專利名稱：：一種提高免疫力的中藥組合物及制備方法和質(zhì)量控制方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種中藥組合物及其制備方法和質(zhì)量控制方法，特別涉及一種用于提高機(jī)體免疫力的中藥組合物及其制備方法和質(zhì)量控制方法。
背景技術(shù)：
：中醫(yī)學(xué)認(rèn)為，肺、脾、腎三臟虛損可引起慢性支氣管炎、反復(fù)感冒，而慢性支氣管炎臨床緩解期患者癥狀緩解，但病理改變尚未消除。治療應(yīng)以增強(qiáng)體質(zhì)提高抗病力為主；該期可用抗菌譜較廣的抗菌藥適當(dāng)?shù)倪M(jìn)行預(yù)防性治療，但長(zhǎng)期服用抗菌藥物容易引起副作用。使用中藥治療和免疫調(diào)節(jié)劑，開展中醫(yī)藥防治該病，已得到國(guó)內(nèi)外學(xué)者的共識(shí)。因此服用副作用小的中成藥是比較適宜的。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的一個(gè)目的在于公開一種中藥組合物；本發(fā)明的另一個(gè)目的在于公開一種提高機(jī)體免疫力的中藥組合物；本發(fā)明的第三個(gè)目的在于公開一種中藥組合物的制備方法；本發(fā)明目的還在于公開一種中藥組合物的質(zhì)量控制方法。本發(fā)明藥物組合物的原料藥組成及配比如下(按重量份)黃芪500-4000重量份刺五加浸膏10-100重量份白術(shù)150-1200重量份五味子80-700重量份防風(fēng)150-1200重量份麥冬150-1200重量份。本發(fā)明藥物組合物的原料藥組成優(yōu)選配比為(按重量份)黃芪3000重量份刺五加浸膏75重量份白術(shù)(炒)1000重量份五味子500重量份防風(fēng)1000重量份麥冬1000重量份。本發(fā)明藥物組合物的原料藥組成優(yōu)選配比為(按重量份)黃芪510重量份刺五加浸膏12重量份白術(shù)167重量份五味子83重量份防風(fēng)167重量份麥冬167重量份。本發(fā)明藥物組合物的原料藥組成優(yōu)選配比為(按重量份)黃芪650重量份刺五加浸膏12重量份炒白術(shù)220重量份五味子110重量份防風(fēng)220重量份麥冬220重量份。本發(fā)明藥物組合物的原料藥組成優(yōu)選配比為(按重量份)黃芪3800重量份刺五加浸膏70重量份白術(shù)(炒)1286重量份五味子643重量份防風(fēng)1286重量份麥冬1286重量份。本發(fā)明藥物組合物的原料藥組成優(yōu)選配比為(按重量份)黃芪550重量份刺五加浸膏10重量份白術(shù)(炒)186重量份五味子93重量份防風(fēng)186重量份麥冬186重量份。本藥物組合物的制備方法以上五味酌予碎斷，分別加水煎煮1-3次，每次各加5-8倍量水，每次0.75-1.5小時(shí)，合并煎液，離心，過濾，靜置18-36小時(shí)，傾取上清液，加入刺五加浸膏，濃縮至相對(duì)密度1.20-1.22(60℃測(cè))的清膏，趁熱加入糊精，充分?jǐn)嚢杈鶆?，低溫干?60℃)，粉碎成細(xì)粉，得本藥物組合物，該藥物組合物可制成臨床可接受的劑型，包括片劑、顆粒劑、膠囊劑、口服液體制劑、滴丸等。本組合物制劑的質(zhì)量控制方法含有如下鑒別和含量測(cè)定方法中的一種或幾種，本發(fā)明質(zhì)量控制方法中的鑒別及含量測(cè)定方法為鑒別方法選自如下方法中的一種或幾種a、取本藥物組合物10g，加5％硫酸溶液50ml，水解2-4小時(shí)，濾過，濾液加氯仿提取2-3次，每次20ml，合并氯仿液，加水洗滌2-3次，每次20ml，分取氯仿液，蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，作為供試品溶液；另取異秦皮啶對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；照薄層色譜法(中國(guó)藥典2000年版一部附錄VIB)試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以8-12∶4-6∶1-2比例的正已烷-醋酸乙酯-甲醇為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視；供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的亮蘭色熒光斑點(diǎn)；b、取本藥物組合物10g，加水50ml，煎煮5-10分鐘，濾過，濾液加鹽酸1ml，加熱煮沸5-10分鐘，放冷，加氯仿20ml振搖提取，分取氯仿液，濃縮至1ml，作為供試品溶液；另取麥冬對(duì)照藥材1g，加水20ml，煎煮5-15分鐘，濾過，濾液加鹽酸0.5ml，同法制成對(duì)照藥材溶液；照薄層色譜法(中國(guó)藥典2000年版一部附錄VIB)試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以4-8∶1-2比例的氯仿-丙酮為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，在100℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰；供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。含量測(cè)定方法為取本藥物組合物10g，精密稱定，置索氏提取器中，加甲醇80ml回流提取至提取液無色，提取液回收甲醇，并濃縮至干，殘?jiān)铀?0ml，微熱使溶解，用水飽和的正丁醇振搖提取2-3次，每次15ml，合并正丁醇液，蒸干，殘?jiān)铀?5ml使溶解，通過D101型大孔吸附樹脂柱(內(nèi)徑1.5cm，長(zhǎng)10cm)，加0.5mol/L氫氧化鈉溶液20ml洗脫，棄去0.5mol/L氫氧化鈉洗脫液，再用水洗脫至pH6.5-7.5，繼用40％乙醇50ml洗脫，棄去40％乙醇洗脫液，最后用70％乙醇80ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，用甲醇溶解并轉(zhuǎn)移至1ml量瓶?jī)?nèi)，加甲醇至刻度，搖勻，作為供試品溶液；另取黃芪甲苷對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液，照薄層色譜法(中國(guó)藥典2000年版一部附錄VIB)試驗(yàn)，吸取供試品溶液8μl、對(duì)照品溶液2μl與4μl，分別交叉點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以65∶35∶10比例的氯仿-甲醇-水10℃以下放置過夜的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，在100℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，在薄層板上覆蓋同樣大小的玻璃板，周圍用膠布固定，照薄層色譜法(中國(guó)藥典2000年版一部附錄VIB薄層掃描法)進(jìn)行掃描，波長(zhǎng)λS＝530nm，λR＝700nm，測(cè)量供試品吸收度積分值與對(duì)照品吸收度積分值，計(jì)算，本品每袋含黃芪甲苷(C41H68O14)，不得少于0.40mg。本發(fā)明中藥組合物益氣固表，健脾，補(bǔ)肺，益腎。用于肺、脾、腎虛弱所致的機(jī)體免疫力低下的治療。本發(fā)明實(shí)現(xiàn)的制劑穩(wěn)定，質(zhì)量可控。對(duì)本中藥組合物顆粒制劑(芪風(fēng)固表顆粒)的藥效學(xué)部分進(jìn)行初步研究；下述實(shí)驗(yàn)例用于進(jìn)一步說明但不限于本發(fā)明實(shí)驗(yàn)例1提取工藝試驗(yàn)根據(jù)湯劑的傳統(tǒng)煎煮方法，把藥味一起沸水群煎2次，每次1小時(shí)，采用離心后靜置方法去除水不溶性雜質(zhì)。選定煎煮時(shí)間、煎煮次數(shù)及煎煮用水量等三因素，選取各因素的三個(gè)水平，煎煮時(shí)間選取0.75-1.5小時(shí)，煎煮次數(shù)選取1-3次，經(jīng)預(yù)試驗(yàn)選取5-8倍加水量較為適宜。因素水平見表1。表1因素水平將三個(gè)因素用L9(34)正交表安排實(shí)驗(yàn)，并進(jìn)行方差分析，考察指標(biāo)為用烘干法測(cè)定的水浸膏，得率結(jié)果見表2、表3。表2正交設(shè)計(jì)表L9(34)表3方差分析表F(1-0.05)(2.2)＝99.0從方差分析結(jié)果可知因素A、B對(duì)水浸膏得率的影響非常顯著，但A、B中IIJ、IIIJ比較接近，考慮到節(jié)省工時(shí)，降低成本等原因，對(duì)A2、A3，B2、B3水平之間分別進(jìn)行F檢驗(yàn)(見表4、表5)。結(jié)果A2、A3、B2、B3之間無顯著性差異，因此選取A2、B2水平，因素C無顯著性差異，故選C1為宜，所以最優(yōu)組合為A2B1C1，即用5倍水量、煎煮2次、煎煮時(shí)間為1小時(shí)水浸膏得率最高。表4因素A中A2、A3水平之間方差分析表5因素B中B2、B3水平之間方差分析實(shí)驗(yàn)例2浸膏與輔料干燥溫度考核(見表6)表6浸膏干燥溫度考察表實(shí)驗(yàn)表明干燥溫度為60℃、80℃時(shí)含量變化不大，綜合其它因素選取較低的干燥溫度60℃為宜。實(shí)驗(yàn)例3含量測(cè)定試驗(yàn)取樣品10g，精密稱定，置索氏提取器中，加甲醇80ml回流提取至提取液無色，提取液回收甲醇并濃縮至干，殘?jiān)铀?0ml，微熱使溶解，用水飽合的正丁醇振搖提取3次，每次15ml，合并正丁醇提取液。減壓回收溶劑，殘?jiān)铀?5ml分次溶解(10、5、5、5)，依次通過D101型大孔樹脂柱(內(nèi)徑1.5cm，長(zhǎng)10cm)，加0.5mol/L氫氧化鈉溶液20ml沖洗，繼用水沖洗至中性，再用40％乙醇50ml洗脫，棄去40％乙醇洗脫液，最后用70％乙醇80ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘?jiān)眉状既芙獠⑥D(zhuǎn)移至1ml容量瓶?jī)?nèi)，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液，另取黃芪甲苷對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液，照薄層色譜法(中國(guó)藥典2000年版一部附錄VIB)試驗(yàn)，吸取供試品溶液8μl，對(duì)照品溶液2μl與4μl，分別交叉點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以氯仿-甲醇-水(65∶35∶10)10℃以下放置過夜的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇液，100℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，在薄層板上覆蓋同樣大小的玻璃板，周圍用膠布固定，照薄層色譜法(中國(guó)藥典2000年版一部附錄VIB薄層掃描法)進(jìn)行掃描，波長(zhǎng)λS＝530nm，λR＝700nm，測(cè)量供試品吸收度積分值與對(duì)照品吸收度積分值，計(jì)算，即得。樣品測(cè)定數(shù)據(jù)取3批樣品，依法測(cè)定黃芪甲苷的含量，結(jié)果見表7。表7樣品測(cè)定結(jié)果由上述測(cè)定結(jié)果，本品黃芪甲苷每袋不得少于0.40mg。實(shí)驗(yàn)例4芪風(fēng)固表顆粒對(duì)慢支模型小鼠肺組織病理形態(tài)學(xué)的影響1、實(shí)驗(yàn)方法取18-22g健康昆明種小鼠50只，雌雄各半，按體重、性別隨機(jī)分為5組，用煙熏法復(fù)制慢支模型，各組每日均正常喂飼食水，實(shí)驗(yàn)當(dāng)日開始灌胃給藥，其劑量按成人每日每公斤體重用藥量折算，空白對(duì)照組每日灌胃1次與給藥組等容積的生理鹽水；模型對(duì)照組每日煙熏并灌胃1次等容積生理鹽水；芪風(fēng)固表低劑組每天煙熏并按2.5g/kg體重灌胃給藥1次(為成人每公斤體重日治療量的12倍)，芪風(fēng)固表高劑組煙熏并按5g/kg體重灌胃給藥1次(為成人日治療量的24倍)，陽性藥對(duì)照組煙熏并灌胃參蘇丸7.5g/kg體重1次。連續(xù)實(shí)驗(yàn)50天。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，將各組小鼠摘眼球取血并剖取心、肝、脾、肺。肺組織以10％福爾馬林常規(guī)固定，送病理室制片(石蠟包埋，常規(guī)制片、HE染色)，光鏡觀察。其它器官做指標(biāo)測(cè)定。先進(jìn)行小鼠慢支模型復(fù)制的預(yù)備實(shí)驗(yàn)，經(jīng)病理檢查證實(shí)，以亞布力煙葉煙熏小鼠可致出現(xiàn)慢支的病理變化。將40只小鼠置于一特制的塑料箱中，容積0.04m3，上面有一直徑1.5cm小出氣孔，在側(cè)下方有一直徑3cm的開口，將煙葉卷成筒狀，點(diǎn)燃，在末端連一大吸耳球向箱內(nèi)送入煙霧(進(jìn)煙速度盡量保持一致)前20天每天上、下午各熏1次，每次30min，煙葉10g，第21-30天每日上午煙熏1次，每次30min，煙葉10g，第31-50天，每天上午煙熏1次，時(shí)間30min，煙葉5g。2、光鏡觀察結(jié)果空白對(duì)照組氣管上皮完整，纖毛排列整齊，未見鱗化，肺內(nèi)支氣管可見極少量慢性炎細(xì)胞浸潤(rùn)，粘膜上皮纖毛未見倒伏，無壞死。模型對(duì)照組氣管上皮增生，鱗化(3/10只)，肺內(nèi)各級(jí)支氣管均出現(xiàn)較多的慢性炎細(xì)胞浸潤(rùn)(10/10只)及中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)(6/10只)，較重者出現(xiàn)“套袖狀”，粘膜上皮纖毛倒?fàn)?，粘連，纖毛細(xì)胞變性壞死或脫落，部分呈乳頭狀增生(5/10只)，個(gè)別出現(xiàn)鱗狀化生(3/10只)杯狀細(xì)胞增生(3/10只)，個(gè)別終未細(xì)支氣管擴(kuò)張，形成小囊腫(2/10只)。本組中出現(xiàn)一例全肺廣泛小膿腫，肺廣泛實(shí)變。芪風(fēng)固表低劑組氣管上皮完整，肺內(nèi)各級(jí)支氣管均出現(xiàn)較多慢性炎細(xì)胞浸潤(rùn)(8/10只)少量中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)(3/10只)，出現(xiàn)較多“套袖狀”。粘膜上皮纖毛粘連、倒伏、纖毛細(xì)胞變性、壞死或脫落(5/10只)，部分呈乳頭狀增生(5/10只)，個(gè)別見鱗化(2/10只)，杯狀細(xì)胞增生(5/10只)，1例肺終末細(xì)支氣管擴(kuò)張。芪風(fēng)固表高劑組氣管上皮完整，個(gè)別杯狀細(xì)胞體積增大，肺內(nèi)各級(jí)支氣管出現(xiàn)較輕的慢性炎細(xì)胞浸潤(rùn)，可見粘膜上皮纖毛倒?fàn)?，壞?2/10只)，小支氣管上皮乳頭狀增生(4/10只)，未見支氣管擴(kuò)張。陽性藥對(duì)照組氣管上皮完整，個(gè)別杯狀細(xì)胞體積增大，可見個(gè)別鱗狀化生(2/10只)，肺內(nèi)各級(jí)支氣管見較少慢性炎細(xì)胞浸潤(rùn)(8/10只)，見少量嗜中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)(2/10只)，細(xì)支氣管呈乳頭狀增生(4/10只)。實(shí)驗(yàn)例5抗炎實(shí)驗(yàn)1、大鼠棉球肉芽腫實(shí)驗(yàn)雄性Wistar140-160g大鼠32只，按體重隨機(jī)分為四組，每組8只。即芪風(fēng)固表低劑組及高劑組；分別按1.10g/kg體重及2.20g/kg體重(成人日治療量的5.5、11倍)；每日灌胃給藥1次。藥物對(duì)照參蘇丸3.75g/kg體重每日灌胃給藥1次?？瞻讓?duì)照組每日灌胃1次與給藥組等體積的生理鹽水。各組大鼠連續(xù)給藥10天，從致炎前三天開始給藥。用乙醚淺麻醉，于無菌條件下做蹊部切口，將已稱重的棉球(30mg左右)經(jīng)高壓滅菌，每個(gè)棉球再加氨芐青霉素1mg/0.1ml，50℃烘箱烘干后，植入大鼠兩側(cè)腹股溝皮下，致炎后第八天剝離出棉球肉芽組織，于70℃烘箱干燥1h后稱重，減去原棉球重量，即為肉芽腫重量，結(jié)果見表8。表8對(duì)大鼠棉球肉芽腫的影響(X±S)注與空白組比較*P＜0.05，**P＜0.01，與高劑組比較△P＜0.05。結(jié)果顯示，給藥高劑組對(duì)大鼠棉球肉芽腫有顯著抑制作用，與空白組比較具有非常顯著性差異(P＜0.01)；低劑組和藥物對(duì)照組與空白組比較差異顯著(P＜0.05)。2、大鼠瓊脂肉芽腫實(shí)驗(yàn)取雄性160-200g大鼠32只，按體重隨機(jī)分為四組，分組及給藥劑量同1，于乙醚淺麻醉下，在鼠背中線皮下注射2％瓊脂溶液2ml，致炎當(dāng)日開始給藥，致炎后第15天剝離出瓊脂肉芽腫塊，稱取濕重，減去瓊脂重量，即為肉芽腫重量。結(jié)果見表9。表9對(duì)大鼠瓊脂肉芽腫的影響(X±S)注與空白組比較*P＜0.05，**P＜0.01。結(jié)果表明，該藥對(duì)大鼠瓊脂肉芽腫形成有顯著抑制作用，高劑組與空白組比較，差異非常顯著(P＜0.01)，藥物對(duì)照組與空白組比較亦具顯著性差異(P＜0.05)。3、大鼠蛋清致足跖腫脹實(shí)驗(yàn)雄性120-150g大鼠32只，按體重隨機(jī)分為四組，分組及給藥劑量同1，各組大鼠給藥7天后，于未次給藥后30min，在大鼠右后肢足跖皮下注入0.1ml的鮮雞蛋清，分別于注后30min，1，2，3，4h用容積測(cè)量法測(cè)量其腫脹度，并計(jì)算腫脹率和抑制率。結(jié)果見表10。表10對(duì)蛋清致大鼠足跖腫脹的影響(X±S)結(jié)果顯示，芪風(fēng)固表高劑組對(duì)大鼠蛋清致足跖腫脹在致炎后2h和3h有顯著的抑制作用(抑制率高于30％)，其腫脹抑制率在各實(shí)驗(yàn)時(shí)間均高于低劑組及藥物對(duì)照組。實(shí)驗(yàn)例6芪風(fēng)固表顆粒對(duì)慢支模型小鼠抗氧化能力影響的實(shí)驗(yàn)研究1、總抗氧化能力測(cè)定機(jī)體防御體系的抗氧化能力的強(qiáng)弱與健康程度存在密切關(guān)系，機(jī)體抗氧化作用受諸多因素的影響，如營(yíng)養(yǎng)年令，激素水平疾病等，這種機(jī)能的降低常常導(dǎo)致疾病的產(chǎn)生。測(cè)定原理機(jī)體中有許多抗氧化物質(zhì)，能使Fe3+還原成Fe2+，后者可與菲啉類物質(zhì)形成穩(wěn)固的絡(luò)合物，通過比色測(cè)定其抗氧化能力的高低。具體方法按試劑盒說明書操作，規(guī)定在37℃時(shí)每毫升血清或每毫克蛋白樣品能使反應(yīng)體系的吸光度(OD)值，每增加0.01時(shí)為1個(gè)抗氧化能力單位。前述慢支造模實(shí)驗(yàn)小鼠摘眼球取血分離血清，以血清為樣品(0.1ml)，檢測(cè)結(jié)果見表11。表11對(duì)芪風(fēng)固表小鼠血清總抗氧化能力的影響(X±S)注與空白對(duì)照組比△△P＜0.01；與模型組比較**P＜0.01。結(jié)果顯示給藥高劑組及藥物對(duì)照組均能顯著提高機(jī)體抗氧化力，與造模組比較，具非常顯著性差異(P＜0.01)。2、超氧化物歧化酶(SOD)的測(cè)定測(cè)定原理通過黃嘌呤及黃嘌呤氧化酶反應(yīng)系統(tǒng)產(chǎn)生超氧陰離子自由基，后經(jīng)氧化輕胺形成亞硝酸鹽，在顯色劑的作用下呈現(xiàn)紫紅色，當(dāng)被測(cè)樣品中含SOD時(shí)，則對(duì)O2有專一性的抑制作用，使形成的亞硝酸鹽減少，用分光光度計(jì)在550nm處測(cè)其OD值，通過公式計(jì)算求出被測(cè)樣品中的SOD活力。計(jì)算公式注依據(jù)酶的定義，每毫升反應(yīng)液中SOD抑制率達(dá)50％時(shí)所對(duì)應(yīng)SOD量為一個(gè)亞硝酸鹽單位(NU/ml或NU/mg蛋白)實(shí)驗(yàn)方法(1)取樣取上述造模小鼠肝組織制備10％肝組織勻漿測(cè)其總SOD的活力(T-SOD)。(2)組織勻漿的制備稱取一定量組織，加少量生理鹽水研磨成勻漿，用生理鹽水配成10％漿液，用時(shí)取適量稀釋至1％取勻漿上清50μl進(jìn)行測(cè)定，單位亞硝酸鹽單位/mg蛋白。測(cè)定結(jié)果見表12。表12對(duì)慢支造模小鼠肝組織T-SOD活力的影響(X±S)<tablesid="table11"num="011"><tablewidth="738">分組n劑量(g/kg)T-SOD(NU/mg蛋白)空白對(duì)照組造模對(duì)照組低劑量組高劑量組藥物對(duì)照組1010101010--2.5g/kg5.0g/kg7.5g/kg0.90±0.150.67±0.16△0.84±0.14*1.40±0.15**1.26±0.12**</table></tables>注與正常對(duì)照組比△P＜0.05；與造模組比*P＜0.05，**P＜0.01。表12可見芪風(fēng)固表能明顯提高機(jī)體組織的SOD活力，高劑組、陽性藥組與造模組及正常對(duì)照組比均具非常顯著性差異(P＜0.01)。3、過氧化脂質(zhì)降解產(chǎn)物丙二醛(MDA)測(cè)定機(jī)體通過酶系統(tǒng)與非酶系統(tǒng)產(chǎn)生氧自由基，氧自由基能攻擊生物膜中多不飽和脂肪酸，引發(fā)脂質(zhì)過氧化作用，形成脂質(zhì)過氧化物，脂質(zhì)過氧化的鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，導(dǎo)致很多脂類分解產(chǎn)物的形成，如丙二醛，過多的分解產(chǎn)物及其中一些分解產(chǎn)物則引起細(xì)胞代謝及功能障礙，引起細(xì)胞損傷，因而測(cè)定MDA的量?？煞从硻C(jī)體內(nèi)脂質(zhì)過氧化的程度，間接反映出細(xì)胞損傷的程度。測(cè)定原理方法過氧化脂質(zhì)降解產(chǎn)物中的丙二醛可與硫代巴比妥酸縮合形成紅色產(chǎn)物，在532nm處有最大吸收，具體方法按試劑盒說明書操作，樣品采取同SOD測(cè)定，制備10％肝勻漿，離心取上清，取樣量100μl。結(jié)果見表13。表13對(duì)慢支造模小鼠肝組織丙二醛含量的影響(X±S)注與正常正組比△△P＜0.01；與造模組比**P＜0.01。表13可見芪風(fēng)固表可明顯降低機(jī)體過氧化反應(yīng)降解產(chǎn)物丙二醛的含量，陽性藥組、芪風(fēng)固表給藥組與造模組比較均具非常顯著性差異(P＜0.01)。4、心肌Na+，k+-ATP酶測(cè)定ATP酶是生物膜上的一種蛋白酶，它在物質(zhì)運(yùn)送能量轉(zhuǎn)換以及信息傳遞方面有重要作用，機(jī)體在缺氧及一些疾病狀態(tài)下，酶活力發(fā)生一系列改變。近年研究指出，補(bǔ)益氣血的藥物對(duì)心肌Na+，k+-ATP酶具有不同程度的抑制作用，ATP酶的產(chǎn)生與降解與中醫(yī)的所謂“氣”關(guān)系密切。測(cè)定原理ATP酶可分解ATP生成ADP及無機(jī)磷，測(cè)定無機(jī)磷的量，可判斷ATP酶活力的高低，ATP酶活力以每小時(shí)分解每mg組織蛋白(mgprot)產(chǎn)生的無機(jī)磷(pi)的含量(μmol)來表示，即μmolpi/mgprot/h。心肌勻漿的制備取上述慢支造膜小鼠心肌組織加生理鹽水研磨制成勻漿，以生理鹽水稀釋為2％。表14對(duì)慢支造模小鼠心肌Na+，k+-ATP酶活力的影響(X±S)注與造模組比*P＜0.05；與空白對(duì)組比△P＞0.05。上表顯示芪風(fēng)固表對(duì)造模小鼠Na+，k+-ATP酶活力有顯著的抑制作用，高劑組及藥物對(duì)照組，與造模組比較均具顯著性差異(P＜0.05)。表明該藥能降低心肌耗氧量，提高缺血心肌的耐受力具有補(bǔ)益氣血之功效。實(shí)驗(yàn)例7芪風(fēng)固表顆?？箲?yīng)激作用的研究1、小鼠耐常壓缺氧實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)取健康昆明種小鼠40只，雌雄各半，體重18-22g按體重、性別隨機(jī)分四組；正常對(duì)照組，給藥高、低劑量組及陽性藥組，給藥劑量及途徑同慢支造型小鼠實(shí)驗(yàn)，連續(xù)給藥7天，于末次給藥后30min進(jìn)行耐缺氧實(shí)驗(yàn)。將小鼠放入盛有20g鈉石灰的500ml廣口瓶?jī)?nèi)，每瓶1只鼠，瓶口涂抹凡士林蓋嚴(yán)，立即計(jì)時(shí)記錄存活時(shí)間。表15芪風(fēng)固表對(duì)小鼠耐常壓缺氧作用(X±S)注與正常對(duì)照組比較*P＜0.05。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，高劑給藥組與正常對(duì)照組經(jīng)比較具有顯著性差異，(P＜0.05)，但各給藥組小鼠存活時(shí)間均高于正常對(duì)照組。2、對(duì)氰化物中毒小鼠生存時(shí)間的影響動(dòng)物分組與給藥同上(1)，連續(xù)給藥10天，于末次給藥后30min，腹腔注射0.1％氰化鉀0.1mg/10kg，記錄各動(dòng)物的生存時(shí)間。結(jié)果見表16。表16對(duì)氰化鉀中毒小鼠生存時(shí)間的影響(X±S)同對(duì)照組比較*P＜0.05。由上述結(jié)果表明芪鳳固表各劑量均能延長(zhǎng)氰化物中毒小鼠存活時(shí)間。高劑量組與正常對(duì)照組經(jīng)比較具有顯著性差異。3、小鼠耐寒實(shí)驗(yàn)分組及給藥同耐缺氧實(shí)驗(yàn)，給藥7天，未次給藥30分后，將小鼠放入室溫水中游泳2分鐘，然后放入-10℃±2℃水箱中，記錄存活時(shí)間。結(jié)果見表17。表17芪風(fēng)固表對(duì)小鼠的耐寒作用(X±S)注與正常對(duì)照組比較*P＜0.05。由上述結(jié)果表明芪鳳固表各劑量均能延長(zhǎng)低溫下小鼠存活時(shí)間。高劑量組與正常對(duì)照組經(jīng)比較具有顯著性差異。實(shí)驗(yàn)例8芪風(fēng)固表顆粒對(duì)免疫功能影響的實(shí)驗(yàn)研究1、對(duì)體液免疫功能的影響雞紅細(xì)胞做免疫原的溶血素測(cè)定實(shí)驗(yàn)方法正常小鼠受雞紅細(xì)胞免疫后，即可產(chǎn)生抗雞紅細(xì)胞抗體(溶血素)這種抗體在體外與雞紅細(xì)胞補(bǔ)體一起溫育，可使雞紅細(xì)胞溶解釋出血紅蛋白，使溶解呈紅色，而紅細(xì)胞溶血與血液中抗體含量有關(guān)，測(cè)量其上清液的OD值，即可判斷血清中抗體形成的數(shù)量。(1)18-22g小鼠雌雄兼用，按體重、性別隨機(jī)分組正常對(duì)照組每天灌胃一次等容積生理鹽水，芪風(fēng)固表高、中、低劑組每天按10g/kg體重5g/kg及2.5g/kg體重灌胃一次，參蘇丸對(duì)照組，每天按7.5g/kg體重灌胃一次，各給藥組注射環(huán)磷酰胺。免疫低下模型組注射環(huán)磷酰胺并每天灌胃1次等容積生理鹽水。(2)雞紅細(xì)胞懸液的制備于無菌條件下自雞翼下靜脈采血加入相當(dāng)于雞血體積5倍的Alsevers溶液混勻4℃冰箱保存，臨用時(shí)用生理鹽水洗滌3次，直至紅細(xì)胞壓積恒定，配成5％紅細(xì)胞混懸液。(3)補(bǔ)體制備取2只豚鼠血清混合，用生理鹽水配成10％(1∶10)稀釋液。(4)實(shí)驗(yàn)步驟實(shí)驗(yàn)第一天，每鼠腹腔注射5％生理鹽水雞紅細(xì)胞懸液0.2ml進(jìn)行免疫，同時(shí)開始灌胃給藥，連續(xù)給藥7天，并于第1.3天，除正常對(duì)照組外，每鼠腹腔注射環(huán)磷酸胺(50mg/kg)各1次。小鼠免疫后7天，摘眼球取血離心，取血清用生理鹽水稀釋100倍，取上述稀釋血清1ml與5％雞紅細(xì)胞懸液0.5ml混合在0℃冰箱中加10％補(bǔ)體0.5ml，37℃恒溫箱中保溫30分鐘后，0℃冰箱中止反應(yīng)。另做2管不加血清的空白對(duì)照，離心取上清液進(jìn)行血紅蛋白量測(cè)定，以光密度(OD)值，做為判定血清溶血素的指標(biāo)比較各組的差異，結(jié)果見表18。表18芪風(fēng)固表對(duì)雞紅細(xì)胞所致小鼠溶血素抗體生成的影響(X±S)與正常免疫組比較△△P＜0.01，與環(huán)磷酰胺組比較*P＜0.05，**P＜0.01。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理表明，芪風(fēng)固表高劑組、中低劑量組與陽性藥對(duì)照組能明顯增加免疫低下小鼠的溶血素抗體生成(P＜0.01；P＜0.05)，并隨劑量增加作用增強(qiáng)。2、對(duì)紅細(xì)胞免疫功能的影響——紅細(xì)胞C3b受體花環(huán)及免疫復(fù)合物花環(huán)試驗(yàn)取小鼠50只，按體重隨機(jī)分為5組，灌胃給藥劑量同慢支造模實(shí)驗(yàn)，給藥第10、12天，以60mg/kg體重的劑量腹腔注射環(huán)磷酰胺，間隔24小時(shí)以同樣劑量再次腹腔注射環(huán)磷酰胺。連續(xù)灌胃試驗(yàn)藥物15天，摘眼球取血按文獻(xiàn)[10]處理樣品進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果見表19。表19對(duì)小鼠紅細(xì)胞C3b受體花環(huán)率及免疫復(fù)合物花環(huán)率的影響(X±S)注與空白對(duì)照組比較△△P＜0.01；與模型組比較**P＜0.01。結(jié)果表明該藥能增強(qiáng)紅細(xì)胞免疫功能，有利于清除循環(huán)免疫復(fù)合物。3、對(duì)非特異性免疫功能的影響(1)芪風(fēng)固表對(duì)小鼠剛果紅吞噬功能的影響巨噬細(xì)胞是機(jī)體內(nèi)吞噬能力最強(qiáng)的一種細(xì)胞，將剛果紅注入動(dòng)物體內(nèi)，檢驗(yàn)巨噬細(xì)胞對(duì)其清除速度。取小鼠40只，體重18-22g雌雄各半，按體重、性別隨機(jī)分為4組，對(duì)照組給等容積生理鹽水，芪風(fēng)固表及參蘇飲組給藥劑量同慢支造模實(shí)驗(yàn)，每日1次，連續(xù)給藥7日，末次給藥后1小時(shí)分別用經(jīng)肝素鈉處理過的毛細(xì)玻管從眼眶后靜脈叢取血50μl，立即放入5.0ml蒸餾水中，使之完全溶血，作為對(duì)照管隨即從尾靜脈定量注入10mg/ml剛果紅生理鹽水溶液0.1ml/10g體重，至注射后30秒時(shí)，摘眼球取血50μl，放入5.0ml蒸餾水中溶血做為試驗(yàn)管，在510nm波長(zhǎng)下，以蒸餾水調(diào)零，測(cè)試對(duì)照管和試驗(yàn)管光密度，以兩者OD值之差，查剛果紅標(biāo)準(zhǔn)曲線，求得經(jīng)吞噬后血中殘留的剛果紅量，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表20。表20芪風(fēng)固表對(duì)小鼠剛果紅吞噬功能的影響(X±S)注與空白對(duì)照組比較**P＜0.01上表可見芪風(fēng)固表高劑組小鼠剛果紅吞噬功能明顯增強(qiáng)，高劑組及陽性藥對(duì)照組與正常對(duì)照組比較均有非常顯著性差異(P＜0.01)(2)血清溶菌酶測(cè)定實(shí)驗(yàn)方法為平板溶菌環(huán)測(cè)定法，具體步驟按《全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》中方法進(jìn)行測(cè)定。取健康小鼠50只，按體重、性別隨機(jī)分成5組，給藥劑量及方法均同小鼠慢支造型實(shí)驗(yàn)，連續(xù)給藥10天，第十、十二天除空白對(duì)照組外分別腹腔注射環(huán)磷酰胺(60mg/kg)，繼續(xù)給藥至第十五天，于末次給藥后30min取血，分離血清，用于本實(shí)驗(yàn)測(cè)定。表21芪風(fēng)固表對(duì)小鼠血清溶菌酶含量的影響(X±S)注與模型組比較*P＜0.05；與空白對(duì)照組比較△P＜0.05。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理表明，芪風(fēng)固表高劑組與陽性藥對(duì)照組能顯著提高小鼠血清溶菌酶含量，與環(huán)磷酰胺組比較，差異顯著(P＜0.05)(3)免疫器官重量測(cè)定免疫器官(胸腺、脾臟)均取自血清溶菌酶測(cè)定試驗(yàn)中的各組小鼠，以胸腺或脾臟重量(mg)與體重(g)之比作為胸腺或脾指數(shù)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表16。表22芪風(fēng)固表對(duì)小鼠免疫器官重量的影響(X±S)胸腺指數(shù)與空白對(duì)照組比較△P＜0.05與模型組比較**P＜0.01脾指數(shù)與模型組比較*P＜0.05經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理表明，芪風(fēng)固表高劑組小鼠的胸腺指數(shù)有顯著提高，與模型組比較差異非常顯著(P＜0.01)小鼠脾指數(shù)也有較顯著提高，與模型組比較差異顯著(P＜0.05)。(4)芪風(fēng)固表誘生小鼠體內(nèi)干擾素作用的研究a、干擾素的誘生鼠明種小鼠28只，雌雄各半，按體重、性別隨機(jī)分為三組，芪風(fēng)固表高、低劑量組各11只，對(duì)照組6只，高劑量組按75g/kg體重，每日灌胃給藥一次，低劑量組按5g/kg每日灌胃給藥一次，連續(xù)給藥20天。末次給藥后2小時(shí)，嚴(yán)格無菌操作、取小鼠脾臟，制備細(xì)胞懸液，將脾細(xì)胞懸液計(jì)數(shù)，稀釋成1×106/ml，加入ConA(每ml含10μg)，置于37℃搖床水浴48h，離心3000rpm/10′取上清備用。b、干擾素的效價(jià)評(píng)定細(xì)胞病變抑制法原理當(dāng)細(xì)胞受病毒損害時(shí)，受損的特征能在不染色的細(xì)胞培養(yǎng)中，用普通顯微鏡檢查出來，如果用足夠的干擾素處理這些細(xì)胞，就會(huì)抑制病變的出現(xiàn)。實(shí)驗(yàn)操作將誘生48h的干擾素每個(gè)標(biāo)本，分別做四倍稀釋設(shè)10個(gè)稀釋度，接種到已形成單層的96孔單層細(xì)胞培養(yǎng)板內(nèi)，每個(gè)稀釋度設(shè)2孔，37℃CO2孵箱培養(yǎng)24h，攻毒(100TCID50)，待病毒對(duì)照孔全部或75％以上發(fā)生明顯病變時(shí)，判定結(jié)果，一般用能抑制50％細(xì)胞病變的最高稀釋度作為1個(gè)干擾素單位。對(duì)照系統(tǒng)設(shè)三組對(duì)照系統(tǒng)A、正常細(xì)胞對(duì)照B、VSV病毒對(duì)照系統(tǒng)C、標(biāo)準(zhǔn)鼠干擾素對(duì)照系統(tǒng)c、結(jié)果見表23表23芪風(fēng)固表誘生小鼠干擾素的作用(X±SD)結(jié)果表明芪風(fēng)固表具有一定的誘生小鼠體內(nèi)干擾素的能力。結(jié)果分析A、本實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)及三組對(duì)照系統(tǒng)均成立。B、除空白組外，其余鼠脾懸液對(duì)病毒均有明顯的抑制作用。實(shí)驗(yàn)例9芪風(fēng)固表對(duì)小鼠止咳化痰作用的實(shí)驗(yàn)研究1、芪風(fēng)固表的止咳作用觀察SO2刺激法(1)SO2的制備，用250ml側(cè)口燒瓶，側(cè)口用橡皮管連接球膽，瓶?jī)?nèi)盛亞硫酸氫鈉，燒瓶塞上裝一滴定管，內(nèi)放濃硫酸，打開滴定管上的活塞，濃硫酸滴下后，在瓶?jī)?nèi)產(chǎn)生SO2，貯于球膽中，用止血鉗夾緊，應(yīng)用時(shí)用注射器吸取4-10ml。(2)小鼠按體重隨機(jī)分為四組，每組8只，高低劑量組，分別按7.5g/kg、5g/kg體重，每日灌胃給藥一次，空白組給同體積的生理鹽水，陽性藥對(duì)照組，每日按12.5g/kg體重灌胃給藥一次，連續(xù)給藥三天，第四天給藥后1小時(shí)，將小鼠放入250ml廣口瓶?jī)?nèi)，注入SO2，觀察咳嗽潛伏期(由注入SO2開始至發(fā)生咳嗽所需的時(shí)間為潛伏期)。結(jié)果芪風(fēng)固表高劑量組咳嗽潛伏期為26.57±11.61(秒)，空白對(duì)照組潛伏期為14.63±6.79(秒)，試驗(yàn)表明芪風(fēng)固表對(duì)SO2致小鼠咳嗽的潛伏期有一定的延長(zhǎng)作用(P＜0.05)，提示該藥具有一定程度的止咳作用。2、芪風(fēng)固表對(duì)小鼠的化痰作用氣管段酚紅法昆明種小鼠32只，雌雄各半，按體重隨機(jī)均分為4組，灌胃給藥方法劑量同上，連續(xù)給藥三天，第四天給藥后30分，IP酚紅0.1ml(5mg/10g體重)，注射酚紅后半小時(shí)，剖開胸腔，剝離氣管周圍組織，剪下自甲狀軟骨下至氣管分支處的一段氣管放入盛2ml生理鹽水的試管中再加0.1mlNaOH，用分光光度計(jì)546nm處測(cè)OD值，用酚紅作標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算酚紅含量(μg/ml)。試驗(yàn)結(jié)果見表24。表24芪風(fēng)固表對(duì)小鼠氣管段酚紅排泌量的影響(X±S)注與空白對(duì)照組比**P＜0.01。上述結(jié)果表明，芪風(fēng)固表能一定程度的增加氣管酚紅排泌量，顯示其一定的化痰作用。實(shí)施例1黃芪3000g刺五加浸膏75g白術(shù)(炒)1000g五味子500g防風(fēng)1000g麥冬1000g以上六味，除刺五加浸膏外，其余黃芪等五味，加水煎煮兩次，每次加水5倍量，每次1小時(shí)，合并煎液，離心，濾過，靜置24小時(shí)，傾取上清液，加入刺五加浸膏，濃縮至相對(duì)密度1.20～1.22(60℃)的清膏，趁熱加入糊精4000g，混勻，60℃干燥，粉碎成細(xì)粉，加乙醇適量制粒，干燥，分裝1000袋，即得。開水沖服，一次1袋，一日2次。實(shí)施例2黃芪500g刺五加浸膏12g白術(shù)(炒)167g五味子83g防風(fēng)167g麥冬167g以上六味，除刺五加浸膏外，其余黃芪等五味，加水煎煮三次，每次加水8倍量，每次1.5小時(shí)，合并煎液，離心，濾過，靜置32小時(shí)，傾取上清液，加入刺五加浸膏，濃縮至相對(duì)密度1.20～1.22(60℃)的清膏，趁熱加入糊精340g，混勻，60℃干燥，粉碎成細(xì)粉，按照常規(guī)方法制成片劑，1000片?？诜?，一次4-5片，一日2次。實(shí)施例3黃芪650g刺五加浸膏17g白術(shù)(炒)220g五味子110g防風(fēng)220g麥冬220g以上六味，除刺五加浸膏外，其余黃芪等五味，加水煎煮兩次，每次加水8倍量，每次1小時(shí)，合并煎液，離心，濾過，靜置18小時(shí)，傾取上清液，加入刺五加浸膏，濃縮至相對(duì)密度1.20～1.22(60℃)的清膏，趁熱加入糊精270g，混勻，60℃干燥，粉碎成細(xì)粉，按照常規(guī)方法制成膠囊劑，1000粒，即得?？诜?，一次4-5粒，一日2次。實(shí)施例4黃芪3800g刺五加浸膏15g白術(shù)(炒)1100g味子90g防風(fēng)1100g麥冬1100g以上六味，除刺五加浸膏外，其余黃芪等五味，加水煎煮兩次，每次加水8倍量，每次1小時(shí)，合并煎液，離心，濾過，靜置18小時(shí)，傾取上清液，加入刺五加浸膏，濃縮至相對(duì)密度1.20～1.22(60℃)的清膏，趁熱加入糊精3800g，混勻，60℃干燥，粉碎成細(xì)粉，按照常規(guī)方法制成顆粒劑，1000袋，即得?？诜?，一次1袋，一日2次。實(shí)施例5黃芪550g刺五加浸膏90g白術(shù)(炒)200g五味子650g防風(fēng)200g麥冬200g以上六味，除刺五加浸膏外，其余黃芪等五味，加水煎煮兩次，每次加水8倍量，每次1小時(shí)，合并煎液，離心，濾過，靜置18小時(shí)，傾取上清液，加入刺五加浸膏，濃縮至相對(duì)密度1.20～1.22(60℃)的清膏，趁熱加入糊精170g，混勻，60℃干燥，粉碎成細(xì)粉，按照常規(guī)方法制成膠囊劑，1000粒，即得。口服，一次4-5粒，一日2次。實(shí)施例6黃芪3800g刺五加浸膏70g白術(shù)(炒)1286g五味子643g防風(fēng)1286g麥冬1286g上六味，除刺五加浸膏外，其余黃芪等五味，加水煎煮兩次，每次加水8倍量，每次1小時(shí)，合并煎液，離心，濾過，靜置18小時(shí)，傾取上清液，加入刺五加浸膏，濃縮至相對(duì)密度1.20～1.22(60℃)的清膏，趁熱加入糊精3800g，混勻，60℃干燥，粉碎成細(xì)粉，按照常規(guī)方法制成顆粒劑，1000袋，即得?？诜淮?袋，一日2次。實(shí)施例7黃芪550g刺五加浸膏10g白術(shù)(炒)186g五味子93g防風(fēng)186g麥冬186g以上六味，除刺五加浸膏外，其余黃芪等五味，加水煎煮兩次，每次加水8倍量，每次1小時(shí)，合并煎液，離心，濾過，靜置18小時(shí)，傾取上清液，加入刺五加浸膏，濃縮至相對(duì)密度1.20～1.22(60℃)的清膏，趁熱加入糊精170g，混勻，60℃干燥，粉碎成細(xì)粉，按照常規(guī)方法制成膠囊劑，1000粒，即得?？诜?，一次4-5粒，一日2次。實(shí)施例8本組合物的鑒別方法取本品10g，加5％硫酸溶液50ml，水解3小時(shí)，濾過，濾液加氯仿提取2次，每次20ml，合并氯仿液，加水洗滌2次，每次20ml，分取氯仿液，蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，作為供試品溶液。另取異秦皮啶對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(中國(guó)藥典2000年版一部附錄VIB)試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以正己烷-醋酸乙酯-甲醇(8∶4∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的亮蘭色熒光斑點(diǎn)。實(shí)施例9本組合物的鑒別方法a、取本品10g，加5％硫酸溶液50ml，水解3小時(shí)，濾過，濾液加氯仿提取2次，每次20ml，合并氯仿液，加水洗滌2次，每次20ml，分取氯仿液，蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，作為供試品溶液。另取異秦皮啶對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(中國(guó)藥典2000年版一部附錄VIB)試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以正己烷-醋酸乙酯-甲醇(8∶4∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的亮蘭色熒光斑點(diǎn)。b、取本品10g，加水50ml，煎煮5分鐘，濾過，濾液加鹽酸1ml，加熱煮沸5分鐘，放冷，加氯仿20ml振搖提取，分取氯仿液，濃縮至1ml，作為供試品溶液。另取麥冬對(duì)照藥材1g，加水20ml，煎煮10分鐘，濾過，濾液加鹽酸0.5ml，同法制成對(duì)照藥材溶液。照薄層色譜法(中國(guó)藥典2000年版一部附錄VIB)試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以氯仿-丙酮(4∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，在100℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。實(shí)施例10本組合物顆粒劑的含量測(cè)定方法取本品10g，精密稱定，置索氏提取器中，加甲醇80ml回流提取至提取液無色，提取液回收甲醇，并濃縮至干，殘?jiān)铀?0ml，微熱使溶解，用水飽和的正丁醇振搖提取3次，每次15ml，合并正丁醇液，蒸干，殘?jiān)铀?5ml使溶解，通過D101型大孔吸附樹脂柱(內(nèi)徑1.5cm，長(zhǎng)10cm)，加0.5mol/L氫氧化鈉溶液20ml洗脫，棄去0.5mol/L氫氧化鈉洗脫液，再用水洗脫至pH7，繼用40％乙醇50ml洗脫，棄去40％乙醇洗脫液，最后用70％乙醇80ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，用甲醇溶解并轉(zhuǎn)移至1ml量瓶?jī)?nèi)，加甲醇至刻度，搖勻，作為供試品溶液。另取黃芪甲苷對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液，照薄層色譜法(中國(guó)藥典2000年版一部附錄VIB)試驗(yàn)，吸取供試品溶液8μl、對(duì)照品溶液2μl與4μl，分別交叉點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以氯仿-甲醇-水(65∶35∶10)10℃以下放置過夜的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，在100℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，在薄層板上覆蓋同樣大小的玻璃板，周圍用膠布固定，照薄層色譜法(中國(guó)藥典2000年版一部附錄VIB薄層掃描法)進(jìn)行掃描，波長(zhǎng)λS＝530nm，λR＝700nm，測(cè)量供試品吸收度積分值與對(duì)照品吸收度積分值，計(jì)算，本品每袋含黃芪甲苷(C41H68O14)，不得少于0.40mg。實(shí)施例11本組合物顆粒劑的質(zhì)量控制方法a、取本品10g，加5％硫酸溶液50ml，水解3小時(shí)，濾過，濾液加氯仿提取2次，每次20ml，合并氯仿液，加水洗滌2次，每次20ml，分取氯仿液，蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，作為供試品溶液。另取異秦皮啶對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(中國(guó)藥典2000年版一部附錄VIB)試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以正己烷-醋酸乙酯-甲醇(8∶4∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的亮蘭色熒光斑點(diǎn)。b、取本品10g，加水50ml，煎煮5分鐘，濾過，濾液加鹽酸1ml，加熱煮沸5分鐘，放冷，加氯仿20ml振搖提取，分取氯仿液，濃縮至1ml，作為供試品溶液。另取麥冬對(duì)照藥材1g，加水20ml，煎煮10分鐘，濾過，濾液加鹽酸0.5ml，同法制成對(duì)照藥材溶液。照薄層色譜法(中國(guó)藥典2000年版一部附錄VIB)試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以氯仿-丙酮(4∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，在100℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。c、取本品10g，精密稱定，置索氏提取器中，加甲醇80ml回流提取至提取液無色，提取液回收甲醇，并濃縮至干，殘?jiān)铀?0ml，微熱使溶解，用水飽和的正丁醇振搖提取3次，每次15ml，合并正丁醇液，蒸干，殘?jiān)铀?5ml使溶解，通過D101型大孔吸附樹脂柱(內(nèi)徑1.5cm，長(zhǎng)10cm)，加0.5mol/L氫氧化鈉溶液20ml洗脫，棄去0.5mol/L氫氧化鈉洗脫液，再用水洗脫至pH7，繼用40％乙醇50ml洗脫，棄去40％乙醇洗脫液，最后用70％乙醇80ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，用甲醇溶解并轉(zhuǎn)移至1ml量瓶?jī)?nèi)，加甲醇至刻度，搖勻，作為供試品溶液。另取黃芪甲苷對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液，照薄層色譜法(中國(guó)藥典2000年版一部附錄VIB)試驗(yàn)，吸取供試品溶液8μl、對(duì)照品溶液2μl與4μl，分別交叉點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以氯仿-甲醇-水(65∶35∶10)10℃以下放置過夜的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，在100℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，在薄層板上覆蓋同樣大小的玻璃板，周圍用膠布固定，照薄層色譜法(中國(guó)藥典2000年版一部附錄VIB薄層掃描法)進(jìn)行掃描，波長(zhǎng)λS＝530nm，λR＝700nm，測(cè)量供試品吸收度積分值與對(duì)照品吸收度積分值，計(jì)算，本品每袋含黃芪甲苷(C41H68O14)，不得少于0.40mg。權(quán)利要求1.一種藥物組合物，其特征在于該藥物組合物是由下述原料藥制成的黃芪500-4000重量份刺五加浸膏10-100重量份白術(shù)150-1200重量份五味子80-700重量份防風(fēng)150-1200重量份麥冬150-1200重量份。2.如權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征在于該藥物組合物是由下述原料藥制成的黃芪3000重量份刺五加浸膏75重量份炒白術(shù)1000重量份五味子500重量份防風(fēng)1000重量份麥冬1000重量份。3.如權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征在于該藥物組合物是由下述原料藥制成的黃芪510重量份刺五加浸膏12重量份白術(shù)167重量份五味子83重量份防風(fēng)167重量份麥冬167重量份。4.如權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征在于該藥物組合物是由下述原料藥制成的黃芪650重量份刺五加浸膏12重量份炒白術(shù)220重量份五味子110重量份防風(fēng)220重量份麥冬220重量份。5.如權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征在于該藥物組合物是由下述原料藥制成的黃芪3800重量份刺五加浸膏15重量份白術(shù)1100重量份五味子90重量份防風(fēng)1100重量份麥冬200重量份。6.如權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征在于該藥物組合物是由下述原料藥制成的黃芪550重量份刺五加浸膏90重量份炒白術(shù)200重量份五味子650重量份防風(fēng)200重量份麥冬1100重量份。7.如權(quán)利要求1、2、3、4、5或6所述的藥物組合物的制備方法，其特征在于該方法為取黃芪、刺五加浸膏、炒白術(shù)、五味子、防風(fēng)、麥冬酌予碎斷，分別加水煎煮1-3次，每次各加5-8倍量水，每次0.75-1.5小時(shí)，合并煎液，離心，過濾，靜置18-36小時(shí)，傾取上清液，加入刺五加浸膏，濃縮至相對(duì)密度1.20-1.22的浸膏，趁熱加入糊精，充分?jǐn)嚢杈鶆?，低溫干燥，粉碎成?xì)粉，得本藥物組合物，該藥物組合物可制成臨床可接受的劑型，包括片劑、顆粒劑、膠囊劑、口服液體制劑、滴丸。8.如權(quán)利要求7所述的藥物組合物的制備方法，其特征在于該方法為取黃芪、刺五加浸膏、炒白術(shù)、五味子、防風(fēng)、麥冬酌予碎斷，分別加水煎煮2次，每次各加5倍量水，每次1小時(shí)，合并煎液，離心，過濾，靜置24小時(shí)，傾取上清液，加入刺五加浸膏，濃縮至相對(duì)密度1.20-1.22的浸膏，趁熱加入糊精，充分?jǐn)嚢杈鶆颍?0℃低溫干燥，粉碎成細(xì)粉，得本藥物組合物，該藥物組合物可制成臨床可接受的劑型，包括片劑、顆粒劑、膠囊劑、口服液體制劑、滴丸。9.如權(quán)利要求1、2、3、4、5或6所述的藥物組合物的質(zhì)量控制方法，其特征在于該方法中包括如下鑒別方法中的一種和/或幾種a、取本藥物組合物10g，加5％硫酸溶液50ml，水解2-4小時(shí)，濾過，濾液加氯仿提取2-3次，每次20ml，合并氯仿液，加水洗滌2-3次，每次20ml，分取氯仿液，蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，作為供試品溶液；另取異秦皮啶對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以8-12∶4-6∶1-2比例的正己烷-醋酸乙酯-甲醇為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的亮蘭色熒光斑點(diǎn)；b、取本藥物組合物10g，加水50ml，煎煮5-10分鐘，濾過，濾液加鹽酸1ml，加熱煮沸5-10分鐘，放冷，加氯仿20ml振搖提取，分取氯仿液，濃縮至1ml，作為供試品溶液；另取麥冬對(duì)照藥材1g，加水20ml，煎煮5-15分鐘，濾過，濾液加鹽酸0.5ml，同法制成對(duì)照藥材溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以4-8∶1-2比例的氯仿-丙酮為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，在100℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰；供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。10.如權(quán)利要求9所述的藥物組合物的質(zhì)量控制方法，其特征在于該方法中包括如下鑒別方法中的一種和/或幾種a、取本藥物組合物10g，加5％硫酸溶液50ml，水解3小時(shí)，濾過，濾液加氯仿提取2次，每次20ml，合并氯仿液，加水洗滌2次，每次20ml，分取氯仿液，蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，作為供試品溶液；另取異秦皮啶對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以8∶4∶1比例的正己烷-醋酸乙酯-甲醇為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的亮蘭色熒光斑點(diǎn)；b、取本藥物組合物10g，加水50ml，煎煮5分鐘，濾過，濾液加鹽酸1ml，加熱煮沸5分鐘，放冷，加氯仿20ml振搖提取，分取氯仿液，濃縮至1ml，作為供試品溶液；另取麥冬對(duì)照藥材1g，加水20ml，煎煮10分鐘，濾過，濾液加鹽酸0.5ml，同法制成對(duì)照藥材溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以4∶1比例的氯仿-丙酮為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，在100℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰；供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。11.如權(quán)利要求1、2、3、4、5或6所述的藥物組合物的質(zhì)量控制方法，其特征在于該方法中包括如下含量測(cè)定方法取本藥物組合物10g，精密稱定，置索氏提取器中，加甲醇80ml回流提取至提取液無色，提取液回收甲醇，并濃縮至干，殘?jiān)铀?0ml，微熱使溶解，用水飽和的正丁醇振搖提取2-3次，每次15ml，合并正丁醇液，蒸干，殘?jiān)铀?5ml使溶解，通過D101型大孔吸附樹脂柱，加0.5mol/L氫氧化鈉溶液20ml洗脫，棄去0.5mol/L氫氧化鈉洗脫液，再用水洗脫至pH6.5-7.5，繼用40％乙醇50ml洗脫，棄去40％乙醇洗脫液，最后用70％7醇80ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，用甲醇溶解并轉(zhuǎn)移至1ml量瓶?jī)?nèi)，加甲醇至刻度，搖勻，作為供試品溶液；另取黃芪甲苷對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液，照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取供試品溶液8μl、對(duì)照品溶液2μl與4μl，分別交叉點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以65∶35∶10比例的氯仿-甲醇-水10℃以下放置過夜的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，在100℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，在薄層板上覆蓋同樣大小的玻璃板，周圍用膠布固定，照薄層色譜法進(jìn)行掃描，波長(zhǎng)λS＝530nm，λR＝700nm，測(cè)量供試品吸收度積分值與對(duì)照品吸收度積分值，計(jì)算，本藥物組合物每袋含黃芪甲苷，不得少于0.40mg。12.如權(quán)利要求11所述的質(zhì)量控制方法，其特征在于該方法中包括如下含量測(cè)定方法取本藥物組合物10g，精密稱定，置索氏提取器中，加甲醇80ml回流提取至提取液無色，提取液回收甲醇，并濃縮至干，殘?jiān)铀?0ml，微熱使溶解，用水飽和的正丁醇振搖提取3次，每次15ml，合并正丁醇液，蒸干，殘?jiān)铀?5ml使溶解，通過D101型大孔吸附樹脂柱，加0.5mol/L氫氧化鈉溶液20ml洗脫，棄去0.5mol/L氫氧化鈉洗脫液，再用水洗脫至pH7，繼用40％乙醇50ml洗脫，棄去40％乙醇洗脫液，最后用70％乙醇80ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，用甲醇溶解并轉(zhuǎn)移至1ml量瓶?jī)?nèi)，加甲醇至刻度，搖勻，作為供試品溶液；另取黃芪甲苷對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液，照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取供試品溶液8μl、對(duì)照品溶液2μ1與4μl，分別交叉點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以65∶35∶10比例的氯仿-甲醇-水10℃以下放置過夜的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，在100℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，在薄層板上覆蓋同樣大小的玻璃板，周圍用膠布固定，照薄層色譜法進(jìn)行掃描，波長(zhǎng)λS＝530nm，λR＝700nm，測(cè)量供試品吸收度積分值與對(duì)照品吸收度積分值，計(jì)算，本藥物組合物每袋含黃芪甲苷，不得少于0.40mg。13.如權(quán)利要求1、2、3、4、5或6所述的藥物組合物在制備提高機(jī)體免疫力藥物中的應(yīng)用。14.如權(quán)利要求1、2、3、4、5或6所述的藥物組合物在制備具有抗炎作用、提高抗氧化能力作用、抗應(yīng)激作用、提高免疫能力作用、或止咳化痰作用的藥物中的應(yīng)用。全文摘要本發(fā)明公開一種用于提高機(jī)體免疫力的中藥組合物及其制備方法和質(zhì)量控制方法。該藥物組合物含有黃芪、刺五加浸膏、白術(shù)、五味子、防風(fēng)、麥冬；以其益氣固表、健脾、補(bǔ)肺、益腎的功效，用于肺、脾、腎虛弱所致的機(jī)體免疫力低下的治療；本發(fā)明實(shí)現(xiàn)的制劑穩(wěn)定，療效確切，質(zhì)量可控。文檔編號(hào)A61K9/48GK1788775SQ20041009880公開日2006年6月21日申請(qǐng)日期2004年12月17日優(yōu)先權(quán)日2004年12月17日發(fā)明者王偉明,張洪娟申請(qǐng)人:王偉明