專利名稱：一種治療咽喉炎的藥物組合物及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種治療咽喉炎的藥物組合物，具體地，是涉及中藥提取物為活性部分的藥物組合物及其制備方法，屬中藥領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
中醫(yī)認為，急性咽喉炎屬風(fēng)熱邪毒外襲，邪熱壅塞肺臟所致的喉痹(急性咽炎)、急喉喑(急性喉炎)，是嚴重影響健康的常見病、多發(fā)病，往往伴隨著感冒而產(chǎn)生。起病急，以咽喉腫痛、聲音嘶啞、頭痛發(fā)燒、咳嗽痰黃為主要癥狀，進一步加劇可出現(xiàn)咽喉、鼻粘膜水腫充血?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)證實急性咽喉炎多為病毒所致，主要有流感病毒、副流感病毒、腺病毒、柯薩奇病毒、呼吸道合胞病毒、鼻病毒等，抗菌素對此類病毒感染無效。臨床治療急性咽喉炎及此類上呼吸道感染常用的西藥有金剛烷胺、金剛乙胺、利巴韋林(病毒唑)、嗎啉雙胍(病毒靈)等。它們對引起急性咽喉炎的某些病毒有肯定的作用，但療效較為單一，無抗菌消炎、解熱鎮(zhèn)痛、止咳作用，即對控制癥狀效果不理想，且均具較嚴重的毒副作用，如導(dǎo)致貧血、血小板和白細胞減少、血尿、頭暈、共濟失調(diào)、水腫、視力喪失、胃腸道反應(yīng)、免疫抑制、腹瀉以及腎功能損害等。治療急性咽喉炎及上呼吸道感染的常用中藥有穿心蓮制劑系列、魚腥草制劑系列、板蘭根制劑系列、雙黃連制劑系列以及其它清熱解毒中藥的復(fù)方制劑。這些中藥制劑的特點是不但對病毒有一定抑制作用，且具有消炎、退熱鎮(zhèn)痛等作用，但抗病毒作用不夠顯著，多為復(fù)方制劑，針對的具體適應(yīng)癥各不相同，質(zhì)量不穩(wěn)定，所含的有效部位或有效成分不明確，且服用、攜帶、保存均不便。
鳶尾是鳶尾科植物鳶尾Iris tectorum Maxim.的根莖。具有消積、破瘀、行水、解毒的作用。治療食滯脹滿，癓瘕積聚，膨脹、腫毒、痔瘺、跌打損傷。申請?zhí)?00410022293.X公開了鳶尾水提物，及在制備治療口腔炎、咽喉炎及慢性支氣管炎及解酒、減肥藥物中的用途。該公開文獻報道的是鳶尾的粗提物，適應(yīng)癥多，有效成分不明確。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的技術(shù)方案提供了一種治療咽喉炎的藥物組合物，它是以鳶尾總黃酮為活性部分制備而成的組合物，本發(fā)明的另一技術(shù)方案是提供了該藥物組合物的制備方法。
本發(fā)明提供了一種治療咽喉炎的藥物組合物，它是由鳶尾科植物鳶尾(Iristectorum Maxim.)提取物為活性部分，加上藥學(xué)上可接受的輔料或輔助性成分制備而成的藥劑，其中，提取物中，總黃酮的百分含量以鳶尾苷(C22H22O11)計算≥55％。
其中，所述的總黃酮中含有鳶尾苷tectoridin、鳶尾甲苷A iristectorin A(又稱野鳶尾苷iridin)、鳶尾苷元tectorigenin、野鳶尾苷元irigenin tectoridiniristectorin A tectorigenin ingenin。
進一步地，總黃酮中四個異黃酮成分的含量比鳶尾苷∶鳶尾甲苷A∶鳶尾苷元∶野鳶尾苷元為1∶0.1～0.4∶0.15～0.6∶0.03～0.1。
更進一步地，總黃酮中四個異黃酮成分的含量比鳶尾苷∶鳶尾甲苷A∶鳶尾苷元∶野鳶尾苷元為1∶0.18∶0.29∶0.056。
所述的鳶尾總黃酮是由下述方法提取制備a、取鳶尾科植物鳶尾(Iris tectorum Maxim.)藥材，粉碎，加入70％乙醇回流提取，濃縮，得浸膏；b、將a步驟的浸膏溶解入水中，過濾，濾液通過大孔吸附樹脂柱；c、用水洗滌脂柱，流出液棄去，至流出液呈近無色澄明溶液時，放干水，用75～90％乙醇洗脫，洗脫液過濾，濃縮即得本發(fā)明總黃酮。
其中，所述的鳶尾總黃酮的提取方法中b步驟所述的大孔吸附樹脂柱的樹脂量與原生藥材的重量配比為3∶1。
所述的制劑是膠囊劑、顆粒劑、片劑、丸劑、口服液。
本發(fā)明還提供了該藥物組合物的制備方法，包括如下步驟a、取鳶尾科植物鳶尾Iris tectorum Maxim.藥材，粉碎，加入70％乙醇回流提取，濃縮，得浸膏；b、將a步驟的浸膏溶解入水中，過濾，濾液通過大孔吸附樹脂柱；c、用水洗滌脂柱，流出液棄去，至流出液呈近無色澄明溶液時，放干水，用75～90％乙醇洗脫，洗脫液過濾，濃縮即得本發(fā)明總黃酮；d、稱取c步驟的總黃酮，加入藥學(xué)上可接受的輔料或輔助性成分制備成藥學(xué)上常用的制劑。
本發(fā)明還提供了該藥物組合物在制備治療急、慢性咽喉炎的藥物中的用途。
本發(fā)明還提供了該藥物組合物在制備抗病毒、抗炎、鎮(zhèn)痛、解熱、止咳藥物中的用途。
本發(fā)明藥物質(zhì)量穩(wěn)定、可控，且確定了其中的藥效成分鳶尾苷、鳶尾甲苷A、鳶尾苷元、野鳶尾苷元，通過該四個成分的配比發(fā)揮了協(xié)同增效的作用。對導(dǎo)致急性咽喉炎和上呼吸道感染的主要病毒如流感病毒、副流感病毒、腺病毒、柯薩其病毒、呼吸道合胞病毒、鼻病毒、皰疹病毒有顯著地抑制作用，且具有顯著的抗炎、消腫、解熱鎮(zhèn)痛作用，臨床上作為急性咽喉炎的治療藥，該藥物起效快，緩解癥狀迅速，咽喉腫痛導(dǎo)致的聲音嘶啞者服藥后幾小時即可恢復(fù)正常語音，咽喉腫痛在數(shù)小時內(nèi)明顯減輕或消失，連續(xù)服藥3～7天，即可痊愈，是一種速效藥物，且成本低、得率高，為臨床提供了一種新的藥用選擇。
顯然，根據(jù)本發(fā)明的上述內(nèi)容，按照本領(lǐng)域的普通技術(shù)知識和慣用手段，在不脫離本發(fā)明上述基本技術(shù)思想前提下，還可以做出其它多種形式的修改、替換或變更。
以下通過實施例形式的具體實施方式
，對本發(fā)明的上述內(nèi)容再作進一步的詳細說明。但不應(yīng)將此理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于以下的實例。凡基于本發(fā)明上述內(nèi)容所實現(xiàn)的技術(shù)均屬于本發(fā)明的范圍。
具體實施例方式
實施例1 本發(fā)明藥物提取物鳶尾總黃酮的制備(1)原生藥粉碎成粗粉過20目篩，置于提取罐內(nèi)，用70％乙醇加熱回流提取三次，每次時間1.5小時，每次溶媒用量為藥材量的4倍(v/w)，合并提取液，過濾，60℃減壓回收乙醇，得比重1.2g/ml(50℃測定)的糖漿狀物質(zhì)(棕黃色浸膏)。其得率為投料量的49～51％(w/w)。將上述浸膏用相當于投料生藥量的20倍量沸水(w/w)攪拌溶解，待溶液冷卻至50℃時，讓其通過已處理好的WLD型大孔吸附樹脂罐(樹脂量原生藥量3∶1，w/w)，流速控制在每100kg樹脂每分鐘5～10立升，流出液棄去，待流出液鹽酸鎂粉反應(yīng)略顯紅色(取流出液1ml置5ml試管內(nèi)，加入鎂粉少許，再滴加鹽酸，反應(yīng)液顯紅色)，即刻用常水洗滌樹脂床(流出液鹽酸鎂粉試驗呈正反應(yīng)的部分留待下批處理)，直至流出液呈近無色的澄明溶液。放干樹脂床內(nèi)的常水，用樹脂量的2倍(w/w)80％乙醇洗脫，流速控制在每100kg樹脂每分鐘約5立升，收集洗脫液，60℃減壓回收溶劑，得棕黃色浸膏(比重1.2g/ml，50℃時測定，其得率為藥材量的29～31％)，60℃減壓真空干燥，粉碎，過60目篩，得棕黃色粉末狀物質(zhì)(鳶尾總黃酮提取物，含量＞55％，含水量＜4％，收率為15～18％。
(2)原生藥粗粉(20目)置多能提取罐內(nèi)，用70％乙醇加熱回流提取三次，每次2小時。溶劑用量為藥材量的4倍(v/w)，合并三次提取液，過濾后60℃減壓回收乙醇，得棕黃色浸膏。將此提取物攪拌溶于30倍量(w/w)沸水中，待溶液冷卻至50～60℃，趁熱通過已處理好的WLD型大孔吸附樹脂柱(300×60cm)，完后繼續(xù)以常水沖洗柱內(nèi)樹脂，棄去柱內(nèi)流出液，至流出液已呈澄明時，放干柱內(nèi)常水，用樹脂量2.5倍(w/w)量的90％乙醇洗脫，收集洗脫乙醇液，60℃減壓回收溶劑至殘留物無醇味，殘留物進行噴霧干燥，得總黃酮提取物黃色粉末(絮狀)，含量(以鳶尾苷計)大于55％，含水量＜4％，收率為16～18％。
(3)原生藥粗粉(20目)置多能提取罐內(nèi)，用70％乙醇加熱回流提取四次，首次提取3小時，乙醇用量為投料量的4倍(v/w)，其余三次每次提取1.5小時，溶劑用量為投料量的3倍(v/w)。合并四次提取液，用藥膜蒸發(fā)器進行濃縮，回收乙醇，得黃棕色膏狀物。將此膏狀物趁熱攪拌溶解于25倍量的沸水中，待其溶解完全后冷卻至50～60℃，趁熱通過已處理好的WLD型大孔吸附樹脂柱(300×60cm)，完后繼續(xù)以常水洗滌樹脂，棄去柱內(nèi)流出液。待柱內(nèi)流出液已呈澄明時，放干柱內(nèi)常水，用樹脂量3倍(w/w)量的75％乙醇洗脫，收集洗脫乙醇液，過濾。濾液進行藥膜濃縮回收乙醇。所得已無乙醇味的浸膏進行噴霧干燥，得鳶尾總黃酮提物(黃色粉末)，含量以鳶尾苷計大于55％，含水量小于4％，收率為15～17％。
實施例2 本發(fā)明藥物膠囊劑的制備本品為鳶尾總黃酮提取物直接填裝制成的硬膠囊劑，每粒含鳶尾總黃酮以鳶尾苷(C2H22O11)計，不得少于180mg(本發(fā)明藥物膠囊每粒填裝提取物平均重量約為0.35g)。
原料鳶尾總黃酮提取物350g，制備成1000粒本發(fā)明藥物膠囊(1)將干燥總黃酮提取物(含量＞55％)粉碎過60目篩，在相對濕度小于64％條件下，用手工或膠囊灌裝機填裝1號膠囊，控制內(nèi)容物每粒約0.35g，制備1000粒。
(2)將鳶尾總黃酮提取物于60℃干燥(蒸氣烘房)，待測其含水量＜4％時，粉碎過60目篩。準確稱取細粉35kg，隨機取樣適量，按質(zhì)量標準方法測定其總黃酮含量及鳶尾苷含量(總黃酮含量應(yīng)大于55％，鳶尾苷含量應(yīng)大于18％)，若總黃酮含量已超過65％，加入適量藥用淀粉稀釋，使其總黃酮含量在55～65％之間，鳶尾苷含量在18～25％之間。在膠囊劑灌裝車間內(nèi)，控制相對濕度小于64％，用膠囊灌裝機將藥粉填裝1號膠囊，每粒裝樣量為0.35g，制備10萬粒。爾后裝瓶(100粒/瓶)，貼箋，送檢，裝箱入庫。
實施例3 本發(fā)明藥物片劑的制備將干燥總黃酮提取物(含量＞55％)粉碎過60目篩，加入淀粉，制粒，整粒，壓片即得。
實施例4 本發(fā)明藥物的質(zhì)量控制[鑒別](1)取本品約25mg置于50ml容量瓶中，用70％乙醇溶解并定容，搖勻，作為A液(0.5ug/ul)。精密吸取A液1ml于50ml容量瓶中，用70％乙醇稀釋并定容至刻度搖勻，作為B液。B液按分光光度法(中國藥典2000版一部附錄VA)，以70％乙醇為空白，于波長200～400nm范圍內(nèi)掃描，并記錄光譜圖，在266±1nm波長處有最大吸收。
(2)取對照品鳶尾苷5mg，置于50ml容量瓶中，加入70％乙醇溶解并稀釋至刻度，此作為對照品溶液。照薄層層析法(中國藥典2000版一部附錄VIB)試驗，吸取鑒別(1)項下A溶液和對照品溶液各10μl，平行點于硅膠GF254薄層板上，以氯仿-甲醇-甲酸(10∶1∶0.1)為展開劑，展開，取出晾干，在熒光燈下(254nm)觀察，應(yīng)顯三個主斑點，在與對照品色譜相應(yīng)位置上，顯相同的斑點。
熾灼殘渣 取本品1g，依法檢查(中國藥典2000版一部附錄IXJ)，熾灼殘渣不得過2％。
重金屬 取本品適量，經(jīng)熾灼殘渣有機破壞后，依法檢查(中國藥典2000版一部附錄IXE第二法)，含重金屬不得過百萬分之十。
砷鹽 取本品2.0g，加水25ml，依法檢查(中國藥典2000版一部附錄IXF第二法)，含砷量不得過百萬分之二。
苯、二甲苯、甲苯、苯乙烯、正庚烷、正癸烷、二乙烯基苯、乙基苯乙烯照氣相色譜法(中國藥典2000版一部附錄VIE)測定。
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗 色譜柱采用HP-INNOWAX柱(即PEG 20M)，30m×0.5mm×1.0um。Tc＝40℃(5min)→5℃/min→80℃(3min)→20℃/min→200℃(3min)。檢測器采用FID，t＝250℃，H2＝35ml/min；尾吹N2＝32ml/min；Air＝300ml/min。載氣He2.7ml/min，線速度S＝20cm/s。(恒壓)進樣口的溫度250℃。頂空瓶溫度140℃，傳輸管溫度150℃，加熱平衡時間10min，頂空不分流進樣。
對照品溶液的制備 精密稱取正庚烷、苯、正癸烷、甲苯、二甲苯、苯乙烯、二乙烯基苯、乙基苯乙烯適量，用二甲亞砜溶解并定容于10ml容量瓶中(2.5mg/ml)。再精密吸取此溶液10μl于10ml容量瓶中，用二甲亞砜定容至刻度，搖勻(2.5μg/ml)。吸取此溶于1ml封于頂空瓶中，即成對照品溶液。
供試品溶液的制備 取本品適量，精密稱定。用1ml二甲亞砜封于頂空瓶中，供測定(0.5g/ml)。
測定法 分別吸取對照品溶液與供試品溶液各500μ1，注入氣相色譜儀中，記錄色譜圖，同時以二甲亞砜作空白，計算即得。
本品含甲苯、二甲苯、苯乙烯、正庚烷、正癸烷、二乙烯基苯、乙基苯乙烯不得過十萬分之二，苯不得過百萬分之二。取本品，在105℃干燥至恒重，減少重量不得超過6％(中國藥典2000版一部附錄IXG)。
總黃酮對照品溶液的制備 精密稱定在105℃干燥至恒重的鳶尾苷對照品15mg，置于50ml容量瓶中，加70％乙醇溶解并定容至刻度，搖勻，即得。每1ml含鳶尾苷0.3mg。
供試品溶液的制備 精密稱取105℃干燥至恒重的本品約25mg，置于50ml容量瓶中，加入70％乙醇溶解并定容至刻度，搖勻，即得。每1ml含本品0.5mg。
測定法 精密吸取對照品溶液與供試品溶液1ml，分別置于50ml容量瓶中，用70％乙醇稀釋并定容至刻度，搖勻。按分光光度法(中國藥典2000版一部附錄VB)，在266nm波長處，以70％乙醇為空白，分別測定對照品與供試品溶液的吸收度，計算，即得。
本品按干燥品計算含總黃酮以鳶尾苷(C22H22O11)計算，不得少于55％。
鳶尾苷照高效液相色譜法(中國藥典2000版一部附錄VID)測定。
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗 用十八烷基硅烷(C18)鍵合硅膠為填充劑，甲醇-0.5％醋酸(30∶70)為流動相；檢測波長為266nm；柱溫為室溫，理論塔板數(shù)按對照品鳶尾苷峰計算，應(yīng)不低于7000。
對照品溶液的制備 精密稱取干燥至恒重的鳶尾苷對照品5mg，置于50ml量瓶內(nèi)，加70％甲醇約40ml，用超聲波振蕩5～10min至溶解完全，續(xù)加70％甲醇至刻度，搖勻，即得(每ml中含鳶尾苷0.1mg)。
供試品溶液的制備 取已干燥至恒重的鳶尾總黃酮約20mg，精密稱定。置于50ml量瓶中，加入70％甲醇液照“對照品溶液制備”項下方法配制成溶液，搖勻即得。
測定法 分別精密吸取供試品溶液與對照品溶液各10μl，注入液相色譜儀測定，即得。
本品按干燥品計算含鳶尾苷(C22H22O11)，不得少于18％。
以下通過藥效學(xué)試驗證明本發(fā)明的藥效。
試驗例1 鳶尾苷元體外抗病毒實驗報告一、實驗材料(1)受試藥鳶尾苷元(鳶尾苷元)制成25mg/ml滅菌溶液，由四川省中藥研究所提供。
(2).陽性對照藥病毒唑(三氮唑核苷注射液)，國藥準字XF1990722，批號000402，100mg/ml，湖北宜藥集團有限責(zé)任公司生產(chǎn)。
注射用穿琥寧，川衛(wèi)藥準字(1981)第006085號，批號981201，成都制藥三廠生產(chǎn)40mg/ml。
(3).細胞株HeP-2由四川省衛(wèi)生防疫站提供，我室凍存、復(fù)蘇、傳代、細胞生長液均為10％小牛血清Eagles液。
Z-HL16C細胞，由汕頭生物工程應(yīng)用研究所細胞工程研究室提供，我室傳代，細胞生長液均為10％小牛血清Eagles液。
(4).病毒株腺病毒(AdV3、7、)呼吸道合胞病毒(RSV)，柯薩奇B組病毒(CoxBV)，單純皰疹病毒(HSV1)和流感病毒(甲1、甲3)分別由首都兒科研究所和中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院病毒研究所提供，我室傳代，實驗前測TCID50。
二、實驗方法(1)細胞毒性實驗取鳶尾苷元溶液(25mg/ml)用Hanks液作倍比稀釋，作4個濃度藥液細胞毒性實驗(即25mg/ml、12.5mg/ml、6.25mg/ml、3.125mg/ml)，然后以無毒性細胞藥物濃度開始作4個濃度藥液抗病毒實驗。同步取陽性對照藥病毒唑、注射用穿琥寧用Hanks液稀釋成4個濃度藥液(25mg/ml、12.5mg/ml、6.25mg/ml、3.125mg/ml)分別取以上3藥液各種不同濃度接種Hep-2、Z-HL16C細胞各2管，加足Eagles液維持液(同步設(shè)細胞對照和空白對照)，置37℃溫箱，逐日觀察細胞毒性反應(yīng)。
(2)抗病毒實驗采用直接滅活法，實驗前確定各類病毒致細胞半數(shù)病變量(TCID50/0.1ml)和各類藥物對細胞無毒性反應(yīng)界線，取100TCID50和AdV3、7、，RSV、CoxBV、HSV1和流感甲1、 甲3病毒分別與上述3種藥物各類不同濃度的藥液等量混合直接作用1小時后，分別取各類病毒和藥物混合液分別接種Hep-2和Z-HL16C細胞，待吸附45分鐘后，加足細胞維持液(2％小牛血清Eagles)，同步設(shè)細胞對照、病毒對照和Hanks液作空白對照，置37℃溫箱培養(yǎng)，(RSV病毒滅活實驗管24小時后移放33℃旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)器)，逐日觀察細胞病變。當病毒對照出現(xiàn)3+病變，細胞對照生長良好，形態(tài)正常，可終止試驗。各類病毒是否被藥物抑制，以細胞是否出現(xiàn)病變?yōu)橹笜?，當細胞出現(xiàn)2+病變(≥50％細胞病變)，可判斷該藥液對病毒無抑制作用。
(3)實驗結(jié)果細胞毒性實驗結(jié)果鳶尾苷元溶液、病毒唑注射液、注射用穿琥寧3種藥物25mg/ml、12.5mg/ml、6.25mg/ml、3.125mg/ml4種濃度藥液對Hep-2、Z-HL16C細胞均無任何毒性反應(yīng)?？瞻讓φ?、細胞對照均無毒性，細胞生長良好，形態(tài)正常。
抗病毒實驗結(jié)果鳶尾苷元溶液25mg/ml-12.5mg/ml藥液對AdV3、7、CoxBV及流感甲3病毒、及25mg/ml-6.25mg/ml藥液對RSV1病毒均能完全抑制病毒引起細胞內(nèi)病變作用。
病毒唑注射液25mg/ml-12.5mg/ml藥液對流感甲1、甲3、AdV3均有抑制細胞內(nèi)病變作用，25mg/ml-3.125mg/ml藥液對RSV，25mg/ml-12.5mg/ml藥液對CoxBV、AdV7及HSV1均有抑制細胞內(nèi)病變作用，6.25mg/ml藥液對AdV7及CoxBV均有部份抑制細胞內(nèi)病變作用。
穿琥寧注射液25mg/ml-12.5mg/ml藥液對AdV3、7均有抑制細胞內(nèi)病變作用，25mg/ml藥液對CoxBV及RSV均有抑制細胞內(nèi)病變作用，12.5mg/ml藥液對CoxBV及RSV有部份抑制細胞內(nèi)病變作用。空白對照均不能抑制AdV3等病毒細胞內(nèi)病變作用。空白對照均不能抑制AdV3等病毒引起細胞內(nèi)病變作用。
鳶尾苷元溶液體外抗病毒實驗與陽性對照藥病毒唑、穿琥寧在藥物濃度相同的情況下與空白對照同步進行，均采用直接滅活法，其結(jié)果提示鳶尾苷元溶液對AdV3、7型，流感甲3型，CoxBV和RSV均有不同程度的抑制作用，對RSV抑制的最低藥物濃度為6.25mg/ml。病毒唑注射液對AdV3型等7種病毒均有抑制作用，對多數(shù)病毒的抑制作用的最低藥物濃度可達0.3125mg/ml。注射用穿琥寧對AdV3、7、CoxBV和RSV有不同程度的抑制作用，對AdV3、7型的抑制作用的最低藥物濃度可達12.5mg/ml。
本結(jié)果提示病毒唑注射液對AdV等7種病毒的抑制作用均優(yōu)于鳶尾苷元和穿琥寧。鳶尾苷元溶液對流感甲3型、CoxBV和RSV的抑制作用均較優(yōu)于穿琥寧。
試驗例2 鳶尾苷體外抗病毒實驗1、實驗材料(1)藥物鳶尾苷(鳶尾苷)受試藥鳶尾苷(白色粉狀)由四川省中藥研究所提供。實驗前用Hanks液配成100mg/ml原液。(加助溶劑二甲基亞楓幫助溶解)除菌。PH為7左右，將原液從1∶10開始作7個不同濃度的等比稀釋，其藥物含量為10mg/ml、5mg/ml、2.5mg/ml、1.25mg/ml、0.62mg/ml、0.31mg/ml、0.15mg/ml，備用。
陽性對照藥病毒唑(三氮唑核苷注射液100mg/ml)，鄂衛(wèi)藥準字(1991)第000042號，批號980605，宜昌市三峽制藥廠生產(chǎn)，我院藥房提供，實驗前用Hanks液配成10mg/ml、5mg/ml、2.5mg/ml、1.25mg/ml、0.62mg/ml、0.31mg/ml、0.15mg/ml，備用。陽性對照藥穿琥寧注射液(40mg/支凍干品)，川衛(wèi)藥準字(1981)第000085號，批號981201，成都制藥三廠生產(chǎn)，我院藥房提供，實驗前用Hanks液配制成與鳶尾苷、7個濃度相同的藥液，備用。
空白對照 用Hanks液代替藥液與xy、病毒唑、穿琥寧抗病毒實驗同步進行。
(2)細胞株Hela、HeP-2、MDCK(狗腎傳代細胞)分別由成都生研所、四川省衛(wèi)生防疫站和北京首都兒科研究所提供，我室復(fù)蘇傳代，生長液均為10％小牛血清Eagles液。
(3)病毒株腺病毒(ADV)3、7、11型，呼吸道合胞病毒(RSV)，流感病毒甲1型甲3型(FluA1A3)、單純皰疹病毒(HSV)1型、2型，柯薩奇B組病毒(CoxBV)混合株，分別由北京首都兒科研究所、中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院病毒研究所和四川省衛(wèi)生防疫站提供，我室傳代，實驗前測TCID50。
2、實驗方法(1)細胞毒性實驗取鳶尾苷、病毒唑、穿琥寧藥液7種不同濃度藥液分別接種Hela、HeP-2、MDCK細胞，經(jīng)吸附后加足2％小牛血清Eagles液維持液，置37℃溫箱，逐日觀察細胞毒性反應(yīng)。同步設(shè)細胞對照。
(2)體外抗病毒實驗取鳶尾苷、病毒唑、穿琥寧藥液7種不同濃度的藥液和空白對照Hanks液分別與100TCID50和AdV3、7、11型，RSV、HSV1、HSV2，F(xiàn)luA1、A3及CoxBV等量混合，于室溫下直接作用1小時，(同步設(shè)各類病毒，細胞對照)后，取各類藥物，Hanks與病毒混合液，接種HeP-2細胞(抗FluA1A3接種MDCK細胞、抗RSV接種Hela細胞)，待吸附45分鐘后，加足2％小牛血清維持液，全部置37℃溫箱，抗RSV試驗次日移放35℃旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)器外，其他抗病毒細胞管均繼續(xù)于37℃環(huán)境中培養(yǎng)，逐日觀察細胞病變，當病毒對照出現(xiàn)3+病變(≥75％細胞病變)細胞對照生長良好，形態(tài)正常，可終止試驗。各類病毒是否被藥物抑制，以細胞是否出現(xiàn)病變?yōu)橹笜?，凡細胞出現(xiàn)2+病變(≥50％細胞病變，＜75％細胞病變＝可判斷該藥液對病毒無效)。
3、實驗結(jié)果(1)細胞毒性試驗受試藥鳶尾苷10mg/ml藥液對Hep-2、MDCK細胞可致部份細胞圓縮、皺縮、脫落外，其他6種濃度藥液對Hela細胞無毒性反應(yīng)。
對照藥病毒唑、穿琥寧7種不同濃度藥液對Hela、Hep-2、MDCK細胞均無任何毒性反應(yīng)。
(2)抗病毒實驗結(jié)果受試藥鳶尾苷5mg/ml-10mg/ml藥液，對照藥病毒唑0.31mg/ml-10mg/ml和穿琥寧2.5-10mg/ml藥液對AdV3型等9種病毒均有不同程度的抑制細胞內(nèi)病變作用，空白對照均不能抑制AdV3型等9種病毒細胞內(nèi)病變。
結(jié)論鳶尾苷10mg/ml藥液對AdV3型，HSV1型等9種病毒均有抑制作用，5mg/ml藥液對AdV7型、RSV和HSV2型等9種病毒均有抑制作用。其它濃度藥液對AdV3、7型均無抑制作用。
病毒唑2.5mg/ml-10mg/ml藥液對AdV3型等9種病毒均有抑制作用，1.25mg/ml藥液對AdV11型、RSV、AdV3型、CoxBV及FluvA16種病毒均有抑制作用。其它濃度藥液AdV3、7型均無抑制作用。0.62mg/ml和0.31mg/ml藥液對RSV有抑制作用，其他濃度藥液對Adu3型等無抑制作用。
穿琥寧10mg/ml藥液對AdV3型等9種病毒均有抑制作用，5mg/ml藥液對AdV3型、AdV11型、RSV、HSV2型、CoxBV有抑制作用。2.5mg/ml藥液對FluVA1、A3均有抑制作用。其它濃度藥液對AdV3型均無抑制作用。
以上結(jié)果提示，受試藥鳶尾苷、對照藥病毒唑、穿琥寧均有不同程度對AdV3型等9種病毒有抑制作用，病毒唑?qū)dV3型等9種病毒的抗病毒作用較明顯優(yōu)于鳶尾苷和穿琥寧。
試驗例3 鳶尾甲苷A藥物體外抗病毒實驗報告1.實驗材料(1).藥物受試藥鳶尾甲苷A(鳶尾甲苷A、白色粉狀)由四川省中藥研究所提供。實驗前用Hanks液配成100mg/ml原液。(加二甲基亞砜幫助溶解)消毒除菌。PH為7左右，將原液從1∶10-1∶160作倍比稀釋，1∶10藥液為10mg/ml。陽性對照藥、病毒唑(三氮唑核苷注射液100mg/ml)，鄂衛(wèi)藥準字(1991)第000042號，批號980605，宜昌市三峽制藥廠生產(chǎn)，我院藥房提供，實驗前用Hanks液配成10mg/ml原液，將原液從1∶10-1∶160作倍比稀釋，1∶10藥液為1mg/ml。陽性對照藥、穿琥寧注射液(40mg支凍干品)，川衛(wèi)藥準字(1981)第006085號，批號981201，成都制藥三廠生產(chǎn)，我院藥房提供，實驗前用Hanks液作1∶10-1∶160作倍比稀釋，1∶10藥液為4mg/ml?？瞻讓φ沼肏anks液代替藥液，同步與受試藥、陽性中西藥對照進行。
(2).細胞株Hela、HeP-2、MDCK(狗腎傳代細胞)分別由成都生研所、四川省衛(wèi)生防疫站和北京首都兒科研究所提供，我室復(fù)蘇、傳代、生長液均為10％小牛血清Eagles液。
(3).病毒株腺病毒(AdV)3、7、11型，呼吸道合胞病毒(HSV)，流感病毒(Flu.V)甲1型甲3型、單純皰疹病毒(HSV)1型、2型，柯薩奇B組病毒(CoxBV)混合株，分別由北京首都兒科研究所、北京中國預(yù)防醫(yī)科院病毒研究所和四川省衛(wèi)生防疫站提供，我室傳代，實驗前測TCID50。
2.實驗方法(1).細胞毒性實驗取1∶10-1∶160不同濃度的鳶尾甲苷A、病毒唑、穿琥寧藥液、分別接種Hela、HeP-2、MDCK細胞、加足2％小牛血清Eagles液維持液，置37℃溫箱、逐日觀察各類細胞毒性反應(yīng)。同步設(shè)各類細胞對照。
(2)抗病毒實驗取1∶10-1∶80四同濃度的鳶尾甲苷A、病毒唑、穿琥寧藥液、各類藥物不同濃度的藥液分別直接與AdV3、7、11型，RSV、HSV1、HSV2。Flu甲1型甲3型及CoxB組病毒等混合，于室溫下直接作用1小時，(同步設(shè)各類病毒，各類細胞對照和空白對照(以hanks液代替藥物)取各類藥物不同濃度藥液與各類不同病毒混合液，除Flu甲1型甲3型接種MDCK細胞、RSV接種Hela細胞外、其它病毒混合液均接種HeP-2細胞，加足2％小牛血清維持液，置37℃溫箱培養(yǎng)，除抗RSV試驗37℃培養(yǎng)24小時后，移放35℃旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)器(12轉(zhuǎn)/小時)外其他抗病毒試驗均繼續(xù)置37℃培養(yǎng)，逐日觀察細胞病變，當病毒對照出現(xiàn)3+(≥75％細胞病變)細胞對照生長良好，形態(tài)正常，可終止試驗。各類病毒是否被抑制，以細胞是否出現(xiàn)病變?yōu)橹笜?，當各類細胞出現(xiàn)2+病變(≥75％細胞病變)可判斷該藥液對病毒無效。
3.實驗結(jié)果(1).細胞毒性試驗結(jié)果鳶尾甲苷A藥物1∶10藥液對Hep-2、MDCK細胞可致部份細胞圓縮、皺縮脫落外，1∶10-1∶160藥液對Hela細胞均無任何毒性反應(yīng)。
對照藥病毒唑、穿琥寧1∶10-1∶160藥液對Hela、Hep-2、MDCK細胞均無任何毒性反應(yīng)。
(2).抗病毒實驗結(jié)果取鳶尾甲苷A1∶10藥液對AdV3型、11型、HSV1型、CoxBV及流感甲1型、甲3型不管對何種細胞均能抑制細胞內(nèi)病變，1∶20藥液對AdV7型，RSV和HSV均能抑制細胞病變；病毒唑1∶10藥液對AdV3型、11型、CoxBV和流感甲1型、甲3型均有抑制細胞內(nèi)病變作用。對HSV1型有部份抑制細胞內(nèi)病變作用，1∶20藥液對HSv2型有部份抑制作用，1∶40藥液對RSV有抑制細胞內(nèi)病變作用。穿琥寧1∶10藥液對AdV11型、HSV2型、1∶20藥液對AdV3型，RSV1和流感甲1型、甲3型均有抑制細胞內(nèi)病變作用。對AdV7型、HSV1型及CoxBV均無抑制作用。
4.結(jié)論鳶尾甲苷A1∶10藥液(10mg/ml)對AdV3·11型，HSV1型CoxBV，流感甲1型、甲3型均有抑制細胞內(nèi)病變作用，1∶20藥液(5mg/ml)對AdV7型，RSV、HSV2均有抑制作用。
西藥對照病毒唑1∶10藥液(1mg/ml)對AdV3·11型、HSV1型CoxBV，流感甲1型、甲3型均有抑制作用，對HSV1型有部份抑制作用。1∶20藥液(0.5mg/ml)對HSV2有部份抑制作用。1∶40藥液(0.25mg/ml)對RSV有抑制作用。1∶10-1∶80藥液AdV7型無抑制作用。
中藥對照穿琥寧1∶10藥液(4mg/ml)對AdV3·11型、RSV、HSV2型及流感甲1型、甲3型有抑制作用。1∶20藥液(2mg/ml)對AdV3型、RSV，流感甲1型、甲3型均有抑制作用，1∶10-1∶80藥液AdV7型，HSV1型、CoxBV均無抑制作用。
空白對照均不能抑制AdV3、7、11型、RSV、HSV1、HSV2型，流感甲1型、甲3型病毒。
鳶尾甲苷A藥物在體外組織細胞內(nèi)對AdV3、7、11型、RSV、HSV1、2型CoxBV，流感甲1型、甲3型均有不同程度的抑制作用。其中對AdV7、HSV2型抑制作用均優(yōu)于病毒唑和穿琥寧。
病毒唑?qū)SV的抑制作用均優(yōu)于鳶尾甲苷A和穿琥寧藥物。
穿琥寧對流感甲1型、甲3型的抑制作用均優(yōu)于鳶尾甲苷A藥物和病毒唑。
以下是藥效學(xué)試驗的受試藥物、工具藥陽性藥1、受試藥物本發(fā)明藥物膠囊為膠囊劑，由實施例3制備，囊內(nèi)裝定量藥粉0.35g。臨床用藥擬定日服3次，1次3粒。急性咽喉炎療程1周，慢性咽喉炎療程2個月。成人平均以60公斤體重計，則日·公斤體重劑量為0.05g/kg。試驗用藥為中試制好備裝膠囊的藥粉，為黃色粉末。由四川省中藥研究所中藥化學(xué)研究室徐學(xué)民研究員等提供。試驗前用0.5％西黃耆膠溶液配成所需濃度，以藥粉重量g/ml表示，以藥粉重量g/kgb.w.(體重)表示給藥劑量。各批藥粉的有效部分含量略有不同，各批平均在60％左右，不能超過±3％(即60±3％)，以此作為質(zhì)量控制標準，以保持藥效的穩(wěn)定性。本批試驗樣品有效部分含量為59.55％。
2、工具藥、陽性對照藥、重要試劑、培養(yǎng)基等陽性對照藥病毒唑注射液(100mg/ml)，鄂衛(wèi)藥準字(1983)第000229號，湖北天門制藥廠生產(chǎn)，批號990610。試驗時作1∶10～1∶80等比稀釋。
穿琥寧凍干粉針劑，40mg/支，成都通德藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，批號991101。試驗前稀釋成100mg/ml，再作1∶10～1∶80等比稀釋。
阿斯匹林中國醫(yī)藥公司重慶公司分裝，批號990507西瓜霜廣西桂林三金藥業(yè)集團公司生產(chǎn)，批號9904248氫化可的松西南制藥三廠出品，批號991205喉疾靈膠囊廣州白云山制藥總廠陽春藥廠生產(chǎn)，批號980201。廣州陳李濟藥廠生產(chǎn)，批號9907314鹽酸嗎啡沈陽第一制藥廠生產(chǎn)，批號990802金嗓子喉寶廣西金嗓子制藥廠出品，批號991001磷酸可待因中國醫(yī)藥公司青海制藥廠生產(chǎn)。
急支糖漿太極集團涪陵制藥廠生產(chǎn)，批號001016095其它試劑藥械0.6％HAC生理鹽水液；0.5％伊文思藍生理鹽水液；0.9％生理鹽水，PH7.0～7.2；二甲苯(AR)，高壓滅菌棉球；水解酪蛋白液體培養(yǎng)基(MH培養(yǎng)基)，含3％血清MH培養(yǎng)基3.實驗動物、細胞、病毒小鼠昆明種遠交系(封閉群30代以上)，1級合格動物，合格證號為川實動管質(zhì)(99)第30號。體重一般選18～22g之間。雌雄各半。動物數(shù)依實驗內(nèi)容而定，由四川省抗菌素工業(yè)研究所動物中心提供。
大鼠SD種遠交系(封閉群30代以上)，1級合格動物，合格證號川實動管質(zhì)(99)第32號。體重一般選180～220g之間。雌雄各半。動物數(shù)依實驗內(nèi)容而定(參閱實驗方法部分)，由四川省抗菌素工業(yè)研究所動物中心提供。
細胞株Hep-2細胞，由四川省人民醫(yī)院檢驗科病毒室-85℃低溫凍存，實驗前復(fù)蘇傳代，生長液為10％小牛血清Eagles液，待細胞在試管形成單層后備用。
病毒柯薩奇CoxB3型、腺病毒AdV3型，由北京首都兒科研究所提供，在四川省人民醫(yī)院檢驗科病毒室復(fù)蘇傳代，試驗前分別傳代測定ICID50/0.1ml。
試驗例4 本發(fā)明藥物的抗病毒試驗研究1.細胞毒性試驗取本發(fā)明藥物、病毒唑、穿琥寧三種藥物1∶10～1∶80藥液(相當于10，5，2.5，1.25mg/ml)，分別接種于Hep-2細胞管，加2％小牛血清Eagles液維持，置37℃溫箱，同步設(shè)細胞對照，逐日觀察細胞反應(yīng)。結(jié)果除本發(fā)明藥物藥液1∶10對Hep-2細胞可致少許皺縮外，1∶20～1∶80藥液對Hep-2細胞均無任何毒性反應(yīng)，病毒唑、穿琥寧對Hep-2細胞均無任何毒性反應(yīng)。結(jié)果見表1。
表1 本發(fā)明藥物及對照藥對細胞毒性試驗結(jié)果

注-細胞無任何毒性反應(yīng)±表示出現(xiàn)少許皺縮結(jié)果表明本發(fā)明藥物5，2.5，1.25mg/ml對Hep-2細胞無毒性，10mg/ml對Hep-2細胞3有輕微毒性。穿琥寧、病毒唑10，5，2.5，1.25mg/ml對Hep-2細胞均無毒性。
2.體外直接抗病毒試驗取本發(fā)明藥物、病毒唑、穿琥寧三種藥物四個濃度藥液(1∶10、1∶20、1∶40、1∶80)，分別與100 TCID50/0.1ml的CoxB3、AdV3病毒等量混合，置室溫直接作用1小時。(同時分設(shè)病毒對照、細胞對照)取每種藥物不同濃度液與CoxB3、AdV3等量混合液0.2ml，分別接種2支Hep-2細胞管(同步設(shè)病毒對照接種0.1ml)，待混合液、病毒吸附細胞45分鐘后，于各管加足維持液，置37℃溫箱，逐日觀察細胞病變情況，待病毒對照出現(xiàn)3+病變時中止試驗。凡細胞出現(xiàn)2+或2+以上病變＞50％者提示受試藥不能抑制病毒；細胞不出現(xiàn)病變，提示藥物對病毒有抑制作用；細胞出現(xiàn)1+以下病變，提示藥物有部分抑制病毒作用。試驗結(jié)果表明在同樣條件下，空白對照細胞生長良好無病變，病毒對照細胞出現(xiàn)嚴重病變(3+)，本發(fā)明藥物1∶10、1∶20、1∶40(即10，5，2.5mg/ml)藥液能完全抑制CoxB3致細胞病變；且本發(fā)明藥物1∶10(即10mg/ml)完全抑制AdV3致細胞病變。西藥對照藥病毒唑只是在1∶10藥液(即10mg/ml)能抑制CoxB3引起的病變，而對AdV3致細胞病變，1∶20、1∶40、1∶80(即5，2.5，1.25mg/ml)不能抑制細胞病變。中藥陽性藥穿琥寧1∶10、1∶20、1∶40(即10，5，2.5mg/ml)藥液能抑制CoxB3致細胞病變，而各個試驗濃度均不能抑制AdV3致細胞病變。以上結(jié)果表明本發(fā)明藥物藥物在體外試驗中有抗病毒作用，對柯薩奇病毒(CoxB3)優(yōu)于病毒唑的抗病毒作用，與穿琥寧的作用一致；對腺病毒(AdV3)的作用優(yōu)于穿琥寧的抗病毒作用，與病毒唑的作用一致。以上結(jié)果見表2。
表2 本發(fā)明藥物的抗病毒作用

注-表示細胞形態(tài)正常，無病變(-)表示藥物完全抑制細胞病變(++)～(+++)表示細胞病變程度3.細胞毒性試驗實驗前用Hank液，將本發(fā)明藥物(SG-2)、西藥對照藥病毒唑、中藥對照藥穿琥寧三藥以1∶10～1∶160作等比稀釋，最大濃度均為10mg/ml，依次是5，2.5，1.25，0.625mg/ml等不同濃度。分別取以上三藥的不同濃度藥液，接種子HeLa細胞，MDCK細胞，同時分別設(shè)不加藥物的細胞對照，置37℃溫箱，逐日觀察細胞毒反應(yīng)。結(jié)果表明本發(fā)明藥物1∶10～1∶60不同濃度的本發(fā)明藥物(SG-2)、病毒唑、穿琥寧和空白對照(Hanks液)對HeLa，MDCK細胞均無任何毒性反應(yīng)。見表3。
表3 本發(fā)明藥物及對照藥對細胞毒性試驗結(jié)果

注-表示2實驗試管(平行復(fù)管)均無任何毒性4.抗病毒試驗取100TCID50/0.1ml的呼吸道合胞病毒(RSV)，流感病毒甲1型、甲3型分別與本發(fā)明藥物(SG-2)、病毒唑、穿琥寧1∶10～1∶80藥液等量混合，室溫作用1小時后，分別取上述各類病毒與藥物混合直接接種HeLa和MDCK細胞，待細胞吸附1小時后，分別加入10％小牛血清生長液，同步設(shè)病毒、細胞對照和空白對照，置37℃溫箱，逐日觀察細胞病變情況。
實驗結(jié)果表明本發(fā)明藥物1∶10，1∶20藥液，即10mg/ml，5mg/ml對呼吸道合胞病毒(RSV)，流感病毒甲1型，以及1∶10，即10mg/ml對于流感病毒甲3型均能抑制細胞病毒，表明此濃度有抗病毒作用，對細胞有保護其免受病毒侵害的作用。病毒唑1∶40藥液，即1.25mg/ml對RSV病毒，1∶10mg/ml對流感病毒甲1、甲3型有抑制細胞病變作用。穿琥寧1∶20藥液即5mg/ml對RSV、流感甲1、甲3型病毒均有抑制其病毒，保護細胞免受病毒損傷的作用。結(jié)果見表4。
表4 本發(fā)明藥物的抗病毒作用

注“-”表示2管細胞無任何病變“++-+++”表示細胞病變程度上述抗病毒實驗證明，本發(fā)明藥物對導(dǎo)致急性咽喉炎及急性上呼吸道感染的主要病毒如流感病毒、腺病毒、柯薩其病毒、呼吸道合胞病毒有顯著地抑制作用，其作用與西藥病病毒唑相當，強于市售藥穿琥寧(穿心蓮乙素琥珀酸半酯單鉀鹽，為中藥治療急性上呼吸道感染首選藥)。
試驗例5 本發(fā)明藥物消炎作用的試驗研究1、本發(fā)明藥物對醋酸所致小鼠腹腔毛細血管通透性增高(炎癥)的影響試驗取體重20～25g小鼠60只，按體重隨機分為6組，分別灌服本發(fā)明藥物1.0，0.5，0.25g/kg，西藥對照藥組阿斯匹林0.1g/kg，中藥對照藥組西瓜霜片1.2g/kg，空白對照組灌服等體積的1％西黃蓍膠溶液。以上各組均在給藥后1小時，各鼠尾靜脈注射伊文思藍生理鹽水0.1ml/10g·bw，隨即腹腔注射0.6％冰醋酸(HAC)0.2ml/只，20分鐘后將小鼠拉脫頸椎處死，剪開腹部皮膚肌肉，用6ml生理鹽水分數(shù)次洗滌腹腔，吸管吸出洗滌液，合并加入生理鹽水至10ml，3000rpm離心15min，取上清液于UV-730生化分析儀590nm處比色測定，以O(shè)D值代表通透性，將結(jié)果進行統(tǒng)計比較。結(jié)果如表5。
表5 本發(fā)明藥物藥粉對小鼠腹腔通透性的影響(X±SD)

注**P＜0.01，***P＜0.001(與對照組相比較)實驗結(jié)果顯示本發(fā)明藥物1.0，0.5，0.25g/kg對腹腔注射HAC所致小鼠腹腔毛細血管通透性增高有非常顯著的抑制作用，與對照組相比較有極顯著統(tǒng)計學(xué)差異(P＜0.01)，表明本發(fā)明藥物藥粉有非常顯著的抑制此種炎癥的作用。其作用比同劑量西瓜霜強。
2、本發(fā)明藥物對二甲苯致小鼠耳廓腫脹的影響取體重18～22g小鼠60只，雌雄各半，按體重隨機分為6組，3個給藥組分別灌胃本發(fā)明藥物1.0，0.5，0.25g/kg，西藥陽性對照藥組sc氫化可的松25mg/kg，中藥對照藥組ig喉疾靈0.66g/kg，空白對照組ig等體積1％西黃蓍膠溶液。各組分別在ig給藥30分鐘后，每只鼠右耳涂布二甲苯0.05ml致炎造型，隔4小時后，將小鼠拉脫頸椎處死，沿耳廓基線剪下兩耳，用直徑8mm打孔器分別在同一部位打下耳圓片，用精密扭力天平稱重，以每鼠右耳片減去左耳片重量為腫脹度，將對照組和給藥組的腫脹程度進行比較和統(tǒng)計學(xué)處理。結(jié)果如表6。
表6 本發(fā)明藥物藥粉對二甲苯致小鼠耳廓腫脹的影響(X±SD)

注*P＜0.05(與對照組相比較)實驗結(jié)果顯示本發(fā)明藥物0.5，0.25g/kg對二甲苯致小鼠耳廓腫脹有顯著的抑制作用，與對照組比較有顯著差異(P＜0.05)，表明有顯著的抗炎消腫作用。其作用強度超過同劑量喉疾靈。
3、本發(fā)明藥物對角叉菜膠致大鼠腳腫脹的影響試驗取SD大鼠60只，按體重隨機分為6組，每鼠左后足掌正面上端用圓珠筆作一清晰橫線，用排水法測大鼠足造型前體積并記錄，然后各組分別ig本發(fā)明藥物0.125，0.25，0.5g/kg和喉疾靈0.33g/kg及sc氫化可的松25mg/kg，對照組ig等體積蒸餾水。1小時后用0.25ml注射器吸取配好的1％角叉菜膠液0.1ml，用4號針頭注入大鼠左后腳跖皮下，然后分別于造型后1、2、4、6、8小時測定各大鼠左后足體積1次，計算鼠足腫脹百分率。

結(jié)果如表7。
表7 本發(fā)明藥物藥粉對大鼠腳腫脹的影響(X±SD，n＝10)

注*P＜0.05**P＜0.01***P＜0.001與對照組比較從表7中可以看出本發(fā)明藥物對大鼠角叉菜膠致大鼠腳腫脹有抑制作用，小、中、大劑量0.125、0.25、0.5g/kg組在測定的5個時間均較對照組腫脹度降低，中、小劑量組在4、6、8小時有非常顯著降低(P＜0.01)。消腫作用雖低于氫化可的松，卻明顯高于中藥對照藥喉疾靈組，表明本發(fā)明藥物有較好的消腫脹作用。
4、本發(fā)明藥物對羧甲基纖維素囊中白細胞游出的影響試驗取SD大鼠60只，分為6組，各組分別ig本發(fā)明藥物0.125、0.25、0.5g/kg，喉疾靈0.33g/kg及sc氫化可的松25mg/kg，對照組ig等體積蒸餾水。每天一次，連續(xù)3天，與此同時，第2天背頸部用5％硫化鈉脫毛，第3天于無菌狀態(tài)下向背頸部皮下注入8ml空氣，形成圓形氣囊，次日用消毒針頭及注射器向氣囊內(nèi)注入羧甲基纖維素(CMC)液5ml/只，于注射后3小時及7.5小時吸取囊中CMC液各0.1ml，滴入3ml亮甲酚藍染液中，混勻染色2分鐘后滴于WBC計數(shù)板上，于顯微鏡下計數(shù)WBC，再換算成每囊內(nèi)WBC總數(shù)，計算四角4個大方格內(nèi)WBC數(shù)，根據(jù)公式(4個方格內(nèi)的WBC總數(shù)÷4×10×20×106＝WBC數(shù)/L)。結(jié)果如表8。
表8 本發(fā)明藥物對羧甲基纖維素囊中白細胞游出的影響(X±SD)

注*P＜0.05，***P＜0.001與對照組比較從表8中可以看出本發(fā)明藥物藥粉對大鼠羧甲基纖維素致炎誘發(fā)機體白細胞游出有一定抑制作用，本發(fā)明藥物3個劑量組在測定的2個時間均較對照組WBC數(shù)減少，大、中劑量組在7.5小時能顯著抑制白細胞向炎灶內(nèi)聚集(P＜0.05)，減少程度雖不及氫化可的松，卻明顯高于中藥對照藥喉疾靈組，表明本發(fā)明藥物藥粉有抑制中期炎癥反應(yīng)的作用。
5、本發(fā)明藥物對小鼠慢性炎癥棉球肉芽腫的影響試驗取體重18～22g小鼠72只，雌雄各半。在每鼠胸部用碘酒消毒，75％酒精棉球脫碘后，在胸部切一小口，用眼科鑷將5mg高壓滅菌棉球從切口處植入皮下腋窩部，隨即縫合皮膚。從手術(shù)當日開始給藥，5個給藥組分別ig本發(fā)明藥物1.0、0.5、0.25g/kg，中藥對照組ig喉疾靈0.66g/kg，西藥對照組sc氫化可的松25mg/kg，空白對照ig等體積蒸餾水。以上各組均連續(xù)給藥6天，第7天試驗結(jié)束前稱體重，然后脫頸椎處死，將植入棉球連同周圍結(jié)締組織一并取出，剔除脂肪組織，放入烘箱中60℃烘干12小時，在精密扭力天平上稱重。將稱得重量減去棉球原重量即得肉芽腫重量，以mg/10g·bw計算，并進行組間比較和統(tǒng)計學(xué)處理。結(jié)果如表9。
表9 本發(fā)明藥物對小鼠慢性炎癥棉球肉芽腫的影響(X±SD)

注*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001與對照組比較實驗過程中有鼠死亡，表中動物數(shù)為實驗結(jié)束時動物數(shù)實驗結(jié)果顯示本發(fā)明藥物1.0，0.5，0.25g/kg對小鼠棉球肉芽腫與對照組相比，有顯著差異(P＜0.01或P＜0.05)，表明本發(fā)明藥物3個劑量有明顯抑制慢性炎癥作用。中藥對照藥喉疾靈未見有明顯作用。本發(fā)明藥物藥粉抗炎作用強于同劑量喉疾靈。
6、本發(fā)明藥物藥粉對大鼠慢性炎癥棉球肉芽腫的影響試驗取體重140～160g SD大鼠一批，均為雄性，隨機分為6組。在每鼠胸部用碘酒消毒，75％酒精棉球脫碘后，在胸部切一小口，用眼科鑷將20mg高壓滅菌棉球從切口處植入皮下腋窩部，隨即縫合皮膚。從手術(shù)當日開始給藥，5個給藥組，分別ig本發(fā)明藥物0.5，0.25，0.125g/kg；中藥對照組ig喉疾靈0.33g/kg，西藥對照組sc氫化可的松12.5mg/kg，空白對照組ig等體積蒸餾水。以上各組均連續(xù)給藥6天，第7天實驗結(jié)束前稱體重一次，然后脫頸椎處死，將植入棉球連同周圍結(jié)締組織一并取出，剔除脂肪組織，放入烘箱中60℃烘干12小時，再在精密扭力天平上稱出總重量。將稱得重量減去棉球原重量即得肉芽腫重量，以mg/100g·BW計算，并進行組間比較和統(tǒng)計學(xué)處理。
結(jié)果如表10。
表10 本發(fā)明藥物對大鼠慢性炎癥棉球肉芽腫的影響(X±SD)

*P＜0.05與對照組比較實驗結(jié)果顯示本發(fā)明藥物藥粉0.5g/kg對大鼠棉球肉芽腫與對照組相比有顯著性差異(P＜0.05)，表明本發(fā)明藥物藥粉0.5g/kg有明顯抑制慢性炎癥作用，而0.25g/kg與對照組比較有一定縮小，但無統(tǒng)計學(xué)差異，表明其余劑量組抑制慢性炎癥作用不明顯，中藥對照藥喉疾靈組也未見有明顯作用。本發(fā)明藥物藥粉作用強度超過喉疾靈。
試驗例6 本發(fā)明藥物鎮(zhèn)痛作用試驗研究1、本發(fā)明藥物對醋酸致小鼠疼痛作用的影響試驗(扭體法)取體重18～22g小鼠60只，雌雄各半，隨機分為6組，3個給藥組分別ig本發(fā)明藥物1.0，0.5，0.25g/kg；中藥對照藥金嗓子喉寶3.0g/kg，給藥60分鐘后每鼠ip0.5％HAC 0.2ml/只，觀察15分鐘內(nèi)扭體次數(shù)。西藥對照藥sc鹽酸嗎啡10mg/kg，注射20分鐘后ip HAC0.2ml/只，同法觀察15分鐘內(nèi)扭體次數(shù)，將結(jié)果進行比較統(tǒng)計。結(jié)果如表12。
表12 本發(fā)明藥物藥粉對小鼠的鎮(zhèn)痛作用(扭體法)(X±SD)

注*P＜0.05**P＜0.01***P＜0.001(與對照組相比較)實驗結(jié)果顯示本發(fā)明藥物藥粉1.0g/kg，0.5g/kg非常顯著地抑制醋酸致小鼠疼痛的扭體次數(shù)，與對照組比較有非常顯著統(tǒng)計學(xué)差異(P＜0.01)，說明本發(fā)明藥物藥粉有非常顯著的鎮(zhèn)痛作用；金嗓子喉寶3.0g/kg也顯著抑制小鼠扭體次數(shù)(P＜0.05)；而鹽酸嗎啡皮下注射則極其顯著抑制小鼠扭體次數(shù)(P＜0.001)，表明3種藥物均有鎮(zhèn)痛作用(化學(xué)法致痛，扭體法)，本發(fā)明藥物藥粉鎮(zhèn)痛作用次于嗎啡，但強過金嗓子喉寶。
2、本發(fā)明藥物對熱板致小鼠疼痛作用的影響試驗(熱板法)將超級恒溫水浴器調(diào)節(jié)至55±0.5℃，使熱板預(yù)熱10分鐘。
首先篩選熱敏合格小鼠取18～22g雌性小鼠一批，每次放1只在熱板上，小鼠自放在熱板上至舔后足所需時間(秒)作為該鼠的痛閾值。凡閾值小于5秒或大于30秒或跳躍者棄之不用。將合格小鼠60只隨機分為6組，重復(fù)測其正常痛閾值，取兩次痛閾值平均值作為該鼠給藥前痛閾值。然后給藥，3個受試藥組分別ig本發(fā)明藥物0.25，0.5，1.0g/kg；中藥對照藥組ig喉疾靈0.66g/kg及西藥對照藥組sc鹽酸嗎啡10mg/kg；空白對照組ig等體積蒸餾水。分別于給藥后15分、30分、60分、90分鐘測定各小鼠的痛閾值。實驗結(jié)束，將各組各時間平均痛閾值進行比較，作統(tǒng)計處理。結(jié)果如表13。
表13 本發(fā)明藥物藥粉對小鼠的鎮(zhèn)痛作用(熱板法)

注*P＜0.05**P＜0.01(與對照組相比較)實驗結(jié)果表明給藥后各組的痛閾值均有提高，以鹽酸嗎啡組最為突出，各個測定時間均較給藥前有非常顯著提高(P＜0.01)；本發(fā)明藥物藥粉，大部分測定時間痛閾值較給藥前均有較明顯提高，且大、中劑量在給藥后90分鐘測定較對照有顯著提高(P＜0.05)，表明本發(fā)明藥物藥粉對熱刺激有顯著的鎮(zhèn)痛作用。
試驗例7 本發(fā)明藥物解熱作用試驗取大鼠80只，每日用水銀體溫計測肛溫2次(上、下午各一次)，連續(xù)2天，試驗當日再測體溫2次，選取體溫波動不超過0.3℃的大鼠60只，隨機分為6組，每組10只，各組分別ig本發(fā)明藥物0.125，0.25，0.5g/kg和喉疾靈0.33g/kg及阿斯匹林25mg/kg，對照組ig等體積蒸餾水。給藥同時于大鼠雙后足兩足跖間皮下注射1％角叉菜膠液各0.1ml/足，然后分別于2、4、6、8、10小時各測肛溫一次，求出各測定時間體溫變化的平均值，進行組間比較，結(jié)果進行統(tǒng)計。結(jié)果如表14。
表14 本發(fā)明藥物藥粉對大鼠角叉菜膠致熱的解熱作用

注*P＜0.05 (與對照組相比較)從表14中可以看出本發(fā)明藥物藥粉對大鼠角叉菜膠致熱有一定解熱作用，大、中、小劑量0.5、0.25、0.125g/kg組3個劑量組在絕大部分測定時間的體溫平均值均低于對照組，大、小劑量組6、8、10小時體溫較對照組降低更明顯，明顯強于中藥對照藥喉疾靈組，且大劑量10小時差異顯著(P＜0.05)，表明本發(fā)明藥物藥粉有一定的解熱作用。
試驗例8 本發(fā)明藥物藥粉的止咳作用試驗購取昆明種小鼠60只，♀、♂各半，在四川省中藥研究所清潔級動物室實驗條件下，適應(yīng)環(huán)境24小時，然后分6組，即正常對照組同體積(與給藥組同體積)蒸餾水，本發(fā)明藥物1.0，0.5，0.25g/kg 3個劑量組，中藥對照藥急支糖漿20ml/kg組，西藥對照藥ig磷酸可待因30mg/kg，各組均連續(xù)給藥3天，在末次給藥40分鐘，分別將小鼠置于倒置的500ml燒杯內(nèi)，向燒杯內(nèi)放置的小杯中注入0.15ml/只濃氨水，經(jīng)氨氣熏15秒鐘，取出小鼠，計數(shù)小鼠2分鐘時間內(nèi)的咳嗽次數(shù)，并將結(jié)果進行統(tǒng)計處理，組間比較作差異顯著性測定。結(jié)果如表15。
表15 本發(fā)明藥物藥粉對濃氨水引咳小鼠的止咳作用(X±SD)

結(jié)果表明可待因組咳嗽次數(shù)較對照組非常顯著降低P(＜0.01)，急支糖漿組也比較對照組顯著降低(P＜0.05)，表明西藥對照藥，中藥對照藥都有顯著止咳作用；本發(fā)明藥物3個劑量組的咳嗽次數(shù)都較對照組降低，大劑量組有顯著差異(P＜0.05)，表明本發(fā)明藥物藥粉大劑量有顯著止咳作用。
通過多種藥效試驗證明1.本發(fā)明藥物藥粉在體外試驗有顯著的抗病毒作用，本發(fā)明藥物藥粉10，5，2.5mg/ml能完全抑制柯薩奇病毒(CoxB)3致細胞病變，與同劑量穿琥寧作用一致，而病毒唑只有10mg/ml有此作用，5.0，2.5mg/ml未能抑制(CoxB)3致細胞病變；本發(fā)明藥物藥粉10mg/ml能抑制腺病毒(AdV)3型致細胞病變，與同劑量的病毒唑作用強度一致。而穿琥寧此濃度未表現(xiàn)抑制腺病毒的作用。
本發(fā)明藥物藥粉10，5mg/ml能完全抑制呼吸道合胞病毒(RSV)致細胞病變，此作用弱于病毒唑(病毒唑0.5mg/ml即可抑制RSV)，與穿琥寧作用一致，能抑制流感病毒甲1型致細胞病變，此作用與穿琥寧的作用一致卻強過病毒唑的作用(病毒唑僅在10mg/ml時才有此作用)本發(fā)明藥物藥粉10mg/ml能抑制流感病毒甲3型致細胞病變，此作用強度不及穿琥寧(穿琥寧5mg/ml即有此作用)卻與病毒唑的作用一致，都是在濃度為10mg/ml時有抑制能抑制流感病毒甲3型致細胞病變作用。
2.本發(fā)明藥物1.0，0.5，0.25g/kg對腹腔注射醋酸致小鼠腹腔毛細血管通透性增高有非常顯著的抑制作用，表明有非常顯著的抗炎性滲出作用，其作用強度比同劑量西瓜霜強。
3.本發(fā)明藥物0.5，0.25g/kg對二甲苯致小鼠耳腫脹有顯著的抑制作用，表明有顯著的抗炎消腫作用，作用強度遠超過同劑量喉疾靈。
4.本發(fā)明藥物藥粉0.5，0.25，0.125g/kg對角叉菜膠致大鼠腳腫脹有非常顯著的抑制作用，表明本發(fā)明藥物有很好的抗炎消腫作用，作用強度低于氫化可的松，顯著高于喉疾靈。
5.本發(fā)明藥物藥粉0.5，0.25，0.125g/kg對羧甲基纖維素誘發(fā)機體白細胞游出有一定抑制作用，大、中劑量組在7.5小時能顯著抑制白細胞游走(P＜0.05)，表明本發(fā)明藥物有抑制炎癥中期反應(yīng)的作用，作用強度超過喉疾靈，不及氫化可的松。
6.本發(fā)明藥物藥粉1.0，0.5，0.25g/kg大、中、小3個劑量組對小鼠棉球肉芽腫均有顯著的抑制作用，表明本發(fā)明藥物有抑制慢性炎癥作用，作用強度超過喉疾靈。
7.本發(fā)明藥物藥粉0.5g/kg對大鼠棉球肉芽腫有顯著抑制作用，表明本發(fā)明藥物有抑制慢性炎癥作用，作用強度超過喉疾靈。
8.本發(fā)明藥物藥粉1.0，0.5g/kg非常顯著地抑制醋酸致小鼠疼痛的扭體次數(shù)，表明本發(fā)明藥物對化學(xué)劑致痛有非常顯著的鎮(zhèn)痛作用，其強度低于嗎啡，超過金嗓子喉寶。
9.本發(fā)明藥物藥粉1.0，0.5，0.25g/kg對小鼠熱刺激有顯著的鎮(zhèn)痛作用，強度低于嗎啡與喉疾靈作用相當。
10.本發(fā)明藥物藥粉0.5，0.25，0.125g/kg對角叉菜膠致熱大鼠有一定解熱作用，強度超過喉疾靈。
11.本發(fā)明藥物藥粉1.0g/kg對濃氨水引咳的小鼠有顯著的止咳作用。
結(jié)論本發(fā)明藥物有顯著的抗病毒作用，能顯著抑制柯薩奇病毒(CoxB3)和腺病毒(AdV3)的體外增殖，較西藥抗病毒藥病毒唑和中藥抗病毒藥穿琥寧的作用全面；本發(fā)明藥物有顯著的消炎作用，能顯著地抑制動物的急性炎性滲出、腫脹(小鼠耳腫脹、大鼠足腫脹)，能顯著地抑制中期炎癥(白細胞游出)及慢性炎癥(大、小鼠肉芽腫)；本發(fā)明藥物有顯著的鎮(zhèn)痛作用，對化學(xué)劑致痛、熱致痛均有鎮(zhèn)痛作用；本發(fā)明藥物有明顯的解熱作用和止咳作用。
綜上所述，本發(fā)明藥物能抗病毒、消炎、鎮(zhèn)痛、解熱、止咳，療效確切、起效快，安全，對感冒、過度吸煙、化學(xué)刺激物等各類因素導(dǎo)致的急性咽喉炎或上呼吸道感染呈現(xiàn)出咽喉腫痛、聲音嘶啞，頭痛發(fā)燒，咳嗽痰黃或咽喉、鼻粘膜充血等癥狀有明顯的治療作用，主要癥狀可在3～7天即可痊愈。治療急、慢性咽喉炎的藥物。本發(fā)明藥物的制備方法是從原生藥材中分離純化出有效部位總黃酮，采用大孔樹脂吸附法，工藝先進，成本低、效率高、無三廢，且附加值高，利潤空間大，原生藥材鳶尾目前價格低廉(4～5元/公斤)，采用本發(fā)明提取方法純化總黃酮的收率為約15％，也就是每公斤原生藥材可制備本發(fā)明藥物膠囊劑400粒(0.35g/粒)，每粒膠囊的直接生產(chǎn)成本約為0.07元/粒，每噸藥材可創(chuàng)產(chǎn)值28萬元，若銷售成本為銷售收入的40％，每噸藥材所生產(chǎn)的產(chǎn)品可獲稅利28-28×40％-2.8(生產(chǎn)成本)＝14萬元，即積利為銷售收入的50％。若每年處理250噸原生藥材，稅利即有3500萬元(產(chǎn)量為1億粒，產(chǎn)值與銷售收入為7000萬)，由此可見，本發(fā)明藥物在商業(yè)上獲得成功，是由于選擇了低成本的原生藥材，在本發(fā)明原料藥物提取方法下，得率高，是由本發(fā)明的技術(shù)特征直接導(dǎo)致的，對本領(lǐng)域技術(shù)人員來說，是非顯而易見的，為臨床提供了一種新的藥用選擇。
權(quán)利要求
1.一種治療咽喉炎的藥物組合物，其特征在于它是由鳶尾科植物鳶尾Iristectorum Maxim.總黃酮提取物為活性部分，加上藥學(xué)上可接受的輔料或輔助性成分制備而成的藥劑，其中，提取物中總黃酮的百分含量以鳶尾苷C22H22O11計算≥55％。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的治療咽喉炎的藥物組合物，其特征在于所述的總黃酮中含有鳶尾苷tectoridin、鳶尾甲苷A iristectorin A、鳶尾苷元tectorigenin、野鳶尾苷元irigenin。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的治療咽喉炎的藥物組合物，其特征在于總黃酮中四個異黃酮成分的重量配比鳶尾苷∶鳶尾甲苷A∶鳶尾苷元∶野鳶尾苷元為1∶0.1～0.4∶0.15～0.6∶0.03～0.1。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的治療咽喉炎的藥物組合物，其特征在于總黃酮中四個異黃酮成分的含量比鳶尾苷∶鳶尾甲苷A∶鳶尾苷元∶野鳶尾苷元為1∶0.18∶0.29∶0.056。
5.根據(jù)權(quán)利要求1～4任一項所述的治療咽喉炎的藥物組合物，其特征在于所述的鳶尾總黃酮是由下述方法提取制備a、取鳶尾科植物鳶尾Iris tectorum Maxim.藥材，粉碎，加入70％乙醇回流提取，濃縮，得浸膏；b、將a步驟的浸膏溶解入水中，過濾，濾液通過大孔吸附樹脂柱；c、用水洗滌脂柱，流出液棄去，至流出液呈近無色澄明溶液時，放干水，用75～90％的乙醇洗脫，洗脫液過濾，濃縮即得本發(fā)明總黃酮。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的治療咽喉炎的藥物組合物，其特征在于所述的鳶尾總黃酮的提取方法中b步驟所述的大孔吸附樹脂柱的樹脂量與原生藥材的重量配比為3∶1。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的治療咽喉炎的藥物組合物，其特征在于所述的制劑是膠囊劑、顆粒劑、片劑、丸劑、口服液。
8.一種制備權(quán)利要求1所述的治療咽喉炎的藥物組合物的方法，包括如下步驟a、取鳶尾科植物鳶尾Iris tectorum Maxim.藥材，粉碎，加入70％乙醇回流提取，濃縮，得浸膏；b、將a步驟的浸膏溶解入水中，過濾，濾液通過大孔吸附樹脂柱；c、用水洗滌脂柱，流出液棄去，至流出液呈近無色澄明溶液時，放干水，用75～90％乙醇洗脫，洗脫液過濾，濃縮即得總黃酮；d、稱取c步驟的總黃酮，加入藥學(xué)上可接受的輔料或輔助性成分制備成藥學(xué)上常用的制劑。
9.權(quán)利要求1所述的藥物組合物在制備治療急、慢性咽喉炎的藥物中的用途。
10.權(quán)利要求1所述的藥物組合物在制備抗病毒、抗炎、鎮(zhèn)痛、解熱、止咳藥物中的用途。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種治療咽喉炎的藥物組合物，它是由鳶尾科植物鳶尾Iristectorum Maxim.總黃酮提取物為活性部分，加上藥學(xué)上可接受的輔料或輔助性成分制備而成的藥劑，其中，提取物總黃酮的百分含量以鳶尾苷C
文檔編號A61K9/08GK1839862SQ20051002063
公開日2006年10月4日 申請日期2005年4月1日 優(yōu)先權(quán)日2005年4月1日
發(fā)明者徐學(xué)民, 袁崇均, 齊尚斌, 李利民, 王笳, 楊紅, 黃衛(wèi)平, 陳帥, 舒光明 申請人:四川省中藥研究所