專利名稱：創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及用于促進(jìn)創(chuàng)傷愈合的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料、其制造方法、制備裝置和利用上述材料、方法、裝置促進(jìn)創(chuàng)傷部位再生的方法。
背景技術(shù)：
近年，相繼闡明有關(guān)創(chuàng)傷愈合的機(jī)理，作為其中之一，已知如白細(xì)胞、血小板這種血液中的細(xì)胞所產(chǎn)生的多種生長因子對組織再生起重要作用。
這里提到的生長因子是指基于復(fù)雜的細(xì)胞間的網(wǎng)絡(luò)關(guān)系，直接或間接干預(yù)從血液凝固、炎癥細(xì)胞游走直至成纖維細(xì)胞增殖、細(xì)胞外間質(zhì)的合成、血管新生和它們的再修復(fù)等諸多創(chuàng)傷愈合現(xiàn)象的物質(zhì)。例如，正在闡明作為衍生于血小板的生長因子之一而被發(fā)現(xiàn)的PDGF(血小板衍生生長因子，plate-derived growth factor)對成纖維細(xì)胞或平滑肌細(xì)胞的游走、促進(jìn)增殖、單核-中性粒細(xì)胞的強(qiáng)效趨化作用、以及其作為成纖維細(xì)胞的膠原蛋白、膠原蛋白酶合成促進(jìn)因子的作用。對此，Pierce等人的小組在兔耳朵上制造深達(dá)軟骨的創(chuàng)傷并給與PDGF-BB時(shí)發(fā)現(xiàn)其損傷修復(fù)比不給與PDGF-BB的損傷要快的多(J.cellBiochem.1991 45319-326)。顧名思義在血小板中含有大量的PDGF，此外巨噬細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞或平滑肌細(xì)胞等細(xì)胞也產(chǎn)生PDGF。作為與創(chuàng)傷愈合有關(guān)的生長因子，除PDGF-BB外，還闡明了FGF(成纖維細(xì)胞生長因子，fibroblast growth factor)、VEGF(血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子，vascular endothelial growth factor)、TGF-β(轉(zhuǎn)化生長因子，transforming growth factor)、EGF(表皮生長因子，epidermal growth factor)等生長因子，其中的一部分已逐漸應(yīng)用于臨床。
作為創(chuàng)傷愈合的另一種機(jī)理，還可以從與血細(xì)胞自身的創(chuàng)傷愈合相關(guān)這一角度得到幾點(diǎn)結(jié)論。例如，Kalka等把外周血中的單核細(xì)胞在體外進(jìn)行培養(yǎng)后，將其移植到進(jìn)行過血管狹窄處理的裸鼠的缺血部位，結(jié)果顯示細(xì)胞移植成功，并重新生成血管，愈合了缺血部位。除了從產(chǎn)生上述生長因子的方面考慮，從其與血管新生直接相關(guān)的方面考慮，也讓人們期待來自外周血的白細(xì)胞的創(chuàng)傷愈合效果(PNAS.2000973422-3427)。此外，Zhao等人揭示了利用多種生長因子，在體外培養(yǎng)人外周血中的單核細(xì)胞組分，使之分化成上皮細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞、肝細(xì)胞、以及神經(jīng)細(xì)胞等細(xì)胞的方法，這也讓人們期待細(xì)胞和生長因子的組合將顯示更多的創(chuàng)傷愈合效果(PNAS.2003 1002426-2431)。
創(chuàng)傷愈合時(shí)，要給與患者特定的生長因子或細(xì)胞，其方法主要分全身給藥或局部給藥兩種。不過全身給藥，尤其是給與生長因子時(shí)，不同生長因子會(huì)在給藥量過量的情況下表現(xiàn)出各自的危險(xiǎn)性，例如VEGF導(dǎo)致低血壓、bFGF導(dǎo)致腎毒性，所以需要極其慎重地決定給與量。另一方面，人們認(rèn)為生長因子或細(xì)胞的任何一種均適合局部給藥，不過在一定時(shí)間內(nèi)于局部保持生長因子濃度很困難。另外，因?yàn)樵趧?chuàng)傷愈合中，細(xì)胞間的信息傳遞屬于受到上面例舉的多種因子作用的復(fù)雜體系，故多數(shù)情況下單獨(dú)使用生長因子的治療效果不理想，因此認(rèn)為有必要給與與創(chuàng)傷愈合有關(guān)的多種生長因子。此外，作為另一種實(shí)現(xiàn)局部給藥的方法，可以考慮基因治療，不過目前尚不能充分地確基因治療的其安全性。
在這一點(diǎn)上講，與生長因子相比，特定細(xì)胞的局部給藥有效性高，所以為此進(jìn)行各種各樣的技術(shù)探討。例如，一種方法用離心分離法從血中濃縮產(chǎn)生生長因子的血小板、向其中加入纖維蛋白原和凝血酶，制造血小板糊，涂抹在創(chuàng)傷部位(Int.J.Artif.Or gans.2002 25(4)334-8)。不過用該方法制造時(shí)存在費(fèi)時(shí)間費(fèi)工夫，以及糊的機(jī)械強(qiáng)度低的問題。在特開2001-204807號公報(bào)上，公開了用于增強(qiáng)含有細(xì)胞的凝膠的機(jī)械強(qiáng)度的、由高分子材料成型物組成的、在骨架內(nèi)部形成含成纖維細(xì)胞等細(xì)胞凝膠的醫(yī)療器材。不過這是以人工皮膚為主要用途的材料，而白細(xì)胞、血小板等不含在該凝膠里，故無法期待其創(chuàng)傷愈合促進(jìn)效果。此外，凝膠中的細(xì)胞是被固定在凝膠內(nèi)的，所以即使細(xì)胞產(chǎn)生某些因子，還存在這些因子要達(dá)到創(chuàng)傷部位還需要時(shí)間的問題。此外在美國專利第6049026號說明書中，提出了將骨髓中的結(jié)締組織前體細(xì)胞付著在基質(zhì)(substrate)表面作為移植片的試劑盒，其中還記載了為了促進(jìn)移植片的成長，再向上面付著血小板。不過這些主要是與骨移植片有關(guān)的發(fā)明，其不是以促進(jìn)創(chuàng)傷愈合、即不是以促進(jìn)機(jī)體創(chuàng)傷部位的細(xì)胞成長為其目的。因此，完全未見到公開有將白細(xì)胞附著在移植片的內(nèi)容。
如上所述，在創(chuàng)傷愈合領(lǐng)域里，人們對有效地利用具有創(chuàng)傷愈合效果的血細(xì)胞的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料沒有認(rèn)識，期待著這樣的技術(shù)革新。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明以上述以往技術(shù)存在的問題作為必須解決的課題。即，本發(fā)明要解決的課題是提供能短時(shí)間內(nèi)有效地濃縮對創(chuàng)傷愈合有效的細(xì)胞，使之作為創(chuàng)傷愈合的促進(jìn)材料而加以運(yùn)用的裝置。
本發(fā)明人等為了解決上述課題刻苦研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)表面上存有白細(xì)胞和/或血小板的片狀多孔材料可通過提高成纖維細(xì)胞的增殖，使之產(chǎn)生創(chuàng)傷愈合有關(guān)的生長因子而促進(jìn)創(chuàng)傷愈合，最終完成本發(fā)明。
即，本發(fā)明涉及以下內(nèi)容。
(1)至少是由表面上存在白細(xì)胞和/或血小板的片狀多孔材料構(gòu)成的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料。
(2)一種含有片狀多孔材料的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料，且該材料具有細(xì)胞增殖功能。
(3)具有成纖維細(xì)胞的增殖功能的(2)中記載的創(chuàng)傷愈合材料。
(4)(3)中記載的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料，其中細(xì)胞增殖功能來源于片狀多孔材料表面上存在的白細(xì)胞和/或血小板。
(5)一種含有片狀多孔材料的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料，且該材料具有生長因子產(chǎn)生的功能。
(6)相對于對照血漿，其中，生長因子產(chǎn)生的功能滿足以下任何一項(xiàng)的(5)中記載的創(chuàng)傷愈合材料其功能為血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)的5倍以上、血小板衍生生長因子-AB(PDGF-AB)的2倍以上、轉(zhuǎn)化生長因子(TGF-β1)的2倍以上。
(7)(6)中記載的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料，其中，生長因子產(chǎn)生的功能來源于片狀多孔材料表面上存在的白細(xì)胞和/或血小板。
(8)(1)～(7)中任一項(xiàng)記載的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料，其中片狀多孔材料的厚度為0.01～3mm。
(9)(1)～(8)中任一項(xiàng)記載的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料，其中片狀多孔材料可根據(jù)創(chuàng)傷部位的形狀而變形。
(10)(9)中記載的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料，其中，片狀多孔材料為無紡布。
(11)(10)中記載的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料，其中，無紡布的纖維直徑為0.3～50μm、松密度是0.05～0.5g/cm3。
(12)(9)中記載的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料，其中，片狀多孔材料為海綿狀結(jié)構(gòu)體。
(13)(12)中記載的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料，其中，海綿狀結(jié)構(gòu)體的平均孔徑為1.0～40μm。
(14)(1)～(13)中任一項(xiàng)記載的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料，其中，片狀多孔材料的材質(zhì)是天然高分子或者是合成高分子。
(15)(14)中記載的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料，其中，片狀多孔材料的材質(zhì)為以疏水性高分子為主要成分的合成高分子。
(16)(13)或(14)中記載的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料，其中，片狀多孔材料的材質(zhì)為生物可分解材料。
(17)(1)～(16)中任一項(xiàng)記載的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料，其中，白細(xì)胞和/或血小板是來源于外周血、骨髓液或者是臍帶血。
(18)(1)～(16)中任一項(xiàng)記載的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料，其中，白細(xì)胞和/或血小板為成熟細(xì)胞。
(19)(17)或(18)中記載的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料，其中，白細(xì)胞和/或血小板來源于自體。
(20)(1)～(19)中任一項(xiàng)記載的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料，其中，在片狀多孔材料上的白細(xì)胞密度為6.0×106個(gè)/cm3以上和/或血小板密度為2.5×108個(gè)/cm3以上。
(21)(1)～(20)中任一項(xiàng)記載的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料，其中，片狀多孔材料中整合有成纖維細(xì)胞。
(22)(21)中記載的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料，其中，成纖維細(xì)胞為來自與創(chuàng)傷組織相同組織的成纖維細(xì)胞。
(23)(1)～(22)中任一項(xiàng)記載的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料，其中，片狀多孔材料含有纖維蛋白。
(24)一種創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料的制造方法，其中，包括在片狀多孔材料上至少捕獲白細(xì)胞和/或血小板的工序。
(25)(24)中記載的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料的制造方法，其中，片狀多孔材料的厚度為0.01～3mm。
(26)(24)或(25)中任一項(xiàng)記載的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料的制造方法，其中，片狀多孔材料為無紡布。
(27)(26)中記載的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料的制造方法，其中無紡布的纖維直徑為0.3～50μm、松密度為0.05～0.5g/cm3。
(28)(24)或(25)中記載的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料的制造方法，其中，片狀多孔材料為海綿狀結(jié)構(gòu)體。
(29)(28)中記載的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料的制造方法，其中，海綿狀結(jié)構(gòu)體的平均孔徑為1.0～40μm。
(30)(24)～(29)中任一項(xiàng)記載的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料的制造方法，其中，片狀多孔材料具有血液細(xì)胞的選擇分離性。
(31)(30)中記載的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料的制造方法，其中，片狀多孔材料的表面具有血液細(xì)胞的選擇分離性。
(32)(31)中記載的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料的制造方法，其中，相對紅細(xì)胞，片狀多孔材料選擇性地捕獲白細(xì)胞和/或血小板。
(33)(32)中記載的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料的制造方法，其中，片狀多孔材料對白細(xì)胞的捕獲率為50％以上和/或?qū)ρ“宓牟东@率為50％以上。
(34)(24)～(33)中任一項(xiàng)記載的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料的制造方法，其中，至少通過過濾含白細(xì)胞和/或血小板的細(xì)胞懸浮液來向片狀多孔材料上捕獲白細(xì)胞和/或血小板。
(35)(34)中記載的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料的制造方法，其中，過濾是經(jīng)過一次性通過(one through)進(jìn)行的。
(36)(35)中記載的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料的制造方法，其中，細(xì)胞懸浮液的過濾量不足400ml。
(37)(35)～(37)中任一項(xiàng)記載的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料的制造方法，其中，相對于片狀多孔材料的有效過濾面積，過濾液量的比不足10ml/cm2。
(38)(35)～(37)中任一項(xiàng)記載的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料的制造方法，其中，對于片狀多孔材料容積過濾液量的比不足100。
(39)(35)～(38)中任一項(xiàng)記載的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料的制造方法，其中，相對于片狀多孔材料，使細(xì)胞懸浮液一次性過濾。
(40)(35)～(40)中任一項(xiàng)記載的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料的制造方法，其中，相對于片狀多孔材料，細(xì)胞懸浮液的過濾方向?yàn)閱我环较颉?br> (41)(35)～(40)中任一項(xiàng)記載的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料的制造方法，其中，過濾時(shí)間在20分鐘以內(nèi)。
(42)(34)中記載的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料的制造方法，其中，由體外循環(huán)進(jìn)行過濾。
(43)(42)中記載的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料的制造方法，其中，過濾流速為20～200ml/min。
(44)(42)或(43)中記載的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料的制造方法，其中，過濾時(shí)間為10～300分鐘。
(45)(24)～(44)中任一項(xiàng)記載的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料的制造方法，其中，細(xì)胞懸浮液為新鮮血。
(46)(45)中記載的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料的制造方法，其中，細(xì)胞懸浮液為采血后48小時(shí)以內(nèi)的新鮮血。
(47)(24)～(46)中任一項(xiàng)記載的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料的制造方法，其中，細(xì)胞懸浮液主要含有成熟細(xì)胞。
(48)(24)～(47)中任一項(xiàng)記載的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料的制造方法，其中，細(xì)胞懸浮液來源于自身血液。
(49)(24)～(48)中任一項(xiàng)記載的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料的制造方法，其中，細(xì)胞懸浮液中含有作為抗凝劑的檸檬酸、肝素類或水解酶抑制劑中的任何一種。
(50)(24)～(49)中任一項(xiàng)記載的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料的制造方法，其中，至少還含有培養(yǎng)捕獲有白細(xì)胞和/或血小板的片狀多孔材料的工序。
(51)(50)中記載的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料的制造方法，其中，在培養(yǎng)時(shí)添加細(xì)胞活化材料。
(52)(24)～(51)中任一項(xiàng)記載的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料的制造方法，其中，還含有在片狀多孔材料中整合成纖維細(xì)胞的工序。
(53)(52)中記載的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料的制造方法，其中，使成纖維細(xì)胞接觸片狀多孔材料，或?qū)⒊衫w維細(xì)胞混合到細(xì)胞懸浮液中后通過過濾使之整合。
(54)(53)中記載的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料的制造方法，其中，成纖維細(xì)胞為來自于與創(chuàng)傷組織相同組織的成纖維細(xì)胞。
(55)(24)～(54)中任一項(xiàng)記載的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料的制造方法，其中，還包括使片狀多孔材料含有纖維蛋白的工序。
(56)(55)中記載的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料的制造方法，其中，纖維蛋白來源于制劑。
(57)(56)中記載的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料的制造方法，其中，纖維蛋白只通過回收用片狀多孔材料過濾細(xì)胞懸浮液時(shí)排出的液體，對其進(jìn)行濃縮所獲得的。
(58)(24)～(57)中任一項(xiàng)記載的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料的制造方法，其中，至少還含有在捕獲白細(xì)胞和/或血小板后洗滌片狀多孔材料的工序。
(59)(24)～(58)中任一項(xiàng)記載的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料的制造方法，其中，至少在附有液體入口和出口的可開放液密容器中進(jìn)行向片狀多孔材料上捕獲白細(xì)胞和/或血小板的工序和/或洗滌該片狀多孔材料的工序。
(60)(59)中記載的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料的制造方法，其中，還含有從可開放液密容器中取出片狀多孔材料進(jìn)行保存的工序。
(61)可由(24)～(60)中任何一種記載的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料的制造方法獲得的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料。
(62)一種創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料的制備裝置，其將片狀多孔材料安裝成一方通向入口側(cè)、另一方通向出口側(cè)，把附有用于液體注入和排出的入口和出口的可開放液密容器內(nèi)部隔絕成兩室。
(63)(62)中記載的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料的制備裝置，其為將片狀多孔材料夾持在到可撓性樹脂板中并溶合或粘合的軟質(zhì)裝置，且可剝開可撓性樹脂板部來露出或取出內(nèi)部的片狀多孔材料。
(64)(63)中記載的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料的制備裝置，其為平板狀。
(65)(62)中記載的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料的制備裝置，其為配備有固定裝置的硬質(zhì)裝置，且可通過解除該固定裝置來露出或取出內(nèi)部的片狀多孔材料。
(66)(65)中記載的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料的制備裝置，其為圓筒狀。
(67)(66)中記載的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料的制備裝置，其中裝有卷成布匹狀收容的片狀多孔材料。
(68)(62)～(67)中任一項(xiàng)記載的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料的制備裝置，其中，片狀多孔材料的厚度為0.01～3mm。
(69)(62)～(68)中任一項(xiàng)記載的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料的制備裝置，其中，片狀多孔材料為無紡布。
(70)(69)中記載的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料的制備裝置，其中，無紡布的纖維直徑為0.3～50μm、松密度為0.05～0.5g/cm3。
(71)(62)～(68)中任一項(xiàng)記載的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料的制備裝置，其中，片狀多孔材料為海綿狀結(jié)構(gòu)體。
(72)(71)中記載的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料的制備裝置，其中，海綿狀結(jié)構(gòu)體平均孔徑為1.0～40μm。
(73)(62)～(72)中任一項(xiàng)記載的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料的制備裝置，其中，片狀多孔材料具有血液細(xì)胞的選擇分離性。
(74)(73)中記載的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料的制備裝置，其中，片狀多孔材料的表面具有血液細(xì)胞的選擇分離性。
(75)(74)中記載的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料的制備裝置，其中，與紅細(xì)胞相比，片狀多孔材料選擇性地捕獲白細(xì)胞和/或血小板。
(76)(75)中記載的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料的制備裝置，其中，片狀多孔材料對白細(xì)胞的捕獲率為50％以上和/或?qū)ρ“宓牟东@率為50％以上。
(77)(62)～(76)中任一項(xiàng)記載的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料的制備裝置，其配備有能夠在容器入口側(cè)和/或出口側(cè)連接袋子的連接部件。
(78)(77)中記載的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料的制備裝置，其在容器的入口側(cè)配備有采血袋和/或出口側(cè)配備有離心袋。
(79)(62)～(76)中任一項(xiàng)記載的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料的制備裝置，其在容器的入口側(cè)和出口側(cè)配備有體外循環(huán)回路。
(80)(62)～(79)中任一項(xiàng)記載的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料的制備裝置，其用滅菌袋包裝進(jìn)行了滅菌。
(81)(77)中記載的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料的制備裝置，其使容器的入口出口與外界連通性進(jìn)行包裝、裝置整體被包裝入滅菌袋進(jìn)行滅菌。
(82)可用(62)～(81)中任一項(xiàng)記載的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料的制備裝置獲得的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料。
(83)一種治療創(chuàng)傷部位的方法，其在創(chuàng)傷部位貼附(1)～(23)、(61)和(82)中任一項(xiàng)記載的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料。
(84)(83)中記載的治療創(chuàng)傷部位的方法，其中，開放容器，以從容器中露出片狀多孔材料一面的狀態(tài)進(jìn)行貼附。
(85)(84)中記載的治療創(chuàng)傷部位的方法，其從容器中取出片狀多孔材料進(jìn)行貼附。
(86)(83)～(85)中任一項(xiàng)記載的創(chuàng)傷部位的治療方法，其在制備創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料后30分鐘之內(nèi)貼附到創(chuàng)傷部位。
(87)(83)～(86)中任一項(xiàng)記載的治療創(chuàng)傷部位的方法，其中，創(chuàng)傷為體表創(chuàng)傷。
(88)(83)～(87)中任一項(xiàng)記載的治療創(chuàng)傷部位的方法，其中，用保護(hù)材料被覆固定所貼附的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料。
(89)(88)中記載的治療創(chuàng)傷部位的方法，其中，保護(hù)材料是由不具有透水性的原料構(gòu)成的片。
(90)(89)中記載的治療創(chuàng)傷部位的方法，其中，保護(hù)材料是由具有氣體通透性而且不具有透水性的原料構(gòu)成的片。


圖1表示用本發(fā)明的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料治療創(chuàng)傷部位的方法。圖1A表示以從容器中露出片狀多孔材料一面的狀態(tài)進(jìn)行貼附的方法，圖1B表示從容器中取出片狀多孔材料后進(jìn)行貼附的方法。
具體實(shí)施例方式
下面，對本發(fā)明的實(shí)施形式作詳細(xì)的說明。
用于本發(fā)明的片狀多孔材料是多邊形或盤狀的片狀材料，該材料是一種通過所具有細(xì)小孔隙或者纖維間隙等多孔部可以在多孔部表面通過吸附或過濾來捕獲細(xì)胞的多孔材料。通常，創(chuàng)傷部位表面不限定為平面，大多伴有凹凸不平的情況，因?yàn)闉榱税l(fā)揮更高的創(chuàng)傷愈合效果，使片狀多孔材料與創(chuàng)傷部位的形狀吻合且與之緊密貼附會(huì)很有效。因此，該片狀多孔材料優(yōu)選具有可根據(jù)創(chuàng)傷部位的形狀變形的柔軟性，據(jù)此比如即使是達(dá)數(shù)厘米大小的創(chuàng)傷部位也可以無縫隙地用一張片子加以覆蓋。
另外，本發(fā)明使用的片狀多孔材料是可從血液等細(xì)胞懸浮液中至少能捕獲白細(xì)胞和/或血小板等血細(xì)胞的材料，優(yōu)選具有過濾層功能。即，最好具有接觸細(xì)胞懸浮液或使之通過時(shí)，至少捕獲白細(xì)胞和/或血小板這種血細(xì)胞或生長因子、而不捕獲液體部分的分離功能。這里不僅包括大小分離還包括基于相對材料表面的細(xì)胞親和性(吸附性等)的分離。
片狀多孔材料優(yōu)選具有能多捕獲特定的血細(xì)胞的選擇分離性。該選擇分離性可以通過適當(dāng)選擇多孔材料的原料或形狀來實(shí)現(xiàn)，如下面所述，也可以通過多孔材料的表面處理來控制更高的選擇性。關(guān)于本發(fā)明的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料，比如從生長因子的產(chǎn)生和分泌作用優(yōu)良的角度出發(fā)，特別優(yōu)選與紅細(xì)胞相比，可以選擇性地捕獲白細(xì)胞和/或血小板的片狀多孔材料。此時(shí)，捕獲率越高越能從更少量的細(xì)胞懸浮液中獲得目的物質(zhì)，因此優(yōu)選白細(xì)胞和/或血小板的捕獲率任一項(xiàng)超過50％。
作為片狀多孔材料的形態(tài)，可列舉無紡布、織布、海綿狀結(jié)構(gòu)體、塞進(jìn)粒子片狀口袋等。其中，在有目的地把白細(xì)胞或血小板作為捕獲對象的時(shí)候，從去除效率的觀點(diǎn)出發(fā)，更優(yōu)選無紡布或海綿狀結(jié)構(gòu)體。
本說明書里所說的無紡布是指不對一層以上的纖維塊進(jìn)行編織而做成的布狀結(jié)構(gòu)的物品。作為纖維的原料，可采用合成纖維、天然纖維、無機(jī)纖維等。其中，以疏水性高分子為主要成分的合成纖維，如聚對苯二甲酸乙二酯、聚對苯二甲酸丁二酯、尼龍、聚丙烯、聚乙烯、聚苯乙烯、聚丙烯腈等纖維，因其對細(xì)胞的粘附性高而優(yōu)選被采用。
片狀多孔材料為無紡布時(shí)，纖維平均直徑優(yōu)選0.3μm以上，不足50.0μm、更優(yōu)選0.5μm以上40.0μm以下、進(jìn)一步優(yōu)選0.7μm以上35.0μm以下、還優(yōu)選1.0μm以上20.0μm以下、尤其優(yōu)選1.0μm以上9.0μm以下。平均直徑如果小于0.3μm，則血細(xì)胞懸浮液或血液流經(jīng)無紡布時(shí)流動(dòng)性差，導(dǎo)致裝置內(nèi)的壓力損失增高。另外，如果平均直徑大于50.0μm，則白細(xì)胞和/或血小板的捕獲率降低。而白細(xì)胞和/或血小板的捕獲率一旦降低，會(huì)導(dǎo)致捕獲到片狀多孔材料內(nèi)的細(xì)胞間的間距離變大，所以為了使如前所述的產(chǎn)生的生長因子更有效的發(fā)揮功能，纖維平均直徑優(yōu)選為上述范圍。
可以通過比如拍取構(gòu)成無紡布的纖維的掃描電子顯微鏡照片，測定隨機(jī)選擇的100個(gè)以上的纖維直徑，將其數(shù)學(xué)平均的方法獲得用于本發(fā)明的、構(gòu)成無紡布的纖維平均直徑。
用于本發(fā)明的無紡布的松密度，優(yōu)選從0.05g/cm3到0.5g/cm3、更優(yōu)選從0.07g/cm3到0.4g/cm3、還優(yōu)選0.1g/cm3到0.3g/cm3。如果松密度大于0.5g/cm3，血細(xì)胞懸浮液或血液流經(jīng)無紡布時(shí)流動(dòng)性變差而增高壓力損失。另外、當(dāng)松密度小于0.5g/cm3時(shí)，細(xì)胞的捕獲率變差的同時(shí)，按照上述的方法捕獲的細(xì)胞間的距離變大。因此，為了使如前所述的產(chǎn)生的生長因子更有效的發(fā)揮功能，纖維松密度優(yōu)選上述范圍。
另外，本發(fā)明中提到的海綿狀結(jié)構(gòu)體是指具有三維網(wǎng)眼狀連續(xù)組織的結(jié)構(gòu)體，而其三維網(wǎng)眼狀連續(xù)組織具有連續(xù)開放氣孔。對海綿狀結(jié)構(gòu)體的材質(zhì)沒有特別的限定，優(yōu)選使用對細(xì)胞的粘附性高的纖維素或其衍生物等天然高分子、或以疏水性高分子為主要成分的聚烯烴、聚酰胺、聚酰亞胺、聚氨酯、聚酯、聚砜、聚丙烯腈、聚醚砜、聚(甲基)丙烯酸酯、丁二烯-丙烯腈共聚物、乙烯-乙烯醇共聚物、聚乙烯醇縮醛或它們的混合物等高分子材料。
海綿狀結(jié)構(gòu)體平均孔徑優(yōu)選1.0μm以上40μm以下，更優(yōu)選2.0μm以上35μm以下，進(jìn)一步優(yōu)選3.0μm以上30μm以下。如果平均直徑小于1.0μm，則血細(xì)胞懸浮液或血液流經(jīng)海綿狀結(jié)構(gòu)體時(shí)血液的流動(dòng)性變差而加大裝置內(nèi)的壓力損失。另外，如果平均直徑大于40μm，則白細(xì)胞捕獲率變差。還有，海綿狀結(jié)構(gòu)體的平均孔徑變大，其結(jié)果會(huì)導(dǎo)致捕獲在過濾層內(nèi)的細(xì)胞間的距離變大，所以為了使如前所述的產(chǎn)生的生長因子更有效的發(fā)揮功能，海綿狀結(jié)構(gòu)體的平均孔徑優(yōu)選為上述范圍。
本發(fā)明中提到的海綿狀結(jié)構(gòu)體的平均孔徑是指由水銀壓入法測得的值。通過由水銀壓入法(比如島津制作所、ポアサイザ9320)的測定，用縱軸表示微孔容量的微分值，橫軸表示取孔徑繪出的圖，取其最峰對應(yīng)的點(diǎn)(最大值)作為平均孔徑。此外，作為由水銀壓入法測定的值，采用在1～2650psia的壓力范圍內(nèi)測定的值。
為提高創(chuàng)傷愈合效果，用于本發(fā)明的片狀多孔材料的厚度為從0.01mm到3.0mm，優(yōu)選從0.05mm到2.5mm，更優(yōu)選從0.1mm到2.0mm。若片狀多孔材料的厚度大于3.0mm，則給向創(chuàng)傷部位上的固定帶來困難的同時(shí)，使白細(xì)胞或血小板所產(chǎn)生的生長因子難以到達(dá)創(chuàng)傷部位。另外，如果片狀多孔材料的厚度小于0.01mm，則機(jī)械強(qiáng)度變?nèi)?。?xì)胞間的效果在兩種情況下得到增強(qiáng)，一種是細(xì)胞產(chǎn)生的生長因子作用于其細(xì)胞本身(自分泌，autocrine)，再有一種情況是使之更強(qiáng)地發(fā)揮作用，與由周邊細(xì)胞產(chǎn)生并擴(kuò)散的生長因子一起發(fā)揮作用(旁分泌，paracrine)。因此，為了使生長因子更有效的發(fā)揮功能，則希望細(xì)胞之間的距離盡可能的接近，因此希望過濾層的厚度在上面所述的范圍內(nèi)。還有，可以使用一張具有上述厚度的片狀多孔材料，也可以將厚度薄的2張以上重疊使用。
再者，為了使片狀多孔材料表面能夠僅對捕獲靶物質(zhì)做選擇性吸附捕獲，也可以在其表面上做特定高分子的包被或者移植處理等。例如，也可以按照包被或固定有聚合體(眾所周知的易吸附血細(xì)胞而難以吸附血小板的聚合體)的片狀多孔材料和易吸附血小板的片狀多孔材料的順序處理血液或血細(xì)胞懸浮液，制造更加選擇性地吸附血小板的片狀多孔材料。作為這樣的聚合體的例子，可以參考例如WO87/05812號小冊子、WO03/011924號小冊子或者是WO03/047655號小冊子等。還有，也可以包被或固定能夠更加選擇性地吸附血細(xì)胞或血漿蛋白等特定成份的配體。
在片狀多孔材料上也可使用具有生物分解性的原料。作為生物吸收性的原料，可列舉聚乳酸、聚乙醇酸、乳酸和乙醇酸共聚物、聚蘋果酸、聚-ε-己內(nèi)酯等聚酯或纖維素、聚褐藻酸、角素、殼聚糖等多糖類。通過利用這些原料，可以得到生物體適用性更高的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料。
對于本發(fā)明的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料，有必要在上述片狀多孔材料表面上至少存在有白細(xì)胞和/或血小板。對于血細(xì)胞的存在量(密度)沒有特別的限定，不過為了進(jìn)一步提高作為創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料的效果，優(yōu)選至少把一定容積的多孔材料中的血細(xì)胞密度濃縮至血液中濃度水平以上。還有，上述細(xì)胞間相互作用(旁分泌)的角度出發(fā)，存在細(xì)胞密度過低則生長因子產(chǎn)生低下的擔(dān)憂，所以有效的方法是提高細(xì)胞密度、縮短細(xì)胞間距離。根據(jù)這些理由，優(yōu)選在片狀多孔材料的表面上存在的白細(xì)胞密度為6.0×106個(gè)/cm3以上和/或血小板密度為2.5×108個(gè)/cm3以上。另一方面，雖然有血細(xì)胞密度越高其創(chuàng)傷愈合效果越高的傾向，不過比如僅通過過濾操作調(diào)整的時(shí)候，存在因堵塞而導(dǎo)致處理時(shí)間增加或多孔材料閉塞的擔(dān)憂，所以優(yōu)選使白細(xì)胞密度的上限為6.0×108個(gè)/cm3以下、血小板密度的上限為1.0×1010個(gè)/cm3以下。
存在于上述表面的血細(xì)胞為來自外周血、骨髓和臍帶血的人血細(xì)胞，從免疫排斥或防止感染等原因出發(fā)，優(yōu)選來自接受創(chuàng)傷愈合的患者自身的血液(自體血)或來自人白細(xì)胞抗原(HLA)配型相近的血液(同種血)。
用于使這些血細(xì)胞捕獲到片狀多孔材料表面據(jù)此制備創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料的細(xì)胞懸浮液，至少是含有白細(xì)胞和/或血小板的懸浮液，也可以是原始狀態(tài)的外周血、骨髓、臍帶血，也可以是全血制劑或分離出的成分制劑、或者是預(yù)先去除特定細(xì)胞組分的細(xì)胞懸浮液。這些懸浮液也可以含有常規(guī)作為抗凝劑的檸檬酸鹽、肝素、低分子肝素、類肝素等肝素類、或者是甲磺酸萘莫司他(FUT)、FOY、Argatroban等水解酶抑制劑。還有，細(xì)胞懸浮液優(yōu)選是新鮮狀態(tài)的，更優(yōu)選是從機(jī)體中取出后直至用片狀多孔材料過濾細(xì)胞懸浮液的時(shí)間在48小時(shí)以內(nèi)的。
作為使之存在于片狀多孔材料表面的血細(xì)胞，不僅希望含有干細(xì)胞或前體細(xì)胞這種未成熟的細(xì)胞，還含有很多成熟白細(xì)胞或成熟血小板這種成熟的細(xì)胞。這是因?yàn)檠褐谢騽?chuàng)傷組織中少量含有的干細(xì)胞或前體細(xì)胞在增殖分化使創(chuàng)傷組織再生的時(shí)候，并不是單獨(dú)進(jìn)行組織再生，而是在與成熟細(xì)胞共存的網(wǎng)絡(luò)中反復(fù)地進(jìn)行最適于創(chuàng)傷愈合的增殖分化，實(shí)現(xiàn)組織再生。
本發(fā)明的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料中可以整合成纖維細(xì)胞。可以將成纖維細(xì)胞與血液細(xì)胞懸浮液分別通過與片狀多孔材料接觸的方法整合其中，也可以預(yù)先將成纖維細(xì)胞與含血細(xì)胞的細(xì)胞懸浮液混合后，使之與片狀多孔材料接觸。還有，也可以單獨(dú)把成纖維細(xì)胞先用別的材料(過濾層)吸附后，再與已吸附有血細(xì)胞的片狀多孔材料組合。整合的成纖維細(xì)胞尤其優(yōu)選與含在創(chuàng)傷部位的成纖維細(xì)胞相同者，據(jù)此可促進(jìn)創(chuàng)傷部位的愈合。
本發(fā)明的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料也可以在其制造過中進(jìn)行培養(yǎng)。對培養(yǎng)液沒有特別的限定，使用常規(guī)用于細(xì)胞培養(yǎng)的培養(yǎng)基即可。也可以另外添加活化血細(xì)胞的因子進(jìn)行培養(yǎng)。例如，可以通過加入凝血酶等血小板活化劑進(jìn)行培養(yǎng)，據(jù)此可提高局部生長因子的濃度。
本發(fā)明的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料里也可還含有纖維蛋白。對用于制造纖維蛋白的纖維蛋白原溶液沒有特別的限定，可以使用市場上銷售的制劑。還有，利用血液作為血細(xì)胞懸浮液的時(shí)候，也可以從片狀多孔材料中回收作為排出液的液體并離心，對此進(jìn)行濃縮后利用。還有，含有成纖維細(xì)胞的時(shí)候，細(xì)胞既可以是預(yù)先包埋在纖維蛋白里的形態(tài)，也可以在后來將細(xì)胞接種到纖維蛋白上。通過含纖維蛋白不不過使在創(chuàng)傷部位固定創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料變得容易，而且包括纖維蛋白原在內(nèi)的其他生長因子可使促進(jìn)創(chuàng)傷愈合的效果進(jìn)一步提高。
在制造本發(fā)明的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料時(shí)，需要使上述的片狀多孔材料表面捕獲到至少含在細(xì)胞懸浮液中的白細(xì)胞和/或血小板。在該捕獲工序中，例如，擴(kuò)展開片狀多孔材料直接滴下細(xì)胞懸浮液進(jìn)行過濾，將所利用的實(shí)驗(yàn)裝置固定在適當(dāng)?shù)倪^濾固定器上過濾細(xì)胞懸浮液(例如可參照圖1B)、或者也可以安裝在可開放性液密容器(在后面的系統(tǒng)說明中敘述)上過濾(例如可參照圖1A和1B)。后兩種情況，既可以自由落下，也可以利用泵或注射器等強(qiáng)制性地過濾。還有，不單純是過濾，如果并用使細(xì)胞懸浮液接觸的狀態(tài)維持一定時(shí)間等操作，也可提高血細(xì)胞表面捕獲率。
在過濾操作中，尤其是進(jìn)行多次斷續(xù)的過濾操作，則過濾的剪切應(yīng)力使細(xì)胞活化，生長因子流失到最終排出的血漿中，這一點(diǎn)讓人擔(dān)憂。因此，優(yōu)選一次性濾過細(xì)胞懸浮液，這樣做的優(yōu)點(diǎn)是準(zhǔn)備或操作方便而且處理時(shí)間短。還有，細(xì)胞懸浮液的過濾方向優(yōu)選為一個(gè)方向。這是因?yàn)橛捎谀撤N原因，片狀多孔材料中未能捕獲到充足密度的白細(xì)胞和/或血小板的時(shí)候，會(huì)使片狀多孔材料的兩面的細(xì)胞密度不同，且過濾入口側(cè)的細(xì)胞密度變高，而在這樣的情況下，可以通過把過濾入口側(cè)的一面緊貼在創(chuàng)傷部位能更有效地發(fā)揮所捕獲細(xì)胞的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)效果?；蛘撸捎幸庾R地使密度不均來實(shí)現(xiàn)這樣的作用。
當(dāng)一次性濾過時(shí)，也可以像在輸血中除去白細(xì)胞的操作那樣處理大量細(xì)胞懸浮液(每單位相當(dāng)于400ml以上)，不過因?yàn)檫M(jìn)行過濾的量越少越能縮短處理時(shí)間，所以例如需要平行于創(chuàng)傷處理進(jìn)行準(zhǔn)備的時(shí)候極其有用。因此，優(yōu)選細(xì)胞懸浮液的過濾量不足400ml，還有，使過濾量和對應(yīng)的片狀多孔材料有效過濾面積之比不足10ml/cm2、或者使過濾液量和對應(yīng)的片狀多孔材料容積之比不足100也可縮短過濾時(shí)間，因此優(yōu)選。
另一方面，如果利用可開放液密容器，也易于通過體外循環(huán)過濾。這種情況下，雖然處理時(shí)間變得比較長，不過它具有連續(xù)地循環(huán)大量的血液、持續(xù)過濾，使片狀多孔材料上的血細(xì)胞密度變高的優(yōu)點(diǎn)。還有，如在后面對系統(tǒng)說明中所述，將片狀多孔材料卷在布匹上并組裝到圓筒狀容器中，因?yàn)槿菀状_保1～2m2的過濾面積，可由大量血液中獲得極其大面積的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料。此時(shí)，體外循環(huán)的過濾速度優(yōu)選為20～200mL/min、過濾時(shí)間優(yōu)選為10～300分鐘。通過體外循環(huán)進(jìn)行過濾的時(shí)候，優(yōu)選過濾流速為20～200mL/分鐘。更優(yōu)選為25～150mL/分鐘、還更優(yōu)選為30～120mL/分鐘.如果過濾流速低于此，則根據(jù)抗凝劑的類型，在實(shí)施體外循環(huán)時(shí)血液易凝固，且體外循環(huán)時(shí)間長增加了患者的負(fù)擔(dān)。還有，過濾流速高于此，根據(jù)患者血管狀態(tài)的不同，有時(shí)采血困難，而且施加在片狀多孔材料的負(fù)荷變高，這容易引起促進(jìn)血液凝固的情況。還有，作為體外循環(huán)的過濾時(shí)間，優(yōu)選10分～300分鐘，更優(yōu)選20分鐘～250分鐘，還更優(yōu)選式30分鐘～200分鐘。如體外循環(huán)的過濾時(shí)間比這短，可能不能捕獲充足的細(xì)胞，反之體外循環(huán)的過濾時(shí)間比這長，則增大了帶給患者的負(fù)擔(dān)。
根據(jù)以上的工序，可獲得在片狀多孔材料的表面上至少存在有白細(xì)胞和/或血小板的本發(fā)明的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料，在該制造調(diào)整方法中還可以包括洗滌工序?？梢詫⑸硇运芤?例如磷酸緩沖液或生理鹽水等)實(shí)施與細(xì)胞懸浮液的過濾操作同樣的操作進(jìn)行洗滌。通過洗滌，可除去創(chuàng)傷愈合中不需要的細(xì)胞或殘留血液等。關(guān)于洗滌后的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料，或者以附在固定器(holder)或容器的狀態(tài)、或者以取出的狀態(tài)，只要使之不干燥同時(shí)無菌地保存即可，對其方法不做任何限定。
本發(fā)明還涉及一種裝置，該裝置用于制造本發(fā)明的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料。它是一種可開放液密容器且為了液體的注入和排出而裝有入口和出口，并把容器內(nèi)部隔絕成兩室、將片狀多孔材料配置成一方通向入口側(cè)、另一方通向出口側(cè)的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料的制備裝置。
在本發(fā)明中，裝有用于液體的注入和排出的入口和出口的液密容器是指裝有注入和排出細(xì)胞懸浮液或使之進(jìn)行體外循環(huán)的入口和出口的容器。例如，具有眾所周知的平板狀白細(xì)胞去除過濾裝置(可以參照例如WO01/091880號小冊)或眾所周知的圓筒狀白細(xì)胞去除模具(可以參照例如WO99/058172號小冊)的外形，其內(nèi)部構(gòu)造也跟這些相同，用濾材(本發(fā)明中所說的片狀多孔材料)把容器內(nèi)部隔成不讓過濾前后的液體混合的兩室，將濾材配置成一方通向入口側(cè)，另一方通向出口側(cè)。
對用于本發(fā)明的裝置的容器形狀沒有特別的限定，只要是易裝納片狀多孔材料、液密、細(xì)胞懸浮液容易流過片狀多孔材料的形狀即可。不過，如果要原本不動(dòng)地裝有片狀多孔材料，優(yōu)選平板型，如果做成布匹狀裝取，則圓筒形容易裝納。而且，也可以將可撓性材料用于平板型容器中，通過把平板型容器整體卷成布匹狀，做成更緊密的狀態(tài)。
所述的可開放指的是可以方便地從上述容器中取出已捕獲血細(xì)胞的片狀多孔材料、或者可以容易地把血細(xì)胞捕獲面的一部分露出來的容器結(jié)構(gòu)，這是本裝置的必要結(jié)構(gòu)。例如，可列舉容器本身具有螺式、打包式、磨合式等固定裝置的、或者做成可以強(qiáng)制剝開的粘合式的結(jié)構(gòu)。更具體而言，當(dāng)為平板狀容器的情況下，優(yōu)選熔接或密合了裝有液體入口的可撓性樹脂片容器和裝有液體出口的可撓性樹脂片容器的周邊部，使之能夠夾進(jìn)片狀多孔材料的軟質(zhì)裝置。當(dāng)為圓筒狀容器的情況下，優(yōu)選向筒狀軀干部(其裝有做成布匹狀的片狀多孔材料)的兩端固定下述兩個(gè)部分的硬質(zhì)裝置一是液體入口和附有上述固定裝置的頭部(header)、二是液體出口和附有固定裝置的頭部的硬質(zhì)裝置。關(guān)于前者，例如如圖1A所顯示，露出已捕獲血細(xì)胞(來自所熔接或密合的板上)的片狀多孔材料的一部分，在貼到創(chuàng)傷部位的時(shí)候非常方便，而關(guān)于后者，雖然作為整體很小型，不過由于可確保大的過濾面積而適合于由體外循環(huán)進(jìn)行制造，所以其適合用于獲得大面積或大量的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料。
此外，如果能夠從上述的容器中方便地取出已捕獲了血細(xì)胞的片狀多孔材料，或可以容易地露出血細(xì)胞捕獲面的一部分，也可以沒有像上述的可開放裝置，而容器整體或一部分也可以由可輕易從外側(cè)破壞的材料或結(jié)構(gòu)構(gòu)成。此外，也可以恰當(dāng)選擇利用市場上銷售的平板狀或圓筒狀的白細(xì)胞去除過濾器。
在本發(fā)明的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料的制備裝置上，為了使細(xì)胞懸浮液無菌地流過，可以在容器入口側(cè)連接附有穿刺針的管，該用于連接采血袋。也可以單取出管用無菌連接器進(jìn)行連接。還有，為了使利用排出液制造血漿或血清的工作變得容易，可在容器出口側(cè)連接用于離心的袋子。而且，可以連接血液泵或者具備導(dǎo)血部和反血部等的通常的體外循環(huán)回路。
在用滅菌袋包裝本發(fā)明的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料的制備裝置的時(shí)候，將裝片狀多孔材料的容器包裝到滅菌袋中，再把裝置整體用別的滅菌袋包裝也可以。通過這么做，可以保持容器和多孔材料在流過細(xì)胞懸浮液后到把多孔材料實(shí)際貼在創(chuàng)傷部位期間無菌，顯著提高取用性。
而且本發(fā)明還涉及向創(chuàng)傷部位貼附本發(fā)明的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料的治療創(chuàng)傷部位的方法。
采用本發(fā)明的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料的治療創(chuàng)傷部位的方法可列舉從容器中取出片狀多孔材料并貼附的方法(圖1B)，或使容器中露出片狀多孔材料的一面的狀態(tài)貼附的方法(圖1A)。關(guān)于前者，因露出面的反面被容器所覆蓋，所以片狀多孔材料的無菌性更優(yōu)異，而且也可以防止多孔材料的干燥。鑒于這些理由，前者尤其在向體表面上的適用性方面很優(yōu)異。
還有，關(guān)于本發(fā)明的治療方法，也可以用保護(hù)材料覆蓋固定貼附于創(chuàng)傷部位的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料的表面。此時(shí)，治療部位，尤其是為了防止創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料表面干燥，優(yōu)選用不具有透水性的原材料構(gòu)成的保護(hù)材料。還有，如果是具有氣體通透性而不具有透濕性的原料，則因?qū)ρ?xì)胞的氧氣供應(yīng)變得容易，更長時(shí)間維持血細(xì)胞的活性而尤其優(yōu)選?？衫猛ǔＳ迷趧?chuàng)傷治療愈合中的保護(hù)材料作為這些保護(hù)材料。
以下用實(shí)施例更具體地對該發(fā)明進(jìn)行說明，不過本發(fā)明不僅限于實(shí)施例[實(shí)施例1]創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料的制備(人血液)用以下方法制造了在表面含有血細(xì)胞的片狀多孔材料。把CPD(citrate-phosphate-dextrose)作為抗凝劑從健康志愿者中，采取外周血(血液∶CPD＝400∶56、白細(xì)胞數(shù)5100個(gè)/μL、血小板數(shù)14.4×104個(gè)/μL)。在由聚乙二醇對苯二甲酸酯制成的無紡布(旭化成株式會(huì)社、平均纖維直徑2.6μm、厚度0.38mm、松密度0.27g/cm3)上打取直徑25mm的布片，并把布片2張重疊，固定在柱子(Advantech公司、型號PP-25)上、再向柱子流過5ml外周血。緊接著血液流過后，向柱子流過10mL磷酸緩沖液進(jìn)行洗滌，得到了含有片狀多孔材料(表面附有血細(xì)胞)的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料。
分別施行2次上述操作，不過處理所需時(shí)間每次均在10分鐘以內(nèi)。
用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板測定處理前后的血液中含有的白細(xì)胞、血小板。
無紡布過濾層的白細(xì)胞和血小板的捕獲率如表1所示。

創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料的制備(人血液)用以下方法制造表面含有血細(xì)胞的片狀多孔材料。把肝素作為抗凝劑，從健康志愿者中采取了外周血(血液∶肝素＝100∶1、白細(xì)胞數(shù)3800個(gè)/μL、血小板數(shù)22.5×104個(gè)/μL)。在由聚乙二醇對苯二甲酸酯制成的無紡布(旭化成株式會(huì)社、平均纖維直徑1.1μm、厚度0.24mm、松密度0.17g/cm3)上打取直徑25mm的片，并將其2張重疊，固定在柱子(Advantech公司、型號PP-25)上、再向柱子流過5mL外周血。緊接著血液流過后，向柱子流過10mL磷酸緩沖液進(jìn)行洗滌，得到由表面附有血細(xì)胞的片狀多孔材料所構(gòu)成的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料。
分別施行上述操作2次，不過處理所需時(shí)間每次均在10分鐘以內(nèi)。
用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板測定處理前后的血液中含有的白細(xì)胞、血小板。無紡布過濾層的白細(xì)胞和血小板的捕獲率如表2所示。

創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料的制備(小鼠血液)用以下方法制造表面含有血細(xì)胞的片狀多孔材料。
把肝素作為抗凝劑，從2型糖尿病模型小鼠(C57BL/KsJ-db/db Jct，日本クレア(株))中采取外周血(白細(xì)胞數(shù)5200個(gè)/μL、血液∶肝素＝100∶1)。在由聚乳酸制成的無紡布(旭化成株式會(huì)社、平均纖維直徑1.14μm、厚度0.20mm、松密度0.20g/cm3)上打取直徑13mm的片，并將其3張重疊，固定在5ml注射器(Terumo公司制造)上，再向其流過200uL小鼠外周血。緊接著血液流過后，流過200ul磷酸緩沖液進(jìn)行洗滌，得到了由表面附有血細(xì)胞的片狀多孔材料所構(gòu)成的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料。
分別施行上述操作2次，不過處理所需時(shí)間每次均在2分鐘以內(nèi)。
用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板測定處理前后的血液中含有的白細(xì)胞。
無紡布過濾層的白細(xì)胞的捕獲率如表3所示。

成纖維細(xì)胞增值率的測定將實(shí)施例1中制造的表面附有血細(xì)胞的無紡布創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料與成纖維細(xì)胞共同培養(yǎng)，對成纖維細(xì)胞的增殖率進(jìn)行研究。
作為培養(yǎng)容器，采用了具有被內(nèi)置的3μm孔徑的膜分隔的多孔培養(yǎng)板(コ-ニング社、Transwell 3452)。
在被內(nèi)置膜分隔的上側(cè)，裝入2張?jiān)趯?shí)施例1中制備的經(jīng)過血液處理的無紡布(即表面上附有血細(xì)胞的本發(fā)明的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料)，下側(cè)接種來自人胎兒肺的正常二倍體成纖維細(xì)胞株(HEL、humanembryonic lung fibroblast)，使細(xì)胞的接種密度為1×105/孔。
向Basal Medium Eagle(Sigma社、B1522)中按制造商所指示的那樣，添加丙酮酸鈉(ICN社)使之達(dá)1mM、添加100倍濃縮的非必需氨基酸(ICN社、Cat.#1681049)至使之稀釋100倍、還添加谷氨酰胺使之達(dá)2mM。向其中再添加胎牛血清(FCS、StemCell Technologies社)使之終濃度達(dá)10％，作為抗生素添加青霉素和鏈霉素，制備培養(yǎng)液。使培養(yǎng)液容量為4ml/孔。
還有，作為對照，進(jìn)行了未作血液處理的無紡布和HEL的共同培養(yǎng)。
將上述的培養(yǎng)物在5％CO2、37℃的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)4天后，測定成纖維細(xì)胞的數(shù)量。結(jié)果如表4所示。用0.25％Trypsin/EDTA液(Gibco公司)回收成纖維細(xì)胞。


如表4所示，證實(shí)了與使用未進(jìn)行血液處理的無紡布的情況相比，通過使用實(shí)施例1中制備的經(jīng)血液處理的無紡布所制成的本發(fā)明的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料使成纖維細(xì)胞增值率變高。
從創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料產(chǎn)生生長因子用培養(yǎng)液培養(yǎng)由實(shí)施例2中制作表面有血細(xì)胞的無紡布創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料，研究由附著的細(xì)胞產(chǎn)生的各種生長因子的濃度。
采用直徑為35mm的培養(yǎng)皿作為培養(yǎng)容器(旭化成株式會(huì)社)。
加入2張?jiān)趯?shí)施例2中經(jīng)血液處理的無紡布(即表面上附有血細(xì)胞的本發(fā)明的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料)。
向市場上銷售的培養(yǎng)液Dulbecco’s Modified Eagle Medium(D-MEM、Gibco公司)中添加胎牛血清(FCS、Gibco公司)使之終濃度達(dá)2％，作為抗生素添加慶大霉素，制備培養(yǎng)基。培養(yǎng)液容量為2mL。
將上述的培養(yǎng)物在5％CO2、37℃的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48小時(shí)之后，回收培養(yǎng)上清，并測定作為創(chuàng)傷愈合有關(guān)的生長因子VEGF、PDGF-AB、以及TGF-β1的濃度。濃度測定采用了市場上銷售的ELISA試劑盒(R&DSystem社)。
作為比較對照，采用了對培養(yǎng)前的培養(yǎng)液和離心經(jīng)無紡布過濾后回收的血液制備得到的血漿。結(jié)果如表5所示。


如表5所示，可知與培養(yǎng)前的培養(yǎng)液和血漿相比，將表面上有血細(xì)胞的無紡布培養(yǎng)72小時(shí)后的培養(yǎng)液上清中，產(chǎn)生了很多生長因子。
使用動(dòng)物模型，如下進(jìn)行創(chuàng)傷愈合效果的確認(rèn)。
在全身麻醉下，剃掉2型糖尿病模型鼠(C57BL/KsJ-db/db Jct，日本クレア(株))的背部的毛后，利用活體組織檢查用6mmΦ的鑿孔器(カイインダストリ-ズ社、BP-60F)進(jìn)行全皮層缺損處理。每個(gè)實(shí)驗(yàn)鼠做3個(gè)全皮層缺損處理。
接著，在3個(gè)全皮層缺損部位分別做如下處理其中一個(gè)貼附實(shí)施例3中經(jīng)血液處理的由聚乳酸制成的無紡布(即表面上吸附血細(xì)胞的本發(fā)明的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料)，另一個(gè)貼附未作血液處理的由聚乳酸制成的無紡布，第三個(gè)作為比較對照，未作任何貼附。并且再用由聚氨酯制成的創(chuàng)傷被覆材料(テガダ-ム、3M社)對其進(jìn)行固定。在比較對照部位上，只貼附了由聚氨酯制成的創(chuàng)傷被覆材料。
2周后，剝開聚氨酯板和創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料，并測定傷口的大小。
用數(shù)碼相機(jī)同時(shí)測定創(chuàng)傷部位和尺寸，通過把得到的圖像用圖像分析軟件ImageJ(the National Institutes of Health)進(jìn)行分析，算出了傷口面積。表6中，把剛做全皮層缺損處理后的創(chuàng)傷部位面積定為100，算出2周后的面積，比較其愈合程度。


如表6所示，貼附了經(jīng)血液處理的無紡布的部位的愈合率有意義地比其他愈合程度高。貼附了由聚乳酸制成的無紡布的部位發(fā)現(xiàn)炎癥，創(chuàng)傷反而比剛進(jìn)行處理之后有擴(kuò)大的傾向。
產(chǎn)業(yè)上的可利用性根據(jù)本發(fā)明，可通過簡便的操作在短時(shí)間內(nèi)制造濃縮了血細(xì)胞的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料。由于本發(fā)明的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料具有促進(jìn)細(xì)胞增殖的效果，所以通過利用本發(fā)明的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料可以促進(jìn)創(chuàng)傷的愈合。
權(quán)利要求
1.一種創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料，其由至少在表面上存在有白細(xì)胞和/或血小板的片狀多孔材料所構(gòu)成。
2.一種創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料，其為含有片狀多孔材料的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料，且具有細(xì)胞增殖功能。
3.權(quán)利要求2中記載的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料，其具有成纖維細(xì)胞的增殖功能。
4.權(quán)利要求3中記載的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料，其細(xì)胞增殖功能來源于片狀多孔材料表面上存在的白細(xì)胞和/或血小板。
5.創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料，其為含有片狀多孔材料的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料，且具有生長因子產(chǎn)生功能。
6.權(quán)利要求5中記載的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料，其中，相對對照血漿，生長因子的產(chǎn)生功能滿足以下任何一項(xiàng)血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)的情況為5倍以上、血小板衍生生長因子-AB(PDGF-AB)的情況為2倍以上、轉(zhuǎn)化生長因子(TGF-β1)的情況為2倍以上。
7.權(quán)利要求6中記載的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料，其中，生長因子的產(chǎn)生功能來源于片狀多孔材料表面上存在的白細(xì)胞和/或血小板。
8.權(quán)利要求1～7任一項(xiàng)中記載的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料，其中，片狀多孔材料的厚度為0.01～3mm。
9.權(quán)利要求1～8任一項(xiàng)中記載的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料，其中，片狀多孔材料可根據(jù)創(chuàng)傷部位的形狀而變形。
10.權(quán)利要求9中記載的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料，其中，片狀多孔材料為無紡布。
11.權(quán)利要求10中記載的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料，其中，無紡布的纖維直徑為0.3～50μm、松密度是0.05～0.5g/cm3。
12.權(quán)利要求9中記載的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料，其中，片狀多孔材料為海綿狀結(jié)構(gòu)體。
13.權(quán)利要求12中記載的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料，其中，海綿狀結(jié)構(gòu)體的平均孔徑為1.0～40μm。
14.權(quán)利要求1～13任一項(xiàng)中記載的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料，其中，片狀多孔材料的材質(zhì)是天然高分子或者是合成高分子。
15.權(quán)利要求14中記載的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料，其中，片狀多孔材料的材質(zhì)為以疏水性高分子為主要成分的合成高分子。
16.權(quán)利要求13或14中記載的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料，其中，片狀多孔材料的材質(zhì)為生物分解性材料。
17.權(quán)利要求1～16任一項(xiàng)中記載的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料，其中，白細(xì)胞和/或血小板是來源于外周血、骨髓液或者臍帶血。
18.權(quán)利要求1～16任一項(xiàng)中記載的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料，其中，白細(xì)胞和/或血小板為成熟細(xì)胞。
19.權(quán)利要求17或18中記載的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料，其中，白細(xì)胞和/或血小板來源于自體。
20.權(quán)利要求1～19任一項(xiàng)中記載的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料，其中，在片狀多孔材料上的白細(xì)胞密度為6.0×106個(gè)/cm3以上和/或血小板密度為2.5×108個(gè)/cm3以上。
21.權(quán)利要求1～20任一項(xiàng)中記載的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料，其中，片狀多孔材料中整合有成纖維細(xì)胞。
22.權(quán)利要求21中記載的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料，其中，成纖維細(xì)胞為來自與創(chuàng)傷組織相同組織的成纖維細(xì)胞。
23.權(quán)利要求1～22任一項(xiàng)中記載的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料，其中，片狀多孔材料含有纖維蛋白。
24.創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料的制造方法，其中包括在片狀多孔材料上至少捕獲白細(xì)胞和/或血小板的工序。
25.權(quán)利要求24中記載的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料的制造方法，其中，片狀多孔材料的厚度為0.01～3mm。
26.權(quán)利要求24或25任一項(xiàng)中記載的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料的制造方法，其中，片狀多孔材料為無紡布。
27.權(quán)利要求26中記載的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料的制造方法，其中，無紡布的纖維直徑為0.3～50μm、松密度為0.05～0.5g/cm3。
28.權(quán)利要求24或25中記載的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料的制造方法，其中，片狀多孔材料為海綿狀結(jié)構(gòu)體。
29.權(quán)利要求28中記載的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料的制造方法，其中，海綿狀結(jié)構(gòu)體的平均孔徑為1.0～40μm。
30.權(quán)利要求24～29任一項(xiàng)中記載的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料的制造方法，其中，片狀多孔材料具有血液細(xì)胞的選擇分離性。
31.權(quán)利要求30中記載的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料的制造方法，其中，片狀多孔材料的表面具有血液細(xì)胞的選擇分離性。
32.權(quán)利要求31中記載的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料的制造方法，其中，相對于紅細(xì)胞，片狀多孔材料選擇性地捕獲白細(xì)胞和/或血小板。
33.權(quán)利要求32中記載的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料的制造方法，其中，片狀多孔材料對白細(xì)胞的捕獲率為50％以上和/或?qū)ρ“宓牟东@率為50％以上。
34.權(quán)利要求24～33任一項(xiàng)中記載的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料的制造方法，其中，通過過濾至少含白細(xì)胞和/或血小板的細(xì)胞懸浮液，在片狀多孔材料上進(jìn)行捕獲。
35.權(quán)利要求34中記載的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料的制造方法，其中，過濾是經(jīng)過一次性通過進(jìn)行的。
36.權(quán)利要求35中記載的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料的制造方法，其中，細(xì)胞懸浮液的過濾液量不足400ml。
37.權(quán)利要求35～37任一項(xiàng)中記載的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料的制造方法，其中，相對于片狀多孔材料的有效過濾面積的過濾液量的比不足10ml/cm2。
38.權(quán)利要求35～37任一項(xiàng)中記載的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料的制造方法，其中，相對于片狀多孔材料容積的過濾液量的比不足100。
39.權(quán)利要求35～38任一項(xiàng)中記載的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料的制造方法，其中，相對于片狀多孔材料，使細(xì)胞懸浮液一次過濾。
40.權(quán)利要求35～40任一項(xiàng)中記載的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料的制造方法，其中，相對于片狀多孔材料，細(xì)胞懸浮液過濾方向?yàn)閱我环较颉?br> 41.權(quán)利要求35～40任一項(xiàng)中記載的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料的制造方法，其中，過濾時(shí)間為20分鐘以內(nèi)。
42.權(quán)利要求34中記載的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料的制造方法，其中，過濾是由體外循環(huán)進(jìn)行。
43.權(quán)利要求42中記載的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料的制造方法，其中，過濾流速為20～200ml/min。
44.權(quán)利要求42或43中記載的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料的制造方法，其中，過濾時(shí)間為10～300分鐘。
45.權(quán)利要求24～44任一項(xiàng)中記載的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料的制造方法，其中，細(xì)胞懸浮液為新鮮血。
46.權(quán)利要求45中記載的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料的制造方法，其中，細(xì)胞懸浮液為采血后48小時(shí)以內(nèi)的新鮮血。
47.權(quán)利要求24～46任一項(xiàng)中記載的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料的制造方法，其中，細(xì)胞懸浮液主要含有成熟細(xì)胞。
48.權(quán)利要求24～47任一項(xiàng)中記載的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料的制造方法，其中，細(xì)胞懸浮液來源為自體血。
49.權(quán)利要求24～48任一項(xiàng)中記載的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料的制造方法，其中，細(xì)胞懸浮液含有作為抗凝劑的檸檬酸、肝素類或水解酶抑制劑中的任一種。
50.權(quán)利要求24～49任一項(xiàng)中記載的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料的制造方法，其中包括培養(yǎng)至少捕獲有白細(xì)胞和/或血小板的片狀多孔材料的工序。
51.權(quán)利要求50中記載的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料的制造方法，其中，在培養(yǎng)時(shí)添加細(xì)胞活性化材料。
52.權(quán)利要求24～51任一項(xiàng)中記載的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料的制造方法，其中還包括在片狀多孔材料中整合成纖維細(xì)胞的工序。
53.權(quán)利要求52中記載的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料的制造方法，其中，使成纖維細(xì)胞接觸片狀多孔材料、或?qū)⒊衫w維細(xì)胞混合到細(xì)胞懸浮液后進(jìn)行過濾使之整合。
54.權(quán)利要求53中記載的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料的制造方法，其中，成纖維細(xì)胞為來自與創(chuàng)傷組織相同組織的成纖維細(xì)胞。
55.權(quán)利要求24～54任一項(xiàng)中記載的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料的制造方法，其中還包括使片狀多孔材料含有纖維蛋白的工序。
56.權(quán)利要求55中記載的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料的制造方法，其中，纖維蛋白為來自于制劑。
57.權(quán)利要求56中記載的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料的制造方法，其中，纖維蛋白為回收用片狀多孔材料過濾細(xì)胞懸浮液時(shí)排出的液體，經(jīng)濃縮得到的。
58.權(quán)利要求24～57任一項(xiàng)中記載的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料的制造方法，其中還包括至少在捕獲白細(xì)胞和/或血小板后洗滌片狀多孔材料的工序。
59.權(quán)利要求24～58任一項(xiàng)中記載的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料的制造方法，其中，在片狀多孔材料上至少捕獲白細(xì)胞和/或血小板的工序和/或洗滌該片狀多孔材料的工序是在附有液體入口和出口的可開放液密容器中進(jìn)行的。
60.權(quán)利要求59中記載的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料的制造方法，其中還包括從可開放液密容器中取出片狀多孔材料進(jìn)行保存的工序。
61.由權(quán)利要求24～60中任一種記載的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料的制造方法獲得的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料。
62.一種創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料的制備裝置，其將片狀多孔材料配置成一方通向入口側(cè)、另一方通向出口側(cè)，把附有用于液體注入和排出的入口和出口的可開放液密容器內(nèi)部隔絕成兩室。
63.權(quán)利要求62中記載的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料的制備裝置，其將片狀多孔材料夾持在可撓性樹脂板中并溶合或粘合的軟質(zhì)裝置，且可剝開可撓性樹脂板的部分來露出或取出內(nèi)部的片狀多孔材料。
64.權(quán)利要求63中記載的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料的制備裝置，其為平板狀。
65.權(quán)利要求62中記載的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料的制備裝置，其為配備有固定裝置的硬質(zhì)裝置，且可通過解除該固定裝置來露出或取出內(nèi)部的片狀多孔材料。
66.權(quán)利要求65中記載的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料的制備裝置，其為圓筒狀。
67.權(quán)利要求66中記載的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料的制備裝置，其中裝有卷成布匹狀收容的片狀多孔材料。
68.權(quán)利要求62～67任一項(xiàng)中記載的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料的制備裝置，其中，片狀多孔材料的厚度為0.01～3mm。
69.權(quán)利要求62～68任一項(xiàng)中記載的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料的制備裝置，其中，片狀多孔材料為無紡布。
70.權(quán)利要求69中記載的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料的制備裝置，其中，無紡布的纖維直徑為0.3～50μm、松密度為0.05～0.5g/cm3。
71.權(quán)利要求62～68任一項(xiàng)中記載的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料的制備裝置，其中，片狀多孔材料為海綿狀結(jié)構(gòu)體。
72.權(quán)利要求71中記載的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料的制備裝置，其中，海綿狀結(jié)構(gòu)體平均孔徑為1.0～40μm。
73.權(quán)利要求62～72任一項(xiàng)中記載的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料的制備裝置，其中，片狀多孔材料具有血液細(xì)胞的選擇分離性。
74.權(quán)利要求73中記載的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料的制備裝置，其中，片狀多孔材料的表面具有血液細(xì)胞的選擇分離性。
75.權(quán)利要求74中記載的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料的制備裝置，其中，與紅細(xì)胞相比，片狀多孔材料選擇性地捕獲白細(xì)胞和/或血小板。
76.權(quán)利要求75中記載的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料的制備裝置，其中，片狀多孔材料對白細(xì)胞的捕獲率為50％以上和/或?qū)ρ“宓牟东@率為50％以上。
77.權(quán)利要求62～76任一項(xiàng)中記載的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料的制備裝置，其配備有能夠在容器入口側(cè)和/或出口側(cè)連接袋子的連接部件。
78.權(quán)利要求77中記載的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料的制備裝置，其中，在容器的入口側(cè)備有采血袋和/或出口側(cè)備有離心袋。
79.權(quán)利要求62～76任一項(xiàng)中記載的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料的制備裝置，其在容器的入口側(cè)和出口側(cè)備有體外循環(huán)回路。
80.權(quán)利要求62～79任一項(xiàng)中記載的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料的制備裝置，其用滅菌袋包裝進(jìn)行了滅菌。
81.權(quán)利要求77中記載的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料的制備裝置，其為使容器的入口出口與外界連通進(jìn)行包裝、裝置整體被滅菌袋包裝而滅菌。
82.利用權(quán)利要求62～81任一項(xiàng)中記載的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料的制備裝置獲得的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料。
83.一種治療創(chuàng)傷部位的方法，是將權(quán)利要求1～23、61和82任一項(xiàng)中記載的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料貼附在創(chuàng)傷部位。
84.權(quán)利要求83中記載的治療創(chuàng)傷部位的方法，其中，開放容器，以從容器中露出片狀多孔材料一面的狀態(tài)進(jìn)行貼附。
85.權(quán)利要求84中記載的治療創(chuàng)傷部位的方法，其為從容器中取出片狀多孔材料進(jìn)行貼附。
86.權(quán)利要求83～85任一項(xiàng)中記載的創(chuàng)傷部位的治療方法，其為在制備創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料后的30分鐘內(nèi)將其貼附到創(chuàng)傷部位。
87.權(quán)利要求83～86任一項(xiàng)中記載的治療創(chuàng)傷部位的方法，其中，創(chuàng)傷為體表創(chuàng)傷。
88.權(quán)利要求83～87任一項(xiàng)中記載的治療創(chuàng)傷部位的方法，其中，用保護(hù)材料被覆固定所貼附的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料。
89.權(quán)利要求88中記載的治療創(chuàng)傷部位的方法，其中，保護(hù)材料為由不具有透水性的原料構(gòu)成的片。
90.權(quán)利要求89中記載的治療創(chuàng)傷部位的方法，其中，保護(hù)材料是由具有氣體通透性同時(shí)不具有透水性的原料構(gòu)成的片。
全文摘要
本發(fā)明的目的是提供用于短時(shí)間內(nèi)有效地濃縮對創(chuàng)傷愈合有效的細(xì)胞，使之作為創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料來應(yīng)用的裝置。本發(fā)明提供了由表面上至少存在有白細(xì)胞和/或血小板的片狀多孔材料所組成的創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料、其制造方法、其制備裝置、和利用上述材料、方法、裝置的創(chuàng)傷部位的治療方法。
文檔編號A61P17/02GK1798565SQ20048001556
公開日2006年7月5日 申請日期2004年6月7日 優(yōu)先權(quán)日2003年6月6日
發(fā)明者巖元潮, 德島恭雄, 北口暢哉 申請人:旭化成醫(yī)療有限公司