按合成通法，活潑酯5g(0.012mol)與過量的Gly進(jìn)行反應(yīng)。用乙酸乙酯重結(jié)晶，得白色晶體5.1g，產(chǎn)率91.0％。IR(KBr，cm-1)3350(s)，3100-2500(w)，1740，16401H NMR(500MHz，DMSO)，δ(ppm)12.15(1H，br，COOH)，8.27(1H，NH)，7.37-7.26(15H，m，Ar)，3.67(2H，d，J＝4.7Hz，CH2)，2.82(2H，s，CH2)羧基的再次活化在配備有溫度計(jì)，冷凝管(加干燥管)和攪拌器的25mL三口燒瓶中，加入上一步產(chǎn)物0.002mol，NHS(0.002mol)和無水THF(7.0mL)，室溫下攪拌10min。冰浴降溫至0-5℃，加入DCC(0.002mol)的無水THF(4mL)溶液，出現(xiàn)白色沉淀，然后維持溫度0～5℃繼續(xù)反應(yīng)2h，攪拌過夜，終止反應(yīng)。過濾旋干，用乙醚研制后，用大量水洗滌。然后烘干。IR顯示1820cm-1，1780cm-1和1740cm-1有活潑酯的特征酯吸收峰。
四齒配體的合成Tr-MAVG3三苯基硫代乙酰-頡氨?；拾彼嵩谂鋫淅淠芎蛿嚢杵鞯?00mL燒瓶中，加入Tr-MAG的活潑酯(0.028mol)和60mL乙腈，然后升溫至50℃左右，緩慢加入等摩爾的甘氨酸二肽的0.2MNaOH水溶液。加熱回流2h，TLC跟蹤反應(yīng)。原料消失，溶液呈堿性，加入水稀釋，再用稀硫酸調(diào)節(jié)PH值至1左右，有大量白色沉淀產(chǎn)生，收集固體。產(chǎn)率70％。Tr-MAG3C27H27N3O5S FW505(2)糖胺的合成2，3，4，6-四-O-乙?；?1-氨基葡萄糖在100mL的反應(yīng)瓶中加入20mL醋酸酐，4℃下逐滴加入103μL高氯酸(70％)，恢復(fù)到室溫，分批加入5g(27.75mmol)1a，30～40℃下反應(yīng)30min得到2a，將2a混合液降溫至20℃，加入1.55g紅磷，用滴液漏斗緩緩加入2.9mL液溴，保持反應(yīng)溫度不超過20℃，然后在大約30min內(nèi)加入3.6mL蒸餾水，保持反應(yīng)溫度低于20℃，加完后自然恢復(fù)至室溫反應(yīng)2h，TLC檢測反應(yīng)進(jìn)程，反應(yīng)結(jié)束后，用30mL二氯甲烷稀釋反應(yīng)液，用沙濾漏斗將不溶物過濾掉，用少量二氯甲烷沖洗反應(yīng)器和漏斗，合并濾液和洗液，用20mL×2冰水快速洗滌，然后將有機(jī)層轉(zhuǎn)入25mL攪拌著碳酸氫鈉冰水液中中和至不再產(chǎn)生氣泡為止，用分液漏斗將水層分掉，有機(jī)層用無水硫酸鈉干燥，過濾，旋蒸得到黃色油狀物，將油狀物轉(zhuǎn)入研缽用石油醚和乙醚[V/V＝1∶1]的混合液進(jìn)行研磨直到白色固體粉末出現(xiàn)，將粉末過濾后用少許乙醚沖洗，干燥，用乙醚-石油醚重結(jié)晶得3a(9.30g)，C14H19BrO9FW411收率81.5％，所得產(chǎn)物不穩(wěn)定直接進(jìn)行下一步反應(yīng)。
將5.0g(12.16mmol)3a溶于10mLDMF中，加入1.00g(15.38mmol)疊氮化鈉，室溫下反應(yīng)12h，TLC檢測反應(yīng)進(jìn)程，反應(yīng)結(jié)束后，過濾，濾液到入大量中冰水中，出現(xiàn)大量白色沉淀，過濾得粗產(chǎn)品4a(3.43g)，C14H19N3O9FW373收率75.6％，用乙酸乙酯重結(jié)晶得棱狀晶體，m.p.129～130℃。
將500mg(1.34mmol)4a溶于43mLTHF中，加入130mgPd/C，室溫下氫化反應(yīng)3h，TLC檢測反應(yīng)進(jìn)程，反應(yīng)結(jié)束后用沙濾漏斗將Pd/C過濾掉，將溶劑蒸除得到白色固體，用無水乙醇重結(jié)晶得326mg白色針狀晶體5a收率70.0％C14H21NO9FW347，所得產(chǎn)物不穩(wěn)定直接進(jìn)行下一步反應(yīng)。
IR(KBr，cm-1)3411.3(NH2)1754.9，1734.0，993.1；(3)糖肽小分子的合成通法在25ml反應(yīng)瓶中加入干燥處理的10ml DMF，加入小肽配體(10mmol)，攪拌5min溶解，加入BOP reagent(15mmol)，反應(yīng)5min，，再加入(10mmol)糖胺和幾滴DIPEA，反應(yīng)5h，然后把混合液加入到25ml冰水混合液中，攪拌5min，有大量白色沉淀生成，過濾，干燥，柱層析(二氯甲烷∶甲醇＝10∶1)，得到目標(biāo)產(chǎn)物。
β-N-三苯甲基硫代乙酰頡氨?；拾滨；?2，3，4，6-四乙?；咸烟?Tr-MAVG2-Glu(Ace)4)β-N-triphenylmethylthioacetyl valyl diglycyl-2，3，4，6-tetra-O-acetylglucose按反應(yīng)通法，柱層析后(二氯甲烷∶甲醇＝10∶1)，收率53.2％ C44H52N4O13S FW876，124.3～128.2℃MS m/zC44H52N4O13SNa[M+Na]+899 found 899.2[α]D20+6.7(c 1.2，CH3OH)IR(cm-1)3396.8(NH)，3059.0.(Ar-H)，2933.0(CH2)，1750.6(酯基)，1652.9(酰胺I帶)，1540.4.(酰胺II帶)，1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ8..66-8.64(d，1H，NH)，8.18(m，1H，NH)，8.06-8.05(m，2H，NH)，7.35-7.25(m，15H，Ar)，5.413-5.375(t，J＝9.5Hz，1H，H-1’)，5.368-5.330(t，J＝9.5Hz，1H，H-3’)，4.920-4.880(t，J＝9.4Hz，1H，H-4’)，4.874-4.836(t，J＝9.4Hz，1H，H-2’)，4.15-4.09(m，3H，H-6’，H-5’，CH(NH))，3.97-3.95(d，J＝12.3Hz，1H，H-6”)，3.72-3.67(br，4H，CH2)，2.94-2.83(m，2H，SCH2)，1.99-1.92(m，13H，4CO(CH3)，CH(CH3)2)，0.83-0.79(m，6H，CH(CH3)2)13C NMR(125MHz，DMSO-d6)δ170.5(1C＝O)，170.0-168.1(6C＝O)，168.0(1C＝O)，144.6(3C，Ar)，129.6(6C，Ar)，128.5(6C，Ar)，127.30(3C，Ar)，77.3(C1)，73.2(C3)，72.6(C5)，71.0(C2)，68.3(C4)，66.5(CPh3)，62.2(C6)，58.5(CH(NH))，42.2-42.1(2CH2)，36.3(SCH2)，30.72(CH(CH3)2)，21.0-20.8(4CO(CH3)，19.6(CH(CH3)2)，18.5(CH(CH3)2)β-N-三苯甲基硫代乙酰頡氨?；拾滨；?葡萄糖(Tr-MAVG2-Glu)β-N-triphenylmethylthioacetyl valyl diglycyl-glucosed8.66-8.64(d，1H，NH)，8.18(m，1H，NH)，8.06-8.05(m，2H，NH)，7.35-7.25(m，15H，Ar)，5.413-5.375(t，J＝9.5Hz，1H，H-1’)，5.368-5.330(t，J＝9.4Hz，1H，H-2’)，4.15-4.09(m，3H，H6’，H-5’，CH(NH))，3.97-3.95(d，J＝12.3Hz，1H，H-6’)，3.80-3.74(m，4H，OH)，3.72-3.67(br，4H，CH2)，2.94-2.83(m，2H，SCH2)，1.93-1.22(m，CH(CH3)2)，0.83-0.79(m，6H，CH(CH3)2)IR(cm-1)3360.9(OH)，3059.0(Ar-H)，2933.0(CH2)，1652.9(酰胺I帶)1540.4(酰胺II帶)實(shí)施例2 Tr-MAVG2-Gla和Tr-MAVG2-Gla(Ace)4(1)小肽配體的制備按上述方法制備得到Tr-MAVG2。
(2)糖胺的合成2，3，4，6-四-O-乙酰基-1-氨基半乳糖在100mL的反應(yīng)瓶中加入20mL醋酸酐，4℃下逐滴加入103μL高氯酸(70％)，恢復(fù)到室溫，分批加入5g(27.75mmol)1b，30～40℃下反應(yīng)30min得到2b，將2b混合液降溫至20℃，加入1.55g紅磷，用滴液漏斗緩緩加入2.9mL液溴，保持反應(yīng)溫度不超過20℃，然后在大約30min內(nèi)加入3.6mL蒸餾水，保持反應(yīng)溫度低于20℃，加完后自然恢復(fù)至室溫反應(yīng)2h，TLC檢測反應(yīng)進(jìn)程，反應(yīng)結(jié)束后，用30mL二氯甲烷稀釋反應(yīng)液，用沙濾漏斗將不溶物過濾掉，用少量二氯甲烷沖洗反應(yīng)器和漏斗，合并濾液和洗液，用20mL×2冰水快速洗滌，然后將有機(jī)層轉(zhuǎn)入25mL攪拌著碳酸氫鈉冰水液中中和至不再產(chǎn)生氣泡為止，用分液漏斗將水層分掉，有機(jī)層用無水硫酸鈉干燥，過濾，旋蒸得到黃色油狀物，將油狀物轉(zhuǎn)入研缽用石油醚和乙醚[V/V＝1∶1]的混合液進(jìn)行研磨直到白色固體粉末出現(xiàn)，將粉末過濾后干燥，得3b(9.10g)，C14H19BrO9FW411收率79.8％，所得產(chǎn)物不穩(wěn)定直接進(jìn)行下一步反應(yīng)。
將5.0g(12.16mmol)3b溶于10mLDMF中，加入1.00g(15.38mmol)疊氮化鈉，室溫下反應(yīng)12h，TLC檢測反應(yīng)進(jìn)程，反應(yīng)結(jié)束后，過濾，濾液到入大量中冰水中，出現(xiàn)大量白色沉淀，過濾得粗產(chǎn)品4b(3.62g)，C14H19N3O9FW373收率79.8％，用乙酸乙酯重結(jié)晶得棱狀晶體，m.p.99～100℃。
IR(KBr，cm-1)2124.9(N3)，1750.81，1382.4，1224.4，1089.0將500mg(1.34mmol)4b溶于43mLTHF中，加入130mgPd/C，室溫下氫化反應(yīng)3h，TLC檢測反應(yīng)進(jìn)程，反應(yīng)結(jié)束后用沙濾漏斗將Pd/C過濾掉，將溶劑蒸除得到油狀物5b C14H21NO9FW347，所得產(chǎn)物不穩(wěn)定直接進(jìn)行下一步反應(yīng)。
(3)糖肽小分子的合成β-N-三苯甲基硫代頡氨酰基二甘氨?；?2，3，4，6-四乙?；肴樘?Tr-MAVG2-Gla(Ace)4)β-N-triphenylmethylthioacetyl valyl diglycyl -2，3，4，6-tetra-O-acetylglalacose按反應(yīng)通法，柱層析后(二氯甲烷∶甲醇＝10∶1)，收率56.1％ C44H52N4O13S FW876.，m.p.111.1～113.4℃MS m/zC44H52N4O13SNa[M+Na]+899found 899.1[α]D20+12.0(c 1.3，CH3OH)IR(cm-1)3325.9(NH)，3059.0(Ar-H)，2933.4(CH2)，1751.6(酯基)，1653.3(酰胺I帶)，1521.1(酰胺II帶)，908.81H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ8.72-8.71(d，1H，NH)，8.18(m，1H，NH)，8.07-8.06(m，2H，NH)，7.34-7.26(m，15H，Ar)，5.37-5.33(t，J＝9.4，1H，H-1’)，5.29(m，2H，H-3’，H-4’)，5.05-5.02(t，J＝9.4，1H，H-2’)，4.32(t，J＝6.0Hz，1H，H-5’)，4.10(1H，CHNH)，4.06-4.02(dd，6.1Hz，11.3Hz，1H，H-6’)，3.97-3.96(dd，J＝6.8Hz，11.3Hz，1H，H-6”)，3.71-3.65(br，4H，CH2)，2.87(m，2H，SCH2)，2.10-1.91(m，12H，4CO(CH3))；13C NMR(125MHz，DMSO-d6)δ171.4(1C＝O)，170.3-169.3(6C＝O)，168.1(1C＝O)，144.6(3C，Ar)，129.6(6C，Ar)，128.5(6C，Ar)，127.3(3C，Ar)，77.7(C1)，71.8(C5)，71.3(C4)，68.7(C2)，68.0(C3)，66.5(CPh3)，61.9(C6)，58.6(CH(NH))，42.2-42.1(2CH2)，36.3(SCH2)，30.72(CH(CH3)2)，21.0-20.8(4CO(CH3)，19.6(CH(CH3)2)，18.5(CH(CH3)2)β-N-三苯甲基硫代頡氨酰基二甘氨?；肴樘?Tr-MAVG2-Gla)β-N-triphenylmethylthioacetyl valvl diglycyl glalacosed8.50-8.44(d，1H，NH)，8.25(S，1H，NH)，8.07-8.01(m，2H，NH)，7.32-7.20(m，15H，Ar)，5.37-5.33(t，J＝9.4Hz，1H，H-1’)，5.290(m，2H，H-3’，H-4’)，5.05-5.02(t，J＝9.4Hz，1H，H-2’)，4.32(t，J＝6.0Hz，1H，H-5’)，4.01(1H，CHNH)，4.06-4.02(dd，6.1HZ，11.3HZ，1H，H-6’)，3.97-3.96(dd，J＝6.8HZ，11.3HZ，1H，H-6’)，3.59-3.55(m，4H，OH)，3.50-3.44(br，4H，CH2)，2.87(m，2H，SCH2)IR(cm-1)3394.9(OH)，3057.4Ar-H)，2929.7(CH2)，1655.5(酰胺I帶)1535.3(酰胺II帶)實(shí)施例3 (Tr-MAVG2-N-Ac-Glu)和Tr-MAVG2-N-Ac-Glu(Ace)3(1)小肽配體的制備按上述方法制備得到Tr-MAVG3。
(2)糖胺的合成
2-N-乙?；?3，4，6-三-O-乙酰基-l-氨基葡萄糖在50mL的反應(yīng)瓶中加入10mL乙酰氯，快速攪拌下在2～3min內(nèi)加入5.0g(22.60mmol)1c室溫下反應(yīng)16h，TLC檢測反應(yīng)進(jìn)程，反應(yīng)結(jié)束后向反應(yīng)體系中加入40mL氯仿進(jìn)行稀釋，然后到入裝有40g冰和10mL水的燒杯中，劇烈攪拌，分液漏斗分液，有機(jī)層迅速轉(zhuǎn)入到40mL飽和碳酸氫鈉溶液中進(jìn)行中和，分液漏斗分液，有機(jī)層用無水硫酸鈉干燥，以上后處理要在15min內(nèi)完成，干燥完成后過濾，50℃下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至剩余約7.5mL溶劑，迅速加入無水乙醚，大約30后開始出現(xiàn)結(jié)晶，放置12h至結(jié)晶完全得3c(5.3g)C14H20ClNO8FW365.7，收率64.1％，所得產(chǎn)物不穩(wěn)定直接進(jìn)行下一部反應(yīng)。
將4.6g(12.58mmol)3c溶于12.3mLDMF中，加入1.31g疊氮化鈉，室溫下反應(yīng)12h，TLC檢測反應(yīng)進(jìn)程，反應(yīng)結(jié)束后，過濾，在減壓下蒸除掉DMF，殘查溶于30mL氯仿，用2.5mL×3冰水洗滌，洗液用15mL×2氯仿反萃，合并氯仿層，用無水硫酸鈉干燥，過濾，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)得固體，用乙酸乙酯-乙醚混合溶劑進(jìn)行重結(jié)晶得3.23g白色針狀晶體3c C14H20N4O8FW372收率69.0％，m.p.172～173℃。
將500mg(1.34mmol)4c溶于43mLTHF中，加入130mgPd/C，室溫下氫化反應(yīng)3h，TLC檢測反應(yīng)進(jìn)程，反應(yīng)結(jié)束后用沙濾漏斗將Pd/C過濾掉，將溶劑蒸除得到油狀物5c C14H22N2O8FW346，所得產(chǎn)物不穩(wěn)定直接進(jìn)行下一步反應(yīng)。
(3)糖肽小分子的合成β-N-三苯甲基硫代乙酰三甘氨?；?2-乙酰氨基-3，4，6-三乙?；咸烟?Tr-MAVG2-N-Ac-Glu(Ace)3)β-N-triphenylmethylthioacetyl valyl diglycyl-2-N-acetylami0no-3，4，6-tri-O-acetyl glucose按反應(yīng)通法，柱層析后(二氯甲烷∶甲醇＝10∶1)，收率41.2％ C44H53N5O12S FW875m.p.123.1～125.4℃MSC44H53N5O12SNa[M+Na]+898 found 898.1[α]D20+12.0(c 1.2，CH3OH)IR(cm-1)3305.2(NH)，3060.9(Ar-H)，2933.5(CH2)，1747.5(酯基)，1660.0(酰胺I帶)，1536.3(酰胺II帶)，904.71H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ8.40-8.38(d，1H，NH)，8.18(m，1H，NH)，8.07-8.05(m，2H，NH)，8.00-7.98(1H，NH)，7.36-7.26(m，15H，Ar)，5.16-5.12(m，2H，H-1’，H-3’)，4.85-4.81((t，J＝9.9Hz，1H，H-4’)，4.19-4.16(dd，J＝4.6，12.4，1H，H-6’)，4.14-4.11(m，1H，CHNH)，3.97-3.94((d，J＝10.4，H-6”)，3.91-3.89(t，J＝9.8Hz，1H，H-2’)，3.87-3.85(m，1H，H-5’)，3.76-3.70(br，4H，CH2)，2.95-2.74(m，2H，SCH2)，2.00-1.92(m，10H，3CO(CH3)，CH(CH3)2)，1.76(s，3H，NHCO(CH3))，0.85-0.80(m，6H，CH(CH3)2)13C NMR(125MHz，DMSO-d6)δ171.4，170.6，170.48，170.0，169.90，169.78，169.55，168.1，144.6(3C，Ar)，129.6(6C，Ar)，128.5(6C，Ar)，127.3(3C，Ar)，78.8(C1)，73.4(C3)，72.7(C5)，68.9(C4)，66.4(CPh3)，62.3(C6)，58.5(CH(NH))，52.5(C2)42.3(2CH2)，36.4(SCH2)，30.83(CH(CH3)2)，23.025，20.998，20.883，20.858，19.6(CH(CH3)2)，18.5(CH(CH3)2)。
β-N-三苯甲基硫代乙酰頡氨?；拾滨；?2-乙酰氨基-3，4，6-三乙?；咸烟?Tr-MAVG2-N-Ac-Glu(Ace)3)
β-N-triphenylmethylthioacetyl valyl diglycyl-2-N-acetylamino-3，4，6-tri-O-acetyl glucoseTr-MAVG2-Lacβ-N-triphenylmethylthioacetyl valyl diglycyl-sept-O-acetyl lactose按反應(yīng)通法，柱層析后(二氯甲烷∶甲醇＝10∶1)，收率54.7％ C56H68N4O21S FW1164m.p.131.1～132.5℃。
MSC56H68N4O21S Na[M+Na]+1187 found 1187.1[α]D20+10.6(c 1.1，CH3OH)IR(cm-1)3327.4(NH)，3058.9(Ar-H)，2934.0(CH2)，1752.6(酯基)，1659.1(酰胺I帶)，1522.2(酰胺II帶)，907.71H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ8.61-8.59(d，1H，NH)，8.18(m，1H，NH)，8.07-8.05(m，2H，NH)，7.35-7.25(m，15H，Ar)，5.29(t，1H，H-1’，J＝9.5Hz)，5.24-5.15(3H，H-4”，H-3’，H-3”)，4.86(dd，J＝8.0，10.1Hz，1H，H-2”)，4.77-4.75(m，2H，H-2’，H-1”)，4.25-4.24(m，2H，H-6”-1，H-5”)，4.11(1H，NHCH)，4.02-4.00(m，3H，H-6”-2，H-6-5’，H-6-1’，)，3.90-3.77(m，2H，H-6-2’，H-4’)，3.72-3.67(m，4H，2CH2)，2.94-2.84(m，2H，SCH2)，2.11-1.90(m，22H，1CH(CH3)2，7CO(CH3))，0.84-0.79(m，6H，CH(CH3)2)。
13C NMR(125MHz，DMSO-d6)δ171.5(1C＝O)，170.7-169.5(9C＝O)，168.1(1C＝O)，144.6(3C，Ar)，129.6(6C，Ar)，128.5(6C，Ar)，127.3(3C，Ar)，100.2(C-1”)77.2(C-1’)，76.4(C-4’)，73.8(C-5’)，73.5(C-3’)，71.3(C-2’)，70.9(C-3”)，70.1(C-5”)，69.3(C-2”)，67.5(C-4”)，66.4(CPh3)，62.9(C-6”)，61.3(C-6’)，58.5(CH(NH))，42.2(2CH2)，36.9(SCH2)，30.83(CH(CH3)2)，21.0-20.8(7CO(CH3)、β-N-三苯甲基硫代乙酰三甘氨?；?2-乙酰氨基葡萄糖(Tr-MAVG2-N-Ac-Glu)β-N-triphenylmethylthioacetyl valyl diglycyl-2-N-acetylamino glucosed8.40-8.38(d，1H，NH)，8.18(m，1H，NH)，8.07-8.05(m，2H，NH)，8.00-7.98(1H，NH)，7.36-7.26(m，15H，Ar)5.16-5.12(m，2H，H-1’，H-3’)，4.85-4.81(t，J＝9.9HZ，1H，H-4’)，4.19-4.16(dd，J＝4.6，12.4，1H，H-6’)，4.14-4.11(m，1H，CHNH)，3.97-3.94(d，J＝10.4，1H，H-6’)，3.91-3.89(Tj＝9.8HZ，1H，H-2’)，3.87-3.85(m，1H，H-5’)，3.80-3.77(m，4H，OH)，3.76-3.70(br，4H，CH2)，2.95-2.74(m，2H，SCH2)，1.92-1.90(m，1H，CH(CH3)2)，1.76(S，3H，NHCO(CH3))，0.85-0.80(m，6H，CH(CH3)2)IR(cm-1)3372.9(OH)，3060.9(Ar-H)，2933.5(CH2)，1660.0(酰胺I帶)1536.3(酰胺II帶)實(shí)施例4 Tr-MAVG2-Mal(Ace)7(1)小肽配體的制備按上述方法制備得到Tr-MAVG3。
(2)糖胺的合成七-O-乙?；?1-氨基麥芽糖在100mL的反應(yīng)瓶中加入20mL醋酸酐，4℃下逐滴加入103μL高氯酸(70％)，恢復(fù)到室溫，分批加入5g(15.15mmol)le，30～40℃下反應(yīng)30min得到2d，將2d混合液降溫至20℃，加入1.55g紅磷，用滴液漏斗緩緩加入2.9mL液溴，保持反應(yīng)溫度不超過20℃，然后在大約30min內(nèi)加入3.6mL蒸餾水，保持反應(yīng)溫度低于20℃，加完后自然恢復(fù)至室溫反應(yīng)2h，TLC檢測反應(yīng)進(jìn)程，反應(yīng)結(jié)束后，用30mL二氯甲烷稀釋反應(yīng)液，用沙慮漏斗將不溶物過濾掉，用少量二氯甲烷沖洗反應(yīng)器和漏斗，合并濾液和洗液，用20mL×2冰水快速洗滌，然后將有機(jī)層轉(zhuǎn)入25mL攪拌著碳酸氫鈉冰水液中中和至不再產(chǎn)生氣泡為止，用分液漏斗將水層分調(diào)，有機(jī)層用無水硫酸鈉干燥，過濾，旋蒸得到油狀物，將油狀物轉(zhuǎn)入研缽用石油醚和乙醚[V/V＝1∶1]的混合液進(jìn)行研磨直到白色固體粉末出現(xiàn)，干燥得3e(6.88g)，C23H31BrO15FW627收率72.5％，所得產(chǎn)物不穩(wěn)定直接進(jìn)行下一步反應(yīng)。
將5.0g(7.97mmol)3d溶于10mLDMF中，加入0.78g(12.00mmol)疊氮化鈉，室溫下反應(yīng)12h，TLC檢測反應(yīng)進(jìn)程，反應(yīng)結(jié)束后，過濾，濾液到入大量中冰水中，出現(xiàn)大量白色沉淀，過濾得粗產(chǎn)品4d(2.63g)，C23H31N3O15FW589.5收率56％，m.p.68.5～71.7℃。
將1.00g(1.70mmol)4a溶于43mLTHF中，加入225mgPd/C，室溫下氫化反應(yīng)3h，TLC檢測反應(yīng)進(jìn)程，反應(yīng)結(jié)束后用沙濾漏斗將Pd/C過濾掉，將溶劑蒸除得到白色固體C23H33NO15FW563.5，所得產(chǎn)物不穩(wěn)定直接進(jìn)行下一步反應(yīng)。
(3)糖肽小分子的合成β-N-三苯甲基硫代乙酰頡氨?；拾滨；?七乙?；溠刻?Tr-MAVG2-Mal(Ace)7)β-N-triphenylmethylthioacetyl valyl diglycyl-sept-O-acetyl maltose按反應(yīng)通法，柱層析后(二氯甲烷∶甲醇＝10∶1)，收率51.2％ C56H68N4O21S FW1164m.p.126.4～130.3℃.
HRMSC56H68N4O21S Na[M+Na]+1187.3994，found 1187.3964[α]D20+43.8(c 1.4，CH3OH)IR(cm-1)3323.0(NH)，3059.4(Ar-H)，2934.0(CH2)，1753.9(酯基)，1655.6(酰胺I帶)，1521.6(酰胺II帶)，900.91H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ8.60-8.58(d，1H，NH)，8.17(m，1H，NH)，8.05-8.04(m，2H，2NH)，7.35-7.25(m，15H，Ar)，5.37-5.22(m，3H，H-1’H的J＝9.2Hz，H-4”，H-3’)，4.99(m，1H，H-3”)，4.88-4.86(dd，J＝8.0，10.1，1H，H-2”)，4.73(t，J＝9.5Hz，H-2’)，4.33(d，J＝9.5Hz，1H，H-1”)，4.15-4.10(m，3H，H-6”-1，H-5”，CHNH)，4.04-3.90(m，5H，H-6”-2，H-6-5’，H-6-1’，H-6-2’，H-4’)，3.72-3.66(br，4H，2CH2)，2.94-2.84(m，2H，SCH2)，2.11-1.90(m，22H，1CH(CH3)2，7CO(CH3))，0.84-0.79(m，6H，CH(CH3)2)。
13C NMR(125MHz，DMSO-d6)δ171.5(1C＝O)，170.6-169.5(9C＝O)，168.1(1C＝O)，144.6(3C，Ar)，129.5(6C，Ar)，128.5(6C，Ar)，127.3(3C，Ar)，95.8(C-1”)77.0(C-1’)，75.5(C-4’)，74.0(C-5’)，73.2(C-3’)，71.6(C-2’)，69.9(C-3”)，69.4(C-5”)，68.4(C-2”)，68.2(C-4”)，66.4(CPh3)，63.4(C-6”)，61.8(C-6’)，58.5(CH(NH))，42.2(2CH2)，36.9(SCH2)，30.8(CH(CH3)2)，21.1-20.7(7CO(CH3)，19.6(CH(CH3)2)，18.5(CH(CH3)2)。
利用上述合成方法可以合成其余的目標(biāo)化合物如結(jié)構(gòu)(1)中的所有目標(biāo)物 其中R1為H、OH、OAC，R2為OH、H、OAC、 R3為OH、OAC、NHAC，R4為OH、OAC，R5為H、Tr，m為0、1、2，n為0、1、2……20。
脫保護(hù)、標(biāo)記及放化純度的檢驗(yàn)
其中R1為H、OH、OAC，R2為OH、H、OAC、 R3為OH、OAC、NHAC，R4為OH、OAC，m為0、1、2，n為0、1、2……20，M為99Tcm、186Re。
脫保護(hù)在10mL燒瓶中加入樣品5.11×10-5mol和TFA(3mL)，攪拌5min后。再加入HSiEt3(1mL)，溶液立即澄清。繼續(xù)攪拌5min，旋蒸溶劑，加入4mL0.1MNaOH水溶液，用CH2Cl2萃取除去三苯甲烷，拋去有機(jī)相，水相充氮?dú)獗Ｗo(hù)。
配體的標(biāo)記采用直接標(biāo)記法制備。10mg葡萄糖酸鈣加入小青霉素瓶中，用100μL配體溶液(濃度10g.L-1)，然后加入5μL醋酸-醋酸鈉緩沖溶液，調(diào)節(jié)溶液的PH值為4～5，加入25μL酒石酸-SnCl2溶液(酒石酸∶SnCl2＝0.8mg/mL∶0.4mg/mL)，加入適量新鮮的99TcmO4-淋洗液，室溫下反應(yīng)30min。反應(yīng)即可完成。
標(biāo)記物的層析鑒定及放化純度的檢驗(yàn)用新華1號濾紙作為支持體，用生理鹽水作展開劑，鑒定測得標(biāo)記物的放化純度均大于95％。
生物活性1)荷肉瘤S180小鼠體內(nèi)γ顯像和體內(nèi)分布實(shí)驗(yàn)荷肉瘤S180小鼠體內(nèi)γ顯像按上述方法制備的不同配合物溶液作為尾靜脈注射液.每只荷肉瘤S180小鼠尾靜脈注射100μL標(biāo)記液(0.56-0.74MBq)，昆明鼠體重為20-24g，分別在注射后不同時(shí)間利用GE MPRγcamera進(jìn)行全身顯像。
體內(nèi)分布荷肉瘤S180小鼠尾靜脈注射不同配合物溶液的標(biāo)記液后不同時(shí)間斷頸處死，取血液和臟器進(jìn)行放射性測量，血液的重量以體重的7％計(jì)，分別計(jì)算各組織的攝取率(ID/％·g-1)以及T與NT的比。
2)生物活性糖肽的99mTc標(biāo)記目標(biāo)物99mTc-Gal-MAVG2在小鼠器官、血液及其腫瘤S180的分布見表1，現(xiàn)在臨床研究顯示比較好的9mTc標(biāo)記物99mTc-ECDG的數(shù)據(jù)列于表2，表中數(shù)據(jù)顯示99mTc-Gal-MAVG2在腫瘤中明顯好于99mTc-ECDG的吸收，與相關(guān)文獻(xiàn)比較結(jié)果也是如此(DavidJ.Yang，Chang-Guhn Kim，Naomi R.Schechter，Imaging with 99mTc ECDC Targeted at theMultifunctional Glucose Transport SystemFeasiility Study with Rodens，Radiology2003；226465-473)，表3中99mTc-Gal-MAVG2和表4中99mTc-ECDG在腫瘤中的吸收與其它部分器官的比值進(jìn)一步證實(shí)了上述結(jié)論，研究顯示其腫瘤顯像效果明顯、相對較清晰，有成為新型腫瘤顯像劑的可能。
表199mTc-Gal-MAVG2在給藥2h后荷有S180瘤的小鼠的分布(％ID/g)Tabl 1 Biodistribution of99mTc-Gal-MAVG2in mice bearing S180 tumor.(％ID/g)

表2、99mTc-ECDG在在給藥后荷有S180瘤的小鼠的分布(％ID/g)Tabl 2 Biodistribution of9mTc-ECDG in mice bearing S180 tumor.(％ID/g

表399mTc-Gal-MAVG2在給藥2h后荷有S180瘤的小鼠腫瘤與部分器官的放射性比值

表499mTc-ECDG在給藥后荷有S180瘤的小鼠腫瘤與部分器官的放射性比值

權(quán)利要求
1.具有式(1)結(jié)構(gòu)的化合物是標(biāo)記99Tcm和186Re的關(guān)鍵配體部分[是能夠全面確定結(jié)構(gòu)、且與結(jié)構(gòu)式(2)(結(jié)構(gòu)式(2)因放射性不穩(wěn)定難以通過譜圖測定)緊密相連的重要部分]。 其中R1為H、OH、OAC，R2為OH、H、OAC、 R3為OH、OAC、NHAC，R4為OH、OAC，R5為H、Tr，m為0、1、2，n為0、1、2……20。
2.權(quán)利要求(1)的化合物R2為H時(shí)，R1為H、OH、OAC，R3為OH、OAC、NHAC，R4為OH、OAC，m為0、1、2，n為0、1、2……20。R2為OH時(shí)，R1為H、OH、OAC，R3為OH、OAC、NHAC，R4為OH、OAC，m為0、1、2，n為0、1、2……20。R2為OAC時(shí)，R1為H、OH、OAC，R3為OH、OAC、NHAC，R4為OH、OAC，m為0、1、2，n為0、1、2……20。R2為 時(shí)，R1為H、OH、OAC，R3為OH、OAC、NHAC，R4為OH、OAC，m為0、1、2，n為0、1、2……20。R2為 時(shí)，R1為H、OH、OAC，R3為OH、OAC、NHAC，R4為OH、OAC，m為0、1、2，n為0、1、2……20。R2為 時(shí)，R1為H、OH、OAC，R3為OH、OAC、NHAC，R4為OH、OAC，m為0、1、2，n為0、1、2……20。R2為 時(shí)，R1為H、OH、OAC，R3為OH、OAC、NHAC，R4為OH、OAC，m為0、1、2，n為0、1、2……20。
3.權(quán)利要求具有結(jié)構(gòu)(2)的化合物，是由結(jié)構(gòu)(1)的化合物經(jīng)與99Tcm或186Re標(biāo)記而得到的不穩(wěn)定、難以通過波譜等確定其結(jié)構(gòu)的標(biāo)記物，它們具有優(yōu)良腫瘤顯像能力。 其中R1為H、OH、OAC，R2為OH、H、OAC、 R3為OH、OAC、NHAC，R4為OH、OAC，m為0、1、2，n為0、1、2……20，M為99Tcm、186Re。
4.權(quán)利要求(2)的化合物本發(fā)明的化合物(2)是如下化合物，其中M＝99Tcm時(shí)，其中R1為H、OH、OAC，R2為OH、H、OAC、 R3為OH、OAC、NHAC，R4為OH、OAC、m為0、1、2，n為0、1、2……20，本發(fā)明的化合物(2)是如下化合物，其中M＝186Re時(shí)，其中R1為H、OH、OAC，R2為OH、H、OAC、 R3為OH、OAC、NHAC，R4為OH、OAC、m為0、1、2，n為0、1、2……20。
5.權(quán)利要求(2)的化合物應(yīng)用于腫瘤放射性藥物，M＝99Tcm標(biāo)記物作為腫瘤顯像劑；M＝186Re標(biāo)記物作為腫瘤治療劑。
全文摘要
本發(fā)明涉及具有優(yōu)良腫瘤顯像效果的1－糖代MAVGn的
文檔編號A61P35/00GK1831007SQ20051005343
公開日2006年9月13日 申請日期2005年3月10日 優(yōu)先權(quán)日2005年3月10日
發(fā)明者齊傳民, 李慧芳潔, 孫彭利, 吳愛琴, 趙云嶺, 張春麗 申請人:北京師范大學(xué)