專利名稱：中藥肉豆蔻及其提取物的制藥新用途的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及中藥肉豆蔻的新用途，具體的說，是在制備5α-還原酶抑制劑和制備治療前列腺增生治療藥物中的應用，屬于中藥領域。
背景技術：
良性前列腺增生癥(BPH)即前列腺肥大，是老年男性常見疾病，以前列腺增生所致的靜力性梗阻和前列腺平滑肌張力增加所致的動力性梗阻為特征，臨床表現為膀胱尿液流出阻塞、尿急、尿頻、尿液殘留，常導致尿道感染甚至誘發(fā)腎炎，其發(fā)病率隨年齡遞增，近年來發(fā)病數也明顯增加，嚴重地影響患者的體力活動和社交能力，從而影響其生活質量。BPH大多采用手術治療效果良好，但手術對于老年病人并非毫無危險，BPH手術是一種創(chuàng)傷性和破壞性操作，有死亡危險性，因此以尋求藥物治療以避免手術的風險，而且，隨著對前列腺增生癥發(fā)病機理認識的不斷完善，藥物已經成為BPH治療的重要手段。
目前雖然BPH發(fā)生的確切機理還沒有完全闡明，但5-α還原酶與BHP發(fā)生的關系已被廣泛接受。5-α還原酶的作用是使睪酮(T)代謝為二氫睪酮(DHT)，與BPH的發(fā)生有關。同時研究表明5α-還原酶是皮膚雄激素代謝的關鍵酶，近年來發(fā)現多種皮膚病與雄激素代謝異常有關，一些5α-還原酶抑制劑已用于雄激素源性脫發(fā)以及其他雄激素相關性皮膚病，如痤瘡、多毛癥等(尹興平，夏隆慶.5a-還原酶在雄激素代謝中的作用及其抑制劑在皮膚科的應用.國外醫(yī)學·皮膚性病學分冊，2004，30(6)375～377)。DHT是前列腺雄性激素的活性形式，為前列腺分化、生長發(fā)育所必需。但在老年期，前列腺組織保持很高的5-α還原酶活性，使DHT含量升高，因此認為是導致前列腺增生的重要因素。這一學說已經通過一種5-α還原酶抑制劑非那雄胺的研究而得到證實。非那雄胺與5α-還原酶競爭性結合而減少睪酮與5α-還原酶結合，阻斷睪酮向DHT轉化，使血漿DHT和前列腺內DHT迅速下降，最終使前列腺縮小，并增加尿流率，改善梗阻癥狀，減少BPH的并發(fā)癥。近年來，植物來源的藥物顯示治療BPH的良好前景，如藍棕果提取物以及花粉提取物(舍尼通)，均具有抑制5α-還原酶的作用。
肉豆蔻系肉豆蔻科高大常綠喬木植物肉豆蔻Myristica fragrans Houtt的成熟種仁。原產馬魯古群島，我國臺灣、云南、廣東引種栽培。據《本草經疏》記載“肉豆蔻辛味能散能消，溫氣能和中通暢，其氣芬芳，香氣先入脾，脾主消化，溫和而辛香，故開胃，胃喜暖也?！吨兴帉W》認為肉豆蔻辛、溫歸脾、胃、大腸經，有澀腸止瀉，溫中行氣的功效，主要用于脾胃虛寒久瀉，胃寒脹痛及食少嘔吐?，F代研究表明肉豆蔻含揮發(fā)油、脂肪油、淀粉、蛋白質及沒食子酸類的鞣酸性成分。揮發(fā)油中含肉豆蔻醚、黃樟醚、欖香脂素、甲基甲香酚及多種萜烯類化合物等。其主要藥理作用為抗微生物、抗氧化、麻醉、鎮(zhèn)靜以及致幻作用(《中藥學》，張廷模主編，北京，高等教育出版社，2002，1)。但迄今尚未見肉豆蔻抑制5α-還原酶、預防或治療良性前列腺增生以及相關疾病的報道。

發(fā)明內容
本發(fā)明的技術方案是提供了中藥肉豆蔻及其提取物的新用途。本發(fā)明還提供了含有肉豆蔻原生藥或提取物為活性成分的藥物組合物及其制備方法和用途。
本發(fā)明提供了中藥肉豆蔻在制備5α-還原酶抑制劑藥物中的應用和中藥肉豆蔻在制備治療前列腺增生藥物中的應用。
所述的中藥肉豆蔻來自于肉豆蔻科高大常綠喬木植物肉豆蔻Myristica fragransHoutt的成熟種仁。
所述的肉豆蔻為肉豆蔻原生藥粉或水/有機溶劑提取物。
本發(fā)明還提供了一種用于制備5α-還原酶抑制劑藥物的藥物組合物，它是由所述的肉豆蔻原生藥粉或其水/有機溶劑提取物為活性成分，加上藥學上可接受的輔料或輔助性成分制備而成的制劑。
其中，所述的肉豆蔻有機溶劑提取物為甲醇、乙醇、乙酸乙酯、正丁醇、乙醚、石油醚等有機溶劑中的一種或任意兩種或者多種溶劑以任意比例組成的混合溶劑的提取物。
以上述中藥肉豆蔻或其提取物，與藥學上可接受的輔助添加劑成分混合后，按相應的常規(guī)藥物制劑方法，可以制備5α-還原酶抑制劑、預防和/或治療前列腺增生的藥物。例如，與在口服制劑中可以被接受的崩解劑、賦形劑、潤滑劑、粘合劑、填充劑等常用輔助添加成分混合后，按常規(guī)的操作方法和過程，可以制成為片劑、丸劑、膠囊劑或多種相應的緩釋劑、控釋劑等固體口服制劑形式的藥物；與常規(guī)的增溶劑、乳化劑、潤飾劑、起泡或消泡劑等表面活性劑、稀釋劑、防腐劑、穩(wěn)定劑、矯味劑、增稠劑等混合后，按相應的常規(guī)方法，可以制備成為水劑、糖漿、口服液等液體制劑形式的口服藥物；與常規(guī)的懸浮劑、穩(wěn)定劑、分散劑或調節(jié)溶液滲透壓的試劑混合，按相應的常規(guī)方法，配置成注射液。
進一步的，本發(fā)明提供了該藥物組合物的制備方法，其中肉豆蔻提取物的制備包括以下步驟
a)肉豆蔻用水或30～95％的乙醇回流提取1～3次，溶媒量分別為6～8倍，提取時間為1～3小時，合并提取液，濃縮干燥得樣品A；b)A溶于水，用石油醚、乙醚、乙酸乙酯或正丁醇萃取，減壓回收溶劑得水提取物和相應的有機溶劑提取物。
本發(fā)明還提供了該藥物組合物在制備5α-還原酶抑制劑藥物中的應用。
本發(fā)明還提供了該藥物組合物在制備治療前列腺增生藥物中的應用。
按照本發(fā)明，可以將上述含有中藥肉豆蔻或其提取物，或中藥肉豆蔻及其提取物與其它具有預防和/或治療前列腺增生作用的西藥或中藥活性成分配伍組成的復方制劑，按照常規(guī)的制劑技術，制備成口服制劑或注射劑。
本發(fā)明從中藥肉豆蔻中提取得到肉豆蔻提取物，試驗證明其具有抑制5α-還原酶活性的作用，對雄性大鼠的前列腺增生具有明顯的治療作用?？捎糜谥苽?α-還原酶抑制劑、治療和/或預防前列腺增生的藥物制劑，如口服制劑或注射劑。具有療效顯著、價格低廉、服用方便的特點。
顯然，根據本發(fā)明的上述內容，按照本領域的普通技術和慣用手段，在不脫離本發(fā)明上述基本技術思想前提下，還可以作出其它多種形式的修改、替換或變更。
以下通過實施例形式的具體實施方式
，對本發(fā)明的上述內容再作進一步的詳細說明。但不應將此理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于以下的實例，凡基于本發(fā)明上述內容所實現的技術均屬于本發(fā)明的范圍。
具體實施例方式
實施例1肉豆蔻原生藥粉的膠囊的制備取中藥肉豆蔻Myristica fragrans Houtt的干燥成熟種仁，按常規(guī)方法粉碎，過篩，制成粒度為60～80目的肉豆蔻細粉，細粉裝入膠囊，滅菌，分裝即成。
實施例2肉豆蔻提取物的制備稱取肉豆蔻1000g，用90％乙醇回流提取三次，溶媒量分別為8倍、6倍、6倍，提取時間分別為2小時、1小時、1小時。合并提取液，回收至無醇味。50℃減壓干燥得樣品A。稱取樣品A 50g，用150ml蒸餾水溶解。水溶液分別用3倍體積的石油醚、乙醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，減壓回收溶劑得樣品B(石油醚相)、C(乙醚相)、D(乙酸乙酯相)、E(正丁醇相)、F(水相)。
實施例3片劑的制備片劑的組成肉豆蔻提取物A0.5gHPMCLV10030g乳糖 69g
硬脂酸鎂0.5g共 100g將肉豆蔻提取物A、HPMCLV100、乳糖混勻，以75％乙醇為粘合劑制濕顆粒，過22目篩，50℃干燥3小時，22目篩整粒，加入硬脂酸鎂混勻壓片，制成1000片，每片0.1g?？诜?，一日3次，每次2片。
實施例4膠囊劑的制備膠囊組成肉豆蔻提取物B 0.5g淀粉 99g硬脂酸鎂 0.5g共100g將肉豆蔻提取物B、淀粉、硬脂酸鎂混勻，裝膠囊，共1000粒，每粒0.1g?？诜?，一日3次，每次2粒。
實施例5注射劑的制備注射液組成肉豆蔻提取物C 0.5g吐溫80 10ml氯化鈉 8g肉豆蔻提取物C，加入10％碳酸鈉調PH值至7.0～7.5，冷藏過濾，加入吐溫80，加注射用水至1000ml，濾過，分裝，灌封，100℃流通蒸汽滅菌，30min即得。
實施例6復方片劑或膠囊的制備用肉豆蔻提取物制備復方制劑，取肉豆蔻提取物D 0.5g，姜黃提取物200g，按常規(guī)方法，加入輔料，制成片劑或膠囊。每片或粒200mg，用于患者，口服，一日3次，每次1片或1粒，一月為一療程。
以下通過藥效學試驗證明本發(fā)明的有益效果。
試驗例1肉豆蔻提取物對前列腺癌細胞5α-還原酶活性的抑制作用前列腺癌細胞(DU145，表達5α-還原酶)按常規(guī)方法維持培養(yǎng)在含10％小牛血清，100ug/ml鏈霉素，100U/ml青霉素的1640培養(yǎng)基中，次日以2×104/孔接種于24孔板中，37℃5％CO2飽和濕度培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時，換新鮮培養(yǎng)基，每孔加入0.1mM睪酮并分別加入待測樣品，以藍棕果(Sabalberry extract，德國馬博士大藥廠)為陽性對照藥物，繼續(xù)培養(yǎng)2小時，收集細胞培養(yǎng)上清，用EIA試劑盒定量檢測二氫睪酮，測定450nm條件下的吸光值，根據標準測定值計算二氫睪酮量，以此確定睪酮的轉換以及樣品對睪酮轉換的抑制，結果見表1
表1肉豆蔻對前列腺癌細胞中睪酮轉換的抑制作用(樣品濃度100μg/ml)

表1結果顯示，細胞+睪酮組DHT濃度較細胞對照組顯著升高，各藥物組DHT濃度均較細胞+睪酮組明顯降低，表明肉豆蔻提取物A、B、C、D、E、F均有抑制前列腺癌細胞5α-還原酶活性的作用，其中肉豆蔻提取物C對5α-還原酶抑制作用最強，作用強于對照藥物藍棕果。
試驗例2肉豆蔻提取物對大鼠前列腺組織5α-還原酶活性的抑制作用取大鼠前列腺組織，加入勻漿緩沖液(1∶5體積)，勻漿緩沖液的組成為0.88M蔗糖，1.5mM CaCl2，組織勻漿液經高速離心(10000×g，15min，4℃)，取上清與待測樣品或陽性藥物(非那雄胺Merck Sharp & Dohme(U.K)Ltd生產，規(guī)格5mg×10粒/盒，批號235820)反應10分鐘，加入0.05mM睪酮、0.02mM NADPH，在450nm條件下測定吸光值，并計算抑制率抑制率(％)＝(A0-A1)/A0×100，結果見表2表2肉豆蔻對前列腺組織5α-還原酶活性的抑制作用(樣品濃度100μg/ml)

表2結果顯示，各藥物組對前列腺組織5α-還原酶活性均表現出抑制作用，表明肉豆蔻提取物A、B、C、D、E、F均有抑制前列腺組織5α-還原酶活性的作用，其中肉豆蔻提取物C對5α-還原酶抑制作用最強，抑制率達到93.72％，作用略弱于對照藥物非那雄胺(100％抑制)。
試驗例3肉豆蔻提取物C治療大鼠前列腺增生的作用選取正常雄性SD大鼠56只，隨機分為七組，每組8只，即正常組(灌胃給予等體積生理鹽水)，去勢組(摘除雙側睪丸)，去勢+睪酮組(摘除雙側睪丸，注射丙酸睪丸酮2mg/kg)，肉豆蔻高、中、低劑量組(去勢+睪酮并灌胃給予肉豆蔻C提取物)，陽性藥物組(去勢+睪酮并灌胃給予舍尼通(10片×1板/盒，每片含水溶性花粉提取物P5 70mg，脂溶性花粉提取物EA10 4mg，南京美瑞制藥有限公司生產))。給藥45天后眼眶后靜脈叢取血，分離血清測定DHT濃度，檢測方法及計算參照EIA試劑盒說明進行；取血后脫頸處死大鼠，剝離前列腺周圍組織，取出前列腺腹葉，稱取濕重后放置低溫勻漿，離心收集上清，檢測組織中的DHT和T濃度，檢測方法及計算參照EIA試劑盒說明進行，結果見表3。
表3肉豆蔻提取物C對前列腺增生大鼠血清、組織DHT水平的影響(n＝8，X±SD)

注與去勢+睪酮組比較，*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001表3結果顯示，與去勢+睪酮組比較，肉豆蔻提取物C各劑量組均有降低血清DHT、組織DHT和前列腺濕重的作用趨勢，且作用強度隨濃度的增加而增強；其中高劑量組有顯著降低血清DHT(P＜0.05)、組織DHT(P＜0.01)和前列腺濕重(P＜0.05)作用，其作用強度與舍尼通相近；中劑量組對組織DHT和前列腺濕重有顯著的降低作用(P＜0.05)。
上述藥效學試驗，雖然是實施例2制備的肉豆蔻提取物C的藥效試驗，但不同劑量組給藥試驗結果表明了本發(fā)明藥物提取物治療前列腺增生的量效關系，說明本發(fā)明藥物具有明顯的治療前列腺增生的作用，且其作用隨給藥劑量的增加而增強，可用于制備治療和/或預防前列腺增生的藥物制劑，療效顯著，且質量穩(wěn)定，可控性強。
權利要求
1.中藥肉豆蔻在制備5α-還原酶抑制劑藥物中的用途。
2.根據權利要求1所述的中藥肉豆蔻在制備5α-還原酶抑制劑藥物中的用途，其特征在于所述5α-還原酶抑制劑藥物是治療前列腺增生的藥物。
3.根據權利要求1或2所述的用途，所述的中藥肉豆蔻為肉豆蔻科高大常綠喬木植物肉豆蔻Myristica fragrans Houtt.的成熟種仁。
4.根據權利要求1或2所述的用途，其特征在于，所述的中藥肉豆蔻為肉豆蔻原生藥粉或肉豆蔻的水或有機溶劑提取物。
5.一種用于制備5α-還原酶抑制劑的藥物組合物，它由肉豆蔻原生藥粉或其水/有機溶劑提取物為活性成分，加上藥學上可接受的輔料或輔助性成分制備成的制劑。
6.根據權利要求5所述的用于制備5α-還原酶抑制劑的藥物組合物，其特征在于所述的肉豆蔻有機溶劑提取物為甲醇、乙醇、乙酸乙酯、正丁醇、乙醚、石油醚等有機溶劑中的一種或多種溶劑組成的混合溶劑的提取物。
7.根據權利要求5所述的制備5α-還原酶抑制劑的藥物組合物，其特征在于所述的制劑是口服制劑或注射劑。
8.一種制備權利要求5所述的藥物組合物的方法，其中肉豆蔻提取物的制備包括以下步驟a)肉豆蔻用水或30～95％的乙醇回流提取，溶媒量為6～8倍，提取時間為1～3小時，合并提取液，濃縮干燥得樣品A；b)將A溶于水，用石油醚、乙醚、乙酸乙酯或正丁醇萃取，減壓回收溶劑得水提取物和相應的有機溶劑提取物。
9.權利要求5～8任一項所述的藥物組合物在制備5α-還原酶抑制劑藥物中的用途。
10.權利要求5～8任一項所述的藥物組合物在制備治療前列腺增生藥物中的用途。
全文摘要
本發(fā)明涉及中藥肉豆蔻及其提取物在制藥領域中的新用途，具體的是中藥肉豆蔻及其提取物在制備5α－還原酶抑制劑、前列腺增生治療藥物中的用途，具有療效顯著、價格低廉、使用方便的特點。
文檔編號A61P13/00GK1846775SQ200510020708
公開日2006年10月18日 申請日期2005年4月14日 優(yōu)先權日2005年4月14日
發(fā)明者高小平, 鄒文俊, 劉忠榮, 李伯剛 申請人:成都地奧制藥集團有限公司