專利名稱：具有免疫調(diào)節(jié)活性、抗炎活性和抗病毒活性的肽和肽模仿物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及肽和肽模仿物(peptidomimetic)，其具有免疫調(diào)節(jié)活性、抗炎活性和抗病毒活性，特別是抗-HIV活性。本發(fā)明包括細(xì)胞周期G2-關(guān)卡-廢除肽(abrogating_peptide)和肽模仿物作為免疫調(diào)節(jié)劑、抗炎劑和抗病毒劑，特別是抗-HIV劑的用途。
背景使用基于表型的篩選，已經(jīng)開發(fā)了細(xì)胞周期-G2-關(guān)卡-廢除肽，以鑒別出能選擇性地廢除G2關(guān)卡的化合物，如美國申請(qǐng)系列號(hào)10/347,145所述，其完整內(nèi)容在這里引作參考。已經(jīng)證實(shí)，各種CBP化合物抑制參與細(xì)胞周期G2關(guān)卡的許多激酶地磷酸化活性，并結(jié)合參與細(xì)胞周期G2關(guān)卡信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑和多種其它胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的14-3-3蛋白。G2細(xì)胞周期停滯、激酶和14-3-3蛋白參與廣泛種類的其它生物學(xué)過程，包括免疫反應(yīng)、炎癥和病毒感染。
發(fā)明概述本發(fā)明提供了具有免疫調(diào)節(jié)活性和/或抗炎活性和/或抗病毒活性的化合物，其中本發(fā)明的化合物包含肽和肽模仿物。本發(fā)明還提供了使用本發(fā)明的免疫調(diào)節(jié)的和/或抗炎的和/或抗病毒的化合物的方法。
本發(fā)明提供了通過施用足以抑制疾病的量的G2-關(guān)卡-廢除肽或肽模仿物，來治療特征在于免疫障礙或炎性反應(yīng)的疾病的方法。本發(fā)明的化合物可以用于治療特征在于免疫障礙或炎性反應(yīng)疾病的疾病，例如，炎癥、關(guān)節(jié)炎、自身免疫病、膠原病、變態(tài)反應(yīng)、哮喘或特應(yīng)性。例如，這些化合物可以用于治療患有或處于患有炎癥、關(guān)節(jié)炎、自身免疫病、膠原病、變態(tài)反應(yīng)、哮喘、花粉病或特應(yīng)性的危險(xiǎn)中的受試者，包括哺乳動(dòng)物，例如人。
本發(fā)明的方法提供了通過施用足以抑制疾病和/或病毒感染的量的G2-關(guān)卡-廢除肽或肽模仿物，來治療由病毒感染造成的疾病的方法。本發(fā)明的化合物可以用于治療由病毒感染造成的疾病，尤其是由慢病毒、特別是HIV造成的疾病。例如，這些化合物可以用于治療患有或處于患有下述疾病的危險(xiǎn)中的受試者，包括哺乳動(dòng)物，例如人病毒感染，特別是慢病毒感染，更特別是HIV感染，且甚至更特別是HIV_AIDS。
附圖描述

圖1顯示了通過施用濃度范圍為0.3125μg/ml_CBP501至80μg/ml_CBP501的CBP501(SEQ_ID_NO80)，對(duì)外周血單核細(xì)胞(PBMC)中的HIV-1的WeJo株復(fù)制的抑制；圖1A顯示了表格形式的結(jié)果，圖1B顯示了圖形形式的結(jié)果。
圖2顯示了通過施用濃度范圍為0.3125μg/ml_CBP501至80μg/ml_CBP501的CBP501(SEQ_ID_NO80)，對(duì)人巨噬細(xì)胞中的Ba-L株HIV-1復(fù)制的抑制；圖2A顯示了表格形式的結(jié)果，圖2B顯示了圖形形式的結(jié)果。
表1顯示了腹膜內(nèi)施用CBP501對(duì)大鼠被動(dòng)皮膚過敏癥(PCA)的影響。
表2顯示了腹膜內(nèi)施用CBP501對(duì)佐劑誘導(dǎo)的大鼠關(guān)節(jié)炎的發(fā)展的影響。
表3公開了示例性的本發(fā)明的肽和肽模仿物的序列、SEQ_ID_NO和對(duì)應(yīng)的CBP編號(hào)。
發(fā)明詳述本發(fā)明提供了化合物，包括肽和肽模仿物，其可以用于治療特征在于免疫障礙、炎性反應(yīng)和/或病毒感染的疾病，所述疾病包括但不限于，關(guān)節(jié)炎、自身免疫病、膠原病、變態(tài)反應(yīng)、哮喘、花粉病、特應(yīng)性或病毒病。本發(fā)明還提供了使用本發(fā)明的化合物治療特征在于免疫障礙、炎性反應(yīng)和/或病毒感染的疾病的方法，包括但不限于，關(guān)節(jié)炎、自身免疫病、膠原病、變態(tài)反應(yīng)、哮喘、花粉病、特應(yīng)性或病毒病。
本發(fā)明提供了G2細(xì)胞周期關(guān)卡-廢除化合物，其令人驚奇地具有免疫調(diào)節(jié)活性、抗炎活性和抗病毒活性。提供了本發(fā)明的G2關(guān)卡-廢除CBP化合物，尤其是表3中公開的CBP化合物，其中CBP化合物具有免疫調(diào)節(jié)活性、抗炎活性和抗病毒活性。根據(jù)一個(gè)方面，提供了使用本發(fā)明的CBP化合物治療特征在于免疫障礙的疾病的方法。在一個(gè)實(shí)施方案中，提供了使用CBP501(SEQ_ID_NO80)治療特征在于免疫障礙的疾病的方法。根據(jù)另一個(gè)方面，提供了使用本發(fā)明的CBP化合物治療特征在于炎性反應(yīng)的疾病的方法。在一個(gè)實(shí)施方案中，提供了使用化合物CBP501(SEQ_ID_NO80)治療特征在于炎性反應(yīng)的疾病的方法。根據(jù)另一個(gè)方面，提供了使用本發(fā)明的CBP化合物治療特征在于病毒感染的疾病的方法。在一個(gè)實(shí)施方案中，提供了使用化合物CBP501(SEQ_ID_NO80)抑制HIV復(fù)制的方法。
定義下面是本文中使用的縮寫Cha環(huán)己基-丙氨酸Phe-2，3，4，5，6-F在苯丙氨酸(Phe)的苯基殘基的2、3、4、5和6位為氟；PheF5F氟Bpa苯甲?；?苯丙氨酸Nal(2)2-萘基-丙氨?；鵄la(3-Bzt)(3-苯并噻吩基)-丙氨酸Nal(1)1-萘基-丙氨?；鵇ph二苯基-丙氨酸Ala(tBu)叔丁基-丙氨酰基Cys(tBu)叔丁基-半胱氨酸Phe-3，4，5-F在苯丙氨酸(Phe)的苯基的3、4和5位為氟Phe-4CF3在苯丙氨酸(Phe)的苯基殘基的4位為CF3Phe-3Br，4Cl，5Br在苯丙氨酸(Phe)的苯基的3位為溴，在4位為氯，在5位為溴Phe-4Cl在苯丙氨酸(Phe)的苯基的4位為氯P1、P2、P3、P4、P5、P6等或P7、P8、P9、P10、P11、P12等分別是P1、P2、P3、P4、P5、P6等；或P7、P8、P9、P10、P11、P12的鄰接序列。
X1、X2、X3、X4、X5、X6等或X7、X8、X9、X10、X11、X12等分別是X1、X2、X3、X4、X5、X6等；或X7、X8、X9、X10、X11、X12的鄰接序列。
除非另有定義，在本文中使用的所有技術(shù)和科學(xué)術(shù)語都具有與本發(fā)明所屬領(lǐng)域的普通技術(shù)人員的通常理解相同的含義。本文描述了合適的用于實(shí)現(xiàn)或測(cè)試本發(fā)明的方法和材料；應(yīng)當(dāng)明白，與本文所述的這些相似的或等同的方法或材料也可以用于實(shí)現(xiàn)或測(cè)試本發(fā)明，本文引用的所有出版物、專利或其它參考文獻(xiàn)都整體引作參考。在沖突的情況下，以本說明書(包括定義)為準(zhǔn)。
如本文所使用的，單數(shù)形式“一(a)”、“或(or)”、“該(the)”或“是(is)”包含復(fù)數(shù)形式，除非上下文另外清楚地說明。因而，例如，提及一種“化合物”時(shí)包括許多化合物，或提及“一個(gè)殘基”或一個(gè)“氨基酸”時(shí)包括一個(gè)或多個(gè)殘基或氨基酸。
“疾病”或“障礙”指生物正常功能的損傷。如本文所使用的，疾病的特征可以是，例如，免疫障礙、炎性反應(yīng)、病毒感染或任意這些狀況中的組合。
“免疫調(diào)節(jié)”指本發(fā)明的化合物改變(調(diào)節(jié))免疫系統(tǒng)的一個(gè)或多個(gè)方面的能力。免疫系統(tǒng)通過涉及淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和其它抗原呈遞細(xì)胞的細(xì)胞和體液機(jī)制，發(fā)揮保護(hù)生物免受感染和外源抗原的功能，這些細(xì)胞通過多種細(xì)胞-細(xì)胞相互作用和通過加工對(duì)免疫細(xì)胞具有自分泌、旁分泌和內(nèi)分泌作用的可溶因子(包括淋巴因子和抗體)彼此調(diào)節(jié)。
“免疫障礙”指免疫系統(tǒng)的異常機(jī)能。有缺陷的免疫反應(yīng)(例如，HIV_AIDS)或過度活化的免疫反應(yīng)(例如，變態(tài)反應(yīng)、自身免疫障礙)可以造成免疫障礙。免疫障礙可以導(dǎo)致免疫細(xì)胞的無控制的增殖，對(duì)外源抗原或生物的無控制的反應(yīng)(這會(huì)產(chǎn)生變應(yīng)性疾病或炎性疾病)，針對(duì)宿主細(xì)胞的異常免疫反應(yīng)(這會(huì)產(chǎn)生自身免疫器官損傷和機(jī)能障礙)，或免疫反應(yīng)的普遍抑制(這會(huì)產(chǎn)生嚴(yán)重的和復(fù)發(fā)的感染)。
應(yīng)當(dāng)理解，“免疫障礙”指先天免疫系統(tǒng)(先天免疫)和獲得性免疫系統(tǒng)(獲得性免疫)的障礙。先天免疫指早期的防御系統(tǒng)，其依賴于能識(shí)別病原體的共有特征的不變的受體。先天免疫系統(tǒng)提供了抑制外源物質(zhì)的屏障和機(jī)制，尤其是通過巨噬細(xì)胞和嗜中性粒細(xì)胞的作用。認(rèn)為炎性反應(yīng)是先天免疫的一部分。先天免疫系統(tǒng)涉及啟動(dòng)獲得性免疫反應(yīng)和去除已經(jīng)被獲得性免疫反應(yīng)靶向的病原體。但是，許多病原體會(huì)逃避或克服先天免疫，且先天免疫不會(huì)產(chǎn)生免疫記憶。
獲得性免疫指特異性地識(shí)別病原體、并提供加強(qiáng)的針對(duì)再感染的保護(hù)的能力，這是因?yàn)榛跀y帶抗原-特異性的受體的淋巴細(xì)胞的克隆選擇的免疫記憶。隨機(jī)重組可變受體基因片段和不同的可變鏈的配對(duì)的方法，會(huì)產(chǎn)生淋巴細(xì)胞群，其中每個(gè)淋巴細(xì)胞攜帶獨(dú)特的受體，從而形成可以實(shí)際上識(shí)別任何抗原的受體譜。如果淋巴細(xì)胞上的受體是對(duì)普遍存在的自身抗原特異性的，則通過在它的發(fā)育早期遇到抗原來正常地消除該細(xì)胞。當(dāng)先天免疫反應(yīng)不能消除新感染時(shí)，正常地啟動(dòng)獲得性免疫，并將抗原和活化的抗原呈遞細(xì)胞送遞到引流(draining)淋巴組織。當(dāng)再循環(huán)淋巴細(xì)胞在外周淋巴組織中遇到它的特異性的外源抗原時(shí)，會(huì)被誘導(dǎo)增殖，且它的后代然后分化成能消除傳染劑的效應(yīng)細(xì)胞。這些增殖淋巴細(xì)胞的亞群會(huì)分化成記憶細(xì)胞，其能在再次遇到相同的病原體時(shí)迅速對(duì)其作出反應(yīng)。
由受損的或無免疫應(yīng)答的免疫系統(tǒng)造成的免疫障礙會(huì)產(chǎn)生有缺陷的免疫反應(yīng)，這會(huì)使身體容易受到各種病毒、細(xì)菌或真菌的機(jī)會(huì)性感染。免疫缺陷的原因可以包括各種疾病，例如病毒、慢性病或免疫系統(tǒng)病。特征在于受損的免疫系統(tǒng)的疾病包括但不限于HIV_AIDS和嚴(yán)重聯(lián)合免疫缺陷綜合征(SCIDS)。
免疫系統(tǒng)過度反應(yīng)會(huì)造成免疫障礙。該過度反應(yīng)可以是對(duì)一種或多種病原體上的抗原的過度反應(yīng)，或?qū)νǔ?huì)被免疫系統(tǒng)忽略掉的抗原的過度反應(yīng)。特征在于過度活化的免疫系統(tǒng)的疾病包括但不限于關(guān)節(jié)炎、變態(tài)反應(yīng)、哮喘、花粉病、特應(yīng)性和自身免疫病。過敏反應(yīng)是用于指會(huì)導(dǎo)致休克的過度免疫系統(tǒng)反應(yīng)的術(shù)語。
“關(guān)節(jié)炎”指關(guān)節(jié)的炎癥，其可以由尤其是關(guān)節(jié)的磨損和撕裂造成，或由對(duì)結(jié)締組織的自身免疫攻擊造成，或由向變應(yīng)原的暴露造成，例如，佐劑誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎。關(guān)節(jié)炎經(jīng)常與抗體-抗原復(fù)合物在關(guān)節(jié)膜中的沉積和炎性反應(yīng)的激活有關(guān)，或由其啟動(dòng)。有時(shí)，免疫反應(yīng)是由細(xì)胞啟動(dòng)的，而不是由抗體啟動(dòng)的，這時(shí)細(xì)胞可以在關(guān)節(jié)膜中產(chǎn)生沉積物。
“變態(tài)反應(yīng)”指對(duì)通常無害的環(huán)境抗原(變應(yīng)原)的免疫反應(yīng)，其原因是抗原和抗體或通過事先暴露于相同抗原而生成的接觸過抗原的T細(xì)胞的相互作用。變態(tài)反應(yīng)的特征在于免疫和炎癥方面，因?yàn)樽儜B(tài)反應(yīng)是由抗原與抗原-特異性的IgE抗體的結(jié)合觸發(fā)的，所述的IgE抗體結(jié)合在肥大細(xì)胞的高親和力IgE受體上，這會(huì)導(dǎo)致抗原-誘導(dǎo)的肥大細(xì)胞表面上的IgE的交聯(lián)，從而造成大量炎癥介質(zhì)(例如組胺)的釋放。變態(tài)反應(yīng)中的晚期事件包括白三烯、細(xì)胞因子和趨化因子，它們能募集和激活嗜酸性粒細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞。該反應(yīng)的晚期階段可以發(fā)展成慢性炎癥，其特征在于存在效應(yīng)T細(xì)胞和嗜酸性粒細(xì)胞，這在慢性變應(yīng)性哮喘中能最清楚地看到。
“哮喘”指影響支氣管的慢性炎性障礙，通常由變應(yīng)原或污染物觸發(fā)或加重。哮喘的特征在于支氣管的狹窄，產(chǎn)生的癥狀包括但不限于，咳嗽、氣促、喘鳴、粘液的過度生成和胸狹窄。
“特應(yīng)性”指發(fā)展成所謂的“典型的”變應(yīng)性疾病的趨勢(shì)，例如特應(yīng)性皮炎、變應(yīng)性鼻炎(枯草熱)和哮喘，且與生成對(duì)普通變應(yīng)原反應(yīng)的免疫球蛋白E(IgE)的能力有關(guān)。特應(yīng)性的特征一般在于皮膚變態(tài)反應(yīng)，包括但不限于濕疹、蕁麻疹和特應(yīng)性皮炎。特應(yīng)性可以由吸入的變應(yīng)原、食物變應(yīng)原和皮膚接觸變應(yīng)原造成或加重，但是特應(yīng)性的變態(tài)反應(yīng)可能發(fā)生在接觸變應(yīng)原以外的身體區(qū)域。發(fā)現(xiàn)大多數(shù)特應(yīng)性皮炎患者具有至少一個(gè)患有濕疹、哮喘或枯草熱的親屬，暗示著特應(yīng)性的強(qiáng)遺傳的(遺傳的(inherited))組分。特應(yīng)性有時(shí)稱作“反應(yīng)素反應(yīng)”。
“花粉病”、“枯草熱”或“過敏性鼻炎”是指特征在于打噴嚏、發(fā)癢和淚溢、鼻漏和腭和咽喉的灼熱感的變態(tài)反應(yīng)的術(shù)語。經(jīng)常為季節(jié)性的，花粉病一般是由對(duì)空氣傳播的物質(zhì)(例如花粉)的變態(tài)反應(yīng)造成的，且該病有時(shí)會(huì)在暴露于其它變應(yīng)原(該個(gè)體對(duì)其是變態(tài)反應(yīng)的)的個(gè)體中加重。
“自身免疫”指針對(duì)自身抗原的獲得性免疫反應(yīng)。“自身免疫疾病”指一種狀況，其中免疫系統(tǒng)與一般會(huì)被忽略的“自身”抗原發(fā)生反應(yīng)，從而導(dǎo)致正常的身體組織的破壞。認(rèn)為自身免疫障礙是由(至少部分地)類似于變態(tài)反應(yīng)的超敏反應(yīng)造成的，因?yàn)樵?種情況下，免疫系統(tǒng)都與一般會(huì)被忽略的物質(zhì)發(fā)生反應(yīng)。自身免疫障礙包括但不限于橋本甲狀腺炎、惡性貧血、Addison氏病、I型(胰島素依賴型)糖尿病、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、全身性紅斑狼瘡、皮肌炎、Sjogren氏綜合征、紅斑狼瘡、多發(fā)性硬化、重癥肌無力、Reiter氏綜合征和Grave氏病、斑禿、關(guān)節(jié)強(qiáng)硬性脊椎炎、抗磷脂綜合征(antiphospholipidsyndrome)、自體免疫性溶血性貧血、自體免疫性肝炎、自體免疫性內(nèi)耳疾病、自體免疫性淋巴細(xì)胞增生綜合征(ALPS)、自體免疫性血小板減少性紫癜(ATP)、Behcet氏病、大皰性類天皰瘡、心肌病、口炎性腹瀉-皮炎、慢性疲勞綜合征免疫缺陷綜合征(CFIDS)、慢性炎性脫髓鞘多發(fā)性神經(jīng)病、疤痕性類天皰瘡、冷凝集素疾病、CREST綜合征、Crohn氏病、Dego氏病、皮肌炎、皮肌炎、盤狀狼瘡、特發(fā)性混合性冷球蛋白血癥、纖維肌痛(fibromyalgia)-纖維肌炎、Guillain-Barre綜合征、特發(fā)性肺纖維化、特發(fā)性血小板減少癥紫癜(ITP)、IgA腎病、青少年關(guān)節(jié)炎、Meniere爾氏病、混合的結(jié)締組織病、尋常天皰瘡、結(jié)節(jié)性多動(dòng)脈炎、多軟骨炎、polyglancular_syndromes、風(fēng)濕性多肌病、多肌炎、原發(fā)性無丙種球蛋白血癥、原發(fā)性膽汁性肝硬變、牛皮癬、Raynaud氏現(xiàn)象、風(fēng)濕熱、結(jié)節(jié)病、硬皮病、僵體綜合征、大動(dòng)脈炎、顳動(dòng)脈炎/巨細(xì)胞性動(dòng)脈炎、潰瘍性結(jié)腸炎、葡萄膜炎、血管炎、白癲風(fēng)和Wegener氏肉芽腫病。
“膠原病”或“結(jié)締組織病”指一種慢性炎性自身免疫障礙，其中自身抗體會(huì)攻擊見于全身的膠原。結(jié)締組織由2種主要結(jié)構(gòu)性蛋白分子(膠原和彈性蛋白)組成；在膠原病中，由于產(chǎn)生的炎癥，針對(duì)膠原的自身抗體會(huì)破壞膠原和彈性蛋白兩者。膠原病包括但不限于紅斑狼瘡、Sjogren氏綜合征、硬皮病、皮肌炎和結(jié)節(jié)性多動(dòng)脈炎。類風(fēng)濕的-膠原病指影響結(jié)締組織的障礙，“風(fēng)濕病的”癥狀包括肌肉僵硬、關(guān)節(jié)和相關(guān)結(jié)構(gòu)的酸痛和疼痛。
“炎性反應(yīng)”或“炎癥”是由物理損傷、感染或局部免疫反應(yīng)啟動(dòng)的流體、血漿蛋白和白細(xì)胞的局部積累的統(tǒng)稱。炎癥是許多疾病和障礙的一個(gè)方面，包括但不限于與免疫障礙、病毒感染、關(guān)節(jié)炎、自身免疫病、膠原病、變態(tài)反應(yīng)、哮喘、花粉病和特應(yīng)性有關(guān)的疾病。炎癥的特征在于發(fā)紅、痛、灼燒(熱)和腫脹，這反應(yīng)了局部血管的變化，該變化會(huì)產(chǎn)生增強(qiáng)的局部血流，后者會(huì)造成熱和發(fā)紅；白細(xì)胞向周圍組織的遷移(外滲)；流體和蛋白從發(fā)炎組織中的血液和它們的局部積累中退出，這導(dǎo)致腫脹和疼痛；以及能輔助宿主防御的血漿蛋白的積累。由活化的巨噬細(xì)胞生產(chǎn)的細(xì)胞因子會(huì)啟動(dòng)這些變化。炎癥經(jīng)常伴隨著由用損傷組織(例如，受損的心肌)替換實(shí)質(zhì)組織造成的功能喪失，由疼痛造成的反射性廢用，和對(duì)功能的機(jī)械約束，例如，當(dāng)關(guān)節(jié)在急性炎癥過程中腫脹時(shí)，或當(dāng)發(fā)炎的關(guān)節(jié)上連接的疤痕組織隨著它成熟為慢性炎性病變而收縮時(shí)。
“抗炎”指本發(fā)明的化合物預(yù)防或減少炎性反應(yīng)、或通過減少炎癥的癥狀(例如發(fā)紅、疼痛、熱或腫脹)而減輕炎癥的能力。
炎性反應(yīng)可以由損傷觸發(fā)，例如皮膚、肌肉、腱或神經(jīng)的損傷。炎性反應(yīng)也可以作為免疫反應(yīng)的一部分而被觸發(fā)。炎性反應(yīng)也可以由感染觸發(fā)，這時(shí)病原體識(shí)別和組織損害可以在感染位點(diǎn)啟動(dòng)炎性反應(yīng)。通常，傳染劑會(huì)通過激活先天免疫來誘導(dǎo)炎性反應(yīng)。炎癥通過下述方式來抗擊感染通過送遞其它的效應(yīng)分子和細(xì)胞，以增加前線巨噬細(xì)胞對(duì)入侵微生物的殺傷；通過提供物理屏障來阻止感染的擴(kuò)散；和通過促進(jìn)損傷組織的修復(fù)?！把仔哉系K”有時(shí)用于指由任何原因造成的慢性炎癥。
特征在于皮膚炎癥的疾病的常見特征是皮疹，包括但不限于皮炎、特應(yīng)性皮炎(濕疹、特應(yīng)性)、接觸性皮炎、皰疹樣皮炎、普遍的剝脫性皮炎、脂溢性皮炎、藥疹、多形性紅斑、結(jié)節(jié)性紅斑、環(huán)形肉芽腫、毒漆藤(poison_ivy)、毒葛、中毒性表皮壞死松解和roseacae。
炎癥的原因可以是皮膚的物理損傷，它會(huì)產(chǎn)生“風(fēng)團(tuán)潮紅反應(yīng)”，其特征在于因?yàn)橹苯拥难苁鎻堅(jiān)斐傻膿p傷部位的痕跡，隨后是因?yàn)閿U(kuò)散血管舒張?jiān)斐傻臄U(kuò)大的紅暈(潮紅)，和由在損傷部位處的瞬時(shí)穿透的毛細(xì)血管后小靜脈喪失流體和血漿蛋白造成的皮膚隆起(腫脹、風(fēng)團(tuán))。
由重復(fù)運(yùn)動(dòng)身體的一部分造成的對(duì)肌肉、腱或神經(jīng)的各種類型的損傷觸發(fā)的炎癥通常稱作重復(fù)性勞損(RSI)。特征在于由RSI觸發(fā)的炎癥的疾病包括但不限于粘液囊炎、腕管綜合征、掌攣縮病、上髁炎(例如“網(wǎng)球肘”)、“神經(jīng)節(jié)”(已經(jīng)在腱鞘中形成的囊的炎癥，常見于腕)旋轉(zhuǎn)帶(rotator_cuff)綜合征、腱炎(例如，阿希利斯跟腱的炎癥)、腱鞘炎和“扳機(jī)指”(伴有腱腫脹的手指或拇指腱鞘的炎癥)。
應(yīng)當(dāng)理解，術(shù)語“免疫障礙”和“炎性反應(yīng)”是非排它的。應(yīng)當(dāng)理解，許多免疫障礙包含急性(短期)或慢性(長(zhǎng)期)炎癥。還應(yīng)當(dāng)理解，炎癥可以具有免疫方面和非免疫的方面。在特定炎性反應(yīng)中的免疫和非免疫細(xì)胞的作用可以隨炎性反應(yīng)的類型而異，且可以在炎性反應(yīng)的過程中變化。與炎癥有關(guān)的炎癥和疾病的免疫方面可以涉及先天和獲得性免疫。某些與炎癥有關(guān)的疾病代表著免疫和非免疫細(xì)胞相互作用的相互影響，例如腸炎(Fiocchi__等，1997，Am_J_PhysiolGastrointest_Liver_Physiol_273G_769-G_775)、肺炎(肺炎癥)或腎小球性腎炎。
另外應(yīng)當(dāng)理解，許多疾病的特征在于免疫障礙和炎性反應(yīng)兩者，所以分開的術(shù)語“免疫障礙”或“炎性反應(yīng)”的使用，無意限制本發(fā)明的化合物關(guān)于治療特定疾病的應(yīng)用范圍或活性。例如，認(rèn)為關(guān)節(jié)炎是特征在于關(guān)節(jié)炎癥的免疫障礙，但是同樣地認(rèn)為關(guān)節(jié)炎是特征在于對(duì)關(guān)節(jié)組織的免疫攻擊的炎性障礙。因而，發(fā)現(xiàn)本發(fā)明的化合物(例如，CBP501)會(huì)減少在關(guān)節(jié)炎動(dòng)物模型中看到的炎癥，并不會(huì)限制觀察到的化合物的抗炎活性。在具有免疫和炎性方面兩者的疾病中，僅僅測(cè)量本發(fā)明的化合物對(duì)炎癥的作用，不能排除該化合物在該相同疾病中也具有免疫調(diào)節(jié)活性的可能性。同樣地，在具有免疫和炎性方面兩者的疾病中，僅僅測(cè)量本發(fā)明的化合物對(duì)免疫反應(yīng)的作用，不能排除該化合物在該相同疾病中也具有抗炎活性的可能性。
如本文使用的“病毒感染”指生物的病原性病毒對(duì)該生物的感染。應(yīng)當(dāng)理解，感染是在病毒已經(jīng)侵入組織和宿主生物的細(xì)胞后造成的，此后，病毒已經(jīng)使用宿主的細(xì)胞機(jī)器來發(fā)揮功能，這可能包括合成病毒酶、復(fù)制病毒核酸、合成病毒包裝和釋放合成的病毒。
“抗病毒”指本發(fā)明的化合物預(yù)防、減少或消除病毒感染的能力。例如，本發(fā)明的抗病毒化合物可以預(yù)防病毒附著到細(xì)胞上，或病毒侵入，或病毒脫殼，或合成病毒酶，或病毒復(fù)制，或病毒釋放。具體地，本發(fā)明的抗病毒化合物可以預(yù)防或抑制感染了病毒的細(xì)胞內(nèi)的病毒復(fù)制。本發(fā)明的抗病毒化合物可以減少(妨礙)病毒附著到細(xì)胞上，或病毒侵入，或病毒脫殼，或合成病毒酶，或病毒復(fù)制，或病毒釋放，以達(dá)到病毒感染不會(huì)造成明顯疾病(生物正常功能的損傷)的程度。本發(fā)明的抗病毒化合物通過殺死或減弱病毒，從而使其不能感染或復(fù)制，可以消除病毒感染。本發(fā)明的抗病毒化合物通過刺激免疫系統(tǒng)殺死病毒的免疫調(diào)節(jié)作用，可以消除病毒感染。
“病毒病”、“特征在于病毒感染的疾病”和“由病毒感染造成的疾病”指由病毒感染造成的生物正常功能的損害。特征在于病毒感染的疾病可以包含其它方面，例如免疫反應(yīng)和炎癥。本發(fā)明的化合物可以用于治療與RNA病毒(包括逆轉(zhuǎn)錄病毒)或DNA病毒的病毒感染有關(guān)的疾病。逆轉(zhuǎn)錄病毒包括能表達(dá)逆轉(zhuǎn)錄酶的任何病毒，包括但不限于，HIV-1、HIV-2、HTLV-I、HTLV-II、FeLV、FIV、SIV、AMV、MMTV和MoMuLV。
與病毒感染有關(guān)的疾病的起因可以是下述病毒的感染皰疹病毒、砂粒病毒、冠狀病毒、腸道病毒、本揚(yáng)病毒、線狀病毒、黃病毒、漢坦病毒、輪狀病毒、蟲媒病毒、EB病毒、巨細(xì)胞病毒、嬰兒巨細(xì)胞病毒、星狀病毒、腺病毒和慢病毒、尤其是HIV。與病毒感染有關(guān)的疾病(病毒病)包括但不限于觸染性軟疣、HTLV、HTLV-1、HIV/AIDS、人乳頭瘤病毒、皰疹病毒、皰疹、生殖器皰疹、病毒性痢疾、感冒、流感、麻疹、風(fēng)疹、水痘、流行性腮腺炎、脊髓灰質(zhì)炎、狂犬病、單核細(xì)胞增多癥、埃博拉病毒(Ebola)、呼吸道合胞病毒(RSV)、登革熱、黃熱病、拉沙熱、病毒性腦膜炎、西尼羅河熱、副流行性感冒、水痘、天花、登革出血熱、進(jìn)行性多病灶腦白質(zhì)病、病毒性胃腸炎、急性闌尾炎、甲型肝炎、乙型肝炎、慢性乙型肝炎、丙型肝炎、慢性丙型肝炎、丁型肝炎、戊型肝炎、X型肝炎、感冒瘡、眼皰疹、腦膜炎、腦炎、帶狀皰疹、肺炎、腦炎、加利福尼亞血清群病毒、圣路易腦炎、裂谷熱、手足口病、亨德拉病毒(Hendra_virus)、日本腦炎、淋巴細(xì)胞脈絡(luò)叢腦膜炎、嬰兒玫瑰疹(roseolainfantum)、白蛉熱、SARS、疣、貓抓病、拍頰綜合征(slap-cheeksyndrome)、羊痘瘡和玫瑰糠疹。
應(yīng)當(dāng)理解，術(shù)語“炎性反應(yīng)”和“病毒感染”和“免疫障礙”不是排它的。與病毒感染有關(guān)的許多疾病包含炎性反應(yīng)，其中炎性反應(yīng)通常是由入侵病毒觸發(fā)的先天免疫系統(tǒng)的一部分。由病毒感染造成的對(duì)細(xì)胞和組織的物理(機(jī)械)損傷也可以觸發(fā)炎癥。特征在于炎癥的病毒感染的實(shí)例包括但不限于腦炎，它是由例如蟲媒病毒、皰疹病毒和麻疹等病毒感染后的腦炎癥(在疫苗通用前)；腦膜炎，它是感染后的腦脊膜(圍繞著腦和脊髓的膜)炎癥；腦膜腦炎，它是腦和腦脊膜二者的感染和炎癥；腦脊髓炎，它是腦和脊髓的感染和炎癥；病毒性胃腸炎，它是病毒感染造成的胃和腸炎癥；病毒性肝炎，它是由病毒感染造成的肝炎癥。
如本文所使用的，術(shù)語“肽”、“多肽”和“蛋白”可互換地使用，且指通過酰胺鍵或非酰胺等同物共價(jià)連接的2個(gè)或更多個(gè)氨基酸。本發(fā)明的肽可以是任意的長(zhǎng)度。例如，肽可以具有約5-100或更多個(gè)殘基，例如，5-12、12-15、15-18、18-25、25-50、50-75、75-100或更大的長(zhǎng)度。本發(fā)明的肽包含1-和d-異構(gòu)體，和1-和d-異構(gòu)體的組合。肽可以包含一般與翻譯后的蛋白加工有關(guān)的修飾，例如，環(huán)化(例如，二硫鍵或酰胺鍵)、磷酸化、糖基化、羧化、遍在蛋白化、十四烷基化或脂化(lipidation)。
本文公開的肽還包括具有氨基酸結(jié)構(gòu)的化合物和功能類似物，例如，具有合成的或非天然氨基酸或氨基酸類似物的肽模仿物，只要該模仿物具有本發(fā)明的化合物的一種或多種功能或活性即可，例如，G2關(guān)卡廢除活性和可檢測(cè)的免疫調(diào)節(jié)活性和/或抗炎活性和/或抗病毒活性。因此，本發(fā)明的化合物包含“模仿物”和“肽模仿物”形式。
如本文所使用的，術(shù)語“模仿物”和“肽模仿物”指合成的化學(xué)化合物，其基本上具有與本發(fā)明的肽相同的結(jié)構(gòu)和/或功能特征。模仿物可以完全由合成的、非天然氨基酸類似物組成，或可以是包含一個(gè)或多個(gè)天然肽氨基酸和一個(gè)或多個(gè)非天然氨基酸類似物的嵌合分子。模仿物也可以整合任意數(shù)目的天然氨基酸保守取代，只要這樣的取代不會(huì)破壞模仿物的活性即可。如同是保守變體的本發(fā)明多肽一樣，可以使用常規(guī)測(cè)試來確定模仿物是否具有必要的活性，例如，G2關(guān)卡廢除活性和可檢測(cè)的免疫調(diào)節(jié)活性和/或抗炎活性和/或抗病毒活性。
肽模仿物組合物可以含有非天然的結(jié)構(gòu)組分的任意組合，它們一般來自3個(gè)結(jié)構(gòu)基團(tuán)a)天然酰胺鍵(“肽鍵”)連接以外的殘基連接基團(tuán)；b)代替天然存在的氨基酸殘基的非天然殘基；或c)可以誘導(dǎo)二級(jí)結(jié)構(gòu)模仿的殘基，即誘導(dǎo)或穩(wěn)定二級(jí)結(jié)構(gòu)，例如，β轉(zhuǎn)角、γ轉(zhuǎn)角、β折疊、α螺旋構(gòu)象等。例如，當(dāng)一個(gè)或多個(gè)殘基通過酰胺鍵以外的化學(xué)方式連接時(shí)，可以將多肽表征為模仿物。單獨(dú)的肽模仿物殘基可以通過酰胺鍵、非天然的和非酰胺的化學(xué)鍵、其它化學(xué)鍵或偶聯(lián)方式連接，所述其它化學(xué)鍵或偶聯(lián)方式包括，例如，戊二醛、N-羥基琥珀酰亞胺酯、雙功能的馬來酰亞胺、N，N’-二環(huán)己基碳二亞胺(DCC)或N，N’-二異丙基碳二亞胺(DIC)。可替換酰胺鍵的連接基團(tuán)包括，例如，酮亞甲基(例如，-C(＝O)-CH2-替換-C(＝O)-NH-)、氨基亞甲基(CH2-NH)、乙烯、烯烴(CH＝CH)、醚(CH2-O)、硫醚(CH2-S)、四唑(CN4-)、噻唑、逆酰胺(retroamide)、硫代酰胺或酯(見，例如，Spatola(1983)，Chemistry_and_Biochemistry_of_Amino_Acids，Peptidesand_Proteins，Vol.7，pp_267-357，Marcel_Decker，NY)。
如討論的，通過含有一個(gè)或多個(gè)替換天然存在的氨基酸殘基的非天然的殘基，可以將肽表征為模仿物。非天然的殘基是本領(lǐng)域已知的?？梢杂米魈烊话被釟埢哪７挛锏姆翘烊粴埢木唧w非限制性實(shí)例是芳族氨基酸的模仿物，包括，例如，D-或L-萘基丙氨酸；D-或L-苯基甘氨酸；D-或L-2噻吩基丙氨酸；D-或L-1，-2，3-或4-芘基丙氨酸；D-或L-3噻吩基丙氨酸；D-或L-(2-吡啶基)-丙氨酸；D-或L-(3-吡啶基)-丙氨酸；D-或L-(2-吡嗪基)-丙氨酸；D-或L-(4-異丙基)-苯基甘氨酸；D-(三氟甲基)-苯基甘氨酸；D-(三氟甲基)-苯丙氨酸；D-對(duì)氟-苯丙氨酸；D-或L-對(duì)聯(lián)苯苯丙氨酸；K-或L-對(duì)甲氧基-聯(lián)苯苯丙氨酸；D-或L-2-吲哚(烷基)丙氨酸；和D-或L-alkylainine，其中烷基可以是取代的或未取代的甲基、乙基、丙基、己基、丁基、戊基、異丙基、異丁基、sec-isotyl、異戊基，或非酸性氨基酸?？梢杂糜谔娲烊环甲瀛h(huán)的非天然氨基酸的芳族環(huán)包括，例如，噻唑基、苯硫基、吡唑基、苯并咪唑基、萘基、呋喃基、吡咯基和吡啶基芳族環(huán)。
通過用非羧酸鹽氨基酸取代同時(shí)維持負(fù)電荷，(膦?；?8丙氨酸和硫酸化的蘇氨酸取代，可以生成酸性氨基酸的模仿物。通過與碳二亞胺(R’-N-C-N-R’)，例如，1-環(huán)己基-3(2-嗎啉基-(4-乙基)碳二亞胺或1-乙基-3(4-氮陽離子-4，4-dimetholpentyl)碳二亞胺進(jìn)行反應(yīng)，也可以選擇性地修飾羧基側(cè)鏈基團(tuán)(例如，天冬氨?；蚬劝滨；?。通過與銨離子反應(yīng)，也可以將天冬氨?；蚬劝滨；D(zhuǎn)化成天冬酰胺酰和谷氨酰胺?；鶊F(tuán)。
通過如下取代可以生成堿性氨基酸的模仿物，例如，除了賴氨酸和精氨酸以外，用氨基酸鳥氨酸，瓜氨酸或(胍基)-乙酸或(胍基)烷基-乙酸，其中烷基可以是取代的或未取代的甲基、乙基、丙基、己基、丁基、戊基、異丙基、異丁基、sec-isotyl、異戊基，或非酸性氨基酸進(jìn)行取代。腈衍生物(例如，含有替代COOH的CN-部分)可以取代天冬酰胺或谷氨酰胺?？梢允固於０孵：凸劝滨０孵埢摪被猿蔀閷?duì)應(yīng)的天冬氨?；蚬劝滨；鶜埢?。
通過使精氨?；芜x地在堿性條件下與一種或多種試劑反應(yīng)可以生成精氨酸模仿物，所述的試劑包括，例如，苯甲酰甲醛、2，3-丁二酮、1，2-環(huán)己烷二酮或茚三酮。通過使酪氨?；c芳族重氮化合物或四硝基甲烷反應(yīng)，可以生成酪氨酸殘基模仿物。N-乙?；溥蚝退南趸淄榭梢苑謩e用于形成O-乙?；野滨；N類和3-硝基衍生物。
通過使賴氨?；c琥珀酸酐或其它羧酸酐反應(yīng)，可以生成賴氨酸模仿物(且可以改變氨基末端殘基)。通過與亞氨酸酯反應(yīng)，例如methyl_picolinimidate、磷酸吡哆醛、吡哆醛、氯代硼氫化物、三硝基苯磺酸、O-甲基異脲、2，4-戊二酮和轉(zhuǎn)酰氨基酶-催化的與乙醛酸的反應(yīng)，也可以生成賴氨酸和其它含有α-氨基的殘基模仿物。
通過與甲硫氨酸亞砜反應(yīng)，可以生成甲硫氨酸模仿物。脯氨酸模仿物包括，例如，2-哌啶酸、噻唑烷羧酸、3-或4-羥基脯氨酸、脫氫脯氨酸、3-或4-甲基脯氨酸和3，3，-二甲基脯氨酸。通過使組氨?；c焦碳酸二乙酯(diethylprocarbonate)或?qū)︿灞郊柞＜谆宸磻?yīng)，可以生成組氨酸模仿物。其它模仿物包括，例如，通過下述反應(yīng)生成的那些脯氨酸和賴氨酸的羥基化；絲氨?；蛱K氨?；鶜埢牧u基的磷酸化；賴氨酸、精氨酸和組氨酸的α-氨基的甲基化；N-末端胺的乙?；恢麈滜０窔埢募谆蛴肗-甲基氨基酸的取代；或C-末端羧基的酰胺化。
可以將一個(gè)或多個(gè)殘基替換為相反手性的氨基酸(或肽模仿物殘基)。因而，可以將天然存在的L-構(gòu)型的任意氨基酸(根據(jù)化學(xué)實(shí)體的結(jié)構(gòu)，其也可以稱作R或S)替換為相同的氨基酸或模仿物，但是屬于相反的手性，稱作D-氨基酸，但是其另外可以稱作R-或S-形式。
本發(fā)明的肽和肽模仿物另外包含本文所述序列的修飾形式，前提是修飾形式能保留至少一部分未修飾的或參照肽或肽模仿物的功能。作為實(shí)例，修飾的肽或肽模仿物會(huì)保留可檢測(cè)的G2關(guān)卡廢除活性和抗炎癥、關(guān)節(jié)炎、自身免疫病、膠原病、變態(tài)反應(yīng)、哮喘、花粉病或特應(yīng)性的活性，盡管相對(duì)于參照肽或肽模仿物，它可以具有提高的或降低的G2廢除活性或抗炎癥、關(guān)節(jié)炎、自身免疫病、膠原病、變態(tài)反應(yīng)、哮喘、花粉病或特應(yīng)性的活性。作為另一個(gè)實(shí)例，修飾的肽或肽模仿物會(huì)保留可檢測(cè)的G2關(guān)卡廢除活性和抗病毒感染、特別是抗HIV的活性，盡管相對(duì)于參照肽或肽模仿物，它可以具有提高的或降低的G2關(guān)卡廢除活性和抗病毒感染、特別是抗HIV的活性。
修飾的肽和肽模仿物可以具有一個(gè)或多個(gè)被另一種殘基取代的、或添加到序列中的、或從序列中刪除的氨基酸殘基。在一個(gè)實(shí)施方案中，修飾的肽或肽模仿物具有一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代、添加或缺失(例如，1-3、3-5、5-10個(gè)或更多)。在一方面，取代是用氨基酸或模仿物的取代，其側(cè)鏈占據(jù)與參照氨基酸或模仿物(被取代的氨基酸或模仿物)相似的空間。在另一方面，取代是用結(jié)構(gòu)上類似于人殘基的非人氨基酸的取代。在一個(gè)具體方面，取代是保守的氨基酸取代。
如本文所使用的，術(shù)語“相似的空間”指占據(jù)了與參照部分大小類似的三維空間的化學(xué)部分。一般地，占據(jù)相似空間的部分的大小會(huì)類似于參照部分。“占據(jù)類似的側(cè)鏈空間”的氨基酸或模仿物具有占據(jù)了大小類似于參照氨基酸或模仿物的三維空間的側(cè)鏈。d-(Phe-2，3，4，5，6-F)、1-(Phe-2，3，4，5，6-F)、d-(Phe-3，4，5F)、1-(Phe-3，4，5F)、d-(Phe-4CF3)或1-(Phe-4CF3)的具體實(shí)例是(1或d-Phe-2R1，3R2，4R3，5R4，6R5)，其中R1、R2、R3、R4、R5可以是氯化物、溴化物、氟化物、碘化物、氫、氧化氫或沒有。對(duì)于小分子，例如，大小約為1埃的氟化物，相似的空間可以沒有部分。
術(shù)語“保守取代”指將一個(gè)氨基酸替換為生物學(xué)上、化學(xué)上或結(jié)構(gòu)上類似的殘基。“生物學(xué)上類似的”指該取代是與生物學(xué)活性相容的，例如，G2關(guān)卡廢除活性和抗炎癥、關(guān)節(jié)炎、自身免疫病、膠原病、變態(tài)反應(yīng)、哮喘、花粉病、特應(yīng)性或病毒病、特別是HIV的活性。結(jié)構(gòu)上類似的指該氨基酸具有類似長(zhǎng)度的側(cè)鏈，例如丙氨酸、甘氨酸和絲氨酸，或具有類似的大小?；瘜W(xué)類似性指該殘基具有相同的電荷，或二者都是親水的或疏水的。具體實(shí)例包括一個(gè)疏水殘基的取代，例如將異亮氨酸、纈氨酸、亮氨酸或甲硫氨酸取代為另一種，或?qū)⒁环N極性殘基取代為另一種，例如用精氨酸取代賴氨酸，用谷氨酸取代天冬氨酸，或用谷氨酰胺取代天冬酰胺，用絲氨酸取代蘇氨酸，等。
因此，本發(fā)明的肽和肽模仿物包含具有與表3所述的肽和肽模仿物序列不同的序列的肽和肽模仿物。在一個(gè)實(shí)施方案中，肽或肽模仿物具有與表3所述的序列有50％、60％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或更高同一性的序列。一方面，同一性是在序列的確定區(qū)域上的，例如，氨基或羧基末端的3-5個(gè)殘基。
使用本領(lǐng)域已知的任意方法，可以生產(chǎn)和分離出本發(fā)明的化合物，包括肽和肽模仿物。使用本領(lǐng)域已知的化學(xué)方法，可以全部地或部分地合成肽(見，例如，Caruthers(1980)Nucleic_Acids_Res.Symp.Ser.215-223；Horn(1980)Nucleic_Acids_Res.Symp.Ser.225-232；和Banga，A.K.，Therapeutic_Peptides_and_Proteins，F(xiàn)ormulation，Processing_and_Delivery_Systems(1995)Technomic_PublishingCo.，Lancaster，PA)。使用各種固相技術(shù)，可以進(jìn)行肽合成(見，例如，Roberge(1995)Science_269202；Merrifield(1997)MethodsEnzymol.289313)，且可以實(shí)現(xiàn)自動(dòng)合成，例如，根據(jù)生產(chǎn)商的說明書，使用ABI_431A肽合成儀(Perkin_Elmer)。
使用本領(lǐng)域已知的各種程序和方法，可以合成整合模仿物的單獨(dú)合成的殘基和多肽(見，例如，Organic_Syntheses_CollectiveVolumes，Gilman，等.(Eds)John_Wiley_&_Sons，Inc.，NY)。使用組合物方法，也可以合成肽和肽模仿物。用于產(chǎn)生肽和肽模仿物文庫的技術(shù)是眾所周知的，且包括，例如，多中心(multipin)、茶葉袋(tea_bag)和分裂偶聯(lián)混合(split_couple_mix)技術(shù)(見，例如，a1-Obeidi(1998)Mol.Biotechnol.9205_223；Hruby(1997)Curr.Opin.Chem.Biol.1114_119；Ostergaard(1997)Mol.Divers.317_27；和Ostresh(1996)Methods_Enzymol.267220234)。通過化學(xué)修飾方法，也可以生產(chǎn)出修飾的肽(見，例如，Belousov(1997)Nucleic_Acids_Res.253440_3444；Frenkel(1995)Free_Radic.Biol.Med.19373_380；和Blommers(1994)Biochemistry_337886_7896)。
本發(fā)明的化合物在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的化合物包含具有下述結(jié)構(gòu)的鄰接的肽或肽模仿物序列P1、P2、P3、P4、P5、P6(SEQ_ID_NO1)或P6、P5、P4、P3、P2、P1(SEQ_ID_NO2)；其中P1是d-或1-Cha、d-或1-Nal(2)、d-或1-(Phe-2，3，4，5，6-F)、d-或1-(Phe-3，4，5F)、d-或1-(Phe-4CF3)、占據(jù)類似的側(cè)鏈空間的氨基酸(例如，d-或1-Tyr、d-或1-Phe)、或在側(cè)鏈上具有1個(gè)或2個(gè)芳族、哌啶、吡嗪、嘧啶、哌嗪、嗎啉或嘧啶基團(tuán)或1個(gè)吲哚、并環(huán)戊二烯、茚、萘基、苯并呋喃、苯并噻吩、喹啉、二氫吲哚、苯并二氫吡喃、喹喔啉、喹唑啉基團(tuán)的任意氨基酸；P2是d-或1-Cha、d-或1-Nal(2)、d-或1-(Phe-2，3，4，5，6-F)、d-或1-(Phe-3，4，5F)、d-或1-(Phe-4CF3)、d-或1-Bpa、d-或1-Phe4NO2、占據(jù)類似的側(cè)鏈空間的氨基酸(例如d-或1-Tyr、d-或1-Phe)、或在側(cè)鏈上具有1個(gè)或2個(gè)芳族、哌啶、吡嗪、嘧啶、哌嗪、嗎啉或嘧啶基團(tuán)或1個(gè)吲哚、并環(huán)戊二烯、茚、萘、苯并呋喃、苯并噻吩、喹啉、二氫吲哚、苯并二氫吡喃、喹喔啉或喹唑啉基團(tuán)的任意氨基酸；P3、P4、P5是任意的氨基酸，或P3、P4、P5中的-個(gè)或多個(gè)是簡(jiǎn)單的碳鏈，從而使P2和P6之間的距離大約與下述情況時(shí)的距離相同P3、P4、P5中的每個(gè)都是氨基酸(d-或1-Trp是P4處的實(shí)例；P6是d-或1-Bpa、d-或1-Phe4NO2、任意氨基酸和d-或1-Tyr(例如，d-Ser-d-Tyr)、任意氨基酸和d-或1-Phe(例如，d-Ser-d-Phe)、任意氨基酸或沒有。在各個(gè)方面，具有簡(jiǎn)單碳鏈的氨基酸是d-或1-11-氨基十一酸、d-或1-10-氨基癸酸、d-或1-9-氨基壬酸、d-或1-8-氨基辛酸、d-或1-7-氨基庚酸、d-或1-6-氨基己酸或具有一個(gè)或多個(gè)不飽和碳鍵的類似結(jié)構(gòu)。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的化合物包含鄰接的肽或肽模仿物序列，其包含下面的結(jié)構(gòu)P1、P2、P3、P4、P5、P6(SEQ_ID_NO3)；P6、P5、P4、P3、P2、P1(SEQ_ID_NO4)；P1、P2、P3、P4、P5、P6、P7、P8、P9、P10、P11、P12(SEQ_ID_NO5)；P1、P2、P3、P4、P5、P6、P12、P11、P10、P9、P8、P7(SEQ_ID_NO6)；P6、P5、P4、P3、P2、P1、P7、P8、P9、P10、P11、P12(SEQ_ID_NO7)；P6、P5、P4、P3、P2、P1、P12、P11、P10、P9、P8、P7(SEQ_ID_NO8)；P7、P8、P9、P10、P11、P12、P1、P2、P3、P4、P5、P6(SEQ_ID_NO9)；P7、P8、P9、P10、P11、P12、P6、P5、P4、P3、P2、P1(SEQ_ID_NO10)；P12、P11、P10、P9、P8、P7、P1、P2、P3、P4、P5、P6(SEQ_ID_NO11)；P12、P11、P10、P9、P8、P7、P6、P5、P4、P3、P2、P1(SEQ_ID_NO12)；P12、P11、P6、P9、P8、P7、P2、P1(SEQ_ID_NO13)；P12、P11、P10、P6、P9、P4、P7、P2、P1(SEQ_ID_NO14)；P1、P2、P7、P8、P9、P6、P11、P12(SEQ_ID_NO15)；或P1、P2、P7、P4、P9、P6、P10、P11、P12(SEQ_ID_NO16)；其中P1是d-或1-Cha、d-或1-Nal(2)、d-或1-(Phe-2，3，4，5，6-F)、d-或1-(Phe-3，4，5F)、d-或1-(Phe-4CF3)、d-或1-Bpa、d-或1-Phe4NO2、占據(jù)類似的側(cè)鏈空間的氨基酸(例如d-或1-Tyr、d-或1-Phe)、或在側(cè)鏈上具有1個(gè)或2個(gè)芳族、哌啶、吡嗪、嘧啶、哌嗪、嗎啉或嘧啶基團(tuán)或1個(gè)吲哚、并環(huán)戊二烯、茚、萘、苯并呋喃、苯并噻吩、喹啉、二氫吲哚、苯并二氫吡喃、喹喔啉或喹唑啉基團(tuán)的任意氨基酸；P2是d-或1-Cha、d-或1-Nal(2)、d-或1-(Phe-2，3，4，5，6-F)、d-或1-(Phe-3，4，5F)、d-或1-(Phe-4CF3)、或占據(jù)類似的側(cè)鏈空間的氨基酸(例如d-或1-Tyr、d-或1-Phe)、或在側(cè)鏈上具有1個(gè)或2個(gè)芳族、哌啶、吡嗪、嘧啶、哌嗪、嗎啉或嘧啶基團(tuán)或1個(gè)吲哚、并環(huán)戊二烯、茚、萘基、苯并呋喃、苯并噻吩、喹啉、二氫吲哚、苯并二氫吡喃、喹喔啉、喹唑啉基團(tuán)的任意氨基酸；P3、P4、P5是任意氨基酸，或P3、P4、P5中的一個(gè)或多個(gè)是簡(jiǎn)單的碳鏈，從而使P2和P6之間的距離大約與下述情況時(shí)的距離相同P3、P4、P5中的每個(gè)都是氨基酸(d-或1-Trp是在P4處的實(shí)例)；P6是d-或1-Bpa、d-或1-Phe4NO2、任意氨基酸和d-或1-Tyr(例如，d-Ser-d-Tyr)、任意氨基酸和d-或1-Phe(例如，d-Ser-d-Phe)，且P7、P8、P9、P10、P11、P12中的至少3個(gè)是堿性氨基酸、且剩下的是任意氨基酸或沒有。在各個(gè)方面，具有簡(jiǎn)單碳鏈的氨基酸是d-或1-11-氨基十一酸、d-或1-10-氨基癸酸、d-或1-9-氨基壬酸、d-或1-8-氨基辛酸、d-或1-7-氨基庚酸、d-或1-6-氨基己酸或具有一個(gè)或多個(gè)不飽和碳鍵的類似結(jié)構(gòu)。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的化合物包含鄰接的肽或肽模仿物序列，其包含下面的結(jié)構(gòu)P1、P2、P3、P4、P5、P6、P7、P8、P9、P10、P11、P12(SEQ_ID_NO17)；P12、P11、P10、P9、P8、P7、P6、P5、P4、P3、P2、P1(SEQ_ID_NO18)；P12、P11、P10、P6、P9、P4、P7、P2、P1(SEQ_ID_NO19)；或P1、P2、P7、P4、P9、P6、P10、P11、P12(SEQ_ID_NO20)；其中P1是d-或1-Cha、d-或1-Nal(2)、d-或1-(Phe-2，3，4，5，6-F)、d-或1-(Phe-3，4，5F)、d-或1-(Phe-4CF3)、d-或1-Bpa、d-或1-Phe4NO2、占據(jù)類似的側(cè)鏈空間的氨基酸(例如d-或1-Tyr、d-或1-Phe)、或在側(cè)鏈上具有1個(gè)或2個(gè)芳族、哌啶、吡嗪、嘧啶、哌嗪、嗎啉或嘧啶基團(tuán)或1個(gè)吲哚、并環(huán)戊二烯、茚、萘、苯并呋喃、苯并噻吩、喹啉、二氫吲哚、苯并二氫吡喃、喹喔啉或喹唑啉基團(tuán)的任意氨基酸；P2是d-或1-Cha、d-或1-Nal(2)、d-或1-(Phe-2，3，4，5，6-F)、d-或1-(Phe-3，4，5F)、d-或1-(Phe-4CF3)、占據(jù)類似的側(cè)鏈空間的氨基酸(例如d-或1-Tyr、d-或1-Phe)、或在側(cè)鏈上具有1個(gè)或2個(gè)芳族、哌啶、吡嗪、嘧啶、哌嗪、嗎啉或嘧啶基團(tuán)或1個(gè)吲哚、并環(huán)戊二烯、茚、萘、苯并呋喃、苯并噻吩、喹啉、二氫吲哚、苯并二氫吡喃、喹喔啉、喹唑啉基團(tuán)的任意氨基酸；P3、P4、P5是任意氨基酸，或P3、P4、P5中的一個(gè)或多個(gè)是簡(jiǎn)單的碳鏈，從而使P2和P6之間的距離大約與下述情況時(shí)的距離相同P3、P4、P5中的每個(gè)都是氨基酸(d-或1-Trp是在P4處的實(shí)例)；P6是d-或1-Bpa、d-或1-Phe4NO2、任意氨基酸和d-或1-Tyr(例如，d-Ser-d-Tyr)、任意氨基酸和d-或1-Phe(例如，d-Ser-d-Phe)、任意氨基酸或沒有；且P7、P8、P9、P10、P11、P12中的至少3個(gè)是堿性氨基酸、且剩下的是任意氨基酸或沒有。在各個(gè)方面，具有簡(jiǎn)單碳鏈的氨基酸是d-或1-氨基十一酸或d-或1-8-氨基辛酸。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的化合物包含鄰接的肽或肽模仿物序列，其包含下面的結(jié)構(gòu)P1、P2、P3、P4、P5、P6(SEQ_ID_NO21)或P6、P5、P4、P3、P2、P1(SEQ_ID_NO22)；其中P1是d-或1-Cha、d-或1-Nal(2)、d-或1-(Phe-2，3，4，5，6-F)、d-或1-(Phe-3，4，5F)、d-或1-(Phe-4CF3)、d-或1-Bpa、d-或1-Phe4NO2、d-或1-Tyr或d-或1-Phe；P2是d-或1-Cha、d-或1-Nal(2)、d-或1-(Phe-2，3，4，5，6-F)、d-或1-(Phe-3，4，5F)、d-或1-(Phe-4CF3)、d-或1-Bpa、d-或1-Phe4NO2、d-或1-Tyr或d-或1-Phe；P3是d-或1-絲氨酸、d-或1-精氨酸、d-或1-半胱氨酸、d-或1-脯氨酸或d-或1-天冬酰胺；P4是d-或1-色氨酸；和P_5是d-或1-絲氨酸、d-或1-精氨酸或d-或1-天冬酰胺；或P3、P4、P5是單獨(dú)的d-或1-氨基十一酸或單獨(dú)的d-或1-8-氨基辛酸；P6是d-或1-Bpa、d-或1-Phe4NO2、(d-Ser-d-Tyr)或(d-Ser-d-Phe)。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的化合物包含鄰接的肽或肽模仿物序列，其包含下面的結(jié)構(gòu)P1、P2、P3、P4、P5、P6、P7、P8、P9、P10、P11、P12(SEQ_ID_NO23)；P1、P2、P3、P4、P5、P6、P12、P11、P10、P9、P8、P7(SEQ_ID_NO24)；P6、P5、P4、P3、P2、P1、P7、P8、P9、P10、P11、P12(SEQ_ID_NO25)；P6、P5、P4、P3、P2、P1、P12、P11、P10、P9、P8、P7(SEQ_ID_NO26)；P7、P8、P9、P10、P11、P12、P1、P2、P3、P4、P5、P6(SEQ_ID_NO27)；P7、P8、P9、P10、P11、P12、P6、P5、P4、P3、P2、P1(SEQ_ID_NO28)；P12、P11、P10、P9、P8、P7、P1、P2、P3、P4、P5、P6(SEQ_ID_NO29)；P12、P11、P10、P9、P8、P7、P6、P5、P4、P3、P2、P1(SEQ_ID_NO30)；P12、P11、P6、P9、P8、P7、P2、P1(SEQ_ID_NO31)；P12、P11、P10、P6、P9、P4、P7、P2、P1(SEQ_ID_NO32)；P1、P2、P7、P8、P9、P6、P11、P12(SEQ_ID_NO33)；或P1、P2、P7、P4、P9、P6、P10、P11、P12(SEQ_ID_NO34)；其中P1是d-或1-Cha、Nal(2)、d-或1-(Phe-2，3，4，5，6-F)、d-或1-(Phe-3，4，5F)、d-或1-(Phe-4CF3)、d-或1-Bpa、d-或1-Phe4NO2、d-或1-Tyr或d-或1-Phe；P2是d-或1-Cha、d-或1-Nal(2)、d-或1-(Phe-2，3，4，5，6-F)、d-或1-(Phe-3，4，5F)、d-或1-(Phe-4CF3)、d-或1-Bpa、d-或1-Phe4NO2、d-或1-Tyr或d-或1-Phe；P3是d-或1-絲氨酸、d-或1-精氨酸、d-或1-半胱氨酸、d-或1-脯氨酸或d-或1-天冬酰胺；P4是d-或1-色氨酸；P5是d-或1-絲氨酸、d-或1-精氨酸或d-或1-天冬酰胺；或P3、P4、P5是單獨(dú)的d-或1-氨基十一酸或單獨(dú)的d-或1-8-氨基辛酸；P6是d-或1-Bpa、d-或1-Phe4NO2、(d-Ser-d-Tyr)或(d-Ser-d-Phe)；且P7、P8、P9、P10、P11、P12中的至少3個(gè)是d-或1-Arg或d-或1-Lys、且剩下的是任意氨基酸或沒有。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的化合物包含鄰接的肽或肽模仿物序列，其包含下面的結(jié)構(gòu)P1、P2、P3、P4、P5、P6、P7、P8、P9、P10、P11、P12(SEQ_ID_NO35)；P12、P11、P10、P9、P8、P7、P6、P5、P4、P3、P2、P1(SEQ_ID_NO36)；P12、P11、P10、P6、P9、P4、P7、P2、P1(SEQ_ID_NO37)或P1、P2、P7、P4、P9、P6、P10、P11、P12(SEQ_ID_NO38)；其中P1是d-或1-Cha或d-或1-Nal(2)；P2是d-或1-(Phe-2，3，4，5，6-F)、d-或1-(Phe-3，4，5F)、d-或1-(Phe-4CF3)；且P7、P8、P9、P10、P11、P12中的至少3個(gè)是d-或1-Arg、且剩下的是任意氨基酸或沒有；P3是d-或1-絲氨酸；P4是d-或1-色氨酸；P5是d-或1-絲氨酸或d-或1-天冬酰胺；P6是d-或1-Bpa、d-或1-Phe4NO2、(d-或1-Ser-d-或1-Tyr)或(d-或1-Ser-d-或1-Phe)。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的化合物包含鄰接的肽或肽模仿物序列，其包含下面的結(jié)構(gòu)P1、P2、P3、P4、P5、P6(SEQ_ID_NO39)或P6、P5、P4、P3、P2、P1(SEQ_ID_NO40)；其中P1是d-或1-Cha或d-或1-Nal(2)；P2是(d-或1-Phe-2，3，4，5，6-F)、(d-或1-Phe-3，4，5F)或(d-或1-Phe-4CF3)；P3是d-或1-Ser；P4是d-或1-Trp；P5是d-或1-Ser；P6是d-或1-Bpa或(d-或1-Ser-d-或1-Tyr)。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的化合物包含鄰接的肽或肽模仿物序列，其包含下面的結(jié)構(gòu)P1、P2、P3、P4、P5、P6(SEQ_ID_NO41)；P6、P5、P4、P3、P2、P1(SEQ_ID_NO42)；P1、P2、P3、P4、P5、P6、P7、P8、P9、P10、P11、P12(SEQ_ID_NO43)；P1、P2、P3、P4、P5、P6、P12、P11、P10、P9、P8、P7(SEQ_ID_NO44)；P6、P5、P4、P3、P2、P1、P7、P8、P9、P10、P11、P12(SEQ_ID_NO45)；P6、P5、P4、P3、P2、P1、P12、P11、P10、P9、P8、P7(SEQ_ID_NO46)；P7、P8、P9、P10、P11、P12、P1、P2、P3、P4、P5、P6(SEQ_ID_NO47)；P7、P8、P9、P10、P11、P12、P6、P5、P4、P3、P2、P1(SEQ_ID_NO48)；P12、P11、P10、P9、P8、P7、P1、P2、P3、P4、P5、P6(SEQ_ID_NO49)；P12、P11、P10、P9、P8、P7、P6、P5、P4、P3、P2、P1(SEQ_ID_NO50)；P12、P11、P6、P9、P8、P7、P2、P1(SEQ_ID_NO51)；P12、P11、P10、P6、P9、P4、P7、P2、P1(SEQ_ID_NO52)；P1、P2、P7、P8、P9、P6、P11、P12(SEQ_ID_NO53)；或P1、P2、P7、P4、P9、P6、P10、P11、P12(SEQ_ID_NO54)；其中P1是d-或1-Cha或d-或1-Nal(2)；P2是(d-或1-Phe-2，3，4，5，6-F)、(d-或1-Phe-3，4，5F)或(d-或1-Phe-4CF3)；P3是任意氨基酸(例如，d-或1-Ser或d-或1-Pro)；P4是d-或1-Trp；P5是任意氨基酸(例如，d-或1-Ser)；P7是d-或1-Arg；P8是d-或1-Arg；P9是d-或1-Arg；P10是d-或1-Gln或d-或1-Arg；P11是d-或1-Arg；P12是d-或1-Arg；P6是d-或1-Bpa或(d-或1-Ser-d-或1-Tyr)。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的化合物包含鄰接的肽或肽模仿物序列，其包含下面的結(jié)構(gòu)P1、P2、P3、P4、P5、P6、P7、P8、P9、P10、P11、P12(SEQ_ID_NO55)；P12、P11、P10、P9、P8、P7、P6、P5、P4、P3、P2、P1(SEQ_ID_NO56)；P12、P11、P10、P6、P9、P4、P7、P2、P1(SEQ_ID_NO57)；或P1、P2、P7、P4、P9、P6、P10、P11、P12(SEQ_ID_NO58)；其中P1是d-或1-Cha或d-或1-Nal(2)；P2是(d-或1-Phe-2，3，4，5，6-F)；P3是d-或1-Ser；P4是d-或1-Trp；P5是d-或1-Ser；P7是d-或1-Arg；P8是d-或1-Arg；P9是d-或1-Arg；P10是d-或1-Gln或d-或1-Arg；P11是d-或1-Arg；P12是d-或1-Arg；P6是d-或1-Bpa或(d-或1-Ser-d-或1-Tyr)。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的化合物包含鄰接的肽或肽模仿物序列，其包含下面的結(jié)構(gòu)(d-Bpa)(d-Ser)(d-Trp)(d-Ser)(d-Phe-2，3，4，5，6-F)(d-Cha)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Gln)(d-Arg)(d-Arg)(SEQ_ID_NO99)；(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Gln)(d-Arg)(d-Arg)(d-Bpa)(d-Ser)(d-Trp)(d-Ser)(d-Phe-2，3，4，5，6-F)(d-Cha)(SEQ_ID_NO100)；(d-Bpa)(d-Ser)(d-Trp)(d-Ser)(d-Phe-2，3，4，5，6-F)(d-Cha)(d-Arg)(d-Arg)(d-Gln)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(SEQ_ID_NO59)；(d-Arg)(d-Arg)(d-Gln)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Bpa)(d-Ser)(d-Trp)(d-Ser)(d-Phe-2，3，4，5，6-F)(d-Cha)(SEQ_ID_NO60)；(d-Cha)(d-Phe-2，3，4，5，6-F)(d-Ser)(d-Trp)(d-Ser)(d-Bpa)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Gln)(d-Arg)(d-Arg)(SEQ_ID_NO61)；(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Gln)(d-Arg)(d-Arg)(d-Cha)(d-Phe-2，3，4，5，6-F)(d-Ser)(d-Trp)(d-Ser)(d-Bpa)(SEQ_ID_NO62)；(d-Cha)(d-Phe-2，3，4，5，6-F)(d-Ser)(d-Trp)(d-Ser)(d-Bpa)(d-Arg)(d-Arg)(d-Gln)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(SEQ_ID_NO63)；(d-Arg)(d-Arg)(d-Gln)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Cha)(d-Phe-2，3，4，5，6-F)(d-Ser)(d-Trp)(d-Ser)(d-Bpa)(SEQ_IDNO64)；(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Cha)(d-Phe-2，3，4，5，6-F)(d-Ser)(d-Trp)(d-Ser)(d-Bpa)(SEQ_ID_NO65)；(d-Cha)(d-Phe-2，3，4，5，6-F)(d-Ser)(d-Trp)(d-Ser)(d-Bpa)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(SEQ_ID_NO66)；(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Bpa)(d-Ser)(d-Trp)(d-Ser)(d-Phe-2，3，4，5，6-F)(d-Cha)(SEQ_ID_NO67)；(d-Bpa)(d-Ser)(d-Trp)(d-Ser)(d-Phe-2，3，4，5，6-F)(d-Cha)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(SEQ_ID_NO68)；(d-Arg)(d-Arg)(d-Bpa)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Phe-2，3，4，5，6-F)(d-Cha)(SEQ_IDNO69)；(d-Cha)(d-Phe-2，3，4，5，6-F)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Bpa)(d-Arg)(d-Arg)(SEQ_ID_NO70)；(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Bpa)(d-Arg)(d-Trp)(d-Arg)(d-Phe-2，3，4，5，6-F)(d-Cha)(SEQ_ID_NO71)；(d-Cha)(d-Phe-2，3，4，5，6-F)(d-Arg)(d-Trp)(d-Arg)(d-Bpa)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(SEQ_ID_NO72)；(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Bpa)(d-Arg)(d-Trp)(d-Arg)(d-Phe-2，3，4，5，6-F)(d-Cha)(SEQ_ID_NO73)；(d-Cha)(d-Phe-2，3，4，5，6-F)(d-Arg)(d-Trp)(d-Arg)(d-Bpa)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(SEQ_ID_NO74)；(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Bpa)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Phe-2，3，4，5，6-F)(d-Cha)(SEQ_ID_NO75)；或(d-Cha)(d-Phe-2，3，4，5，6-F)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Bpa)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(SEQ_ID_NO76)。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的化合物包含鄰接的肽或肽模仿物序列，其包含下面的結(jié)構(gòu)(d-Bpa)(d-Ser)(d-Trp)(d-Ser)(d-Phe-2，3，4，5，6-F)(d-Cha)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Gln)(d-Arg)(d-Arg)(SEQ_ID_NO77)。
在其它實(shí)施方案中，本發(fā)明的化合物包含鄰接的肽或肽模仿物序列X1_X2_X3_X4_X5_X6_X7_X8_X9_X10_X11(SEQ_ID_NO137)，其中X1是L、F、W、M、R、I、V、Y、K或沒有，X2是Y、F、A、W、S或T，X3是任意氨基酸，X4是任意氨基酸，X5是任意氨基酸，X6是S、A、N、H或P，X7是任意氨基酸，X8是任意氨基酸，X9是任意氨基酸或沒有，X10是N、G、L、S、M、P、N、A或沒有，和X11是L或沒有。在各個(gè)方面，X1是L、F、W、M、R或沒有，或X1是L、F或W；X2是Y、F、A；X3是R、T、S、H、D、G、A、L、K、A、N、Q或P，或X3是R、T、S、H、D、G、A或L，或X3是R、T、S或H；X4是S、T、G、A、L、R、I、M、V、P，或X4是S、T、G、A、L、R，或X4是S；X5是P、A、G、S或T，或X5是P；X6是S、N、H、P、A、G或T，或X6是S、N或H，或X6是S；X7是M、F、Y、D、E、N、Q、H、G、I、L、V、A、P、N或W，或X7是M、F、Y、D、E、N、Q或H，或X7是M、F、Y、Q或H；X8是P、F、Y、W、L、G、M、D、E、N、Q、H、I、V、A或P，或X8是P、F、Y或W，或X8是Y；X9是E、G、L、S、M、P、N、D、A、T、P或沒有；X10是沒有；X11是沒有。在另一個(gè)實(shí)施方案中，X2是Y，X5是P，和X10是N；X3是R，X8是P，和X11是L；和X4是S，X5是P，X6是S，X9是E，X10是N和X11是L。
在其它實(shí)施方案中，本發(fā)明的化合物包含鄰接的肽或肽模仿物序列Y_G_G_P_G_G_G_G_N(SEQ_ID_NO138)；R_Y_S_L_P_P_E_L_S_N_M(SEQ_ID_NO139)；L_A_R_S_A_S_M_P_E_A_L(SEQ_ID_NO140)；L_YR_S_P_S_M_P_E_N_L(SEQ_ID_NO141)；L_Y_R_S_P_A_M_P_E_N_L(SEQID_NO142)；W_Y_R_S_P_S_F_Y_E_N_L(SEQ_ID_NO143)；W_Y_R_SP_S_Y_Y_E_N_L(SEQ_ID_NO144)；或W_Y_R_S_P_S_Y_Y(SEQ_ID_NO145)。
在替代實(shí)施方案中，本發(fā)明的化合物包含鄰接的肽或肽模仿物序列L_Y_R_S_P_S_Y_P_E_N_L(SEQ_ID_NO146)；L_Y_R_S_P_S_Y_F_EN_L(SEQ_ID_NO147)；L_Y_R_S_P_S_Y_Y_E_N_L(SEQ_ID_NO148)；L_Y_R_S_P_S_Y_W_E_N_L(SEQ_ID_NO149)；L_Y_R_S_P_S_N_P_E_NL(SEQ_ID_NO150)；L_Y_R_S_P_S_N_F_E_N_L(SEQ_ID_NO151)；LY_R_S_P_S_N_Y_E_N_L(SEQ_ID_NO152)；L_Y_R_S_P_S_N_W_E_N_L(SEQ_ID_NO153)；L_Y_R_S_P_S_H_P_E_N_L(SEQ_ID_NO154)；L_YR_S_P_S_H_F_E_N_L(SEQ_ID_NO155)；L_Y_R_S_P_S_H_Y_E_N_L(SEQID_NO156)；L_Y_R_S_P_S_H_W_E_N_L(SEQ_ID_NO157)；L_Y_S_SP_S_M_P_E_N_L(SEQ_ID_NO158)；L_Y_S_S_P_S_M_F_E_N_L(SFQ_IDNO159)；L_Y_S_S_P_S_M_Y_E_N_L(SEQ_ID_NO160)；L_Y_S_S_P_SM_W_E_N_L(SEQ_ID_NO161)；L_Y_S_S_P_S_F_P_E_N_L(SEQ_ID_NO162)；L_Y_S_S_P_S_F_P_E_N_L(SEQ_ID_NO163)；L_Y_S_S_P_S_F_F_E_NL(SEQ_ID_NO164)；L_Y_S_S_P_S_F_Y_E_N_L(SEQ_ID_NO165)；LY_S_S_P_S_F_W_E_N_L(SEQ_ID_NO166)；L_Y_S_S_P_S_Y_P_E_N_L(SEQ_ID_NO167)；L_Y_S_S_P_S_Y_F_E_N_L(SEQ_ID_NO168)；L_YS_S_P_S_Y_Y_E_N_L(SEQ_ID_NO169)；L_Y_S_S_P_S_Y_W_E_N_L(SEQID_NO170)；L_Y_S_S_P_S_Q_P_E_N_L(SEQ_ID_NO171)；L_Y_S_SP_S_Q_W_E_N_L(SEQ_ID_NO172)；L_Y_S_S_P_S_H_P_E_N_L(SEQ_IDNO173)；L_Y_S_S_P_S_H_F_E_N_L(SEQ_ID_NO174)；L_Y_S_S_P_SH_Y_E_N_L(SEQ_ID_NO175)；L_Y_S_S_P_S_H_W_E_N_L(SEQ_ID_NO176)；L_Y_T_S_P_S_M_P_E_N_L(SEQ__ID_NO177)；L_Y_T_S_P_S_M_F_E_NL(SEQ_ID_NO178)；L_Y_T_S_P_S_M_Y_E_N_L(SEQ_ID_NO179)；LY_T_S_P_S_M_W_E_N_L(SEQ_ID_NO180)；L_Y_T_S_P_S_F_P_E_N_L(SEQ_ID_NO181)；L_Y_T_S_P_S_F_F_E_N_L(SEQ_ID_NO182)；L_YT_S_P_S_F_Y_E_N_L(SEQ_ID_NO183)；L_Y_T_S_P_S_F_W_E_N_L(SEQID__NO184)；L_Y_T_S_P_S_Y_P_E_N_L(SEQ_ID_NO185)；L_Y_T_SP_S_Y_F_E_N_L(SEQ_ID_NO186)；L_Y_T_S_P_S_Y_Y_E_N_L(SEQ_IDNO187)；L_Y_T_S_P_S_Y_W_E_N_L(SEQ_ID_NO188)；L_Y_T_S_P_SN_P_E_N_L(SEQ_ID_NO189)；L_Y_T_S_P_S_N_F_E_N_L(SEQ_ID_NO190)；L_Y_T_S_P_S_N_Y_E_N_L(SEQ_ID_NO191)；L_Y_T_S_P_S_N_W_E_NL(SEQ_ID_NO192)；L_Y_T_S_P_S_H_P_E_N_L(SEQ_ID_NO193)；LY_T_S_P_S_H_F_E_N_L(SEQ_ID_NO194)；L_Y_T_S_P_S_H_Y_E_N_L(SEQ_ID_NO195)；L_Y_T_S_P_S_H_W_E_N_L(SEQ_ID_NO196)；L_YH_S_P_S_Y_P_E_N_L(SEQ_ID_NO197)；L_Y_H_S_P_S_Y_F_E_N_L(SEQID_NO198)；L_Y_H_S_P_S_Y_Y_E_N_L(SEQ_ID_NO199)；L_Y_H_SP_S_Y_W_E_N_L(SEQ_ID_NO200)；L_F_T_S_P_S_Y_P_E_N_L(SEQ_IDNO201)；L_F_T_S_P_S_Y_F_E_N_L(SEQ_ID_NO202)；L_F_T_S_P_SY_Y_E_N_L(SEQ_ID_NO203)；L_F_T_S_P_S_Y_W_E_N_L(SEQ_ID_NO204)；F_Y_S_S_P_S_H_P_E_N_L(SEQ_ID_NO205)；F_Y_S_S_P_S_H_F_E_NL(SEQ_ID_NO206)；F_Y_S_S_P_S_H_Y_E_N_L(SEQ_ID_NO207)；FY_S_S_P_S_H_W_E_N_L(SEQ_ID_NO208)；F_Y_T_S_P_S_M_P_E_N_L(SEQ_ID_NO209)；F_Y_T_S_P_S_M_F_E_N_L(SEQ_ID_NO210)；F_YT_S_P_S_M_Y_E_N_L(SEQ_ID_NO211)；F_Y_T_S_P_S_M_W_E_N_L(SEQID_NO212)；F_Y_T_S_P_S_F_P_E_N_L(SEQ_ID_NO213)；F_Y_T_SP_S_F_F_E_N_L(SEQ_ID_NO214)；F_Y_T_S_P_S_F_Y_E_N_L(SEQ_IDNO215)；F_Y_T_S_P_S_F_W_E_N_L(SEQ_ID_NO216)；F_Y_T_S_P_SY_P_E_N_L(SEQ_ID_NO217)；F_Y_T_S_P_S_Y_F_E_N_L(SEQ_ID_NO218)；F_Y_T_S_P_S_Y_Y_E_N_L(SEQ_ID_NO219)；F_Y_T_S_P_S_Y_W_E_NL(SEQ_ID_NO220)；W_Y_R_S_P_S_M_P_E_N_L(SEQ_ID_NO221)；WY_R_S_P_S_M_F_E_N_L(SEQ_ID_NO222)；W_Y_R_S_P_S_M_Y_E_N_L(SEQ_ID_NO223)；W_Y_R_S_P_S_M_W_E_N_L(SEQ_ID_NO224)；W_YR_S_P_S_F_P_E_N_L(SEQ_ID_NO225)；W_Y_R_S_P_S_F_F_E_N_L(SEQID_NO226)；W_Y_R_S_P_S_F_Y_E_N_L(SEQ_ID_NO227)；W_Y_R_SP_S_F_W_E_N_L(SEQ_ID_NO228)；W_Y_R_S_P_S_Y_P_E_N_L(SEQ_IDNO229)；W_Y_R_S_P_S_Y_F_E_N_L(SEQ_ID_NO230)；W_Y_R_S_P_SY_Y_E_N_L(SEQ_ID_NO231)；W_Y_R_S_P_S_Y_W_E_N_L(SEQ_ID_NO232)；W_Y_T_S_P_S_M_P_E_N_L(SEQ_ID_NO233)；W_Y_T_S_P_S_M_F_E_NL(SEQ_ID_NO234)；W_Y_T_S_P_S_M_Y_E_N_L(SEQ_ID_NO235)；WY_T_S_P_S_M_W_E_N_L(SEQ_ID_NO236)；W_Y_T_S_P_S_F_P_E_N_L(SEQ_ID_NO237)；W_Y_T_S_P_S_F_F_E_N_L(SEQ_ID_NO238)；W_YT_S_P_S_F_Y_E_N_L(SEQ_ID_NO239)；W_Y_T_S_P_S_F_W_E_N_L(SEQID_NO240)；W_Y_T_S_P_S_Y_P_E_N_L(SEQ_ID_NO241)；W_Y_T_SP_S_Y_F_E_N_L(SEQ_ID_NO242)；W_Y_T_S_P_S_Y_Y_E_N_L(SEQ_IDNO243)；W_Y_T_S_P_S_Y_W_E_N_L(SEQ_ID_NO244)；W_Y_T_S_P_SH_P_E_N_L(SEQ_ID_NO245)；W_Y_T_S_P_S_H_F_E_N_L(SEQ_ID_NO246)；W_Y_T_S_P_S_H_Y_E_N_L(SEQ_ID_NO247)；W_Y_T_S_P_S_H_W_E_NL(SEQ_ID_NO248)；L_K_R_S_P_S_M_P_E_N_L(SEQ_ID_NO249)；LY_I_S_P_S_M_P_E_N_L(SEQ_ID_NO250)；或L_Y_R_S_P_S_M_V_E_NL(SEQ_ID_NO251)。
本發(fā)明的化合物任選地包含細(xì)胞膜透過序列(permeantsequence)，以輔助穿越細(xì)胞膜。細(xì)胞膜透過序列可以包含多肽，例如TAT蛋白轉(zhuǎn)導(dǎo)結(jié)構(gòu)域，例如，序列Y_G_R_K_K_R_R_Q_R_R_R(SEQID_NO252)。本發(fā)明的化合物任選地含有聚-lys和/或arg序列，以輔助穿越細(xì)胞膜。在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明的化合物不具有能輔助細(xì)胞進(jìn)入的聚-lys和/或arg序列。不具有能輔助細(xì)胞膜穿越的聚-lys/arg序列的最小序列的示例性實(shí)施方案包括但不限于P6、P5、P4、P3、P2、P1，例如，d-Bpa、d-Ser、d-Trp、d-Ser、d-Phe-2，3，4，5，6F、d-Cha(SEQ_ID_NO101)；d-Tyr、d-Ser、d-Pro、d-Trp、d-Ser、d-Phe-2，3，4，5，6F、d-Cha(SEQ_ID_NO102)；d-Bpa、d-Cys、d-Trp、d-Ser、d-Phe-2，3，4，5，6F、d-Cha、d-Cys(SEQ_IDNO103)；和d-Tyr、d-Cys、d-Pro、d-Trp、d-Ser、d-Phe-2，3，4，5，6F、d-Cha、d-Cys(SEQ_ID_NO104)。在某些實(shí)施方案中，Cys殘基是任選地環(huán)化的。
具有免疫調(diào)節(jié)活性和/或抗炎活性和/或抗病毒活性的CBP化合物。
根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)方面，在此提供了具有免疫調(diào)節(jié)活性和/或抗炎活性和/或抗病毒活性的CBP化合物。已知CBP_G2關(guān)卡-廢除化合物會(huì)抑制激酶和/或14-3-3蛋白，且還已知激酶和14-3-3蛋白會(huì)參與某些信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑。令人驚奇地，如本文所公開的，具有G2-關(guān)卡-廢除活性的CBP化合物也具有免疫調(diào)節(jié)活性和/或抗炎活性和/或抗病毒活性。根據(jù)本發(fā)明的具有免疫調(diào)節(jié)活性和/或抗炎活性和/或抗病毒活性的CBP化合物包括但不限于下面的CBP化合物CBP413(SEQID_NO105)；CBP420(SEQ_ID_NO106)；CBP430(SEQ_ID_NO107)；CBP431(SEQ_ID_NO108)；CBP432(SEQ_ID_NO109)；CBP440(SEQID_NO110)；CBP450(SEQ_ID_NO111)；CBP451(SEQ_ID_NO87)；CBP452(SEQ_ID_NO88)；CBP454(SEQ_ID_NO112)；CBP455(SEQID_NO113)；CBP_460(SEQ_ID_NO114)；CBP_461(SEQ_ID_NO115)；CBP462(SEQ_ID_NO116)；CBP463(SEQ_ID_NO117)；CBP464(SEQID_NO118)；CBP465(SEQ_ID_NO119)；CBP466(SEQ_ID_NO120)；CBP470(SEQ_ID_NO121)；CBP471(SEQ_ID_NO122)；CBP481(SEQID_NO123)；CBP500(SEQ_ID_NO124)；CBP501(SEQ_ID_NO80)；CBP502(SEQ_ID_NO125)；CBP503(SEQ_ID_NO126)；CBP504(SEQID_NO127)；CBP505(SEQ_ID_NO128)；CBP506(SEQ_ID_NO129)；CBP510(SEQ_ID_NO93)；CBP511(SEQ_ID_NO94)；CBP512(SEQID_NO95)；CBP601(SEQ_ID_NO130)；CBP602(SEQ_ID_NO131)；CBP603(SEQ_ID_NO89)；CBP604(SEQ_ID_NO132)；CBP605(SEQID_NO133)；CBP606(SEQ_ID_NO134)；CBP607(SEQ_ID_NO90)；CBP608(SEQ_ID_NO91)；CBP609(SEQ_ID_NO92)；CBP700(SEQID_NO96)；CBP701(SEQ_ID_NO97)；CBP702(SEQ_ID_NO98)；CBP703(SEQ_ID_NO99)；CBP524(SEQ_ID_NO135)；和CBP721(SEQID_NO136)。每種前述CBP化合物的序列公開在表3中。
根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)具體方面，具有免疫調(diào)節(jié)活性和/或抗炎活性和/或抗病毒活性的G2-關(guān)卡-廢除CBP化合物包含區(qū)域A和B，其排列成下述的任意結(jié)構(gòu)P1、P2、P3、P4、P5、P6、P7、P8、P9、P10、P11(SEQ_ID_NO253)或P6、P7、P8、P9、P10、P11、P1、P2、P3、P4、P5(SEQ_ID_NO253)或P1、P2、P3、P4、P5(SEQ_ID_NO255)，其中P1和P5是Bpa，或Tyr，或Phe，或(Cha)(Phe-2，3，4，5，6-F)，或TyrTyr，或PhePhe，或占據(jù)類似于1個(gè)或2個(gè)苯-樣或環(huán)己烷-樣側(cè)鏈結(jié)構(gòu)占據(jù)的側(cè)鏈空間的部分，其中該部分可以是1個(gè)或2個(gè)氨基酸或氨基酸結(jié)構(gòu)/功能類似物，包括非天然氨基酸、合成的氨基酸、氨基酸模仿物和嵌合分子。位置P2和P4是任意氨基酸，且P3是Trp或占據(jù)類似于Trp側(cè)鏈占據(jù)的側(cè)鏈空間的任意部分。當(dāng)P2和/或P3不是Arg時(shí)，位置P6、P7、P8、P9、P10、P11在5個(gè)或更多個(gè)位置包含Arg，且任意的非-Arg位置可以是任意氨基酸或沒有。當(dāng)P2和/或P3是Arg時(shí)，則P6-P11可以含有少于5個(gè)Arg。
本發(fā)明提供了CBP化合物，其具有上述的P1、P2、P3、P4、P5、P6、P7、P8、P9、P10、P11(SEQ_ID_NO253)或P6、P7、P8、P9、P10、P11、P1、P2、P3、P4、P5(SEQ_ID_NO253)結(jié)構(gòu)，且具有類似于化合物CBP501(SEQ_ID_NO80)的G2關(guān)卡廢除活性，其中這些CBP化合物包括但不限于CBP500(SEQ_ID_NO124)；CBP501(SEQID_NO80)；CBP504(SEQ_ID_NO127)；CBP505(SEQ_ID_NO128)；CBP506(SEQ_ID_NO129)；CBP510(SEQ_ID_NO93)；CBP511(SEQID_NO94)；CBP512(SEQ_ID_NO95)；CBP603(SEQ_ID_NO89)。因此，本文提供的具有免疫調(diào)節(jié)活性和/或抗炎活性和/或抗病毒活性的CBP化合物包括但不限于CBP500(SEQ_ID_NO124)；CBP501(SEQID_NO80)；CBP504(SEQ_ID_NO127)；CBP505(SEQ_ID_NO128)；CBP506(SEQ_ID_NO129)；CBP510(SEQ_ID_NO93)；CBP511(SEQID_NO94)；CBP512(SEQ_ID_NO95)；CBP603(SEQ_ID_NO89)。
根據(jù)本發(fā)明的另一個(gè)方面，當(dāng)提供了另一種將CBP化合物導(dǎo)入細(xì)胞中的方式時(shí)，例如，當(dāng)通過脂質(zhì)體載體將CBP化合物導(dǎo)入細(xì)胞中時(shí)，不需要P6-P11。因此，本發(fā)明提供了具有結(jié)構(gòu)P1、P2、P3、P4、P5(SEQ_ID_NO255)的化合物，其中P1和P5是Bpa，或Tyr，或Phe，或(Cha)(Phe-2，3，4，5，6-F)，或TyrTyr，或PhePhe，或占據(jù)類似于1個(gè)或2個(gè)苯-樣或環(huán)己烷-樣側(cè)鏈結(jié)構(gòu)占據(jù)的側(cè)鏈空間的部分，其中該部分可以是1個(gè)或2個(gè)氨基酸或氨基酸結(jié)構(gòu)/功能類似物，包括非天然氨基酸、合成的氨基酸、氨基酸模仿物和嵌合分子。位置P2和P4是任意氨基酸，且P3是Trp或占據(jù)類似于Trp側(cè)鏈占據(jù)的側(cè)鏈空間的任意部分。
具有免疫調(diào)節(jié)和抗炎活性的化合物CBP501在一個(gè)實(shí)施方案中，CBP501(SEQ_ID_NO80)是如本文提供的免疫調(diào)節(jié)的和/或抗炎的化合物。CBP501的氨基酸序列(SEQ_ID_NO80)公開在表3中。使用能有效地鑒別出具有選擇性G2關(guān)卡廢除活性的化合物的基于表型的篩選，如美國申請(qǐng)系列號(hào)10/347,145所公開的，開發(fā)了細(xì)胞周期G2關(guān)卡廢除肽CBP501。如以前在美國申請(qǐng)系列號(hào)10/347,145中所公開的，CBP501會(huì)抑制參與細(xì)胞周期G2關(guān)卡的多種激酶的磷酸化活性，包括促分裂原活化激酶p38，且CBP501會(huì)結(jié)合14-3-3蛋白。在如本文所述的本發(fā)明中，測(cè)試了CBP501對(duì)特征在于免疫障礙或炎性反應(yīng)的疾病的作用，由變態(tài)反應(yīng)和關(guān)節(jié)炎的動(dòng)物模型得到的結(jié)果證實(shí)了CBP501具有免疫調(diào)節(jié)活性和抗炎活性。
在一個(gè)實(shí)施方案中，CBP501具有抗變態(tài)反應(yīng)活性，且可以用于治療變態(tài)反應(yīng)障礙。如下面實(shí)施例1和表1所示的，發(fā)現(xiàn)CBP501在被動(dòng)皮膚過敏癥(PCA)的大鼠模型中具有抗變態(tài)反應(yīng)活性，其中腹膜內(nèi)施用20、10和5mg/kg的CBP501分別將變態(tài)反應(yīng)抑制了93％、93％和87％。在相同的實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)中，CBP501的效力等于或大于抗組胺二苯環(huán)庚啶-HCl。
如下面實(shí)施例2和表2所示的，發(fā)現(xiàn)CBP501在佐劑誘導(dǎo)的大鼠關(guān)節(jié)炎中具有抗炎活性，其中作為單劑在腹膜內(nèi)施用10mg/kg，或每天一次5mg/kg，連續(xù)施用5天，在佐劑誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎的急性期和晚期中都產(chǎn)生了顯著的抗炎活性。在相同的實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)中，CBP501的效力等于或大于氫化可的松(每天30mg/kg，進(jìn)行5天)。
具有免疫調(diào)節(jié)活性和/或抗炎活性的CBP化合物CBP500、CBP504、CBP505、CBP506、CBP510、CBP511、CBP512和CBP603具有類似于肽CBP501(SEQ_ID_NO80)的G2關(guān)卡廢除活性的CBP化合物包括但不限于CBP500(SEQ_ID_NO124)、CBP504(SEQID_NO127)、CBP505(SEQ_ID_NO128)、CBP506(SEQ_ID_NO129)、CBP510(SEQ_ID_NO93)、CBP511(SEQ_ID_NO94)、CBP512(SEQ_ID_NO95)和CBP603(SEQ_ID_NO89)。所有前述CBP化合物的序列都公開在表3中。在一個(gè)實(shí)施方案中，CBP500(SEQID_NO124)是免疫調(diào)節(jié)的和/或抗炎的化合物，其可以用于治療特征在于免疫障礙或炎性反應(yīng)的疾病。在另一個(gè)實(shí)施方案中，CBP504(SEQ_ID_NO127)是免疫調(diào)節(jié)的和/或抗炎的化合物，其可以用于治療特征在于免疫障礙或炎性反應(yīng)的疾病。在另一個(gè)實(shí)施方案中，CBP505(SEQ_ID_NO128)是免疫調(diào)節(jié)的和/或抗炎的化合物，其可以用于治療特征在于免疫障礙或炎性反應(yīng)的疾病。在另一個(gè)實(shí)施方案中，CBP506(SEQ_ID_NO129)是免疫調(diào)節(jié)的和/或抗炎的化合物，其可以用于治療特征在于免疫障礙或炎性反應(yīng)的疾病。在另一個(gè)實(shí)施方案中，CBP510(SEQ_ID_NO93)是免疫調(diào)節(jié)的和/或抗炎的化合物，其可以用于治療特征在于免疫障礙或炎性反應(yīng)的疾病。在另一個(gè)實(shí)施方案中，CBP511(SEQ_ID_NO94)是免疫調(diào)節(jié)的和/或抗炎的化合物，其可以用于治療特征在于免疫障礙或炎性反應(yīng)的疾病。在另一個(gè)實(shí)施方案中，CBP512(SEQ_ID_NO95)是免疫調(diào)節(jié)的和/或抗炎的化合物，其可以用于治療特征在于免疫障礙或炎性反應(yīng)的疾病。在另一個(gè)實(shí)施方案中，CBP603(SEQ_ID_NO89)是免疫調(diào)節(jié)的和/或抗炎的化合物，其可以用于治療特征在于免疫障礙或炎性反應(yīng)的疾病。
可以測(cè)試其它的G2-關(guān)卡-廢除化合物，以確定它們的如本文所述的抗炎活性和/或免疫調(diào)節(jié)活性，且可以根據(jù)關(guān)于每一種活性的效力對(duì)化合物進(jìn)行排序。在一個(gè)實(shí)施方案中，評(píng)價(jià)了公開在表3中的示例性肽和肽模仿物的抗炎活性和/或免疫調(diào)節(jié)活性，例如，如實(shí)施例5所述，并且可以開發(fā)結(jié)構(gòu)-活性關(guān)系，以用于各種用途，包括藥物設(shè)計(jì)。
具有抗病毒活性的化合物CBP501根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)方面，本發(fā)明的化合物是如本文提供的具有抗病毒活性的CBP化合物。如美國申請(qǐng)系列號(hào)10/347,145所公開的，CBP化合物可以抑制參與細(xì)胞周期G2關(guān)卡的多種激酶的磷酸化活性。CBP化合物能結(jié)合14-3-3蛋白，它也參與細(xì)胞周期G2關(guān)卡信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑。1型人免疫缺陷病毒(HIV-1)、HIV-2、猿猴免疫缺陷病毒和其它慢病毒具有會(huì)造成細(xì)胞周期G2停滯的病毒蛋白vpr或有關(guān)的蛋白(Jowett等，J.Virol.696304-13(1995)；Roshal等，J.Biol.Chem.May_8，2003；Stivahtis，等，J.Virol_714331-8(1997))。Vpr對(duì)于HIV-1在淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞中的復(fù)制是必需的(Campbell和Hirsch，J.Virol，715593-602(1997)；Subbramanian，等，J.Exp.Med.，1871103-11(1998))。
根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)具體方面，化合物CBP501(SEQ_ID_NO80)是如本文提供的抗病毒的化合物。如實(shí)施例3和4所示，CBP501能體外地抑制HIV-1的復(fù)制，這證實(shí)了G2關(guān)卡廢除劑(abrogator)(例如CBP501)的抗病毒活性。
在一個(gè)實(shí)施方案中，CBP501能抑制HIV-1復(fù)制。如下面實(shí)施例3和圖1所示，CBP501通過抑制臨床兒科HIV株WeJo，在外周血單核細(xì)胞(PBMC)中顯示出抗病毒活性；確定了IC50(能將病毒復(fù)制抑制50％的濃度)是＝0.71μg/ml_CBP_501，確定了TC50(使細(xì)胞生存力降低50％的濃度)是＞80μg/ml_CBP501，且確定了TI(治療指數(shù)＝TC50/IC50)是＞113。應(yīng)當(dāng)指出，CBP501表現(xiàn)出非常低的體內(nèi)細(xì)胞毒性在該實(shí)施方案中測(cè)試的最高濃度80μg/ml，幾乎沒有影響細(xì)胞生存力(見，圖1)。已知了低細(xì)胞毒性，計(jì)算結(jié)果TC50＝＞80μg/ml_CBP501不是毒性的度量，而是估計(jì)。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，CBP501具有針對(duì)不同組織中的不同HIV株的抗病毒活性。例如，CBP501已經(jīng)抑制了PBMC中的HIV-1的WeJo株的復(fù)制，和人單核細(xì)胞/巨噬細(xì)胞中的HIV-1的Ba-L株的復(fù)制。如下面實(shí)施例4和圖2所示，CBP501通過抑制單核細(xì)胞/巨噬細(xì)胞中的HIV-1的Ba-L株的復(fù)制，表現(xiàn)出抗HIV-1的抗病毒活性，其中確定了IC50是＝6.5μg/ml_CBP501，確定了TC50是＞80μg/ml_CBP501，且確定了TI(治療指數(shù)＝TC50/IC50)是＞12.3。應(yīng)當(dāng)指出，CBP501表現(xiàn)出低的體內(nèi)細(xì)胞毒性在該實(shí)施方案中測(cè)試的最高濃度80μg/ml，細(xì)胞生存力僅僅降低了約25％(見，圖2)，所以計(jì)算結(jié)果TC50＝＞80μg/ml_CBP501不是毒性的度量，而是估計(jì)。
具有抗病毒活性的CBP化合物CBP500、CBP504、CBP505、CBP506、CBP510、CBP511、CBP512和CBP603具有類似于肽CBP501(SEQ_ID_NO80)的G2關(guān)卡廢除活性的CBP化合物包括但不限于CBP500(SEQ_ID_NO124)、CBP504(SEQID_NO127)、CBP505(SEQ_ID_NO128)、CBP506(SEQ_ID_NO129)、CBP510(SEQ_ID_NO93)、CBP511(SEQ_ID_NO94)、CBP512(SEQID_NO95)和CBP603(SEQ_ID_NO89)。所有前述CBP化合物的序列都公開在表3中。在一個(gè)實(shí)施方案中，CBP500(SEQ_ID_NO124)是抗病毒的化合物，其可以用于治療特征在于病毒感染的疾病。在另一個(gè)實(shí)施方案中，CBP504(SEQ_ID_NO127)是抗病毒的化合物，其可以用于治療特征在于病毒感染的疾病。在另一個(gè)實(shí)施方案中，CBP505(SEQ_ID_NO128)是抗病毒的化合物，其可以用于治療特征在于病毒感染的疾病。在另一個(gè)實(shí)施方案中，CBP506(SEQ_ID_NO129)是抗病毒的化合物，其可以用于治療特征在于病毒感染的疾病。在另一個(gè)實(shí)施方案中，CBP510(SEQ_ID_NO93)是抗病毒的化合物，其可以用于治療特征在于病毒感染的疾病。在另一個(gè)實(shí)施方案中，CBP511(SEQ_ID_NO94)是抗病毒的化合物，其可以用于治療特征在于病毒感染的疾病。在另一個(gè)實(shí)施方案中，CBP512(SEQ_IDNO95)是抗病毒的化合物，其可以用于治療特征在于病毒感染的疾病。在另一個(gè)實(shí)施方案中，CBP603(SEQ_ID_NO89)是抗病毒的化合物，其可以用于治療特征在于病毒感染的疾病。
化合物和藥物組合物的施用本發(fā)明提供了可以施用來達(dá)到需要的效果的化合物。本發(fā)明還提供了可以施用來達(dá)到需要的效果的藥物組合物，其中本發(fā)明的藥物組合物包含至少一種本發(fā)明的化合物和藥學(xué)上可接受的載體或賦形劑，且可以任選地包含其它成分。
本發(fā)明提供了至少一種本發(fā)明的化合物和脂質(zhì)體載體的組合。這種組合適用于治療例如HIV感染的狀況，其中已知該病毒會(huì)駐留在細(xì)胞內(nèi)(例如，單核細(xì)胞/巨噬細(xì)胞)，且還已知脂質(zhì)體會(huì)積累在那些細(xì)胞中。
本發(fā)明提供了至少一種本發(fā)明的化合物的制品，所述的化合物具有細(xì)胞膜透過序列，以輔助穿越細(xì)胞膜，如上所述。
根據(jù)能達(dá)到需要的效果的任意方案或途徑，可以全身地、區(qū)域地(例如，指向器官或組織)或局部地(例如，腔內(nèi)或局部地在皮膚上)施用本發(fā)明的化合物。每天(例如，以低劑量)，或間歇地(例如，每隔一天、每周一次等，以高劑量)，可以作為單劑或多劑施用化合物?？梢酝ㄟ^吸入(例如，氣管內(nèi)的)、經(jīng)口的、靜脈內(nèi)的、動(dòng)脈內(nèi)的、血管內(nèi)的、鞘內(nèi)的、腹膜內(nèi)的、肌內(nèi)的、皮下的、腔內(nèi)的、經(jīng)皮的(例如，局部的)或跨粘膜的(例如，口的、陰道的、子宮的、直腸的或鼻的)送遞，施用化合物和藥物組合物。通過持續(xù)釋放(例如，隨時(shí)間推移的逐步灌注)或在快速灌注方式(single_bolus)中，可以多次施用化合物和藥物組合物。
術(shù)語“受試者”指動(dòng)物，一般地是哺乳動(dòng)物，例如靈長(zhǎng)類動(dòng)物(人、猿、長(zhǎng)臂猿、黑猩猩、猩猩、獼猴)，家畜(狗、貓、鳥)，飼養(yǎng)動(dòng)物(馬、牛、山羊、綿羊、豬)和實(shí)驗(yàn)動(dòng)物(小鼠、大鼠、兔、豚鼠)。受試者包含動(dòng)物疾病模型。
施用的量一般地是“有效量”或“足夠量”，它是足以產(chǎn)生需要的效果的量。因此，有效量是能誘導(dǎo)G2關(guān)卡廢除和下述的一種或多種的量抑制或降低對(duì)炎癥、關(guān)節(jié)炎、自身免疫病、膠原病、變態(tài)反應(yīng)、哮喘、花粉病或特應(yīng)性的易感性；減少與炎癥、關(guān)節(jié)炎、自身免疫病、膠原病、變態(tài)反應(yīng)、哮喘、花粉病或特應(yīng)性有關(guān)的一種或多種癥狀；抑制或降低對(duì)病毒感染、特別是HIV感染的易感性；減少與病毒感染、特別是HIV感染有關(guān)的一種或多種癥狀。
有效量可以客觀地或主觀地減少或降低與炎癥、關(guān)節(jié)炎、自身免疫病、膠原病、變態(tài)反應(yīng)、哮喘、花粉病或特應(yīng)性或有關(guān)的障礙或狀況有關(guān)的癥狀的嚴(yán)重性或頻率。例如，能減少癢感、炎癥、疼痛、排出(discharge)或任何其它癥狀或有關(guān)狀況的本發(fā)明的化合物的量，是能產(chǎn)生令人滿意的臨床終點(diǎn)的有效量。有效量也包含用另一種藥物治療炎癥、關(guān)節(jié)炎、自身免疫病、膠原病、變態(tài)反應(yīng)、哮喘、花粉病或特應(yīng)性的治療量(例如，劑量)或頻率的減少，認(rèn)為它是令人滿意的臨床終點(diǎn)。
有效量可以客觀地或主觀地減少或降低與病毒感染、特別是HIV感染，或有關(guān)的障礙或狀況有關(guān)的癥狀的嚴(yán)重性或頻率。例如，能減少疼痛、發(fā)熱、皮膚障礙、體重喪失、惡心、腹瀉或任何其它癥狀或病毒感染有關(guān)狀況的本發(fā)明的化合物的量，是能產(chǎn)生令人滿意的臨床終點(diǎn)的有效量。有效量也包含用另一種抗病毒藥物、特別是抗-HIV藥物治療量(例如，劑量)或頻率的減少，認(rèn)為它是令人滿意的臨床終點(diǎn)。
能導(dǎo)致受試者狀況的改善或治療益處的本發(fā)明的方法的持續(xù)時(shí)間可以是相對(duì)短的，例如改善可以持續(xù)幾小時(shí)、幾天或幾周，或延續(xù)更長(zhǎng)的時(shí)間段，例如幾月或幾年。有效量不需要完全消除狀況或障礙的任意或所有癥狀。因而，當(dāng)存在短時(shí)間段的或長(zhǎng)時(shí)間段的受試者狀況的主觀或客觀改善時(shí)，如使用任意的前述標(biāo)準(zhǔn)或本領(lǐng)域已知的適用于確定障礙或狀況的狀態(tài)的其它標(biāo)準(zhǔn)所確定的，則達(dá)到了有效量的令人滿意的臨床終點(diǎn)。如本文所述的或本領(lǐng)域已知的，提供一種或多種有益效果的有效量稱作受試者狀況的“改善”或?qū)κ茉囌叩摹爸委熞嫣帯薄?br> 在動(dòng)物研究的基礎(chǔ)上，或任選地在人臨床試驗(yàn)中，可以確定本發(fā)明的化合物的有效量。技術(shù)人員能夠明白可能影響治療特定受試者所需的劑量或時(shí)間選擇的各種因素，包括，例如，受試者的總體健康、年齡或性別，障礙或狀況的嚴(yán)重性或病期，以前的治療，對(duì)不想要的副作用的易感性，所需的臨床結(jié)果，或其它障礙或狀況的存在。這些因素可能影響提供足以實(shí)現(xiàn)治療益處的量所需的劑量或時(shí)間選擇。
本發(fā)明的化合物在篩選中的用途本發(fā)明提供了使用本發(fā)明的化合物篩選具有抗炎活性和/或免疫調(diào)節(jié)活性和/或抗病毒活性的化合物的方法。
使用包含一種或多種本發(fā)明的肽或肽模仿物化合物的競(jìng)爭(zhēng)測(cè)定，優(yōu)選地使用一種或多種具有已知治療效果的化合物，可以篩選實(shí)驗(yàn)化合物。根據(jù)一個(gè)方面，通過在有本發(fā)明的標(biāo)記化合物存在的情況下，將組織樣品與實(shí)驗(yàn)化合物的濃度系列一起溫育，并測(cè)量結(jié)合到每種組織樣品上的標(biāo)記的化合物的量，確定了實(shí)驗(yàn)化合物與本發(fā)明的標(biāo)記化合物競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合位點(diǎn)的能力。應(yīng)當(dāng)理解，在有已知量的實(shí)驗(yàn)化合物存在的情況下，結(jié)合到組織樣品上的標(biāo)記的化合物的量的降低，表明該實(shí)驗(yàn)化合物會(huì)競(jìng)爭(zhēng)與本發(fā)明的標(biāo)記化合物相同的結(jié)合位點(diǎn)。為了用于競(jìng)爭(zhēng)性篩選測(cè)定，可以用任何可檢測(cè)的標(biāo)記物標(biāo)記本發(fā)明的化合物，但是所述標(biāo)記物不會(huì)妨礙化合物結(jié)合它的作用位點(diǎn)和實(shí)現(xiàn)治療效果的能力。合適的標(biāo)記物包括但不限于放射性標(biāo)記、熒光標(biāo)記、產(chǎn)色標(biāo)記、生物素、鏈霉抗生物素蛋白和地高辛。本領(lǐng)域的技術(shù)人員可以使用標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)來確定實(shí)驗(yàn)化合物對(duì)本發(fā)明的標(biāo)記化合物結(jié)合的結(jié)合位點(diǎn)的結(jié)合親和力。
根據(jù)另一個(gè)方面，通過測(cè)量實(shí)驗(yàn)化合物取代本發(fā)明的治療性化合物在測(cè)定系統(tǒng)中引起已知反應(yīng)的能力，確定了實(shí)驗(yàn)化合物的效力。應(yīng)當(dāng)理解，本發(fā)明的治療性化合物具有免疫調(diào)節(jié)活性和/或抗炎活性和/或抗病毒活性。還應(yīng)當(dāng)理解，用于測(cè)量本發(fā)明的治療性化合物引起的反應(yīng)的測(cè)定系統(tǒng)可以直接測(cè)量免疫調(diào)節(jié)活性和/或抗炎活性和/或抗病毒活性，例如，在疾病的動(dòng)物模型或患有該疾病的人受試者中?；蛘?，用于測(cè)量本發(fā)明的治療性化合物引起的反應(yīng)的測(cè)定系統(tǒng)可以通過測(cè)量例如，基因表達(dá)、蛋白修飾(例如，激酶-介導(dǎo)的磷酸化)、免疫或炎性反應(yīng)的介質(zhì)的釋放、免疫或炎性反應(yīng)的介質(zhì)效應(yīng)的阻斷、細(xì)胞分化、細(xì)胞募集、細(xì)胞增殖等，間接測(cè)量免疫調(diào)節(jié)活性和/或抗炎活性和/或抗病毒活性。在一個(gè)示例性的實(shí)施方案中，篩選了實(shí)驗(yàn)化合物的抑制組胺釋放的能力，并將造成特定水平的抑制所需的實(shí)驗(yàn)化合物濃度與造成相同水平的抑制所需的本發(fā)明的化合物濃度進(jìn)行了對(duì)比。在有些實(shí)施方案中，治療性化合物會(huì)引起復(fù)雜的治療反應(yīng)，并通過測(cè)量，例如，如實(shí)施例1和2所述的在人疾病動(dòng)物模型中的免疫調(diào)節(jié)或抗炎作用，或通過如實(shí)施例3和4所述的在人疾病的細(xì)胞培養(yǎng)物模型中的抗病毒活性，確定了治療性化合物的效力?？梢院Y選實(shí)驗(yàn)化合物在測(cè)定系統(tǒng)中引起與本發(fā)明的治療性化合物引起的相同的治療反應(yīng)的能力。在某些實(shí)施方案中，可以在相同測(cè)定系統(tǒng)中測(cè)量實(shí)驗(yàn)化合物和本發(fā)明的治療性化合物，從而提供了一種方法，由此可以篩選實(shí)驗(yàn)化合物的加強(qiáng)(提高，增強(qiáng))由本發(fā)明的化合物引起的治療反應(yīng)的能力。
根據(jù)另一個(gè)方面，在它們的結(jié)構(gòu)的基礎(chǔ)上，本發(fā)明的化合物可以用于鑒別潛在有效的化合物，其中對(duì)本發(fā)明的化合物進(jìn)行的結(jié)構(gòu)-活性研究，例如，如實(shí)施例5所述，能提供對(duì)比未知實(shí)驗(yàn)化合物的結(jié)構(gòu)和具有已知抗炎活性和/或免疫調(diào)節(jié)活性和/或抗病毒活性的本發(fā)明化合物的結(jié)構(gòu)的方法。本發(fā)明的化合物可以用于產(chǎn)生結(jié)構(gòu)-活性數(shù)據(jù)庫，其可以用于評(píng)價(jià)和選擇要篩選的實(shí)驗(yàn)化合物。這樣的結(jié)構(gòu)-活性數(shù)據(jù)庫也可以用于設(shè)計(jì)新的要篩選的實(shí)驗(yàn)化合物，其中預(yù)期新實(shí)驗(yàn)化合物會(huì)表現(xiàn)出提高的活性/性質(zhì)，和測(cè)試目前的結(jié)構(gòu)-活性模型的有效性。通過產(chǎn)生從選定的識(shí)別出的試劑的組合合成新的實(shí)驗(yàn)化合物的說明，可以實(shí)現(xiàn)源自結(jié)構(gòu)-活性數(shù)據(jù)庫的預(yù)測(cè)。
已經(jīng)描述了本發(fā)明的許多實(shí)施方案。然而，應(yīng)當(dāng)明白，可以進(jìn)行各種修改，而不脫離本發(fā)明的精神或范圍。因此，下面的實(shí)施例意在解釋而不是限制權(quán)利要求書所述的發(fā)明范圍。
實(shí)施例實(shí)施例1.CBP501的抗大鼠被動(dòng)皮膚過敏癥的活性評(píng)價(jià)了CBP501(SEQ_ID_NO80)在Wistar大鼠的被動(dòng)皮膚過敏癥(PCA)模型中的抗變態(tài)反應(yīng)活性。在用卵清蛋白和Evans_Blue染料的混合物攻擊前30分鐘，以20、10和5mg/kg的劑量，腹膜內(nèi)地(IP)施用CBP501。20、10和5mg/kg的CBP501證實(shí)了非常顯著的抗變態(tài)反應(yīng)作用，分別相對(duì)于載體對(duì)照組抑制了93％、93％和87％。同時(shí)進(jìn)行使用抗組胺二苯環(huán)庚啶-HCl的實(shí)驗(yàn)作為對(duì)照腹膜內(nèi)1mg/kg的二苯環(huán)庚啶-HCl表現(xiàn)出顯著的抗變態(tài)反應(yīng)作用(87％抑制)。
材料與方法將CBP501溶解到0.9％NaCl中。在用卵清蛋白和Evans_Blue染料的混合物攻擊前30分鐘，腹膜內(nèi)地(IP)施用20、10和5mg/kg的CBP501。
動(dòng)物MDS_Pharma_Services-Taiwan_Ltd.的動(dòng)物飼養(yǎng)中心提供了雄性或雌性Wistar大鼠。6只動(dòng)物的空間分配是45×23×21cm。在使用前，將所有動(dòng)物都維持在衛(wèi)生環(huán)境中，在控制的溫度(21.5-22.5℃)和濕度(50％-70％)環(huán)境中，12小時(shí)光照-黑暗周期，持續(xù)至少一周，飼養(yǎng)在MDS_Pharma_Services-Taiwan_Laboratory中。通常根據(jù)涉及動(dòng)物的生物醫(yī)學(xué)研究的國際指導(dǎo)原則(InternationalGuiding_Principles_for_Biomedical_Research_InvolvingAnimals)(CIOMS公開號(hào)ISBN_92_90360194，1985)，進(jìn)行包括圈養(yǎng)(housing)、動(dòng)物的實(shí)驗(yàn)和處置在內(nèi)的該工作的所有方面。
化學(xué)試劑使用了二苯環(huán)庚啶-HCl(RBI-美國)、無水乙醇(Merck，德國)、蒸餾水(內(nèi)部的(in-house))Evans_Blue(Fluka，瑞士)和卵清蛋白(Sigma-Aldrich，美國)。
施用方法通過在背側(cè)面的2個(gè)點(diǎn)上皮內(nèi)注射反應(yīng)素的(IgE)抗卵清蛋白血清(0.05ml)前16小時(shí)，被動(dòng)敏化了5組重80+/-10g的Wistar-衍生的雄性大鼠，每組三(3)只。以5、10和20mg/kg腹膜內(nèi)施用CBP501。施用CBP501后30分鐘內(nèi)，用卵清蛋白(1mg)和Evans_Blue染料(5mg)的混合物靜脈內(nèi)地(IV)攻擊動(dòng)物。攻擊后30分鐘，處死動(dòng)物。
結(jié)果對(duì)于每只動(dòng)物，取2次測(cè)量的傷痕直徑的平均值，并如下進(jìn)行打分如果為＜0.05cm，則為0，如果為0.05-0.2cm，則為1，如果為0.2-0.4cm，則為2，如果為0.4-0.6cm，則為3，如果為0.6-0.8cm，則為4，和如果為＞0.8cm，則為5。每只動(dòng)物的最大可能分?jǐn)?shù)總計(jì)2×5＝10。與載體對(duì)照組相比，將得到的PCA藍(lán)染色的傷痕抑制50％或更多，指示著可能的抗變態(tài)反應(yīng)活性。結(jié)果如下面的表1所示，其中用星號(hào)(*)標(biāo)記顯著變化。
實(shí)施例2.CBP501的抗佐劑誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎的活性在完全弗氏佐劑(CFA)-誘導(dǎo)的大鼠關(guān)節(jié)炎中，評(píng)價(jià)了實(shí)驗(yàn)物質(zhì)CBP501(SEQ_ID_NO80)的可能的抗炎活性。CFA是一種含有分枝桿菌細(xì)胞壁組分的油包水乳劑，當(dāng)用作佐劑時(shí)，其會(huì)加強(qiáng)對(duì)注射的抗原的體液抗體反應(yīng)。因?yàn)镃FA也會(huì)刺激局部免疫反應(yīng)，所以注射CFA自身也會(huì)提供有用的關(guān)節(jié)炎動(dòng)物模型(佐劑誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎)。以10mg/kg作為單劑，或以每天一次2.5和5mg/kg，連續(xù)5天，腹膜內(nèi)地(IP)施用CBP501。在CFA注射后4小時(shí)(記為第1天)和在第5天，測(cè)量右后爪體積，并在第14和18天，測(cè)量對(duì)側(cè)左后爪體積。在該模型中，10mg/kg(單劑)和5mg/kg(×5劑)的CBP501在急性期和晚期中都表現(xiàn)出顯著的抗炎活性。但是，2.5mg/kg(×5劑)的CBP501僅僅在急性期中表現(xiàn)出中等的、但是非顯著的活性，且在晚期中無活性。同時(shí)進(jìn)行了使用氫化可的松的實(shí)驗(yàn)作為對(duì)照以每天30mg/kg，持續(xù)5天，施用氫化可的松，在急性期中表現(xiàn)出顯著活性，且在晚期中表現(xiàn)出接近顯著的活性。結(jié)果顯示在表中，其中用星號(hào)(*)標(biāo)記了顯著值。這些結(jié)果表明，10mg/kg_IP或5mg/kg×5_IP的CBP501，在CFA-誘導(dǎo)的大鼠關(guān)節(jié)炎中表現(xiàn)出顯著的抗炎活性。
材料與方法實(shí)驗(yàn)物質(zhì)和給藥模式以5ml/kg的體積，將CBP501溶于0.9％NaCl中。在第1天，以10mg/kg，一次腹膜內(nèi)地(IP)注射CBP501。每天一次IP施用2.5或5mg/kg的CBP501、單獨(dú)的載體(載體對(duì)照)或氫化可的松(30mg/kg)，連續(xù)5天。在用CFA攻擊前1小時(shí)，進(jìn)行第一次給藥。
動(dòng)物從Charles_River_Japan_Inc得到了雄性Lewis大鼠。6只動(dòng)物的空間分配是45×23×21cm。在使用前，將所有動(dòng)物都維持在控制的溫度(23-25℃)和濕度(60-70％)環(huán)境中，12小時(shí)光照-黑暗周期，持續(xù)至少一周，飼養(yǎng)在MDS_Pharma_Services-TaiwanLaboratory中。允許大鼠自由獲得大鼠的標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室食物(Lab_Diet，Rodent_Diet，PMI_Nutrition_International，美國)和自來水。通常根據(jù)涉及動(dòng)物的生物醫(yī)學(xué)研究的國際指導(dǎo)原則(CIOMS公開號(hào)ISBN92_90360194，1985)，進(jìn)行包括圈養(yǎng)、動(dòng)物的實(shí)驗(yàn)和處置在內(nèi)的該工作的所有方面。
化學(xué)試劑使用了無致熱原的鹽水(Sintong，R.O.C.)、氫化可的松(Sigma-Aldrich，美國)、礦物油(Wako，日本)和結(jié)核分枝桿菌(Mycobacterium_tuberculosis)(DIFCO，美國)。
裝置在這些實(shí)驗(yàn)中使用了動(dòng)物籠(ShinTeh，R.O.C.)，玻璃注射器(1ml和2ml，Mitsuba，日本)，皮下注射針頭(25G×1”，Top_Corporation，日本)，容積測(cè)量器(plethysmometer)(目錄號(hào)7150，UGO_Basile，意大利)，水室(water_cell)(25mm直徑，目錄號(hào)7157，UGO_Basile，意大利)，大鼠天平(2.5g-500g，Misaki，日本)和大鼠口針(oral_needle)(Natsume，日本)。
方法使用了5組重160±10g的Lewis衍生的雄性大鼠，每組5只。以10mg/kg(單劑)或2.5和5mg/kg(每天一次，連續(xù)5天)，腹膜內(nèi)地施用了實(shí)驗(yàn)物質(zhì)CBP501。在第1天首次給藥(記為第1天)后1小時(shí)，將含有殺死的結(jié)核分枝桿菌的懸浮液(0.3mg溶于0.1ml輕礦物油中)的完全弗氏佐劑(CFA)注射進(jìn)右后爪的腳底下區(qū)域。通過容積測(cè)量器和水室(25mm直徑)，測(cè)量了后爪體積在第0天(CFA攻擊前)、第1天和第5天，測(cè)量右爪(注射了CFA)；在第0天、第14天和第18天，測(cè)量左爪(未注射CFA)。在即將首次給藥前和在最后一次給藥后1小時(shí)，稱量大鼠的重量。對(duì)于CFA-注射的載體對(duì)照大鼠，第5天與第1天相比爪體積的增加(炎癥的急性期)通常是0.7-0.9ml；第18天與第14天相比(炎癥的晚期)的增加通常是0.2-0.4ml。因而，通過在急性期和晚期過程中計(jì)算出的值，確定了該模型的抗炎活性。在第0天和第18天，也稱量了動(dòng)物；在該時(shí)間段，CFA-注射的載體對(duì)照動(dòng)物的體重一般增加了20-50g。認(rèn)為與載體處理的對(duì)照相比，30％或更大(＞30％)的爪體積減少是顯著的。結(jié)果如下面表2所示，其中用星號(hào)(*)標(biāo)記了顯著的抑制值(與載體對(duì)照相比，＞30％)。
實(shí)施例3.CBP501對(duì)PBMC中的HIV-1復(fù)制的抑制使用臨床兒科HIV株WeJo，測(cè)試了CBP501針對(duì)外周血單核細(xì)胞(PBMC)中的HIV-1的抗病毒活性。PBMC源自正常的HIV-1-陰性的供體，并在能促進(jìn)細(xì)胞存活和HIV復(fù)制的條件下培養(yǎng)。通過檢測(cè)樣品中的胞外HIV-1p24蛋白的量，測(cè)量了抗病毒活性，其中p24水平的降低指示著抗病毒活性。通過四氮唑染料還原方法，測(cè)量了細(xì)胞毒性。分析了100μg/ml_CBP501原液的系列稀釋液的抗病毒活性。使用該化合物的系列稀釋液進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)，產(chǎn)生了0.3125-80μg/ml_CBP501的系列濃度。結(jié)果如圖1所示。
如圖1所示，確定了IC50(能將病毒復(fù)制抑制50％的濃度)是＝0.71μg/ml_CBP501，確定了TC50(使細(xì)胞生存力降低50％的濃度)是＞80μg/ml_CBP501(應(yīng)當(dāng)指出，在測(cè)試的最高濃度80μg/ml，幾乎沒有影響細(xì)胞生存力)，且確定了TI(治療指數(shù)＝TC50/IC50)是＞113。應(yīng)當(dāng)指出，CBP501在圖1中也稱作SF322。
實(shí)施例4.CBP501對(duì)人巨噬細(xì)胞中的HIV-1復(fù)制的抑制使用HIV株Ba-L，評(píng)價(jià)了CBP501在單核細(xì)胞/巨噬細(xì)胞中的抗病毒活性。單核細(xì)胞/巨噬細(xì)胞源自正常的HIV-1-陰性的供體，并在能促進(jìn)細(xì)胞存活和HIV復(fù)制的條件下培養(yǎng)。通過檢測(cè)樣品中的胞外HIV-1p24蛋白的量，測(cè)量了抗病毒活性，其中p24水平的降低指示著抗病毒活性。通過四氮唑染料還原方法，測(cè)量了細(xì)胞毒性。分析了100μg/ml_CBP501原液的系列稀釋液的抗病毒活性。使用該化合物的系列稀釋液進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)，產(chǎn)生了0.3125-80μg/ml_CBP_501的系列濃度。結(jié)果如圖2所示。
如圖2所示，確定了IC50(能將病毒復(fù)制抑制50％的濃度)是＝6.5μg/ml_CBP501，確定了TC50(使細(xì)胞生存力降低50％的濃度)是＞80μg/ml_CBP501(應(yīng)當(dāng)指出，在測(cè)試的最高濃度80μg/ml，細(xì)胞生存力僅僅降低了約25％)，且確定了TI(治療指數(shù)＝TC50/IC50)是＞12.3。應(yīng)當(dāng)指出，CBP501在圖2中也稱作SF322。
實(shí)施例5.本發(fā)明的示例性的肽和肽模仿物的結(jié)構(gòu)-活性關(guān)系如上面實(shí)施例1-4所述，測(cè)試了如表3所示的本發(fā)明的示例性的肽和肽模仿物的抗炎活性、免疫調(diào)節(jié)活性和抗病毒活性。通過采用美國申請(qǐng)系列號(hào)10/347,145中公開的方法，可以確定結(jié)構(gòu)-活性關(guān)系。簡(jiǎn)而言之，通過進(jìn)行實(shí)驗(yàn)來確定每種化合物關(guān)于一類活性的效力，隨后根據(jù)它們的關(guān)于每類活性的效力，即(a)抗炎活性；(b)免疫調(diào)節(jié)活性；和/或(c)抗病毒活性，對(duì)化合物進(jìn)行排序，確定了表3所列的示例性化合物的結(jié)構(gòu)-活性關(guān)系。應(yīng)當(dāng)理解，本領(lǐng)域的技術(shù)人員可以選擇實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)來確定每種化合物關(guān)于任意種類活性(試圖確定它的結(jié)構(gòu)-活性)的效力。還應(yīng)當(dāng)理解，本領(lǐng)域的技術(shù)人員可以選擇能確定超過一類活性的實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)，例如，實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)可以包含變態(tài)反應(yīng)模型(例如實(shí)施例1所述的PCA模型)和實(shí)施例2所述的關(guān)節(jié)炎模型，以測(cè)量要測(cè)試的化合物的免疫調(diào)節(jié)活性和抗炎活性。
為了確定表3所列的示例性化合物關(guān)于抗炎活性的結(jié)構(gòu)-活性關(guān)系，進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)來確定每種化合物關(guān)于它的抗炎活性的效力，例如，使用上面實(shí)施例2所述的實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)來定量地測(cè)量炎性反應(yīng)，并根據(jù)它們?cè)趯?shí)驗(yàn)系統(tǒng)中作為抗炎劑的效力，對(duì)化合物進(jìn)行排序。如實(shí)施例2所述的關(guān)節(jié)炎模型也適用于確定化合物關(guān)于免疫調(diào)節(jié)活性的效力。
為了確定表3所列的示例性化合物關(guān)于免疫調(diào)節(jié)活性的結(jié)構(gòu)-活性關(guān)系，進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)來確定每種化合物關(guān)于它的免疫調(diào)節(jié)活性的效力，例如，使用上面實(shí)施例1所述的實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)來定量地測(cè)量免疫反應(yīng)，并根據(jù)它們的關(guān)于免疫調(diào)節(jié)活性的效力，對(duì)化合物進(jìn)行排序。
為了確定表3所列的示例性化合物關(guān)于抗病毒活性的結(jié)構(gòu)-活性關(guān)系，進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)來確定每種化合物關(guān)于它的抗病毒活性的效力，例如，使用如實(shí)施例3或4所述的實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)來定量地測(cè)量病毒感染的指示物(在這里，是病毒復(fù)制)，并根據(jù)它們的關(guān)于抗病毒活性的效力，對(duì)化合物進(jìn)行排序。
對(duì)于每類活性，通過檢查具有高水平活性、中等水平活性和低水平活性的化合物的結(jié)構(gòu)，并鑒定出具有理想水平活性的化合物的共有特征，確定了結(jié)構(gòu)-活性關(guān)系。
表3.示例性的肽和肽模仿物的序列、SEQ_ID_NO和CBP編號(hào)
權(quán)利要求
1.通過施用有效量的G2-關(guān)卡-廢除肽或肽模仿物，治療特征在于免疫障礙、炎性反應(yīng)或病毒感染的疾病的方法，所述的肽或肽模仿物包含結(jié)構(gòu)P1、P2、P3、P4、P5、P6、P7、P8、P9、P10、P11(SEQID_NO253)或P6、P7、P8、P9、P10、P11、P1、P2、P3、P4、P5(SEQID_NO253)，其中P1是Bpa、Tyr、Phe、(Cha)(Phe-2，3，4，5，6-F)、TyrTyr、PhePhe或占據(jù)類似的側(cè)鏈空間的部分；P2是任意氨基酸；P3是Trp或占據(jù)類似的側(cè)鏈空間的部分；P4是任意氨基酸；P5是Bpa、Tyr、Phe、(Cha)(Phe-2，3，4，5，6-F)、TyrTyr、PhePhe或占據(jù)類似的側(cè)鏈空間的部分；且P6、P7、P8、P9、P10、P11包含至少一個(gè)Arg，且另外其中任意的非-Arg位置是任意氨基酸或沒有。
2.權(quán)利要求1的方法，其中P6、P7、P8、P9、P10、P11包含5個(gè)Arg。
3.權(quán)利要求1的方法，其中在P1處的部分包含1個(gè)或2個(gè)氨基酸或氨基酸結(jié)構(gòu)/功能類似物。
4.權(quán)利要求1的方法，其中在P5處的部分包含1個(gè)或2個(gè)氨基酸或氨基酸結(jié)構(gòu)/功能類似物。
5.權(quán)利要求1的方法，包含施用CBP500(SEQ_ID_NO124)。
6.權(quán)利要求1的方法，包含施用CBP501(SEQ_ID_NO80)。
7.權(quán)利要求1的方法，包含施用CBP504(SEQ_ID_NO127)。
8.權(quán)利要求1的方法，包含施用CBP505(SEQ_ID_NO128)。
9.權(quán)利要求1的方法，包含施用CBP506(SEQ_ID_NO129)。
10.權(quán)利要求1的方法，包含施用CBP510(SEQ_ID_NO93)。
11.權(quán)利要求1的方法，包含施用CBP511(SEQ_ID_NO94)。
12.權(quán)利要求1的方法，包含施用CBP512(SEQ_ID_NO95)。
13.權(quán)利要求1的方法，包含施用CBP603(SEQ_ID_NO89)。
14.權(quán)利要求1的方法，其中所述疾病的特征在于免疫障礙。
15.權(quán)利要求1的方法，其中所述疾病的特征在于炎性反應(yīng)。
16.權(quán)利要求1的方法，其中所述疾病的特征在于免疫障礙和炎性反應(yīng)。
17.權(quán)利要求1的方法，其中所述疾病是炎癥。
18.權(quán)利要求1的方法，其中所述疾病是關(guān)節(jié)炎。
19.權(quán)利要求1的方法，其中所述疾病是自身免疫疾病。
20.權(quán)利要求1的方法，其中所述疾病是膠原病。
21.權(quán)利要求1的方法，其中所述疾病是變態(tài)反應(yīng)。
22.權(quán)利要求1的方法，其中所述疾病是哮喘。
23.權(quán)利要求1的方法，其中所述疾病是花粉病。
24.權(quán)利要求1的方法，其中所述疾病是特應(yīng)性。
25.權(quán)利要求1的方法，其中所述疾病的特征在于病毒感染。
26.權(quán)利要求1的方法，其中所述疾病的特征在于病毒感染和免疫障礙。
27.權(quán)利要求1的方法，其中所述疾病的特征在于病毒感染和炎性反應(yīng)。
28.權(quán)利要求1的方法，其中所述疾病是HIV_AIDS。
29.權(quán)利要求1的方法，其中所述肽或肽模仿物通過抑制病毒復(fù)制治療疾病。
30.權(quán)利要求30的方法，其中所述肽或肽模仿物能抑制HIV復(fù)制。
31.篩選具有免疫調(diào)節(jié)活性、抗炎活性或抗病毒活性的化合物的方法，其包括(a)提供實(shí)驗(yàn)化合物；(b)提供標(biāo)記的化合物，其中該化合物是G2-關(guān)卡-廢除肽或肽模仿物，其包含結(jié)構(gòu)P1、P2、P3、P4、P5、P6、P7、P8、P9、P10、P11(SEQ_ID_NO253)或P6、P7、P8、P9、P10、P11、P1、P2、P3、P4、P5(SEQ_ID_NO253)，其中P1是Bpa、Tyr、Phe、(Cha)(Phe-2，3，4，5，6-F)、TyrTyr、PhePhe或占據(jù)類似的側(cè)鏈空間的部分；P2是任意氨基酸；P3是Trp或占據(jù)類似的側(cè)鏈空間的部分；P4是任意氨基酸；P5是Bpa、Tyr、Phe、(Cha)(Phe-2，3，4，5，6-F)、TyrTyr、PhePhe或占據(jù)類似的側(cè)鏈空間的部分；且P6、P7、P8、P9、P10、P11包含至少一個(gè)Arg，且另外其中任意的非-Arg位置是任意氨基酸或沒有；(c)在有已知量的步驟(b)的標(biāo)記的化合物存在的情況下，使組織樣品接觸已知量的實(shí)驗(yàn)化合物；和(d)測(cè)量結(jié)合到組織樣品上的步驟(b)的標(biāo)記的化合物的量。
32.權(quán)利要求31的方法，其中將許多組織樣品與實(shí)驗(yàn)化合物的濃度系列一起溫育，其中所述濃度系列包含許多已知量的實(shí)驗(yàn)化合物。
33.權(quán)利要求31的方法，其中所述步驟(b)的標(biāo)記的化合物具有免疫調(diào)節(jié)活性。
34.權(quán)利要求31的方法，其中所述步驟(b)的標(biāo)記的化合物具有抗炎活性。
35.權(quán)利要求31的方法，其中所述步驟(b)的標(biāo)記的化合物具有抗病毒活性。
36.篩選具有免疫調(diào)節(jié)活性、抗炎活性或抗病毒活性的化合物的方法，其包括(a)提供實(shí)驗(yàn)化合物；(b)提供具有免疫調(diào)節(jié)活性、抗炎活性或抗病毒活性的治療性化合物，其中治療性化合物能在測(cè)定系統(tǒng)中引起已知的反應(yīng)，且另外其中化合物是G_2-關(guān)卡-廢除肽或肽模仿物，其包含結(jié)構(gòu)P1、P2、P3、P4、P5、P6、P7、P8、P9、P10、P11(SEQ_ID_NO253)或P6、P7、P8、P9、P10、P11、P1、P2、P3、P4、P5(SEQ_ID_NO253)，其中P1是Bpa、Tyr、Phe、(Cha)(Phe-2，3，4，5，6-F)、Tyr_Tyr、PhePhe或占據(jù)類似的側(cè)鏈空間的部分；P2是任意氨基酸；P3是Trp或占據(jù)類似的側(cè)鏈空間的部分；P4是任意氨基酸；P5是Bpa、Tyr、Phe、(Cha)(Phe-2，3，4，5，6-F)、TyrTyr、PhePhe或占據(jù)類似的側(cè)鏈空間的部分；且P6、P7、P8、P9、P10、P11包含至少一個(gè)Arg，且另外其中任意的非-Arg位置是任意氨基酸或沒有；(c)向測(cè)定系統(tǒng)施用已知量的實(shí)驗(yàn)化合物，并確定實(shí)驗(yàn)化合物引起的反應(yīng)；(d)向測(cè)定系統(tǒng)施用已知量的治療性化合物，并確定實(shí)驗(yàn)性化合物引起的反應(yīng)；且(e)對(duì)比實(shí)驗(yàn)化合物引起的反應(yīng)和治療性化合物引起的反應(yīng)。
37.權(quán)利要求36的方法，其中所述治療性化合物引起的反應(yīng)指示著免疫調(diào)節(jié)活性。
38.權(quán)利要求36的方法，其中所述治療性化合物引起的反應(yīng)指示著抗炎活性。
39.權(quán)利要求36的方法，其中所述治療性化合物引起的反應(yīng)指示著抗病毒活性。
40.權(quán)利要求36的方法，其中向相同的測(cè)定系統(tǒng)中施用實(shí)驗(yàn)化合物和治療性化合物。
全文摘要
本發(fā)明提供了具有免疫調(diào)節(jié)活性和/或抗炎活性和/或抗病毒活性的化合物，其中本發(fā)明的化合物包含肽和肽模仿物。本發(fā)明還提供了使用本發(fā)明的免疫調(diào)節(jié)的和/或抗炎的和/或抗病毒的化合物的方法。具體地，本發(fā)明提供了通過施用足以抑制疾病的量的G2－關(guān)卡－廢除肽或肽模仿物，治療與免疫障礙或炎癥或病毒感染有關(guān)的疾病的方法。
文檔編號(hào)A61P29/00GK1812805SQ200480018002
公開日2006年8月2日 申請(qǐng)日期2004年6月25日 優(yōu)先權(quán)日2003年6月25日
發(fā)明者河邊拓己, 小林榮孝 申請(qǐng)人:坎巴斯有限公司