專利名稱：氨基取代的乙氨基β的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及新的β2腎上腺素能受體激動(dòng)劑。本發(fā)明還涉及含有該化合物的藥物組合物、使用該化合物治療與β2腎上腺素能受體活性有關(guān)的疾病的方法、以及適用于制備該化合物的方法和中間體。
背景技術(shù)：
β2腎上腺素能受體激動(dòng)劑被認(rèn)為是用于治療肺疾病如哮喘和慢性阻塞性肺病(包括慢性支氣管炎和肺氣腫)的有效藥物。β2腎上腺素能受體激動(dòng)劑還適用于治療早產(chǎn)，而且可能適用于治療神經(jīng)障礙和心臟障礙。盡管采用某些β2腎上腺素能受體激動(dòng)劑已經(jīng)取得了成功，但是目前的藥劑具有較不理想的作用持續(xù)時(shí)間、效力、選擇性和/或起效。因此，需要具有改進(jìn)性質(zhì)，例如改進(jìn)的作用持續(xù)時(shí)間、效力、選擇性和/或起效的新的β2腎上腺素能受體激動(dòng)劑。
發(fā)明概述本發(fā)明提供了新的具有β2腎上腺素能受體激動(dòng)劑活性的化合物。除了其它的性質(zhì)以外，已發(fā)現(xiàn)本發(fā)明的化合物是強(qiáng)效的和選擇性的β2腎上腺素能受體激動(dòng)劑。此外，還發(fā)現(xiàn)本發(fā)明的化合物具有令人吃驚和出乎意料的長的作用持續(xù)時(shí)間，其允許每日一次，或甚至更不頻繁的，給藥。
相應(yīng)地，本發(fā)明提供了式(I)的化合物
其中R1、R2、R3和R4各自獨(dú)立地選自H、氨基、鹵素、羥基、-CH2OH和-NHCHO，或R1和R2連在一起是-NHC(＝O)CH＝CH-、-CH＝CHC(＝O)NH-、-NHC(＝O)S-或-SC(＝O)NH-；R5和R6各自獨(dú)立地選自H、C1-6烷基、-C(＝O)Rd、C2-6鏈烯基、C2-6炔基和C3-6環(huán)烷基，其中C1-6烷基、C2-6鏈烯基、C2-6炔基和C3-6環(huán)烷基各自任選被一個(gè)或多個(gè)獨(dú)立選自芳基、雜芳基、雜環(huán)基、-ORa和-NRbRc的取代基取代，其中每個(gè)芳基、雜芳基和雜環(huán)基任選被一個(gè)或多個(gè)獨(dú)立地選自-ORa和-NRbRc的取代基取代，或R5和R6，和與之連接的氮原子一起形成有5-7個(gè)環(huán)原子且含有1或2個(gè)雜原子的雜環(huán)，該雜原子獨(dú)立地選自O(shè)、N和S，其中S任選用一個(gè)或2個(gè)O取代；R7和R8各自獨(dú)立地是H或C1-6烷基；R9、R10和R11各自獨(dú)立地選自H、C1-6烷基、芳基、鹵素、-ORa、和-NRbRc；Rd是H或C1-3烷基，任選地被一個(gè)或多個(gè)獨(dú)立選自-ORa、-NRbRc、哌啶基和吡咯烷基的取代基取代；和Ra、Rb和Rc各自獨(dú)立地是H或C1-3烷基；或其制藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑合物或立體異構(gòu)體。
本發(fā)明還提供包含本發(fā)明的化合物和制藥學(xué)上可接受的載體的藥物組合物。本發(fā)明進(jìn)一步提供包含本發(fā)明的化合物與一種或多種其他治療藥的組合，以及含有該組合的藥物組合物。
本發(fā)明還提供一種治療哺乳動(dòng)物中與β2腎上腺素能受體活性有關(guān)的疾病或病況(例如，肺疾病如哮喘和慢性阻塞性肺病、早產(chǎn)、神經(jīng)障礙、心臟障礙，或炎癥)的方法，它包括對(duì)所述哺乳動(dòng)物給予治療有效量的本發(fā)明的化合物。本發(fā)明進(jìn)一步提供一種治療的方法，它包括給予治療有效量的本發(fā)明的化合物與一種或多種其他治療藥的組合。
本發(fā)明還提供一種治療哺乳動(dòng)物中與β2腎上腺素能受體活性有關(guān)的疾病和病況的方法，它包括對(duì)所述哺乳動(dòng)物給予治療有效量的本發(fā)明的藥物組合物。
本發(fā)明的化合物還可以用作研究工具，即用于研究生物系統(tǒng)或樣品，或用于發(fā)現(xiàn)新的β2腎上腺素能受體激動(dòng)劑。相應(yīng)地，在其方法方面之一，本發(fā)明涉及激動(dòng)生物系統(tǒng)或樣品中β2腎上腺素能受體的方法，該方法包括使含β2腎上腺素能受體的生物系統(tǒng)或樣品與β2腎上腺素能受體激動(dòng)量的式(I)化合物或其制藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑合物或立體異構(gòu)體接觸。
在分開和不同的方面，本發(fā)明還提供在本文中描述的合成方法和中間體，它們適用于制備本發(fā)明的化合物。
本發(fā)明還提供在醫(yī)學(xué)療法中使用的如本文描述的本發(fā)明的化合物，以及本發(fā)明的化合物在制備治療哺乳動(dòng)物中與β2腎上腺素能受體活性有關(guān)的疾病或病況例如肺疾病如哮喘或慢性阻塞性肺病、早產(chǎn)、神經(jīng)障礙、心臟障礙，或炎癥的制劑或藥劑中的用途。
附圖簡述參考


了本發(fā)明，附圖顯示了N-{2-[4-((R)-2-羥基-2-苯基乙氨基)苯基]乙基}-(R)-2-羥基-2-(3-甲酰氨基-4-羥基苯基)乙胺鹽酸鹽的粉末x-射線衍射圖。
發(fā)明詳述本發(fā)明提供新的式(I)的氨基取代的乙氨基β2腎上腺素能受體激動(dòng)劑，或其制藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑合物或立體異構(gòu)體。下述的基團(tuán)、取代基和范圍的示范和優(yōu)選的值，僅用于說明；它們不排除其它定義的值或基團(tuán)和取代基定義范圍內(nèi)的其它值。
R1的特定值的實(shí)例是鹵素、-CH2OH和-NHCHO，包括氯、-CH2OH和-NHCHO。
R1的另一個(gè)特定值是-CH2OH和-NHCHO。
R2的特定值是H。
R1和R2特定值是R1和R2連在一起是-NHC(＝O)CH＝CH-或-CH＝CHC(＝O)NH-。
R3特定值的實(shí)例是羥基和氨基。
R4的特定值的實(shí)例是H和鹵素，包括H和氯。
式(I)的一組化合物是其中R1是-NHCHO，R3是羥基，R2和R4均為氫的化合物。
式(I)的另一組化合物是其中R1和R2連在一起是-NHC(＝O)CH＝CH-或-CH＝CHC(＝O)NH-，R3是羥基，R4是H的化合物。
R1、R2、R3和R4的另一組具體值為，R1是-CH2OH，R3是羥基，R2和R4均為H。
然而R1、R2、R3和R4的另一組具體值為，R1和R4是氯，R3是氨基，R2是H。
R5和R6的特定值的實(shí)例為，R5和R6均獨(dú)立選自H、C1-6烷基和C3-6環(huán)烷基，其中每個(gè)C1-6烷基任選被一個(gè)或多個(gè)獨(dú)立選自雜環(huán)基、-ORa和-NRbRc的取代基取代。R5和R6的其它實(shí)例為，R5和R6與和其連接的氮原子一起形成有5-7個(gè)環(huán)原子且含有1或2個(gè)雜原子的雜環(huán)，該雜原子獨(dú)立地選自O(shè)、N和S。
在一個(gè)實(shí)施方式中，R5和R6均獨(dú)立地是H或C1-3烷基，其中每個(gè)C1-3烷基任選被一個(gè)獨(dú)立選自羥基、氨基、哌啶基和吡咯烷基的取代基取代。在另一個(gè)實(shí)施方式中，R5和R6與和其連接的氮原子一起形成嗎啉基或哌啶基環(huán)。
然而在另一個(gè)實(shí)施方式中，R5和R6均獨(dú)立地是H或C1-3烷基。
R7的特定值是H。
R8的特定值是H。
R9的特定值的實(shí)例是H、鹵素和-ORa，其中Ra是H或C1-3烷基。
R9的特定值的另一個(gè)實(shí)例是羥基和甲氧基。
R9的另一個(gè)特定值是H。
R10的特定值的實(shí)例是H、鹵素和-ORa，其中Ra是H或C1-3烷基。
R10的特定值的另一個(gè)實(shí)例是羥基和甲氧基。
R10的另一個(gè)特定值是H。
R11的特定值的實(shí)例是H、鹵素和-ORa，其中Ra是H或C1-3烷基。
R11的特定值的另一個(gè)實(shí)例是羥基和甲氧基。
R11的另一個(gè)特定值是H。
在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式中，式(I)的化合物是式(II)的化合物 其中R1是-CH2OH或-NHCHO，R2是H；或R1和R2連在一起是-NHC(＝O)CH＝CH-或-CH＝CHC(＝O)NH-；R5和R6各自獨(dú)立地選自H、C1-6烷基、C2-6鏈烯基、C2-6炔基和C3-6環(huán)烷基，其中C1-6烷基、C2-6鏈烯基、C2-6炔基和C3-6環(huán)烷基各自任選被一個(gè)或多個(gè)獨(dú)立選自芳基、雜芳基、雜環(huán)基、-ORa和-NRbRc的取代基取代，其中芳基、雜芳基和雜環(huán)基各自任選被一個(gè)或多個(gè)獨(dú)立地選自-ORa和-NRbRc的取代基取代，或R5和R6與和其連接的氮原子一起形成有5-7個(gè)環(huán)原子且含有1或2個(gè)雜原子的雜環(huán)，該雜原子獨(dú)立地選自O(shè)、N和S，其中S任選用一個(gè)或2個(gè)O取代；和Ra、Rb和Rc各自獨(dú)立地是H或C1-3烷基；或其制藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑合物或立體異構(gòu)體。
式(II)的一組化合物是那些化合物，其中R5和R6各自獨(dú)立選自H、C1-6烷基和C3-6環(huán)烷基，其中每個(gè)C1-6烷基任選被一個(gè)或多個(gè)獨(dú)立選自雜環(huán)基、-ORa和-NRbRc的取代基取代，或R5和R6與和其連接的氮原子一起形成雜環(huán)，該雜環(huán)有5-7個(gè)環(huán)原子且包含1個(gè)或2個(gè)雜原子，該雜原子獨(dú)立地選自O(shè)、N和S。
在式(II)的另一組化合物中，R5和R6均獨(dú)立地是H或C1-3烷基，其中每個(gè)C1-3烷基任選被一個(gè)或多個(gè)獨(dú)立選自羥基、氨基、哌啶基和吡咯烷基的取代基取代；或R5和R6與和其連接的氮原子一起形成嗎啉基或哌啶基環(huán)。然而，在式(II)的另一組化合物中，R5和R6各自是H或C1-3烷基。
特別值得一提的是以下化合物5-((R)-2-{2-[4-((R)-2-氨基-2-苯基乙氨基)苯基]乙氨基}-1-羥乙基)-8-羥基-1H-喹啉-2-酮 N-[5-((R)-2-{2-[4-((R)-2-氨基-2-苯基乙氨基)苯基]乙氨基}-1-羥乙基)-2-羥基苯基]甲酰胺
5-((R)-2-{2-[4-((S)-2-氨基-2-苯基乙氨基)苯基]乙氨基}-1-羥乙基)-8-羥基-1H-喹啉-2-酮；N-[5-((R)-2-{2-[4-((S)-2-氨基-2-苯基乙氨基)苯基]乙氨基}-1-羥乙基)-2-羥基苯基]甲酰胺；5-((R)-2-{2-[4-((R)-2-甲氨基-2-苯基乙氨基)苯基]乙氨基}-1-羥乙基)-8-羥基-1H-喹啉-2-酮；5-((R)-2-{2-[4-((R)-2-二甲氨基-2-苯基乙氨基)苯基]乙氨基}-1-羥乙基)-8-羥基-1H-喹啉-2-酮；N-[5-((R)-2-{2-[4-((R)-2-甲氨基-2-苯基乙氨基)苯基]乙氨基}-1-羥乙基)-2-羥基苯基]甲酰胺；N-[5-((R)-2-{2-[4-((R)-2-二甲氨基-2-苯基乙氨基)苯基]-乙氨基}-1-羥乙基)-2-羥基苯基]甲酰胺；5-((R)-2-{2-[4-((S)-2-甲氨基-2-苯基乙氨基)苯基]乙氨基}-1-羥乙基)-8-羥基-1H-喹啉-2-酮；5-((R)-2-{2-[4-((S)-2-二甲氨基-2-苯基乙氨基)苯基]乙氨基}-1-羥乙基)-8-羥基-1H-喹啉-2-酮；N-[5-((R)-2-{2-[4-((S)-2-甲氨基-2-苯基乙氨基)苯基]乙氨基}-1-羥乙基)-2-羥基苯基]甲酰胺；和N-[5-((R)-2-{2-[4-((S)-2-二甲氨基-2-苯基乙氨基)苯基]乙氨基}-1-羥乙基)-2-羥基苯基]甲酰胺；其中，化學(xué)命名法符合自動(dòng)命名程序AutoNom，其由MDL信息系統(tǒng)，GmbH(Frankfurt，德國)提供。
如以上說明的，本發(fā)明的化合物包含一個(gè)或多個(gè)手性中心。相應(yīng)地，除非另外指出，本發(fā)明包括外消旋混合物、純的立體異構(gòu)體(即，單個(gè)的對(duì)映異構(gòu)體或非對(duì)映異構(gòu)體)，以及這類異構(gòu)體的富含立體異構(gòu)體的混合物。當(dāng)顯示一個(gè)特定的立體異構(gòu)體時(shí)，本領(lǐng)域技術(shù)人員將要理解，除非另外指出，少量的其它立體異構(gòu)體可以存在于本發(fā)明的組合物中，條件是這類其它異構(gòu)體的存在不消除作為整體的組合物的實(shí)用性。
特別地，本發(fā)明的化合物在式(I)和(II)的亞烷基碳原子上含有一個(gè)手性中心，羥基連接在該碳原子上。當(dāng)使用立體異構(gòu)體的混合物時(shí)，帶有羥基的手性中心為(R)取向的立體異構(gòu)體的大于對(duì)應(yīng)的(S)立體異構(gòu)體的量是有利的。當(dāng)比較相同化合物的立體異構(gòu)體時(shí)，(R)立體異構(gòu)體優(yōu)于(S)立體異構(gòu)體。
定義在描述本發(fā)明的化合物、組合物和方法時(shí)，除非另外指出，以下術(shù)語具有下面的含義。
術(shù)語“烷基”意思是一價(jià)飽和的烴基團(tuán)，其可以是直鏈或支鏈或其組合。作為實(shí)例，典型的烷基包括甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、仲丁基、異丁基、叔丁基、正戊基、正己基、正庚基、正辛基、正壬基、正癸基等。
當(dāng)具體數(shù)目的碳原子計(jì)劃用于在本文中使用的特定術(shù)語時(shí)，在術(shù)語前顯示碳原子的數(shù)目。例如術(shù)語“C1-6烷基”意思是具有1-6個(gè)碳原子的烷基。
術(shù)語“鏈烯基”意思是一價(jià)不飽和的含有至少一個(gè)碳-碳雙鍵的烴基團(tuán)，通常為1或2個(gè)碳-碳雙鍵，其可以是直鏈或支鏈或其組合。作為實(shí)例，典型的鏈烯基包括乙烯基、烯丙基、異丙烯基、丁-2-烯基、正戊-2-烯基、正己-2-烯基、正庚-2-烯基、正辛-2-烯基、正壬-2-烯基、正癸-4-烯基、正癸-2，4-二烯基等等。
術(shù)語“炔基”意思是一價(jià)不飽和的含至少一個(gè)碳-碳三鍵的烴基團(tuán)，通常為1個(gè)碳-碳三鍵，其可以是直鏈或支鏈或其組合。作為實(shí)例，典型的炔基包括乙炔基、炔丙基、丁-2-炔基等等。
術(shù)語“環(huán)烷基”意思是一價(jià)飽和的碳環(huán)基團(tuán)，其可以是單環(huán)或多環(huán)的。作為實(shí)例，典型的環(huán)烷基包括環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基、環(huán)庚基、環(huán)辛基等。
術(shù)語“芳基”意思是一價(jià)芳香烴，具有單個(gè)的環(huán)(即，苯基)或稠合的環(huán)(即，萘)。除非另外指出，這樣的芳基通常包含6至10個(gè)碳環(huán)原子。作為實(shí)例，典型的芳基包括苯基、萘-1-基、萘-2-基等等。
術(shù)語“雜芳基”意思是一價(jià)芳香烴，具有單個(gè)環(huán)或2個(gè)稠合環(huán)，在環(huán)上包含至少一個(gè)雜原子(通常為1至3個(gè)雜原子)，該雜原子選自N、O和S。除非另外指出，這樣的雜芳基通常包含5至10個(gè)原子總環(huán)原子。作為實(shí)例，典型的的雜芳基包括吡咯基、異噁唑基、異噻唑基、吡唑基、吡啶基(或，相當(dāng)?shù)兀拎せ?、噁唑基、噁二唑基、噻二唑基、噻唑基、咪唑基、三唑基、四唑基、呋喃基、三嗪基、噻吩基、嘧啶基、噠嗪基、吡嗪基、苯并噁唑基、苯并噻唑、苯并咪唑基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、喹啉基、吲哚基、異喹啉基等，其中連接點(diǎn)在任何適用的碳或氮環(huán)原子上。
術(shù)語“雜環(huán)基”或“雜環(huán)”意思是一價(jià)飽和的或部分不飽和環(huán)狀的非芳香族基團(tuán)，其可以是單環(huán)或多環(huán)(即，稠合或橋連的)，而且其包含至少一個(gè)選自N、O和S的雜原子(通常為1至3個(gè)雜原子)。除非另外定義，這樣的雜環(huán)基團(tuán)通常包含5-10個(gè)總環(huán)原子。作為實(shí)例，典型的雜環(huán)基團(tuán)包括吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、咪唑烷基、嗎啉基、二氫吲哚-3-基、2-咪唑啉基、1，2，3，4-四氫異喹啉-2-基、奎寧環(huán)基等等。
術(shù)語“鹵素”意思是氟、氯、溴或碘。
術(shù)語“氨基”意思是-NH2。
術(shù)語“治療有效量”意思是當(dāng)對(duì)需要治療的患者給藥時(shí)，足夠用于實(shí)現(xiàn)治療目的量。
如此處使用的術(shù)語“治療”意思治療是患者，例如哺乳動(dòng)物(特別是人)中的疾病和醫(yī)學(xué)病況，其包括(a)預(yù)防疾病或醫(yī)學(xué)病況的發(fā)生，即患者的預(yù)防性治療；
(b)改善疾病或醫(yī)學(xué)病況，即，消除患者的疾病或醫(yī)學(xué)病況，或引起患者中疾病或醫(yī)學(xué)病況的消退；(c)抑制疾病或醫(yī)學(xué)病況，即，減緩或阻止患者中疾病或醫(yī)學(xué)病況的發(fā)展；或(d)減輕患者中疾病或醫(yī)學(xué)病況的癥狀。
短語“與β2腎上腺素能受體活性有關(guān)的疾病或病況”包括現(xiàn)在承認(rèn)的或?qū)戆l(fā)現(xiàn)的與β2腎上腺素能受體活性有關(guān)的所有的病狀和/或病況。這樣的病狀包括，但不限于，肺疾病如哮喘和慢性阻塞性肺病(包括慢性支氣管炎和肺氣腫)，以及神經(jīng)障礙和心臟障礙。還已知β2腎上腺素能受體活性與早產(chǎn)(參見美國專利號(hào)5,872,126)和一些類型炎癥(參見國際專利申請公開號(hào)WO 99/30703和美國專利申請?zhí)?,290,815)有關(guān)。
術(shù)語“制藥學(xué)上可接受的鹽”意思是由對(duì)于對(duì)患者如哺乳動(dòng)物給藥可接受的堿或酸制備的鹽。這樣的鹽可以來源于制藥學(xué)上可接受的無機(jī)堿或有機(jī)堿以及來源于制藥學(xué)上可接受的無機(jī)酸或有機(jī)酸。
衍生自制藥學(xué)上可接受的酸的鹽包括，但不限于醋酸鹽、苯磺酸鹽、苯甲酸鹽、樟腦磺酸鹽、檸檬酸鹽、乙磺酸鹽、富馬酸鹽、葡糖酸鹽、谷氨酸鹽、氫溴酸鹽、鹽酸鹽、乳酸鹽、馬來酸鹽、蘋果酸鹽、扁桃酸鹽、甲磺酸鹽、半乳糖二酸鹽、硝酸鹽、泛酸鹽、磷酸鹽、琥珀酸鹽、硫酸鹽、酒石酸鹽、對(duì)甲苯磺酸鹽、昔萘酸(1-羥基-2-萘酸)鹽等等。特別優(yōu)選的是衍生自富馬酸、氫溴酸、鹽酸、醋酸、硫酸、甲磺酸、昔萘酸和酒石酸的鹽。
衍生自制藥學(xué)上可接受的無機(jī)堿的鹽包括鋁、銨、鈣、銅、三價(jià)鐵、二價(jià)鐵、鋰、鎂、錳、二價(jià)錳、鉀、鈉、鋅鹽等等。特別優(yōu)選的是銨、鈣、鎂、鉀和鈉鹽。衍生自制藥學(xué)上可接受的有機(jī)堿的鹽包括伯胺、仲胺和叔胺的鹽，所述胺類包括取代的胺、環(huán)胺、天然存在的胺，如精氨酸、甜菜堿、咖啡堿、膽堿、N，N′-二芐基乙二胺、二乙胺、2-二乙氨基乙醇、2-二甲氨基乙醇、乙醇胺、乙二胺、N-乙基嗎啉、N-乙基哌啶、葡糖胺、氨基葡糖、組氨酸、海巴明(hydrabamine)、異丙胺、賴氨酸、甲基葡糖胺、嗎啉，哌嗪、哌啶、聚胺樹脂、普魯卡因、嘌呤、可可堿、三乙胺、三甲基胺、三丙基胺、緩血酸胺等等。
術(shù)語“溶劑合物”意思是由一個(gè)或多個(gè)溶質(zhì)分子即本發(fā)明的化合物或其制藥學(xué)上可接受的鹽，以及一個(gè)或多個(gè)溶劑分子形成的絡(luò)合物或聚集體。這樣的溶劑合物通常是具有基本上固定的溶質(zhì)和溶劑摩爾比的結(jié)晶固體。作為實(shí)例，典型的溶劑包括水、甲醇、乙醇、異丙醇、乙酸等等。當(dāng)溶劑是水時(shí)，形成的溶劑合物是水合物。
應(yīng)當(dāng)理解，術(shù)語“或其立體異構(gòu)體的制藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑合物”意思包括所有排列的鹽、溶劑合物和立體異構(gòu)體，如式(I)的化合物的立體異構(gòu)體的制藥學(xué)上可接受的鹽的溶劑合物。
術(shù)語“離去基團(tuán)”意思是在取代反應(yīng)如親核取代反應(yīng)中可以被另外的官能團(tuán)或原子代替的官能團(tuán)或原子。作為實(shí)例，典型的離去基團(tuán)包括Cl、Br和I；磺酸酯基團(tuán)如甲磺酸酯、甲苯磺酸酯、對(duì)溴苯磺酸酯、對(duì)硝基苯磺酸酯等等；和酰氧基如乙酰氧基、三氟乙酰氧基等等。
術(shù)語“氨基保護(hù)基團(tuán)”意思是適于防止在氨基N位的不希望的反應(yīng)的保護(hù)基團(tuán)。典型的氨基保護(hù)基團(tuán)包括，但不限于甲?；货；?，例如烷?；缫阴；?；烷氧羰基如叔丁氧羰基(Boc)；芳基甲氧羰基如芐氧羰基(Cbz)和9-芴基甲氧羰基(Fmoc)；芳甲基如芐基(Bn)、三苯甲基(Tr)、和1，1-二-(4′-甲氧苯基)甲基；甲硅烷基如三甲基甲硅烷基(TMS)和叔丁基二甲基甲硅烷基(TBS)；等等。
術(shù)語“羥基保護(hù)基團(tuán)”意思是適于防止在羥基位的不希望的反應(yīng)的保護(hù)基團(tuán)。典型的羥基保護(hù)基團(tuán)包括，但不限于烷基如甲基、乙基和叔丁基；?；缤轷；缫阴；环技谆缙S基(Bn)、對(duì)甲氧基芐基(PMB)、9-芴基甲基(Fm)和二苯基甲基(二苯甲基、DPM)；甲硅烷基如三甲基甲硅烷基(TMS)和叔丁基二甲基甲硅烷基(TBS)；等等。
一般的合成步驟本發(fā)明的化合物可以由容易得到的原料采用以下的一般方法和步驟制得。盡管在以下的方案說明了本發(fā)明的特定方面，本領(lǐng)域的技術(shù)人員將承認(rèn)本發(fā)明的所有方面可以采用在本文中描述的方法或本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的其它方法、試劑和原料來制得。還將要理解當(dāng)給予其中典型或優(yōu)選的工藝條件(即，反應(yīng)溫度、時(shí)間、反應(yīng)物的摩爾比、溶劑、壓力等)時(shí)，除非另外說明，其他工藝條件也可以使用。最適的反應(yīng)條件可以隨使用的特定反應(yīng)物或溶劑而變化，但是本領(lǐng)域的技術(shù)人員通過常規(guī)優(yōu)化的操作可以決定該反應(yīng)條件。
此外，為防止某些官能團(tuán)經(jīng)受不希望的反應(yīng)，需要常規(guī)保護(hù)基團(tuán)，這對(duì)本領(lǐng)技術(shù)人員來講是顯而易見的。用于特定官能團(tuán)的適合的保護(hù)基團(tuán)的選擇以及保護(hù)和脫保護(hù)的適宜的條件，在本領(lǐng)域中也是熟知的。例如，多數(shù)的保護(hù)基團(tuán)以及其引入和除去，描述于T.W.Greene和G.M.Wuts，Protecting Groups in Organic Synthesis，第三版，Wiley，紐約1999，并且在本文中引入作為參考。
在一個(gè)合成的方法中，式(I)和(II)的化合物按照方案A的說明制備。(下述的方案所示的取代基和可變量，除非另外指出，具有如上的所給的定義)
方案A 其中，P1表示羥基保護(hù)基團(tuán)，p2表示羥基保護(hù)基團(tuán)，L表示離去基團(tuán)如溴基。
如方案A所示，式1的化合物首先與(R)-N2-[4-(2-氨乙基)苯基]-1-苯乙烷-1，2-二胺(2)反應(yīng)來得到式3的中間體。通常，這樣的反應(yīng)在存在堿的極性、質(zhì)子惰性的溶劑中加熱下進(jìn)行。保護(hù)基團(tuán)P1通常是甲硅烷基保護(hù)基團(tuán)，通常用氟化物或酸試劑將其從式3的中間體上脫去得到式4的中間體。保護(hù)基團(tuán)P2通常是芐基保護(hù)基團(tuán)，通常用碳載鈀催化劑通過氫化將其從式4的中間體上脫去得到產(chǎn)物。
在該申請描述的反應(yīng)中使用的式1的化合物通過現(xiàn)有技術(shù)已知的步驟是很容易制備的，而且，例如其描述于美國專利號(hào)6,653,323B2和6,670,376B1中，它們及其中的參考文獻(xiàn)作為參考在本文中引入。中間體2由容易得到的原料制得，例如，按照方案B說明的步驟。
方案B 在方案B中，P3表示氨基保護(hù)基團(tuán)，P4表示氨基保護(hù)基團(tuán)。
如方案B中說明的，保護(hù)基團(tuán)P3加成到2-(4-硝基苯基)乙胺5的氨基的N上，得到6的中間體。保護(hù)基團(tuán)P3通常是叔丁氧羰基(Boc)，通常在堿性條件下通過重碳酸二叔丁酯(Boc2O)的反應(yīng)加成上。還原中間體6得到式7的中間體。中間體6的還原通常采用碳載鈀催化劑的氫化作用實(shí)現(xiàn)。中間體7的胺與保護(hù)的苯基甘氨酸8偶合得到式9的中間體。中間體7和8的偶合可以采用肽偶聯(lián)劑例如1-[3-(二甲氨基)丙基]-3-乙基碳二亞胺(EDC)實(shí)現(xiàn)，而且可以使用催化劑，例如1-羥基苯并三唑水合物(HOBT)或1-羥基-7-氮雜苯并三唑水合物(HOAT)。中間體9通常在酸性條件下脫保護(hù)，得到式10的中間體，通常用硼烷還原劑將其還原，形成(R)-N2-[4-(2-氨乙基)苯基]-1-苯基-乙烷-1，2-二胺(2)。
在以下實(shí)施例1的a-e部分中進(jìn)一步描述了中間體2的制備。
選擇性地，本發(fā)明的化合物可以按照方案C的說明制備。
方案C 根據(jù)方案C，中間體1與(S)-2-[4-(2-氨乙基)-苯基氨基]-1-苯基乙醇(11)偶合得到式12的中間體。通常，該反應(yīng)堿存在下在在極性、質(zhì)子惰性的溶劑中加熱下進(jìn)行。中間體12與試劑如二苯基磷?；B氮化物反應(yīng)，其將醇轉(zhuǎn)化為離去基團(tuán)，提供親核的疊氮化物陰離子得到式13的中間體。選擇性地，可以使用兩種試劑系統(tǒng)來將中間體12轉(zhuǎn)化為疊氮化物13。接著，保護(hù)基團(tuán)P1，其通常是甲硅烷基保護(hù)基團(tuán)，通常用氟化物或酸試劑脫去得到式14的中間體。該產(chǎn)物可以通過同時(shí)疊氮化物的氫化和式14中間體的保護(hù)基團(tuán)P2的脫保護(hù)得到，當(dāng)P2是如芐基的基團(tuán)，通過氫化脫去。如果，保護(hù)基團(tuán)P2對(duì)氫化作用是穩(wěn)定的，那么需要額外的脫保護(hù)步驟。
中間體11通過2-(4-氨基苯基)乙胺和手性氧化苯乙烯的反應(yīng)容易地制得，如下述的實(shí)施例3，a部分描述的。
關(guān)于制備本發(fā)明的典型化合物或合成它的中間體的具體反應(yīng)條件和其它步驟的進(jìn)一步詳情，描述在以下的實(shí)施例中。
相應(yīng)地，在方法方面，本發(fā)明提供了制備式(I)的化合物或其鹽或立體異構(gòu)體或保護(hù)的衍生物的方法，所述方法包括使式(III)的化合物 其中，P1是羥基保護(hù)基團(tuán)，L是離去基團(tuán)，R1a、R2a、R3a和R4a各自獨(dú)立地被定義為與式(I)中的R1、R2、R3和R4相同，或-OP2，其中p2是羥基保護(hù)基團(tuán)，與式(IV)的化合物反應(yīng)
其中R5、R6、R7、R8、R9、R10和R11是如式(I)中所定義，得到式(V)的化合物 脫去保護(hù)基團(tuán)P1得到式(VI)的化合物 和當(dāng)，R1a、R2a、R3a或R4a的任一個(gè)是-OP2時(shí)，脫去保護(hù)基團(tuán)P2得到式(I)的化合物，或其鹽或立體異構(gòu)體。
藥物組合物本發(fā)明還提供包含本發(fā)明的化合物的藥物組合物。相應(yīng)地，該化合物，優(yōu)選以制藥學(xué)上可接受的鹽的形式，可以被配制成任何適合的給藥形式，如口服或胃腸外給藥，或吸入給藥。
作為說明，化合物可以與常規(guī)藥物載體和賦形劑摻和，以粉劑、片劑、膠囊劑、酏劑、混懸劑、糖漿劑和糯米紙囊劑等形式使用。所述藥物組合物將包含約0.05-約90％的重量的活性化合物，更通常的是約0.1-約30％。藥物可以包含常規(guī)的載體和賦形劑，如玉米淀粉或明膠、乳糖、硫酸鎂、硬脂酸鎂、蔗糖、微晶纖維素、高嶺土、甘露醇、磷酸二鈣、氯化鈉和藻酸。常用于本發(fā)明制劑中的崩解劑包括交聯(lián)羧甲基纖維素、微晶纖維素、玉米淀粉、羥基乙酸淀粉鈉和藻酸。
液體組合物一般由在適合液體載體中化合物或其制藥學(xué)上可接受的鹽的混懸劑或溶液組成，所述液體載體例如乙醇、甘油、山梨糖醇、非水溶劑如聚乙二醇、油類或水，任選含助懸劑、增溶劑(如環(huán)糊精)、防腐劑、表面活性劑、濕潤劑、嬌味劑或著色劑。選擇性地，液體制劑可以由可重構(gòu)的粉末制得。
例如，含活性化合物、助懸劑、蔗糖和增甜劑的粉末可以用水重構(gòu)形成混懸液；糖漿劑可以由含活性成分、蔗糖和增甜劑的粉末制得。
片劑形式的組合物可以采用任何合適的常規(guī)用于制備固體組合物的藥物載體制備。所述載體的實(shí)例包括硬脂酸鎂、淀粉、乳糖、蔗糖、微晶纖維素和粘合劑，例如聚乙烯吡咯烷酮。片劑還可以提供有彩色薄膜包衣，或內(nèi)含的顏色作為載體的一部分。此外，活性化合物可以被配制成受控釋放的劑型如含親水或疏水基質(zhì)的片劑。
膠囊劑形式的組合物，可以采用常規(guī)的封裝步驟制得，例如將活性化合物和賦形劑摻入硬明膠膠囊中。選擇性地，可以制備活性化合物和高分子量的聚乙二醇的半固體基質(zhì)并將其裝填入硬明膠膠囊中；或可以制備活性化合物的聚乙二醇的溶液或可食用油，例如液體石蠟或分級(jí)椰子油的混懸液并將其裝入軟明膠膠囊中。
可以包括的片劑粘合劑是阿拉伯膠、甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉、聚乙烯吡咯烷酮(聚維酮)、羥丙基甲基纖維素、蔗糖、淀粉和乙基纖維素?？梢允褂玫臐櫥瑒┌ㄓ仓徭V或其它硬脂酸金屬鹽、硬脂酸、硅酮液、滑石粉、蠟、油和膠態(tài)二氧化硅。
嬌味劑如薄荷、冬青油，櫻桃調(diào)味劑等也可以使用。相應(yīng)地，加入著色劑使劑型在外觀上更吸引人或有助于識(shí)別產(chǎn)品可能是理想的。
當(dāng)胃腸外給予時(shí)有效的本發(fā)明的化合物及其制藥學(xué)上可接受的鹽，可以配制成肌肉內(nèi)、鞘內(nèi)或靜脈內(nèi)給藥。
用于肌內(nèi)或鞘內(nèi)給藥的典型的組合物將由在油，例如花生油或芝麻油中的活性成分的混懸液或溶液組成。用于靜脈內(nèi)或鞘內(nèi)給藥的典型的組合物將由無菌等滲的水溶液組成，其含例如活性成分和葡萄糖或氯化鈉，或葡萄糖和氯化鈉的混合物。其它實(shí)例是乳酸鹽林格注射液，加葡萄糖的乳酸鹽林格注射液、Normosol-M和葡萄糖、Isolyte E、酰化格林注射液等等。任選地，共溶劑例如聚乙二醇；鰲合劑例如乙二胺四乙酸；增溶劑例如環(huán)糊精；和抗氧化劑例如偏亞硫酸氫鈉，可以包括在制劑中。選擇性地，溶液可以冷凍干燥，隨后就在給藥前用適合的溶劑重構(gòu)。
局部給藥有效的本發(fā)明的化合物及其制藥學(xué)上可接受的鹽可以配制為透皮組合物或透皮給藥系統(tǒng)(“貼劑”)。這樣的組合物包括，例如背襯、活性化合物儲(chǔ)庫、控釋膜、襯墊和接觸粘合劑。這樣的透皮貼劑可用于提供受控的量連續(xù)或不連續(xù)的注入本發(fā)明的化合物。用于藥物制劑遞送的透皮貼劑的結(jié)構(gòu)和用途是現(xiàn)有技術(shù)熟知的。例如，參見美國專利號(hào)5,023,252。這樣的貼劑可以被構(gòu)建用于連續(xù)的、脈沖式遞送藥物，或者需要時(shí)遞送藥物。
給藥本發(fā)明的化合物的一個(gè)優(yōu)選的方式是吸入。吸入是一個(gè)有效的遞送藥劑直接至呼吸道的方法。有三種一般類型的藥物吸入裝置霧化器吸入器、干粉吸入器(DPI)和定量吸入器(MDI)。常規(guī)霧化器裝置產(chǎn)生高速的氣流，引起治療藥像霧一樣噴霧，其被帶進(jìn)患者的呼吸道。治療藥配制呈液體形式如可呼吸大小的微粒化粒子的溶液或混懸液，其中微?；ǔ６x為具有約90％或更多的直徑小于約10μm的粒子。
常規(guī)霧化器裝置中使用的典型的制劑是活性劑藥用鹽的等滲水溶液，活性劑的濃度介于約0.05μg/mL至1mg/mL之間。適合的霧化器裝置能從商業(yè)上購得，例如，PARI GmbH(Starnberg，德國)。其它霧化器裝置例如，已經(jīng)公開于美國專利號(hào)6,123,068。
DPI通常以自由流動(dòng)的粉的形式給予治療藥，在吸入的過程中其可以分散于患者的氣流。使用外部的能源來分散粉的選擇性DPI裝置也已被開發(fā)。為了得到自由流動(dòng)的粉，治療藥可以用適合的賦形劑(例如，乳糖或淀粉)來配制。干粉制劑例如，可以通過將干的乳糖顆粒與本發(fā)明的化合物(即，活性劑)適合的形式，通常是制藥學(xué)上可接受的鹽的微?；牧Ｗ踊旌?，再干摻合來制得。選擇性地，藥劑可以不加入賦形劑進(jìn)行配制。將制劑裝入干粉配送器或與干粉遞送裝置一起使用的吸入藥筒或膠囊。
商業(yè)上購得的DPI遞送裝置的實(shí)例包括Diskhaler(GlaxoSmithKline，Research Triangle Park，NC)(參見，例如美國專利號(hào)5,035,237)；Diskus(GlaxoSmithKline)(參見，例如美國專利號(hào)6,378,519)；Turbuhaler(AstraZeneca，Wilmington，DE)(參見，例如美國專利號(hào)4,524,769)；和Rotahaler(GlaxoSmithKline)(參見，例如美國專利號(hào)4,353,365)。適合的DPI裝置的進(jìn)一步實(shí)例描述于美國專利號(hào)5,415,162、5,239,993和5,715,810，以及其中的參考文獻(xiàn)。
MDI通常用壓縮的氣體推進(jìn)劑排放出測定量的治療藥。盡管用于MDI給藥的制劑包括液化的推進(jìn)劑中的活性成分的溶液或混懸液。含氯氟烴如CCl3F，常規(guī)用作推進(jìn)劑，但由于對(duì)這類物質(zhì)對(duì)臭氧層的不利影響的擔(dān)心，開發(fā)使用了氫氟烷烴(HFA)如1，1，1，2-四氟乙烷(HFA134a)和1，1，1，2，3，3，3，-六氟-正丙烷(HFA 227)的制劑。MDI給藥的HFA制劑的另外的組分包括共溶劑如乙醇或戊烷，和表面活性劑如失水山梨醇三油酸酯、油酸、卵磷脂和甘油。(參見，例如美國專利號(hào)5,225,183、EP 0717987 A2和WO92/22286)因此，MDI給藥的適合的制劑可以包括約0.001％-約2％重量的本晶型，約0％-約20％重量的乙醇和約0％-約5％重量的表面活性劑，剩余物是HFA推進(jìn)劑。在一個(gè)方法中，為了制備制劑，將冷凍或加壓的氫氟烷烴加入含本晶型、乙醇(假如存在)和表面活性劑(假如存在)的瓶中。為了制備混懸液，以微?；Ｗ有问教峁┧幱名}。該制劑裝載入氣霧劑罐中，形成了MDI裝置的一部分。美國專利號(hào)6,006,745和6,143,227提供了專門開發(fā)的與HFA推進(jìn)劑使用的MDI裝置的實(shí)例。
在選擇性的制劑中，通過在活性化合物的藥用鹽的微?；Ｗ由蠂婌F干燥表面活性劑的包衣，制得混懸劑制劑(參見，例如WO99/53901和WO 00/61108)。制備適合可吸入粒子的方法以及適于吸入給藥給藥的制劑和裝置參見美國專利號(hào)6,268,533、5,983,956、5,874,063和6,221,398，WO 99/55319和WO 00/30614。
將要理解，適于特定給藥方式的本發(fā)明化合物的任何形式(即，游離堿、藥用鹽或溶劑合物)，可被用于上述的藥物組合物中。
活性化合物適用作β2腎上腺素能受體激動(dòng)劑，因此適用于治療哺乳動(dòng)物中由β2腎上腺素能受體介導(dǎo)的或與β2腎上腺素能受體活性有關(guān)的醫(yī)學(xué)上的疾病或病況，即，被通過用β2腎上腺素能受體激動(dòng)劑治療改善的醫(yī)學(xué)病況。所述醫(yī)學(xué)病況包括但不限于，肺疾病如哮喘或慢性阻塞性肺病、早產(chǎn)、神經(jīng)障礙、心臟障礙或炎癥。
活性化合物在大的劑量范圍內(nèi)有效，并且一般以治療有效量給藥。然而，將要理解，實(shí)際給藥的化合物量將由醫(yī)生按照有關(guān)的情況包括將要治療的病況、選擇的給藥途徑、實(shí)際給藥的化合物及其相對(duì)活性、個(gè)體患者的年齡、體重和反應(yīng)、患者癥狀的嚴(yán)重性等來決定的。
吸入給藥的治療藥的合適劑量在約0.05μg/天至約1000μg/天的一般范圍內(nèi)，優(yōu)選是約0.1μg/天至約500μg/天。將要理解的是，在確定吸入給藥的適合劑量中，要考慮遞送到特定遞送裝置的肺特征的活性劑部分。
化合物可以周期性的劑量給藥每周一次、每周多次、每日一次或每日多次劑量。治療方案可能需要延長的時(shí)間段給藥，例如持續(xù)幾周或數(shù)月，或治療方案可能需要長期給藥。口服給藥的合適劑量在約0.05μg/天至約100mg/天的一般范圍內(nèi)，優(yōu)選是約0.5μg/天至約1000μg/天。
在其它性質(zhì)中，已發(fā)現(xiàn)本發(fā)明的化合物是強(qiáng)有力的和選擇性的β2腎上腺素能受體激動(dòng)劑。特別地，與β1和β3腎上腺素能受體比較，本發(fā)明的化合物證明對(duì)β2腎上腺素能受體有極好的選擇性。此外，已發(fā)現(xiàn)本發(fā)明的化合物具有令人驚奇和出人意料的作用持續(xù)時(shí)間。如以下生物試驗(yàn)中描述的，本發(fā)明的化合物已證明在支氣管保護(hù)的動(dòng)物模型中的作用時(shí)間大于24小時(shí)。
本發(fā)明的因此提供了一種治療哺乳動(dòng)物中與β2腎上腺素能受體活性有關(guān)的疾病或病況的方法，它包括向該哺乳動(dòng)物給予治療有效量的本發(fā)明的化合物或含本發(fā)明化合物的藥物組合物。
本活性劑還可以和一種或多種其它的治療藥聯(lián)合給藥。例如，本活性劑可以與一種或多種治療藥聯(lián)合給藥，所述治療藥選自抗炎藥(例如，皮質(zhì)類固醇類和非甾體類抗炎藥(NSAIDs)、抗膽堿能藥(尤其是毒蕈堿性受體拮抗劑)、其它β2腎上腺素能受體激動(dòng)劑、抗感染藥(例如，抗生素或抗病毒藥)或抗組胺劑。因此，在進(jìn)一步方面，本發(fā)明提供包含本發(fā)明的化合物和一種或多種治療藥例如，抗炎藥、抗膽堿能藥、另外的β2腎上腺素能受體激動(dòng)劑、抗感染藥或抗組胺劑的組合。
其它的治療藥可以制藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑合物的形式使用。合適時(shí)，其它治療藥可以光學(xué)純的立體異構(gòu)體形式使用。
適合的抗炎藥包括皮質(zhì)類固醇類和NSAIDs?？梢耘c本發(fā)明的化合物聯(lián)合使用的合適的皮質(zhì)類固醇類為那些口服和吸入的皮質(zhì)類固醇類及其具有抗炎活性的前藥。實(shí)例包括甲基潑尼松龍、潑尼松龍、地塞米松、氟替卡松丙酸酯、6α，9α-二氟-17α-[(2-呋喃基羰基)氧基]-11β-羥基-16α-甲基-3-氧代-雄甾-1，4-二烯-17β-硫代羥酸S-氟代甲酯、6α，9α-二氟-11β-羥基-16α-甲基-3-氧代-17α-丙酰氧基-雄甾-1，4-二烯-17β-硫代羥酸S-(2-氧代-四氫-呋喃-3S-基)酯、倍氯米松酯(例如，17-丙酸酯或17，21-二丙酸酯)、布地奈德、氟尼縮松、莫米松酯(例如，糠酸酯)、曲安奈德、羅氟奈德、環(huán)索奈德、布替可特丙酸酯、RPR-106541和ST-126。優(yōu)選的皮質(zhì)類固醇類包括氟替卡松丙酸酯、6α，9α-二氟-11β-羥基-16α-甲基-17α-[(4-甲基-1，3-噻唑-5-羰基)氧基]-3-氧代-雄甾-1，4-二烯-17β-硫代羥酸S-氟代甲酯和6α，9α-二氟-17α-[(2-呋喃基羰基)氧基]-11β-羥基-16α-甲基-3-氧代-雄甾-1，4-二烯-17β-硫代羥酸S-氟代甲酯，更優(yōu)選為6α，9α-二氟-17α-[(2-呋喃基羰基)氧基]-11β-羥基-16α-甲基-3-氧代-雄甾-1，4-二烯-17β-硫代羥酸S-氟代甲酯。
合適的NSAIDs包括色甘酸鈉、奈多羅米鈉、磷酸二酯酶(PDE)抑制劑(例如茶堿、PDE4抑制劑或者混合的PDE3/PDE4抑制劑)、白三烯拮抗劑(例如，孟魯司特)、白三烯合成抑制劑、iNOS抑制劑、蛋白酶抑制劑如類胰蛋白酶和彈性蛋白酶抑制劑、β-2整聯(lián)蛋白拮抗劑和腺苷受體激動(dòng)劑或拮抗劑(例如腺苷2a激動(dòng)劑)、細(xì)胞因子拮抗劑(例如趨化因子拮抗劑，如白介素抗體(αIL抗體)、特別地αIL-4療法、αIL-13療法或其組合)；或者細(xì)胞因子合成抑制劑。合適的其它的β2-腎上腺素受體激動(dòng)劑包括沙美特羅(例如昔萘酸鹽)、沙丁胺醇(例如作為硫酸鹽或者游離堿)、福美特羅(例如作為富馬酸鹽)、非諾特羅或者特布他林和它們的鹽。
還感興趣的是本活性劑與磷酸二酯酶4(PDE4)抑制劑或混合的PDE3/PDE4抑制劑聯(lián)合的用途。典型的磷酸二酯酶-4(PDE4)抑制劑或混合的PDE3/PDE4抑制劑包括，但是不限于，順式4-氰基-4-(3-環(huán)戊氧基-4-甲氧基苯基)環(huán)己烷-1-羧酸、2-甲氧甲酰-4-氰基-4-(3-環(huán)丙基甲氧基-4-二氟甲氧基苯基)環(huán)己烷-1-酮、順式-[4-氰基-4-(3-環(huán)丙基甲氧基-4-二氟甲氧基苯基)環(huán)己烷-1-醇]、順式-4-氰基-4-[3-(環(huán)戊氧基)-4-甲氧基苯基]環(huán)己烷-1-羧酸等，或其藥學(xué)上可接受的鹽。其它典型的PDE4或混合的PDE3/PDE4抑制劑包括AWD-12-281(elbion)、NCS-613(INSERM)、D-4418(Chiroscience和Schering-Plough)、CI-1018或PD-168787(Pfizer)、WO 99/16766中公開的苯并間二氧雜環(huán)戊烯化合物(Kyoma Hakko)、K-34(Kyowa Hakko)、V-11294A(Napp)、羅氟司特(Byk-Gulden)、WO99/47505中公開的pthalazinone化合物(Byk-Gulden)、普馬芬群(Byk-Gulden，目前為Altana)、阿羅茶堿(Almirall-Prodesfarma)、VM554/UM565(Vernalis)、T-440(Tanabe Seiyaku)和T2585(Tanabe Seiyaku)。
合適的抗膽堿能藥是充當(dāng)毒蕈堿性受體拮抗劑的那些化合物，特別是M1、M2或M3受體及其組合的拮抗劑的那些化合物。示范性化合物包括顛茄植物的生物堿，例如阿托品、東莨菪堿、后馬托品、莨菪堿；這些化合物通常是作為叔胺的鹽而給藥的。這些藥物、特別是鹽形式容易從大量商業(yè)來源獲得或者可以利用文獻(xiàn)資料制備，即阿托品-CAS-51-55-8或CAS-51-48-1(無水形式)，阿托品硫酸鹽-CAS-5908-99-6；阿托品氧化物-CAS-4438-22-6或其HCl鹽-CAS-4574-60-1和甲基阿托品硝酸鹽-CAS-52-88-0。
后馬托品-CAS-87-00-3，氫溴酸鹽-CAS-51-56-9，甲基溴化物鹽-CAS-80-49-9。
莨菪堿(d，l)-CAS-101-31-5，氫溴酸鹽-CAS-306-03-6和硫酸鹽-CAS-6835-16-1。
東莨菪堿-CAS-51-34-3，氫溴酸鹽-CAS-6533-68-2，甲基溴化物鹽-CAS-155-41-9。
優(yōu)選抗膽堿能藥包括以愛全樂(Atrovent)的名稱銷售的異丙托銨(例如溴化物形式)，氧托銨(例如溴化物形式)和噻托銨(例如溴化物形式)(CAS-139404-48-1)。還感興趣的有甲胺太林(CAS-53-46-3)、溴化丙胺太林(CAS-50-34-9)、甲溴辛托品或Valpin 50(CAS-80-50-2)、克利溴銨(Quarzan，CAS-3485-62-9)、copyrrolate(Robinul)、異丙碘銨(CAS-71-81-8)、溴美噴酯(美國專利2,918,408)、氯化三乙己苯銨(Pathilone，CAS-4310-35-4)和甲硫己環(huán)銨(Tral，CAS-115-63-9)。還參見鹽酸環(huán)噴托酯(CAS-5870-29-1)、托吡卡胺(CAS-1508-75-4)、鹽酸苯海索(CAS-144-11-6)、哌侖西平(CAS-29868-97-1)、替侖西平(CAS-80880-90-9)、AF-DX 116或美索曲明和在WO 01/04118中公開的化合物，其公開在本文中引入作為參考。
合適的抗組胺劑(也稱作H1-受體拮抗劑)包括大量已知抑制H1-受體并且對(duì)于人類使用是安全的拮抗劑中的任何一種或者多種。全部為組胺與H1-受體相互作用的可逆的、競爭性抑制劑。這些抑制劑的大部分，大多數(shù)為第一代拮抗劑，基于其核心結(jié)構(gòu)被表征為乙醇胺類、乙二胺類和烷基胺類。此外，其它的第一代抗組胺劑包括那些可以基于哌嗪和吩噻嗪來表征的藥物。第二代拮抗劑，其為非-鎮(zhèn)靜的，具有類似的結(jié)構(gòu)-活性關(guān)系，因?yàn)樗鼈儽Ａ袅撕诵膩喴一?烷基胺類)或者模擬具有哌嗪或者哌啶的叔胺基團(tuán)。舉例說明的拮抗劑如下乙醇胺類馬來酸卡比沙明、富馬酸氯馬斯汀、鹽酸苯海拉明和茶苯海明。
乙二胺類馬來酸吡拉明、曲吡那敏HCl和枸櫞酸曲吡那敏。
烷基胺類氯苯那敏及其鹽例如馬來酸鹽和阿伐斯汀。
哌嗪類羥嗪HCl、雙羥萘酸羥嗪、賽克力嗪HCl、乳酸賽克力嗪、美克洛嗪HCl和西替利嗪HCl。
哌啶類阿斯咪唑、左卡巴斯汀HCl、氯雷他定或其脫乙氧甲酰(descarboethoxy)類似物，和特非那定和鹽酸非索非那定或者另一種藥學(xué)上可接受的鹽。
鹽酸氮卓斯汀也為另一種H1受體拮抗劑，其可以用于與本發(fā)明的化合物組合。
優(yōu)選的抗組胺劑的實(shí)例包括美沙吡林和氯雷他定。
因此，本發(fā)明在進(jìn)一步方面提供一種含式(I)的化合物或其制藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑合物或立體異構(gòu)體和皮質(zhì)類固醇類的組合。特別地，本發(fā)明提供一種組合，其中皮質(zhì)類固醇類是丙酸氟替卡松或其中皮質(zhì)類固醇類是6α，9α-二氟-17α-[(2-呋喃基羰基)氧基]-11β-羥基-16α-甲基-3-氧代-雄甾-1，4-二烯-17β-硫代羥酸S-氟代甲酯或6α，9α-二氟-11β-羥基-16α-甲基-3-氧代-17α-丙酰氧基-雄甾-1，4-二烯-17β-硫代羥酸S-(2-氧代-四氫-呋喃-3S-基)酯。
因此，本發(fā)明在進(jìn)一步方面提供了包含式(I)的化合物或其制藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑合物或立體異構(gòu)體和PDE4抑制劑的組合。
因此，本發(fā)明在進(jìn)一步方面提供了包含式(I)的化合物或其制藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑合物或立體異構(gòu)體和抗膽堿能藥的組合。
因此，本發(fā)明在進(jìn)一步方面提供了包含式(I)的化合物或其制藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑合物或立體異構(gòu)體和抗組胺劑的組合。
因此，本發(fā)明在進(jìn)一步方面提供了包含式(I)的化合物或其制藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑合物或立體異構(gòu)體連同PDE4抑制劑和皮質(zhì)類固醇類的組合。
因此，本發(fā)明在進(jìn)一步方面提供了包含式(I)的化合物或其制藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑合物或立體異構(gòu)體連同抗膽堿能藥和皮質(zhì)類固醇類的組合。
如以上組合中所用的，術(shù)語“式(I)的化合物”包括式(II)的化合物及其優(yōu)選的組，任何個(gè)別公開的化合物。
相應(yīng)地，本發(fā)明的藥物組合物可以任選包含式(I)的化合物或其制藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑合物或立體異構(gòu)體與一種或多種其它治療藥的組合，如以上所述的。
這樣的組合的單一化合物可以以分開或者組合的藥用制劑連續(xù)或者同時(shí)給藥。已知治療藥的合適劑量對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員來講將是顯而易見的。因此，本發(fā)明的治療方法包括以分開或者組合的藥物制劑連續(xù)或者同時(shí)給予該類組合的單一化合物。
因此，根據(jù)進(jìn)一步方面，本發(fā)明提供治療哺乳動(dòng)物中與β2腎上腺素能受體活性有關(guān)的疾病或病況的方法，包括對(duì)所述哺乳動(dòng)物給予治療有效量的式(I)的化合物或其制藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑合物或立體異構(gòu)體與一種或多種其它治療藥的組合。
由于本發(fā)明的化合物是β2腎上腺素能受體激動(dòng)劑，這類化合物還可以用作調(diào)查或研究含有β2腎上腺素能受體的生物系統(tǒng)或樣品的研究工具，或用來發(fā)現(xiàn)新的β2腎上腺素能受體激動(dòng)劑。而且，因?yàn)榕c其它β腎上腺素能亞型受體的結(jié)合和功能活性的比較，本發(fā)明的化合物表現(xiàn)出對(duì)β2腎上腺素能受體的選擇性，所以該類化合物還適用于研究生物系統(tǒng)或樣品中的β2腎上腺素能受體的選擇性激動(dòng)的作用。任何含β2腎上腺素能受體的合適的生物系統(tǒng)或樣品可用于這樣的研究中，該研究可以在體外或體內(nèi)進(jìn)行。
適合于這樣研究的典型生物系統(tǒng)或樣品包括，但不限于細(xì)胞、細(xì)胞提取物、質(zhì)膜、組織樣品、哺乳動(dòng)物(如小鼠、大鼠、豚鼠、兔、狗、豬等)等等。采用常規(guī)的操作和裝置，如放射配體結(jié)合試驗(yàn)和功能試驗(yàn)，來確定激動(dòng)β2腎上腺素能受體的效應(yīng)，例如如下所述的配體-介導(dǎo)的細(xì)胞內(nèi)環(huán)腺苷酸(cAMP)變化的測定或相似性質(zhì)的測定。本發(fā)明化合物的β2腎上腺素能受體激動(dòng)的量通常將在約1納摩爾至約1000納摩爾的范圍內(nèi)。當(dāng)本發(fā)明的化合物用作發(fā)現(xiàn)新的β2腎上腺素能受體激動(dòng)劑的研究工具時(shí)，本發(fā)明還包括，作為分開的實(shí)施方式，比較數(shù)據(jù)(使用合適的試驗(yàn))的產(chǎn)生和試驗(yàn)數(shù)據(jù)的分析以鑒定目標(biāo)試驗(yàn)化合物。
下面的非限制性實(shí)施例說明了本發(fā)明的典型的藥物組合物。用于本發(fā)明活性化合物的制劑的另外的合適載體還可以在RemingtonTheScience and Practice of Pharmacy，第二十版，Lippincott Williams &Willdns，Philadelphia，PA，2000中找到。
制劑實(shí)施例A這個(gè)實(shí)施例說明了用于本發(fā)明化合物口服給藥的典型藥物組合物的制備成分每片的量(mg)活性化合物 1乳糖、噴霧干燥的148硬脂酸鎂2混合上述成分，填充入硬殼明膠膠囊內(nèi)。
制劑實(shí)施例B這個(gè)實(shí)施例說明了用于本發(fā)明化合物口服給藥的另一個(gè)典型藥物組合物的制備成分每片的量(mg)活性化合物 1玉米淀粉50乳糖145硬脂酸鎂5以上成分直接混合，加壓成單刻痕片劑。
制劑實(shí)施例C這個(gè)實(shí)施例說明了用于本發(fā)明化合物口服給藥的典型藥物組合物的制備。
制備具有以下組成的口服混懸劑。
成分活性化合物3mg富馬酸0.5g氯化鈉2.0g尼泊金甲酯0.1g砂糖 25.5g山梨糖醇(70％溶液)12.85gVeegum K(Vanderbilt Co.) 1.0g妖味劑0.035mL著色劑0.5mg蒸餾水適量至100mL制劑實(shí)施例D這個(gè)實(shí)施例說明了含本發(fā)明化合物的典型藥物組合物的制備。
制備具有以下組成的緩沖至pH4的可注射的制劑成分活性化合物0.1mg醋酸鈉緩沖溶液(0.4M) 2.0mLHCl(1N) 適量至pH4水(蒸餾過的、無菌的) 適量至20mL
制劑實(shí)施例E這個(gè)實(shí)施例說明了用于注射本發(fā)明化合物的典型藥物組合物的制備。
通過向1mg的本發(fā)明的化合物中加入20mL的無菌水制備重構(gòu)的溶液。使用前，該溶液用200mL的可與活性化合物配伍的靜脈內(nèi)液體稀釋。這類液體選自5％葡萄糖溶液、0.9％氯化鈉或5％的葡萄糖和0.9％的氯化鈉的混合物。其它實(shí)例是乳酸鹽格林注射液、含5％葡萄糖的乳酸鹽格林注射液、Normosol-M和5％的葡萄糖、Isolyte E和?；母窳肿⑸湟骸?br> 制劑實(shí)施例F這個(gè)實(shí)施例說明了本發(fā)明化合物的局部施用的典型藥物組合物的制備。
成分克活性化合物 0.2-10司盤60 2吐溫60 2礦物油 5凡士林 10尼泊金甲酯 0.15尼泊金丙酯 0.05BHA(丁基化羥基苯甲醚) 0.01水 適量至100合并以上除了水的所有成分，攪拌下加熱至60℃。在劇烈攪拌下加入足量的60℃水使成分乳化，再適量加入水至100g。
制劑實(shí)施例G
這個(gè)實(shí)施例說明了含本發(fā)明化合物的典型藥物組合物的制備。
把0.1mg活性化合物的藥用鹽溶解于用檸檬酸酸化的0.9％的氯化鈉溶液中，制得用于霧化器的含水氣霧劑制劑。攪拌混合物并超聲處理直到活性鹽溶解。緩慢加NaOH調(diào)節(jié)溶液的pH至3-8的范圍內(nèi)的值。
制劑實(shí)施例H這個(gè)實(shí)施例說明了用于吸入藥筒的含本發(fā)化合物的干粉制劑的制備。
用具有下面組成的藥物組合物填充明膠吸入藥筒成分mg/藥筒活性化合物的藥用鹽0.2乳糖 25活性化合物的藥用鹽在與乳糖摻合前，先微?；Ｊ褂梅蹌┪肫鱽斫o予藥筒的內(nèi)含物。
制劑實(shí)施例I這個(gè)實(shí)施例說明了用于干粉吸入裝置的含本發(fā)明化合物的干粉制劑的制備。
制備微?；乃幱名}和乳糖的體積制劑比為1∶200的藥物組合物。把組合物填充入干粉吸入裝置，其能遞送每劑量約10μg-約100μg的活性藥物成分。
制劑實(shí)施例J這個(gè)實(shí)施例說明了用于定量吸入器中的含本發(fā)明化合物的制劑的制備。
通過將5g平均尺寸小于10μm的微粒化粒子形式的活性化合物分散于膠體溶液中制成含5％的活性化合物的藥用鹽、0.5％卵磷脂和0.5％海藻糖的混懸液，所述膠體溶液由0.5g的海藻糖和0.5g的卵磷脂溶解于100mL的軟化水中形成。將混懸液噴霧干燥，所得的物質(zhì)微?；玫狡骄睆叫∮?.5μm的粒子。該粒子裝填入含加壓的1，1，1，2-四氟乙烷的罐中。
制劑實(shí)施例K這個(gè)實(shí)施例說明了用于定量吸入器中的含本發(fā)明化合物的制劑的制備。
通過將10g平均尺寸小于10μm的微粒化粒子形式的活性化合物分散于溶液中制成含5％的活性化合物的藥用鹽、0.1％卵磷脂的混懸液，所述溶液由0.2g的卵磷脂溶解于200mL的軟化水中形成。將混懸液噴霧干燥，所得的物質(zhì)微?；玫狡骄睆叫∮?.5μm的粒子。該粒子裝填入含加壓的1，1，1，2，3，3，3-六氟-正丙烷的罐中。
生物學(xué)試驗(yàn)本發(fā)明的化合物及其制藥學(xué)上可接受的鹽，表現(xiàn)出生物活性并適用于醫(yī)學(xué)治療?；衔锝Y(jié)合β2腎上腺素能受體的能力，以及其選擇性、激動(dòng)劑效力和內(nèi)在活性，可以用以下的試驗(yàn)A-B證明，或可以使用本領(lǐng)域已知的其它試驗(yàn)證明。
縮寫％Eff％功效ATCC 美國典型培養(yǎng)物保藏中心BSA 牛血清白蛋白cAMP 3，:5，-環(huán)磷酸腺苷DMEM Dulbecco氏改進(jìn)的Eagle培養(yǎng)基
DMSO二甲亞砜EDTA乙二胺四乙酸Emax最大功效FBS 胎牛血清Gly 甘氨酸HEK-293 人胚腎-293PBS 磷酸鹽緩沖鹽水rpm 每分鐘轉(zhuǎn)數(shù)Tris三(羥甲基)氨基甲烷來自表達(dá)人β1或β2腎上腺素能受體的細(xì)胞的膜制劑使分別穩(wěn)定地表達(dá)克隆的人β2或β2腎上腺素能受體的HEK-293衍生的細(xì)胞系在存在500μg/mL遺傳霉素下在含10％透析的FBS的DMEM中生長到接近匯合。使用細(xì)胞刮板用Versene 1∶5,000(PBS中0.2g/L EDTA)提起細(xì)胞單層。通過在1,000rpm下離心沉淀細(xì)胞，細(xì)胞沉淀在-80℃下冷凍保存或立刻制備膜。就制備而言，將細(xì)胞沉淀再懸浮于溶胞緩沖液(10mM的Tris/HCL pH 7.4@4℃，每50mL的緩沖液(Roche cat.# 1697498，Roche Molecular Biochemicals，Indianapolis，IN)有一片“含2mM EDTA的完全性蛋白酶抑制劑混合物”)，并在冰上使用吻合緊密的Dounce玻璃勻漿器勻化(沖擊20次)。在20,000xg下離心勻漿，通過如上的再懸浮和離心，該沉淀用溶胞緩沖液洗一次。將最后的沉淀再懸浮于膜緩沖液(75mM的Tris/HCl pH 7.4，12.5mM的MgCl2，1mM的EDTA@25℃)。用Bradford的方法(Bradford MM.，Analytical Biochemistry，1976，72，248-54)測定膜懸浮液的蛋白質(zhì)濃度。以等分部分在-80℃下冷凍保存膜。
試驗(yàn)A對(duì)人β1和β2腎上腺素能受體的放射配體結(jié)合試驗(yàn)在96-孔微量滴定板中進(jìn)行結(jié)合試驗(yàn)，在測定緩沖液(75mM的Tris/HCl pH 7.4@25℃，12.5mM的MgCl2，1mM的EDTA，0.2％的BSA)中，總測定體積為100μL，對(duì)于含有人β2腎上腺素能受體的膜來說含有5μg膜蛋白，或?qū)τ诤腥甩?腎上腺素能受體的膜來說含2.5μg膜蛋白。采用[3H]二氫阿普洛爾(NET-720，100Ci/mmol，PerkinElmer Life Sciences Inc.，Boston，MA)在從0.01nM-200nM的10個(gè)不同的濃度范圍下，進(jìn)行用于測定放射性配體的Kd值的飽和結(jié)合研究。用1nM的[3H]二氫阿普洛爾在從40pM-10μM的10個(gè)不同的化合物濃度下，進(jìn)行用于測定化合物pKi值的置換試驗(yàn)。在溶解緩沖液(25mM的Gly-HCl，pH 3.0，含50％的DMSO)中將化合物溶解至濃度為10mM，然后在50mM的pH 3.0的Gly-HCl中稀釋至1mM，從這里連續(xù)稀釋成測定緩沖液。在存在10μM的未標(biāo)記的阿普洛爾的條件下，測定非特異結(jié)合。測定在室溫下孵育90分鐘，通過預(yù)先浸漬在0.3％的聚乙烯亞胺中的GF/B玻璃纖維濾板(PackardBioScience Co.，Meriden，CT)快速過濾使反應(yīng)終止。濾板用過濾緩沖液(75mM的Tris/HCl，pH 7.4@4℃，12.5mM的MgCl2，1mM的EDTA)沖洗三次除去未結(jié)合放射性。將板干燥，加入50μL的Microscint-20液體閃爍流體(Packard BioScience Co.，Meriden，CT)，板在液體閃爍計(jì)數(shù)器(Packard BioScience Co.，Meriden，CT)計(jì)數(shù)。采用使用一位點(diǎn)競爭的3參數(shù)模型的GraphPad Prism軟件包(GraphPad Software，Inc.，San Diego，CA)通過非線性回歸分析分析結(jié)合數(shù)據(jù)。當(dāng)存在10μM的阿普洛爾的條件下測定時(shí)，曲線最小值固定在非特異結(jié)合的值上。采用Cheng-Prusoff方程式，從觀察到的IC50值和放射性配體的Kd值計(jì)算化合物的Ki值(Cheng Y.和Prusoff WH.，Biochemical Pharmacology，1973年，22期，23期，第3099-108頁)。受體亞型選擇性計(jì)算為Ki(β1)/Ki(β2)之比。本發(fā)明的化合物證明對(duì)β2腎上腺素能受體的結(jié)合大于對(duì)β1腎上腺素能受體的結(jié)合，即，Ki(β1)＞Ki(β2)，選擇性大于約100。
試驗(yàn)B用分別異源地表達(dá)人β1腎上腺素受體、β2腎上腺素受體和β3腎上腺素受體的細(xì)胞系的全細(xì)胞cAMP快速板(Flashplate)試驗(yàn)使穩(wěn)定地表達(dá)克隆的人β1腎上腺素能受體(克隆H34.1)的HEK-293細(xì)胞系，在由用10％的FBS和500μg/mL的遺傳霉素補(bǔ)充的DMEM組成的培養(yǎng)基中長到約70％-90％的匯合。使穩(wěn)定地表達(dá)克隆的人β2-腎上腺素受體(克隆H24.14)的HEK-293細(xì)胞系在相同的培養(yǎng)基中長到全部匯合。使穩(wěn)定地表達(dá)人β3-腎上腺素受體的CHO-K1的細(xì)胞系在用10％FBS和每第五傳代加入800μg/mL的遺傳霉素補(bǔ)充的Ham’s F-12培養(yǎng)基中長到70％-90％的匯合。在測定前一天，培養(yǎng)物都轉(zhuǎn)換到相同的不含抗生素的生長培養(yǎng)基中。
根據(jù)廠商的說明書，采用含125I-cAMP的快速板腺苷酸環(huán)化酶活化測定系統(tǒng)(NEN SMP004，PerkinElmer Life Sciences Inc.，Boston，MA)的放射免疫測定格式進(jìn)行cAMP的測定。
在測定的當(dāng)天，細(xì)胞用PBS漂洗一次，用Versene 1∶5,000(PBS中含0.2g/L的EDTA)提起并計(jì)數(shù)。在1,000rpm下離心沉淀細(xì)胞，并再懸浮在預(yù)加熱至37℃的刺激緩沖液中。對(duì)于表達(dá)β1-腎上腺素受體的細(xì)胞來說，將10nM的ICI 118，551加入刺激緩沖液，細(xì)胞在37℃下孵育10分鐘。對(duì)于表達(dá)β1-腎上腺素受體-、β2-腎上腺素受體-和β3-腎上腺素受體的細(xì)胞，分別以30,000、40,000和70,000個(gè)細(xì)胞/孔的最后濃度使用細(xì)胞。將化合物溶解于DMSO至10mM的濃度，然后用50mM的pH 3.0的Gly-HCl稀釋至1mM，從這里連續(xù)稀釋成測定的緩沖液(75mM的Tris/HCl，pH 7.4@25℃，12.5mM的MgCl2，1mM的EDTA，0.2％的BSA)?；衔镌跍y定法中以10μM-9.5pM的11個(gè)不同的濃度進(jìn)行試驗(yàn)。反應(yīng)在37℃下孵育10分鐘，通過加入100μL的冰冷的檢測緩沖液停止反應(yīng)。將板密封，在4℃下孵育過夜，在第二天早上在topcount閃爍計(jì)數(shù)器(Packard BioScience Co.，Meriden，CT)中計(jì)數(shù)?；谟^察到的樣品和cAMP標(biāo)準(zhǔn)品的計(jì)數(shù)計(jì)算出反應(yīng)每mL產(chǎn)生的cAMP的量，如廠商的用戶說明書描述的。采用使用S形劑量響應(yīng)(希爾斜率＝1)的3參數(shù)模型的GraphPad Prism軟件包(GraphPad Software，Inc.，San Diego，CA)通過非線性回歸分析分析數(shù)據(jù)。激動(dòng)劑的效力表達(dá)為pEC50值。
在本測定中本發(fā)明的化合物證明了對(duì)β2腎上腺素能受體的強(qiáng)活性，如由pEC50值大于約8.5所證明的。此外，與對(duì)β1受體和β3受體的功能活性相比，測試的化合物證明了對(duì)β2受體的功能活性有選擇性。特別地，本發(fā)明的化合物證明了EC50(β1)/EC50(β2)之比大于約50，EC50(β3)/EC50(β2)之比大于約600。
試驗(yàn)C用內(nèi)源性地表達(dá)人β2腎上腺素能受體的肺上皮細(xì)胞系的全細(xì)胞cAMP快速板試驗(yàn)為了在表達(dá)內(nèi)源性水平的β2腎上腺素能受體的細(xì)胞系中測定激動(dòng)劑效力和功效(內(nèi)在活性)，使用人肺上皮細(xì)胞系(BEAS-2B)(ATCCCRL-9609，美國典型培養(yǎng)物保藏中心，Manassas，VA)(January B等人，British Journal of Pharmacology，1998年，123卷第4期，第701-711頁)。使細(xì)胞在完全、無血清的培養(yǎng)基(含腎上腺素和維甲酸的LHC-9MEDIUM，cat# 181-500，Biosource International，Camarillo，CA)生長到75％-90％的匯合。在測定前一天，培養(yǎng)基轉(zhuǎn)換為LHC-8(不含腎上腺素或維甲酸，cat# 141-500，Biosource International，Camarillo，CA)。
根據(jù)廠商的說明書，采用含125I-cAMP的快速板腺苷酸環(huán)化酶活化測定系統(tǒng)(NEN SMP004，PerkinElmer Life Sciences Inc.，Boston，MA)的放射免疫測定格式進(jìn)行cAMP的測定。
在測定的當(dāng)天，細(xì)胞用PBS漂洗，通過用5mMEDTA的PBS刮而提起，并計(jì)數(shù)。通過在1,000rpm下離心沉淀細(xì)胞，再以600,000細(xì)胞/mL的最后濃度再懸浮于預(yù)加熱至37℃的刺激緩沖液中。在測定中，細(xì)胞使用30,000細(xì)胞/孔的最終濃度。將化合物溶解于溶解緩沖液(25mM的pH 3.0的Gly-HCl，含50％的DMSO)中至10mM的濃度，然后用50mM的pH 3.0的Gly-HCl稀釋至1mM，從這里連續(xù)稀釋成測定的緩沖液(75mM的Tris/HCl，pH 7.4@25℃，12.5mM的MgCl2，1mM的EDTA，0.2％的BSA)。
化合物在測定中在10μM-40pM的10個(gè)不同濃度下進(jìn)行試驗(yàn)。最大響應(yīng)在存在10μM的異丙腎上腺素的條件下確定。反應(yīng)在37℃下孵育10分鐘，通過加入100μL的冰冷的檢測緩沖液停止反應(yīng)。把板密封，在4℃下孵育過夜，在第二天早上在topcount閃爍計(jì)數(shù)器(Packard BioScience Co.，Meriden，CT)中計(jì)數(shù)?；谟^察到的樣品和cAMP標(biāo)準(zhǔn)品計(jì)數(shù)計(jì)算出反應(yīng)每mL產(chǎn)生的cAMP的量，如廠商的用戶手冊中描述的。采用具有可變斜率的S形劑量響應(yīng)的4參數(shù)模型的GraphPad Prism軟件包(GraphPad Software，Inc.，San Diego，CA)通過非線性回歸分析進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。在這個(gè)測定中，試驗(yàn)的本發(fā)明的化合物證明pEC50值大于約8。
化合物的功效(％Eff)由觀察到的Emax(擬合曲線的頂點(diǎn))和從10μM的異丙腎上腺素獲得的最大響應(yīng)之比計(jì)算出，表達(dá)為相對(duì)于異丙腎上腺素的％Eff。試驗(yàn)的化合物證明％Eff大于約50。
試驗(yàn)D在豚鼠模型中測定抗乙酰膽堿誘導(dǎo)的支氣管痙攣的支氣管保護(hù)作用幾組體重介于250和350g之間的6只雄性豚鼠(Duncan-Hartley(HsdPocDH)Harlan，Madison，WI)，用籠子卡片單獨(dú)辨別。整個(gè)研究過程，允許研究的動(dòng)物隨意地接觸食物和水。
在全身暴露給藥室(R & S Molds，San Carlos，CA)中，在10分鐘內(nèi)通過吸入給予試驗(yàn)化合物。安排給藥室，使氣霧劑從中央總管同時(shí)遞送到6個(gè)個(gè)體隔室。60分鐘適應(yīng)期并暴露于霧化的注射用水(WFI)10分鐘后，將豚鼠暴露于試驗(yàn)化合物或載體(WFI)的氣霧劑。這些氣霧劑由使用22psi壓力的氣體混合物(CO2＝5％、O2＝21％和N2＝74％)推動(dòng)的LC Star霧化裝置(型號(hào)22F51，PARI Equipment，Inc.Midlothian，VA)的水溶液產(chǎn)生。在該操作壓力下通過霧化器的氣流量大約是3L/分鐘。產(chǎn)生的氣霧劑通過正壓推進(jìn)腔內(nèi)。未稀釋的空氣在遞送氣霧化溶液的過程中使用。在10分鐘的霧化過程中，大約霧化了1.8mL的溶液。通過比較霧化前和霧化后填充的霧化器的重量，用重量分析法測量出霧化的溶液的量。
服藥后1.5、24、48和72小時(shí)，采用全身體積描記法評(píng)價(jià)吸入法給藥的化合物的支氣管保護(hù)的效果。肺評(píng)估開始前45分鐘，每只豚鼠肌內(nèi)注射氯胺酮(43.75mg/kg)、賽拉嗪(3.50mg/kg)、乙酰丙嗪(1.05mg/kg)來麻醉。將外科手術(shù)位點(diǎn)剃毛和用70％的酒精清潔過后，做一個(gè)2-5cm的頸腹側(cè)面的中線切口。然后，分離頸靜脈，用充滿鹽水的聚乙烯導(dǎo)管(PE-50，Becton Dickinson，Sparks，MD)插管，允許靜脈內(nèi)輸注0.1mg/mL的乙酰膽堿(Ach)(Sigma-Aldrich，St.Louis，MO)的鹽水溶液。然后，解剖游離氣管，用14G聚四氟乙烯管(#NE-014，SmallParts，Miami Lakes，F(xiàn)L)插管。如果需要，通過另外肌肉內(nèi)注射前面提及的麻醉劑混合物來保持麻醉。如果動(dòng)物對(duì)捏擰其爪有反應(yīng)或其呼吸率大于100次/分鐘，監(jiān)視并調(diào)節(jié)麻醉的深度。
一旦完成插管，將動(dòng)物置于在體積描記器(#PLY3114，BuxcoElectronics，Inc.，Sharon，CT)上，插入食管壓力插管來測量肺驅(qū)動(dòng)壓(壓力)。將聚四氟乙烯氣管的導(dǎo)管連在體積描記器的開口上，允許豚鼠呼吸來自給室外面的室內(nèi)空氣。然后密封室。加熱燈用于維持體溫，用4mL的空氣使豚鼠的肺膨脹3次，采用10mL的標(biāo)定注射器(#5520系列，Hans Rudolph，Kansas City，MO)，來確保下氣道不會(huì)萎陷和動(dòng)物不會(huì)遭受通氣過度。
一旦確定順應(yīng)性的基線值在0.3-0.9mL/cm H2O的范圍內(nèi)，阻力在每秒0.1-0.199cm H2O/mL的范圍內(nèi)，就開始肺的評(píng)估。Buxco肺測量計(jì)算機(jī)程序能夠采集并導(dǎo)出肺的值。開始該程序起動(dòng)了實(shí)驗(yàn)方案和數(shù)據(jù)采集。通過Buxco壓力傳感器測量每次呼吸在體積描記器內(nèi)出現(xiàn)的隨時(shí)間的體積變化。通過整合隨時(shí)間出現(xiàn)的信號(hào)，計(jì)算出每次呼吸的流量的量度。該信號(hào)與肺的驅(qū)動(dòng)壓變化，使用Sensym壓力傳感器(#TRD4100)采集，通過Buxco(MAX 2270)前置放大器連接至數(shù)據(jù)采集界面(#′s SFT3400和SFT3813)。所有其它與肺的參數(shù)從這兩個(gè)輸入值導(dǎo)出。
基線值采集5分鐘，5分鐘后用Ach攻擊豚鼠。Ach從實(shí)驗(yàn)開始按照下述的劑量和規(guī)定的時(shí)間從注射器泵(sp210iw，World PrecisionInstruments，Inc.，Sarasota，F(xiàn)L)中由靜脈內(nèi)輸入1分鐘在5分鐘時(shí)1.9μg/分，在10分鐘時(shí)3.8μg/分，在15分鐘時(shí)7.5μg/分，在20分鐘時(shí)15.0μg/分，在25分鐘時(shí)30μg/分，在30分鐘時(shí)60μg/分。如果在每次Ach劑量后3分鐘阻力或順應(yīng)性沒有回到基線值，豚鼠的肺用來自10mL的標(biāo)定注射器的4mL的空氣膨脹3次。記錄的肺參數(shù)包括呼吸(呼吸/分鐘)、順應(yīng)性(mL/cm H2O)和肺阻力(每秒cmH2O/mL)(Giles等，1971)。一旦在這個(gè)程序的35分鐘完成肺功能測量，將豚鼠從體積描記器上移開，通過CO2窒息安樂死。
量PD2，其定義為使基線肺阻力加倍的所需Ach的量，其采用肺阻力值計(jì)算出，所述肺阻力值使用下列方程式由一系列Ach攻擊過程中的流量和壓力導(dǎo)出。從診所中用于計(jì)算PC2值的方程式得到該量(Am.Thoracic Soc，2000)。
PD2=antilog[logC1+(logC2-logC1)(2R0-R1)R2-R1]]]>其中C1＝倒數(shù)第二個(gè)Ach濃度(C2前面的濃度)C2＝最后的Ach濃度(濃度導(dǎo)致肺阻力(RL)增加兩倍的濃度)R0＝基線RL值R1＝C1后的RL值R2＝C2后的RL值使用單因素方差分析進(jìn)行數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)分析，接著使用Bonferroni/Dunn檢驗(yàn)的post-hoc分析。P-值＜0.05認(rèn)為是顯著的。
劑量-響應(yīng)曲線用四參數(shù)對(duì)數(shù)方程擬合，采用GraphPad Prism，Windows 3.00版本(GraphPad Software，San Diego，California)。
Y＝Min+(Max-Min)/(1+10^((logED50-X)*希爾斜率))，其中X是劑量的對(duì)數(shù)，Y是響應(yīng)值(PD2)，Y在最小值開始，漸近接近到最大值，具有S形。
發(fā)現(xiàn)本發(fā)明典型的化合物在服藥后超過24小時(shí)的時(shí)間點(diǎn)上具有顯著的支氣管保護(hù)活性。
提供以下的合成實(shí)施例用于說明本發(fā)明，無論如何并不理解為限制本發(fā)明的范圍。
實(shí)施例一般原則除非另外指出，試劑、原料和溶劑是從商業(yè)供應(yīng)商處購得，例如Sigma-Aldrich(St.Louis，MO)、J.T.Baker(Phillipsburg，NJ)和Honeywell Burdick和Jackson(Muskegon，MI)，并且無需進(jìn)一步純化而使用；反應(yīng)在氮保護(hù)氣氛下進(jìn)行；用薄層色譜法(二氧化硅TLC)、分析性高效液相色譜法(分析性HPLC)或質(zhì)譜測定法監(jiān)測反應(yīng)混合物；反應(yīng)混合物通常用硅膠急驟柱色譜法或用制備性HPLC，采用以下所述的一般方案提純；NMR試樣溶解于氘代溶劑(CD3OD、CDCl3或DMSO-d6)中，并用Varian Gemini 2000儀器(300MHz)在標(biāo)準(zhǔn)參數(shù)下獲得光譜；以及采用Perkin Elmer儀器(PE SCIEX API 150EX)的電噴霧離子化方法(ESMS)進(jìn)行質(zhì)譜測定法鑒別。
實(shí)施例15-((R)-2-{2-[4-((R)-2-氨基-2-苯基乙氨基)-苯基]乙氨基}-1-羥乙基)-8-羥基-1H-喹啉-2-酮的合成a.[2-(4-硝基苯基)乙基]氨基甲酸叔丁基酯的制備重碳酸二叔丁基酯(20g，92mmol)懸浮在飽和的碳酸氫鈉(200mL)中，冷卻至0℃。加入二噁烷(10mL)。在水(150mL)中制備2-(4-硝基苯基)乙胺鹽酸鹽(20g，99mmol)的溶液，并滴加。加成的過程中，出現(xiàn)結(jié)晶。添加完成后，混合物在0℃下再攪拌15分鐘，再在室溫下攪拌16小時(shí)。過濾收集產(chǎn)物，用500mL的水洗，風(fēng)干。
b.[2-(4-氨基苯基)乙基]氨基甲酸叔丁基酯的制備向上步的部分干燥的餅中加入碳載鈀(2g，10％Pd)，緊接著加入甲醇(250mL，在氮?dú)庀?。氣體用氫氣代替，混合物在大氣壓下攪拌24小時(shí)。鈀殘?jiān)ㄟ^過濾除去，溶劑通過減壓除去。獲得標(biāo)題中間產(chǎn)物，為米色固體(20g，85mmol，二步的產(chǎn)率為93％)。
c.(R)-{[4-(2-叔-丁氧基羰基氨乙基)苯氨基甲?；鵠苯基-甲基氨基甲酸叔丁基酯的制備在氮?dú)庀?，將[2-(4-氨基苯基)乙基]氨基甲叔丁基酯(1g，4.2mmol)、((R)-叔-丁氧基羰基氨基)苯乙酸(920mg，3.7mmol)和1-羥基苯并三唑(600mg，4.4mmol)溶解于N，N-二甲基甲酰胺(10mL)中，冷卻至0℃。加入1-(3-二甲基氨丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(850mg，4.4mmol)，混合物在0℃下攪拌10分鐘，再在室溫下攪拌21小時(shí)?；旌衔镌谒鸵宜嵋阴ブg分配，有機(jī)物用0.5M的檸檬酸、飽和的碳酸氫鈉和飽和的氯化鈉洗滌。有機(jī)物通過硫酸鈉干燥，再蒸干。標(biāo)題中間產(chǎn)物無需進(jìn)一步純化即可使用。
d.(R)-2-氨基-N-[4-(2-氨乙基)苯基]-2-苯乙酰胺的制備將上步的粗制產(chǎn)物溶解于二氯甲烷(10mL)中，加入三氟乙酸(10mL)。混合物攪拌1小時(shí)，再減壓除去揮發(fā)物。該油狀物用二氯甲烷吸收，用1N的氫氧化鈉洗滌。二氯甲烷相通過硫酸鈉干燥，再蒸干，得到標(biāo)題中間產(chǎn)物(690mg，2.6mmol)，其無需進(jìn)一步純化即可使用。
e.(R)-N2-[4-(2-氨乙基)苯基]-1-苯乙烷-1，2-二胺的制備將上步的粗制產(chǎn)物(690mg，2.6mmol)溶解于四氫呋喃(7mL)中，用硼烷-二甲基硫化物絡(luò)合物(1mL)處理?；旌衔锘亓?小時(shí)，并冷卻至室溫。加入甲醇(30mL)，蒸干混合物。又加入甲醇(30mL)，再蒸干混合物。標(biāo)題中間產(chǎn)物無需進(jìn)一步純化即可使用。
f.5-((R)-2-{2-[4-((R)-2-氨基-2-苯基乙氨基)苯基]乙氨基}-1-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)乙基)-8-芐氧基-1H-喹啉-2-酮的制備在氮?dú)庀?，上步的粗制產(chǎn)物(330mg，1.3mmol)、8-芐氧基-5-[(R)-2-溴代-1-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)乙基]-1H-喹啉-2-酮(490mg，1.0mmol)、碘化鈉(150mg，1.0mmol)和碳酸氫鈉(250mg，3.0mmol)用二甲亞砜(2.5mL)處理，加熱至140℃，持續(xù)15分鐘?；旌衔锢鋮s到室溫，在水和乙酸乙酯中分配。有機(jī)物用飽和的氯化鈉洗滌，通過硫酸鈉干燥，再蒸干。產(chǎn)物用反相HPLC純化，再凍干分離得到標(biāo)題中間產(chǎn)物，為其三氟乙酸鹽。
g.5-((R)-2-{2-[4-((R)-2-氨基-2-苯基乙氨基)苯基]乙氨基}-1-羥乙基)-8-芐氧基-1H-喹啉-2-酮的制備將上步的產(chǎn)物溶解于四氫呋喃(1.5mL)中，用三乙胺-三氟化氫(160μL)處理24小時(shí)。混合物分配于1N的氫氧化鈉和乙酸乙酯之間。有機(jī)物通過無水硫酸鈉干燥，蒸干得到標(biāo)題中間產(chǎn)物(42mg)，其無需進(jìn)一步純化即可使用。
h.5-((R)-2-{2-[4-((R)-2-氨基-2-苯基乙氨基)苯基]乙氨基}-1-羥乙基)-8-羥基-1H-喹啉-2-酮的合成上步的粗制產(chǎn)物(42mg)溶解于二氯甲烷(1mL)中，并加入三氯化硼(二氯甲烷中1.0M，400μL)。15分鐘后，加入水(5mL)和乙腈(500μL)，減壓除去二氯甲烷。標(biāo)題化合物通過反相HPLC純化，凍干分離其三氟醋酸鹽。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)10.4(br s，2H)，9.2(br s，1H)，8.6(br s，3H)，8.1(d，1H，J＝10.2Hz)，7.2-7.4(m，5H)，7.0(d，1H，8.2Hz)，6.8-6.9(m，3H)，6.5(d，2H，J＝8.0Hz)，6.4(s，1H，J＝10.2Hz)，5.3(br d，1H，J＝7.7Hz)，4.3(m，1H)，3.4(dd，1H，J＝7.1，13.9Hz)，3.3(dd，1H，J＝6.5，13.9Hz)，2.8-3.0(m，4H)，2.6-2.8(m，2H)。C27H30N4O3的m/z[M+H+]計(jì)算值459.2；實(shí)測值459.4。
實(shí)施例2N-[5-((R)-2-{2-[4-((R)-2-氨基-2-苯基-乙氨基)苯基]乙氨基}-1-羥乙基)-2-羥基苯基]-甲酰胺的合成a.N-[5-((R)-2-{2-[4-((R)-2-氨基-2-苯基乙氨基)苯基]-乙氨基}-1-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)乙基)-2-芐氧基苯基]甲酰胺的制備在氮?dú)庀?，粗制?R)-N2-[4-(2-氨乙基)苯基]-1-苯乙烷-1，2-二胺(實(shí)施例1，步驟e)(320mg，1.3mmol)、N-[2-芐氧基-5-((R)-2-溴-1-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)乙基)苯基]甲酰胺(450mg，1.0mmol)、碘化鈉(150mg，1.0mmol)和碳酸鉀(550mg，4.0mmol)用二甲亞砜(2.5mL)處理，加熱到140℃，持續(xù)15分鐘?；旌衔锢鋮s到室溫，分配于水和乙酸乙酯之間。有機(jī)物用飽和的氯化鈉洗滌，通過硫酸鈉干燥，再蒸干。產(chǎn)物用反相HPLC純化，再凍干分離得到標(biāo)題中間產(chǎn)物，為其三氟乙酸鹽。
b.N-[5-((R)-2-{2-[4-((R)-2-氨基-2-苯基乙氨基)苯基]乙氨基}-1-羥乙基)-2-芐氧基苯基]甲酰胺的制備將上步的產(chǎn)物溶解于四氫呋喃(2.0mL)中，用三乙胺-三氟化氫(200μL)處理23小時(shí)?；旌衔锓峙溆?N的氫氧化鈉和乙酸乙酯之間。有機(jī)物通過無水硫酸鈉干燥，蒸干得到標(biāo)題中間產(chǎn)物(55mg)，其無需進(jìn)一步純化即可使用。
c.N-[5-((R)-2-{2-[4-((R)-2-氨基-2-苯基乙氨基)苯基]乙氨基}-1-羥乙基)-2-羥苯基]甲酰胺的合成在氮?dú)庀?，向上步的產(chǎn)物(55mg)和碳載鈀(11％Pd，11g)的混合物中加入甲醇(2mL)。在氫氣(大氣壓力)下劇烈攪拌混合物23小時(shí)。過濾除去催化劑，用檸檬酸酸化溶液，加水稀釋。標(biāo)題化合物通過反相HPLC純化，凍干分離其三氟醋酸鹽。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)10.0(s，1H)，9.5(s，1H)，8.5(br s，2H)，8.3(br s，3H)，8.2(s，1H)，8.0(s，1H)，7.2-7.4(m，5H)，6.9(d，2H，J＝8.0Hz)，6.8(dd，1H)，6.7(d，1H，J＝8.2Hz)，6.5(d，2H，J＝8.2Hz)，6.0(m，1H)，5.6(m，1H)，4.6(m，1H)，4.2(m，1H)，2.8-3(m，4H)，2.6-2.7(m，2H)。C25H30N4O3的m/z[M+H+]計(jì)算值435.2；實(shí)測值435.3。
實(shí)施例35-((R)-2-{2-[4-((R)-2-氨基-2-苯基-乙氨基)苯基]乙氨基}-1-羥乙基)-8-羥基-1H-喹啉-2-酮的可替代合成a.(S)-2-[4-(2-氨乙基)苯基氨基]-1-苯基乙醇的制備向1000mL的3-頸燒瓶中加入20g的(147mmol)的2-(4-氨基苯基)乙胺和30mL的1，3-二甲基-3，4，5，6-四氫-2(1H)嘧啶酮(DMPU)。反應(yīng)燒瓶裝配有上置的攪拌器和溫度計(jì)。反應(yīng)燒瓶用氮?dú)馇鍧?，置于冷水浴中。反?yīng)混合物裝入165mL(165mmol)的含1.0M的雙(三甲基甲硅烷基)酰胺鈉的四氫呋喃(溫度保持在30℃以下)。強(qiáng)烈攪拌下，一份份地加入雙(三甲基甲硅烷基)酰胺鈉溶液。反應(yīng)混合物冷卻至-10℃，并加入(S)-氧化苯乙烯(17mL，150mmol)。控制添加的速率，保持溫度在-10℃以下。加入(S)-氧化苯乙烯后，使反應(yīng)在15分鐘內(nèi)加溫至20℃，在30分鐘內(nèi)達(dá)到28℃。反應(yīng)冷卻至25℃，通過滴加90mL的水來猝滅。反應(yīng)混合物轉(zhuǎn)移到分液漏斗中，用100mL的乙酸異丙酯稀釋，并用90mL的飽和氯化鈉水溶液洗滌。有機(jī)層用90mL的水和90mL的飽和氯化鈉水溶液的混合物洗三次，最后用180mL的飽和氯化鈉水溶液洗。有機(jī)層在真空中濃縮。殘留物從異丙醇(100mL部分)中再濃縮兩次，再溶于異丙醇(500mL)，在攪拌下加熱至70℃。2分鐘內(nèi)加入濃鹽酸(27mL，327mmol)。允許混合物冷卻到室溫，并攪拌14小時(shí)。沉淀產(chǎn)物過濾分離，用異丙醇和乙酸異丙酯洗滌。產(chǎn)物在50℃的水浴中真空干燥1小時(shí)，再溶于80mL的水中，轉(zhuǎn)移到分液漏斗中。加入乙酸異丙酯(80mL)和10N的氫氧化鈉水溶液(40mL，400mmol)。搖晃分液漏斗，分離相。有機(jī)層用40mL飽和的NaCl洗一次，并通過硫酸鎂干燥。收集固體，濃縮濾液。從甲苯中再濃縮殘留物兩次得到標(biāo)題中間產(chǎn)物，為油狀物(14.7g，59mmol，40％)。
b.5-((R)-2-{2-[4-((S)-2-羥基-2-苯基乙氨基)苯基]-乙氨基}-1-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)乙基)-8-芐氧基-1H-喹啉-2-酮的制備在氮?dú)庀拢?S)-2-[4-(2-氨基乙基)-苯基氨基]-1-苯基乙醇(1.7g，6.6mmol)和8-芐氧基-5-[(R)-2-溴-1-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)乙基]-1H-喹啉-2-酮(1.5g，3.1mmol)用二甲亞砜(4.0mL)處理，加熱到120℃，維持40分鐘?；旌衔锞徛鋮s至室溫，分配于水和乙酸乙酯之間(傾析除去一些不溶的膠質(zhì)殘余后)。有機(jī)物用0.9M的乙酸鈉/乙酸、飽和的碳酸氫鈉和飽和的氯化鈉洗滌，通過硫酸鈉干燥，再蒸干。標(biāo)題中間產(chǎn)物無需進(jìn)一步純化即可使用。
c.5-((R)-2-{2-[4-((R)-2-疊氮基-2-苯基乙氨基)苯基]乙氨基}-1-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)乙基)-8-芐氧基-1H-喹啉-2-酮的制備在氮?dú)庀拢瑢⑸喜降漠a(chǎn)物(500g，0.75mmol)溶解于四氫呋喃(9mL)，并用二苯基磷?；B氮化物(325μL，1.5mmol)和1，8-二氮雜雙環(huán)[5.4.0]十一碳-7-烯(226μL，1.5mmol)處理?；旌衔锘亓?.5小時(shí)，再冷卻到室溫16小時(shí)。加入另外的二苯基磷?；B氮化物(160μL，0.75mmol)和1，8-二氮雜雙環(huán)[5.4.0]十一碳-7-烯(113μL，0.75mmol)，混合物進(jìn)一步回流3小時(shí)，再冷卻至室溫?；旌衔锓峙溆谝宜嵋阴ズ退g。有機(jī)物用0.9M的乙酸鈉/乙酸、飽和的碳酸氫鈉和飽和的氯化鈉洗滌，通過硫酸鈉干燥，再蒸干。產(chǎn)物通過反相HPLC純化，并凍干分離得到標(biāo)題中間產(chǎn)物，為其三氟乙酸鹽(110mg)。
d.5-((R)-2-{2-[4-((R)-2-疊氮基-2-苯基乙氨基)苯基]乙氨基}-1-羥乙基)-8-芐氧基-1H-喹啉-2-酮的制備將上步的產(chǎn)物(110mg)溶解于四氫呋喃(2.0mL)，并用三乙胺-三氟化氫(200μL)處理23小時(shí)?；旌衔锓峙溆?N的氫氧化鈉和乙酸乙酯之間。有機(jī)物通過無水硫酸鈉干燥，蒸干得到標(biāo)題中間產(chǎn)物(50mg)，其無需進(jìn)一步純化即可使用。
e.5-((R)-2-{2-[4-((R)-2-氨基-2-苯基乙氨基)苯基]-乙氨基}-1-羥乙基)-8-羥基-1H-喹啉-2-酮的合成在氮?dú)庀?，向上步的產(chǎn)物(50mg)和碳載鈀(10％Pd，10mg)的混合物中加入二氯甲烷(500μL)和乙醇(500μL)。在氫氣下(大氣壓力)強(qiáng)烈攪拌混懸液23小時(shí)。加入另外的催化劑(10mg)和N，N-二甲基甲酰胺(1mL)，進(jìn)一步攪拌混懸液24小時(shí)。過濾除去催化劑，減壓濃縮混合物。標(biāo)題化合物通過反相HPLC純化并凍干分離，為其三氟乙酸鹽。
實(shí)施例4N-[5-((R)-2-{2-[4-((R)-2-氨基-2-苯基-乙氨基)苯基]乙氨基}-1-羥乙基)-2-羥苯基]-甲酰胺的可替代合成a.N-[5-((R)-2-{2-[4-((S)-2-羥基-2-苯基乙氨基)苯基]-乙氨基}-1-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)乙基)-2-芐氧基苯基]甲酰胺的制備在氮?dú)庀拢?S)-2-[4-(2-氨乙基)苯基氨基]-1-苯基乙醇(實(shí)施例3，a部分)(1.7g，6.6mmol)、N-[2-芐氧基-5-((R)-2-溴代-1-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)乙基)苯基]甲酰胺(2.4g，5.2mmol)、碳酸鉀(2.8g，20mmol)和碘化鈉(860mg，5.7mmol)用二甲亞砜(4.7mL)處理，并加熱到140℃，維持12分鐘。混合物冷卻至室溫，并分配于水和50％的乙酸乙酯/乙酸異丙酯之間(傾析除去一些不溶的膠質(zhì)殘余后)。有機(jī)物用水、0.9M的乙酸鈉/乙酸、飽和的碳酸氫鈉和飽和的氯化鈉洗滌，通過硫酸鈉干燥，并蒸干。標(biāo)題中間產(chǎn)物無需進(jìn)一步純化即可使用。
b.N-[5-((R)-2-{2-[4-((R)-2-疊氮基-2-苯基乙氨基)苯基]-乙氨基}-1-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)乙基)-2芐氧基苯基]甲酰胺的制備在氮?dú)庀?，將上步的產(chǎn)物(900mg，1.4mmol)溶解于四氫呋喃(9mL)，并用二苯基磷?；B氮化物(610μL，2.8mmol)和1，8-二氮雜雙環(huán)[5.4.0]十一碳-7-烯(420μL，2.8mmol)處理?；旌衔锘亓?.5個(gè)小時(shí)，再冷卻到室溫16個(gè)小時(shí)。加入另外的二苯基磷酰疊氮化物(305μL，1.4mmol)和1，8-二氮雜雙環(huán)[5.4.0]十一碳-7-烯(210μL，1.4mmol)，混合物進(jìn)一步回流3小時(shí)，再冷卻至室溫?；旌衔锓峙溆谝宜嵋阴ズ退g。有機(jī)物用0.9M的乙酸鈉/乙酸、飽和的碳酸氫鈉和飽和的氯化鈉洗滌，通過硫酸鈉干燥，再蒸干。產(chǎn)物通過反相HPLC純化，并凍干分離得到標(biāo)題中間產(chǎn)物，為其三氟乙酸鹽(180mg)。
c.N-[5-((R)-2-{2-[4-((R)-2-疊氮基-2-苯基乙氨基)苯基]-乙氨基}-1-羥乙基)-2-芐氧基苯基]甲酰胺的制備上步的產(chǎn)物(130mg)溶解于四氫呋喃(2.0mL)，并用三乙胺-三氟化氫(200μL)處理23小時(shí)?；旌衔锓峙溆?N的氫氧化鈉和乙酸乙酯之間。有機(jī)物通過無水硫酸鈉干燥，蒸干得到標(biāo)題中間產(chǎn)物(90mg)，其無需進(jìn)一步純化即可使用。
d.N-5-((R)-2-{2-[4-((R)-2-氨基-2-苯基乙氨基)苯基]-乙氨基}-1-羥乙基)-2-羥苯基]甲酰胺的合成在氮?dú)庀?，向上步所得的產(chǎn)物(90mg)和碳載鈀(10％Pd，18mg)的混合物中加入二氯甲烷(1mL)和乙醇(1mL)。在氫氣下(大氣壓力)強(qiáng)烈攪拌混懸液23小時(shí)。加入另外的催化劑(18mg)和N，N-二甲基甲酰胺(1mL)，進(jìn)一步攪拌混懸液24小時(shí)。過濾除去催化劑，減壓濃縮混合物。標(biāo)題化合物通過反相HPLC純化，并凍干分離，為其三氟乙酸鹽。
實(shí)施例5(R)-N2-[4-(2-氨基乙基)苯基]-1-苯乙烷-1，2-二胺的可替代制備a.[2-(4-氨基苯基)乙基]氨基甲酸叔丁基酯的制備向0℃下4-氨基苯乙胺(65.1g，1.0當(dāng)量)的二氯甲烷(1.5L)混懸液中逐滴加入含重碳酸二叔丁基酯(99.2g，0.95當(dāng)量)的二氯甲烷(300mL)。溶液緩慢加熱至室溫，攪拌18個(gè)小時(shí)。加入水(200mL)，在減壓蒸發(fā)去溶劑到約1L的體積，分離水層和有機(jī)層。有機(jī)層用水(200mL)洗，緊接著用飽和的氯化鈉水溶液(100mL)洗。有機(jī)層通過無水硫酸鈉(40g)干燥。過濾固體，濃縮濾液得到粗制的標(biāo)題中間產(chǎn)物(100.7g)，其混懸于己烷(745mL)和乙酸乙酯(150mL)的混合物。加熱漿液直至獲得澄清的溶液，溶液再緩慢冷卻到室溫。過濾所得的結(jié)晶，用10％的乙酸乙酯/己烷溶液(100mL)沖洗，真空干燥得標(biāo)題中間產(chǎn)物(55.1g，產(chǎn)率48％)。
b.(R)-{[4-(2-叔丁氧基羰基氨基乙基)苯基氨基甲酰基]苯基-甲基氨基甲酸叔丁基酯的制備用上步的產(chǎn)物(30.0g，1.07當(dāng)量)、((R)-叔丁氧基羰基氨基)苯乙酸(30.0g，1.0當(dāng)量)以及1-羥基-7-氮雜苯并三唑(16.3g，1.01當(dāng)量)的N，N-二甲基甲酰胺(240mL)溶液裝入1升的燒瓶中。攪拌溶液，直到全部固體溶解。溶液在冰浴中冷卻15分鐘，加入1-[3-二甲氨丙基]-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(26.9g，1.18當(dāng)量)。反應(yīng)在0℃下攪拌80分鐘?；旌衔锓峙溆谒鸵宜嵋阴ブg，有機(jī)相用水、1N的鹽酸、飽和的碳酸氫鈉水溶液和飽和的氯化鈉水溶液按順序洗滌。有機(jī)層通過無水硫酸鈉干燥。過濾固體，濃縮濾液得到標(biāo)題中間產(chǎn)物，為固體(57g，定量產(chǎn)率)，其無需進(jìn)一步純化即可使用。
c.(R)-2-氨基-N-[4-(2-氨基乙基)苯基]-2-苯乙酰胺的制備將上步的粗制產(chǎn)物(57g)與二甲亞砜(100mL)合并?；旌衔锢鋮s至0℃，15分鐘內(nèi)加入三氟乙酸(150mL)?；旌衔镌谑覝叵聰嚢?.5小時(shí)，然后減壓除去揮發(fā)物。所得的油狀物用二氯甲烷(300mL)吸收，加入1N的氫氧化鈉(200mL)，緊接著加入10N的氫氧化鈉(50mL)。分離層，堿性水層用二氯甲烷(3×200mL)萃取。合并有機(jī)層，通過無水硫酸鈉(20g)干燥。過濾除去固體，濃縮濾液得到標(biāo)題中間產(chǎn)物(33.3g，定量產(chǎn)率)，其無需進(jìn)一步純化即可使用。
d.(R)-N2-[4-(2-氨基乙基)苯基]-1-苯乙烷-1，2-二胺的制備將上步的粗制產(chǎn)物(33.3g，1.0當(dāng)量)溶于四氫呋喃(250mL)中，在冰浴中冷卻。加入硼烷-二甲基硫化物絡(luò)合物(45.5mL，4.0當(dāng)量)。溶液加熱至65℃，攪拌2小時(shí)，然后冷卻至0℃。加入甲醇(650mL)，接著加入三氟乙酸(5mL)，蒸干混合物。殘留物溶解于甲醇(200mL)中，接著加入三氟乙酸(5mL)，再蒸干。殘留物溶解于甲醇(150mL)中，加入1N的氫氧化鈉(150mL)，接著加入10N的氫氧化鈉(40mL)。濃縮溶液，除去有機(jī)溶劑，殘留的水層用二氯甲烷(400mL，接著3×100mL)萃取。合并有機(jī)層，通過無水硫酸鈉干燥。過濾除去固體，濃縮濾液得到粗制的標(biāo)題產(chǎn)物(29.8g)。
將粗制的產(chǎn)物溶于乙醇(600mL)中，在80℃下攪拌30分鐘。加入L-蘋果酸(16.6g，1.06當(dāng)量)的水(90mL)溶液，接著逐滴加入乙醇(350mL)。混合物在80℃下攪拌30分鐘，然后在室溫下攪拌12小時(shí)。通過真空抽濾收集固體，用10％水/乙醇(130mL)漂洗，再用乙醇(130mL)漂洗。結(jié)晶在真空下干燥得到標(biāo)題中間產(chǎn)物的L-蘋果酸鹽(38.6g)。將該L-蘋果酸鹽溶解于水(150mL)中，加入二氯甲烷(175mL)。攪拌混合物，冷卻至0℃，加入10.0N的氫氧化鈉(50mL)。分離層，水層用二氯甲烷萃取(2×175mL)。合并有機(jī)層并用無水硫酸鈉(20g)干燥。過濾除去固體，濃縮濾液得到標(biāo)題產(chǎn)物(24.9g，對(duì)映體過量(e.e.)＞99％)，為無色油。
實(shí)施例6N-[5-((R)-2-{2-[4-((R)-2-氨基-2-苯基乙氨基)苯基]乙氨基}-1-羥乙基)-2-羥基苯基]-甲酰胺的可替代合成a.N-[5-((R)-2-{2-[4-((R)-2-氨基-2-苯基乙氨基)苯基]-乙氨基}-1-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)乙基)-2-芐氧基苯基]甲酰胺的制備在氮?dú)庀拢瑢?R)-N2-[4-(2-氨基乙基)苯基]-1-苯乙烷-1，2-二胺(實(shí)施例5)(22.4g，1.4當(dāng)量)、N-[2-芐氧基-5-((R)-2-溴代-1-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)乙基)苯基]甲酰胺(29.2g，1.0當(dāng)量)、碳酸鉀(34.7g，4.0當(dāng)量)與二甲亞砜(35mL)合并。所得的漿液在100℃下攪拌85分鐘?；旌衔锢鋮s至室溫，加入水(200mL)和乙酸異丙酯(200mL)。分離層，有機(jī)層用水(200mL)洗，接著用飽和氯化鈉水溶液(150mL)洗，通過無水硫酸鎂(20g)干燥。過濾除去固體，濃縮濾液得到粗制的標(biāo)題中間產(chǎn)物，為琥珀色油。
b.N-[5-((R)-2-{2-[4-((R)-2-氨基-2-苯基乙氨基)苯基]-乙氨基}-1-羥乙基)-2-芐氧基苯基]甲酰胺的制備將上步的產(chǎn)物(50.5g，1.0當(dāng)量)溶于四氫呋喃(300mL)，并在室溫下用三乙胺-三氟化氫(19.1g，1.5當(dāng)量)處理12小時(shí)。潷去有機(jī)物上層清夜并丟棄，向剩下的含產(chǎn)物的膠質(zhì)固體中加入乙酸異丙酯(200mL)，接著加入1.0N的氫氧化鈉水溶液(200mL)。攪拌混合物直到大多數(shù)固體溶解。潷出二相混合物的上層，并保存。把乙酸異丙酯(150mL)加入水層，攪拌直到所有的固體都溶解，然后將二相混合物與保留的有機(jī)層合并。分離層，堿性水層再用乙酸異丙酯(150mL)萃取。合并有機(jī)層，通過無水硫酸鈉干燥。過濾除去固體，蒸發(fā)掉溶劑得到粗制的標(biāo)題中間產(chǎn)物(38.3g)，為琥珀色殘留物。
粗制產(chǎn)物分成三批。在一典型批次中，將粗制產(chǎn)物(18.1g)溶于乙腈(125mL)中，蒸干溶液。殘留物用水(40mL)、乙腈(20mL)和乙酸(4mL)稀釋。過濾溶液，用制備性HPLC純化，合并干凈的部分，凍干濃縮得到標(biāo)題中間產(chǎn)物的三氟乙酸鹽，為無定形固體。三個(gè)批次的總產(chǎn)量20g，產(chǎn)率34％。
c.N-[5-((R)-2-{2-[4-((R)-2-氨基-2-苯基乙氨基)苯基]乙氨基}-1-羥乙基)-2-羥基苯基]甲酰胺的合成將上步的產(chǎn)物(16.0g，1.0當(dāng)量)溶解于四氫呋喃(640mL)，在氮?dú)饬飨录尤胩驾d氫氧化鈀(3.2g，0.2當(dāng)量)。在氫氣下攪拌溶液3-5小時(shí)。反應(yīng)燒瓶用氮?dú)馇鍧?，反?yīng)混合物通過硅藻土(celite)(30.0g)過濾，用四氫呋喃(100mL)洗。在真空下除去溶劑得到粗制的標(biāo)題中間產(chǎn)物(16.0g)，為油狀物。
粗制產(chǎn)為分成三批。在一典型批中，將粗制產(chǎn)物(4.0g)溶于水(10mL)中，攪拌10分鐘溶解。過濾溶液，用制備性HLPC純化，合并干凈的部分，凍干濃縮得到標(biāo)題中間產(chǎn)物的三氟乙酸鹽，為無定形固體。三個(gè)批次的總產(chǎn)量8.4g，產(chǎn)率60％。
實(shí)施例7結(jié)晶N-[5-((R)-2-{2-[4-((R)-2-氨基-2-苯基乙氨基)苯基]乙氨基}-1-羥乙基)-2-羥苯基]甲酰胺鹽酸鹽的合成a.N-[5-((R)-2-{2-[4-((R)-2-氨基-2-苯基乙氨基)苯基]-乙氨基}-1-羥乙基)-2-芐氧基苯基]甲酰胺游離堿的制備將N-[5-((R)-2-{2-[4-((R)-2-氨基-2-苯基乙氨基)苯基]-乙氨基}-1-羥乙基)-2-芐氧基苯基]甲酰胺的三氟乙酸鹽(實(shí)施例6，b部分)分配于二氯甲烷(100mL)和1.0N的氫氧化鈉水溶液(100mL)之間。有機(jī)層用另外的1.0N的氫氧化鈉水溶液(100mL)洗，接著用水(100mL)洗。有機(jī)層通過無水硫酸鈉干燥15分鐘。通過真空抽濾收集固體，蒸發(fā)掉溶劑得到標(biāo)題中間產(chǎn)物，為油狀物。
b.N-[5-((R)-2-{2-[4-((R)-2-氨基-2-苯基乙氨基)苯基]-乙氨基}-1-羥乙基)-2-羥苯基]甲酰胺游離堿的制備向上步所得的產(chǎn)物(1.5g)中加入碳(300mg)載氫氧化鈀20％w/w，接著加入1∶1的四氫呋喃∶乙醇混合物(60mL)。在氫氣下，所得的漿液強(qiáng)烈攪拌過夜。過濾除去催化劑，在真空下濃縮濾液得到粗制的標(biāo)題產(chǎn)物(1.2g)。
c.N-[5-((R)-2-{2-[4-((R)-2-氨基-2-苯基乙氨基)苯基]-乙氨基}-1-羥乙基)-2-羥苯基]甲酰胺鹽酸鹽的晶種的制備在一圓底燒瓶中，將上步的游離堿產(chǎn)物(120mg)和異丙醇(3.6mL)在50℃下攪拌直到溶液變成單相的，接著加入0.5N的HCl(0.58mL)，溶液在50℃下再攪拌5分鐘。溶液在1.5小內(nèi)逐漸冷卻至室溫，然后攪拌過夜。過濾所得的結(jié)晶并真空干燥得到標(biāo)題的結(jié)晶產(chǎn)物(78.0mg)。
d.結(jié)晶N-[5-((R)-2-{2-[4-((R)-2-氨基-2-苯基乙氨基)苯基]乙氨基}-1-羥乙基)-2-羥苯基]甲酰胺鹽酸鹽的合成在一圓底燒瓶中，將步驟b的游離堿產(chǎn)物(1.0g)在45℃下溶解于異丙醇(30mL)中，直到溶液變成單相，接著加入0.5N的HCl(4.8mL)。溶液加熱幾分鐘，加入在上步中產(chǎn)生的晶種(約5mg)。溶液冷卻至35℃并攪拌2小時(shí)。溶液在2小時(shí)內(nèi)緩慢冷卻至室溫。分離所得的結(jié)晶，空氣過濾干燥得到標(biāo)題鹽酸鹽(690mg)。加入異丙醇(7mL)和水(3.36mL)，結(jié)晶再在40℃加熱。加入異丙醇(14mL)，漿液攪拌1小時(shí)。溶液緩慢冷卻至室溫，然后再在40℃加熱5小時(shí)。溶液緩慢冷卻至室溫，攪拌過夜。過濾分離結(jié)晶，風(fēng)干得到標(biāo)題結(jié)晶鹽酸鹽(550mg)。
實(shí)施例8結(jié)晶N-[5-((R)-2-{2-[4-((R)-2-氨基-2-苯基乙氨基)苯基]乙氨基}-1-羥乙基)-2-羥苯基]甲酰胺鹽酸鹽的表征如實(shí)施例7、d部分制備的標(biāo)題的結(jié)晶鹽酸鹽的樣品被表征如下1H NMR(300MHz)9.5(s，1H)，8.2(s，1H)，8.0(br s，1H)，7.1-7.4(m，6H)，6.7-6.9(m，5H)，6.4(d，2H)，5.5(br s，2H)，4.5(d，1H)，4.0(t，1H)，3.1(br s，2H)，2.6-2.8(m，4H)，2.3(m，5H)；C25H30N4O3的m/z[M+H+]的計(jì)算值435.4，實(shí)測值435.5；C25H30N4O3·HCl的元素分析(wt％)計(jì)算值C，63.8，H，6.6，N，11.9，O 10.2，Cl 7.5；實(shí)測值C，63.7，H，6.8，N，11.8，O，9.7，Cl 8.1；Karl Fisher分析法測的水含量為0.9％。
差示掃描量熱法軌跡(TA儀器型號(hào)DSC2010，在30℃下平衡，每分鐘5℃加熱直到300℃)在約185℃至約200℃之間的吸熱熱流中表現(xiàn)出一個(gè)尖峰。
在圖中顯示了使用采用Cu Kα發(fā)射(30kV，15mA)的Rigaku X-射線Miniflex衍射儀獲得粉末x-射線衍射圖，該衍射儀具有每分鐘3°的掃描速率并且每點(diǎn)0.030的步長。
實(shí)施例9N-[5-((R)-2-{2-[4-((S)-2-氨基-2-苯基乙氨基)苯基]乙氨基}-1-羥乙基)-2-羥苯基]甲酰胺的合成a.(S)-{[4-(2-叔丁氧基羰基氨基乙基)苯基氨基甲?；鵠苯基-甲基氨基甲酸叔丁基酯的制備在氮?dú)庀?，將[2-(4-氨基苯基)乙基]氨基甲酸叔丁基酯(3.95g，16.7mmol)、((S)-叔丁氧基羰基氨基)苯乙酸(3.97，15.7mmol)溶解于0.5M的1-羥基-7-氮雜苯并三唑的N，N-二甲基甲酰胺(31.76mL)溶液，并冷卻至0℃。加入1-[3-二甲基氨基丙基]-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(3.57g，18.6mmol)，混合物在0℃下攪拌10分鐘，然后在室溫下攪拌1.5小時(shí)?；旌衔锓峙溆谒鸵宜嵋阴ブg，有機(jī)物用1.0N的HCl、飽和的碳酸氫鈉和飽和的氯化鈉洗滌。有機(jī)物通過硫酸鈉干燥并蒸干。標(biāo)題中間產(chǎn)物無需進(jìn)一步純化即可使用。
b.(S)-2-氨基-N-[4-(2-氨基乙基)苯基]-2-苯乙酰胺的制備將上步的粗制產(chǎn)物溶于二氯甲烷(15mL)，冷卻至0℃。加入三氟乙酸(15mL)，混合物在0℃下攪拌30分鐘。溶液加溫到室溫，攪拌1小時(shí)，然后減壓除去揮發(fā)物。用二氯甲烷吸收油狀物，用1N的氫氧化鈉洗滌。有機(jī)相通過硫酸鈉干燥，并蒸干，得到標(biāo)題中間產(chǎn)物(4.3g，16.2mmol)，其無需進(jìn)一步純化即可使用。
c.(S)-N2-[4-(2-氨基乙基)苯基]-1-苯乙烷-1，2-二胺的制備上步的粗制產(chǎn)物(4.3g，16.2mmol)溶于四氫呋喃(50mL)中，用硼烷-二甲基硫化物絡(luò)合物(5.7mL)處理?；旌衔镌?5℃下回流2小時(shí)，冷卻至室溫。30分鐘內(nèi)加入甲醇(50mL)，接著加入三氟乙酸(3mL)，蒸干混合物。用甲醇(50mL)和三氟乙酸(1mL)吸收殘留物，再蒸干。所得到的油狀物用甲醇(30mL)溶解，再用1.0N的氫氧化鈉(30mL)溶解，接著添加10.0N的氫氧化鈉(5mL)。攪拌溶液10分鐘，用水稀釋，用二氯甲烷萃取。有機(jī)層通過硫酸鈉干燥，并蒸干。粗制的標(biāo)題產(chǎn)物(3.7g，14.4mmol)再溶于乙醇(105mL)，加熱至80℃。向已加熱的溶液中加入D-蘋果酸(2.16g，16.1mmol)的水(5.3mL)溶液，接著加入乙醇(45mL)，以及用1.0N NaOH和飽和的氯化鈉洗滌有機(jī)物。溶液冷卻至室溫，攪拌15小時(shí)。過濾沉淀，分配于水和二氯甲烷之間，以及用1.0N NaOH和飽和的氯化鈉洗滌有機(jī)物。有機(jī)物通過硫酸鈉干燥，蒸干得到標(biāo)題中間產(chǎn)物(2.0g，7.8mmol)。
d.N-[5-((R)-2-{2-[4-((S)-2-氨基-2-苯基乙氨基)苯基]-乙氨基}-1-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)乙基)-2芐氧基苯基]甲酰胺的制備在氮?dú)庀?，上步的粗制產(chǎn)物(431mg，1.7mmol)、N-[2-芐氧基-5-((R)-2-溴代-1-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)乙基)苯基]甲酰胺(471mg，1.0mmol)、碳酸氫鈉(300mg，3.5mmol)用二甲亞砜(1.2mL)處理，在100℃加熱1小時(shí)。混合物冷卻至室溫，分配于加入水和乙酸乙酯之間。有機(jī)物用飽和氯化鈉洗滌，通過硫酸鈉干燥并蒸干。標(biāo)題中間產(chǎn)物無需進(jìn)一步純化即可使用。
e.N-[5-((R)-2-{2-[4-((S)-2-氨基-2-苯基乙氨基)苯基]-乙氨基}-1-羥乙基)-2-芐氧基苯基]甲酰胺的制備將上步的產(chǎn)物溶于四氫呋喃(5mL)，并用三乙胺-三氟化氫(823μL)處理8小時(shí)?；旌衔锓峙溆?N的氫氧化鈉和二氯甲烷之間。有機(jī)物通過無水硫酸鈉干燥并蒸干。產(chǎn)物用反相HLPC提純，凍干分離得到標(biāo)題，為其三氟乙酸鹽(150mg，0.2mmol)。
f.N-[5-((R)-2-{2-[4-((S)-2-氨基-2-苯基乙氨基)苯基]-乙氨基}-1-羥乙基)-2-羥基苯基]甲酰胺的合成將上步的產(chǎn)物(150mg，0.2mmol)溶解于乙醇(5mL)和乙酸(5mL)，在氮?dú)饬飨录尤?0％Pd(OH)2(2.4mg)。大氣壓下用氫氣清潔反應(yīng)瓶，在氫氣下攪拌20小時(shí)。濾除催化劑，蒸發(fā)掉揮發(fā)物。標(biāo)題化合物用反相HPLC提純并凍干分離，為其三氟乙酸鹽(79.0mg，0.12mmol)。C25H30N4O3的m/z[M+H+]計(jì)算值435.2；實(shí)測值435.8。
實(shí)施例105-((R)-2-{2-[4-((S)-2-氨基-2-苯基乙氨基)苯基]乙氨基}-1-羥乙基)-8-羥基-1H-喹啉-2-酮的合成采用與實(shí)施例9的步驟d、e和f相似的操作，在步驟d中用8-芐氧基-5-[(R)-2-溴代-1-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)乙基]-1H-喹啉-2-酮代替N-[2-芐氧基-5-((R)-2-溴代-1-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)乙基)苯基]甲酰胺，得到標(biāo)題化合物的三氟乙酸鹽。C27H30N4O3的m/z[M+H+]計(jì)算值459.2；實(shí)測值459.4。
實(shí)施例115-((R)-2-{2-[4-((R)-2-甲氨基-2-苯基乙氨基)苯基]乙氨基}-1-羥乙基)-8-羥基-1H-喹啉-2-酮的合成a.(R)-(芐氧基羰基甲氨基)苯乙酸的制備在氮?dú)庀拢瑢?R)-(芐氧基羰基氨基)苯乙酸(2.0g，7.0mmol)用四氫呋喃溶解，加入氫化鈉(在礦物油中60％的分散體，840mg，21mmol)。向溶液中加入碘代甲烷(737mg，，50mmol)，反應(yīng)攪拌30分鐘。向反應(yīng)中加入水(1mL)，蒸發(fā)掉揮發(fā)物。用反相HLPC提純該產(chǎn)物，凍干分離得到標(biāo)題中間產(chǎn)物(1.66g，5.5mmol)。
b.(R)-[4-(2-叔丁氧基羰基氨基乙基)苯基氨基甲?；鵠-苯基甲基}甲基氨基甲酸芐基酯的制備在氮?dú)庀?，將[2-(4-氨基苯基)乙基]氨基甲酸叔丁基酯(1.31g，5.6mmol)、上步的產(chǎn)物(1.66g，5.6mmol)、1-羥基-7-氮雜苯并三唑(1.46g，10.5mmol)用N，N-二甲基甲酰胺(10mL)溶解，冷卻至0℃。加入1-(3-二甲基氨丙基)-3乙基碳二亞胺鹽酸鹽(2.02g，10.5mmol)，混合物在0℃下攪拌10分鐘，再在室溫下攪拌1.5小時(shí)。混合物在水和乙酸乙酯之間分配，有機(jī)物用1.0N的HCl、飽和的碳酸氫鈉和飽和的氯化鈉沖洗。有機(jī)物通過硫酸鈉干燥，并蒸干。標(biāo)題中間產(chǎn)物無需進(jìn)一步純化即可使用。
c.{(R)-[4-(2-氨基乙基)苯基氨基甲?；鵠苯基甲基}甲基氨基甲酸芐基酯的制備將上步的粗制產(chǎn)物溶解于二氯甲烷(5mL)，加入三氟乙酸(5mL)?；旌衔飻嚢?0分鐘，再減壓除去揮發(fā)物。用二氯甲烷吸收油狀物，用1N的氫氧化鈉洗滌。二氯甲烷相通過硫酸鈉干燥并蒸干，得到標(biāo)題中間產(chǎn)物，其無需進(jìn)一步純化即可使用。
d.(R)-N-[4-(2-氨基乙基)苯基]-2-甲氨基-2-苯乙酰胺的制備將上步的粗制產(chǎn)物(800mg，1.9mmol)用甲醇(5mL)和二氯甲烷(5mL)溶解，在氮?dú)庀录尤胩?200mg)載10％鈀。在大氣壓下，反應(yīng)燒瓶用氫氣清潔，反應(yīng)在氫氣下攪拌2小時(shí)。過濾除去鈀催化劑，蒸發(fā)掉揮發(fā)物，得到標(biāo)題中間產(chǎn)物。
e.(R)-N2-[4-(2-氨乙基)苯基]-N1-甲基-1-苯乙烷-1，2-二胺的制備將上步的粗制產(chǎn)物(523mg，1.84mmol)溶解于四氫呋喃(50mL)中，用硼烷-二甲基硫化物絡(luò)合物(0.7mL)處理?；旌衔镌?5℃下回流2小時(shí)，冷卻至室溫。加入甲醇(10mL)，接著加入含4.0N的二噁烷(1.4mL)，混合物攪拌10分鐘，然后蒸干。又用甲醇(50mL)和三氟乙酸(1mL)吸收該油，蒸干。所得的油然后用甲醇(10mL)和KOH(10mL的20％的水溶液)溶解，并攪拌10分鐘。溶液用水稀釋，用二氯甲烷萃取。有機(jī)層通過硫酸鈉干燥，蒸干。標(biāo)題中間產(chǎn)物，為油，其無需進(jìn)一步純化即可使用。
f.5-((R)-2-{2-[4-((R)-2-甲氨基-2-苯基乙氨基)苯基]乙氨基}-1-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)乙基)-8-芐氧基-1H-喹啉-2-酮的制備在氮?dú)庀?，上步的粗制產(chǎn)物(250mg，0.93mmol)、8-芐氧基-5-[(R)-2-溴代-1-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)乙基]-1H-喹啉-2-酮(454mg，0.93mmol)和碳酸氫鈉(234mg，2.8mmol)用二甲亞砜(10mL)處理，加熱至100℃，持續(xù)3小時(shí)?；旌衔锢鋮s到室溫，在水和乙酸乙酯中分配。有機(jī)物用飽和的氯化鈉洗滌，通過硫酸鈉干燥，蒸發(fā)。標(biāo)題中間產(chǎn)物無需進(jìn)一步純化即可使用。
g.5-((R)-2-{2-[4-((R)-2-甲氨基-2-苯基乙氨基)苯基]乙氨基}-1-羥乙基)-8-芐氧基-1H-喹啉-2-酮的制備上步的產(chǎn)物(80mg，0.12mmol)溶解于四氫呋喃(5mL)中，用三乙胺-三氟化氫(21μL)處理5小時(shí)。溶液蒸干，產(chǎn)物用反相HPLC純化，凍干分離得到標(biāo)題中間產(chǎn)物，為其三氟乙酸鹽。
h.5-((R)-2-{2-[4-((R)-2-甲氨基-2-苯基乙氨基)苯基]乙氨基}-1-羥乙基)-8-羥基-1H-喹啉-2-酮的合成。
將上步的產(chǎn)物(70mg)溶解于乙醇(2mL)，在氮?dú)庀录尤爰尤胩?14mg)載10％鈀。在大氣壓下，反應(yīng)燒瓶用氫氣在大氣壓下清潔，反應(yīng)在氫氣下攪拌2小時(shí)。過濾除去催化劑，蒸發(fā)掉揮發(fā)物，標(biāo)題化合物通過反相HPLC純化，凍干分離其三氟醋酸鹽(40mg，0.057mmol)。1H NMR(300MHz)10.6(br s，2H)，9.2(br d，2H)，8.8(br d，2H)，8.2(d，1H，J＝10.2Hz)，7.4-7.6(m，5H)，7.2(d，1H，8.2Hz)，6.9-7.0(m，3H)，6.5-6.6(m，3H)，6.2(br s，1H，)，5.3(br d，1H，J＝7.1Hz)，4.3(m，1H)，3.6(dd，1H，J＝7.0，14.0Hz)，3.3(dd，1H，J＝6.3，14.0Hz)，2.8-3.0(m，4H)，2.6-2.8(m，2H)，2.4(s，3H)。C28H32N4O3的m/z[M+H+]計(jì)算值473.3；實(shí)測值473.3。
實(shí)施例12N-[5-((R)-2-{2-[4-((S)-2-甲氨基-2-苯基乙氨基)苯基]乙氨基}-1-羥乙基)-2-羥苯基]-甲酰胺的合成采用和實(shí)施例11步驟f、g和h相似的操作，在步驟f中用N-[2-芐氧基-5-((R)-2-溴代-1-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)乙基)苯基]甲酰胺代替8-芐氧基-5-[(R)-2-溴代-1-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)乙基]-1H-喹啉-2-酮，得到標(biāo)題化合物的三氟乙酸鹽。1H NMR(300MHz)10.0(s，1H)，9.5(s，1H)，8.5(br s，2H)，8.5(br s，2H)，8.2(s，1H)，8.0(s，1H)，7.2-7.4(m，5H)，6.7-6.9(m，4H)，6.4(d，2H)，6.0(m，1H)，5.6(m，1H)，4.6(m，1H)，4.2(m，1H)，3.6(dd，1H，J＝7.1，14.0Hz)，3.3(dd，1H，J＝6.0，14.0Hz)，2.8-3(m，4H)，2.6-2.7(m，2H)，2.3(s，3H)。C26H32N4O3的m/z[M+H+]計(jì)算值449.3；實(shí)測值449.5。
根據(jù)其具體的實(shí)施方式描述了本發(fā)明，本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，在不背離本發(fā)明真實(shí)的精神和范圍下，可以產(chǎn)生多種變化并且可以取代同等物質(zhì)。此外，可以進(jìn)行很多修飾以適應(yīng)特定的情形、原料、物質(zhì)的組合物、方法、步驟，適應(yīng)本發(fā)明的目的、精神和保護(hù)范圍。所有這些修飾認(rèn)為是在本文中附加的權(quán)利要求的范圍之內(nèi)的。另外地，在上文中引用的所有的出版物、專利、專利文獻(xiàn)在本文中以全文引入作為參考，好像個(gè)別地引入作為參考。
權(quán)利要求
1.式(I)的化合物或其制藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑合物或立體異構(gòu)體 其中R1、R2、R3和R4各自獨(dú)立選自H、氨基、鹵素、羥基、-CH2OH和-NHCHO，或R1和R2連在一起是-NHC(＝O)CH＝CH-、-CH＝CHC(＝O)NH-、-NHC(＝O)S-或-SC(＝O)NH-；R5和R6各自獨(dú)立選自H、C1-6烷基、-C(＝O)Rd、C2-6鏈烯基、C2-6炔基和C3-6環(huán)烷基，其中C1-6烷基、C2-6鏈烯基、C2-6炔基和C3-6環(huán)烷基各自任選被一個(gè)或多個(gè)獨(dú)立選自芳基、雜芳基、雜環(huán)基、-ORa和-NRbRc的取代基取代，其中每個(gè)芳基、雜芳基和雜環(huán)基任選被一個(gè)或多個(gè)獨(dú)立選自-ORa和-NRbRc的取代基取代，或R5和R6與和它們連接的氮原子一起形成有5-7個(gè)環(huán)原子的雜環(huán)，其中該環(huán)任選含有另外的雜原子，所述雜原子獨(dú)立地選自O(shè)、N和S，其中S任選被一個(gè)或2個(gè)O取代；R7和R8各自獨(dú)立地是H或C1-6烷基；R9、R10和R11各自獨(dú)立地選自H、C1-6烷基、芳基、鹵素、-ORa、和-NRbRc；Rd是H或C1-3烷基，任選地被一個(gè)或多個(gè)獨(dú)立選自-ORa、-NRbRc、哌啶基和吡咯烷基的取代基取代；和Ra、Rb和Rc各自獨(dú)立地是H或C1-3烷基。
2.權(quán)利要求1的化合物，其中R1、R2、R3和R4各自獨(dú)立選自H、氨基、鹵素、羥基、-CH2OH和-NHCHO，或R1和R2連在一起是-NHC(＝O)CH＝CH-或-CH＝CHC(＝O)NH-。
3.權(quán)利要求1或2的化合物，其中R9、R10和R11均是H。
4.權(quán)利要求1至3的任一項(xiàng)所述的化合物，其中R7和R8均是H。
5.權(quán)利要求1的化合物，其是式(II)的化合物或其制藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑合物或立體異構(gòu)體 其中R1是-CH2OH或-NHCHO，R2是H；或R1和R2連在一起是-NHC(＝O)CH＝CH-或-CH＝CHC(＝O)NH-；R5和R6各自獨(dú)立選自H、C1-6烷基、C2-6鏈烯基、C2-6炔基和C3-6環(huán)烷基，其中C1-6烷基、C2-6鏈烯基、C2-6炔基和C3-6環(huán)烷基各自任選被一個(gè)或多個(gè)獨(dú)立地選自芳基、雜芳基、雜環(huán)基、-ORa和-NRbRc的取代基取代，其中芳基、雜芳基和雜環(huán)基各自任選被一個(gè)或多個(gè)獨(dú)立地選自-ORa和-NRbRc的取代基取代，或R5和R6與和它們連接的氮原子一起形成有5-7個(gè)環(huán)原子且含有1或2個(gè)雜原子的雜環(huán)，該雜原子獨(dú)立地選自O(shè)、N和S，其中S任選被一個(gè)或2個(gè)O取代；和Ra、Rb和Rc各自獨(dú)立地是H或C1-3烷基。
6.權(quán)利要求1至5任一項(xiàng)所述的化合物，其中R5和R6各自獨(dú)立地選自H、C1-6烷基和C3-6環(huán)烷基，其中每個(gè)C1-6烷基任選被一個(gè)或多個(gè)獨(dú)立地選自雜環(huán)基、-ORa和-NRbRc的取代基取代，或R5和R6與和它們連接的氮原子一起形成有5-7個(gè)環(huán)原子且含有1或2個(gè)雜原子的雜環(huán)，該雜原子獨(dú)立地選自O(shè)、N和S。
7.權(quán)利要求1至6任一項(xiàng)所述的化合物，其中R5和R6均獨(dú)立地是H或C1-3烷基，其中每個(gè)C1-3烷基任選被一個(gè)獨(dú)立選自羥基、氨基、哌啶基和吡咯烷基的取代基取代；或R5和R6與和它們連接的氮原子一起形成嗎啉基或哌啶基環(huán)。
8.權(quán)利要求1至7任一項(xiàng)所述的化合物，其中各R5和R6獨(dú)立地是H或C1-3烷基。
9.權(quán)利要求1至8任一項(xiàng)所述的化合物，其中帶有羥基的亞烷基碳的立體化學(xué)是(R)。
10.權(quán)利要求1的化合物，其選自5-((R)-2-{2-[4-((R)-2-氨基-2-苯基乙氨基)苯基]乙氨基}-1-羥乙基)-8-羥基-1H-喹啉-2-酮；N-[5-((R)-2-{2-[4-((R)-2-氨基-2-苯基乙氨基)苯基]乙氨基}-1-羥乙基)-2-羥基苯基]甲酰胺；5-((R)-2-{2-[4-((S)-2-氨基-2-苯基乙氨基)苯基]乙氨基}-1-羥乙基)-8-羥基-1H-喹啉-2-酮；N-[5-((R)-2-{2-[4-((S)-2-氨基-2-苯基乙氨基)苯基]乙氨基}-1-羥乙基)-2-羥基苯基]甲酰胺；5-((R)-2-{2-[4-((R)-2-甲氨基-2-苯基乙氨基)苯基]乙氨基}-1-羥乙基)-8-羥基-1H-喹啉-2-酮；5-((R)-2-{2-[4-((R)-2-二甲氨基-2-苯基乙氨基)苯基]乙氨基}-1-羥乙基)-8-羥基-1H-喹啉-2-酮；N-[5-((R)-2-{2-[4-((R)-2-甲氨基-2-苯基乙氨基)苯基]乙氨基}-1-羥乙基)-2-羥基苯基]甲酰胺；N-[5-((R)-2-{2-[4-((R)-2-二甲氨基-2-苯基乙氨基)苯基]-乙氨基}-1-羥乙基)-2-羥基苯基]甲酰胺；5-((R)-2-{2-[4-((S)-2-甲氨基-2-苯基乙氨基)苯基]乙氨基}-1-羥乙基)-8-羥基-1H-喹啉-2-酮；5-((R)-2-{2-[4-((S)-2-二甲氨基-2-苯基乙氨基)苯基]乙氨基}-1-羥乙基)-8-羥基-1H-喹啉-2-酮；N-[5-((R)-2-{2-[4-((S)-2-甲氨基-2-苯基乙氨基)苯基]乙氨基}-1-羥乙基)-2-羥基苯基]甲酰胺；和N-[5-((R)-2-{2-[4-((S)-2-二甲氨基-2-苯基乙氨基)苯基]乙氨基}-1-羥乙基)-2-羥基苯基]甲酰胺；它們的制藥學(xué)上可接受的鹽和溶劑合物和立體異構(gòu)體。
11.權(quán)利要求10的化合物，其選自5-((R)-2-{2-[4-((R)-2-氨基-2-苯基乙氨基)苯基]乙氨基}-1-羥乙基)-8-羥基-1H-喹啉-2-酮；N-[5-((R)-2-{2-[4-((R)-2-氨基-2-苯基乙氨基)苯基]乙氨基}-1-羥乙基)-2-羥苯基]甲酰胺；5-((R)-2-{2-[4-((S)-2-氨基-2-苯基乙氨基)苯基]乙氨基}-1-羥乙基)-8-羥基-1H-喹啉-2-酮；N-[5-((R)-2-{2-[4-((S)-2-氨基-2-苯基乙氨基)苯基]乙氨基}-1-羥乙基)-2-羥基苯基]甲酰胺；5-((R)-2-{2-[4-((R)-2-甲氨基-2-苯基乙氨基)苯基]乙氨基}-1-羥乙基)-8-羥基-1H-喹啉-2-酮；和N-[5-((R)-2-{2-[4-((R)-2-甲氨基-2-苯基乙氨基)苯基]乙氨基}-1-羥乙基)-2-羥基苯基]甲酰胺；以及它們的制藥學(xué)上可接受的鹽和溶劑合物和立體異構(gòu)體。
12.結(jié)晶N-[5-((R)-2-{2-[4-((R)-2-氨基-2-苯基乙氨基)苯基]乙氨基}-1-羥乙基)-2-羥基苯基]甲酰胺鹽酸鹽。
13.一種藥物組合物，其包含治療有效量的權(quán)利要求1至12任一項(xiàng)所述的化合物和制藥學(xué)上可接受的載體。
14.權(quán)利要求13的藥物組合物，其中所述組合物進(jìn)一步包含治療有效量的一種或多種其它的治療藥。
15.權(quán)利要求14的藥物組合物，其中其它治療藥是皮質(zhì)類固醇類、抗膽堿能藥或PDE4抑制劑。
16.權(quán)利要求13至15任一項(xiàng)所述的藥物組合物，其中該組合物被配制供吸入給藥。
17.一種組合，它包含權(quán)利要求1至12任一項(xiàng)所述的化合物和一種或多種其它治療藥。
18.權(quán)利要求17的組合，其中其它治療藥是皮質(zhì)類固醇類、抗膽堿能藥或PDE4抑制劑。
19.一種組合，其包含權(quán)利要求1-12任一項(xiàng)所述的化合物和選自丙酸氟替卡松、6α，9α-二氟-17α-[(2-呋喃基羰基)氧基]-11β-羥基-16α-甲基-3-氧代-雄甾-1，4-二烯-17β-硫代羥酸S-氟代甲酯和6α，9α-二氟-11β-羥基-16α-甲基-3-氧代-17α-丙酰氧基-雄甾-1，4-二烯-17β-硫代羥酸S-(2-氧代-四氫呋喃-3S-基)酯的化合物。
20.一種治療患有與β2腎上腺素能受體活性有關(guān)的疾病或病況的哺乳動(dòng)物的方法，該方法包括對(duì)所述哺乳動(dòng)物給予治療有效量的權(quán)利要求1至12任一項(xiàng)所述的化合物。
21.權(quán)利要求20的方法，其中所述的疾病或病況是肺的疾病或病況。
22.權(quán)利要求21的方法，其中肺的疾病或病況是哮喘或慢性阻塞性肺病。
23.權(quán)利要求20的方法，其中所述疾病或病況選自早產(chǎn)、神經(jīng)障礙、心臟障礙和炎癥。
24.權(quán)利要求20的方法，其進(jìn)一步包括給予治療有效量的一種或多種其它的治療藥。
25.權(quán)利要求24的方法，其中其它的治療藥是皮質(zhì)類固醇類、抗膽堿能藥或PDE4抑制劑。
26.權(quán)利要求20的方法，其中該方法包括通過吸入給予藥物組合物。
27.一種制備式(I)的化合物的方法，其包括使式(III)的化合物 其中，P1是羥基保護(hù)基團(tuán)，L是離去基團(tuán)，R1a、R2a、R3a和R4a各自被獨(dú)立地定義為與權(quán)利要求1中的R1、R2、R3和R4相同，或-OP2，其中P2是羥基保護(hù)基團(tuán)，與式(IV)的化合物反應(yīng) 其中R5、R6、R7、R8、R9、R10和R11為權(quán)利要求1中所定義，得到式(V)的化合物 脫去保護(hù)基團(tuán)P1得到式(VI)的化合物 和當(dāng)R1a、R2a、R3a或R4a的任一個(gè)是-OP2時(shí)，脫去保護(hù)基團(tuán)P2得到式(I)的化合物，或其鹽或立體異構(gòu)體。
28.由權(quán)利要求27的方法制備的產(chǎn)品。
29.用于治療的如權(quán)利要求1至12任一項(xiàng)所述的化合物。
30.權(quán)利要求1至12任一項(xiàng)所述的化合物在制備藥物中的用途。
31.權(quán)利要求30的用途，其中該藥物用于治療哺乳動(dòng)物中與β2腎上腺素能受體活性有關(guān)的疾病或病況。
32.權(quán)利要求31的用途，所述的疾病或病況是肺的疾病或病況。
33.權(quán)利要求32的用途，其中肺的疾病或病況是哮喘或慢性阻塞性肺病。
34.權(quán)利要求31至33的任一項(xiàng)的用途，其中所述藥物適于通過吸入給藥。
35.一種激動(dòng)生物系統(tǒng)或樣品中β2腎上腺素能受體的方法，該方法包括使含β2腎上腺素能受體的生物系統(tǒng)或樣品與β2腎上腺素能受體激動(dòng)量的權(quán)利要求1至12任一項(xiàng)所述的化合物接觸。
全文摘要
本發(fā)明提供新的β2腎上腺素能受體激動(dòng)劑化合物。本發(fā)明還提供含有該化合物的藥物組合物、使用該化合物治療與β2腎上腺素能受體活性相關(guān)的疾病的方法以及適用于制備該化合物的方法和中間體。
文檔編號(hào)A61K31/40GK1856465SQ200480027409
公開日2006年11月1日 申請日期2004年9月21日 優(yōu)先權(quán)日2003年9月22日
發(fā)明者M·S·林賽爾, J·R·雅格布森, D·R·塞托 申請人:施萬制藥