專利名稱：：抑制β₁-腎上腺素受體抗體的突變雙環(huán)化受體肽的制作方法抑制β-腎上腺素受體抗體的突變雙環(huán)化受體肽本發(fā)明涉及包含能形成分子內(nèi)鍵的僅兩個(gè)半胱氨酸殘基的新的β-AR同源環(huán)肽_突變體，涉及能形成這些環(huán)肽_突變體的線性肽，以及涉及編碼這些環(huán)肽_突變體和線性肽的核酸分子。而且，提供了包含所述核酸分子的載體和重組宿主細(xì)胞和產(chǎn)生公開的環(huán)肽-突變體的方法。進(jìn)一步提供了包含本發(fā)明的肽、核酸分子、載體或宿主細(xì)胞的組合物。本發(fā)明還涉及利用本發(fā)明的肽的治療和診斷的手段、方法和用途以及用于檢測如抗-βf腎上腺素能受體抗體的抗_腎上腺素能受體抗體的手段、方法和用途。未知病因?qū)W的漸進(jìn)性心臟擴(kuò)大和泵衰竭被稱為“特發(fā)性”擴(kuò)張性心肌病(DCM)(Richardson1996Circulation，93，841-842)。DCM是嚴(yán)重性心力衰竭的主要原因之一，年發(fā)病率為每一百萬人中有高達(dá)100例的患者，流行程度為每一百萬人中有300-400例患者(AHA報(bào)道2007)。編碼肌細(xì)胞結(jié)構(gòu)蛋白的基因突變(Morita2005)和包括酒精、蒽環(huán)類抗生素和最近治療上使用的單克隆抗體(例如曲妥單抗)的若干心臟毒素約占擴(kuò)張性心肌病(DCM)病因的三分之一(Chien2000,FabrizioandRegan1994)。然而對剩下三分之二的病因?qū)W了解甚少。目前絕大部分的DCM被認(rèn)為是源于導(dǎo)致急性心肌炎的初始(主要為病毒性的)感染，急性心肌炎在免疫系統(tǒng)活化時(shí)可進(jìn)展為(慢性)自身免疫性心肌炎而導(dǎo)致心臟擴(kuò)大和嚴(yán)重的充血性心力衰竭；后述的進(jìn)展特別出現(xiàn)在伴隨如下(a)或(b)時(shí)(a)針對心臟功能所必需的獨(dú)特的肌細(xì)胞肌纖維膜蛋白或膜蛋白的自身抗體形成(Freedman2004，Jahns2006),(b)心肌慢性炎癥和病毒持續(xù)存在(Kilhl2005)。這些最近的研究結(jié)果被DCM患者經(jīng)常伴有細(xì)胞免疫和體液免疫兩者的改變這一事實(shí)(Jahns2006,Limas1997，Luppi1998,Mahrholdt2006)進(jìn)一步鞏固。在這種情況下，初始的急性炎癥反應(yīng)可進(jìn)展為一種輕度的炎癥(MacLellan2003)，其促進(jìn)異常的或誤導(dǎo)的對初次感染觸發(fā)劑的免疫應(yīng)答(Freedman2004,Kuhl2005,MacLellanandLusis2003,Maekawa2007,Smulski2006)。在體液反應(yīng)的環(huán)境下，已發(fā)現(xiàn)大多數(shù)DCM患者產(chǎn)生了針對包括下述的多種心臟抗原的交叉反應(yīng)抗體和/或自身抗體線粒體蛋白(例如腺嘌呤核苷酸轉(zhuǎn)運(yùn)體，硫辛酰胺和丙酮酸脫氫酶(Pohlner1997，Schultheiss1985，Schultheiss1988，Schulze1999))、肌纖維膜蛋白(例如肌動蛋白、層粘連蛋白、肌球蛋白、肌鈣蛋白(Caforio2002,Goser2006,Li2006,Neumann1990,Okazaki2003))和膜蛋白(例如細(xì)胞表面腎上腺素能或蕈毒能受體(Christ.2006，F(xiàn)u1993，Jahns1999b,Magnussonl994)。然而看起來這些中只有幾個(gè)選擇的抗體自身能夠?qū)е滦募〗M織損傷和誘導(dǎo)嚴(yán)重的充血性心力衰竭。另外，個(gè)體基因遺傳傾向(包括各自的人白細(xì)胞抗原(HLA)-和主要組織相容性復(fù)合物(MHC)-表型(Limas1996))也可能明顯地促進(jìn)針對自體的免疫反應(yīng)的易感性和疾病的表型表達(dá)(Limas2004，MacLellan2003)。諸如膜受體的肌細(xì)胞表面分子與病毒或細(xì)菌蛋白間的同源性被提議作為通過抗原模擬產(chǎn)生內(nèi)源性心臟自身抗體的機(jī)制(Hoebeke1996,Mobini2004)。查加斯氏心臟病(Chagas’heartdisease)，一種慢性進(jìn)展的炎性心肌病，是這一機(jī)制最顯著的實(shí)例之一(Elies1996，Smulski2006)。這一疾病起源于原生動物克氏錐蟲(Trypanosomacruzi)感染；在大約30%查加斯氏患者中，克氏錐蟲的核糖體Ρ2β蛋白與P1-腎上腺素受體(^1-AR)的第二細(xì)胞外環(huán)的N-末端半段間的分子模擬導(dǎo)致交叉反應(yīng)抗體的產(chǎn)生(Ferrari1995)。因?yàn)閬碜訢CM患者的受體-自身抗體優(yōu)先地識別同一環(huán)的C-末端半段(Wallukat1995)，故推測這些抗體可能來源于P1-AR和迄今未鑒定出的病毒病原體(Magnusson1996)間的分子模擬。另一種導(dǎo)致內(nèi)源性心臟自身抗體產(chǎn)生的可能更相關(guān)的機(jī)制為初次心臟損傷后伴隨“關(guān)鍵量”的抗原性決定子從肌細(xì)胞膜或細(xì)胞質(zhì)中的(快速的或慢性的)釋放，這些抗原決定子原先不暴露于免疫系統(tǒng)。這種損傷最可能是發(fā)生在導(dǎo)致肌細(xì)胞凋亡或壞死的急性感染(心肌炎)、中毒或缺血性心臟疾病(心肌缺血)中(Caforio2002，Rose2001)。然后心肌自身抗原向免疫系統(tǒng)的呈遞誘發(fā)自身免疫反應(yīng)，其在最壞的情況下導(dǎo)致免疫介導(dǎo)的永久性肌細(xì)胞損傷，這涉及細(xì)胞(例如T細(xì)胞)或體液(例如B細(xì)胞)免疫反應(yīng)，或先天性和適應(yīng)性免疫系統(tǒng)的共活化(Eriksson2003，Rose2001)。從病理生理學(xué)角度來看，將心臟特異性自身抗體的可能的有害性(例如誘導(dǎo)心肌病)與相應(yīng)靶標(biāo)的可及性和功能的關(guān)聯(lián)性聯(lián)系起來是合理的。對自身抗體而言，肌細(xì)胞表面受體是可容易地接近的(0kaZaki2005)。兩種最有希望的候選物為心臟的βI-AR(代表心臟中占優(yōu)勢的腎上腺素受體亞型)和Μ2-毒蕈堿性乙酰膽堿受體，針對這兩種受體的自身抗體已在DCM患者中檢測到(Fu.1993，Jahns1999b，Matsui1995)然而抗毒蕈堿的抗體(表現(xiàn)出對心臟M2乙酰膽堿受體的類激動劑作用)主要與竇房水平的負(fù)性變時(shí)性效應(yīng)有關(guān)(例如竇房結(jié)功能障礙，心房纖顫(Baba2004，Wang.1996))，激動性抗βfAR抗體與心室水平的嚴(yán)重心律失常的發(fā)生(Christ2001，Iwata2001a)以及與最終轉(zhuǎn)變?yōu)樽笮氖以龃蠛蜐u進(jìn)性心力衰竭的(適應(yīng)不良的)左心室肥大的發(fā)展(Iwata2001b,Jahns1999b，Khoynezhad2007)這兩者有關(guān)。這兩種自身抗體呈現(xiàn)出針對各自受體的第二細(xì)胞外環(huán)。為產(chǎn)生自身免疫應(yīng)答，肌細(xì)胞膜蛋白(例如受體)必須降解成能與宿主的MHC或HLAII類分子形成復(fù)合物的小的寡肽(Hoebeke1996)。就人類β^AR而言，基于計(jì)算機(jī)的對潛在免疫原性氨基酸片段的分析顯示，該受體分子包含B-和T-細(xì)胞表位并可被自身抗體接近的唯一部分實(shí)際上是預(yù)測的第二細(xì)胞外受體環(huán)(P1-EC11)(Hoebeke1996)。這可以解釋第二環(huán)肽在不同的動物模型中用于產(chǎn)生P1-特異性受體抗體的成功應(yīng)用(Iwata2001b,Jahns.2000,Jahns1996)。而且，在最近十年中，幾個(gè)研究組在不同的免疫測定(全細(xì)胞酶聯(lián)免疫吸附測定，免疫沉淀反應(yīng)，免疫熒光)中已獨(dú)立地證實(shí)了抗體第二環(huán)優(yōu)先地識別完整天然的βfAR，這表明它們是“構(gòu)象的”(Hoebeke1996,Jahns2006)。功能測定揭示相同的抗體也影響受體功能，諸如細(xì)胞內(nèi)cAMP-產(chǎn)生和/或cAMP-依賴性蛋白激酶(PKA)活性，提示它們可以作為P1-AR活性的變構(gòu)調(diào)節(jié)劑(Jahns2000,Jahns2006)。也可通過Warne(2008Nature.DOI10.1038)分析β「AR的結(jié)構(gòu)。按照Witebsky，s要求(Witebsky1957)，疾病的自身免疫病因?qū)W的間接證據(jù)需要鑒定觸發(fā)劑(例如作為病因的自身抗原)，以及誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)性動物中針對自身抗原的免疫應(yīng)答，其隨后必須發(fā)展為類似的疾病。然而，直接的證據(jù)需要自一動物向同一物種中另一動物轉(zhuǎn)移同源性致病抗體或自身反應(yīng)T細(xì)胞來再現(xiàn)疾病(Rose1993)。為分析抗P1-AR抗體的致病潛力，Jahns等選擇了體內(nèi)實(shí)驗(yàn)方法，其滿足Witebsky對自身免疫性疾病直接證據(jù)的標(biāo)準(zhǔn)。通過針對β^EC1J人類與大鼠間100%序列同源性；間接證據(jù))免疫近交系大鼠誘導(dǎo)DCM；然后通過大鼠抗“βrAR自身抗體”的等基因轉(zhuǎn)移在健康動物中再現(xiàn)疾病(直接證據(jù))(Jahns2004)。動物發(fā)生漸進(jìn)性左心室(LV)擴(kuò)張和功能失調(diào)，LV壁增厚度的相對下降和βfAR的選擇性下調(diào)，這一特征也可見于人類DCM(Lohse2003)。這些結(jié)果，結(jié)合體內(nèi)抗體激動劑樣的短期效應(yīng)(Jahns2004)，提示誘導(dǎo)的和轉(zhuǎn)移的心肌病表型這兩者主要?dú)w因于通過刺激型抗βfAR抗體獲得的適度但持久的受體活化。基因或藥理學(xué)處理后所觀察到過量的和/或長期的P1-AR活化的心臟毒性效應(yīng)而獲得的大量數(shù)據(jù)支持了這一假說(Engelhardt1999,Woodiwiss2001)。因此，現(xiàn)在可認(rèn)為抗^-AR誘導(dǎo)的擴(kuò)張性免疫性心肌病(DiCM)自身結(jié)合其他的已確定的諸如重癥肌無力或Graves，疾病的針對受體的自身免疫性疾病(Freedman2004Hershko2005，Jahns2004，Jahns2006)yMt^IES#(pathogeneticdiseaseentity)。心臟自身抗體的臨床重要性難以評估，因?yàn)樯鲜隹贵w作為天然免疫系統(tǒng)全部的一部分，在健康人群中也可以檢測到這種抗體的低滴定量(Rose2001)。然而，關(guān)于功能性活化的抗P1-AR抗體，先前來自Jahns等的數(shù)據(jù)顯示，如果使用基于以天然構(gòu)象呈遞靶標(biāo)(例如P1-AR)的細(xì)胞系統(tǒng)的篩選方法，抗βfAR抗體在健康個(gè)體中的流行程度是幾乎可以忽略的(<)(Jahns1999b)。通過利用后者的篩選方法，也可以在慢性瓣膜或高血壓性心臟病的患者中排除抗P1-AR自身抗體的出現(xiàn)(Jahns1999a)。相比之下，刺激性抗βfAR的流行程度在缺血性心肌病(ICM)中為約10%、在擴(kuò)張性心肌病(DCM)中為約30%(Jahns1999b)，這顯著高于健康對照組，但是處于以前報(bào)道的關(guān)于DCM集合(33%到95%流行程度)較低的范圍(Limas1992，Magnusson1994，Wallukat1995)。似乎可以想象得到的是用于檢測功能性活化的抗P1-AR自身抗體的篩選方法的差異很可能造成了過去報(bào)道的流行程度的寬泛范圍(Limasl992)。實(shí)際上，只有很少部分的ELISA-確定的人抗^1-AR自身抗體能結(jié)合到位于細(xì)胞表面的天然h-AR，只有這一部分識別(如免疫熒光所確定的)和活化(如細(xì)胞的cAMP和/或PKA活性所確定的)表達(dá)在完整的真核細(xì)胞膜的AiB1-ARCJahns2000,Jahns1999b)。因此，以靶標(biāo)天然構(gòu)象呈遞靶標(biāo)的細(xì)胞系統(tǒng)代表了在用于功能性相關(guān)抗P1-AR自身抗體的篩選中的基本工具(Nikolaev2007)。臨床上，DCM中抗βrAR自身抗體的存在顯示與更嚴(yán)重地降低的心臟功能(Jahns1999b)、更嚴(yán)重的室性心律失常的發(fā)生(Chiale2001)和心源性猝死的高發(fā)病率(Iwata2001a)有關(guān)。對比隨訪時(shí)間超過10年的抗體陽性和抗體陰性DCM患者所獲得的最新數(shù)據(jù)不但確定了在活化抗βfAR存在情況下室性心律失常的高患病率，而且揭示了抗體陽性預(yù)示幾乎增加了3倍的心血管死亡率-風(fēng)險(xiǎn)(St0rk2006)。總之，可獲得的臨床數(shù)據(jù)強(qiáng)調(diào)了DCM中功能性活化的抗i^-AR自身抗體的病理生理學(xué)的關(guān)聯(lián)性。目前普遍所接受的一種藥理學(xué)的策略為使用阻斷劑以減弱或甚至消除自身抗體介導(dǎo)的刺激性效應(yīng)，至少如果阻斷劑確實(shí)能預(yù)防抗體誘導(dǎo)的P1-AR的活化(Freedman2004，Jahns2000,Matsui2001，Jahns2006)。實(shí)際上新的治療方法包括通過非選擇性的或選擇性的免疫吸附去除刺激性抗β^AROfershko2005，Wallukat2002)或抗β!-EC11抗體和/或自身產(chǎn)生抗β!-EC11的B細(xì)胞(即免疫耐受的誘導(dǎo))的直接靶向作用(Anderton2001)。然而，因?yàn)槊庖咔虻鞍缀慕吆蟾腥镜娘L(fēng)險(xiǎn)性增加，出于安全考慮，非選擇性免疫吸附需要人IgG的取代物(Felix2000)，其有本領(lǐng)域中已知的取代的人蛋白的所有可能的副作用，包括嚴(yán)重過敏反應(yīng)和死亡。WO01/21660公開了某些與β^AR的第一和第二環(huán)的表位同源的肽并建議將這些肽用于擴(kuò)張性心肌病(DCM)的醫(yī)療干預(yù)。即便W001/21660概略地提及可將肽進(jìn)行修飾以保護(hù)它們免遭血清蛋白酶降解，例如通過環(huán)化作用，但沒有給出相應(yīng)的實(shí)例和實(shí)施方案，也沒有所建議的肽對DCM進(jìn)程或?qū)κ荏w-抗體滴定過程的任何體外或體內(nèi)的影響。此外，WO01/21660中意圖采用上文提及的非選擇性的免疫吸附方法，其具有相應(yīng)提及的風(fēng)險(xiǎn)。此外，相比之下，刺激性抗P1-EC11抗體的活性誘導(dǎo)后6周，使用新開發(fā)的^-EC11同源性環(huán)肽(例如β!-EC11-CPs)。β^EC11-CPs為包含3個(gè)半胱氨酸殘基的環(huán)肽并因此能形成分子內(nèi)鍵，從而有個(gè)別地形成兩個(gè)分子內(nèi)鍵的潛在性選擇(另外N末端和C末端間的環(huán)化作用)。β^EC11-CP顯著性減少了循環(huán)的抗β^EC11抗體的數(shù)量，有效地預(yù)防了心臟擴(kuò)張和功能失調(diào)的發(fā)展(Boivin2005)。WO2006/103101中也公開了上文提及的β^EC11-CPst5結(jié)合現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明潛在的技術(shù)問題是提供改進(jìn)的和易于獲得的手段和方法，用于與抗β-AR抗體尤其是抗^^(^抗體相關(guān)的疾病的醫(yī)療干預(yù)。所述技術(shù)問題是通過權(quán)利要求中表征的實(shí)施方案的提供得以解決的。因此，在第一方面，本發(fā)明涉及β-AR同源性環(huán)肽-突變體(本文中也稱為環(huán)狀肽或環(huán)肽等)，具體涉及βrAR同源性環(huán)肽_突變體，即β!-EC11同源性環(huán)肽-突變體。這些環(huán)肽_突變體/環(huán)狀肽的結(jié)構(gòu)的特征在于能夠形成只有一個(gè)單獨(dú)的分子內(nèi)二硫鍵。具體地，在第一方面，本發(fā)明涉及式I的環(huán)狀肽eyeIo(x-xh~Cys-x-xa-xb-xc-x-Cys-y-xj-x)(I),其中a)X為除Cys以外的氨基酸；b)h為1至15的任一整數(shù)；c)i為0至14的任一整數(shù)；d)x%Xb和Xc的一個(gè)為Pro；e)y為除Cys以外的氨基酸；和f)環(huán)狀肽由至少16個(gè)且最多25個(gè)氨基酸組成。如下文所討論的，特別優(yōu)選的具體實(shí)施方案為式VII、IX、IX'、VI或VIII描述的具體環(huán)狀肽。本發(fā)明解決了上文確定的技術(shù)問題，因?yàn)槿缦挛暮退降膶?shí)施例所記載的，令人驚訝地發(fā)現(xiàn)含有僅兩個(gè)半胱氨酸的突變環(huán)狀肽也能夠抑制抗β-AR抗體，因此能夠用于抑制刺激性抗βrAR抗體，所述兩個(gè)半胱氨酸能形成一個(gè)確定的、單獨(dú)的分子內(nèi)二硫鍵。此外，在本發(fā)明上下文中還令人驚訝地發(fā)現(xiàn)，在構(gòu)象抗β-AR抗體的識別或清除以及抗體中和(即藥學(xué))潛力兩個(gè)方面，本文描述和提供的具有環(huán)狀結(jié)構(gòu)的肽突變體(例如環(huán)狀肽)都優(yōu)于它們的線狀對應(yīng)物。分別通過示例性地應(yīng)用ELISA競爭性測定和功能性(cAMP)FRET-測定獲得這些研究結(jié)果。另外，能夠容易地獲得/制備、生物化學(xué)上表征以及純化包含僅兩個(gè)半胱氨酸的本發(fā)明的環(huán)狀肽，所述兩個(gè)半胱氨酸能形成單個(gè)確定的、單獨(dú)的分子內(nèi)二硫鍵。這在需要同一環(huán)肽異構(gòu)體的純化部分時(shí)特別正確。在本發(fā)明的環(huán)境下，避免了包含具有不同分子內(nèi)二硫鍵的環(huán)肽異構(gòu)體的環(huán)肽異構(gòu)體(即立體異構(gòu)體)的混合物。如下文所記載的，因?yàn)檫@種避免，能夠獲得特異的純凈的醫(yī)學(xué)產(chǎn)品(符合GMP標(biāo)準(zhǔn))，其包含均具有同一分子內(nèi)二硫鍵的異構(gòu)體。在本發(fā)明的上下文中以及如所附的實(shí)施例所描述的，還有一個(gè)令人驚訝的發(fā)現(xiàn)半胱氨酸殘基的一個(gè)與絲氨酸殘基交換的精確性顯著地決定了衍生于β!-EC11的環(huán)狀肽的抗體中和效價(jià)強(qiáng)度。具體地，如分別地在本文示例地和優(yōu)選地公開的25-meric環(huán)肽(式VII/IX)的18位、在本文示例地和優(yōu)選地公開的22-meric環(huán)肽(式IX)的17位或在本文示例地和優(yōu)選地公開的18-meric環(huán)肽(式VI/VIII)的14位的Cys—Ser交換的Cys—Ser交換產(chǎn)生了具有極好的體外抗體中和以及藥理學(xué)效應(yīng)(圖.4-11和27)的環(huán)肽，而令人驚訝地，分別在本文示例性公開的25-meric、22-meric或18-meric環(huán)狀肽的17、16或13位的Cys—Ser交換幾乎沒有抑制效應(yīng)。既不能在它們作為抗體_清道夫的性能方面檢測到這種抑制效應(yīng)，也不能在它們抑制功能性抗體效應(yīng)的能力方面檢測到這種抑制效應(yīng)，例如，如體外受體_刺激的中和作用所顯示的(例如圖.4-10)。在本發(fā)明中還有一個(gè)發(fā)現(xiàn)能夠通過包含22個(gè)氨基酸的第二環(huán)-同源環(huán)化肽獲得ECII-^1-AR結(jié)構(gòu)域的近乎完美的空間模擬，所述22個(gè)氨基酸例如人βrAR公開的原始一級序列的21個(gè)氨基酸，即氨基酸200(R)到221(T)(根據(jù)Frielleetal.1987，PNAS84，pages7920-7924編號)加上一個(gè)額外的氨基酸殘基(例如甘氨酸(G))在222位上閉合合成環(huán)以形成22AA環(huán)肽。不受理論約束，環(huán)狀肽的心臟保護(hù)和免疫調(diào)節(jié)活性很大程度上取決于它們的構(gòu)象。另外，在本發(fā)明中發(fā)現(xiàn)在(預(yù)測)的環(huán)閉合位點(diǎn)上(或其相應(yīng)的位置上)導(dǎo)入最小的天然存在的氨基酸-甘氨酸使對抗βrAR自身抗體的結(jié)合增強(qiáng)，即明顯進(jìn)一步增加了22ΑΑ肽與ECII-β「AR結(jié)構(gòu)域的相似性。具體地，所附的實(shí)施例等顯示了cyc22AA環(huán)肽與其它較大的ECII-模擬環(huán)肽(例如cyc25AA肽)或較小的ECII-模擬環(huán)肽(例如cyclSAA肽)相比，具有顯著提高的體內(nèi)抗體阻斷功效。對上述22AA環(huán)肽的計(jì)算機(jī)輔助模型研究證實(shí)了預(yù)測的第二細(xì)胞外環(huán)結(jié)構(gòu)的極好的模擬，當(dāng)與預(yù)測的天然第二細(xì)胞外環(huán)反向螺旋(也見于附圖24)相對比時(shí)，計(jì)算的差異在環(huán)肽基部(而不是預(yù)測的抗體結(jié)合位點(diǎn))僅4.5埃(4.5人)大小。而且，本文和附加的實(shí)施例中顯示，特別是所述22AA環(huán)肽非常高效地降低了抗βrAR自身抗體的滴定度。因?yàn)榇嬖谟诃h(huán)狀22AA肽的三個(gè)半胱氨酸中的一個(gè)的取代允許剩余的兩個(gè)半胱氨酸間引入增強(qiáng)的二硫鍵(作為第二”內(nèi)部”環(huán)，經(jīng)雙環(huán)化作用產(chǎn)生)，產(chǎn)生的環(huán)狀22AA環(huán)肽也代表了生物化學(xué)上明確定義的產(chǎn)物(也見于圖25和26)。還令人驚訝地發(fā)現(xiàn)在25位(25-meric環(huán)肽-突變體)或18(18-meric環(huán)肽-突變體)上的GlnoD-Glu交換沒有顯著地影響環(huán)肽的阻斷能力，與它們的長度無關(guān)；例如如圖6，7和9所顯示的25與18個(gè)氨基酸。下文的實(shí)施例也證明了本文所公開的環(huán)狀肽顯示了改進(jìn)的特征，例如與包含3個(gè)半胱氨酸殘基的肽相比(例如WO2006/103101中所公開的Cys/Cys環(huán)狀肽)。本發(fā)明環(huán)狀肽的改進(jìn)特征的實(shí)例有極佳的阻斷抗βrAR抗體的能力及根據(jù)GMP標(biāo)準(zhǔn)提高的可生產(chǎn)性。在本發(fā)明中，體外發(fā)現(xiàn)通常經(jīng)體內(nèi)試驗(yàn)證實(shí)(圖12-16和28/29)。令人感興趣的是，Cys18,17sai4—Ser18,17sai4突變的環(huán)肽與其相應(yīng)的線性肽相比的阻斷能力的差異甚至在體內(nèi)更為顯著(圖5，7和14-16)。已建立的抗P1-腎上腺素的抗體誘導(dǎo)的自身免疫-心肌病大鼠模型(Jahns，2004)用于評價(jià)體內(nèi)產(chǎn)生的^1-EC11同源的環(huán)肽突變體的功效。體內(nèi)數(shù)據(jù)表明，公開的突變環(huán)肽(例如18AACys/Ser環(huán)肽)的功效可能同等地取決于給藥的劑量(圖14-16)。另外，體內(nèi)實(shí)驗(yàn)顯示突變環(huán)肽的抗體阻斷能力似乎沒有被氨基酸自25-meric到18-meric環(huán)肽的氨基酸數(shù)量的減少所影響；體外和體內(nèi)數(shù)據(jù)顯示這兩個(gè)含有2個(gè)半胱氨酸的單個(gè)二硫鍵的25AACys/Ser或18AACys/Ser環(huán)肽突變體有極好的可比性。然而應(yīng)該注意的是，1.Omg/kg25AA-mericCys/Ser及高劑量(即4.Omg/kgBw)18AACys/Ser突變體都導(dǎo)致了抗體_滴定度最初瞬間的增加從而使受體抗體滴定度對三分之一或四分之一環(huán)肽應(yīng)用的顯著性減少延遲(治療的第三或第四個(gè)月)。1.0或2.Omg/kgBw劑量的18AACys/Ser環(huán)肽突變體均未發(fā)生這一現(xiàn)象(圖16B，C)。特別地，如本文所公開的ISmeric或25meric環(huán)狀肽給藥的動物未表現(xiàn)出異常的體征，只檢測到給藥的肽的期待的效應(yīng)，即抗P1-AR抗體阻斷作用。相應(yīng)地，本文所提供的肽在應(yīng)用的劑量方案未顯示出不良的副作用或毒性。這在本文中通過下述現(xiàn)象的顯示被進(jìn)一步證實(shí)本發(fā)明的環(huán)狀肽對腎臟無毒性(未檢測到腎小球膜的機(jī)械性阻塞；圖23)。另夕卜，指示腎臟功能的常規(guī)實(shí)驗(yàn)室參數(shù)在環(huán)狀肽應(yīng)用12個(gè)月下仍然正常，與未治療的對照的動物相比沒有差異(圖22A，B)。本發(fā)明的突變的環(huán)肽的抗體阻斷能力不受肽長度的影響，只要肽不短于18個(gè)氨基酸，并不超過25個(gè)氨基酸。這一點(diǎn)通過肽的氨基酸數(shù)目自25到18的減少被示例性地證實(shí)。在18到25格氨基酸范圍內(nèi)，本發(fā)明具有22個(gè)氨基酸的環(huán)狀肽是最有效的，因此具有22個(gè)氨基酸的環(huán)狀肽為特別優(yōu)選的實(shí)施方案。這種特別優(yōu)選的22mer環(huán)狀肽的實(shí)例顯示于式IX中。本發(fā)明的環(huán)肽突變體的優(yōu)勢之一為_通過將一個(gè)特定的半胱氨酸(優(yōu)選對應(yīng)于βi-AR氨基酸序列的Cys216的Cys)突變?yōu)榻z氨酸殘基并通過經(jīng)由另一S-S的特異性環(huán)化方法加強(qiáng)獨(dú)特的可能的分子內(nèi)S-S鍵形成-它們的構(gòu)象限制(conformationalrestraint)是增加的。與本領(lǐng)域已知的肽相比，本發(fā)明的肽增加的抑制產(chǎn)生的分子較好地模擬在細(xì)胞表面上的第二、^(^環(huán)的天然構(gòu)象中呈現(xiàn)的表位。諸如比索洛爾的β阻斷劑顯著降低了心率和血壓，所述β阻斷劑用于治療擴(kuò)張性心肌病和其他由刺激性抗P1-AR抗體導(dǎo)致的疾病的領(lǐng)域。與此相比之下，本發(fā)明突變環(huán)肽的體內(nèi)應(yīng)用對肺臟功能、心率或血壓沒有負(fù)面影響(圖20和21)。另外，大量評價(jià)肝臟和腎臟功能的重要的實(shí)驗(yàn)室參數(shù)沒有受到重復(fù)的環(huán)肽注射的影響(圖22a/b和23)。因此，本發(fā)明的環(huán)狀肽尤其適用于不然不能應(yīng)用β阻斷劑治療的特殊患者組，例如已患有心動過緩的病人，或?qū)δ切┮驗(yàn)榻砂Y而不可能使β阻斷劑的患者(比如那些患有阻塞性肺疾病或低血壓的患者)。特別地，如所提及的，相比于利用衍生自仍含有3個(gè)半胱氨酸的P1-EC11W(環(huán)狀)肽(例如如在WO2006/103101中所公開的)的手段和方法，本發(fā)明的手段和方法的另外優(yōu)勢是能夠避免環(huán)肽異構(gòu)體混合物的形成。在包含3個(gè)或更多Cys殘基的肽的環(huán)化期間形成的不同環(huán)肽異構(gòu)體混合物的生化表征是費(fèi)力的。因此，當(dāng)利用包含3個(gè)或更多個(gè)Cys殘基的肽時(shí)，生產(chǎn)僅包含一種類型環(huán)肽異構(gòu)體的純環(huán)狀肽部分耗費(fèi)巨大的時(shí)間和財(cái)力。當(dāng)在GMP標(biāo)準(zhǔn)下生產(chǎn)環(huán)狀肽時(shí)尤其這樣。與此相比之下，本發(fā)明的環(huán)狀肽作為同一異構(gòu)體的純化部分可被容易地表征和生產(chǎn)。這帶來了高度的再現(xiàn)性。本發(fā)明的肽的特別優(yōu)勢是避免了必須被分離且通過復(fù)雜的測試進(jìn)行表征的異構(gòu)體混合物，這樣最終省略了至少另外一步的生產(chǎn)步驟(分離和/或生化表征)(也見于Sewald2002)。本發(fā)明尤其基于所附的實(shí)施例描述的實(shí)驗(yàn)。在這些實(shí)施例中，β!-EC1125ΑΑ-環(huán)肽的17位或18位的半胱氨酸的一個(gè)被絲氨酸殘基取代(Cys17^si8-Ser17^s18突變)，從而可形成只有一個(gè)單獨(dú)的、單一分子內(nèi)二硫鍵(S-S)(圖1)。像這樣的措施提供了減少副作用和保持或提高本發(fā)明的構(gòu)建體的生物功效的潛能。與現(xiàn)有技術(shù)中形成異構(gòu)體混合物的肽相比，可通過簡單、穩(wěn)健和可高度重復(fù)的生產(chǎn)過程獲取本發(fā)明的環(huán)狀肽。這些能夠按比例的有效增加。而且這些過程避免了異構(gòu)體混合物的分離，并適合GMP標(biāo)準(zhǔn)。附加的實(shí)施例提供了相應(yīng)的生產(chǎn)/制備方法。在所附的實(shí)施例中，尤其通過引入“DGlu”突變(例如在環(huán)狀肽的(環(huán))閉合位點(diǎn)引入；如圖2所示的Gln^DGlii突變)來實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的肽的環(huán)化。而且，在本發(fā)明的另外的環(huán)肽突變體系列中，氨基酸數(shù)量自25AA減少到22AA，并進(jìn)一步減少到18AA。這一措施提供了使構(gòu)建體潛在的免疫副作用降低到最小的潛力。18AA環(huán)肽_突變體包含14位或13位上的半胱氨酸一絲氨酸交換(分別包含Cysl3-Serl4或Serl3-Cysl4突變環(huán)肽的18AA)，所述半胱氨酸一絲氨酸交換與例如在環(huán)狀肽的環(huán)閉合位點(diǎn)的(另外的)谷氨酰胺_交換/D-谷氨酸(GlneD-Glu突變)組合或不與其組合(圖2)。22AA環(huán)肽-突變體包含位置17上cysteine—serine交換(包含Cys16-Ser17的22AA)，選擇性地結(jié)合位置22上引入的甘氨酸殘基(環(huán)狀肽的可能的環(huán)閉合位點(diǎn)；圖24)?？傊疚奶峁┑膶?shí)驗(yàn)性體外數(shù)據(jù)以及體內(nèi)數(shù)據(jù)清楚地表明，所公開的突變環(huán)狀肽的抗體阻斷能力不受環(huán)肽氨基酸數(shù)量自25-meric到18-meric減少的影響，當(dāng)使用的劑量為0.25至5.Omg/kgBw，尤其為1.0至2.Omg/kgBw時(shí)。體內(nèi)外數(shù)據(jù)顯示了劑量在1.Omg/kgBw的包含2個(gè)半胱氨酸的單個(gè)二硫鍵的25AACys/Ser(式VII/IX)或18AACys/Ser(公式VI/VIII)的兩個(gè)環(huán)肽突變體有極好的可比性；圖16到21。然而，依照本發(fā)明，19到24AA的“中間”環(huán)狀肽顯示了增加的活性。具體地，依照本發(fā)明，22AA環(huán)狀肽顯示了增加的活性。上述“中間”環(huán)狀肽的優(yōu)選實(shí)例為包含或由如式IX中所顯示的氨基酸殘基組成。而且，半胱氨酸殘基的一個(gè)與絲氨酸殘基交換(即Cys/Ser或Ser/Cys-突變體)的精確的性質(zhì)顯著地決定了所公開的環(huán)狀肽的體外及體內(nèi)的效價(jià)強(qiáng)度(圖6-10和14-16)。β-腎上腺素受體(β-AR)，特別是βr腎上腺素受體(βrAR)為本
技術(shù)領(lǐng)域：
所熟知。例如，人^1-AR(也稱為腎上腺素β-l-受體(ADRBl))的核酸和氨基酸序列(SEQIDNO.40)能夠從數(shù)據(jù)庫條目ΝΜ_000684或NP_000675獲取。已知β-ARs形成兩個(gè)在本文中稱為EC1和EC11或β(D-EC1和β(D-EC11的細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域。如上所述，本發(fā)明的環(huán)狀肽與β^EC11共享序列相似性，特別是與人^-AR的氨基酸片段DEARRCYNDPKCXDFV(SEQIDNO.33)或RAESDEARRCYNDPKCCDFVTNR(SEQIDNO.34)(分別為204-219位或200-222位的氨基酸)共享序列相似性，或者，特別是與人P1-AR的氨基酸片段DEARRCYNDPK(SEQIDN0.45)或ESDEARRCYNDPK(SEQIDNO.46)共享序列相似性。本文所使用的β-AR優(yōu)選地指βr腎上腺素受體(βrAR)，更優(yōu)選地是如上文所描述的人βrARo本文所提供的環(huán)狀肽具備至少一個(gè)選自以下的特征a)能夠結(jié)合抗βr腎上腺素受體(βfAlOECn環(huán)的(自身)抗體；b)能夠抑制βrAR與抗βrAR的EC11環(huán)的(自身)抗體間的相互作用；c)模擬在βrAR的EC11環(huán)的天然構(gòu)象中呈現(xiàn)的至少一個(gè)表位；d)能夠降低抗體介導(dǎo)的βfAR的活化。Warne(2008Nature.DOI10.1038)尤其分析了βI-AR的結(jié)構(gòu)。如上文所提及的，本發(fā)明的環(huán)狀肽是由通式環(huán)(X-Xh-CyS-X-Xa-Xb-Xe-X-Cys-y-Xi-x)(式I)所確定的。在該式中，“y”可以是除Cys外的任一氨基酸殘基，優(yōu)選地，“y”可以為除Pro和Cys外的任一氨基酸殘基。一般地，“y”可為任一氨基酸，只要這一氨基酸不會與文中所提供的環(huán)狀肽的另一氨基酸(例如與文中所提供的環(huán)狀肽的另一Cys)形成分子內(nèi)鍵(例如二硫鍵)。優(yōu)選地，“y”可為類似于Cys的任一氨基酸(即具有類似的化學(xué)結(jié)構(gòu)和/或三維肽結(jié)構(gòu)內(nèi)類似的性能)，除外的情況是它不會與文中所提供的環(huán)狀肽的另一氨基酸(例如與文中所提供的環(huán)狀肽的另一Cys)形成分子內(nèi)鍵(例如二硫鍵)。更優(yōu)選地，“y”可以是除Cys外的任一極性氨基酸，如蘇氨酸Thr和絲氨酸Ser。最優(yōu)選地，本文所提供的環(huán)狀肽中，“y”為Ser或Ser類似物。本文中“Ser類似物”表示具備與Ser具有相似的結(jié)構(gòu)特征的殘基，特別是氨基酸殘基。例如“Ser類似物”指的是具備與Ser的化學(xué)結(jié)構(gòu)相似的和/或與Ser在三維肽結(jié)構(gòu)中性能相似的(氨基酸)殘基。進(jìn)一步的實(shí)例中，“y”也可為硒代半胱氨酸或其類似物?？傊?，像“除Cys外的任一氨基酸(殘基)”或“不同于Cys的氨基酸(殘基)”等的術(shù)語的意義都為本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知。具體地，如本發(fā)明自始至終所使用的，上述術(shù)語指的是任一氨基酸，只要這一氨基酸不與文中所提供的環(huán)狀肽的另一氨基酸(例如與文中所提供的環(huán)狀肽的另一Cys)形成分子內(nèi)鍵(例如二硫鍵)。如所提及的，本發(fā)明環(huán)狀肽的一個(gè)主要特征為它們包含能形成分子內(nèi)鍵的僅兩個(gè)半胱氨酸。例如，上述環(huán)狀肽能夠通過用一個(gè)不同的氨基酸取代β^EC11的同源肽的第三個(gè)Cys來獲得。因此，待被取代的Cys為對應(yīng)于βrECn的第二個(gè)或優(yōu)選第三個(gè)Cys，其彼此直接鄰近(人βfAR的215位和216位氨基酸(也見于NP_000675和SEQIDNO.40)。本文中這兩個(gè)Cys殘基指的是如”Cys-Cys”，“Cys/Cys”，"Cys215-Cys216”或“Cys215/Cys216”寸Jο因此將產(chǎn)生的如文中所公開的合成突變肽或突變體稱為“Cys-Ser”，"Cys/Ser","Cys13,16sai7-Ser14,17或18”或"Cys13,16sSl7/Ser14,17sa18”突變肽或突變體或者“Ser-Cys”，“Ser/Cys”，“Ser13或17-Cys14或18”或“Ser13或17/Cys14或18”突變肽或突變體，這取決于哪個(gè)半胱氨酸Cys被取代以及突變肽包含多少個(gè)氨基酸?？蛇x地，通過特定位置上具體氨基酸的交換的參照來確定如本文所公開的突變肽。然后，例如突變肽/突變體被稱為"Cys14,17或18—Ser14il7sai8”突變肽/突變體或"Cys13或17—Ser13g8l/'突變肽/突變體，分別取決于對應(yīng)于βfAR的Cys216的Cys或?qū)?yīng)于βrAR的Cys215的Cys是否被不同的氨基酸取代。指數(shù)“14，17或18”或“13或17”涉及本發(fā)明的示例性環(huán)狀肽中的位置。其中位置1對應(yīng)于如式I，即環(huán)(2rXh-CyS-X-Xa-Xb-Xe-X-CyS-y-Xi-X)中所確定的第一個(gè)“X”。因此，使用的如"Cys13-Ser1/或“Cys13/Ser14”突變肽/突變體的術(shù)語與“Cys14—Ser14”突變肽/突變體具有同樣的意義，而且在具體實(shí)施例中，指的是本文所公開的ISmer肽。使用的如"Cys16-Ser1/'或“Cys16/Ser17”突變肽/突變體的術(shù)語與“Cys17—Ser17”突變肽/突變體具有同樣的意義，而且在一具體實(shí)例中，指的是本文所公開22mer肽。使用的如"Cys17-Ser18”或“CySl7/Ser18”突變肽/突變體的術(shù)語與"Cys18—Ser18"突變肽/突變體具有同樣的意義，而且在一具體實(shí)例中，指的是本文所公開的25mer肽。類似地，使用的如"Ser13-CyS14，，或“Ser13/CySl4”突變肽/突變體的術(shù)語與“Cys13—Ser13”突變肽/突變體具有同樣的意義，而且在一具體實(shí)例中，指的是本文所公開的ISmer肽，并且使用的如"Ser17-Cys18"或“Ser17/Cys18”的術(shù)語與"Cys17—Ser17"突變肽/突變體在具有同樣的意義，而且在一具體實(shí)例中，指的是本文所公開的25mer肽。上文所給出的示例性指數(shù)指的是分別在本文所公開的具體的18mer、22mer或25mer肽中所示的氨基酸的位置。在本發(fā)明中，給出的關(guān)于本文公開的環(huán)狀肽所示氨基酸位置的起始點(diǎn)為環(huán)狀肽線性主鏈的N-末端氨基酸(像式I中的第一個(gè)“X”，見于上文)。給出的關(guān)于本文公開的線性肽所示氨基酸位置的起始點(diǎn)為其N-末端氨基酸。如本文所提供的發(fā)現(xiàn)和附加的實(shí)施例展現(xiàn)了沒有任何半胱氨酸Cys突變的25AA，22AA和18AA環(huán)肽與環(huán)狀25AA，22AA或18AACys18,17gSl4—Ser18,17或14(Cys-Ser)突變體、而不是與環(huán)狀25AA或I8AACys17sai3—Ser17g8l3(Ser-Cys)突變體的可比性。還如上文所提及的，本發(fā)明的環(huán)狀肽的式中，h能夠是1至15的任一整數(shù)，優(yōu)選為5至9的任一整數(shù)，和/或i能夠?yàn)?至14的任一整數(shù)，優(yōu)選1至14，更優(yōu)選0至6且甚至更優(yōu)選1至6的任一整數(shù)。因此，h能夠?yàn)?，2，3，4，5，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14或15和/或i能夠?yàn)?，1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13或14。優(yōu)選地，h為5，8或9和/或i為3，4或6。更優(yōu)選地，h為8和/或i為4。在本發(fā)明特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，Xh代表特定氨基酸片段DEARR(SEQIDNO.35),AESDEARR(SEQIDNO.47)或RAESDEARR(SEQIDNO.36)和/或Xi代表特定氨基酸片段DFV(SEQIDNO.37)，DFVT(SEQIDNO.48)或DFVTNR(SEQIDNO.38)。在本發(fā)明更優(yōu)選的實(shí)施方案中，xh代表特定氨基酸片段AESDEARR(SEQIDNO.47)和/或Xi代表特定氨基酸片段DFVT(SEQIDN0.48)。本發(fā)明的環(huán)狀肽(或其環(huán)狀部分)可以由至少18個(gè)氨基酸、且最多25個(gè)氨基酸組成。因此，本發(fā)明的環(huán)狀肽可以由18，19，20，21，22，23，24或25個(gè)氨基酸組成，其中特別地，優(yōu)選18或25個(gè)氨基酸，且特別地，最優(yōu)選22個(gè)氨基酸。在次優(yōu)選的實(shí)施方案中，還考慮較小的肽，即包含16個(gè)或17個(gè)氨基酸的肽。在本發(fā)明中，特別優(yōu)選的環(huán)狀肽為如下的肽長度為(21+1=)22個(gè)氨基酸，具有確定的取決于各自氨基酸組成的環(huán)狀分子的最大和最小尺寸，由來自人βι-腎上腺素受體的原始一級序列的21個(gè)氨基酸以及作為在假定環(huán)閉合位點(diǎn)(位置222)的？？“氨基酸的一個(gè)附加甘氨酸組成。不受理論約束時(shí)，結(jié)合抗βrAR抗體的環(huán)狀肽的一級結(jié)構(gòu)(即氨基酸主鏈)的氨基酸數(shù)量進(jìn)而長度對它們的生物學(xué)效應(yīng)和/或成功/有效的生產(chǎn)是很關(guān)鍵的。長度為或超過26個(gè)氨基酸(一級結(jié)構(gòu))的肽可直接刺激(即不用載體蛋白)免疫活性T細(xì)胞并由此可以引發(fā)通過T細(xì)胞介導(dǎo)的B細(xì)胞刺激產(chǎn)生的抗βr受體抗體的不希望的異常增加。在將合成的產(chǎn)物溶解于水溶液中的生產(chǎn)過程和問題期間，例如用于靜脈或皮下注射，長度小于16個(gè)氨基酸(一級結(jié)構(gòu))的肽導(dǎo)致不希望的結(jié)晶。在本發(fā)明的次優(yōu)選的實(shí)施方案中，也提供了屬于上文給出的式I的a)到f)定義的環(huán)狀肽，其只由16個(gè)氨基酸或甚至不太優(yōu)選的只有17個(gè)氨基酸組成的環(huán)狀肽。上述次優(yōu)選的非限定性實(shí)例為肽環(huán)(Ala-Arg-Arg-Cys-Tyr-Asn-Asp-Pro-Lys-Cys-Ser-Asp-Phe-Val-Tyr-Gln/DGlu)(如可由SEQIDNO.39中所示的氨基酸主鏈所形成的)。本文特別優(yōu)選的是，所公開的環(huán)狀肽包含單個(gè)Pro。因此，特別優(yōu)選的是，既不是本文所描述的式中的y也不是χ，除了恰好x%xb和f的一個(gè)外，不是Pro。式I(或其他的式)中所描述的氨基酸片段x%xb和f中，優(yōu)選f為Pro。本文特別考慮的是，酸性氨基酸，如Asp或Glu，在本發(fā)明環(huán)狀肽中所包含的Pro之前。因此，優(yōu)選的是，式I(或其他的式)中所示的Xb為酸性氨基酸，如Asp或Glu。具體地，當(dāng)f為Pro時(shí)，xb可為酸性氨基酸，當(dāng)Xb為Pro時(shí)，xa可為酸性氨基酸和當(dāng)Xa為Pro時(shí)，式I(或其他的式)的位于Xa與第一個(gè)Cys間的χ可為酸性氨基酸。更具體地，本發(fā)明的環(huán)狀肽可由式?；騃"所確定環(huán)(X1-Xh-Cys-X-Xa-Xb-Xc-X-Cys-Y-Xi-X)(I')；環(huán)(X111-Xh-Cys-X-Xa-Xb-Xc-X-Cys-Y-Xi-X)(I“)甚至更具體地，本發(fā)明的環(huán)狀肽可由公式Γ“或I"“所確定環(huán)(X1-Xh-Cys-X-Xa-Xb-Xc-X-Cys-Y-Xi-X11)(I‘“)；環(huán)(X111-Xh-Cys-X-Xa-Xb-Xc-X-Cys-Y-Xi-Xiv)(I"“)?？傊缢峒暗?，式Γ和I'“中(和本文所示的其他式中)所示的X1和X11可為除了半胱氨酸以外的任一氨基酸。然而，特別地，當(dāng)本發(fā)明的環(huán)狀肽的環(huán)閉合發(fā)生在&和X11間時(shí)，特別考慮的是，XjPX11是在“頭到尾(headtotail)”環(huán)化作用條件下能與彼此形成肽鍵的氨基酸?！邦^到尾”環(huán)化作用為本領(lǐng)域技術(shù)人員所知(例如KatesandAlbericioSolidphasesynthesis,CRC-Press,2000；Williams,ChemicalApproachestotheSynthesisofPeptides,CRC-Press1997；BenoitonChemistryofPeptideSynthesis.CRC-Press,2005)并在實(shí)驗(yàn)性部分給出其實(shí)施例。氨基酸可能的實(shí)例可為X1是甘氨酸、纈氨酸、蘇氨酸、絲氨酸和優(yōu)選丙氨酸。氨基酸可能的實(shí)例可為X11是谷氨酸和優(yōu)選谷氨酰胺。次優(yōu)選地，X11也可以是Asp或Asn。最優(yōu)選地，X1是ALa和X11是Gln或Glu(優(yōu)選DGlu)。因此，本發(fā)明的環(huán)狀肽中，如式Γ和?！ㄋ峒暗腦11可以為Gln或Glu，其中Glu也可為DGlu(D-Glu;D-谷氨酸)。然而，天然氨基酸在本文是優(yōu)選的。因此，更優(yōu)選地，X11為谷氨酰胺?；诒疚乃峁┑慕虒?dǎo)和本領(lǐng)域的知識(例如Williams，ChemicalApproachestotheSynthesisofPeptides,CRC-Press1997；BenoitonChemistryofPeptideSynthesis.CRC-Press，2005)，本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠挑選出適合作為本發(fā)明的式Γ和I'“的&和/或X11的氨基酸殘基。如所提及的，式I“和I““中(和本文描述的其他式中)所描述的X111和Xiv可以是除了Cys以外的任一氨基酸。然而，具體當(dāng)本發(fā)明的環(huán)狀肽的環(huán)閉合發(fā)生在X111和xIV間時(shí)，特別考慮的是，X111和xIV是在”頭到尾”環(huán)化作用條件下能與彼此形成肽鍵等的氨基酸。可為X111的氨基酸可能的實(shí)例是精氨酸。可為Xlv的可能的且最優(yōu)選的氨基酸實(shí)例是甘氨酸或甘氨酸類似物。本文中的"Gly類似物”表示具有與甘氨酸類似的結(jié)構(gòu)特征的殘基，特別為氨基酸殘基。具體地，例如“Gly類似物”指的是與Gly殘基大小一樣的(或甚至更小的)(氨基酸)殘基。在本發(fā)明中令人驚訝地發(fā)現(xiàn)，具體地像位于“XIV”位置的Gly的小的(氨基酸)殘基導(dǎo)致本發(fā)明相應(yīng)的環(huán)狀肽對βfAR的ECII模擬的改進(jìn)。根據(jù)本文所提供的教導(dǎo)和本領(lǐng)域的知識(例如Williams，ChemicalApproachestotheSynthesisofPeptides,CRC-Press1997；Benoiton:ChemistryofPeptideSynthesis.CRC-Press,2005)，本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠挑選出適合作為式1〃和1〃“的X111和/或xIV的氨基酸殘基。本文進(jìn)一步特別優(yōu)選的是，本發(fā)明的環(huán)狀肽缺乏Trp和/或His。因此，在本發(fā)明中特別考慮的是，式I到I"“中任一個(gè)所描述的X或y都不是Trp或His。而且，優(yōu)選所提供的環(huán)狀肽沒有對水解作用或切割蛋白酶，例如像血清蛋白酶敏感的位點(diǎn)。術(shù)語“水解作用”和“(血清)蛋白酶”的含義都是本領(lǐng)域中所熟知的。本文所提供的肽也可描述為由與SEQIDNO.33(代表包含βrECn表位的野生型氨基酸片段)同源的氨基酸序列組成或包含與SEQIDN0.33同源的氨基酸序列的肽，其中(a)對應(yīng)于SEQIDNO.33的位置13(或次優(yōu)選的，對應(yīng)于位置12)的氨基酸不是半胱氨酸，并且對應(yīng)于SEQIDN0.33的位置6和12(或次優(yōu)選的，對應(yīng)于位置6和13)的氨基酸為半胱氨酸，(b)其中所述氨基酸序列不包含能在肽(即在與SEQIDN0.33同源的肽部分)中形成分子內(nèi)鍵的另外的半胱氨酸，以及其中所述肽能夠發(fā)揮本發(fā)明的環(huán)狀肽的功能，例如能阻斷抗β「AR抗體，或者其中所述肽能形成這種環(huán)狀肽。任選地，本文所給出的關(guān)于公開的線性和/或環(huán)狀肽的結(jié)構(gòu)的更多規(guī)定應(yīng)用于本文，并作出必要的修改。這樣確定的肽由與SEQIDN0.33同源的16個(gè)氨基酸片段組成，一個(gè)或多個(gè)氨基酸位于N-末端和C-末端側(cè)翼，優(yōu)選天然存在的氨基酸，如位于本文所給出的式Γ到I"“的位置1的“χ/’/“xm”和最后位置的“x”/“xIV”。在本發(fā)明中，尤其在(野生型)SEQIDN0.33中，術(shù)語“同源的”表示氨基酸水平上的一致性至少為18.75%，至少為37.5%，至少為50%，至少為56.25%，至少為62.5%，至少為68.75%，至少為75%，至少為81.25%，至少87.5%或93.75%，其中優(yōu)選較高的數(shù)值。總之，術(shù)語“氨基酸”或“氨基酸殘基”的含義為本領(lǐng)域中已知的并相應(yīng)地用于本文中。因此，需要注意的是當(dāng)“氨基酸”為肽或蛋白的組分時(shí)，本文中所使用的術(shù)語“氨基酸”的意義與“氨基酸殘基”是一樣的。具體地，本文中提及的“氨基酸”或“氨基酸殘基”優(yōu)選考慮為天然存在的氨基酸，更優(yōu)選天然存在的L-氨基酸(除外上文提及的DGlu)。然而，盡管次優(yōu)選地，本發(fā)明中的“氨基酸”或“氨基酸殘基”也可以為非天然存在(例如合成的)氨基酸，例如，像正亮氨酸或β-丙氨酸，或具體地就本文所描述的式的“y”而言，“y”為硒代半胱氨酸或其類似物。術(shù)語“酸性氨基酸”、“堿性氨基酸”、“脂肪氨基酸”和“極性氨基酸”的含義也是本領(lǐng)域己知的(例如Stryer，Biochemie，SpectrumAkad.Verlag,1991,Item1.2·)。相應(yīng)地這些術(shù)語的使用貫穿本發(fā)明始終。因此，本文給出的關(guān)于本發(fā)明的環(huán)狀肽的具體規(guī)定也適用本文。具體地，本文所使用的術(shù)語“酸性氨基酸”意指選自Asp，Asn,GlujPGln的氨基酸，優(yōu)選Asp和Glu；本文所使用的術(shù)語“堿性氨基酸”意指選自Arg，Lys和His的氨基酸，優(yōu)選Arg和Lys；本文所使用的術(shù)語“脂肪氨基酸”意指選自Gly，Ala,Ser,Thr,Val,Leu,lie,Asp,Asn,Glu，Gin,Arg，Lys,Cys和Met的任一氨基酸；本文所使用的術(shù)語“極性氨基酸”意指選自Cys，Met,Ser，Tyr,Gin,Asn以及次優(yōu)選的Trp的任一氨基酸。在本發(fā)明第一方面的更一般的實(shí)施方案中，本文所提供的環(huán)狀肽可以為式II，III或ΙΙΓ的環(huán)狀肽環(huán)(X1-X1-X1-X-X2-X2-Cys-X-Xa-Xb-Xc-X-Cys-Y-Xi-X11)(II)；環(huán)(X1-X2-X-X1-X-X1-X1-X-X2-X2-Cys-X-Xa-Xb-Xc-X-Cys-Y-Xi-X11)(III)；環(huán)(Xlllj2-X-X1-X-X1-X1-X-X2-X2-Cys-X-Xa-Xb-Xc-X-Cys-Y-Xi-Xiv)(III‘),其中a)X1單獨(dú)地和獨(dú)立地選自酸性氨基酸；和/或b)X2單獨(dú)地和獨(dú)立地選自堿性氨基酸。在本發(fā)明第一方面的更具體的實(shí)施方案中，本文所提供的環(huán)狀肽可為式IV，V或V'的環(huán)狀肽環(huán)(X1-X1-X1-X4-X2-X2-Cys-X3-Xa5-Xb-Xc-X2-Cys-Y-X1-X3-X3-X11)(IV)；環(huán)(X1-X2-X4-X1-X4-X1-X1-X4-X2-X2-Cys-X3-Xa5-Xb-Xc-X2-Cys-Y-X1-X3-X3-X4-X5-X2-Xπ)(V)；環(huán)(χΠΙ，^X4-X1-X4-X1-X1-X4-X2-X2-CyS-X3-Xa5-Xb-Xc-X2-CyS-Y-X1-X3-X3-X4-Xiv)(V)，其中a)X1單獨(dú)地和獨(dú)立地選自酸性氨基酸；b)X2單獨(dú)地和獨(dú)立地選自堿性氨基酸；c)X3單獨(dú)地和獨(dú)立地選自Leu，lie，Val，Met，Trp，Tyr和Phe；d)X4單獨(dú)地和獨(dú)立地選自Ser，Thr，Ala和Gly；和/或e)X5單獨(dú)地和獨(dú)立地選自Gln和Asn。在本發(fā)明第一方面另外的實(shí)施方案中，環(huán)狀肽包含由式II或IV的第2-12或2_14位氨基酸所確定的氨基酸片段、由式III或V的第4-16或4-18位氨基酸所確定的氨基酸片段或由式ΙΙ?；騐'的第3-15或3-17位氨基酸所確定的氨基酸片段；在本發(fā)明第一方面的更一般的實(shí)施方案中，本文所提供的環(huán)狀肽可以為式II，III或ΙΙΓ的環(huán)狀肽。在本發(fā)明第一方面另外特定的實(shí)施方案中，本文所提供的環(huán)狀肽可以包含如下氨基酸片段aci-Glu-Ala-bas-bas-Cys-Tyr-neu-aci-neu-bas；aci-neu-aci-Glu-Ala-bas-bas-Cys-Tyr-neu-aci-neu-bas；aci-Glu-Ala-bas-bas-Cys-Tyr-neu-aci-neu-bas-Cys-Ser；或aci-neu-aci-Glu-Ala-bas-bas-Cys-Tyr-neu-aci-neu-bas-Cys-Ser,其中“aci”代表酸性氨基酸，“neu”代表中性氨基酸且“bas”代表堿性氨基酸。上文兩個(gè)氨基酸片段的每一個(gè)氨基酸殘基也可以獨(dú)立地確定為如本文所提供的式I，II，III，III'，IV，V和V的任一個(gè)的相應(yīng)氨基酸殘基。在本發(fā)明第一方面的另外具體的實(shí)施方案中，本文所提供的環(huán)狀肽可以包含如下氨基酸片段(aminoacidstretch)Asp-Xxx1-Xxx4-Arg-Arg-Cys-Xxx3-Asn-Asp-Pro-Lys(SEQIDNO.45)或Glu-Ser-Asp-Xxx1-Xxx4-Arg-Arg-Cys-Xxx3-Asn-Asp-Pro-Lys(SEQIDNO.46)。其中如上文所示的式所提及的，乂％被確定為‘、”或“<，乂^被確定為“X”或“x3”和/或Xxx4被確定為“X”或“x4”。例如上述氨基酸片段可以為Asp-Glu-Ala-Arg-Arg-Cys-Tyr-Asn-Asp-Pro-Lys(SEQIDNO.45)或Glu-Ser-Asp-Glu-Ala-Arg-Arg-Cys-Tyr-Asn-Asp-Pro-Lys(SEQIDNO.46)。本文特別考慮的是，本發(fā)明環(huán)狀肽包含一個(gè)或多個(gè)由β^EC11攜帶的表位，例如像任一上文所提及的氨基酸片段(或所公開的包含這些氨基酸片段的環(huán)狀肽的部分)所攜帶的表位。在本文中，術(shù)語“表位”具體指與(自身)抗βrAR抗體結(jié)合的氨基酸片段。具體地，本發(fā)明中的表位由至少3個(gè)、至少4個(gè)、至少5個(gè)、至少6個(gè)、至少7個(gè)、至少8個(gè)、至少9個(gè)、至少10個(gè)、至少11個(gè)、至少12個(gè)、至少13個(gè)或至少14個(gè)氨基酸組成。本領(lǐng)域技術(shù)人員處在推論β!-EC11的哪個(gè)特定氨基酸殘基促成(自身)抗β「AR抗體結(jié)合的表位的位置。因此，他能推出至少哪個(gè)特定氨基酸殘基必須包含在本發(fā)明的環(huán)狀肽中以確保這些肽結(jié)合(自身)抗P1-AR抗體。為此，可利用若干本領(lǐng)域中已知的手段和方法(例如，用于表位定位的手段和方法(像P印Sp0tsTM、BiaC0re、氨基酸掃描(像丙氨酸掃描))。根據(jù)本發(fā)明，非限定性環(huán)狀肽實(shí)例為選自以下的環(huán)狀肽a)由如SEQIDNO.41，43，1_4和17_20的任一個(gè)所示的氨基酸序列形成或可形成的環(huán)狀肽；b)由如SEQIDNO.42，44，9-12，25-28，49，50，53和54的任一個(gè)所示的核苷酸序列編碼的氨基酸序列形成或可形成的環(huán)狀肽；和c)由核苷酸序列編碼的氨基酸序列形成或可形成的環(huán)狀肽，由于遺傳密碼的簡并性，所述核苷酸序列不同于SEQIDN0.42，44，9-12，25-28，49，50，53和54的任一個(gè)所示的核苷酸序列。根據(jù)本發(fā)明的環(huán)狀肽中，特別優(yōu)選那些為Cys-Ser突變肽的環(huán)狀肽，即對應(yīng)于β!-EC11的第三個(gè)Cys(位于βrAR位置216的Cys)的Cys被Ser交換的環(huán)狀肽。上文給出的實(shí)例指的是這種特別優(yōu)選的環(huán)狀肽。如所附加的實(shí)施所顯示的，這種環(huán)狀肽在抑制或診斷抗P1-AR抗體中特別有用。下文的式VI到IX'的任一個(gè)給出了上述示例性特別優(yōu)選的環(huán)狀肽的特定結(jié)構(gòu)環(huán)(Arg-Ala-Glu-Ser-Asp-Glu-Ala-Arg-Arg-Cys-Tyr-Asn-Asp-Pro-Lys-Cys-Ser-Asp-Phe-Val-Thr-Gly)(IX')；環(huán)(Ala-Asp-Glu-Ala-Arg-Arg-Cys-Tyr-Asn-Asp-Pro-Lys-Cys-Ser-Asp-Phe-Va1-Gln)(VI)；環(huán)(Ala-Arg-Ala-Glu-Ser-Asp-Glu-Ala-Arg-Arg-Cys-Tyr-Asn-Asp-Pro-Lys-Cys-Ser-Asp-Phe-Val-Thr-Asn-Arg-Gln)(VII)；環(huán)(Ala-Asp-Glu-Ala-Arg-Arg-Cys-Tyr-Asn-Asp-Pro-Lys-Cys-Ser-Asp-Phe-Va1-DGlu)(VIII)；和環(huán)(Ala-Arg-Ala-Glu-Ser-Asp-Glu-Ala-Arg-Arg-Cys-Tyr-Asn-Asp-Pro-Lys-Cys-Ser-Asp-Phe-Val-Thr-Asn-Arg-DGlu)(IX)0根據(jù)本發(fā)明，非限定性的次優(yōu)選的環(huán)狀肽實(shí)例為選自以下的環(huán)狀肽a)由如SEQIDN0.5_8和21_24的任一個(gè)所示的氨基酸序列可形成或形成的環(huán)狀肽；b)由如SEQIDNO.13_16和29_32的任一個(gè)所示的核苷酸序列所編碼的氨基酸序列可形成或形成的環(huán)狀肽；和c)由核苷酸序列編碼的氨基酸序列可形成或形成的環(huán)狀肽，所述核苷酸序列由于遺傳密碼的簡并性不同于SEQIDNO.29-32任一個(gè)所示的核苷酸序列。下文的式X到XIII的任一個(gè)給出了上文示例性次優(yōu)選的環(huán)狀肽的特定結(jié)構(gòu)環(huán)(Ala-Asp-Glu-Ala-Arg-Arg-Cys-Tyr-Asn-Asp-Pro-Lys-Ser-Cys-Asp-Phe-VaI-Gln)⑴；環(huán)(Ala-Arg-Ala-Glu-Ser-Asp-Glu-Ala-Arg-Arg-Cys-Tyr-Asn-Asp-Pro-Lys-Ser-Cys-Asp-Phe-Val-Thr-Asn-Arg-Gln)(XI)；環(huán)(Ala-Asp-Glu-Ala-Arg-Arg-Cys-Tyr-Asn-Asp-Pro-Lys-Ser-Cys-Asp-Phe-Va1-DGlu)(XII)；環(huán)(Ala-Arg-Ala-Glu-Ser-Asp-Glu-Ala-Arg-Arg-Cys-Tyr-Asn-Asp-Pro-Lys-Ser-Cys-Asp-Phe-Val-Thr-Asn-Arg-DGlu)(XIII)。上述肽是本發(fā)明次優(yōu)選的實(shí)施方案，因?yàn)槿纭癈ys-Ser”突變肽(“Cys-Ser”環(huán)狀肽)的肽尤其是在體內(nèi)的作用強(qiáng)于本文所確定的次優(yōu)選的“Ser-Cys”突變肽(“Ser-Cys”環(huán)狀肽)。在本文中值得注意的是，本發(fā)明的環(huán)狀肽的最優(yōu)選的實(shí)例特別為那些藥理學(xué)和/或診斷功能已在所附的實(shí)施例中被證實(shí)的環(huán)狀肽(例如式VI到IX'的任一個(gè)所表征的那些)?？梢岳斫獾氖?，對于本發(fā)明的各種不同的肽，只要能保證相應(yīng)肽的至少由一些確定的氨基酸殘基和它們的空間排列所確定的總體二級和三級結(jié)構(gòu)，例如氨基酸序列主鏈的一級序列中的特定的柔韌性和變異性是可能的(例如見式I，上述)?；诒疚乃峁┑慕虒?dǎo)，一方面，本領(lǐng)域技術(shù)人員容易發(fā)現(xiàn)本發(fā)明的肽的相應(yīng)的變體。另一方面，本領(lǐng)域技術(shù)人員能測試本發(fā)明的肽的特定變異體是否仍具有期望的功能，例如特異性結(jié)合β-AR抗體的能力，因此而擁有相應(yīng)的像本文所提供和描述的治療和診斷應(yīng)用的醫(yī)學(xué)干預(yù)的潛能。本文示例性提供和描述了上述測試，即相應(yīng)的測定的實(shí)驗(yàn)指南，，特別是在附加的實(shí)施例中。因此，本文也提供本文所公開和描述的肽的變體，只要是，首先這些變體仍有符合本發(fā)明的功能性活性，即作為抗β-AR抗體、特別作為抗βrECn的抗βi-AR抗體的結(jié)合配體的功能活性，更具體地作為P1-AR的阻斷劑的功能活性和甚至更優(yōu)選在抑制P1-AR與針對β!-EC11的抗βrAR(更優(yōu)選針對β!-EC11的自身-抗βrAR抗體)間的相互作用中的活性；和其次，當(dāng)根據(jù)本發(fā)明的生產(chǎn)方法環(huán)化時(shí)，這些變體不會以異構(gòu)體混合物的形式出現(xiàn)且不會形成異構(gòu)體混合物。這些變體被考慮為含有僅兩個(gè)特定的半胱氨酸殘基，所述兩個(gè)殘基形成或能夠形成僅一個(gè)單獨(dú)的分子內(nèi)鍵(例如二硫鍵)。在本發(fā)明的肽的變體中，例如考慮將所述肽的一個(gè)或多個(gè)氨基酸用另外的一個(gè)或多個(gè)天然存在或合成的氨基酸取代。在本文中，優(yōu)選這一/這些氨基酸交換為保守的氨基酸交換，即取代氨基酸與被取代的氨基酸屬于同一類的氨基酸。例如，一個(gè)酸性氨基酸可被另一個(gè)酸性氨基酸所取代、一個(gè)堿性氨基酸可被另一個(gè)堿性氨基酸所取代，脂肪氨基酸可被另一個(gè)脂肪氨基酸所取代和/或一個(gè)極性氨基酸可被另一個(gè)極性氨基酸所取代。因此，本發(fā)明特別優(yōu)選和提供的(環(huán))肽的變體為如下變體其中至少一個(gè)酸性氨基酸被選自酸性氨基酸的不同的氨基酸所取代，至少有一個(gè)堿性氨基酸被選自堿性氨基酸的不同的氨基酸所取代，至少有一個(gè)極性氨基酸被選自極性氨基酸的不同的氨基酸所取代和/或至少有一個(gè)脂肪族氨基酸被選自脂肪族氨基酸的不同的氨基酸所取代(只要是滿足上文所提及的要求)。特別考慮的是，導(dǎo)致形成所公開的(環(huán))肽的變體的氨基酸交換使得產(chǎn)生的變體的三級結(jié)構(gòu)中的極性和電荷的形式實(shí)質(zhì)上仍模擬相應(yīng)的βrAR的EC11表位的三維結(jié)構(gòu)。在本發(fā)明的(環(huán))肽的變體方面，本文所確定的半胱氨酸也可被另外的氨基酸取代，只要這一取代仍可導(dǎo)致形成環(huán)肽中像二硫鍵那樣的單獨(dú)的分子內(nèi)鍵，即環(huán)化期間異構(gòu)體混合物形成的避免和/或βrAR的EC11的正確模擬。上述氨基酸尤其可能為非天然形成的氨基酸，像含有能形成二硫鍵的-SH基團(tuán)的非天然形成的氨基酸。然而，本文優(yōu)選的是，上文式I中所給出的Cys確實(shí)為天然形成的氨基酸，優(yōu)選半胱氨酸自身。本領(lǐng)域中的技術(shù)人員也公認(rèn)的是形成本發(fā)明的(環(huán))肽的一個(gè)或幾個(gè)氨基酸可被修飾。與此相對應(yīng)的是，本文所使用的任一氨基酸都可代表其修飾形式。例如，本文所使用的丙氨酸殘基可包含一個(gè)修飾的丙氨酸殘基。上述的修飾尤其可為甲基化或酰基化等，從而這種修飾或修飾的氨基酸優(yōu)選包含在本發(fā)明中，只要這樣修飾的氨基酸，更具體地是包含所述這樣修飾的氨基酸的肽仍有本文所確定的功能性活性，比如作為抗P1-AR抗體的抑制劑的功能性活性，優(yōu)選在抑制βrAR與抗體間相互作用方面的活性，更優(yōu)選作為直接針對^1-AR的自身抗體。確定所述肽，即包含一個(gè)或幾個(gè)修飾的氨基酸的肽是否滿足這一要求的相應(yīng)測定法為本領(lǐng)域中技術(shù)人員所知曉，其中包括那些本文、特別是在本文實(shí)施例部分描述的那些。本發(fā)明也提供了所公開的(環(huán))肽的衍生物，諸如像鹽酸、硫酸、磷酸、蘋果酸、反丁烯二酸、枸櫞酸、tatratic酸、乙酸的生理學(xué)的有機(jī)酸和無機(jī)酸的鹽。如本文所使用的，自N末端到C末端顯示公開的肽序列，由此N末端在所描述的相應(yīng)氨基酸序列的左側(cè)而C末端在所描述的相應(yīng)氨基酸序列的右側(cè)。當(dāng)提及環(huán)狀肽時(shí)，自對應(yīng)于式I的左側(cè)到對應(yīng)于公式I的右側(cè)顯示對應(yīng)的序列。根據(jù)本發(fā)明，“環(huán)狀肽”或“環(huán)肽”等為在其氨基酸主鏈/一級氨基酸序列中通過具有共價(jià)特征的至少一個(gè)、優(yōu)選至少兩個(gè)、更優(yōu)選恰好兩個(gè)分子內(nèi)鍵在分子內(nèi)形成分子環(huán)狀結(jié)構(gòu)的肽。在本發(fā)明中，這一分子環(huán)狀結(jié)構(gòu)的形成過程也稱為“環(huán)化”。在一具體優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明的環(huán)狀肽有兩個(gè)具有共價(jià)特征的分子內(nèi)鍵，其中這些鍵中的一個(gè)為肽的N和C末端間的分子內(nèi)鍵，所述肽為公開的環(huán)狀肽的氨基酸主鏈/一級氨基酸序列，另一個(gè)是位于該肽的兩個(gè)非末端的氨基酸間的分子內(nèi)鍵合。如所提及的，這兩個(gè)非末端氨基酸可以是兩個(gè)Cys。通常，本發(fā)明的“環(huán)化”可以通過至少一個(gè)選自S-S鍵、肽鍵、諸如C-C或C=C的碳鍵、酯鍵、乙醚鍵、偶氮鍵、C-S-C鍵、C-N-C鍵和C=N-C鍵的共價(jià)結(jié)合的鍵發(fā)生。具體地，能通過肽的N末端氨基酸的NH2基團(tuán)和肽的C末端氨基酸的COOH基團(tuán)形成如本發(fā)明自始至終所提及的的肽鍵，所述肽形成所公開的環(huán)狀肽的氨基酸主鏈/一級氨基酸序列。優(yōu)選地，形成所公開的環(huán)狀肽的氨基酸主鏈/一級氨基酸序列的肽的N和C末端間的分子內(nèi)鍵是肽鍵，并且位于該肽的兩個(gè)非末端氨基酸間的分子內(nèi)鍵為S-S鍵(例如二硫鍵)。在本發(fā)明中，在提供的環(huán)狀肽的氨基酸主鏈/一級氨基酸序列中的兩個(gè)Cys殘基間能形成在所述環(huán)狀肽中的分子內(nèi)S-S鍵。在本發(fā)明的環(huán)狀肽內(nèi)，不但可以形成上文提及的兩個(gè)特定的分子內(nèi)共價(jià)鍵，而且在下述條件下還可以形成另外的分子內(nèi)鍵保持本文所描述的環(huán)狀肽的功能和仍能容易地對環(huán)狀肽進(jìn)行生化表征，這例如意味著在相應(yīng)的氨基酸主鏈/一級氨基酸序列的環(huán)化期間不會形成異構(gòu)體混合物。例如，上述另外的分子內(nèi)鍵為由組成氨基酸(constituentaminoacids)的NH2基團(tuán)和C00H基團(tuán)的側(cè)鏈形成的附加鍵。如本發(fā)明自始至終所使用的“氨基酸主鏈”或“一級氨基酸序列，，的術(shù)語一方面指的是環(huán)狀肽的結(jié)構(gòu)組分或部分，其由它對應(yīng)的氨基酸序列可形成或形成，。另一方面，這些術(shù)語指的是能通過環(huán)化作用形成本發(fā)明的環(huán)狀肽的線性的肽。在本發(fā)明第一方面的一個(gè)具體實(shí)施方案中，所提供的環(huán)狀肽為可通過如本文所提供的環(huán)狀肽的生產(chǎn)方法獲得的。上文所給出的定義也適用于這一具體提供的本發(fā)明的環(huán)狀肽。在本發(fā)明第一方面的一個(gè)具體實(shí)施方案中，也提供了這樣的肽，所公開的環(huán)狀肽通過這樣的肽可形成或形成。具體地，這些肽是形成或能夠形成本文公開的環(huán)狀肽的線性肽，即其氨基酸主鏈/一級氨基酸序列?？傊@種線性肽可為任一肽，其N和C末端的共價(jià)鍵產(chǎn)生如本發(fā)明中所公開的環(huán)狀肽。例如，這種線性肽可以是生產(chǎn)本發(fā)明的環(huán)狀肽的過程中的某種中間化合物，所述過程如本文所公開的生產(chǎn)環(huán)狀肽的方法?？傊诒景l(fā)明中，本文所提供的線性肽的N和C末端可以是位于所公開的環(huán)狀肽的氨基酸主鏈中的直接相互鄰近處的任一氨基酸對。換句話說，本發(fā)明的環(huán)狀肽的環(huán)化(環(huán)閉合)通常發(fā)生在任一所述氨基酸對之間。技術(shù)人員容易發(fā)現(xiàn)這種特定的氨基酸對，其能夠有效地/適合作為本文所公開的線性肽的N和C末端，即其能夠有效地/適合作為參與本發(fā)明中所確定的環(huán)閉合/環(huán)化的氨基酸對。在一優(yōu)選的但非限定性的實(shí)例中，本發(fā)明的線性肽的環(huán)化(環(huán)閉合)可以發(fā)生在Ala與Gin或Glu間，即這一線性肽的N末端氨基酸可為Ala，并且C末端氨基酸可為Gin或Glu。能形成本發(fā)明的環(huán)狀肽的這種線性肽的實(shí)例為SEQIDNO.1-4和次優(yōu)選的SEQIDNO.5-8。在另一優(yōu)選的但非限定性的實(shí)例中，本發(fā)明的線性肽的環(huán)化(環(huán)閉合)可以發(fā)生在Lys與Pro間，即這一線性肽的N末端氨基酸可為Lys且C末端氨基酸可為Pro。能形成本發(fā)明的環(huán)狀肽的這種線性肽的實(shí)例為SEQIDNO.17-20和次優(yōu)選的SEQIDNO.21-24。在另一更優(yōu)選的但非限定性的實(shí)例中，特別當(dāng)所提供的為22mer環(huán)狀肽時(shí)，本發(fā)明的線性肽的環(huán)化(環(huán)閉合)可以發(fā)生在Arg與Gly間，即這一線性肽的N末端氨基酸可為Arg且C末端氨基酸可為Gly。能形成本發(fā)明的環(huán)狀肽的這種線性肽的實(shí)例為SEQIDNO.41。在另一更優(yōu)選的但非限定性的實(shí)例中，特別當(dāng)所提供的為22mer環(huán)狀肽時(shí)，本發(fā)明的線性肽的環(huán)化(環(huán)閉合)可以發(fā)生在Lys與Pro間，即這一線性肽的N末端氨基酸可為Lys且C末端氨基酸可為Pro。能形成本發(fā)明的環(huán)狀肽的這種線性肽的實(shí)例為SEQIDNO.43。除了它們的氨基酸主鏈之外，本發(fā)明的環(huán)狀肽還可以包含(例如共價(jià)結(jié)合的)(a)另外的取代基，像標(biāo)記物、錨定基(像蛋白性膜錨定基)、標(biāo)簽(像組氨酸標(biāo)簽)等。合適的取代基和將它們添加到本發(fā)明的環(huán)狀肽的方法都為本領(lǐng)域中的技術(shù)人員所熟知。本文中的標(biāo)記物的實(shí)例尤其包括熒光染料(像熒光素、若丹明、德克薩斯紅(TexasRed)等)、酶(像辣根過氧化物酶、3_半乳糖苷酶、堿性磷酸酶)、放射性同位素(像32P、33P，35S、121I或123I、135I、124I、11C、150)、生物素、地高辛、膠體金屬、化學(xué)或生物發(fā)光化合物(像二氧烷酮基、魯米諾或吖啶酯)?？梢耘c本發(fā)明的肽結(jié)合的特別考慮的一種標(biāo)記物為屬于熒光染料的FRET對的熒光染料，例如GFP變體(例如GFP、eGFP、EYFP或ECFP)?？梢岳酶鞣N用于標(biāo)記生物分子的技術(shù)，這些技術(shù)為本領(lǐng)域中技術(shù)人員所熟知并被認(rèn)為在本發(fā)明的范圍內(nèi)并且尤其包含酶或生物素基團(tuán)的共價(jià)偶聯(lián)，磷酸化作用，生物素(酰)化，隨機(jī)引物法，切口平移法，拖尾(利用末端轉(zhuǎn)移酶)法。這些技術(shù)例如在Tijssen，‘‘Practiceandtheoryofenzymeimmunoassays，，，BurdenandvonKnippenburg(Eds)，Volume15(1985)；“Basicmethodsinmolecularbiology”，DavisLG，DibmerMD，BatteyElsevier(1990)；Mayer,(Eds)"Immunochemicalmethodsincellandmolecularbiology，，AcademicPress，London(1987)；或在“MethodsinEnzymology”，AcademicPress,Inc.系列中有所描述。檢測方法包括，但不限于，放射自顯影法、熒光顯微法、直接和間接酶促反應(yīng)等。取代基可直接或通過連接子與本發(fā)明的環(huán)狀肽結(jié)合(例如共價(jià)地)。技術(shù)人員容易地找到應(yīng)用于本文中的合適的連接子。另一方面，本發(fā)明涉及包含編碼本發(fā)明中所公開的環(huán)狀肽的氨基酸主鏈/一級氨基酸序列的核苷酸序列的核酸分子。本發(fā)明也涉及包含編碼本文所提供和描述的線性肽的核苷酸序列的核酸分子。例如，這種核酸分子可以包含如SEQIDNO.42，44，9-12，25-28，49，50，53和54中的任一個(gè)或如次優(yōu)選的SEQIDNO.13-16和29-32中的任一個(gè)所描述的核苷酸序列或由于遺傳密碼子的簡并性而與其有所不同的核苷酸序列。術(shù)語“核酸分子”、“核酸序列”和“核苷酸序列”等術(shù)語的意義為本領(lǐng)域所熟知并且相應(yīng)地應(yīng)用于本發(fā)明中。例如，當(dāng)在本發(fā)明自始至終使用時(shí)，這些術(shù)語指所有天然存在形式的或重組產(chǎn)生的類型的核苷酸序列和/或核酸序列/分子以及指化學(xué)合成的核苷酸序列和/或核酸序列/分子。這些術(shù)語也包含核酸類似物和核酸衍生物，諸如，例如鎖DNA、PNA、寡聚核苷酸硫代磷酸酯和取代的寡聚核糖核苷酸。此外，這些術(shù)語還指包含核苷酸或核苷酸類似物的任一分子。優(yōu)選地，“核酸分子”、“核酸序列，，和“核苷酸序列，，等術(shù)語指脫氧核糖核酸(DNA)和核糖核酸(RNA)?！昂怂岱肿印?、“核酸序列”和“核苷酸序列”可通過本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的合成化學(xué)方法學(xué)、或通過利用重組技術(shù)來制備，或者從天然來源中分離或通過其組合來制備。DNA和RNA可以任選地包含非天然的核苷酸并且可以為單鏈或雙鏈?！昂怂岱肿印?、“核酸序列”和“核苷酸序列”還指正義和反義DNA和RNA，即與DNA和/或RNA中的特定核苷酸序列互補(bǔ)的核苷酸序列。此外，“核酸分子”、“核酸序列”和“核苷酸序列”等術(shù)語可以指DNA或RNA或其雜交體或其在現(xiàn)有技術(shù)中已知的任一修飾物(例如參見US5525711，US4711955，US5792608或EP302175的修飾物的實(shí)例)。本發(fā)明的這些分子可為單鏈或雙鏈的、線性的或環(huán)狀的、天然或合成的，并且沒有任何大小的限制。例如，“核酸分子”、“核酸序列”和“核苷酸序列”可以為基因組的DNA、cDNA、mRNA、反義RNA、核酶或編碼上述RNA的DNA或嵌合體(Cole-StraussScience1996273(5280)1386-9)。它們可為質(zhì)粒形式或病毒DNA或RNA的形式。“核酸分子”、“核酸序列”和“核苷酸序列”等還指寡聚核苷酸，其中包括現(xiàn)有技術(shù)中的任一修飾物，諸如硫代磷酸酯或肽核酸(PNA)。本文所提供的核酸分子特別用于生產(chǎn)本發(fā)明的環(huán)狀肽，例如通過本文所公開的相應(yīng)的方法。另一方面，本發(fā)明還涉及包含如本文所公開和上文描述的核酸分子的載體。所述載體可為克隆性載體或表達(dá)性載體，例如噬菌體、質(zhì)粒、病毒或逆轉(zhuǎn)錄病毒載體。逆轉(zhuǎn)錄病毒載體可以具有復(fù)制能力或?yàn)閺?fù)制缺陷型。在后一種情況下，病毒增殖通常只發(fā)生在互補(bǔ)的宿主/細(xì)胞中。本文所提供的核酸分子可以連接到包含用于在宿主中增殖的選擇性標(biāo)記物的特定載體。通常，在諸如磷酸鈣沉淀物或氯化銣沉淀物的沉淀物中，或在帶電荷的脂質(zhì)的復(fù)合物中，或諸如富勒烯的碳基簇中引入質(zhì)粒載體。如果載體為病毒，可以在應(yīng)用于宿主細(xì)胞前利用合適的包裝細(xì)胞株將其在體外包裝。優(yōu)選地，本發(fā)明的核酸分子可操作地連接到允許在原核或真核細(xì)胞或其分離的部分中表達(dá)的表達(dá)調(diào)控序列(例如在本文所公開的載體中)。所述多聚核苷酸的表達(dá)包括核酸分子的轉(zhuǎn)錄，優(yōu)選將核酸分子轉(zhuǎn)錄為可翻譯的mRNA。確保在真核細(xì)胞中、優(yōu)選在哺乳動物細(xì)胞中表達(dá)的調(diào)節(jié)元件為本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知。它們通常包含確保轉(zhuǎn)錄起始的調(diào)節(jié)序列和確保轉(zhuǎn)錄終止和轉(zhuǎn)錄物穩(wěn)定的任選的多聚A信號。額外的調(diào)節(jié)元件可包括轉(zhuǎn)錄及翻譯增強(qiáng)子。允許真核宿主細(xì)胞內(nèi)表達(dá)的可能的調(diào)節(jié)元件包含例如大腸桿菌中的lac、trp或tac啟動子，并且允許真核宿主細(xì)胞內(nèi)表達(dá)的調(diào)節(jié)元件的實(shí)例有酵母中的A0X1或GAL1啟動子或哺乳動物和其它動物細(xì)胞中的CMV-，SV40-，RSV-啟動子(魯斯氏肉瘤)、CMV-增強(qiáng)子、SV40-增強(qiáng)子或珠蛋白內(nèi)含子。除了負(fù)責(zé)轉(zhuǎn)錄起始的元件外，上述的調(diào)節(jié)元件還可以包括轉(zhuǎn)錄終止信號，諸如SV40-多聚-A位點(diǎn)或tk-多聚-A位點(diǎn)，多聚核苷酸的下游區(qū)。在本文中，合適的表達(dá)載體諸如Okayama-BergcDNA表達(dá)載體pcDVl(Pharmacia)、pCDM8、pRc/CMV,pcDNAUpcDNA3(Invitrogen),pSPORTl(GIBCOBRL)是本領(lǐng)域已知的。優(yōu)選地，所述載體為表達(dá)載體和/或基因轉(zhuǎn)移載體。衍生于諸如下述的病毒的表達(dá)載體可以用于將本發(fā)明的多聚核苷酸或載體遞運(yùn)到靶向的細(xì)胞群逆轉(zhuǎn)錄病毒、腺病毒、牛痘病毒、腺相關(guān)病毒、皰疹病毒或牛乳頭瘤病毒。為本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的方法可用于構(gòu)建符合本發(fā)明的載體；例如參見Sambrook,MolecularCloningALaboratoryManual,ColdSpringHarborLaboratory(1989)N.Y.禾口Ausubel,CurrentProtocolsinMolecularBiology,GreenPublishingAssociates禾口WileyInterscience,N.Y.(1994)中所描述的技術(shù)。可選地，可將本發(fā)明的多聚核苷酸和載體重建到脂質(zhì)體中以用于遞送到靶細(xì)胞。術(shù)語“其分離的部分”指能夠從本發(fā)明的載體轉(zhuǎn)錄或者轉(zhuǎn)錄和翻譯RNA的真核或原核細(xì)胞或組織的部分。所述部分包含RNA轉(zhuǎn)錄所需的蛋白或者RNA轉(zhuǎn)錄以及所述RNA翻譯為多肽所需的蛋白。例如，所述分離的部分可為真核細(xì)胞諸如網(wǎng)織紅細(xì)胞的核和胞漿部分。包含上述細(xì)胞或組織的分離的部分、用于轉(zhuǎn)錄和翻譯RNA的試劑盒可以商購，例如TNT網(wǎng)織紅細(xì)胞裂解物(TNTreticulolysate,Promega)。此外，像本發(fā)明的核酸分子，本文所提供和描述的載體也特別用于生產(chǎn)本發(fā)明的環(huán)狀肽，例如通過本文所公開的相應(yīng)的方法。在另一方面，本發(fā)明涉及包含如本文所公開的核酸分子和/或載體的重組宿主細(xì)胞。在這一方面，本文所公開的核酸分子和/或載體尤其能用于基因工程宿主細(xì)胞，例如以表達(dá)和分離本文所公開的環(huán)狀肽的氨基酸主鏈/一級氨基酸序列，并由此表達(dá)和分離本發(fā)明的線性肽。上述宿主細(xì)胞可為原核或真核細(xì)胞；參見上文。出現(xiàn)在宿主細(xì)胞中的核酸分子或載體可被整合到宿主細(xì)胞的基因組或其仍保持在染色體外。宿主細(xì)胞可為任一原核或真核細(xì)胞，諸如細(xì)菌的、昆蟲的、真菌的、植物的、動物的、哺乳動物的或優(yōu)選人類細(xì)胞。例如優(yōu)選的真菌細(xì)胞為酵母屬那些、尤其是釀酒酵母種的那些，或者屬于菌絲真菌組的那些、例如若干青霉株或曲霉株。術(shù)語“原核的”意味著包括所有能被核酸分子轉(zhuǎn)化或轉(zhuǎn)染以用于表達(dá)本文所公開的環(huán)狀肽的氨基酸主鏈/一級氨基酸序列，從而表達(dá)本發(fā)明的線性肽的細(xì)菌。原核宿主可以包括革蘭氏陰性及革蘭氏陽性細(xì)菌諸如，例如大腸桿菌(E.coli)、鼠傷寒沙門氏菌(S.typhimurium)、粘質(zhì)沙雷氏菌(Serratiamarcescens)和枯草桿菌(Bacillussubtilis)。利用本領(lǐng)域中技術(shù)人員所普遍知曉的任一技術(shù)，能夠?qū)⒂糜诰幋a本文所公開的環(huán)狀肽的氨基酸主鏈/一級氨基酸序列，從而編碼本發(fā)明的線性肽的核酸分子用于轉(zhuǎn)化或轉(zhuǎn)染宿主。制備融合的、可操作地連接的基因并在細(xì)菌或動物細(xì)胞中表達(dá)它們的方法為本領(lǐng)域中所熟知(Sambrook，見上文)。本文所描述的基因構(gòu)建體和方法可用于在例如原核宿主中表達(dá)上文提及的氨基酸主鏈/一級氨基酸序列和線性肽?？傊?，促進(jìn)插入的多聚核苷酸有效轉(zhuǎn)錄的包含啟動子序列的表達(dá)載體被用于與宿主的連接。表達(dá)載體代表性地包含復(fù)制起始點(diǎn)、啟動子和終止子及能夠提供轉(zhuǎn)化的細(xì)胞的表型選擇的特定基因。轉(zhuǎn)化的原核宿主能夠在發(fā)酵罐中生長，并能夠根據(jù)本領(lǐng)域中已知的技術(shù)培養(yǎng)轉(zhuǎn)化的原核宿主以實(shí)現(xiàn)最佳的細(xì)胞生長。然后能夠從生長培養(yǎng)基、細(xì)胞溶解物或細(xì)胞膜部分中分離表達(dá)的肽。微生物表達(dá)或以另外方式表達(dá)的肽的分離和純化可借助任一常規(guī)方法諸如，例如制備型色譜分離法和諸如涉及單克隆或多克隆抗體使用的那些的免疫學(xué)分離法(Ausubel，CurrentProtocolsinMolecularBiology,GreenPublishingAssociatesandWileyInterscience,N.Y.(1994))。此外，像本文所描述和提供的核酸分子和載體，相應(yīng)的宿主細(xì)胞也特別用于生產(chǎn)本發(fā)明的環(huán)狀肽，例如，通過文本所公開的相應(yīng)的方法。然而在另一方面，本發(fā)明涉及生產(chǎn)本發(fā)明的環(huán)狀肽的方法，包括以下步驟a)⑴在使本文公開的環(huán)狀肽的氨基酸主鏈(或本發(fā)明的線性肽)表達(dá)的條件下培養(yǎng)本發(fā)明的重組宿主細(xì)胞，并且回收上述的氨基酸主鏈(或上述的本發(fā)明的線性肽)；或(ii)化學(xué)合成本文所公開的環(huán)狀肽的氨基酸主鏈(或本發(fā)明的線性肽)；以及b)使上述氨基酸主鏈(或上述線性肽)環(huán)化以形成本文所公開的環(huán)狀肽。上文所給出的關(guān)于術(shù)語“環(huán)化”的定義適用于此處，并可作必要的變化。在上文方法的具體背景下，術(shù)語“環(huán)化”的含義包括分子內(nèi)鍵(二硫鍵)的形成和通過共價(jià)連接環(huán)狀肽主鏈的N末端和C末端產(chǎn)生的環(huán)閉合。本文給出的有關(guān)本發(fā)明的環(huán)狀肽、其氨基酸主鏈或相應(yīng)的線性肽及有關(guān)本文所提供的宿主細(xì)胞方面的定義適用于此處，并可作必要的變化。如上文已提及的有關(guān)所提供的環(huán)狀肽和線性肽方面，在本發(fā)明的另一方面的優(yōu)選實(shí)施方案中，待環(huán)化以產(chǎn)生本發(fā)明的環(huán)狀肽的氨基酸主鏈/線性肽的N末端氨基酸為Ala、Arg或Lys，并且相應(yīng)的C末端氨基酸為GlruGly或Glu(DGlu也是可能的)或Pro。然而，如上文所提及的，也考慮其它的N和C末端的氨基酸，即在所公開的方法中也可以使用其它的環(huán)化(環(huán)閉合)位點(diǎn)?；诠ＷR和如W02006/103101的現(xiàn)有技術(shù)(其公開了如何合成肽特別是環(huán)狀肽的通用方法)，本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠容易地將本文所公開的生產(chǎn)環(huán)狀肽的方法付諸實(shí)施。另外，例如在附加的實(shí)驗(yàn)部分(實(shí)施例1)中的本發(fā)明的教導(dǎo)提供了能夠?qū)崿F(xiàn)的技術(shù)指導(dǎo)。在本發(fā)明的非限定性實(shí)施例1中，將環(huán)肽首先合成為其線性肽/氨基酸主鏈的形式(例如通過應(yīng)用化學(xué)合成方法，比如芴甲氧羰基/叔丁基策略(Fmoc/tertbutylstrategy)(如WO2006/103101中所記載的；Chenff.C.andWhiteP.D.:FmocSolidPhasePeptideSynthesis,OxfordUniversityPress2003))，然后通過C末端的羧基基團(tuán)與N末端氨基酸的氨基的縮合將其在主鏈中共價(jià)環(huán)化(“頭到尾”環(huán)化；KatesS.andAlbericioF.Solidphasesynthesis,CRC-Press,2000)。隨后，通過本領(lǐng)域已知的化學(xué)相互作用(e.g.BenoitonN.L.:ChemistryofPetideSynthesis.CRC-Press,2005)在能形成二硫鍵的線性肽的那兩個(gè)半胱氨酸殘基間形成二硫鍵(例如18mer肽的Cys7和Cys13間，22mer肽的Cys1(1和Cys16間，或者25mer肽的Cysn和Cys17間)?？傊谏衔拿枋龅姆椒ǖ摹碍h(huán)化”步驟中，待生產(chǎn)的環(huán)狀肽的線性主鏈的環(huán)閉合可在S-S鍵形成之前或之后完成。換句話說，肽氨基酸鏈的兩個(gè)半胱氨酸殘基間的S-S鍵可為所描述的生產(chǎn)過程的“環(huán)化”步驟的第一步而環(huán)閉合為第二步，或反之亦然。技術(shù)人員能發(fā)現(xiàn)這些具體方法的哪一種是適合給出的生產(chǎn)先決條件的方案。如上文所提及的，待生產(chǎn)的線性肽/環(huán)狀肽的氨基酸主鏈也可通過重組工程技術(shù)來生產(chǎn)。上述的技術(shù)在本領(lǐng)域中是熟知的(例如Sambrook，見上文)。特別地，也如上文所提及的，所述線性肽/氨基酸主鏈的這種生產(chǎn)方式可以利用本文公開和描述的核酸分子、載體和/或宿主細(xì)胞。相應(yīng)地上文給出的定義也適用于此處，并可作必要的修改。肽合成的若干方法，特別是環(huán)狀肽的合成方法為本領(lǐng)域中是已知的(例如Williams,ChemicalApproachestotheSynthesisofPeptides,CRC-Press1997；Benoiton:ChemistryofPeptideSynthesis.CRC-Press，2005)。技術(shù)人員基于本文提供的教導(dǎo)，能夠容易地將現(xiàn)有技術(shù)知識適用于所公開的生產(chǎn)環(huán)狀肽的方法的特定要求。如上文已提及的，本發(fā)明還涉及通過上文所描述的方法可獲得的或獲得的環(huán)狀肽，而且也涉及通過上文所描述的方法可獲得的或獲得的作為某種中間產(chǎn)物(具體地，通過上文描述的方法的步驟a)可獲得的或獲得的產(chǎn)物)的相應(yīng)的線性肽(相應(yīng)的環(huán)狀肽的氨基酸主鏈/一級序列)。總之，本發(fā)明的環(huán)狀肽尤其可用于醫(yī)療干預(yù)方法中。這種方法包括作為診斷試劑或在診斷試劑中的使用和用于生產(chǎn)治療疾病的藥物，或者在組合物中或作為組合物，優(yōu)選藥物組合物、診斷組合物或診斷試劑盒的使用，優(yōu)選用于抗0-AR抗體的檢測，更優(yōu)選用于抗抗體的檢測。如所提及的，本文所確定或描述的抗體優(yōu)選自身抗體?；衔铮貏e是本發(fā)明的環(huán)狀肽的非限定性用途和應(yīng)用描述于本文中，例如在下文中。本發(fā)明還涉及包含本發(fā)明中所公開和提供的環(huán)狀或線性肽、核酸分子、載體或重組宿主細(xì)胞和任選的載體的組合物。在這一方面的一具體實(shí)施方案中，上述的組合物為藥物組合物，并且上述的載體為藥物可接受的載體。如本文所描述和確定的，本發(fā)明的組合物，特別是本發(fā)明的藥物組合物應(yīng)用于治療、改善或預(yù)防時(shí)特別有用。因此，本發(fā)明的藥物組合物可以用于0-AR的活性增強(qiáng)的疾病的治療、改善和預(yù)防或用于治療帶有抗0-AR抗體的患者。而且，本發(fā)明的藥物組合物可以用于誘導(dǎo)患者的免疫耐受，特別是誘導(dǎo)患者對于內(nèi)源性0rAR的免疫原片段的免疫耐受。除了包含至少一個(gè)本發(fā)明的環(huán)狀肽以外，所提供的(藥物)組合物可以包含兩個(gè)或多個(gè)(比如至少3個(gè)或至少5個(gè))本發(fā)明的環(huán)狀肽。同樣地，根據(jù)本發(fā)明，不但一個(gè)，而且兩個(gè)或多個(gè)(比如至少3個(gè)或至少5個(gè))上述的環(huán)狀肽可以給予需要醫(yī)療干預(yù)的患者。因此上述一個(gè)以上的環(huán)狀肽的給藥可以是同時(shí)地或相繼地。而且，在一具體實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及本文所公開的藥物組合物、醫(yī)療干預(yù)的方法或用途或者環(huán)狀肽或藥物組合物，其中上述環(huán)狀肽與至少一個(gè)另外的藥物活性劑一起給藥或上述藥物組合物包含至少一個(gè)另外的藥物活性劑。上述至少一個(gè)另外的藥物活性劑可以是0受體阻斷劑，優(yōu)選選擇性0-AR阻斷劑，例如，比如選自阿替洛爾、美托洛爾、奈比洛爾、比索洛爾等的日rAR阻斷劑。不受理論約束，因?yàn)?rAR同時(shí)通過像比索洛爾或美托洛爾的3阻斷劑上調(diào)，這種特定的組合通過本文所提供的環(huán)狀肽提供防御抗體誘導(dǎo)的選擇性0「At下調(diào)的保護(hù)并且最終產(chǎn)生環(huán)狀肽和附加的0阻斷劑的協(xié)同效應(yīng)。任選地包含在本發(fā)明的(藥物)組合物中或與本發(fā)明的(藥物)組合物或環(huán)狀肽一起給藥的載體可具體為藥物可接受的載體、賦形劑或稀釋劑。上述載體為本領(lǐng)域中所熟知。技術(shù)人員容易地找出特別適合應(yīng)用于本發(fā)明的載體。下文中，描述了若干非限定性給藥方案和相應(yīng)合適的藥物可接受的載體的使用。對于經(jīng)由皮下或靜脈內(nèi)注射給予本發(fā)明的藥物組合物和/或環(huán)狀肽，本發(fā)明的化合物可在水溶液中配制，優(yōu)選在生理性相容的緩沖液中，諸如Hank’s溶液、Ringer’s溶液或生理鹽水緩沖液。對于經(jīng)粘膜或經(jīng)肺給藥，在制劑中使用適于滲透屏障的滲透劑。上述滲透劑為本領(lǐng)域中所通常知曉的。使用藥物可接受的載體將本發(fā)明的化合物配制成適于全身給藥，即靜脈內(nèi)/動脈內(nèi)或皮下給藥的劑型或藥物組合物，這在本發(fā)明的范圍內(nèi)。通過選擇正確的載體和合適的生產(chǎn)實(shí)踐，本發(fā)明的組合物，尤其是配制成溶液的那些，可以經(jīng)胃腸外給藥，諸如經(jīng)靜脈內(nèi)注射。利用本領(lǐng)域中所熟知的藥物可接受的載體，可以容易地將化合物配制成適合于皮下或口腔給藥的劑型。上述載體使本發(fā)明的化合物能配制成為片劑、藥丸、膠囊、錠劑、液體、凝膠、糖漿、水漿、懸浮液等用于治療對象的口服?？梢岳帽绢I(lǐng)域中技術(shù)人員所熟知的技術(shù)，給予預(yù)期體內(nèi)/細(xì)胞內(nèi)給藥的本發(fā)明的化合物或包含化合物的藥物。例如，上述試劑可以包裹在脂質(zhì)體內(nèi)，然后如上文所描述的給藥。脂質(zhì)體為內(nèi)部含水的球狀脂質(zhì)雙分子層。脂質(zhì)體形成時(shí)存在于水溶液中的所有分子都被合并到水性內(nèi)部。脂質(zhì)體內(nèi)容物既被保護(hù)免于與外部的(細(xì)胞)微環(huán)境接觸，而且因?yàn)橹|(zhì)體與細(xì)胞膜融合，又能有效地被遞送到細(xì)胞表面附近。Janoff等擁有的U.S.PatentNo.4，880，635中公開了涉及脂質(zhì)體的遞送系統(tǒng)。出版物和專利提供了脂質(zhì)體藥物遞送技術(shù)的有用的描述。用于胃腸外和/或皮下給藥的包含本發(fā)明化合物的藥物組合物包括水溶形式的活性化合物的水溶液。另外，活性化合物的懸浮液可制備成合適的油性注射懸浮液。合適的親脂性溶劑或載體包括諸如芝麻油或蓖麻油的脂肪油，或諸如油酸乙酯或甘油三酯的合成性脂肪酸酯，或脂質(zhì)體。水性注射懸浮液可以包含增加懸浮液粘性的化合物，諸如羧甲基纖維素鈉、山梨糖醇、右旋糖酐等。任選地，懸浮液也可包含合適的穩(wěn)定劑或增加化合物的可溶性的試劑以允許制備高度濃縮溶液并使物質(zhì)在有機(jī)體內(nèi)持續(xù)緩慢釋放。本領(lǐng)域技術(shù)人員清楚的是，根據(jù)本發(fā)明，公開的藥物組合物或環(huán)狀肽可以以藥物/治療有效劑量給藥，這意味著達(dá)到給予的化合物的藥物/治療有效量。優(yōu)選地，藥物/治療有效劑量指給予的化合物(活性成分)引起個(gè)體癥狀改善或存活延長的量，這可由本領(lǐng)域技術(shù)人員借助常規(guī)試驗(yàn)來確定。需要注意的是，本發(fā)明待給藥的化合物的劑量方案將由主治醫(yī)生和臨床因素所決定。如醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中所熟知的，對任一患者的劑量取決于許多因素，包括患者的體積、體表面積、年齡、待給藥的特定化合物、性別、給藥時(shí)間和途徑、一般健康狀況、和同時(shí)給予的其他藥物。本領(lǐng)域技術(shù)人員可意識到并能檢測根據(jù)本發(fā)明應(yīng)用于醫(yī)學(xué)的化合物被給藥的相關(guān)劑量。如本文所顯示的，本文所提供的環(huán)狀肽的作用，即抗0fAR抗體的阻斷，可通過劑量依賴性方式來獲得。從而如本文所公開的Cys—Ser突變環(huán)肽的功效取決于閾值濃度(圖14.15和16B,C)。因此，特別地，公開的藥物組合物或環(huán)狀肽可以其存在如下濃度，即達(dá)到閾值濃度的方式給藥每kg體重至少0.05mg,優(yōu)選每kg體重至少0.lmg，更優(yōu)選為每kg體重0.lmg(100ug/kg)至每kg體重lOOmg，更優(yōu)選為每kg體重lmg至每kg體重lOOmg和最優(yōu)選為每kg體重lmg至每kg體重10mg。特別地，公開的藥物組合物或環(huán)狀肽的有效劑量可以為大約每kg體重lmg。通過相應(yīng)的給藥應(yīng)用方案，通常也考慮達(dá)到公開的藥物組合物或環(huán)狀肽的更高濃度。例如，如此的更高濃度可以為每kg體重至少2、3、4或5mg。優(yōu)選每kg體重至少lmg或每kg體重至少2mg的濃度。本發(fā)明中應(yīng)用的一個(gè)特別優(yōu)選的非限定性給藥方案為每2周或4周皮下或靜脈注射。在本文中，需要注意的是，本文應(yīng)用的大鼠模型中，1到4mg/kg的劑量每隔一個(gè)月靜脈注射可足以得到本發(fā)明的化合物的治療水平，而人類相應(yīng)的劑量方案優(yōu)選為約0.3-10mg/kg靜脈或皮下注射，更優(yōu)選約l-10mg/kg靜脈或皮下注射，甚至更優(yōu)選約l_5mg/kg靜脈或皮下注射。如本文所顯示的，公開的環(huán)狀肽的給藥最初可觸發(fā)短暫的相反的免疫反應(yīng)，尤其當(dāng)使用較高劑量時(shí)。長遠(yuǎn)來看這種短暫的免疫反應(yīng)可被使用的環(huán)狀肽的抗體滅活活性所抵消。這可能導(dǎo)致使用的環(huán)狀肽的作用降低，即抗3fAR抗體的清除減慢并由此導(dǎo)致(異常的)i^-AR活性的降低緩慢。本發(fā)明還涉及用于下述的方法a)治療、改善或預(yù)防0-AR活性增強(qiáng)、優(yōu)選0rAR活性增強(qiáng)的疾??；b)治療以下患者具有抗日-AR、優(yōu)選抗h-AR的抗體，或者患有或有發(fā)展為本文所公開的疾病的風(fēng)險(xiǎn)；或c)誘導(dǎo)免疫耐受，所述方法包括以下步驟給予需要這種醫(yī)療干預(yù)的患者藥物活性量的本文所公開的環(huán)狀肽和/或藥物組合物，以及任選地藥物可接受的載體。本發(fā)明也涉及如本文所公開的環(huán)狀肽和藥物組合物，以及任選地藥物可接受的載體，用于a)治療、改善或預(yù)防0-AR活性增強(qiáng)、優(yōu)選0rAR活性增強(qiáng)的疾病；b)治療以下患者具有抗日-AR、優(yōu)選抗h-AR的抗體，或者患有或有發(fā)展為本文所公開的疾病的風(fēng)險(xiǎn)；或c)誘導(dǎo)免疫耐受。根據(jù)本發(fā)明待醫(yī)療干預(yù)(治療、改善、預(yù)防或診斷)的疾病或如本文確定和描述的患者所患的疾病優(yōu)選是那些其中i^-AR以非生理方式活化的疾病，更優(yōu)選其中h-AR通過抗體、更優(yōu)選通過抗h-AR的自身抗體活化的疾病。示例性地且優(yōu)選地，根據(jù)本發(fā)明待醫(yī)療干預(yù)的疾病或如本文確定和描述的患者所患的疾病包括，但不只限于心臟病類型。特別地，根據(jù)本發(fā)明待醫(yī)療干預(yù)的心臟疾病或如本文所確定和描述的患者所患的心臟疾病可以包含但不限于感染性和非感染性心臟疾病、缺血性和非缺血性心臟疾病、炎癥性心臟疾病和心肌炎、心臟擴(kuò)張、特發(fā)性心肌病、(特發(fā)的)擴(kuò)張性心肌病(DCM)、免疫性心肌病、心力衰竭和包括室性和/或室上性過早奪獲搏動及包括心房纖顫和/或心房撲動在內(nèi)的任何房性心律失常的任何心律失常。換句話說，對于本發(fā)明的方法或環(huán)狀肽或藥物性組合物，本文給出的描述和定義中所提及的心臟疾病可以是選自下述的心臟疾病感染性和非感染性心臟疾病、缺血性和非缺血性心臟疾病、炎癥性心臟疾病和心肌炎、心臟擴(kuò)張、特發(fā)性心肌病(特發(fā)的)擴(kuò)張性心肌病(DCM)、免疫性心肌病、心力衰竭和包括室性和/或室上性過早奪獲搏動及包括心房纖顫和/或心房撲動在內(nèi)的任何房性心律失常的任何心律失常。需要注意的是，根據(jù)本發(fā)明待醫(yī)療干預(yù)(治療、改善、預(yù)防或診斷)的最優(yōu)選的疾病或如本文所確定和描述的患者所患的最優(yōu)選的疾病為擴(kuò)張性心肌病(DCM)，優(yōu)選自發(fā)性擴(kuò)張性心肌病。出于本發(fā)明的目的，“患者”的特定亞群為患有任一本文所描述的疾病的那些患者，更具體地為患有本文所描述的心臟疾病和同時(shí)具有抗0-ARs抗體、更優(yōu)選抗f^-AR抗體的患者，其中抗體優(yōu)選為自身抗體。根據(jù)本發(fā)明待醫(yī)療干預(yù)(治療、改善、預(yù)防或診斷)的疾病或如本文所確定和描述的患者所患的疾病預(yù)期通過抗0-AR抗體、優(yōu)選抗h-AR抗體被誘發(fā)。這些抗體優(yōu)選為自身抗體。本文所提供的手段和方法在用于本文所確定的疾病的預(yù)防/防止時(shí)尤其有用。這意味著患者可應(yīng)用本發(fā)明的環(huán)狀肽和/或藥物性組合物在本文所確定的疾病(癥狀)發(fā)作前進(jìn)行治療。例如，這一預(yù)防性治療在前述的診斷應(yīng)用后，例如，所述診斷應(yīng)用利用本文所提供的診斷手段和方法。因此，當(dāng)診斷為具有發(fā)展為如本文所確定的疾病風(fēng)險(xiǎn)時(shí)，例如當(dāng)檢測到抗0_AR(自身)抗體時(shí)，優(yōu)選應(yīng)用利用本發(fā)明的治療性手段和方法的預(yù)防性治療。在本文中，優(yōu)選的“患者”為處于發(fā)展為如本文所確定的疾病風(fēng)險(xiǎn)中的患者。具體地，這一患者具有抗0-AR(自身)抗體、優(yōu)選抗0rAR(自身)抗體，但還未患有如本文所確定的疾病或其癥狀。本發(fā)明中免疫耐受的誘導(dǎo)可以考慮具體通過抑制抗0-AR分子的免疫原片段的抗體的產(chǎn)生來獲得，不受理論約束，這可歸因于對產(chǎn)生抗體的早期(成熟的)B細(xì)胞和記憶B細(xì)胞的抗原識別位點(diǎn)的阻斷。在本發(fā)明中，所提供的藥物性組合物或環(huán)狀肽特別用于治療、預(yù)防和/或改善在本文所確定的任一疾病和患者群或患者，包括在這些患者中利用上述的化合物檢測抗3-AR抗體。出于本發(fā)明的目的，“患者”，即待給藥本發(fā)明的化合物或患有本文所確定和描述的疾病或者預(yù)期依照本發(fā)明被診斷的那些，包括人類和其他的動物和有機(jī)體。從而本發(fā)明的化合物和方法可應(yīng)用于或與包括診斷劑、診斷步驟和方法及分期步驟和方法在內(nèi)的人類治療和獸醫(yī)應(yīng)用有關(guān)。在一優(yōu)選實(shí)施方案中，患者為哺乳動物，并且在最優(yōu)選的實(shí)施方案中，患者為人類。本發(fā)明的突變環(huán)狀肽也可以用于制備治療、預(yù)防和/或改善如本文所確定的任一疾病和患者群/患者的藥物。本文就藥物組合物所述的內(nèi)容也適用于本發(fā)明肽可以用于其生產(chǎn)的藥物。仍在另一方面，本發(fā)明涉及診斷試劑，其包含或是本發(fā)明的環(huán)狀肽或組合物，以及任選地至少一個(gè)另外的生物活性化合物。本文所公開的診斷劑優(yōu)選包含或由本發(fā)明的突變肽組成，其中突變肽包含標(biāo)記物。這種標(biāo)記物可以選自包含放射性標(biāo)記物和熒光標(biāo)記物的組。相應(yīng)的標(biāo)記物是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的。如上文所給出的標(biāo)記物的定義和描述應(yīng)用于此，并可以作必要的修改。代表性地，肽為賦予診斷劑特異結(jié)合特征的診斷劑的部分，優(yōu)選結(jié)合抗0fAR抗體，而標(biāo)記物賦予診斷劑信號特征。除了標(biāo)記的或未標(biāo)記的本發(fā)明的突變肽以外，本發(fā)明的診斷劑可以包含另外的生30物活性化合物。這種另外的生物活性化合物可以是賦予診斷劑信號特征的一種手段，尤其在本發(fā)明的突變肽未標(biāo)記的情況下。例如，另外的生物活性化合物可以是抗體，優(yōu)選單克隆抗體，更優(yōu)選特異性結(jié)合本發(fā)明的突變肽的標(biāo)記的抗體或結(jié)合由本發(fā)明的突變肽和抗3-AR抗體、優(yōu)選抗0rAR抗體組成的復(fù)合物的標(biāo)記的抗體。在另一方面，本發(fā)明涉及診斷本文所確定和描述的疾病的方法，其包含以下步驟a)利用本發(fā)明的環(huán)狀肽或組合物或診斷劑檢測抗0-AR的抗體(例如在樣品中)；和b)當(dāng)上述抗體的滴定度增加時(shí)，診斷為上述疾病。在另一方面，本發(fā)明涉及利用本發(fā)明的突變肽、藥物組合物和藥物診斷能夠被治療的患者的方法。在該特定方法中也可使用利用本發(fā)明的化合物檢測針對0-AR的抗體(例如在樣品中)的步驟和/或考慮上述檢測步驟的結(jié)果是否提示本文所確定的疾病的步驟。如所提及的，當(dāng)上述的抗0-AR抗體的滴定度增加時(shí)，即指示本文所確定的疾病或發(fā)展為本文所確定的疾病的風(fēng)險(xiǎn)。在另一方面，本發(fā)明涉及用于診斷如本文所確定的疾病(例如在樣品中)的如本文所提供和描述的環(huán)狀肽、組合物或診斷劑。同樣，通過抗3-AR抗體增加的滴定度指示本文所確定的疾病或發(fā)展為本文所確定的疾病的風(fēng)險(xiǎn)。在本發(fā)明中，術(shù)語“抗0-AR抗體增加的滴定度”意指抗0-AR抗體(例如在來自本發(fā)明待診斷的患者的樣品中)的滴定度高于健康對照患者的滴定度，所述健康對照患者也就是沒有患本文所確定的疾病的患者和/或沒有抗0-AR抗體的患者。如所提及的，健康患者中，抗0-AR抗體通常是幾乎或完全不存在的或不可檢測的。因此，本發(fā)明的“抗0-AR抗體增加的滴定度”優(yōu)選指抗0-AR抗體的任何出現(xiàn)，即可檢測量的抗0-AR抗體的任何出現(xiàn)。根據(jù)本發(fā)明，合適的“樣品”包括，但并不限于，(a)生物或醫(yī)學(xué)樣品，例如像包含細(xì)胞或組織的樣品。例如這種樣品可以包含活檢組織的生物物質(zhì)?！盎顧z組織”的含義為本領(lǐng)域中所知。例如，活檢組織包括主治醫(yī)生取自本文所描述的患者/個(gè)體的細(xì)胞或組織。示例性而非限定性的本發(fā)明中待分析的生物或醫(yī)學(xué)樣品為或衍生于血液、血漿、血白細(xì)胞、尿液、精液、痰液、腦脊液、淋巴或淋巴組織或細(xì)胞、肌細(xì)胞、心臟細(xì)胞、靜脈或動脈來源的細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞、脊髓來源的細(xì)胞、腦細(xì)胞、肝細(xì)胞、腎臟細(xì)胞、腸道來源的細(xì)胞、睪丸來源的細(xì)胞、泌尿生殖道來源的細(xì)胞、結(jié)腸細(xì)胞、皮膚、骨、骨髓、胎盤、羊水、毛發(fā)、毛發(fā)和/或毛囊、干細(xì)胞(胚胎的、神經(jīng)元的和/或其它的)或原代或永生性細(xì)胞系(淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞或細(xì)胞系)。根據(jù)本發(fā)明，優(yōu)選的“樣品”為衍生于血液或血漿的那些。本文所確定的生物或醫(yī)學(xué)樣品也可以是或衍生于活檢組織，例如衍生于心臟組織、靜脈或動脈的活檢組織。在另一方面，本發(fā)明涉及診斷試劑盒，例如用于檢測針對0-AR的抗體的診斷試劑盒，包含本發(fā)明的環(huán)狀肽、組合物或診斷劑。根據(jù)本發(fā)明的試劑盒包含本發(fā)明所公開的至少一個(gè)化合物，例如像本發(fā)明的環(huán)狀或線性肽，本發(fā)明的核酸分子、載體或宿主細(xì)胞或本發(fā)明的組合物或診斷劑。在一具體實(shí)施方案中，試劑盒還包含說明書和/或用于試劑盒應(yīng)用的緩沖液、和/或執(zhí)行試劑盒用于或待用于的檢測反應(yīng)的至少一個(gè)反應(yīng)容器。在另一實(shí)施方案中，至少一個(gè)、一些或所有的用于與31上述試劑盒應(yīng)用相關(guān)的試劑作為用于執(zhí)行反應(yīng)額部分存在，所述反應(yīng)為試劑盒用于或待用于的反應(yīng)。本發(fā)明的環(huán)狀肽、診斷試劑或試劑盒也可以應(yīng)用于3fAR的檢測。因此，本發(fā)明的環(huán)狀肽、診斷劑或試劑盒具體用于鑒定/檢測細(xì)胞或組織表面的結(jié)合的抗h-AR抗體。例如，本發(fā)明的環(huán)狀肽、診斷劑或試劑盒可用于成像目的，像單光子發(fā)射斷層攝影術(shù)(SPECT)、MiBi、PET、磁共振斷層攝影術(shù)(MRI)或其他應(yīng)用于醫(yī)學(xué)的診斷成像技術(shù)。由于1311_標(biāo)記的CP-體內(nèi)分布模式(圖30)，例如本發(fā)明的環(huán)狀肽、診斷劑可具體用作器官特異性示蹤劑。將本發(fā)明的化合物分別用作診斷劑和用于診斷方法中的一個(gè)特定方法是三步篩選法。例如這一方法包括使用本發(fā)明的環(huán)狀肽進(jìn)行酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)，以及確定表達(dá)天然人類0-AR的細(xì)胞中的免疫熒光和cAMP反應(yīng)。公認(rèn)的是，利用本發(fā)明的環(huán)狀肽，能夠同樣地進(jìn)行前述的每一步驟用于上述抗體的檢測。由此基于功能活躍的抗Pi-AR抗體，篩選出大量患者，例如心力衰竭患者。結(jié)合這種(而且與本文所公開的其他的)診斷方法，功能活躍的抗0i-AR抗體的定義優(yōu)選基于它們對受體介導(dǎo)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的作用，即它們對細(xì)胞cAMP水平和對cAMP-依賴性蛋白激酶(PKA)的活性的作用。環(huán)AMP為包括0-AR家族在內(nèi)的許多G蛋白偶聯(lián)受體的通用二級信使。它通過PKA、cAMP門控離子通道、磷酸二酯酶和cAMP直接活化的交換蛋白(稱為Epac1和2)發(fā)揮作用?，F(xiàn)有技術(shù)描述了若干用于測定完整細(xì)胞中cAMP的熒光方法，其都可用于本發(fā)明的診斷方法中。與PKA的調(diào)節(jié)和催化亞基融合的綠色熒光蛋白(GFP)變體間的熒光共振能量偏移(FRET)已被描述用于研究神經(jīng)元(HempelCM,VincentP,AdamsSR，TsienRY,SelverstonAI.Nature.1996;384:113-114)或心肌細(xì)胞(ZaccoloM，PozzanT.，Science.2002；295:1711-1715)中的cAMP的時(shí)空動力學(xué)。更近地，本領(lǐng)域中描述了單鏈熒光指示劑，其特征在于具有與Epac蛋白的cAMP結(jié)合結(jié)構(gòu)域直接融合的增強(qiáng)的藍(lán)綠色(CFP)或黃色(YFP)熒光蛋白，這可允許獲得敏感性更高和瞬時(shí)分辨率更好的cAMP測定。在W02005/052186等中描述了這一系統(tǒng)。利用本發(fā)明的環(huán)狀肽或其他相應(yīng)的化合物，這一系統(tǒng)能夠與本發(fā)明的任一診斷方法聯(lián)用。這一系統(tǒng)也能夠用于分析功能活躍的抗h-AR抗體的流行性，然而并不僅限于此。優(yōu)選地，這一診斷方法應(yīng)用于先前抗體驗(yàn)明的DCM患者組群或任何待被評估的個(gè)體或疑似患有任一本文所描述疾病或有患任一本文所描述疾病風(fēng)險(xiǎn)的個(gè)體。診斷方法和篩選方法的另外步驟中，可分別評估和確定0阻斷劑抑制抗f^-AR抗體誘導(dǎo)的受體活化作用的能力。前述測定方法是有利的，因?yàn)樗^簡單、耗時(shí)更少且同時(shí)披露或鑒定所有先前被認(rèn)為抗h-ECn抗體陽性的DCM患者，所述測定方法為利用本發(fā)明的肽的如W02005/052186中所描述的基于FRET的方法。利用本發(fā)明的一種或幾種肽的基于FRET的診斷方法的該實(shí)施方案基于檢測抗體誘導(dǎo)的cAMP增加?？傊珽pac-FRET篩選看起來代表了非常敏感的單步驟方法，其允許檢測直接針對人3rAR的活化的抗體。因此，本發(fā)明也涉及本發(fā)明的一種或幾種肽在Epac-FRET測定中的應(yīng)用。更優(yōu)選地，這種Epac-FRET測定用于診斷，甚至更優(yōu)選地用于患有或疑似患有本文所描述的任一疾病的患者的診斷。鑒于上述，依照本發(fā)明，特別優(yōu)選地使用或應(yīng)用FRET技術(shù)，特別是基于FRET的檢測系統(tǒng)。在另一方面，本發(fā)明涉及用于檢測針對0-AR(例如在如本文所確定的樣品中)的抗體的方法，其包含上述待被檢測的抗體與本發(fā)明的環(huán)狀肽相接觸的步驟。在另一方面，本發(fā)明涉及用于檢測(例如在如本文所確定的樣品中)抗0-AR的抗體的如本文所公開的環(huán)狀肽、組合物或診斷劑。上述檢測抗體或環(huán)狀肽、組合物或診斷劑的方法特別用于應(yīng)用在在本發(fā)明所提供和描述的診斷應(yīng)用中。本申請自始至終中，下列的縮寫詞的含義如下Ab或ab抗體，Abs或或abs多個(gè)抗體，AR腎上腺素受體，EC3-AR的細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域，ECn3-AR的細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域II以及AA氨基酸。參考下文的非限定性的附圖和實(shí)施例進(jìn)一步描述了本發(fā)明。圖1為顯示日rECn-25氨基酸(AA)環(huán)肽和突變的3rECn-25AA環(huán)肽(具有原始的Cys殘基(白球)或絲氨酸突變的半胱氨酸(黑球；分別為Cys/Ser或Ser/Cys)的黑環(huán))的結(jié)構(gòu)設(shè)計(jì)，以及顯示分別在210nm或220nm波長下檢測的高液壓液相色譜洗脫圖譜的圖。對含有3個(gè)Cys的0rECn-25AACys/Cys環(huán)肽，在Waters分離模塊(WatersSeparationModul)2690連同Waters雙A(WatersDualLambda)吸光度檢測器中進(jìn)行高壓液相色譜；220nm處讀取吸光度。肽合成和環(huán)化后，將樣品溶解于水乙睛(ACN)中，然后力口載于流速為lml/minNuclosil100—5/C18柱(Macherey-NagelInc.，Germany；柱長250nm，管腔4mm)；然后在0.2%TFA存在下跑5%-60%ACN的分離梯度。殘余微弱量的線狀3fECnISAA肽出現(xiàn)小峰，通常在14到16分鐘間，而含有31-ECII-25AACys/Cys環(huán)肽的部分在18分鐘到20分鐘出現(xiàn)。突變25AA環(huán)肽的高壓液相色譜的操作利用流速為lml/min的繼而在分離梯度為0.1%TFA中含5%到60%ACN的硅氧碳18柱(15iim，120A，長250mm，管徑4mm)走柱。含有環(huán)狀0fEC^jSAA突變體的部分通過紫外線吸收法(210nm)監(jiān)測，并且顯示了在10.5分鐘(25AACys/Ser-突變體，左側(cè))或16.5分鐘(25AASer/Cys，右側(cè))出現(xiàn)的銳利的單洗脫峰。圖2為顯示突變的0fECnISAA或18AA環(huán)肽(具有原始的半胱氨酸殘基(白球)或絲氨酸突變的半胱氨酸(黑球；分別為半胱氨酸/絲氨酸或絲氨酸/半胱氨酸)，連同參與頭到尾閉合后一級環(huán)結(jié)構(gòu)形成的氨基酸(閉合位點(diǎn)，Ala-DGlu，或Pro-Lys)的結(jié)構(gòu)設(shè)計(jì)的圖。對于固相上合成環(huán)狀3fECn-lSAA(或31-ECII-25AA)肽，將具有側(cè)鏈保護(hù)基團(tuán)的Fmoc-Glu-ODmab或其他Fmoc氨基酸合并到線性肽的C末端，所述保護(hù)基團(tuán)可被選擇性以正交方式裂解掉。環(huán)狀肽從合成樹脂裂解下來產(chǎn)生肽酰胺(在D-Glu—Gin的情況下)且通過三氟乙酸/三乙丙基硅烷/乙烷二硫醇/水處理樹脂幾個(gè)小時(shí)來移除側(cè)鏈的保護(hù)性基團(tuán)。圖3顯示了展現(xiàn)本發(fā)明的兩個(gè)線性肽(左側(cè)，分別為18AA半胱氨酸/絲氨酸和25AA半胱氨酸/半胱氨酸)和4個(gè)突變的環(huán)肽的高壓液相色譜洗脫圖譜的6個(gè)圖面，所有突變的環(huán)肽為具有Pro-Lys閉合位點(diǎn)的含有Gln的環(huán)肽。突變的25AA-或18AA-環(huán)肽的HPLC在Waters分離模塊以及紫外線吸收檢測儀中進(jìn)行操作。讀取210nm處的吸光度。肽合成和環(huán)化后，將樣品溶解于水/5%乙睛(ACN)且加載于流速為lml/min的C18硅柱上(15μm,120A,柱長250mm，管腔4mm)；然后在0.1%TFA存在下跑5%-60%ACN的分離梯度。如它們的線性對應(yīng)物所顯示的，包含環(huán)狀β^EC11-ISAA突變體的部分(上面一行，中間的圖面)(半胱氨酸/絲氨酸，14分鐘)，右側(cè)圖面(絲氨酸/半胱氨酸，16.5分鐘)；或^1-EC11ISAA突變體(下面一行，中間的圖面(半胱氨酸/絲氨酸，10.6分鐘)，右側(cè)圖面(絲氨酸/半胱氨酸，16.5分鐘)的部分在所示的時(shí)間點(diǎn)出現(xiàn)銳利的單洗脫峰。圖4為顯示具有DGlu環(huán)閉合的β!-EC11-ISAA環(huán)肽突變體(半胱氨酸/絲氨酸突變，白色柱；絲氨酸/半胱氨酸突變，右斜陰影線柱)阻斷能力的圖，顯示了利用含有3個(gè)半胱氨酸的線性25ΑΑ半胱氨酸/半胱氨酸肽作為抗原的ELISA競爭性測定中，上述突變體與含有3個(gè)半胱氨酸的18ΑΑ環(huán)肽(黑色柱)相比的阻斷能力的在。描述了利用自12只不同的免疫的抗體陽性大鼠血清分離出的IgG部分獲得的代表性結(jié)果。y軸代表使用的不同肽的阻斷功效，表示為血清與所示環(huán)肽預(yù)孵育后(12小時(shí)過夜，4°C旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)箱)，阻斷的相對非阻斷的血清ELISA-反應(yīng)的百分比。圖5為顯示了具有DGlu環(huán)閉合的P1-EC11-ISAA環(huán)肽突變體(半胱氨酸/絲氨酸突變，白色菱形；絲氨酸/半胱氨酸突變，黑色菱形)阻斷能力的圖，顯示了利用含有3個(gè)半胱氨酸的線性25AA半胱氨酸/半胱氨酸肽作為抗原的ELISA競爭性測定中，所述突變體與含有3個(gè)半胱氨酸的線性25AA半胱氨酸/半胱氨酸肽(黑色方塊)相比的阻斷能力。利用取自抗體陽性的心肌病大鼠的單一代表性血清(圖4，4號大鼠)。Y軸代表通過ELISA所確定的特異性抗P1-EC11IgG抗體的濃度，χ軸對應(yīng)于用于預(yù)孵育IgG部分(12h，4°C，旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)箱)的線性或環(huán)狀肽的摩爾超出量，假定11化學(xué)計(jì)量(假定一個(gè)環(huán)狀(2.IKDa分子量(MM)或線性肽(3.OKDaMM)阻斷一個(gè)IgG抗體(150KDaMM))。圖6為顯示了利用熒光共振能量轉(zhuǎn)移(FRET)的方法，具有DGlu環(huán)閉合的βrECn-18AA環(huán)肽突變體對β！受體介導(dǎo)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)(功能性cAMP測定)的的阻斷能力的圖。將代表性大鼠(血清)(圖4，4號大鼠)的抗β^EC11IgG抗體與β^EC11-ISAA環(huán)肽突變體(半胱氨酸/絲氨酸突變，深藍(lán)(3)；絲氨酸/半胱氨酸雜合，淺藍(lán)(4))的預(yù)孵育(12h，4°C，旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)箱)的效應(yīng)與含有3個(gè)半胱氨酸的25AA半胱氨酸/半胱氨酸環(huán)肽(紅色(2))的效應(yīng)或在無阻斷性肽存在情況下抗P1-EC11IgG抗體所獲得的結(jié)果對比(黑色⑴)。Y軸代表記錄的FRET發(fā)射信號的標(biāo)準(zhǔn)化的YFP/CFP比，χ軸對應(yīng)于以秒計(jì)的記錄時(shí)間。圖7為在利用線性的含有3個(gè)半胱氨酸的25ΑΑ半胱氨酸/半胱氨酸肽作為抗原的ELISA競爭性測定中，與從源自免疫的抗體陽性大鼠的78血清分離出的IgG預(yù)孵育后，繼續(xù)描述具有DGlu環(huán)閉合的環(huán)肽突變體的阻斷效應(yīng)的圖。柱代表突變的P1-EC11ISAA環(huán)肽(半胱氨酸/絲氨酸突變，黑色柱；絲氨酸/半胱氨酸突變，白色柱)與含有3個(gè)半胱氨酸的18ΑΑ環(huán)肽(垂直陰影柱)、含有3個(gè)半胱氨酸的25ΑΑ環(huán)肽(水平陰影柱)或含有3個(gè)半胱氨酸的線性25ΑΑ肽(右斜線陰影柱)相比所獲得的結(jié)果。誤差棒顯示平均值的標(biāo)準(zhǔn)誤(士SEM)。y軸代表所用的不同肽的阻斷功效，表示為阻斷的相對未阻斷的血清ELISA-反應(yīng)性的百分比。圖8為在利用η=82的經(jīng)免疫抗體陽性大鼠的血清進(jìn)行的ELISA競爭性測定中，繼續(xù)描述β^EC11ISAA環(huán)肽突變體(具有DGlu環(huán)閉合)的阻斷效應(yīng)的圖。約95%的血清能被單獨(dú)的^-EC11ISAACys/Ser突變環(huán)肽(左側(cè)白色柱的上部示意的)有效阻斷，而約5%的血清被18AACys/Ser-和18AASer/Cys突變體(右側(cè)黑色柱的上部示意的后者)的兩者所阻斷。圖9為由兩個(gè)主要的(上面的和下面的)圖面組成的圖，顯示了在利用含有3個(gè)半胱氨酸的線性25AA半胱氨酸/半胱氨酸肽作為抗原的競爭性ELISA測定中，與自69只不同的經(jīng)免疫抗體陽性的大鼠分離的血清預(yù)孵育(12h，4°C，旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)箱)后，具有Gln閉合位點(diǎn)的25AA和18AA環(huán)肽突變體及具有DGlu閉合位點(diǎn)的18AA環(huán)肽突變體的重新獲得的阻斷效應(yīng)。上部圖面描述了優(yōu)先與半胱氨酸/絲氨酸突變環(huán)肽反應(yīng)(類型1反應(yīng)，η=64)的大鼠血清，分別在cyc25AA(Gln)肽(左側(cè))和eye18AA(Gln和DGlu)肽(右側(cè))中。下部圖面描述了與半胱氨酸/絲氨酸和絲氨酸/半胱氨酸突變的環(huán)狀肽反應(yīng)(類型2反應(yīng)，η=5)的大鼠血清，同樣分別在用cyc25AA(Gln)肽(左側(cè))和cycl8AA(Gln和DGlu)肽(右側(cè))所獲得的結(jié)果中。兩個(gè)圖面中左側(cè)的前三個(gè)柱代表用(非突變的)含有3個(gè)半胱氨酸的25AA(Gln)環(huán)肽(黑色柱)和突變的βrECn-25AA(Gln)環(huán)肽(半胱氨酸/絲氨酸突變，白色柱；絲氨酸/半胱氨酸突變，水平陰影柱)所獲得的結(jié)果。兩個(gè)圖面中右側(cè)的五個(gè)柱代表用含有3個(gè)半胱氨酸的ISAA(Gln)環(huán)肽(黑色柱)與另外的含有2個(gè)半胱氨酸的突變18AA環(huán)肽(具有Gln閉合位點(diǎn)的18AA半胱氨酸/絲氨酸突變體，白色柱；具有DGlu閉合位點(diǎn)的18AA半胱氨酸/絲氨酸突變體，左斜線陰影柱(digonallylefthatchedcolumn)；具有Gln閉合位點(diǎn)的18AA絲氨酸/半胱氨酸突變體，右斜線陰影柱(diagonallyrighthatchedcolumn)；具有DGlu閉合位點(diǎn)的18AA絲氨酸/半胱氨酸突變體，垂直陰影柱)相比所獲得的結(jié)果。誤差棒代表平均值的標(biāo)準(zhǔn)誤(士SEM)。y軸代表所用的不同肽的阻斷功效，表示為阻斷的相對非阻斷的血清ELISA-反應(yīng)的百分比。圖10為在用源自η=69經(jīng)免疫抗體陽性大鼠的血清的競爭性ELISA測定中，繼續(xù)描述^1-EC11-ISAA(Gln)環(huán)肽突變體的阻斷能力的圖。約93%(η=64)的血清可被單獨(dú)的β!-EC11-ISAA半胱氨酸/絲氨酸突變的肽有效阻斷(左側(cè)白色柱的上部所示意的)，而約7%(η=5)的血清被18ΑΑ半胱氨酸/絲氨酸和18ΑΑ絲氨酸/半胱氨酸突變體(后者如右側(cè)黑色柱的上部所示意的)兩者所阻斷。圖11為在采用源自η=6隨機(jī)選取的經(jīng)免疫抗體陽性大鼠的血清的競爭性ELISA測定中，繼續(xù)描述不同線性和環(huán)狀β^EC11肽的劑量依賴性(X軸，橫坐標(biāo)特定肽的摩爾超出量的-倍數(shù))阻斷能力的圖，表示為未阻斷的抗體滴定度的百分比(y軸，縱坐標(biāo))，所述肽包括25AA半胱氨酸/半胱氨酸線性肽(黑色方塊)、25AA半胱氨酸/絲氨酸環(huán)肽突變體(白色方塊)、18AA半胱氨酸/半胱氨酸環(huán)肽(黑色菱形)、18AA半胱氨酸/絲氨酸環(huán)肽突變體(白色菱形)和18AA半胱氨酸/絲氨酸線性肽突變體(垂直陰影菱形)。所有的血清被β!-EC11-ISAA半胱氨酸/絲氨酸突變環(huán)肽最有效地阻斷，其次是非突變的18ΑΑ半胱氨酸/半胱氨酸環(huán)肽和25ΑΑ半胱氨酸/絲氨酸突變環(huán)肽。所有的環(huán)肽(具有或不具有突變)在抗體阻斷能力方面大大優(yōu)于它們的線性對應(yīng)物(P<0.005)。圖12為繼續(xù)描述不同線性和環(huán)狀h-EQjt在第一次免疫(和兩個(gè)隨后的3rECn/GST抗原加強(qiáng)，對應(yīng)于預(yù)防方案)后3月開始，總共5次(預(yù)防性)應(yīng)用的體內(nèi)阻斷能力的圖。B1受體抗體的血清滴定度在每一肽注射前和注射后18-20小時(shí)(橫坐標(biāo)，時(shí)間以月為單位)確定，并表示為免疫的未處理的大鼠的相應(yīng)抗體滴定的百分比(y軸，縱坐標(biāo))。注射的肽為25AA半胱氨酸/半胱氨酸線性肽(黑色方塊)、25AA半胱氨酸/半胱氨酸環(huán)肽(白色方塊)、18AA半胱氨酸/半胱氨酸環(huán)肽(黑色菱形)、18AA半胱氨酸/絲氨酸環(huán)肽突變體(白色菱形)以及18AA半胱氨酸/絲氨酸線性肽突變體(垂直陰影線菱形)。環(huán)狀肽在體內(nèi)的功效也大大優(yōu)于它們的線性對應(yīng)物?？贵w中和作用的最大效能的取得在l.Omg/kg體重(Bw)的非突變25AA半胱氨酸/半胱氨酸或18AA半胱氨酸/半胱氨酸環(huán)肽(在5次環(huán)肽注射后87.7士2%或89.9士3%降低，與未處理的免疫動物相比，皆P<0.005)，其次是18AA半胱氨酸/絲氨酸突變環(huán)肽(在5次環(huán)肽注射后54.5士2%降低；P<0.05)，而同一濃度的線性25AA半胱氨酸/半胱氨酸肽或線性18AA半胱氨酸/絲氨酸突變體無顯著的阻斷效應(yīng)(在5次環(huán)肽注射后25.8士3%或4.5士11%降低，分別為P=0.16或P=0.8)。黑圈顯示作為參照的未定期處理的(每4周)免疫的動物的抗體滴定度，設(shè)定為100%。圖13顯示了用從免疫的抗^陽性心肌病的未處理的動物(^未處理的，黑色柱)的骨髓(左側(cè)柱)或脾臟(右側(cè)柱)制備的B細(xì)胞進(jìn)行的ELISP0T測定的結(jié)果，與從預(yù)防性地用25AAECn半胱氨酸/半胱氨酸環(huán)肽(25cyc.Cys/Cys,垂直陰影柱)，18AAECn半胱氨酸/絲氨酸環(huán)肽突變體(18cyc.Cys/Ser,右斜線陰影柱)，或線性18AAECn半胱氨酸/絲氨酸肽突變體(181in.Cys/Ser，水平陰影柱)處理的免疫的抗0工抗體陽性的心肌病的動物中分離出來的那些相比較。對于這一測定，利用0.05mol/lTris緩沖液pH9.4.中的特異性抗原(GST/0rECn-FP)包被ELIspot板并過夜，然后洗板三次并在37°C應(yīng)用BSA阻斷3小時(shí)。繼而在37°C將板用來源于脾臟或骨髓的B細(xì)胞(培養(yǎng)于添加了10%胎牛血清(FCS)的RPMI1640/X-VIV0-15培養(yǎng)基中)孵育過夜保持每孔1X106到1X103細(xì)胞。12小時(shí)后去除B細(xì)胞并將結(jié)合有B細(xì)胞分泌性IgG的板洗滌若干次(PBS/0.5%Tween)，然后添加堿性磷酸酶偶聯(lián)的抗大鼠IgG二抗(0.g/ml)以檢測結(jié)合的大鼠IgG。然后將板在37°C再孵育3小時(shí)，用PBS/0.5%Tween洗滌若干次，利用LMP/BICP51(lml每孔；”LMP”意為低熔點(diǎn)瓊脂糖，”BICP”意為5-溴-4-氯-3-吲哚基磷酸對甲苯胺鹽，藍(lán)色的染料)顯色允許對所獲得的藍(lán)色斑點(diǎn)定量，每一個(gè)斑點(diǎn)代表脾臟或骨髓細(xì)胞分泌的一個(gè)抗原特異性IgG。圖14為繼續(xù)描述帶有Gin閉合位點(diǎn)的25AA和18AA環(huán)肽突變體在第一次靜脈注射(i.v.)1.Omg/kg體重(Bw)到免疫的抗體陽性的大鼠中后所所測定的的體內(nèi)阻斷效應(yīng)的圖。在靜脈注射1.0或0.25mg/kgBw的所示的肽后18-20小時(shí)提取血清并利用含有3個(gè)半胱氨酸的線性25AA半胱氨酸/半胱氨酸肽作為抗原通過ELISA測定反應(yīng)性。圖面中的第一組代表了用突變的含有2個(gè)半胱氨酸的25AA半胱氨酸/絲氨酸(谷氨酰胺)_環(huán)肽(第一組的上方所示意的，陰影化圓圈)處理的大鼠組(n=5)，第二和第三組代表了用兩種不同濃度的突變的18AA半胱氨酸/絲氨酸(谷氨酰胺)環(huán)肽(n=40，lmg/kgBw；n=9,0.25mg/kgBw，第二組上部描述的環(huán)狀肽圖，白色圓圈)處理的大鼠組，第四組代表了用突變的18AA絲氨酸/半胱氨酸(谷氨酰胺)環(huán)肽(lmg/kgBw，第四組的上部描述的環(huán)狀肽圖，黑色菱形)處理的n=4動物，第五組代表了靜脈注射含有兩個(gè)半胱氨酸的線性18AA半胱氨酸/絲氨酸(谷氨酰胺_)肽(第五組的上方描述的線性肽圖，黑色圓圈)所獲得的結(jié)果。每一組的長條和序號(框內(nèi)(inboxes))代表靜脈注射肽前或注射肽后18-20小時(shí)(y軸)相應(yīng)標(biāo)示肽的阻斷能力的平均值，表示為血清ELISA免疫反應(yīng)的百分比圖15為繼續(xù)描述帶有Gln閉合位點(diǎn)的25AA和18AA環(huán)狀肽突變體在第一次靜脈注射lmg/kgBw或0.25mg/kgBw到免疫的抗體陽性的大鼠后所確定的體內(nèi)阻斷效應(yīng)的圖。在靜脈注射各種肽后18-20小時(shí)后提取血清并利用含有3個(gè)半胱氨酸線性25AA半胱氨酸/半胱氨酸作為抗原通過ELISA測定反應(yīng)性。圖表描述了注射不同肽后取自抗體陽性免疫大鼠血清中特異性抗β！受體抗體滴定度的相對降低(或增加)以及顯示了靜脈注射肽前或注射肽后18-20小時(shí)相應(yīng)標(biāo)明肽的阻斷能力的平均值(y軸)，表示為血清的ELISA免疫反應(yīng)的百分比。圖面右側(cè)的符號代表白色方塊，18AA半胱氨酸/絲氨酸突變(谷氨酰胺)環(huán)肽(lmg/kgBw)；白色菱形，18AA半胱氨酸/絲氨酸突變(谷氨酰胺)環(huán)肽(0.25mg/kgBw)；黑色菱形，18AA絲氨酸/半胱氨酸突變(谷氨酰胺)環(huán)肽(lmg/kgBw)；水平陰影方塊，18AA半胱氨酸/絲氨酸突變線性(谷氨酰胺)肽(lmg/kgBw)；黑色方塊，25AA半胱氨酸/絲氨酸突變的(谷氨酰胺)環(huán)肽(lmg/kgBw)0為了清楚，誤差棒沒有在圖中顯示。圖16A為繼續(xù)描述帶有Gln閉合位點(diǎn)的25AA和18AA環(huán)肽突變體體內(nèi)阻斷效應(yīng)的圖，這在將1.0mg/kgBw的所示肽總計(jì)9次靜脈注射到免疫的抗體陽性大鼠后所確定。每4周靜脈注射不同肽前和注射后18-20小時(shí)(橫坐標(biāo)以月為時(shí)間的處理)提取血清并利用含有3個(gè)半胱氨酸的線性25AA半胱氨酸/半胱氨酸肽作為抗原通過ELISA測定反應(yīng)性。圖表描述了注射不同肽后，來自抗體陽性的免疫大鼠血清中的特異性抗P1受體抗體滴定度的相對降低(或增加)，并顯示了以開始處理前初始ELISA免疫反應(yīng)性的百分比表示的肽阻斷能力的相應(yīng)的平均值(y軸，縱坐標(biāo))。符號表示黑色圓圈，未定期(每4周)處理的免疫的動物(n=9)；白色菱形，18AA半胱氨酸/絲氨酸突變(谷氨酰胺)環(huán)肽(1.Omg/kgBw,η=20)；黑色正方形，25ΑΑ半胱氨酸/絲氨酸突變(谷氨酰胺)環(huán)肽(1.Omg/kgBw,η=5)。圖16Β為繼續(xù)描述不同濃度的帶有Gln閉合位點(diǎn)的18ΑΑ環(huán)肽突變體，在總共9次靜脈注射0.25，1.0，2.0和4.Omg/kgBw到免疫抗體陽性大鼠后所確定的體內(nèi)阻斷效應(yīng)的圖，不考慮個(gè)別動物的環(huán)肽“應(yīng)答器狀態(tài)(responder-state)”。每4周靜脈注射不同種肽前和注射后18-20小時(shí)(橫坐標(biāo)以月為時(shí)間單位)提取血清并利用含有3個(gè)半胱氨酸的線性25AA半胱氨酸/半胱氨酸肽作為抗原通過ELISA測定反應(yīng)性。圖表描述了注射所示的肽后，來自抗體陽性的免疫的大鼠血清中的特異性抗受體抗體滴定度的相對降低(或增加)，并顯示了以開始處理前初始ELISA免疫反應(yīng)性的百分比表示的肽阻斷能力的相應(yīng)的平均值(y軸，縱坐標(biāo))。符號表示黑色圓圈，未定期(每4周)處理的免疫的動物(n=9)；白色圓圈，18AA半胱氨酸/絲氨酸突變(谷氨酰胺)環(huán)肽(0.25mg/kgBw,n=4)；白色菱形，18AA半胱氨酸/絲氨酸突變(谷氨酰胺)環(huán)肽(1.Omg/kgBw,η=20)；垂直陰影化菱形，18ΑΑ半胱氨酸/絲氨酸突變(谷氨酰胺)環(huán)肽(2.0mg/kgBw,n=5)；黑色菱形，18AA半胱氨酸/絲氨酸突變(谷氨酰胺)環(huán)肽(4.Omg/kgBw,η=9)。圖16C為繼續(xù)描述不同濃度的帶有Gln閉合位點(diǎn)的18ΑΑ環(huán)肽突變體，在總共9次靜脈注射0.25、1.0,2.0和4.Omg/kg體重(Bw)到免疫的抗體陽性大鼠后所確定的體內(nèi)阻斷效應(yīng)的圖，只考慮環(huán)肽敏感性“應(yīng)答器”，這由如下確定在注射7次環(huán)肽后，動物具有的最大殘余受體抗體水平等于或低于治療開始時(shí)的相應(yīng)滴定度的80%(對比圖16c和圖16b的曲線，后者代表未選擇的動物的天然存在的多相應(yīng)答)。如上文所描述的，提取血清并利用含有3個(gè)半胱氨酸的線性25AA半胱氨酸/半胱氨酸肽作為抗原通過ELISA測定反應(yīng)性。圖表顯示，注射所示的肽后，來自抗體陽性的免疫的大鼠血清中的特異性抗β！受體抗體滴定度的相對降低，將阻斷能力表示為初始ELISA免疫反應(yīng)性的百分比(y軸，縱坐標(biāo))°符號表示(粗體表示的應(yīng)答器數(shù))黑色圓圈，未定期(每4周)處理的免疫的動物(n=9)；白色圓圈，18AA半胱氨酸/絲氨酸突變(谷氨酰胺)環(huán)肽(0.25mg/kgBw,η=3/4)；白色菱形，18ΑΑ半胱氨酸/絲氨酸突變(谷氨酰胺)環(huán)肽(1.Omg/kgBw,n=16/20)；垂直陰影化菱形，18AA半胱氨酸/絲氨酸突變(谷氨酰胺)環(huán)肽(2.Omg/kgBw,η=2/5)；黑色菱形，18ΑΑ半胱氨酸/絲氨酸突變(谷氨酰胺)環(huán)肽(4.Omg/kgBw,η=6/9)。圖17Α為顯示了以下內(nèi)容的圖=GSTZ^1-ECn-免疫的未治療的(黑色圓圈)與用標(biāo)明的不同環(huán)肽(見圖例)治療的GST/I-EC11-免疫的動物通過超聲心動描記術(shù)(超聲心動圖系統(tǒng)可視聲學(xué)，VevO770(版本V2.2.3)，裝備有15-17.5MHz換能器)所確定的內(nèi)部的收縮末期的和舒張末期的左心室直徑的時(shí)程(O到20月)，從而LVES/LVED為左心室收縮末期直徑和左心室舒張末期直徑。符號表示白色圓圈，未治療的0.9%NaCl注射的未免疫的對照動物(η=10)；黑色圓圈，未定期(每4周)治療的免疫動物(η=9)；白色菱形，18ΑΑ半胱氨酸/絲氨酸突變(谷氨酰胺)環(huán)肽(1.Omg/kgBw,η=20)；黑色方塊，25ΑΑ半胱氨酸/絲氨酸突變(谷氨酰胺)環(huán)肽(1.Omg/kgBw,n=5)；白色方塊，18AA半胱氨酸/絲氨酸突變線性(谷氨酰胺)肽(1.Omg/kgBw,η=5)ο圖17Β為類似的表現(xiàn)GSTZ^1-EC11-免疫的未治療的(黑色圓圈)與用不同濃度的18ΑΑ半胱氨酸/絲氨酸環(huán)肽突變體(見圖例)治療的βrECn-免疫的動物的內(nèi)部收縮末期的和舒張末期的左心室直徑(LVES，LVED)的時(shí)程(O到20月)的圖。符號表示白色圓圈，未治療的0.9%NaCl注射的未免疫的對照動物(η=10)；黑色圓圈，未定期(每4周)治療的免疫的動物(η=9)；白色正方形，18ΑΑ半胱氨酸/絲氨酸突變(谷氨酰胺)環(huán)肽(0.25mg/kgBw,n=4)；白色菱形，18AA半胱氨酸/絲氨酸突變(谷氨酰胺)環(huán)肽(1.Omg/kgBw,η=20)；垂直陰影化菱形，18ΑΑ半胱氨酸/絲氨酸突變(谷氨酰胺)環(huán)肽(2.Omg/kgBw,η=5)；黑色菱形，18ΑΑ半胱氨酸/絲氨酸突變(谷氨酰胺)環(huán)肽(4.Omg/kgBw，η=9)。圖18為顯示在GSTz^1-ECii-免疫的大鼠與0.9%NaCl注射的大鼠中的特異性抗β^EC11抗體的滴定度過程(O到9月)的圖，其中“β/’表示免疫的動物(根據(jù)本發(fā)明在用肽開始治療之前)，"NaCl對照”表示相應(yīng)的NaCl注射的對照動物。圖19Α為描述通過超聲波心動描記術(shù)(超聲心動圖系統(tǒng)，見圖17a的圖例)所確定的以ml/min/g(體重)表示的“心指數(shù)(cardiacindex)，，(Cl)的時(shí)程(0到20月)圖。符號表示白色圓圈，未治療的0.9%NaCl注射的未免疫的對照動物(η=10)；黑色圓圈，未定期(每4周)治療的免疫的動物(η=9)；白色菱形，18ΑΑ半胱氨酸/絲氨酸突變(谷氨酰胺)環(huán)肽(1.Omg/kgBw,η=20)；黑色正方形，25ΑΑ半胱氨酸/絲氨酸突變(谷氨酰胺)環(huán)肽(1.Omg/kgBw,η=5)；白色正方形，18ΑΑ半胱氨酸/絲氨酸突變線性(谷氨酰胺)肽(1.Omg/kgBw,η=5)。圖19Β為類似的顯示通過超聲波心動描記術(shù)(超聲心動圖系統(tǒng)見圖17a的圖例)所確定的以ml/min/g(體重)表示的“心指數(shù)”(Cl)的時(shí)程(O到20月)圖。符號表示白色圓圈，未治療的0.9%NaCl注射的未免疫的對照動物(η=10)；黑色圓圈，未定期(每4周)治療的免疫的動物(η=9)；白色正方形，18ΑΑ半胱氨酸/絲氨酸突變(谷氨酰胺)環(huán)肽(0.25mg/kgBw,n=4)；白色菱形，18AA半胱氨酸/絲氨酸突變(谷氨酰胺)環(huán)肽(1.Omg/kgBw,η=20)；垂直陰影化菱形，18ΑΑ半胱氨酸/絲氨酸突變(谷氨酰胺)環(huán)肽(2.Omg/kgBw,η=5)。圖20顯示在10個(gè)月的治療后治療性研究中所獲得的血液動力學(xué)參數(shù)的三組圖面(a，b，c)，具體地，第一組在第一組(a)的每一圖面的左側(cè)顯示了以每分鐘跳動(=bpm)為單位的心率(HF)，右側(cè)顯示了以mmHg為單位的LV收縮期血壓(LV壓)；第二組(b)的每一圖面的左側(cè)顯示了以mmHg/s為單位的收縮性(+dP/dt)以及右側(cè)顯示了以-mmHg/s為單位的舒張(-dP/dt)；第三組(c)表現(xiàn)了通過心導(dǎo)管檢查術(shù)所確定的以mmHg為單位的左心室舒張末期壓(LVEDP)。每一組中的左和右圖面分開用(左圖面，不同的肽均為1.Omg/kgBw)環(huán)狀18AA半胱氨酸/絲氨酸(右斜線線陰影柱，η=20動物)、線性半胱氨酸/絲氨酸突變體(水平陰影柱，η=5動物)和環(huán)25ΑΑCys/Ser突變體(豎直陰影柱，η=5動物)獲得的數(shù)據(jù)。右側(cè)圖面中的柱代表不同濃度的環(huán)狀18ΑΑ半胱氨酸/絲氨酸突變體所獲得的數(shù)據(jù)白色填充的黑色圓點(diǎn)柱對應(yīng)于0.25mg/kgBw(η=4動物)，右斜線陰影柱對應(yīng)于1.Omg/kgBw(η=10動物)，左斜線陰影柱對應(yīng)于2.Omg/kgBw(η=5動物)以及黑色結(jié)構(gòu)柱對應(yīng)于4.Omg/kgBw(n=9動物)。每一圖面中的黑色和白色柱作為參照并對應(yīng)于未定期(每4周)處理的免疫的動物(陽性對照，黑色，η=9)或0.9%NaCl注射的未免疫的對照動物(陰性對照，白色，η=10)。圖例中“βr未處理的”表示免疫的抗β！抗體陽性心肌病未處理的動物(η=9，黑色柱)，“對照”表示0.9%NaCl注射的對照組(η=10，白色柱)，“IScyc半胱氨酸/絲氨酸”表示在免疫9個(gè)月后利用標(biāo)示的線性ISlin半胱氨酸/絲氨酸(n=5[1.Omg/kgBw]或環(huán)狀I(lǐng)Scyc半胱氨酸/絲氨酸突變體(n=10[1.Omg/kgBw]或環(huán)狀25AA半胱氨酸/絲氨酸突變體(n=4[1.Omg/kgBw)治療性處理的免疫的抗β工抗體陽性心肌病動物。右側(cè)圖面描述了不同劑量的經(jīng)靜脈內(nèi)注射的P1-ECiiISAA半胱氨酸/絲氨酸環(huán)肽突變體(分別為η=4；η=20[LOmg/kgBw],η=5[2.Omg/kgBw]，禾口η=9[4·Omg/kgBw])的效應(yīng)。通過單因素方差分析(onewayANOVA)評估組間差異；n.s=無顯著性，<0.05,<0.005。圖21顯示了兩個(gè)圖面(a和b)，表現(xiàn)了來自如柱中的治療研究的動物的宏觀解剖學(xué)參數(shù)。上圖面(a)表現(xiàn)了以g/kg體重為單位的所示器官(自左到右為心臟，脾臟，右側(cè)腎臟，左側(cè)腎臟，肺臟和肝臟)的相對濕重，從而"P1-未處理的”表示免疫的抗^抗體陽性心肌病未處理的動物(η=9，黑色柱)，”對照”表示0.9%NaCl注射的對照組(η=10，白色柱)，“IScyc半胱氨酸/絲氨酸”表示在免疫9個(gè)月后利用標(biāo)示的線性ISlin半胱氨酸/絲氨酸(η=5[1.Omg/kgBw]，水平陰影柱)或環(huán)狀I(lǐng)Scyc半胱氨酸/絲氨酸突變體(η=20[1.Omg/kgBw]，斜線陰影柱)或環(huán)狀25AA半胱氨酸/絲氨酸肽突變體(n=4[1.Omg/kgBw]，垂直陰影柱)治療性處理的免疫的抗β工抗體陽性心肌病動物。下圖面(b)表現(xiàn)了免疫的抗β！陽性心肌病動物以g/kg體重表示的所示器官(自左到右為心臟，脾臟，右側(cè)腎臟，左側(cè)腎臟，肺臟和肝臟)的相對凈重，所述免疫的抗P1陽性心肌病動物在免疫9個(gè)月后利用所示劑量的β!-EC11ISAA半胱氨酸/絲氨酸環(huán)肽突變體(n=4，白色填充黑色圓點(diǎn)柱；η=20[1·Omg/kgBw]，右斜線陰影柱，η=5[2.Omg/kgBw]，左斜線陰影柱；η=9[4.Omg/kgBw]，黑色結(jié)構(gòu)柱)治療性處理，從而“βr未處理的”表示免疫的抗β！抗體陽性心肌病未治療的動物(η=9，黑色柱)，“對照”表示0.9%NaCl注射的對照組(η=10，白色柱)。腎臟R表示右側(cè)腎臟，腎臟L表示左側(cè)腎臟。通過單因素方差分析評估組間差異；n.s=無顯著性，*Ρ<0.05,**Ρ<0.005。圖22表現(xiàn)了10個(gè)月治療后在動物血清中測定的不同實(shí)驗(yàn)室參數(shù)的兩個(gè)圖面(a和b)。兩個(gè)圖面中的"P1-未處理的”和“對照”分別地表示免疫抗^抗體陽性心肌病未處理的動物(η=5，黑色柱，陽性對照)和0.9%NaCl注射的對照組(η=6，白色柱，陰性對照)。上圖面(a)表現(xiàn)了免疫9個(gè)月后利用標(biāo)明的線性ISlin半胱氨酸/絲氨酸(η=5[1.Omg/kgBw]，水平陰影柱)或環(huán)狀I(lǐng)Scyc半胱氨酸/絲氨酸突變體(η=20[1.Omg/kgBw]，右斜線陰影柱)或環(huán)狀25AA半胱氨酸/絲氨酸肽突變體(η=4[1.Omg/kgBw]，垂直陰影柱)治療性處理免疫的抗β工抗體陽性心肌病動物的參數(shù)。下圖面(b)表現(xiàn)了免疫9個(gè)月后利用所示劑量的β!-EC11ISAA半胱氨酸/絲氨酸環(huán)肽突變體(n=4，白色填充黑色圓點(diǎn)柱；η=20[1.Omg/kgBw]，右斜線陰影柱，n=5[2.Omg/kgBw]，左斜線陰影柱；η=9[4.Omg/kgBw]，黑色結(jié)構(gòu)柱)治療性處理免疫的抗β！陽性心肌病動物的參數(shù)；Crea表示肌酸酐；GOT表示谷氨酸草酰乙酸轉(zhuǎn)氨酶；GPT表示谷氨酸丙酮酸轉(zhuǎn)氨酶；LDH表示乳酸脫氫酶。圖23表現(xiàn)了在靜脈注射1.Omg/kg體重(Bw)的標(biāo)記的環(huán)肽到未免疫的0.9%NaCl處理的對照動物(左panel)或免疫的抗體陽性的心肌病路易斯鼠(550gBw)后德克薩斯紅(texasred)(熒光染料)標(biāo)記的ISAAEC11半胱氨酸/絲氨酸環(huán)肽突變體(“CP-1”)的分布模式。照片描述了德克薩斯紅標(biāo)記的18AA半胱氨酸/絲氨酸環(huán)肽突變體在腎臟(腎臟皮質(zhì)區(qū)域的2μπι切片)中的亞細(xì)胞分布。這一圖像表明未觀察到本發(fā)明的環(huán)狀肽作用于腎臟的毒性和腎小球膜的機(jī)械性阻塞。圖24為描述突變的包含半胱氨酸的βrECn同源性環(huán)肽(白色小球代表氨基酸ΑΑ，并在每一個(gè)球中寫有相應(yīng)的AA字母編碼)的示意圖。半胱氨酸分子和它們的取代物顯示為黑色小球。黑色粗體線代表二硫鍵的假定位置。左側(cè)描述人β工腎上腺素受體的EC11環(huán)的原始序列的示意圖；中間帶有位于假定的環(huán)閉合位點(diǎn)(位置222)上的Gly突變的環(huán)狀22AAECn同源肽。右圖面描述了包含僅兩個(gè)半胱氨酸(即位置209和215)的環(huán)狀22A肽突變體的實(shí)例。顯示了位于第216位的半胱氨酸的半胱氨酸/絲氨酸突變體(環(huán)狀ZZAiB1-EC1JtCys216一Ser216)ο給定的號碼指示了根據(jù)Frielleetal.1987，PNAS84，pages7920_7924氨基酸原始一級序列的編號。圖25顯示的兩個(gè)圖面表現(xiàn)了兩個(gè)環(huán)狀((22+1)=22AA肽的高壓液相色譜(HPLC)洗脫圖譜；第一個(gè)圖面對應(yīng)本發(fā)明含有3個(gè)半胱氨酸的構(gòu)建體cyc22AA半胱氨酸/半胱氨酸(25A)，且第二個(gè)圖面對應(yīng)本發(fā)明含有2個(gè)半胱氨酸的突變cyc22AA半胱氨酸/絲氨酸(25B)，它們所有環(huán)肽都有一個(gè)Gly閉合位點(diǎn)。在裝備有雙波長UV吸收檢測器的HewlettPackardM^J1050yMffHPLC(AgilentTechnologiesGermanyGmbHjBoblingen)中操作HPLC，在216nm處讀取吸光度。肽合成和環(huán)化后，樣品溶解于H20/0.1%三氟酸(TFA)并加樣于流速為2ml/min的分析HPLC柱(WatersGmbH,Eschborn)XBridgeBEH130,C18,3，5μm(柱長50_，管腔4.6mm)；然后在0.1%TFA存在下自0%到75%乙睛(ACN)的分離梯度跑柱5分鐘。包含具有三個(gè)可自由地接近的半胱氨酸分子的環(huán)狀β1-ECII-22AA半胱氨酸/半胱氨酸肽的部分展現(xiàn)出典型的山峰狀的洗脫形式，提示了半胱氨酸消旋物的存在(25A，在2.6與3.8分鐘間洗脫)。相比之下，包含僅兩個(gè)半胱氨酸(通過另一強(qiáng)化的二硫鍵連接)的突變的環(huán)狀22AA肽在2.63出現(xiàn)銳利的單洗脫峰(cyc22AA半胱氨酸/絲氨酸，25B)。圖26顯示了通過質(zhì)譜(MALDI)描述22AA_EC環(huán)狀肽特征的兩個(gè)代表性圖面。第一個(gè)圖面對應(yīng)包含3個(gè)半胱氨酸的構(gòu)建體cyc22AA半胱氨酸/半胱氨酸(26A)，且第二個(gè)圖面對應(yīng)本發(fā)明含有2個(gè)半胱氨酸的突變cyc22AA半胱氨酸/絲氨酸(26B)，它們所有環(huán)肽都有一個(gè)Gly閉合位點(diǎn)。圖面顯示了所示的環(huán)狀βrECn-22AA肽的代表性MALDI-示蹤。每一圖的縱坐標(biāo)表示測量的信號強(qiáng)度(“a.u.”表示任意單位)，橫坐標(biāo)指示分子量(表示為m/z)。26A對應(yīng)cyc22AA半胱氨酸/半胱氨酸肽(2518.28m/z)和26B對應(yīng)cyc22AA半胱氨酸/絲氨酸突變體((2502.31m/z)。MALDI分析通過利用裝備有Scout-26樣品載體的反射II質(zhì)譜儀(BrukerDaltonicGmbH,Bremen)進(jìn)行操作。在所有情況下在2200m/z分析簡單質(zhì)子化的分子。圖27A和B描述了人β工腎上腺素受體的第二細(xì)胞外環(huán)(ECII)的不同的含有半胱氨酸的環(huán)肽變異體的體外阻斷能力(=中和作用)，這是通過ELISA測試在與標(biāo)示的環(huán)肽一起過夜孵育后(12-14h，4°C)免疫的βrECn抗體陽性大鼠的η=6個(gè)體血清(27Α)所確定的。27Α中的柱代表所示的環(huán)肽的受體抗體阻斷功效，表示為未阻斷的抗體陽性大鼠血清所獲得的抗體-(ELISA-)信號的百分比。27Β中的柱代表每一環(huán)肽的平均阻斷功效，誤差棒表示士SEM。白色柱CyC18AA半胱氨酸/絲氨酸突變體(當(dāng)通過雙側(cè)t檢驗(yàn)測試其與未阻斷血清間的顯著性時(shí)，阻斷功效60.0士8.3%，P=0.0014)；垂直陰影柱cycl8AA半胱氨酸/半胱氨酸(阻斷功效66.1士7.0%，P=O.00025)；黑色柱cyc22AA半胱氨酸/半胱氨酸(阻斷功效82.0士5.0%，P=0.000046)；(右)斜線陰影柱cyc22AA半胱氨酸/絲氨酸突變體(阻斷功效74.9士5.0%，P=O.00026)；水平陰影柱cyc25AA半胱氨酸/半胱氨酸(阻斷功效73.4士5.0%，P=0.00011)。圖28A和B描述了在將不同構(gòu)建體治療性地注射到自8個(gè)月定期免疫的大鼠(第一次=基礎(chǔ)免疫，其后是每4周一次的7次抗原加強(qiáng)免疫)時(shí)，人β工腎上腺素受體的第二細(xì)胞外環(huán)(ECII)的含有兩個(gè)半胱氨酸的18AA或22AA環(huán)肽突變體的體內(nèi)阻斷能力(=中和作用)。顯示了4到5次后續(xù)的每4周一次的環(huán)肽注射的效應(yīng)。圖28A描述了免疫的^1-EC11抗體陽性心肌病大鼠(每組動物數(shù)在圖例中給出)的每一處理組的平均值士SEM。圖28A顯示4次后續(xù)的環(huán)肽注射的平均效應(yīng)，這由所示的構(gòu)建體應(yīng)用后20-22小時(shí)所確定。(柱)描述了每組注射后殘余的受體抗體滴定度，表示為初始治療時(shí)(第8個(gè)月)抗體滴定度的百分比。誤差棒表示士SEM。柱中的號碼表示(后續(xù)的)每月注射的數(shù)。黑色柱未處理的抗體陽性的動物(總共8+4(=12)抗原加強(qiáng)免疫后的參考滴定度(對比治療開始時(shí)的滴定度)110.7士5.6%；η=5，陽性對照)。白色柱CyC18AA半胱氨酸/絲氨酸突變體，η=5動物(4次注射后殘余的抗體滴定度，以治療開始時(shí)的滴定度的百分比表示當(dāng)通過雙側(cè)t檢驗(yàn)測試其與未處理的抗體陽性動物的抗體滴定度顯著性時(shí)，76.0士23.0%，P=0.44)。(右)斜線陰影柱cyc22AA半胱氨酸/絲氨酸突變體，η=8動物(以治療開始時(shí)的滴定度的百分比表示的4次注射后殘余抗體滴定度9.0士2.2%，P=3.OXl(T)。圖28Β顯示了4次后續(xù)環(huán)肽注射后抗體滴定度的時(shí)程，這由應(yīng)用所示的構(gòu)建體之前和之后20-22小時(shí)所確定。值表示為與開始治療(第8個(gè)月)時(shí)確定的抗體滴定度相比，每次環(huán)肽注射后相應(yīng)抗體滴定度的增加或減少的百分比。黑色圓圈未處理的抗體陽性動物(η=5，陽性對照)；白色正方形cycl8AA半胱氨酸/絲氨酸突變突變體，4次注射，η=5動物；黑色菱形cyc22AA半胱氨酸/絲氨酸突變突變體，4次注射，η=8動物。圖29Α為顯示了以下內(nèi)容的圖=GSiyii1-EC11-免疫的未處理的動物(黑色圓圈)與用所示的不同環(huán)肽(見圖例)處理的GSTz^1-EC11-免疫的動物通過2D和M模式的超聲心動描記術(shù)(超聲心動圖系統(tǒng)可視聲學(xué)，VevO770(版本V2.2.3)，裝備有15-17.5MHz換能器)所確定的內(nèi)部收縮末期的和舒張末期的左心室直徑(LVES，LVED)的時(shí)程(0到12月)，從而LVES/LVED為左心室收縮末期直徑和左心室舒張末期直徑。白色圓圈，未治療的0.9%NaCl注射的未免疫的對照動物(η=5)；黑色圓圈，未定期(每4周)治療的免疫的抗體陽性動物(η=6)；白色正方形，cyclSAA半胱氨酸/絲氨酸突變體(1.0mg/kgBw,η=5)；黑色菱形，cyc22AA半胱氨酸/絲氨酸突變(Gly)肽(1.Omg/kgBw,η=8)。圖29Β為描述通過2D和多普勒超聲波心動描記術(shù)(超聲心動圖系統(tǒng)見上文)所確定的表示為ml/min/g(體重)的心指數(shù)(Cl)的時(shí)程(0到12月)的圖。白色圓圈，未治療的0.9%NaCl注射的未免疫的對照動物(η=5)；黑色圓圈，未定期(每4周)治療的免疫的抗體陽性動物(n=6)白色正方形，cyclSAA半胱氨酸/絲氨酸突變體(1.Omg/kgBw,η=5)；黑色菱形，cyc22AA半胱氨酸/絲氨酸突變(Gly)肽(1.Omg/kgBw,η=8)。圖30表現(xiàn)了將0.5-1.OMBq的jodinel31標(biāo)記的18AAEC11半胱氨酸/絲氨酸環(huán)肽突變體靜脈注射到未免疫的0.9%NaCl處理的對照動物(左圖面)和免疫的抗體陽性的Lewis大鼠(350-400gBw)后20分鐘，所示器官中累積的放射活性的模式。數(shù)值以每g器官濕重的初始注射的放射活性(ID)的百分比活性給出。下文的非限定性實(shí)施例對本發(fā)明進(jìn)行了說明。實(shí)施例1突變環(huán)肽的合成本文所公開的只能形成單個(gè)獨(dú)立的二硫鍵的環(huán)肽的三個(gè)具體實(shí)例分別由18、22或25氨基酸(AA)=EC11-ISAA半胱氨酸/絲氨酸突變(谷氨酰胺)環(huán)肽、ECn_22AA半胱氨酸/絲氨酸突變(甘氨酸)環(huán)肽和ECn-25AA半胱氨酸/絲氨酸突變(谷氨酰胺)環(huán)肽組成。其一級序列與人P1-AR序列部分同源(分別為第204-219、200-220和200-222位氨基酸)。借助通過線性肽的頭到尾環(huán)化及隨后另一(單個(gè))二硫鍵穩(wěn)定環(huán)化的步驟來限制構(gòu)象柔性，18AA、22或25AA環(huán)肽突變體采取的構(gòu)象更接近模擬存在于天然βrECn蛋白環(huán)表面的表位的構(gòu)象。而且，經(jīng)常將環(huán)化作為一種延長肽作用持續(xù)時(shí)間的工具，因?yàn)榄h(huán)狀肽通常比它們的線性對應(yīng)物對蛋白水解作用更穩(wěn)定。詳細(xì)地，環(huán)(K-18-P)環(huán)狀S-S，Cys/Ser突變體的肽序列為環(huán)-Ala-Asp-Glu-Ala-Arg-Arg-Cys-Tyr-Asn-Asp-Pro-Lys-Cys-Ser-Asp-Phe-VaI-Gln；環(huán)化可發(fā)生在Cys7和Cys13間(二硫鍵)及Ala1和Gln18間(環(huán)閉合)。詳細(xì)地，環(huán)(K-22-P)環(huán)狀S-S，Cys/Ser突變體的肽序列為環(huán)-Arg-Ala-Glu-Ser-Asp-Glu-Ala-Arg-Arg-Cys-Tyr-Asn-Asp-Pro-Lys-Cys-Ser-Asp-Phe-Val-Thr-Gly；環(huán)化可發(fā)生在Cysltl和Cys16間(二硫鍵)及Arg1和Gly22間(環(huán)閉合)。詳細(xì)地，環(huán)(K-25-P)環(huán)狀S-S，Cys/Ser突變體的肽序列為環(huán)-Ala-Arg-Ala-Glu-Ser-Asp-Glu-Ala-Arg-Arg-Cys-Tyr-Asn-Asp-Pro-Lys-Cys-Ser-Asp-Phe-Val-Thr-Asn-Arg-Gln；環(huán)化可發(fā)生在Cys11和Cys17間(二硫鍵)及Ala1和Gln25間(環(huán)閉合)。本發(fā)明的環(huán)肽突變體首先合成為線性肽，然后在氨基酸主鏈上借助C末端羧基與N末端的氨基縮合共價(jià)地環(huán)化。隨后，在半胱氨酸殘基7和13(ISmer環(huán)肽)、半胱氨酸殘基10和16(22mer環(huán)肽)和半胱氨酸殘基11和17(25mer環(huán)肽)間形成二硫鍵。采用芴甲氧羰基叔丁基策略(Fmoc/tertbutylstrategy)通過逐步的固相肽合成進(jìn)行線性肽的組裝。氯代三苯甲基作為啟始樹脂使用。第一個(gè)氨基酸(Fmoc-Pro-OH)在DMF中與DIEA偶聯(lián)，第二個(gè)在DMF中與PYB0P/H0BT/DIEA偶聯(lián)然后接下來的氨基酸在DMF中與二異丙基碳酰亞胺(diisopropylcarboimide),HOBT偶聯(lián)。通過UV檢測器在線監(jiān)測肽的質(zhì)量。以下描述了脫保護(hù)/偶聯(lián)(超過兩倍)操作方法表1脫保護(hù)/偶聯(lián)(超過兩倍)操作方法<table>tableseeoriginaldocumentpage44</column></row><table>*偶聯(lián)時(shí)間由Kaiser測試確定對于組裝，使用以下的氨基酸(提供ISmer環(huán)狀半胱氨酸/絲氨酸肽突變體作為示例)表2用于18mer環(huán)狀Cys/Ser肽突變體的F-moc合成的氨基酸<table>tableseeoriginaldocumentpage44</column></row><table>帶有反應(yīng)性N末端氨基和C末端羧基基團(tuán)的完全保護(hù)的肽通過六氟異丙醇/二氯甲烷的處理從樹脂中裂解下來。其后根據(jù)以下操作步驟在溶液中進(jìn)行環(huán)化被保護(hù)的肽的“頭到尾”環(huán)化作用在高DMF稀釋液(IOmrnol線性肽/ILDMF)中用PyB0P/NaHC03進(jìn)行。在3天后完成環(huán)化。DMF蒸餾后，用5%NaHCO3、水和純水洗滌肽。冷卻反應(yīng)混合物，將肽除了半胱氨酸基團(tuán)之外脫保護(hù)。然后，部分被保護(hù)的肽通過甲基叔丁基乙醚的沉淀作用而分離出來。粗制肽通過液態(tài)層析法進(jìn)行預(yù)純化固定相硅膠C18，15ym，120A洗脫劑水乙腈和0.1%TFA檢測UV(2IOnm)在二甲基sulfoxyde(3%)存在的情況下，在水中(2mg/ML)進(jìn)行二硫化物的環(huán)化。環(huán)化反應(yīng)在3天后完成。利用上文所描述的條件通過HPLC純化肽。純度高于95%的部分合并在一起。肽在離子交換樹脂(Dowex1X2)上進(jìn)行交換且將最終的溶液凍干。肽內(nèi)容物通過氨基酸分析來確定(Edman測序)。圖1、3、25和26中的HPLC洗脫圖清楚地顯示了銳利且輪廓分明的洗脫峰，其是由所有包含相同單個(gè)二硫鍵的突變環(huán)肽所獲得的，與包含3個(gè)半胱氨酸的18AACys13-Cys14,22AACys16-Cys17和25AACyS17-CyS18環(huán)肽所獲得的較大的(山峰樣)洗脫圖形成對比。下文所有的體外和體內(nèi)研究都利用這些環(huán)肽突變體進(jìn)行。實(shí)施例2體外ELISA競爭性測定利用包含3個(gè)半胱氨酸的線性25AA半胱氨酸/半胱氨酸肽作為抗原的ELISA競爭性測定中，不同數(shù)目的來源于免疫的抗體陽性大鼠的血清孵育(12h，4°C，旋轉(zhuǎn)孵育過夜)后，比較βrECn-18AA環(huán)肽突變體(具有額外D-Glu—Gln交換(例如環(huán)閉合位點(diǎn)上)的Cys13-Ser14或Ser13-Cys14突變)與包含3個(gè)半胱氨酸的25AA或18AA半胱氨酸/半胱氨酸環(huán)肽的阻斷能力。圖4，5和7-10顯示了利用本發(fā)明不同的環(huán)肽對η=12直到η=82免疫的抗體陽性大鼠血清實(shí)施測定的結(jié)果。令人驚奇地，自12只不同免疫的抗體陽性大鼠血清分離出的IgG部分所獲得的結(jié)果顯示只有半胱氨酸/絲氨酸而不是絲氨酸/半胱氨酸環(huán)肽突變體能顯著性阻斷抗體結(jié)合β!-EC11抗原。18ΑΑ半胱氨酸/絲氨酸突變環(huán)肽的阻斷效應(yīng)與包含3個(gè)半胱氨酸的^1-EC11-ISAA環(huán)肽的阻斷能力相比是相當(dāng)?shù)?在超過半數(shù)的被分析的血清η=8/12)甚或更有效(圖4)。這一發(fā)現(xiàn)通過劑量滴定法研究得以證實(shí)，劑量滴定法研究顯示了清楚的βrECn-18AA半胱氨酸/絲氨酸環(huán)肽突變體的劑量依賴性阻斷效應(yīng)，其在兩倍到八倍摩爾超出量(假定兩個(gè)環(huán)狀(2.IKDa分子量(MM))和線性肽(3.OkDaMM)的化學(xué)計(jì)量為11，考慮IgG分子的分子量為150kDa)在阻斷受體抗體方面持續(xù)明顯地優(yōu)于其絲氨酸/半胱氨酸突變對應(yīng)物或包含3個(gè)半胱氨酸的線性25AA半胱氨酸/半胱氨酸肽(圖5)。圖7繼續(xù)描述在利用線性的包含3個(gè)半胱氨酸的25AA半胱氨酸/半胱氨酸肽作為抗原的ELISA競爭性測定中，不同環(huán)肽突變體在與自η=78免疫的抗體陽性大鼠分離出的IgG預(yù)孵育后的阻斷效應(yīng)。相比于完全無效的環(huán)狀25ΑΑ或18ΑΑ絲氨酸/半胱氨酸突變體(分別為6士2%或1士2%;Ρ<5X10_3°或P<3.7XIO"33)，18ΑΑ半胱氨酸/絲氨酸突變體的阻斷能力最高(69士2%)，其次為25ΑΑ半胱氨酸/半胱氨酸(67士2%)、18ΑΑ半胱氨酸/半胱氨酸環(huán)肽(60士4%)和包含3個(gè)半胱氨酸的線性25ΑΑ肽(55士4%)。只有少于5%的測試的大鼠血清還部分地被環(huán)狀EC11-ISAA絲氨酸/半胱氨酸突變體阻斷，然而絕大多數(shù)(>95%;η=78)能被EC11-ISAA半胱氨酸/絲氨酸突變體有效阻斷(圖8)。利用ELISA競爭性測定(利用包含3個(gè)半胱氨酸的線性25ΑΑ半胱氨酸/半胱氨酸肽作為抗原)分析具有谷氨酰胺_丙氨酸閉合位點(diǎn)或D-谷氨酸-丙氨酸閉合位點(diǎn)的環(huán)肽突變體在與從69只不同的免疫的抗體陽性的大鼠中分離出的血清預(yù)孵育后的體外阻斷效應(yīng)。結(jié)果顯示在圖9中。同樣，測試的大鼠血清存在兩種反應(yīng)模式(類1/類型2)。血清的大部分(93%，圖9，上部圖面，類型1和圖10)可被25ΑΑ或18ΑΑ半胱氨酸/絲氨酸突變環(huán)肽(分別為69士2%或68士3%(Gln-閉合)/69士2%(D-Glu-閉合)非常有效地阻斷，這甚至優(yōu)于相應(yīng)的包含3個(gè)半胱氨酸的25ΑΑ或18ΑΑ半胱氨酸/半胱氨酸環(huán)肽(分別為65士2%或59士2%)，然而25ΑΑ或18ΑΑ絲氨酸/半胱氨酸突變體幾乎無抑制效應(yīng)，與位于閉合位點(diǎn)的氨基酸無關(guān)(6士2%，25ΑΑ絲氨酸/半胱氨酸，P<5X10_3°；1士2%，具有谷氨酰胺閉合的18ΑΑ絲氨酸/半胱氨酸(Ρ<3.7Χ10—33)或1士2%，具有D-Glu閉合的18ΑΑ絲氨酸/半胱氨酸(P<6XIO"55)。血清的較小部分(7%，圖9，下部圖面，類型2和圖10)能被半胱氨酸/絲氨酸或絲氨酸/半胱氨酸突變肽類似地阻斷-盡管阻斷能力較??；另外，對于25AA和18AA環(huán)肽，突變體效應(yīng)小于它們包含3個(gè)半胱氨酸的25AA或18AA半胱氨酸/半胱氨酸對應(yīng)物。25AA或18AA半胱氨酸/絲氨酸突變環(huán)肽的阻斷能力分別為48士6%或50士8%(谷氨酰胺閉合)/47士5%(D-Glu閉合)，這都低于相應(yīng)的包含3個(gè)半胱氨酸的25AA或18AA半胱氨酸/半胱氨酸環(huán)肽(分別為72士5%或67士6%)的阻斷能力；然而，在這些動物中，25AA或18AA絲氨酸/半胱氨酸突變體顯示的阻斷能力幾乎與半胱氨酸/絲氨酸突變體的阻斷能力相當(dāng)(分別為37士7%25AA絲氨酸/半胱氨酸，P=0.22η.s.；47士3%具有谷氨酰胺的18ΑΑSer/Cys或33士5%，帶有D-Glu閉合的18ΑΑSer/CysP=O.7n.s.或P=0·08η·s.)。隨后，利用相同的競爭性ELISA測定分析不同線性和環(huán)狀β!-EC11肽的體外劑量依賴性阻斷能力(圖11)包括線性25ΑΑ半胱氨酸/半胱氨酸肽、環(huán)狀25ΑΑ半胱氨酸/絲氨酸肽突變體、環(huán)狀18ΑΑ半胱氨酸/半胱氨酸肽、環(huán)狀18ΑΑ半胱氨酸/絲氨酸肽突變體和線性18ΑΑ半胱氨酸/絲氨酸肽突變體的試驗(yàn)顯示，所有來自η=6隨機(jī)選取的免疫的抗體陽性大鼠的血清被β^EC11-ISAA半胱氨酸/絲氨酸突變環(huán)肽以劑量依賴方式最好地阻斷，其次是非突變的18AA半胱氨酸/半胱氨酸環(huán)肽和25AA半胱氨酸/絲氨酸環(huán)肽突變體。所有環(huán)肽的抗體中和能力大大優(yōu)于它們的線性對應(yīng)物(有或無突變)(P<0.005；圖11)，18AA半胱氨酸/絲氨酸環(huán)肽突變體使循環(huán)中游離的抗P1-EC11-抗體劑量依賴性降低8倍超出量的18AA半胱氨酸/絲氨酸環(huán)肽突變體使循環(huán)中游離的抗β!-EC11-抗體降低53%，20倍超出量降低66%,80倍超出量降低大約85%。環(huán)狀18ΑΑ半胱氨酸/半胱氨酸或環(huán)狀25ΑΑ半胱氨酸/絲氨酸肽的相應(yīng)結(jié)果為46/30%[8倍超出量]，56/49%[20倍超出量]和在80倍超出量時(shí)的71/83%。線性肽的功效明顯地較小，線性25ΑΑ半胱氨酸/半胱氨酸和線性18ΑΑ半胱氨酸/絲氨酸肽使受體抗體滴定度的劑量依賴性降低僅24%[8倍超出量]、35%[20倍超出量]和在80倍超出量時(shí)的大約50%。此外，人βr腎上腺素受體的第二細(xì)胞外環(huán)(EC11)的不同環(huán)肽變異體的體外阻斷(=中和作用)能力利用在4°C孵育12-14小時(shí)后的免疫的β^EC11抗體陽性大鼠的血清進(jìn)行測試。22ΑΑ環(huán)肽cyc22AACys/Cys(相對于未阻斷的血清的阻斷功效為82.0士5.0%,P=0.000046)和22AA環(huán)肽突變體cyc22AACys/Ser(阻斷功效為74.9士5.0%，P=0.00026)的體外阻斷功效甚至高于前面描述的包含3個(gè)半胱氨酸的環(huán)肽，即cyc25AA半胱氨酸/半胱氨酸(阻斷功效73.4士5.0%，P=0.00011)或cyclSAA半胱氨酸/半胱氨酸(相對于未阻斷的血清的阻斷功效為66.1士7.0%，P=0.00025；見圖27A/B)的阻斷能力。實(shí)施例3體外功能性FRET測定利用通過熒光共振能量轉(zhuǎn)移的方法測定β!-EC1125ΑΑ或18ΑΑ環(huán)肽突變體(在環(huán)閉合位點(diǎn)上有或無D-Glu/Gln)對β工受體介導(dǎo)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)(功能性cAMP測定)的阻斷能力進(jìn)(圖6)。將與βrECn18AA環(huán)肽突變體(分別為半胱氨酸/絲氨酸或絲氨酸/半胱氨酸)預(yù)孵育(12小時(shí)，4°C，旋轉(zhuǎn)孵育器)的代表性大鼠的抗P1-EC11IgG抗體的效應(yīng)與包含3個(gè)半胱氨酸的25AA半胱氨酸/半胱氨酸環(huán)肽的抑制效應(yīng)相比或與未與阻斷性肽一起孵育的抗^1-EC11IgG抗體的效應(yīng)相比較。記錄的FRET發(fā)射信號的標(biāo)準(zhǔn)化YFP/CFP比用于量化本發(fā)明的環(huán)肽突變體在阻斷抗體誘導(dǎo)的細(xì)胞的cAMP產(chǎn)生(以百分比)方面的效應(yīng)，所述細(xì)胞的cAMP為瞬時(shí)Epacl轉(zhuǎn)染的穩(wěn)定表達(dá)βrAR的人胚腎細(xì)胞(ΗΕΚ293_βi細(xì)胞)產(chǎn)生的。圖6中的χ軸對應(yīng)于以秒(s)為單位的記錄時(shí)間。利用通過熒光共振能量轉(zhuǎn)移(FRET)的方法分析βrECn18AA環(huán)肽突變體對抗體誘導(dǎo)的β工腎上腺素的跨膜信號轉(zhuǎn)導(dǎo)刺激的抑制效應(yīng)。同樣，在抑制可測量的功能性抗體效應(yīng)(阻斷細(xì)胞內(nèi)的CAMP增加)方面，環(huán)狀β!-EC11ISAA半胱氨酸/絲氨酸突變體也大大優(yōu)于其絲氨酸/半胱氨酸對應(yīng)物，甚至輕度比包含3個(gè)半胱氨酸的25ΑΑ半胱氨酸/半胱氨酸環(huán)肽更有效(圖6)。總之，本文所進(jìn)行的測試的結(jié)果表明，突變的環(huán)肽的抗體阻斷能力沒有受到自25-meric到18-meric肽的氨基酸數(shù)目減少的影響。這些結(jié)果也顯示出25AA半胱氨酸/半胱氨酸和18AA半胱氨酸/半胱氨酸環(huán)肽與環(huán)狀25AA或18AA半胱氨酸/絲氨酸突變體，而不是與環(huán)狀25AA或18AA絲氨酸/半胱氨酸突變體-的極好的可比性。令人吃驚地，單個(gè)半胱氨酸殘基與絲氨酸殘基的交換的精確性顯著地確定了突變的肽的中和效能分別在位置18上(25AA環(huán)肽)或位置14上(18AA環(huán)肽)的Cys—Ser交換產(chǎn)生了具有極好的體外抗體中和和藥理學(xué)作用(圖6-10)，然而Cys17—Ser17或Cys13—Ser13突變體(分別為25AA或18AA肽)幾乎沒有阻斷效應(yīng)，無論是在其為抗體清道夫的性能方面，還是在其抑制功能性抗體效應(yīng)的能力方面(體外受體刺激的中和作用；圖6-10和實(shí)施例3)。第25(25AA環(huán)肽突變體)或18(18AA環(huán)肽突變體)位上的D-Glu/谷氨酰胺交換沒有顯著地影響環(huán)肽的阻斷能力，不管它們的長度如何(即25和18氨基酸相比；圖7-10)。實(shí)施例4動物模型，受體抗體的”體內(nèi)”阻斷如果沒有相反的說明，用于這一實(shí)施例和本文所描述的其他任何實(shí)施例的動物模型為模擬人類的大鼠模型。分別在評價(jià)和測試之前，利用本發(fā)明的不同化合物，更特別地式VI,VII,VIII和IX的化合物以及對照如下文所描述的處理模擬人類的大鼠模型，所述對照為線性EC11-ISAA半胱氨酸/絲氨酸突變的(Gln18-)肽(氨基酸序列如下=Ala-Asp-Glu-AIa-Arg-Arg-Cys-Tyr-Asn-Asp-Pro-Lys-Cys-Ser-Asp-Phe-Val-Gln)和線性非突變的包含3個(gè)半胱氨酸的ECn-25AA半胱氨酸/半胱氨酸(Gln25)肽(氨基酸序列如下=Ala-Arg-Ala-Glu-Ser-Asp-Glu-Ala-Arg-Arg-Cys-Tyr-Asn-Asp-Pro-Lys-Cys-Cys-Asp-Phe-Val-Thr-Asn-Arg-Gln)。在將1.Omg/kgBw的每一構(gòu)建體靜脈注射到最近免疫的抗體陽性的大鼠(即，環(huán)肽用于一種”預(yù)防性”研究中)后，分析25AA和18AA半胱氨酸/絲氨酸突變環(huán)肽(帶有谷氨酰胺閉合位點(diǎn))、18AA絲氨酸/半胱氨酸突變環(huán)肽和突變的線性18AA半胱氨酸/絲氨酸肽的體內(nèi)阻斷效應(yīng)，在最初免疫(以及在第2和3月的兩次加強(qiáng))后3個(gè)月第一次應(yīng)用環(huán)肽。加起來，在4周一次的間隔內(nèi)給予不同構(gòu)建體5次預(yù)防性應(yīng)用，總是在每月一次持續(xù)的抗原加強(qiáng)后兩周。血清提取自靜脈注射后18-20小時(shí)并利用含有3個(gè)半胱氨酸的線性25AA半胱氨酸/半胱氨酸肽作為抗原的ELISA測定反應(yīng)性(圖12)。第一次(預(yù)防性)體內(nèi)環(huán)肽應(yīng)用表明，1.Omg/kg體重(Bw)的非突變25AA半胱氨酸/半胱氨酸或18AA半胱氨酸/半胱氨酸環(huán)肽獲得了抗體中和作用的最高功效(與未治療的免疫的動物相比，5次環(huán)肽注射后降低87.7士2%或89.9士3%;都是P<0.005)，其次是18AA半胱氨酸/絲氨酸突變環(huán)肽(5次環(huán)肽注射后54.5士2%的降低；P<0.05)，然而同一濃度的線性25AA半胱氨酸/半胱氨酸肽或線性18AA半胱氨酸/絲氨酸突變體沒有顯著的阻斷效應(yīng)(5次注射后抗體滴定度降低25.8士3%或4.5士11%，P=0.16或P=0.8；圖12)。所選擇的環(huán)肽處理的與未處理的免疫的大鼠(η=3)的骨髓和脾臟細(xì)胞制備物的ELIspot分析證實(shí)了這一發(fā)現(xiàn)。圖13顯示，特異性抗β^EC11抗體分泌細(xì)胞(ASC)的數(shù)目在脾臟和骨髓中(較低程度)的顯著減少只出現(xiàn)在用25ΑΑ半胱氨酸/半胱氨酸環(huán)肽或18ΑΑ半胱氨酸/絲氨酸環(huán)肽突變體處理的大鼠中(分別地η=3或4)，然而線性18ΑΑ半胱氨酸/絲氨酸肽突變體(η=3)(無論是在脾臟還是骨髓)都對ASC沒有作用。而且，在將每一構(gòu)建體的首次靜脈劑量(S卩，1.Omg/kg體重(Bw))注射到長期免疫的抗β^EC11抗體陽性、呈現(xiàn)出心肌病的表型的大鼠中(h-ECn/GST抗原的每月1次免疫9個(gè)月后；圖14-16和17)，評價(jià)治療性使用的25AA和18AA半胱氨酸/絲氨酸環(huán)肽突變體、18AA絲氨酸/半胱氨酸(谷氨酰胺)環(huán)肽和突變的線性18AA半胱氨酸/絲氨酸肽的體內(nèi)阻斷效應(yīng)。首次靜脈注射各種構(gòu)建體后18-20小時(shí)提取血清并利用包含3個(gè)半胱氨酸的線性25AA半胱氨酸/半胱氨酸肽作為抗原的ELISA測定反應(yīng)性。各種環(huán)肽在心肌病抗體陽性大鼠中的“治療性”應(yīng)用顯示，18AA半胱氨酸/絲氨酸環(huán)肽突變體(lmg/kg/Bw)相比于同一濃度的25AA半胱氨酸/絲氨酸環(huán)肽突變體或功效明顯較低的18AA絲氨酸/半胱氨酸環(huán)肽突變體具有較高的體內(nèi)阻斷能力(圖14和15)。此外，18AA半胱氨酸/絲氨酸環(huán)肽突變體的體內(nèi)功效大大優(yōu)于線性18AA半胱氨酸/絲氨酸環(huán)肽突變體的體內(nèi)功效。然而當(dāng)將環(huán)狀18AA半胱氨酸/絲氨酸突變體的應(yīng)用劑量降低到0.25mg/kg體重(Bw)時(shí)，沒有獲得相應(yīng)的受體抗體的降低，這提示環(huán)肽突變體的劑量和效應(yīng)關(guān)系。突變的單個(gè)S-S環(huán)肽每4周注射到長期免疫的患有抗體誘導(dǎo)的免疫心肌病的大鼠中的反復(fù)的治療性注射證實(shí)了單個(gè)S-S環(huán)肽突變體的一種“臨界最小劑量”和效應(yīng)關(guān)系18AA半胱氨酸/絲氨酸環(huán)肽的0.25mg/kgBw劑量-雖然在一定程度上能夠清除受體抗體-在以下兩方面的功效明顯較小(1)達(dá)到的循環(huán)的受體抗體降低(甚至當(dāng)只考慮環(huán)肽敏感性“應(yīng)答器”，這由如下確定-J次環(huán)肽注射后動物具有的最大殘余抗體水平等于或低于治療開始時(shí)的滴定度的80%(圖16b和c)，和⑵與1.0或2.Omg/kgBw劑量的18AA半胱氨酸/絲氨酸環(huán)肽相比較的所獲得的心臟保護(hù)效應(yīng)(圖17b，19b，20和21b)。后兩者劑量在中和循環(huán)的受體抗體(圖16b和c)和逆轉(zhuǎn)抗體誘導(dǎo)的心肌病特征(圖17b，19b,20和21b)兩方面的效力幾乎是等同的。然而將應(yīng)用的劑量進(jìn)一步增加到4.Omg/kgBw并沒有產(chǎn)生更高的功效，無論是抗體清除能力(圖16b和c)還是心肌保護(hù)性效應(yīng)方面(圖17b，19b,20和21b)。肽注射時(shí)，未觀察到嚴(yán)重的局部或全身不良反應(yīng)。此外，在各種突變環(huán)肽注射后，動物的心率和血壓都沒有受到影響(圖20a)。此外，沒有發(fā)生明顯的與環(huán)肽突變體應(yīng)用相關(guān)的常規(guī)實(shí)驗(yàn)室參數(shù)的改變(圖22a和b)。為了產(chǎn)生抗受體抗體，利用包含細(xì)菌谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶的融合蛋白和人腎上腺素受體的第二細(xì)胞外環(huán)(GSTz^1-EC11)免疫動物。在利用本發(fā)明的突變環(huán)肽處理動物前，在每4周常規(guī)免疫6到8個(gè)月后觀察到漸進(jìn)性擴(kuò)張免疫心肌病(圖17)。所有免疫的動物產(chǎn)生了高滴定度的刺激性抗P1-EC11抗體。特異性抗β^EC11滴定度在每4周連續(xù)加強(qiáng)免疫動物的6到8個(gè)月間達(dá)到最大值，然而，NaCl注射的對照動物未產(chǎn)生特異性受體抗體(圖18)。上述的免疫的動物用于本發(fā)明的突變環(huán)肽應(yīng)用中。在首次靜脈注射(i.v.)1.Omg/kgBw(對18AA半胱氨酸/絲氨酸環(huán)肽也為0.25mg/kg/Bw)到免疫的抗體陽性大鼠中后，確定25AA和18AA半胱氨酸/絲氨酸突變環(huán)肽(帶有谷氨酰胺閉合位點(diǎn))的體內(nèi)阻斷效應(yīng)。血清提取自首次靜脈注射各種構(gòu)建體后18-20小時(shí)并利用包含3個(gè)半胱氨酸的線性25AA半胱氨酸/半胱氨酸肽作為抗原的ELISA測定反應(yīng)性。如所提及的，在首次靜脈注射(i.v.)1.Omg/kgBw的每一構(gòu)建體到免疫的抗體陽性大鼠中后，分析25AA和18AA半胱氨酸/絲氨酸突變環(huán)肽(帶有谷氨酰胺閉合位點(diǎn))、18AASer/Cys突變(Gln-)環(huán)肽和突變的線性18AA半胱氨酸/絲氨酸肽的體內(nèi)阻斷效應(yīng)。靜脈注射后18-20小時(shí)提取血清并利用包含3個(gè)半胱氨酸的線性25AA半胱氨酸/半胱氨酸肽作為抗原的ELISA測定反應(yīng)性。體內(nèi)數(shù)據(jù)證實(shí)了18AA半胱氨酸/絲氨酸突變環(huán)肽(lmg/kg/BW)相比于同一濃度的25AA半胱氨酸/絲氨酸突變體或效力明顯較小的18AA絲氨酸/半胱氨酸突變環(huán)肽具有較高的阻斷能力(圖14和15)。18AA半胱氨酸/絲氨酸環(huán)肽的體內(nèi)功效也大大優(yōu)于線性18AA半胱氨酸/絲氨酸肽的體內(nèi)功效。在肽注射時(shí)，未觀察到嚴(yán)重的局部或全身不良反應(yīng)。而且，在各種突變環(huán)肽注射后，動物的心率和血壓都沒有受到影響。然而體內(nèi)數(shù)據(jù)也提示，18AACys/Ser突變的(Gln_)環(huán)肽的功效看起來也取決于應(yīng)用的劑量；0.25mg/kg/Bw注射在抗體中和作用方面的功效低于同一構(gòu)建體在lmg/kg/Bw濃度時(shí)所達(dá)到的功效(圖14和15)。實(shí)施例2和3所描述的體外發(fā)現(xiàn)普遍在體內(nèi)得到證實(shí)(例如圖14-16)。有趣的是，半胱氨酸/絲氨酸突變環(huán)肽相比于線性肽的阻斷功效在體內(nèi)的差異更明顯(圖5，7和14-16)。然而，體內(nèi)數(shù)據(jù)也提示，18AA半胱氨酸/絲氨酸突變環(huán)肽的功效可能同樣取決于應(yīng)用的劑量(圖14-16)。所獲得的結(jié)果與單個(gè)S-S環(huán)肽突變體的(最小)劑量和效應(yīng)關(guān)系是符合的相比于1.0或2.Omg/kgBw劑量，0.25mg/kg劑量的18AA半胱氨酸/絲氨酸環(huán)肽突變體在達(dá)到的循環(huán)受體抗體的降低和達(dá)到的的心臟保護(hù)效應(yīng)兩方面的功效大幅降低(圖14-16)。這些劑量在循環(huán)受體抗體的中和及抗體誘導(dǎo)的心肌病特征的逆轉(zhuǎn)兩方面的功效是相等的(圖16-20)。然而應(yīng)用劑量進(jìn)一步增加到4mg/kgBw并沒有引起更高的功效-無論是關(guān)于抗體清除能力(圖16)還是關(guān)于體內(nèi)心肌保護(hù)效應(yīng)方面(圖17-21)。cyclSAA半胱氨酸/絲氨酸突變體的高劑量(=4mg/kgBw)沒有提高功效；反而，它導(dǎo)致抗體滴定度的短暫增加，只有在第三或第四次環(huán)肽注射后才使受體抗體滴定度顯著降低。最值得注意的是，在利用1.0或2.Omg/kgBw18AA半胱氨酸/絲氨酸環(huán)肽突變體所獲得的最佳心臟保護(hù)作用的研究期間的逆轉(zhuǎn)抗體誘導(dǎo)的心肌病特征方面也證實(shí)了不同注射濃度的cyclSAA半胱氨酸/絲氨酸突變環(huán)肽的抗體中和能力的效應(yīng)(圖17B，19B，20，21B)。如所提及的，1.Omg/kgBw的25AA-meric半胱氨酸/絲氨酸及高劑量(=4.Omg/kgBw)的18AA-meric半胱氨酸/絲氨酸突變體導(dǎo)致抗體滴定度的短暫增加，與初始免疫反應(yīng)符合，只有在第三或第四次環(huán)肽注射(治療第3或4個(gè)月；見圖16a和b)后才使受體抗體滴定度顯著降低。這一現(xiàn)象在1.O或2.Omg/kg劑量的18AA半胱氨酸/絲氨酸環(huán)肽突變體沒有出現(xiàn)，導(dǎo)致治療9個(gè)月后抗體滴定度與治療開始時(shí)相應(yīng)抗體滴定度的僅-37士13%(1.Omg/kg25AA半胱氨酸/絲氨酸環(huán)肽；P=0.36與免疫的未治療的動物相比)或39士14%(4.Omg/kg18AA半胱氨酸/絲氨酸環(huán)肽；P=0.24與免疫的未治療的動物相比)相比的更高的絕對降低(分別為1.Omg/kg:-59士14%或2.Omg/kg:_59士12%，P<0.0005與免疫的未治療的動物相比)。因此劑量為1.0或2.Omg/kgBw的cyclSAA半胱氨酸/絲氨酸肽在中和循環(huán)受體抗體方面(圖16b和c)和抗體誘導(dǎo)的心肌病特征逆轉(zhuǎn)方面的研究期間的功效幾乎是相等的(圖17b、19b、20和21b)。另外，體內(nèi)實(shí)驗(yàn)表明，突變環(huán)肽的抗體阻斷能力看起來沒有受到氨基酸數(shù)目自25-meric到18-meric環(huán)肽減少的影響；體外和體內(nèi)數(shù)據(jù)都表明了這兩種包含2個(gè)半胱氨酸的單個(gè)二硫鍵的25AA半胱氨酸/絲氨酸或18AA半胱氨酸/絲氨酸環(huán)肽突變體極好的相似性(圖17a)。然而應(yīng)該注意的是1.Omg/kg25AAmeric半胱氨酸/絲氨酸以及高劑量(即4.Omg/kgBw)的18AAmeric半胱氨酸/絲氨酸突變體引起抗體滴定度初始短暫的升高(圖16a和b)，從而將受體抗體滴定度的顯著降低推遲到第三或第四次環(huán)肽應(yīng)用時(shí)(治療的第三或第四個(gè)月)。應(yīng)用1.0或2.Omg/kgBw劑量的18AA半胱氨酸/絲氨酸環(huán)肽突變體時(shí)未出現(xiàn)這一現(xiàn)象。人βi腎上腺素受體的第二細(xì)胞外環(huán)(EC11)的eye22AA半胱氨酸/絲氨酸突變體的體內(nèi)阻斷(=中和)能力也通過“治療性”注射大鼠來測試并與所描述的cyclSAA半胱氨酸/絲氨酸突變體的效應(yīng)相比較，所述大鼠已被定期免疫8個(gè)月(基礎(chǔ)免疫和隨后每4周的7次抗原加強(qiáng)，見圖28A/B)。在4到5次環(huán)肽每4周定期注射后，未治療的抗體陽性的動物中的滴定度增加到治療開始時(shí)數(shù)值的110.7士5.6%(η=5，陽性對照；與第8月的抗體滴定度相比，總共8+4(=12)次抗原應(yīng)用后的參考滴定度)。相比之下，cyc22AA半胱氨酸/絲氨酸突變體(η=8動物)的4次注射使抗體滴定度降低到治療開始時(shí)抗體滴定度的9.0士2.2%(P=3.0X10_7，當(dāng)通過雙側(cè)t檢驗(yàn)測試與未治療的抗體陽性動物的抗體滴定度的顯著性時(shí))。因此，cyc22AA突變體的體內(nèi)功效與所描述的具有18個(gè)氨基酸長度的半胱氨酸/絲氨酸環(huán)肽突變體(cyclSAA半胱氨酸/絲氨酸；η=5動物)相比進(jìn)一步地增強(qiáng)，其在4次注射后使抗體滴定度降低到治療開始時(shí)滴定度的76.0士23.0%(與未治療的抗體陽性動物相比P=0.44，n.s.；見圖28Α)。另外，治療4個(gè)月后的超聲心動圖的追蹤數(shù)據(jù)也顯示了cyc22AA突變體相比于cyclSAA半胱氨酸/絲氨酸突變體在關(guān)于體內(nèi)心臟保護(hù)效應(yīng)方面的優(yōu)越性，這可由通過體內(nèi)心臟保護(hù)效應(yīng)通過利用可視聲學(xué)超聲心動圖系統(tǒng)(Vevo770,versionV2.2.3版本)；裝備有17.5MHz換能器)的二維和多普勒超聲心動描記術(shù)所確定的左心室舒張末期(LVED)和左心室收縮末期(LVES)直徑的減小(圖29A)和“心指數(shù)”(Cl，以ml/min/g體重表示，見圖29B)的增加來評價(jià)?？傊?，因?yàn)镋CII同源的環(huán)狀肽的心臟保護(hù)和免疫調(diào)節(jié)活性看起來在很大程度上取決于它們的構(gòu)象，位于分子內(nèi)的二硫鍵對于穩(wěn)定和維持構(gòu)建體的三維結(jié)構(gòu)是必要的。環(huán)狀21+1(=22)AA肽中，保留的半胱氨酸(即在209位和215位的半胱氨酸，如果216位已被突變?yōu)榻z氨酸)維持確定的分子內(nèi)間距，這通過在(預(yù)測的)環(huán)閉合位點(diǎn)引入最小的天然存在的氨基酸-Gly進(jìn)一步加強(qiáng)，以允許確定結(jié)構(gòu)的分子內(nèi)二硫鍵的形成。本發(fā)明涉及下文的核苷酸和氨基酸序列SEQIDNo.1與人βrAR的EC11表位同源的氨基酸序列(18AA；Cys14—Ser14)；環(huán)化可發(fā)生在Ala1和Gln18間Ala-Asp-Glu-Ala-Arg-Arg-Cys-Tyr-Asn-Asp-Pro-Lys-Cys-Ser-Asp-Phe-Val-GInSEQIDNo.2與人βrAR的EC11表位同源的氨基酸序列(25AA；Cys18—Ser18)；環(huán)化可發(fā)生在Ala1和Gln25間Ala-Arg-Ala-Glu-Ser-Asp-Glu-Ala-Arg-Arg-Cys-Tyr-Asn-Asp-Pro-Lys-Cys-Ser-Asp-Phe-Val-Thr-Asn-Arg-GlnSEQIDNo.3與人βrAR的EC11表位同源的氨基酸序列(18AA；Cys14—Ser14；Gln18—DGlu18)；環(huán)化可發(fā)生在Ala1和DGlu18間Ala-Asp-Glu-Ala-Arg-Arg-Cys-Tyr-Asn-Asp-Pro-Lys-Cys-Ser-Asp-Phe-Val-DGluSEQIDNo.4與人βrAR的EC11表位同源的氨基酸序列(25AA；Cys18—Ser18；Gln25—DGlu25)；環(huán)化可發(fā)生在Ala1和DGlu25間Ala-Arg-Ala-Glu-Ser-Asp-Glu-Ala-Arg-Arg-Cys-Tyr-Asn-Asp-Pro-Lys-Cys-Ser-Asp-Phe-Val-Thr-Asn-Arg-DGluSEQIDNo.5與人βrAR的EC11表位同源的氨基酸序列(18AA；Cys13—Ser13)；環(huán)化可發(fā)生在Ala1和Gln18間Ala-Asp-Glu-Ala-Arg-Arg-Cys-Tyr-Asn-Asp-Pro-Lys-Ser-Cys-Asp-Phe-Val-GInSEQIDNo.6與人βrAR的EC11表位同源的氨基酸序列(25AA；Cys17—Ser17)；環(huán)化可發(fā)生在Ala1和Gln25間Ala-Arg-Ala-Glu-Ser-Asp-Glu-Ala-Arg-Arg-Cys-Tyr-Asn-Asp-Pro-Lys-Ser-Cys-Asp-Phe-Val-Thr-Asn-Arg-GlnSEQIDNo.7與人βrAR的EC11表位同源的氨基酸序列(18AA；Cys13—Ser13；Gln18—DGlu18)；環(huán)化可發(fā)生在Ala1和DGlu18間Ala-Asp-Glu-Ala-Arg-Arg-Cys-Tyr-Asn-Asp-Pro-Lys-Ser-Cys-Asp-Phe-Val-DGluSEQIDNo.8與人βrAR的EC11表位同源的氨基酸序列(25AA；Cys17—Ser17；Gln25—DGlu25)；環(huán)化可發(fā)生在Ala1和DGlu25間Ala-Arg-Ala-Glu-Ser-Asp-Glu-Ala-Arg-Arg-Cys-Tyr-Asn-Asp-Pro-Lys-Ser-Cys-Asp-Phe-Val-Thr-Asn-Arg-DGluSEQIDNo.9編碼與人βrAR的EC11表位同源的氨基酸序列(18AA；Cys14—SeT14)的核苷酸序列g(shù)CIlgacgaggcgcgccgctgctacaacgaccccaagtgcSERgacttcgtccarSEQIDNo.10編碼與人βrAR的EC11表位同源的氨基酸序列(25AA；Cys18—Ser18)的核苷酸序列g(shù)CDcgggcggagagcgacgaggcgcgccgctgctacaacgaccccaagtgcSERgacttcgtcaccaaccggcarSEQIDNo.11編碼與人βfAR的EC11表位同源的氨基酸序列(I8AA；Cys14—Ser14；Gln18—DGlu18)的核苷酸序列g(shù)CIlgacgaggcgcgccgctgctacaacgaccccaagtgcSERgacttcgtcgarSEQIDNo.12編碼與人βfAR的EC11表位同源的氨基酸序列(25AA；Cys18—Ser18；Gln25—DGlu25)的核苷酸序列g(shù)CIlcgggcggagagcgacgaggcgcgccgctgctacaacgaccccaagtgcSERgacttcgtcaccaaccgggarSEQIDNo.13編碼與人βrAR的EC11表位同源的氨基酸序列(18AA；Cys13—Ser13)的核苷酸序列g(shù)CHgacgaggcgcgccgctgctacaacgaccccaagSERtgCgacttcgtccarSEQIDNo.14編碼與人βrAR的EC11表位同源的氨基酸序列(25AA；Cys17—Ser17)的核苷酸序列g(shù)CIlcgggcggagagcgacgaggcgcgccgctgctacaacgaccccaagSERtgcgacttcgtcaccaaccggcarSEQIDNo.15編碼與人βfAR的EC11表位同源的氨基酸序列(18AA；Cys13—Ser13；Gln18—DGlu18)的核苷酸序列g(shù)CIlgacgaggcgcgccgctgctacaacgaccccaagSERtgCgacttcgtcgarSEQIDNo.16編碼與人βfAR的EC11表位同源的氨基酸序列(25AA；Cys17—Ser17；Gln25—DGlu25)的核苷酸序列g(shù)CIlcgggcggagagcgacgaggcgcgccgctgctacaacgaccccaagSERtgcgacttcgtcaccaaccggSEQIDNo.17與人βrAR的EC11表位同源的氨基酸序列(18AA；Cys3—Ser3)；環(huán)化可發(fā)生在Lys1禾口Pro18間Lys-Cys-Ser-Asp-Phe-Val-Gln-Ala-Asp-Glu-Ala-Arg-Arg-Cys-Tyr-Asn-Asp-ProSEQIDNo.18與人βrAR的EC11表位同源的氨基酸序列(25AA；Cys3—Ser3)；環(huán)化可發(fā)生在Lys1禾口Pro25間Lys-Cys-Ser-Asp-Phe-Val-Thr-Asn-Arg-Gln-Ala-Arg-Ala-Glu-Ser-Asp-Glu-AIa-Arg-Arg-Cys-Tyr-Asn-Asp-ProSEQIDNo.19與人βrAR的EC11表位同源的氨基酸序列(18AA；Cys3—Ser3；Gln7—DGlu7)；環(huán)化可發(fā)生在Lys1和Pro18間Lys-Cys-Ser-Asp-Phe-Val-DGlu-Ala-Asp-Glu-Ala-Arg-Arg-Cys-Tyr-Asn-Asp-ProSEQIDNo.20與人β「AR的EC11表位同源的氨基酸序列(25ΑΑ；Cys3—Ser3；Gln10—DGlu10)；環(huán)化可發(fā)生在Lys1和Pro25間Lys-Cys-Ser-Asp-Phe-Val-Thr-Asn-Arg-DGlu-Ala-Arg-Ala-Glu-Ser-Asp-Glu-Ala-Arg-Arg-Cys-Tyr-Asn-Asp-ProSEQIDNo.21與人β「AR的EC11表位同源的氨基酸序列(18Α?。籆ys2—Ser2)；環(huán)化可發(fā)生在Lys1禾口Pro18間Lys-Ser-Cys-Asp-Phe-Val-Gln-Ala-Asp-Glu-Ala-Arg-Arg-Cys-Tyr-Asn-Asp-ProSEQIDNo.22與人βrAR的EC11表位(25AA；Cys2—Ser2)同源的氨基酸序列；環(huán)化可發(fā)生在Lys1禾口Pro25間Lys-Ser-Cys-Asp-Phe-Val-Thr-Asn-Arg-Gln-Ala-Arg-Ala-Glu-Ser-Asp-Glu-AIa-Arg-Arg-Cys-Tyr-Asn-Asp-ProSEQIDNo.23與人βrAR的EC11表位同源的氨基酸序列(18AA；Cys2—Ser2；Gln7—DGlu7)；環(huán)化可發(fā)生在Lys1和Pro18間Lys-Ser-Cys-Asp-Phe-Val-DGlu-Ala-Asp-Glu-Ala-Arg-Arg-Cys-Tyr-Asn-Asp-ProSEQIDNo.24與人β「AR的EC11表位同源的氨基酸序列(25Α??；Cys2—Ser2；Gln10—DGlu10)；環(huán)化可發(fā)生在Lys1和Pro25間Lys-Ser-Cys-Asp-Phe-Val-Thr-Asn-Arg-DGlu-Ala-Arg-Ala-Glu-Ser-Asp-Glu-Ala-Arg-Arg-Cys-Tyr-Asn-Asp-ProSEQIDNo.25編碼與人βrAR的EC11表位同源的氨基酸序列(18AA；Cys3—Ser3)的核苷酸序列aagtgcSERgacttcgtcCargCngacgaggcgcgccgctgctacaacgaccccSEQIDNo.26編碼與人βrAR的EC11表位同源的氨基酸序列(25AA；Cys3—Ser3)的核苷酸序列aagtgCSERgacttcgtcaccaaccggCargCHcgggcggagagcgacgaggcgcgccgctgctacaacgaccccSEQIDNo.27編碼與人βfAR的EC11表位同源的氨基酸序列(18AA；Cys3-Ser3；Gln7-DGlu7)的核苷酸序列aagtgCSERgacttcgtcgargcngacgaggcgcgccgctgctacaacgaccccSEQIDNo.28編碼與人βrAR的EC11表位同源的氨基酸序列(25AA；Cys3—Ser3；Gln10—DGlu10)的核苷酸序列aagtgCSERgacttcgtcaccaaccgggargcncgggcggagagcgacgaggcgcgccgctgctacaacgaccccSEQIDNo.29編碼與人βrAR的EC11表位同源的氨基酸序列(18AA；Cys2—Ser2)的核苷酸序列aagSERtgCgacttcgtcCargCngacgaggcgcgccgctgctacaacgaccccSEQIDNo.30編碼與人βrAR的EC11表位(25AA；Cys2—Ser2)同源的氨基酸序列的核苷酸序列aagSERtgCgacttcgtcaccaaccggCargCncgggcggagagcgacgaggcgcgccgctgctacaacgaccccSEQIDNo.31編碼與人βrAR的EC11表位(18AA；Cys2—Ser2；Gln7—DGlu7)同源的氨基酸序列的核苷酸序列aagSERtgCgacttcgtcgargCllgacgaggcgcgccgctgctacaacgaccccSEQIDNo.32編碼與人βrAR的EC11表位同源的氨基酸序列(25AA；Cys2—Ser2；Gln10—DGlu10)的核苷酸序列aagSERtgCgacttcgtcaccaaccggg^rgCIlcgggcggagagcgacgaggcgcgccgctgctacaacgaccccSEQIDNo.33人βrAR的EC11表位攜帶部分的氨基酸序列(16AA；204到219位AA)DEARRCYNDPKCCDFVSEQIDNo.34人βfAR的EC11表位攜帶部分的氨基酸序列(23AA；200到222位AA)RAESDEARRCYNDPKCCDFVTNRSEQIDNo.35人βfAR的EC11表位的氨基酸序列DEARRSEQIDNo.36人β「AR的EC11表位(攜帶部分)的氨基酸序列RAESDEARRSEQIDNo.37人βrAR的EC11表位的氨基酸序列DFVSEQIDNo.38人βrAR的EC11表位的氨基酸序列DFVTNRSEQIDNo.39與人βfAR的EC11表位同源的氨基酸序列(16AA；Cys11—Ser11；N末端AA=Gln16或DGlu16)；環(huán)化可發(fā)生在Ala1和Gln16/DGlu16間Ala-Arg-Arg-Cys-Tyr-Asn-Asp-Pro-Lys-Cys-Ser-Asp-Phe-Val-Tyr-Gln/DGluSEQIDNo.40Ai^1-AR的氨基酸序列1mgagvlvlgasepgnlssaaplpdgaataarllvpasppasllppasespeplsqqwtag61mgllmalivllivagnvlvivaiaktprlqtltnlfimslasadlvmgllvvpfgativv121wgrweygsffcelwtsvdvlcvtasietlcvialdrylaitspfryqslltrararglvc181tvwaisalvsflpilmhwwraesdearrcyndpkccdfvtnrayaiassvvsfyvplcim241afvylrvfreaqkqvkkidscerrflggparppspspspvpapapppgpprpaaaaatap301langragkrrpsrlvalreqkalktlgiimgvftlcwlpfflanvvkafhrelvpdrlfv361ffnwlgyansafnpiiycrspdfrkafqgllccarraarrrhathgdrprasgclarpgp421ppspgaasddddddvvgatpparllepwagcnggaaadsdssldepcrpgfaseskvSEQIDNo.41與人βfAR的EC11表位同源的氨基酸序列(22AA；Cys17—Ser17)；環(huán)化可發(fā)生在Arg1和Gly22間Arg-Ala-Glu-Ser-Asp-Glu-Ala-Arg-Arg-Cys-Tyr-Asn-Asp-Pro-Lys-Cys-Ser-Asp-Phe-Val-Thr-GlySEQIDNo.42編碼與人βfAR的EC11表位同源的氨基酸序列(22AA；Cys17—Ser17)的核苷酸序列CgggcggagagcgacgaggcgcgccgctgctacaacgaccccaagtgcSER.gacttcgtcaccGLYSEQIDNo.43與人βrAR的EC11表位(22AA；Cys3—Ser3)同源的氨基酸序列；環(huán)化可發(fā)生在Lys1禾口Pro22間Lys-Cys-Ser-Asp-Phe-Val-Thr-Gly-Arg-Ala-Glu-Ser-Asp-Glu-Ala-Arg-Arg-Cys-Tyr-Asn-Asp-ProSEQIDNo.44編碼與人βrAR的EC11表位同源的氨基酸序列(22AA；Cys3—Ser3)的核苷酸序列aagtgCSERgacttcgtcaccGLYCgggcggagagcgacgaggcgcgccgctgctacaacgaccCCSEQIDNo.45人β「AR的EC11表位(攜帶部分)的氨基酸序列DEARRCYNDPKSEQIDNo.46人β「AR的EC11表位(攜帶部分)的氨基酸序列ESDEARRCYNDPKSEQIDNo.47人βrAR的EC11表位的氨基酸序列AESDEARRSEQIDNo.48人βrAR的EC11表位的氨基酸序列DFVTSEQIDNo.49編碼與人βrAR的EC11表位同源的氨基酸序列(19AA；Cys15—Ser15(18AA；Cys14-Ser14))的核苷酸序列g(shù)CIlagcgacgaggcgcgccgctgctacaacgaccccaagtgcSERgacttcgtccarSEQIDNo.50編碼與人βrAR的EC11表位同源的氨基酸序列(19AA；Cys15—Ser15(18AA；Cys14—Ser14)；Gln18—DGlu18)的核苷酸序列g(shù)CllagcgacgaggcgcgccgctgctacaacgaccccaagtgCSERgacttcgtcξΒΓSEQIDNo.51編碼與人P1-AR的EC11表位同源的氨基酸序列(19ΑΑ;Cys14—Ser14(18Α?。籆ys13-Ser13))的核苷酸序列g(shù)CllagcgacgaggcgcgccgctgctacaacgaccccaagSERtgCgacttcgtccarSEQIDNo.52編碼與人βrAR的EC11表位同源的氨基酸序列(19AA；Cys14—Ser14(18AA；Cys13—Ser13)；Gln18—DGlu18)的核苷酸序列g(shù)CHagcgacgaggcgcgccgctgctacaacgaccccaagSERtgCgacttcgtcgarSEQIDNo.53編碼與人βrAR的EC11表位同源的氨基酸序列(19AA；Cys3—Ser3(18AA；Cys3-Ser3))的核苷酸序列aagtgCSERgacttcgtcCargCHagcgacgaggcgcgccgctgctacaacgaccccSEQIDNo.54編碼與人βrAR的EC11表位同源的氨基酸序列(19AA；Cys3—Ser3(18AA；Cys3—Ser3)；Gln7—DGlu7)的核苷酸序列aagtgCSERgacttcgtcgargcnagcgacgaggcgcgccgctgctacaacgaccccSEQIDNo.55編碼與人βrAR的EC11表位同源的氨基酸序列(19AA；Cys2—Ser2(18AA；Cys2-Ser2))的核苷酸序列aagSERtgCgacttcgtcCargCUagcgacgaggcgcgccgctgctacaacgaccccSEQIDNo.56編碼與人βrAR的EC11表位同源的氨基酸序列(19AA；Cys2—Ser2(18AA；Cys2—Ser2)；Gln7—DGlu7)的核苷酸序列aagSERtgCgacttcgtcgargcnagcgacgaggcgcgccgctgctacaacgacccc在核苷酸序列中，“SER”代表編碼Ser(絲氨酸)的任一核苷酸三聯(lián)體，即ten或agy；“GLY”代表編碼Gly(甘氨酸)的任一核苷酸三聯(lián)體，即ggn。η代表任一核苷酸，特別地a、c、g或t，y代表t或c以及r代表a或g。如本文所使用的，各種肽的序列的顯示自N末端到C末端，從而N末端在相應(yīng)描述的氨基酸序列的左側(cè)且C末端在相應(yīng)描述的氨基酸序列的右側(cè)。下面為本文使用的其它的縮寫詞氨基酸3-字母代碼1-字母代碼丙氨酸AlaA精氨酸ArgR天冬酰胺AsnN天冬氨酸AspD半胱氨酸CysC谷氨酸GluE谷氨酰胺GlnQ甘氨酸GlyG組氨酸HisH異亮氨酸lieI亮氨酸LeuL賴氨酸LysK甲硫氨酸MetM苯丙氨酸PheF脯氨酸ProP絲氨酸SerS蘇氨酸ThrT色氨酸TrpW酪氨酸TyrY纈氨酸ValV天冬酰胺或天冬氨酸AsxB谷氨酰胺或谷氨酸GlxZ亮氨酸或異亮氨酸XleJ未指明的或未知的氨基酸XaaX另外引用的參考文獻(xiàn)American,Heart,Association2007.Dallas；Heartdiseaseandstrokestatistics-2007update(心臟疾病和中風(fēng)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)-2007年修正).Circulation115:e69_el71Anderton2001Immunology104:367_376Baba2004Eur.HeartJ.25:1108—1115Boivin2005Eur.J.HeartFail.4，suppl.124(104)Caforio2002Eur.J.HeartFail.4:411_417Chiale2001Circulation103:1765-1771Chien2000Oncol.279~17Christ2001J.Mol.Cell.Cardiol.33:1515_1525Christ2006J.Mol.CellCardiol.41:716_723Elies1996J.Immunol.157:4203_4211Engelhardt1999Proc.Natl.Acad.Sci.USA96:7059_7064Eriksson2003Nat.Med.91484-1490Fabrizio1994DrugsTher.889-94Felix2000J.Am.Coll.Cardiol.35:1590_1598Ferrari1995J.Exp.Med.18259-65Freedman2004J.Clin.Invest.113:1379—1382Fu1993J.Clin.Invest.91:1964-1968Goser2006Circulation114:1693—1702Hershko2005Ann.N.Y.Acad.Sci.1051:635_646Hoebeke1996Int.J.Cardiol.54:103—111Iwata2001aJ.Am.Coll.Cardiol.37:418_424Iwata2001bCirc.Res.88:578_586Jahns1996Eur.J.Pharmacol.316111-121Jahns1999aJ.Am.Coll.Cardiol.34:1545_1551Jahns1999bCirculation99:649_654Jahns2000J.Am.Coll.Cardiol.36:1280—1287Jahns2004J.Clin.Invest.113:1419_1429Jahns2006TrendsCardiovascMed1620~24Khoynezhad2007Eur.J.HeartFail.9:120_123Kuhl2005Circulation112:1965-1970Li2006177=8234-8240Limas1992Am.HeartJ.123:967_970Limas1996Int.J.Cardiol.54:113—116Limas1997Circulation951979-1980Limas2004Am.J.Cardiol.93:1189-1191Lohse2003Circ.Res.93:896_906Luppi1998Circulation98-.777-785MacLellan2003Nat.Med.9:1455—1456Maekawa2007Circulation115:5—8Magnusson1994Circulation89:2760_2767Magnusson1996Int.J.Cardiol.54:137-141Mahrholdt2006Circulation114:1581—1590Matsui1995Autoimmunity2185-88Matsui2001Autoimmunity43:217_220Mobini2004AutoimmunityRev.3:277_284Morita2005J.Clin.Invest.115:518_526Neumann1990J.Am.Coll.Cardiol.16:839_846Nikolaev2007J.Am.Coll.Cardiol.50:423_431Okazaki2003Nat.Med.91477-1483Okazaki2005TrendsMolMed11-.322-326Pohlner1997Am.J.Cardiol.80:1040-1045Rose1993Immunol.Today14:426_430Rose2001J.Clin.Invest.107:943_944Schultheiss1985J.Mol.CellCardiol.17:603_617Schultheiss1988J.Exp.Med.168:2102_2109Schulze1999Cardiovasc.Res.44:91_100Sewald2002Peptides=ChemistryandBiology,ffilley-VCH.Smulski2006FASEBJ.20:1396-1406Stork2006Am.HeartJ.152:697-704Wallukat1995J.Mol.CellCardiol.27:397_406Wallukat2002N.Engl.J.Med.3471806Wang1996BloodPressure3:25_27Witebsky1957J.Am.Med.Assoc.1641439-1447Woodiwiss2001Circulation103:155-160權(quán)利要求式I的環(huán)狀肽環(huán)(x-xh-Cys-x-xa-xb-xc-x-Cys-y-xi-x)(I)，其中a)X為除Cys以外的氨基酸；b)h為1至15的任一整數(shù)；c)i為0至14的任一整數(shù)；d)xa，xb和xc的一個(gè)為Pro；e)y為除Cys以外的氨基酸；和f)所述環(huán)狀肽由至少16個(gè)且最多25個(gè)氨基酸組成。2.如權(quán)利要求1所述的環(huán)狀肽，其中所述肽e)能夠結(jié)合抗3r腎上腺素受體(0fAR)的ECh環(huán)的(自身)抗體；f)能夠抑制3「AR與抗3rAR的ECn環(huán)的(自身)抗體之間的相互作用；g)模擬在0rAR的ECn環(huán)的天然構(gòu)象中呈現(xiàn)的一個(gè)或多個(gè)表位；和/或h)能夠降低抗體介導(dǎo)的h-AR的活化。3.如權(quán)利要求1或2所述的環(huán)狀肽，其中y單獨(dú)地和獨(dú)立地選自極性氨基酸。4.如權(quán)利要求1至3中任一權(quán)利要求所述的環(huán)狀肽，其中y為絲氨酸或絲氨酸類似物。5.如權(quán)利要求1至4中任一權(quán)利要求所述的環(huán)狀肽，其中h為5，8或9。6.如權(quán)利要求1至5中任一權(quán)利要求所述的環(huán)狀肽，其中i為3，4或6。7.如權(quán)利要求1至6中任一權(quán)利要求所述的環(huán)狀肽，其為式I'或I"的環(huán)狀肽環(huán)(xI-xh-Cys-x-xa-xb-xc-x-Cys-y-xi-x)(I‘)；環(huán)(xIII-xh-Cys-x-xa-xb-xc-x-Cys-y-xi-x)(I“)，其中xx為Ala，Gly，Val，Thr或Ser，且xni為Argo8.如權(quán)利要求1至7中任一權(quán)利要求所述的環(huán)狀肽，其為式I"‘或I"“的環(huán)狀肽環(huán)(xI-xh-Cys-x-xa-xb-xc-x-Cys-y-xi-xII)(I“‘)；環(huán)(xIII-xh-Cys-x-xa-xb-xc-x-Cys-y-xi-xIV)(I““),其中xn為Gln，Glu，Asp或Asn，并且xIV為Gly或Gly類似物。9.如權(quán)利要求7或8所述的環(huán)狀肽，其中\(zhòng)為Ala。10.如權(quán)利要求7至9中任一權(quán)利要求所述的環(huán)狀肽，其中xn為Gin或Glu。11.如權(quán)利要求7至10中任一權(quán)利要求所述的環(huán)狀肽，其中xn為DGlu。12.如權(quán)利要求1至11中任一權(quán)利要求所述的環(huán)狀肽，其中f為Pro。13.如權(quán)利要求1至12中任一權(quán)利要求所述的環(huán)狀肽，其中xb為酸性氨基酸。14.如權(quán)利要求1至13中任一權(quán)利要求所述的環(huán)狀肽，其中y不是Pro和/或除xa，xb或xc外的x不是Pro。15.如權(quán)利要求1至14中任一權(quán)利要求所述的環(huán)狀肽，其為式II，III或III'的環(huán)狀肽環(huán)(xI-x1-x1-x-x2-x2-Cys-x-xa-xb-xc-x-Cys-y-xi-xII)(II)；環(huán)(xI-x2-x-x1-x-x1-x1-x-x2-x2-Cys-x-xa-xb-xc-x-Cys-y-xi-xII)(III)；環(huán)(xiii,2_x_xi_x_xi_xi_x_x2_x2_Cys-x-xa-xb-xc-x-Cys-y-xi-xIV)(III')其中a)X1單獨(dú)地和獨(dú)立地選自酸性氨基酸；和/或b)x2單獨(dú)地和獨(dú)立地選自堿性氨基酸。16.如權(quán)利要求1至15中任一權(quán)利要求所述的環(huán)狀肽，其為式IV，V或V'的環(huán)狀肽環(huán)(X1-X1-X1-X4-X2-X2-Cys-X3-Xa5-Xb-Xc-X2-Cys-Y-X1-X3-X3-X11)(IV)；環(huán)(X1-X2-X4-X1-X4-X1-X1-X4-X2-X2-Cys-X3-Xa5-Xb-Xc-X2-Cys-Y-X1-X3-X3-X4-X5-X2-X11)(V)；環(huán)(xIiuWWH-Cys-X3-Xa5-Xb-Xc-X2-Cys-Y-X1-X3-X3-X4-X1v)(V,)，其中a)X1單獨(dú)地和獨(dú)立地選自酸性氨基酸；b)x2單獨(dú)地和獨(dú)立地選自堿性氨基酸；c)X3單獨(dú)地和獨(dú)立地選自Leu，lie，Val，Met,Trp,Tyr和Phe；d)X4單獨(dú)地和獨(dú)立地選自Ser，Thr，Ala和Gly；和/或e)X5單獨(dú)地和獨(dú)立地選自Gln和Asn。17.如權(quán)利要求1至16中任一權(quán)利要求所述的環(huán)狀肽，其包含如下的氨基酸片段Asp-Xxx1-Xxx4-Arg-Arg-Cys-Xxx3-Asn-Asp-Pro-Lys；或Glu-Ser-Asp-Xxx1-Xxx4-Arg-Arg-Cys-Xxx3-Asn-Asp-Pro-Lys,其中Xxx1如權(quán)利要求la)、15a)和16a)中任一項(xiàng)所定義的，Xxx3如權(quán)利要求la)或16c)所定義的，和/或Xxx4如權(quán)利要求la)或16d)所定義的。18.如權(quán)利要求1至17中任一權(quán)利要求所述的環(huán)狀肽，其包含如下的氨基酸片段Asp-Glu-Ala-Arg-Arg-Cys-Tyr-Asn-Asp-Pro-Lys；或Glu-Ser-Asp-Glu-Ala-Arg-Arg-Cys-Tyr-Asn-Asp-Pro-Lysο19.如權(quán)利要求1至18中任一權(quán)利要求所述的環(huán)狀肽，其為選自如下的環(huán)狀肽a)由如SEQIDNO.41，43，1-4和17-20的任一個(gè)所示的氨基酸序列形成或可形成的環(huán)狀肽；b)由如SEQIDNO.42，44，9-12，25-28，49，50，53和54的任一個(gè)所示的核苷酸序列編碼的氨基酸序列形成或可形成的環(huán)狀肽；c)由核苷酸序列編碼的氨基酸序列形成或可形成的環(huán)狀肽，所述核苷酸序列由于遺傳密碼的簡并性而不同于SEQIDNO.42，44，9-12，25-28，49，50，53和54的任一個(gè)所示的核苷酸序列；以及d)式VI到IX'中任一個(gè)的環(huán)狀肽環(huán)(Arg-Ala-Glu-Ser-Asp-Glu-Ala-Arg-Arg-Cys-Tyr-Asn-Asp-Pro-Lys-Cys-Ser-Asp-Phe-Val-Thr-Gly)(IX')；環(huán)(Ala-Asp-Glu-Ala-Arg-Arg-Cys-Tyr-Asn-Asp-Pro-Lys-Cys-Ser-Asp-Phe-Val-Gln)(VI)；環(huán)(Ala-Arg-Ala-Glu-Ser-Asp-Glu-Ala-Arg-Arg-Cys-Tyr-Asn-Asp-Pro-Lys-Cys-Ser-Asp-Phe-Val-Thr-Asn-Arg-Gln)(VII)；環(huán)(Ala-Asp-Glu-Ala-Arg-Arg-Cys-Tyr-Asn-Asp-Pro-Lys-Cys-Ser-Asp-Phe-Val-DGlu)(VIII)；環(huán)(Ala-Arg-Ala-Glu-Ser-Asp-Glu-Ala-Arg-Arg-Cys-Tyr-Asn-Asp-Pro-Lys-Cys-Ser-Asp-Phe-Val-Thr-Asn-Arg-DGlu)(IX)。20.如權(quán)利要求19所述的環(huán)狀肽，其中至少一個(gè)酸性氨基酸被選自酸性氨基酸的不同的氨基酸所取代。21.如權(quán)利要求19或20所述的環(huán)狀肽，其中至少一個(gè)堿性氨基酸被選自堿性氨基酸的不同的氨基酸所取代。22.如權(quán)利要求19至21中任一權(quán)利要求所述的環(huán)狀肽，其中至少一個(gè)脂肪族氨基酸殘基被選自脂肪族氨基酸的不同的氨基酸所取代。23.如權(quán)利要求1至22中任一權(quán)利要求所述的環(huán)狀肽，其中環(huán)化通過至少一個(gè)共價(jià)結(jié)合的鍵發(fā)生，所述鍵選自S-S鍵、肽鍵、碳鍵諸如C-C或C=C、酯鍵、醚鍵、偶氮鍵、C-S-C鍵、C-N-C鍵和C=N-C鍵。24.如權(quán)利要求1至23中任一權(quán)利要求所述的環(huán)狀肽，其中環(huán)化通過至少兩個(gè)為S-S鍵和肽鍵的鍵發(fā)生。25.如權(quán)利要求23或24所述的環(huán)狀肽，其中所述S-S鍵通過所述肽的兩個(gè)半胱氨酸殘基形成。26.如權(quán)利要求23-25中任一權(quán)利要求所述的環(huán)狀肽，其中所述肽鍵通過N末端氨基酸的NH2基團(tuán)和C末端氨基酸的COOH基團(tuán)形成。27.如權(quán)利要求23-26中任一權(quán)利要求所述的環(huán)狀肽，其中附加的鍵通過組成氨基酸的NH2基團(tuán)和COOH基團(tuán)的側(cè)鏈形成。28.編碼如權(quán)利要求1至27中任一權(quán)利要求所述的環(huán)狀肽的氨基酸主鏈的核酸分子。29.如權(quán)利要求28所述的核酸分子，其包含在SEQIDNO.9_12，25-28，42和44任一個(gè)中所描述的核苷酸序列或由于遺傳密碼的簡并性而與之不同的核苷酸序列。30.載體，包含權(quán)利要求28或29所述的核酸分子。31.重組宿主細(xì)胞，包含權(quán)利要求28或29所述的核酸分子或權(quán)利要求30所述的載體。32.生產(chǎn)權(quán)利要求1至27中任一權(quán)利要求所述的環(huán)狀肽的方法，包含以下步驟a)(i)在使權(quán)利要求1至27中任一項(xiàng)所述的多肽的氨基酸主鏈表達(dá)的條件下，培養(yǎng)權(quán)利要求31所述的重組宿主細(xì)胞，并回收所述氨基酸主鏈；或()化學(xué)合成權(quán)利要求1至27中任一項(xiàng)所述的多肽的氨基酸主鏈；以及b)使所述氨基酸主鏈環(huán)化以形成權(quán)利要求1至27中任一項(xiàng)所述的環(huán)狀肽。33.如權(quán)利要求32所述的方法，其中所述環(huán)化如權(quán)利要求23至27中任一權(quán)利要求所定義的。34.如權(quán)利要求33所述的方法，其中分別地所述N末端氨基酸為Ala或Arg，且所述C末端氨基酸為Gln或Glu或Gly，或者所述N末端氨基酸為Lys，且所述C末端氨基酸為Pro。35.如權(quán)利要求31所述的方法，其中Glu為DGlu。36.通過權(quán)利要求32至35中任一權(quán)利要求所述的方法可獲得的環(huán)狀肽。37.組合物，其包含權(quán)利要求1-27和36中任一權(quán)利要求的環(huán)狀肽、權(quán)利要求28或29的核酸分子、權(quán)利要求30的載體或權(quán)利要求31的重組宿主細(xì)胞，以及任選的載體。38.如權(quán)利要求37所述的組合物，其中所述組合物為藥物組合物，且所述載體為藥物可接受的載體。39.方法，其用于a)治療、改善或預(yù)防β腎上腺素受體(β-AR)活性增強(qiáng)的疾??；b)治療具有抗β-AR的抗體的患者；或c)誘導(dǎo)免疫耐受，所述方法包括下述步驟給予需要這種醫(yī)療干預(yù)的患者藥物活性量的權(quán)利要求1至27和36中任一項(xiàng)所述的環(huán)狀肽和/或權(quán)利要求38所述的藥物組合物以及任選的藥物可接受的載體。40.如權(quán)利要求1至27和36中任一權(quán)利要求所述的環(huán)狀肽或權(quán)利要求38所述的藥物組合物，以及任選的藥物可接受的載體，其用于a)治療、改善或預(yù)防β-AR活性增強(qiáng)的疾?。籦)治療具有抗β-AR抗體的患者；或c)誘導(dǎo)免疫耐受。41.如權(quán)利要求38至40中任一權(quán)利要求所述的藥物組合物、方法或環(huán)狀肽，其中所述環(huán)狀肽與至少一種另外的藥物活性劑一起給藥，或者所述藥物組合物包含至少一種另外的藥物活性劑。42.如權(quán)利要求41所述的藥物組合物、方法或環(huán)狀肽，其中所述至少一種另外的藥物活性劑為受體阻斷劑。43.如權(quán)利要求42所述的藥物組合物、方法或環(huán)狀肽，其中所述β-受體阻斷劑為選擇性β-AR阻斷劑。44.如權(quán)利要求43所述的藥物組合物、方法或環(huán)狀肽，其中所述選擇性β-AR阻斷劑為阿替洛爾、美托洛爾、奈比洛爾和比索洛爾。45.如權(quán)利要求39至44中任一權(quán)利要求所述的方法、環(huán)狀肽或藥物組合物，其中所述β腎上腺素受體活性增強(qiáng)的疾病為心臟疾病，或者其中所述患者患有心臟疾病。46.如權(quán)利要求45所述的方法或環(huán)狀肽或藥物組合物，其中所述心臟疾病選自感染性和非感染性心臟疾病、缺血性和非缺血性心臟疾病、炎癥性心臟疾病和心肌炎、心臟擴(kuò)張、特發(fā)性心肌病、(特發(fā)性)擴(kuò)張性心肌病(DCM)、免疫性心肌病、心力衰竭和包括室性和/或室上性過早奪獲搏動及包括心房纖顫和/或心房撲動在內(nèi)的任一房性心律失常的任一心律失常。47.如權(quán)利要求45或46所述的方法或環(huán)狀肽或藥物組合物，其中所述心臟疾病為(特發(fā)性)DCM。48.如權(quán)利要求39到47中任一權(quán)利要求所述的方法、環(huán)狀肽或藥物組合物，其中所述疾病由抗β-AR的抗體誘發(fā)。49.如權(quán)利要求39到44中任一權(quán)利要求所述的方法、環(huán)狀肽或藥物組合物，其中通過抑制抗β-AR抗體的產(chǎn)生獲得所述免疫耐受的誘導(dǎo)。50.如權(quán)利要求49所述的方法、環(huán)狀肽或藥物組合物，其中通過憑借產(chǎn)生抗體的早期B細(xì)胞和記憶B細(xì)胞的抗原識別位點(diǎn)的阻斷來抑制抗β-AR抗體的產(chǎn)生而獲得所述免疫耐受的誘導(dǎo)。51.如權(quán)利要求39至50中任一權(quán)利要求所述的方法、環(huán)狀肽或藥物組合物，其中所述環(huán)狀肽或所述藥物組合物以達(dá)到每kg體重至少0.05mg所述環(huán)狀肽給藥。52.檢測(樣品中)抗β-AR抗體的方法，包含將權(quán)利要求1-27和36中任一權(quán)利要求所述的環(huán)狀肽與待檢測的所述抗體接觸的步驟。53.權(quán)利要求39至52中任一權(quán)利要求所述的方法、環(huán)狀肽或藥物組合物，其中所述β-AR%β「ARο全文摘要本發(fā)明涉及新的β-腎上腺素受體同源性環(huán)肽-突變體，其包含能形成分子內(nèi)鍵的僅兩個(gè)半胱氨酸殘基，涉及能形成這些環(huán)肽-突變體的線性肽以及涉及編碼這些環(huán)肽-突變體和線性肽的核酸分子。而且，提供了包含上述的核酸分子的載體和重組體宿主細(xì)胞和產(chǎn)生公開的環(huán)肽-突變體的方法。還提供了包含本發(fā)明的肽、核酸分子、載體或宿主細(xì)胞的組合物。本發(fā)明也涉及利用本發(fā)明肽的治療和診斷的手段、方法和用途以及涉及用于檢測類似抗-β1-腎上腺素受體抗體的抗-β-腎上腺素受體抗體的手段、方法和用途。文檔編號A61K38/12GK101835793SQ200880112623公開日2010年9月15日申請日期2008年8月22日優(yōu)先權(quán)日2007年8月24日發(fā)明者瓦勒瑞·耶恩斯,維亞徹斯拉韋·尼科萊維,羅蘭·耶恩斯,馬丁·羅瑟申請人:烏利班-馬克西姆利安大學(xué)