專利名稱：蒙花苷在制備治療或預(yù)防出血性疾病的藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及蒙花苷在制備治療或預(yù)防出血性疾病的藥物中的應(yīng)用，具體地涉及蒙花苷在制備治療或預(yù)防內(nèi)出血或外出血的藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
血具有營養(yǎng)和滋潤的作用。血在脈中循行，內(nèi)注五臟六腑，外濡皮肉筋骨，如環(huán)無端，運行不息，以維持生理活動所需的營養(yǎng)。故《素問，五臟生成篇》說“肝受血而能視，足受血而能步，掌受血而能握，指受血而能攝?！贝送猓质菤獾妮d體，又是機(jī)體精神意識思維活動的主要物質(zhì)基礎(chǔ)，故有“血氣者，人之神”之說。出血過多可出現(xiàn)貧血，嚴(yán)重時并發(fā)出血性休克，危及生命，因此開發(fā)有效安全的止血藥物成為研發(fā)熱點。
斷血流是唇形科植物蔭風(fēng)輪或風(fēng)輪菜的干燥地上部分，在民間廣為用做止血藥物，其藥理作用得到廣泛證實韓傳環(huán)，周曉琳，葉壽山.斷血流口服液的藥效學(xué)研究.中藥藥理與臨床.1998，14(3)27-28，蒙花苷又稱刺槐甙，化學(xué)名為刺槐素-7-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖苷，是從斷血流中提取的一個成分，通過試驗，我們發(fā)現(xiàn)蒙花苷在預(yù)防或治療內(nèi)出血、外出血等方面具有顯著作用。
蒙花苷的化學(xué)結(jié)構(gòu)式發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明提供了蒙花苷在制備治療或預(yù)防出血性疾病的藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明提供了蒙花苷在制備治療或預(yù)防內(nèi)出血的藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明提供了蒙花苷在制備治療或預(yù)防陰道出血的藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明提供了蒙花苷在制備治療或預(yù)防消化道出血的藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明提供了蒙花苷在制備治療或預(yù)防病理性出血(血友病)的藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明提供了蒙花苷在制備治療或預(yù)防外出血的藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明提供了蒙花苷在制備治療或預(yù)防創(chuàng)傷性出血的藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明提供了以蒙花苷為活性成分的用于治療出血性疾病的藥物組合物。
本發(fā)明提供的藥物組合物中活性成分的含量范圍為5～500mg.。
本發(fā)明所述的蒙花苷在用于上述任一用途時，其使用劑量范圍為10mg～500mg/天。
本發(fā)明提供的藥物組合物可以通過口服、舌下、經(jīng)皮、經(jīng)肌肉或皮下、皮膚粘膜、陰道、靜脈途徑給藥。藥物組合物可以以粉針劑、注射液、片劑、栓劑、膠囊、軟膠囊、滴丸或口服液的形式存在。本發(fā)明所提供的各種藥物劑型均可以以藥學(xué)常規(guī)方法制備而成。
下面的內(nèi)容是為了更好地理解本發(fā)明外出血體表可見到。血管破裂后，血液經(jīng)皮膚損傷處流出體外。
內(nèi)出血體表見不到。血液由破裂的血管流入組織、臟器或體腔內(nèi)。
陰道出血包括子宮功能性、功能失調(diào)性、子宮肌瘤、子宮肌腺癥、宮頸炎癥、宮頸癌、子宮內(nèi)膜炎、子宮肌炎、子宮內(nèi)膜癌、宮頸、宮體惡性腫瘤晚期引起的出血。
消化道出血包括上消化道出血和下消化道出血，前者是指食管、胃、十二指腸、胰腺、膽道等部位的出血；后者是指空腸、回腸和大腸出血被稱為下消化道出血。
創(chuàng)傷性出血是指因事故、手術(shù)引起的出血。
本發(fā)明人通過下列試驗證實了蒙花苷具有治療或預(yù)防出血性疾病的作用，下面的實施例用來更詳細(xì)的說明本發(fā)明，但并限于此。
具體實施例方式制備例1制備蒙花苷斷血流藥材粉碎后加入10倍量水，浸泡30分鐘后用水煮，煎煮2小時后，過濾，濾渣再加入10倍量水煎煮，過濾，合并濾液，濾液濃縮至五分之一體積時，加入1倍量的95％乙醇，攪勻，靜置過夜，過濾，濾液用5倍體積水稀釋，用AB-8大孔樹脂吸附，吸附樹脂用去離子水洗后，80％乙醇洗脫，洗脫液減壓濃縮后至無醇味后，用聚酰胺吸附，用40％的乙醇洗脫，洗脫液濃縮后，用制備液相分離，蒸干即得，經(jīng)HPLC檢測，峰面積歸一化法其純度為98.2％。
薄層層析將分離制得的蒙花苷用甲醇溶解后點樣10μl于硅膠G預(yù)制板(100×100mm)上，展開劑為氯仿-甲醇-冰醋酸-水(70∶30∶10∶3)，顯色劑為10％的硫酸乙醇溶液，噴霧后加熱顯色。檢測結(jié)果表明蒙花苷中無其它雜質(zhì)斑點。
液相色譜分析將分離制得的蒙花苷用甲醇溶解后進(jìn)樣10μl，進(jìn)行HPLC分析，色譜條件如下色譜柱為LUNA C18粒徑5μm，250mm×4.6mm，SUPELCO公司產(chǎn)品；流動相為甲醇-0.2％的磷酸(v/v)為50∶50；流速為0.8ml/min；檢測波長為220nm；峰面積歸一化法其純度為98％以上。結(jié)構(gòu)鑒定本品為淡黃色粉末，mp270～272℃，TLC酸水解，產(chǎn)生Glc和Rham。UV(λmax，nm)271，329.ESI-MS593(M+H)+，1H-NMR(DMSO)8.06，7.16(各2H，d，J＝8.8Hz，2’，6’-H，3’，5’-H)，6.93(1H，s，3-H)，6.79，6.45(各1H，d，J＝2.0Hz，8-H，6-H)，5.07(1H，d，J＝7.2Hz，Glc1-H)，4.5(1H，s，Rham 1-H)，3.87(3H，s，OCH3)，1.08(3H，d，J＝6.0Hz，Rham-CH3)。
1H-NMR譜、13C-NMR譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報道李教社，趙玉英等，密蒙花黃酮類化合物的分離和鑒定，藥學(xué)學(xué)報，1996，31(11)蒙花苷的波譜數(shù)據(jù)一致。
制備例2制備片劑取蒙花苷細(xì)粉適量，以淀粉為添充劑，以5％的淀粉漿作為粘合劑，制粒，加入硬脂酸鎂，混勻，用壓片機(jī)壓制為片劑10mg/片。
制備例3制備膠囊取蒙花苷細(xì)粉適量，以淀粉為添充劑，加入硬脂酸鎂混勻，直接填充為10mg/粒膠囊劑。
制備例4制備口服液取蒙花苷細(xì)粉適量用10％的吐溫80混懸，再加入總體積10％的糖漿作為調(diào)味劑和3％苯甲酸鈉作為防腐劑分裝即得。
制備例5制備外用氣霧劑取蒙花苷細(xì)粉適量用10％的吐溫80混懸，再加入總體積10％的異丙醇和3％苯甲酸鈉作為防腐劑，分裝并加入異丁烷、二氧化碳等適宜的拋射劑封裝即得。
試驗例1.小鼠的斷尾出血實驗1.1材料蒙花苷按制備例1制備，批號050415；斷血流片，安慶乘風(fēng)制藥有限公司，批號040804；清潔級昆明種小鼠，體重18～22g，雌雄各半，由山東省綠葉制藥股份有限公司實驗動物中心提供，動物合格證號為SYXK(魯)20030020。
1.2方法與結(jié)果取健康小鼠50只，雌雄各半，按體重隨機(jī)分為空白對照組(生理鹽水)，蒙花苷2mg/kg組、10mg/kg組和100mg/kg組，斷血流片1g/kg組。各組灌胃給藥，連續(xù)3天，每天一次，末次給藥1小時后，用手術(shù)刀將小鼠尾尖50mm處橫斷，待血液自行溢出時計時，每隔30s用濾紙吸血滴1次，直至血液自然停止，計算出血時間。結(jié)果見表1。
表1蒙花苷灌胃給藥后小鼠斷尾出血時間(x±s，n＝10)

*與空白對照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001如表1所示，蒙花苷3個劑量組能明顯縮短小鼠出血時間。
試驗例2蒙花苷對小鼠肝素抗凝血的抑制作用2.1材料蒙花苷按制備例1制備，批號050415；斷血流片，安慶乘風(fēng)制藥有限公司，批號040804；清潔級昆明種小鼠，體重18～22g，雌雄各半，由山東省綠葉制藥股份有限公司實驗動物中心提供，動物合格證號為SYXK(魯)20030020。
2.2方法與結(jié)果取健康小鼠60只，雌雄各半，隨機(jī)分成6組，空白對照組(生理鹽水)，模型組(生理鹽水)，蒙花苷2mg/kg組、10mg/kg組和100mg/kg組，斷血流片1g/kg組。各組灌胃給藥，連續(xù)3天，每天一次，末次給藥0.5小時后，除空白對照組外，其它各組每只小鼠尾靜脈注射肝素60U/kg，15min后由內(nèi)眥球后靜脈叢取血，按毛細(xì)玻管法測定凝血時間(min)，結(jié)果見表2。
表2.蒙花苷對小鼠肝素抗凝血的抑制作用

*與模型組比較，*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001如表2所示，蒙花苷能明顯對抗肝素引起小鼠凝血時間的延長。凝血時間顯著縮短。
試驗例3蒙花苷對熱盛胃出血模型止血作用的影響3.1材料清潔級昆明種小鼠，體重18～22g，雌雄各半，由山東省綠葉制藥股份有限公司實驗動物中心提供，動物合格證號為SYXK(魯)20030020。
蒙花苷按制備例1制備，批號050415。
消炎痛，邯鄲滏榮制藥有限公司生產(chǎn)，批號020203；乙醇，山東煙臺市化工廠生產(chǎn)，批號021127。
平面體視顯微鏡，北京泰克儀器有限公司生產(chǎn)。
3.2方法與結(jié)果將昆明種小鼠40只隨機(jī)分為空白對照組、模型組，蒙花苷高(100mg/kg)、低劑量(2mg/kg)組?？瞻捉M對照組飼以普通飲食，模型組及給藥組參照文獻(xiàn)[陳小野.實用中醫(yī)證候動物模型學(xué).北京北京醫(yī)科大學(xué)，中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué)聯(lián)合出版社，1993.285]造摸，飼養(yǎng)10日后，禁食16h，外，其它各組利用消炎痛加乙醇，每日灌胃造模藥0.25ml/10g體重，連續(xù)給藥10d后，胃出血造模參照文獻(xiàn)[沈雅琴，陳光娟，朱自平.中藥蓽澄茄“溫中止痛”藥理研究.中藥藥理與臨床，1991(2)18]用消炎痛加乙醇法，腹腔注射消炎痛7.5mg/ml，0.1ml/10g體重，0.5h后，給藥組灌胃給予蒙花苷，3h后重復(fù)灌胃1次，第2次灌胃2.5h后，模型組再灌胃50％乙醇，0.1ml/10g體重，解剖取胃，福爾馬林固定，解剖鏡下觀察腺胃部糜爛出血點數(shù)。結(jié)果見表3
表2.蒙花苷對熱盛胃出血模型止血作用

*與模型組比較，*p＜0.05，***P＜0.001如表3所示，與模型對照組比較，蒙花苷顯著降低胃潰瘍出血點數(shù)。
試驗例4蒙花苷對早孕大鼠子宮出血的影響4.1材料動物SD大鼠，♀鼠220～250g，♂鼠250～300g，由山東省綠葉制藥股份有限公司實驗動物中心提供，動物合格證號為SYXK(魯)20030020。
蒙花苷按制備例1方法制備，批號050415；宮血寧膠囊云南白藥集團(tuán)有限公司生產(chǎn)，批號030414；米非司酮上海華聯(lián)制藥有限公司產(chǎn)品，批號44040807，用時以5g/L羧甲基纖維素鈉配制成混懸液；米索前列醇北京紫竹藥業(yè)有限公司制造，批號42040705，用時以5g/L羧甲基纖維素鈉配制成混懸液。
4.2方法與結(jié)果造模大鼠每日20:00時♀、♂按2∶1比例合籠，次日08:00時進(jìn)行陰道涂片檢查，以發(fā)現(xiàn)精子為妊娠第1天。于第7天08:00和18:00時分別灌服米非司酮(13.8mg/kg)和米索前列醇(135ug/kg)，引起不完全流產(chǎn)模型。同時陰道內(nèi)置入定量棉球一個(棉球重75～80mg，用塑料薄膜包裹半側(cè)，以防血液漏出和尿液返流)。次日分別于08:00和18:00將棉球取出，放入塑料袋中密閉冷藏保存，同時置換一個新棉球于陰道內(nèi)，觀察陰道出血情況，連續(xù)至第14天。實驗分組和給藥方法取48只妊娠大鼠，未造模的8只大鼠為空白對照組，其余40只造模大鼠隨機(jī)分為5組模型對照組、宮血寧組(0.1g/kg)、蒙花苷高劑量組(50mg/kg)、蒙花苷低劑量組(1mg/kg)。各組于造模次日(第8天)開始灌胃，連續(xù)7d。按照文獻(xiàn)[王曉東，趙軍寧，張白嘉等。藥物致早孕大鼠子宮出血模型的建立.中國藥理學(xué)通報，1999；15(2)182～184]的方法測定子宮出血量。結(jié)果見表4
表4.蒙花苷對早孕大鼠子宮出血的影響

*與模型組比較，*P＜0.05，***P＜0.001如表4所示，與模型對照組比較，蒙花苷顯著減少早孕大鼠子宮出血量。
試驗例5蒙花苷對離體家兔動脈條的作用5.1材料動物新西蘭大白兔，雌雄各半，1.5～2.5kg，由山東省綠葉制藥股份有限公司實驗動物中心提供，動物合格證號為SYXK(魯)20030020。
蒙花苷按制備例1方法制備，批號050415；去甲腎上腺素上海禾豐制藥有限公司生產(chǎn)，批號0306012，；Krebs液山東省綠葉天然藥物研究開發(fā)有限公司藥理室配置；BIOPAC M150多導(dǎo)生理紀(jì)錄儀、張力傳感器(TSD105A)均為BIOPAC Systems，Inc.公司生產(chǎn)。
5.2方法與結(jié)果家兔胸主動脈條的制備取健康家兔(1.5～2.5kg)，雌雄兼用。猛擊家兔頭部，剪取胸主動脈制成3×30mm的螺旋形肌條，將肌條置于含有改良Krebs液中(38±0.5)℃，pH值為7.2～7.4，通以95％O2+5％CO2。肌條一端固定在通氣鉤上，另一端通過肌張力傳感器記錄在BIOPACM150多導(dǎo)生理紀(jì)錄儀上，負(fù)荷2g張力，平衡1.5～2h后開始實驗，用0.01％去甲腎上腺素檢驗血管收縮活性。穩(wěn)定后加入蒙花苷溶液(濃度A、濃度B、濃度C)，記錄收縮曲線，作用達(dá)高峰后，繼續(xù)記錄一段時間，觀察作用維持時間。結(jié)果見表5。
表5.蒙花苷溶液對兔主動脈條的作用

表5可見，蒙花苷可提高血管收縮力，具有較強(qiáng)的縮血管作用。
試驗例6蒙花苷對正常大鼠離體子宮平滑肌收縮的作用6.1材料動物SD大鼠，♂鼠250～300g，由山東省綠葉制藥股份有限公司實驗動物中心提供，動物合格證號為SYXK(魯)20030020。
蒙花苷溶液按制備例1制備，批號050416，用前按濃度配成溶液。
Krebs液山東省綠葉天然藥物研究開發(fā)有限公司藥理室配置。
BIOPAC M150多導(dǎo)生理紀(jì)錄儀、張力傳感器(TSD105A)均為BIOPAC Systems，Inc.公司生產(chǎn)。
6.2方法與結(jié)果取雌性未孕SD大鼠(體重250～300g)50只，隨機(jī)分5組，每組10只。實驗前24～48h皮下注射已烯雌酚1mg/kg體重促發(fā)情。實驗時將大鼠處死，取子宮約長2cm，一端固定在通氣鉤上，另一端通過肌張力傳感器記錄在BIOPAC M150多導(dǎo)生理紀(jì)錄儀上，負(fù)荷2g張力，平衡1.5～2h后開始實驗，用0.01％去甲腎上腺素檢驗子宮的收縮活性。穩(wěn)定后加入蒙花苷溶液(高濃度組A、中濃度組B、低濃度組C)、縮宮素溶液D，記錄收縮曲線，收縮幅度、收縮頻率。結(jié)果見表6
表6.蒙花苷溶液對正常大鼠離體子宮平滑肌收縮的作用

*與用藥前比較，*P＜0.05表6可見，蒙花苷和縮宮素對正常大鼠子宮平滑肌收縮幅度、收縮頻率均有明顯影響，其效果與縮宮素接近，經(jīng)檢驗與用藥前有顯著性差異(P＜0.05)。
權(quán)利要求
1.以蒙花苷為活性成分的用于治療或預(yù)防出血性疾病的藥物組合物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其活性成分的含量范圍為5-500mg。
3.蒙花苷在制備治療或預(yù)防出血性疾病的藥物中的應(yīng)用。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，蒙花苷在制備治療或預(yù)防內(nèi)出血的藥物中的應(yīng)用。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，蒙花苷在制備治療或預(yù)防陰道出血的藥物中的應(yīng)用。
6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，蒙花苷在制備治療或預(yù)防消化道出血的藥物中的應(yīng)用。
7.根據(jù)權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，蒙花苷在制備治療或預(yù)防病理性出血(血友病)的藥物中的應(yīng)用。
8.根據(jù)權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，蒙花苷在制備治療或預(yù)防外出血的藥物中的應(yīng)用。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的應(yīng)用，蒙藥苷在制備治療或預(yù)防創(chuàng)傷性出血的藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明提供了蒙花苷在制備治療或預(yù)防出血性疾病的藥物中的應(yīng)用，具體地提供了蒙花苷在制備治療或預(yù)防內(nèi)出血、陰道出血、消化道出血、病理性出血及外出血的藥物中的應(yīng)用。
文檔編號A61P7/04GK1872082SQ20051004369
公開日2006年12月6日 申請日期2005年5月31日 優(yōu)先權(quán)日2005年5月31日
發(fā)明者宋吉倫, 王超云, 張紅香 申請人:山東綠葉天然藥物研究開發(fā)有限公司