專利名稱：在11位帶有烴取代基的非芳香族雌激素甾族化合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于具有甾族骨架的雌激素化合物領(lǐng)域，該骨架含有非芳香族的A-環(huán)和位于3位碳原子上的游離或封閉的羥基。雌激素化合物通常可用于避孕以及治療與雌激素缺乏有關(guān)的疾病，例如絕經(jīng)主訴癥狀和骨質(zhì)疏松。
有許多雌激素化合物是已知的。例如，美國專利3,413,287教導(dǎo)性地公開了含有非芳香族的A-環(huán)和位于3位碳原子上的游離或封閉的羥基的雌激素化合物。其它記載了帶有3-羥基取代和4-5雙鍵的非芳香族甾族化合物的雌激素或激素作用的文獻包括WO 94/18224、US3,465,010、FR 2099385、US 3,652,606和EP 145 493。Baran等在US3,377,366中公開了帶有3-酮基取代和5-10雙鍵的非芳香族甾族化合物。該化合物被描述為尤其是具有雌激素或抗雌激素作用的物質(zhì)。最近，在雌激素受體(ER)藥物領(lǐng)域，注意力集中在了所發(fā)現(xiàn)的兩種不同類型的雌激素受體(稱為ERα和ERβ)上(Mosselman等，F(xiàn)EBS Letters392(1996)49-53以及EP-A0 798 378)。由于這些受體在人體組織中具有不同的分布，尋找對這兩種受體類型之一具有選擇性親和性的化合物是非常重要的技術(shù)上的進步，因為可以對與雌激素缺乏有關(guān)的疾病提供更具選擇性的治療，并較少承受與雌激素有關(guān)的副作用。
本發(fā)明提供了如下通式的雌激素 其中
R1是H、(C1-C3)烷基或(C2-C3)?；?；R2是H、α-(C1-C4)烷基、α-(C2-C4)鏈烯基或α-(C2-C4)鏈炔基；R3是H或位于甾族骨架的15或16位的(C1-C4)烷基、(C2-C4)鏈烯基或(C2-C4)鏈炔基；R4是H或選擇性地被鹵素取代的(C1-C5)烷基、(C2-C5)鏈烯基或(C2-C5)鏈炔基；優(yōu)選是乙炔基；R5是H、(C1-C3)烷基或(C2-C3)酰基；R6是(C1-C5)烷基、(C2-C5)鏈烯基、(C2-C5)鏈炔基或(C1-C5)亞烷基，這些基團選擇性地被鹵素或(C1-C3)烷氧基取代；優(yōu)選烯丙基；優(yōu)選R6中的鹵素是氟和氯；虛線的鍵表示選擇性的雙鍵。當(dāng)R6是亞烷基時，指向R6的虛線表示亞烷基部分中的另一個鍵，當(dāng)R6是烷基或鏈烯基時，11位原子和R6之間的鍵是單鍵。
現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)，這些在甾族骨架的11位帶有取代基的非芳香族的雌二醇衍生物對ERα-受體具有選擇性的親和性。
本發(fā)明的化合物是改良的雌激素，可用于與雌激素有關(guān)的疾病，例如絕經(jīng)主訴癥狀和骨質(zhì)疏松。該化合物還可用于避孕，并且還可用于治療或預(yù)防早老性癡呆、乳腺腫瘤、良性前列腺增生和心血管疾病。本發(fā)明的化合物特別適于治療和預(yù)防與雌激素缺乏有關(guān)的疾病并具有較少的與雌激素有關(guān)的副作用。
在本說明書中，所用術(shù)語具有如下含義(C1-C5)烷基是含有1-5個碳原子的支鏈、直鏈或環(huán)狀的烷基，例如甲基、乙基、異丙基、2-甲基環(huán)丙基、丁基、仲丁基、叔丁基等。
(C2-C5)鏈烯基是含有2-5個碳原子的支鏈、直鏈或環(huán)狀的鏈烯基，例如乙烯基、2-丁烯基等。
(C2-C5)鏈炔基是含有2-5個碳原子的支鏈或直鏈的鏈炔基，例如乙炔基和丙炔基。
(C2-C3)?；呛?-3個碳原子的從烷基羧酸衍生的基團，其中的烷基部分具有以上所定義的含義。
(C1-C5)亞烷基是含有1-5碳原子的支鏈、直鏈或環(huán)狀的亞烷基，例如亞甲基和亞乙基。
在以上給出的通式中，本發(fā)明的化合物優(yōu)選是具有通式II的化合物， 式II其中R1是H、(C1-C3)烷基、(C2-C3)?；?；R2是H、α-(C1-C4)烷基、α-(C2-C4)鏈烯基、α-(C2-C4)鏈炔基；R3是H或位于甾族骨架的16位的(C1-C4)烷基；R4是乙炔基；R5是H或(C1-C3)烷基、(C2-C3)?；籖6是(C1-C5)烷基、(C2-C5)鏈烯基、(C2-C5)鏈炔基；這些基團可以被氯或氟取代。當(dāng)R6是(C1-C2)烷基、乙烯基或乙炔基時，這些基團可以選擇性地被氯或氟取代，優(yōu)選R3是位于甾族骨架的16位的甲基。
更優(yōu)選的本發(fā)明甾族化合物是如下化合物，其中，在通式II的化合物中，R1是H；R2是H；R3是H或16α-甲基；R4是乙炔基；R5是H；R6是丙烯基、烯丙基或丁烯基。
本發(fā)明的化合物可以通過有機化學(xué)領(lǐng)域、特別是甾族化學(xué)領(lǐng)域已知的各種方法來制備。參見，例如Fried，J.和Edwards，J.A.，“Organic Rections in Steroid Chemistry”，第I和II卷，Van NostrandReinhold Company，New York，1972；和C.Djerassi，“SteroidReactions”，Holden-Day，Inc.，San Francisco，1963。
在C7位帶有特定取代基的甾族化合物的合成可以通過例如有機金屬化合物與適宜的4，6-二烯-3-酮甾族化合物的共軛加成來完成，通常生成7α衍生的甾族化合物(伴有少量的7β甾族化合物，其很容易通過結(jié)晶或色譜法除去)。該方法的許多例子是文獻中已知的。在甾族骨架的C11位引入取代基可以通過多種方法來進行。其中的一種方法是按照Teutsch等，Steroids 37，361(1981)中的描述將有機金屬化合物與適當(dāng)保護的5α，10α-環(huán)氧，9(11)-烯烴進行共軛加成，但也可以采用其它利用適當(dāng)保護的19-去甲雄甾-5-烯的11-氧代功能基作為按照已知的化學(xué)方法向例如C-11醛進行功能基轉(zhuǎn)化的活潑功能基的方法(參見a.o.E.Ottow等，Tetr.Lett.，5253(1993))來制備所要求保護的化合物。當(dāng)然，所列兩種方法的組合同樣可以很好地實現(xiàn)該目的。
在5(10)位引入雙鍵可以通過將適當(dāng)功能基化的甾族化合物的芳香族對應(yīng)物的A環(huán)進行所謂的Birch還原，用溶解的金屬將Δ-4，5-9，11-二烯酮還原來完成；或者通過將3-酮基-Δ-4，5-甾族化合物縮酮化來完成。后一種方法可以直接產(chǎn)生所需的Δ-5(10)異構(gòu)體，或者生成可以在合成的適宜階段通過色譜法或結(jié)晶進行分離的縮酮的混合物。將C3位的縮酮小心地水解生成所需的3-氧代-Δ-5(10)-異構(gòu)體，可通過用氫化物還原將其轉(zhuǎn)化成3-OH化合物。飽和的甾族化合物(即5αH-衍生物)很容易在還原條件下(例如將堿金屬溶于胺或氨)制得。在C14，15引入雙鍵通常通過如下方法來進行首先在C15，C16位引入雙鍵，然后將該雙鍵按照已知方法異構(gòu)化到C14，C15位。C15，C16的雙鍵還可用來和例如氰化物進行共軛加成，以進一步構(gòu)建C15上的取代基。C16取代基的引入很容易用適宜的堿和親電試劑通過烷基化來進行。
本發(fā)明還涉及藥物組合物，該組合物含有本發(fā)明的甾族化合物以及可藥用輔劑，例如常規(guī)參考書Gennaro等，Remington′sPharmaceutical Sciences(第18版，Mack出版公司，1990，尤其參見第8部分藥物制劑及其生產(chǎn))中所描述的輔劑。本發(fā)明的甾族化合物與可藥用輔劑的混合物可以壓制成固體劑量單位，例如丸劑、片劑，或者加工成膠囊或栓劑。采用藥學(xué)上適宜的液體形式，還可將該化合物以溶液、混懸液、乳液的形式作為注射制劑應(yīng)用，或者作為噴霧劑例如鼻噴霧劑應(yīng)用。為了制備劑量單位例如片劑，可以使用常規(guī)的添加劑，例如填充劑、著色劑、聚合物粘合劑等。通?？梢圆捎萌魏尾粫蓴_活性化合物功能的可藥用添加劑。本發(fā)明的甾族化合物還可以包含在植入物、陰道環(huán)、貼劑、凝膠以及其它用于緩釋的制劑中。
可用于組合物給藥的適宜載體包括乳糖、淀粉、纖維素衍生物等，或者以適宜量使用的這些物質(zhì)的混合物。
此外，本發(fā)明還涉及本發(fā)明的甾族化合物在生產(chǎn)用于治療與雌激素缺乏有關(guān)的疾病例如絕經(jīng)期間和/或絕經(jīng)后的主訴癥狀的藥物中的用途。因此，本發(fā)明還涉及絕經(jīng)期間和/或絕經(jīng)后(更年期)的主訴癥狀和骨質(zhì)疏松醫(yī)學(xué)適應(yīng)征，即，HRT(激素替代療法)領(lǐng)域的治療方法，該方法包括，向女性患者施用上述化合物(在適宜的藥物劑型中)。
此外，本發(fā)明還涉及本發(fā)明的甾族化合物在生產(chǎn)具有避孕活性的藥物中的用途。因此，本發(fā)明還涉及避孕的醫(yī)學(xué)適應(yīng)征，即，避孕的方法，該方法包括，向女性個體或雌性動物施用本領(lǐng)域常規(guī)的孕激素和雌激素，其中的雌激素是上述化合物(在適宜的藥物劑型中)。
最后，本發(fā)明涉及甾族化合物在生產(chǎn)具有選擇性雌激素活性的藥物中的用途，該藥物適用于HRT(激素替代療法)領(lǐng)域。
本發(fā)明甾族化合物的劑量可以在雌二醇衍生物的常規(guī)劑量范圍之內(nèi)，例如每次給藥0.01至10mg。
以下將參照一些非限定性的實施例和所涉及的相應(yīng)的結(jié)構(gòu)式流程圖來進一步說明本發(fā)明。
實施例1
參照流程

圖1(下一頁)描述化合物(3α，11β，17β)-11-(2-丙烯基)-19-去甲孕-5(10)-烯-20-炔-3，17-二醇(化合物11)和(3α，11β，16α，17β)-16-甲基-11-(2-丙烯基)-19-去甲孕-5(10)-烯-20-炔-3，17-二醇(化合物16)的合成。將化合物用數(shù)字編號。數(shù)字是指流程圖1-7中的相應(yīng)結(jié)構(gòu)式。
化合物2向17.3g CuI和3.84g LiCl的250ml無水THF溶液中于-70℃下加入90.6ml 1M烯丙基溴化鎂的乙醚溶液。繼續(xù)攪拌20分鐘后，加入11.4ml三甲基氯硅烷，然后加入7.5g甾族化合物1的100ml THF溶液。將反應(yīng)混合物在所有的時間內(nèi)均保持在-60℃以下。攪拌1小時后，通過倒入飽和氯化銨水溶液中終止反應(yīng)。將產(chǎn)物用乙酸乙酯萃取然后通過柱色譜純化得到6.25g無色油狀的2。NMR 5.20(m，CH烯丙基)；5.0(CH2，烯丙基)；3.04(m，H11)。
3向9.6g2在含有800mg NaOH的100ml甲醇和30ml二氯甲烷的混合物中的溶液中于0-5℃下加入0.4g硼氫化鈉。攪拌1.5小時后，反應(yīng)結(jié)束，將混合物用20ml丙酮處理0.5小時。
然后將反應(yīng)液倒入水中并用乙酸乙酯萃取，得到9.5g3。NMR 3.59(t，CHOH)；2.98(m，H11)，0.92(s，CH3)。
流程圖1
4向9.5g3的100ml丙酮溶液中加入8ml 6N HCl。攪拌2小時后，將混合物用碳酸氫鈉中和然后濃縮至少量的體積，用水稀釋并用乙酸乙酯萃取。由此得到8.2g無色無定形的4。NMR 5.68(m，H4)；3.10(m，H11)；3.65(m，CHOH)。
5將8.2g4的100ml無水THF溶液于-70℃下加入到500ml液氨中。將該混合物用一定量的金屬鋰(約500mg)處理直至反應(yīng)混合物的藍(lán)色能夠保持至少15分鐘。通過加入氯化銨終止反應(yīng)。
將蒸除氨后剩余的殘余物用水稀釋并用乙酸乙酯萃取。
色譜純化得到4.0g無色油狀的5；Rf0.55(庚烷/乙酸乙酯1/1 v/v)。
NMR 2.80(ab，C4上的CH2)；0.93(s，CH3)。
6向4.0g5的80ml甲醇溶液中加入6ml原甲酸三甲酯，然后加入0.8g甲苯磺酸。攪拌2小時后，縮酮化反應(yīng)結(jié)束。將混合物用6ml吡啶處理然后濃縮至少量的體積。將殘余物用水稀釋并用乙酸乙酯萃取。殘余物4.7g，幾乎全部由純凈的6組成；tlc，Rf0.78(庚烷/乙酸乙酯1/1，v/v)。
NMR 3.22，3.25(2x s，OCH3)。
7向33g6的50ml丙酮溶液中加入6g分子篩(4_)，然后加入3.2g N-甲基嗎啉-N-氧化物和150mg四丙基過釕酸銨。將該混合物攪拌1小時。向反應(yīng)混合物中加入5g硅膠，然后加入50ml庚烷并繼續(xù)攪拌5分鐘。將混合物通過hy-flow過濾，在部分濃縮后，將其加入乙酸乙酯中，用水洗滌然后濃縮。將殘余物通過短的硅膠柱得到2.9g7。Rf0.52(庚烷/乙酸乙酯7/3)。NMR 1.02(s，CH3)。
8為了進行乙炔化反應(yīng)，從二溴乙烯和丁基鋰制備乙炔化鋰。
向0.74ml 1，2-二溴乙烯的20ml THF溶液中于-70℃下加入11ml1.6M BuLi的己烷溶液。攪拌15分鐘后，加入800mg7的2ml THF溶液。將混合物在15分鐘內(nèi)升溫至室溫，在室溫下15分鐘后，用水終止反應(yīng)并將產(chǎn)物用乙酸乙酯萃取。濃縮，然后通過短的硅膠柱得到810mg白色無定形的8。Rf0.48(庚烷-乙酸乙酯7/3)，Rf原料0.52。NMR 2.61(s，乙炔)。
9向3.2g8的60ml乙醇懸浮液中加入0.16g草酸的16ml水溶液。將該混合物攪拌2.5小時，逐漸變?yōu)榫?。將反?yīng)混合物用碳酸氫鈉處理然后濃縮至少量體積。然后加入水并將產(chǎn)物用乙酸乙酯萃取。將分離出的粗產(chǎn)物通過短的硅膠柱然后用二異丙基醚結(jié)晶，得到2.3g9，Mp 136℃。Rf0.66(庚烷-乙酸乙酯1/1)。NMR 2.78(ab，2，H4)；2.61(s，乙炔)。
10，11向1g9的12ml THF溶液中加入1.6g叔丁氧基氫化鋰鋁。室溫下攪拌1小時后，將混合物用水處理然后加入2N HCl進行中和。將產(chǎn)物用乙酸乙酯萃取然后進行硅膠色譜(庚烷/乙酸乙酯8/2作為洗脫劑)。得到0.56g 3β醇10(Mp 121-123℃)和0.24g 3α醇11(Mp 84-87℃)。
Rf0.53(10)和0.45(11)，庚烷/乙酸乙酯1/1。NMR(3αOH)3.82(m，CHOH)；(3βOH)4.08(m，CHOH)12向六甲基二硅氮烷基鋰(從1.9ml 1.6M BuLi-己烷溶液和0.71ml六甲基二硅氮烷的4ml干燥THF溶液制備)的溶液中于-40℃下加入1g7和0.7ml DMPU的5ml THF溶液。將該混合物于-40℃攪拌0.5小時，然后通過注射器加入225μl CH3I。于-40℃下繼續(xù)攪拌0.5小時后，反應(yīng)結(jié)束。將混合物。將混合物用水稀釋并用乙酸乙酯萃取。將分離出的粗產(chǎn)物經(jīng)色譜純化得到1.3g12，Rf0.43(庚烷/乙酸乙酯8/2)。
13按照制備8所述的方法，將1.3g12轉(zhuǎn)化成所需的13，得到1.2g，Rf0.46(庚烷/乙酸乙酯7/3)Rf(12)0.55。
14向800mg13的20ml乙醇溶液中加入80mg草酸的5ml水溶液。將該混合物攪拌1小時然后加入碳酸氫鈉進行中和。用水稀釋并用乙酸乙酯萃取后，得到0.7g結(jié)晶狀的14。Rf0.47(庚烷/乙酸乙酯7/3)。
15，16向725mg14在20ml 1/1乙醇和THF混合物中的溶液中加入130mg硼氫化鈉。攪拌1后，加入2ml丙酮以破壞過量的反應(yīng)物。15分鐘后，將混合物倒入水中并將產(chǎn)物用乙酸乙酯萃取。將得到物質(zhì)通過硅膠色譜純化，用二氯甲烷-丙酮或己烷-乙酸乙酯作為洗脫劑。得到300mg16(3α-OH)和75mg15(3β-OH)。Rf(15)0.47(二氯甲烷/丙酮95/5)。Rf(16)0.54(二氯甲烷/丙酮95/5)實施例2參照流程圖2(下一頁)描述化合物(3β，5α，11β，17β)-11-二氟甲基-19-去甲孕-20-炔-3，17-二醇(化合物21)的合成。
18向4g已知的醛17的200ml二氯甲烷溶液中加入10ml二甲基三氟化硫。將該混合物室溫攪拌48小時然后倒入冰水中并用二氯甲烷萃取，然后用碳酸氫鈉洗滌。濃縮并經(jīng)色譜純化(SiO2-庚烷-乙酸乙酯2/1)后得到2.5g18，Mp 138-139。NMR(CDCl3)6.05ppm CHF2的雙三重峰；5.9s，H4；0.95(s，CH3)。
流程圖II 19向脫氣的1.3g叔丁醇鉀和1g18在7ml THF和2ml叔丁醇中的混合物中于0℃下通入乙炔氣45分鐘。然后將混合物倒入水中并用乙酸乙酯萃取。洗滌和濃縮后，將殘余物用二異丙基醚處理，得到0.85g白色固體狀的19。Mp 178-180。Rf0.43(庚烷-乙酸乙酯1/1)。
20向20mg Li的10ml液氨溶液中于-60℃下加入300mg19的6mlTHF溶液。攪拌1分鐘后，將混合物用0.5g氯化銨處理。將氨蒸發(fā)，將殘余物用水處理并用乙酸乙酯萃取。將得到的物質(zhì)通過色譜純化，得到140mg20，Mp 224-225，Rf0.64(庚烷-乙酸乙酯7/3)。
21
向25mg LiAlH4的4ml THF溶液中于-60℃下加入85mg20的1mlTHF溶液。攪拌5分鐘后，將混合物迅速升溫至室溫并加入45μl水、45μl 3N NaOH溶液和140μl水進行處理。濾出沉淀，將濾液加入乙酸乙酯中并用2N HCl和水洗滌。將干燥和蒸發(fā)后得到的殘余物用二異丙基醚研磨得到50mg21。Mp 168-169℃，Rf0.30(甲苯-乙酸乙酯7/3)NMR 3.6ppm CHOH，2.65 CH乙炔，6.0雙三重峰CHF2)。
實施例3參照流程圖3描述化合物(3β，5α，11β，17β)-11-(2-氟乙基)-19-去甲孕-20-炔-3，17-二醇(化合物31)和(3α，5α，11β，17β)-11-(2-氟乙基)-19-去甲孕-20-炔-3，17-二醇(化合物32)的合成。
流程圖III 23向4.95g 11β-羥基乙基雌酮-3-甲醚(22)的115ml THF溶液中加入66g 4_分子篩，然后依次加入45ml 1M TBAF的THF(無水)溶液和5.3g甲苯磺酰氟。將該混合物攪拌回流2小時。然后將反應(yīng)液冷卻，倒入700ml 10％碳酸氫鈉水溶液中并用乙酸乙酯萃取。蒸除溶劑并通過色譜純化后，分離得到3.4g23。Rf0.39(庚烷/乙酸乙酯7/3)。
24將4g23在30ml THF和30ml甲醇混合物中的溶液依次用0.1ml4N NaOH和0.23g NaBH4處理。攪拌1小時后，將反應(yīng)液倒入水中并用乙酸乙酯萃取。將粗產(chǎn)物過濾通過短的硅膠柱得到3.8g24。Rf0.26(庚烷/乙酸乙酯7/3)Rf230.33。
25向3.8g24在40ml THF和230ml液氨的混合物中的溶液中于-33℃加入5g Li。將該混合物攪拌5小時。然后通過用45ml乙醇處理破壞過量的鋰。使氨蒸發(fā)，將殘余物用水稀釋并用乙酸乙酯萃取。干燥和濃縮后得到3.7g粗品1，2，5(10)二烯醇醚。將其溶于30ml丙酮，向其中加入3ml 6N HCl。攪拌3小時后，將混合物用碳酸氫鈉中和，然后用水稀釋并用乙酸乙酯萃取，得到2.8g25。Rf0.10(庚烷/乙酸乙酯4/6)。
26將0.84g25在30ml液氨和6ml THF的混合物中的溶液于-60℃下用小片的鋰處理直至反應(yīng)混合物的藍(lán)色能夠保持至少5分鐘。然后加入少量氯化銨破壞過量的反應(yīng)物并使NH3蒸發(fā)。將殘余物用水稀釋并用乙酸乙酯萃取。蒸除溶劑得到0.80g基本純凈的物質(zhì)；Rf(0.39(庚烷/乙酸乙酯1/1)，Rf25，0.24。
27向0.8g26的8ml二氯甲烷溶液中加入2.8ml乙二醇、2.5ml原甲酸三乙酯和5mg甲苯磺酸。將該混合物攪拌過夜然后倒入飽和碳酸氫鈉溶液中并用乙酸乙酯萃取。將得到的粗產(chǎn)物通過短的硅膠柱進行純化，得到0.72g27。Rf0.46(庚烷/乙酸乙酯1/1)，Rf26，0.38。
28
向0.72g27的15ml丙酮溶液中加入1g分子篩(4_)，然后加入0.70gN-甲基嗎啉-N-氧化物和30mg四丙基過釕酸銨。將該混合物攪拌1小時。向反應(yīng)混合物中加入1g硅膠，然后加入15ml庚烷并繼續(xù)攪拌5分鐘。將該混合物通過hy-flow過濾，部分濃縮后，將其加入乙酸乙酯中，用水洗滌然后濃縮。將殘余物通過短的硅膠柱，得到0.59g28。Rf0.62(庚烷/乙酸乙酯1/1)。
29為了進行乙炔化反應(yīng)，從二溴乙烯和丁基鋰制備乙炔化鋰。
向0.74ml 1，2-二溴乙烯的20ml THF溶液中于-70℃下加入11ml1.6M BuLi的己烷溶液。攪拌15分鐘后，加入590mg28的2ml THF溶液。將混合物在15分鐘內(nèi)升溫至室溫，在室溫下15分鐘后，用水終止反應(yīng)并將產(chǎn)物用乙酸乙酯萃取。濃縮，然后通過短的硅膠柱得到430mg白色無定形的29。Rf0.11(庚烷-丙酮9/1)，Rf原料0.21。
30向0.43g29的15ml丙酮溶液中加入1ml 2N HCl。將該混合物攪拌2小時，用飽和碳酸氫鈉水溶液處理，然后用乙酸乙酯萃取，得到0.40g基本純凈的30；Rf0.18(庚烷/乙酸乙酯7/3)Rf290.23。
31/32向0.40g30的4ml THF和4ml乙醇溶液中加入30mg硼氫化鈉。攪拌0.5后，加入數(shù)滴丙酮以分解過量的反應(yīng)物。繼續(xù)攪拌15分鐘后，將反應(yīng)液倒入水中并用乙酸乙酯萃取，然后將得到的粗產(chǎn)物進行硅膠色譜得到80mg 3αOH異構(gòu)體32和160mg 3βOH衍生物31。Rf310.37，Rf320.42，Rf原料0.48(庚烷/丙酮6/4)。
實施例4參照流程圖4描述化合物(3α，11β，17β)-11-(3-丁烯基)-19-去甲孕-5(10)-烯-20-炔-3，17-二醇(化合物42)和(3β，11β，17β)-11-(3-丁烯基)-19-去甲孕-5(10)-烯-20-炔-3，17-二醇(化合物43)的合成。
流程圖IV 33將55g甾族化合物1在300ml THF和300ml甲醇混合物中的溶液用2.7g硼氫化鈉的30ml水溶液(含3mg NaOH)處理。攪拌1小時后，還原反應(yīng)結(jié)束，加入75ml丙酮破壞過量的氫化物。繼續(xù)攪拌1小時后，將反應(yīng)混合物倒入水中并用乙酸乙酯萃取。將有機相濃縮得到54g33，Rf0.31(庚烷/乙酸乙酯4/6)，Rf原料0.42。
34于-10℃下向54g33的350ml DMF溶液中加入35g咪唑，然后加入37ml三甲基氯硅烷。繼續(xù)攪拌0.5小時后，反應(yīng)結(jié)束。將混合物倒入1.5L水中并用乙醚萃取。將濃縮有機物后得到的殘余物在80％含水乙醇中研磨得到50g純凈的34，Mp 90-91℃，Rf0.79(庚烷/乙酸乙酯4/6)，Rf原料0.3635于-10℃下，向丁烯基溴化鎂(從0.51ml 4-溴-1-丁烯和119mg Mg制備)的20ml THF溶液中加入100mg CuI。攪拌0.5小時后，將混合物冷卻至-30℃并加入1g34的5ml THF溶液。使反應(yīng)混合物升溫至室溫約1小時。然后加入100ml飽和氯化銨水溶液并用乙酸乙酯萃取。經(jīng)色譜純化得到0.9g35。Rf0.54(庚烷/乙酸乙酯6/4)，Rf原料0.60。
36向8.65g35的80ml丙酮溶液中加入2ml 2N HCl。將該混合物攪拌2小時然后用飽和碳酸氫鈉水溶液中和，濃縮至少量體積，用水稀釋然后用乙酸乙酯萃取。將得到的粗產(chǎn)物通過短的硅膠柱，得到5.3g36；Rf0.18(庚烷/乙酸乙酯7/3)Rf原料0.51。
37將小片的金屬鋰在-70℃下加入到5.3g36在340ml液氨、110mlTHF和9ml叔丁醇的混合物中的溶液中直至藍(lán)色能夠保持45分鐘(±350mg)。通過加入氯化銨破壞過量的反應(yīng)物。將氨氣蒸發(fā)，將殘余物用水稀釋并用乙酸乙酯萃取。將得到的粗產(chǎn)物通過短的硅膠柱得到3.8g 37。Rf0.46(庚烷/乙酸乙酯6/4)Rf原料0.22。
38向3.3g37的60ml甲醇溶液中加入5ml原甲酸三甲酯和0.3g對甲苯磺酸。室溫攪拌1小時后，通過加入1ml吡啶將混合物中和。將混合物濃縮至原體積的三分之一，倒入水中并用乙酸乙酯萃取，經(jīng)色譜純化后得到3.7g38。Rf0.60(庚烷/乙酸乙酯1/1)Rf原料0.48。
39向3.7g38的45ml丙酮溶液中加入5g分子篩(4_)，然后加入3.6gN-甲基嗎啉-N-氧化物和100mg四丙基過釕酸銨。將該混合物攪拌1小時。向反應(yīng)混合物中加入5g硅膠，然后加入100ml庚烷并繼續(xù)攪拌5分鐘。將混合物用hy-flow過濾，將其部分濃縮后加入乙酸乙酯中，用水洗滌然后濃縮。將殘余物通過短的硅膠柱，得到3.3g39。Rf0.51(庚烷/乙酸乙酯7/3)；原料Rf0.38。
40為了進行乙炔化反應(yīng)，從二溴乙烯和丁基鋰制備乙炔化鋰。
向0.74ml 1，2-二溴乙烯的20ml THF溶液中于-70℃下加入11ml1.6M BuLi的己烷溶液。攪拌15分鐘后，加入0.8g39的2ml THF溶液。將混合物在15分鐘內(nèi)升溫至室溫，在室溫下15分鐘后，用水終止反應(yīng)并將產(chǎn)物用乙酸乙酯萃取。濃縮，然后通過短的硅膠柱得到0.96g白色無定形的40。Rf0.15(庚烷-丙酮95/5)，Rf原料0.30。
41向0.95g40的20ml乙醇溶液中加入0.6g草酸的3ml水溶液。將該混合物攪拌1.5小時。將反應(yīng)混合物用碳酸氫鈉處理然后濃縮至少量的體積。然后加入水，將產(chǎn)物用乙酸乙酯萃取。將得到的粗產(chǎn)物通過短的硅膠柱，得到0.55g41。Rf0.33(庚烷-乙酸乙酯7/3)；Rf原料0.40。
42/43向0.55g41的4ml THF和4ml乙醇溶液中加入30mg硼氫化鈉。攪拌0.5小時后，加入數(shù)滴丙酮以分解過量的反應(yīng)物。繼續(xù)攪拌15分鐘后，將反應(yīng)液倒入水中并用乙酸乙酯萃取，將得到的粗產(chǎn)物進行柱色譜得到90mg 3αOH異構(gòu)體42，Mp 159℃，和150mg 3βOH衍生物43，Mp 90℃。Rf420.31，Rf430.23，Rf原料0.41(庚烷/乙酸乙酯6/4)。
實施例5參照流程圖5(下一頁)描述化合物(3β，7α，11β，17β)-11-(2-氟乙基)-7-甲基-19-去甲孕-5(10)-烯-20-炔-3，17-二醇(化合物54)和(3α，7α，11β，17β)-11-(2-氟乙基)-7-甲基-19-去甲孕-5(10)-烯-20-炔-3，17-二醇(化合物55)的合成。
45向4g44的35ml甲醇溶液中加入12ml原甲酸三甲酯，然后加入0.3g甲苯磺酸。攪拌1小時后，原料被消耗掉，加入1g碳酸氫鈉將反應(yīng)混合物中和然后濃縮。將殘余物用水稀釋并用乙酸乙酯萃取。將粗產(chǎn)物通過色譜純化得到3.4g45。Rf0.61(庚烷/乙酸乙酯7/3)。Rf原料0.35。
46向3.4g45的50ml甲醇溶液中加入0.5g NaOH。攪拌2小時后，皂化反應(yīng)結(jié)束。將混合物濃縮，用水稀釋并用乙酸乙酯萃取，得到3g無色油狀的46。Rf0.31(庚烷/乙酸乙酯7/3)。Rf原料0.65。
47向3.6g46的30ml DMF溶液中加入2.8g咪唑，然后加入2g叔丁基二甲基氯硅烷。攪拌2小時后，將混合物倒入水中并用乙酸乙酯萃取。將粗產(chǎn)物通過短的硅膠柱得到3.8g油狀的47。
Rf0.70(庚烷/乙酸乙酯7/3)。Rf原料0.61。
流程圖V
48從1.75ml 1，5-環(huán)辛二烯和1.4ml硼烷-二甲硫醚復(fù)合物的40mlTHF溶液制備9-BBN的溶液。向其中加入3.8g47的5ml THF溶液。將該混合物攪拌2小時然后通過小心地依次加入水(5ml)、10ml 2NNaOH和8ml 30％H2O2終止反應(yīng)。劇烈攪拌2小時后，將反應(yīng)混合物用水稀釋，用乙酸乙酯萃取然后用10％亞硫酸鈉水溶液洗滌。濃縮并經(jīng)色譜純化后得到2.8g48。Rf0.27(庚烷/乙酸乙酯7/3)。Rf原料0.70。
49將1g48和0.5g甲苯磺酰氯在5ml吡啶中的混合物于0-5℃下攪拌5小時。然后加入1ml水并繼續(xù)攪拌15分鐘。將反應(yīng)混合物用水稀釋并用乙酸乙酯萃取，然后將粗產(chǎn)物通過色譜純化，得到1.1g49，Mp 120℃，Rf0.57(庚烷/乙酸乙酯7/3)。Rf原料0.30。
50將400mg49在5ml無水1M TBAF/THF中的溶液攪拌5小時，導(dǎo)致氟化物的生成并同時使硅烷基功能基裂解。將混合物倒入水中并用乙酸乙酯萃取。通過色譜純化得到185mg50，Mp 161-162℃，Rf0.35(庚烷/乙酸乙酯7/3)。Rf原料0.53。
51向180mg50的5ml丙酮溶液中加入0.5g分子篩(4_)，然后加入200mg N-甲基嗎啉-N-氧化物和10mg四丙基過釕酸銨。將該混合物攪拌1小時。向反應(yīng)混合物中加入0.5g硅膠，然后加入10ml庚烷并繼續(xù)攪拌5分鐘。將混合物用hy-flow過濾，將其部分濃縮后加入到乙酸乙酯中，用水洗滌然后濃縮得到150mg51，Mp 166℃。Rf0.45(庚烷/乙酸乙酯7/3)；原料Rf0.35。
52為了進行乙炔化反應(yīng)，從二溴乙烯和丁基鋰制備乙炔化鋰。
向0.30ml 1，2-二溴乙烯的6ml THF溶液中于-70℃下加入4.5ml1.6M BuLi的己烷溶液。攪拌15分鐘后，加入150mg51的1ml THF溶液。將混合物在15分鐘內(nèi)升溫至室溫，在室溫下15分鐘后，用水終止反應(yīng)并將產(chǎn)物用乙酸乙酯萃取。濃縮然后用少量庚烷處理得到140mg白色固體狀的52，Mp 168℃。Rf0.38(庚烷-丙酮95/5)，Rf原料0.40。
53向145mg52的3ml乙醇和1.5ml THF溶液中加入0.2g草酸的3ml水溶液。將該混合物攪拌1.5小時。將反應(yīng)混合物用碳酸氫鈉處理然后濃縮至少量體積。然后加入水，將產(chǎn)物用乙酸乙酯萃取。將分離出的粗產(chǎn)物通過短的硅膠柱，得到125mg53。Rf0.23(庚烷-乙酸乙酯7/3)；Rf原料0.38。
54/55向125mg53的2ml THF和1ml乙醇溶液中加入20mg硼氫化鈉。還原反應(yīng)在0.5小時后結(jié)束。將混合物用水稀釋并用乙酸乙酯萃取。將分離出的粗產(chǎn)物通過反相C-18柱進行純化，用乙腈-水作為洗脫劑，得到40mg 3αOH55和20mg 3βOH54，，兩種均為無定形狀，其在硅膠上具有相同的Rf值；Rf0.43(CH2Cl2/丙酮9/1)，Rf原料0.70。
實施例6該實施例的化合物按照流程圖VI(下一頁)制備57將80mg硼氫化鈉和112mg氫氧化鈉的12ml甲醇溶液于0℃下滴加到7α，11β-二甲基雌-4-烯-3，17-二酮(56)在18ml甲醇和4ml二氯甲烷的混合物中的溶液中。攪拌1小時后，通過加入12ml丙酮并繼續(xù)攪拌15分鐘破壞過量的硼氫化物。將混合物倒入水中并用乙酸乙酯萃取。將合并的有機相用飽和氯化鈉溶液洗滌一次，然后干燥，濃縮并在硅膠柱上純化，得到0.74g57，其中含有少量的3，17-二醇。(后者在下一步中除去)；Rf0.40(庚烷/乙酸乙酯6/4)。NMR(CDCl3)6 3.60(t，1，17αH)，0.77(d，3，7αCH3)，1.08(d，3，11βCH3)。
58向0.74g 57的15ml甲醇和1.1ml原甲酸三甲酯溶液中加入0.2g對甲苯磺酸。將該混合物攪拌2小時。然后加入0.1ml吡啶并倒入水中。將產(chǎn)物用乙酸乙酯萃取并通過硅膠色譜純化，用庚烷/乙酸乙酯作為洗脫劑，得到0.59g 3，3-二甲基縮酮58，Rf0.47(庚烷/乙酸乙酯6/4)；NMRδ3.20(2s，6，OCH3)，3.65(t，1，17αH)，0.86(s，3，18CH3)，0.77(d，3，7αCH3)，0.90(d，3，11βCH3)。
流程圖VI
59向0.59g甾族化合物58的10ml丙酮溶液中依次加入0.6g N-甲基嗎啉-N-氧化物和40mg四丙基過釕酸銨。攪拌1小時后，加入10ml庚烷和1g硅膠。將該混合物繼續(xù)攪拌15分鐘，然后用硅藻土過濾，濃縮并將殘余物通過短的硅膠柱，得到0.56g 59；Rf0.55(庚烷/乙酸乙酯6/4)；NMRδ0.98(s，3，18CH3)，0.82(d，3，7αCH3)，0.92(d，3，11βCH3)，3.20(2xs，6，OCH3)。
60通過將1.24ml 1.55M BuLi的己烷溶液于-40℃下加入到0.44ml二-三甲基硅烷基胺的4ml THF溶液中制備六甲基二硅氮烷基鋰。攪拌0.5小時后，加入0.56g 59和0.46ml DMPU的8ml THF溶液。于-40℃下繼續(xù)攪拌45分鐘，然后加入140μl碘甲烷。繼續(xù)攪拌30分鐘后，烷基化反應(yīng)結(jié)束。將混合物倒入40ml飽和氯化銨溶液中并用乙酸乙酯萃取。經(jīng)色譜純化得到0.55g 16α-甲基化的產(chǎn)物60。Rf0.73(庚烷/乙酸乙酯1/1)原料Rf0.69；NMRδ1.11(d，3，16αCH3)，1.02(s，3，18CH3)，0.82(d，3，7αCH3)，0.91(d，3，11βCH3)61通過將9.5ml 1.55M BuLi的己烷溶液于-60℃下加入到0.60ml 1，2-二溴乙烷的20ml THF溶液中制備乙炔基鋰。攪拌0.5小時后，加入0.55g酮60的2ml THF溶液并移走冷卻裝置以使混合物逐漸升溫至室溫。然后加入水并將產(chǎn)物用乙酸乙酯萃取。經(jīng)色譜純化后得到0.50g61；Rf0.22(庚烷/乙酸乙酯9/1)原料Rf0.42；NMRδ1.18(d，3，16αCH3)，1.02(s，3，18CH3)，0.78(d，3，7αCH3)，0.94(d，3，11βCH3)，2.66(s，1，乙炔)。
62向0.49g 61的20ml乙醇溶液中加入50mg草酸的3ml水溶液。將該混合物攪拌4小時。將反應(yīng)混合物用5％碳酸氫鈉水溶液處理并將產(chǎn)物用乙酸乙酯萃取，然后通過硅膠柱除去少量的雜質(zhì)，得到250mg62；Rf0.40(庚烷/乙酸乙酯6/4)，原料Rf0.49；NMRδ2.80(m，2，H4)，1.19(d，3，16αCH3)，1.04(s，3，18CH3)，0.82(d，3，7αCH3)，0.93(d，3，11βCH3)，2.67(s，1，乙炔)。
63/64向240mg 62的5ml THF溶液中加入360mg鋰(叔丁氧基)3AlH。將該混合物攪拌1小時，然后倒入水中并將產(chǎn)物用乙酸乙酯萃取。將得到的醇異構(gòu)體通過制備型hplc(反相C18)分離，用乙腈/水梯度洗脫。將濃縮洗脫液后得到的產(chǎn)物用水-乙醇結(jié)晶。得到68mg 3α-羥基衍生物64和70mg 3β-異構(gòu)體63，Rf(63/64)0.36(庚烷/乙酸乙酯6/4)，原料Rf0.54。Mp(63)165-167℃，Mp(64)171-172℃。NMR(64)δ3.80(m，1，H3)，2.67(s，1，乙炔)，1.17(d，3，16αCH3)，1.02(s，3，18CH3)，0.77(d，3，7αCH3)，0.90(d，3，11βCH3)。NMR(63)δ4.05(m，1，H3)，2.67(s，1，乙炔)，1.18(d，3，16α-CH3)，1.02(s，3，18CH3)，0.77(d，3，7αCH3)，0.93(d，3，11βCH3)。
實施例7該化合物的化合物按照流程圖VII(下一頁)制備
流程圖VII
66向10g 11α-羥基去甲二烯二酮(65)的45ml DMF溶液中加入10g咪唑，然后在0℃下加入8.6ml三甲基氯硅烷。攪拌1小時后，將混合物倒入冰水中并將產(chǎn)物用乙酸乙酯萃取。將粗產(chǎn)物進行色譜純化，然后用庚烷研磨得到7.8g 11-三甲基硅烷氧基衍生物66，Mp 89-90℃，NMRδ4.08(m，1，11αH)，5.80(s，1H，H4)，6.25(m，2，H6，7)，0.15(s，9，三甲基硅烷基)。
67向5.3g 66和500mg Cu(Oac)2的20ml THF溶液中于-30℃下滴加9.8ml 1M甲基氯化鎂的THF溶液。將該混合物攪拌1小時然后倒入6ml濃硫酸的300ml水溶液中并攪拌過夜。將產(chǎn)物用乙酸乙酯萃取，干燥然后濃縮，得到4.8g固體狀物質(zhì)，其具有足夠的純度用于下一步反應(yīng)。NMRδ5.85(s，1，H4)，3.92(m，1，H11α)，0.83(d，3，7αCH3)，0.95(s，3，18CH3)；Rf0.22(庚烷/乙酸乙酯7/3)原料Rf0.65。
68向4.8g 67和6.6g NMO的100ml丙酮溶液中加入130mg四丙基過釕酸銨。攪拌2小時后，加入2g硅膠，然后加入100ml庚烷。將該混合物繼續(xù)攪拌0.5小時然后用硅藻土過濾。將濾液濃縮并將殘余物用二異丙基醚處理，得到4g基本純凈的三酮68。NMRδ5.89(s，1，H4)，0.89(s，3，18CH3)，0.92(d，3，7αCH3)；Rf0.46(庚烷/乙酸乙酯7/3)原料Rf0.24。
69將3.5g甾族化合物68，1.3ml乙二硫醇，300mg對甲苯磺酸和35ml乙醇的混合物回流1小時。將反應(yīng)液冷卻至室溫并加入80ml冷的0.5NNaOH。攪拌1小時后，將產(chǎn)物過濾并用冷水洗滌。于50℃下真空干燥后得到4.6g 69；NMRδ5.66(s，1，H4)，3.22和3.38(m，4，酮縮硫醇)0.85(s，3，18CH3)，0.88(d，3，7αCH3)；Rf0.88(甲苯/ac7/3)原料Rf0.59。
70向4.0g 69在100ml甲醇和50ml二氯甲烷的混合物中的溶液中于-20℃下小批量地加入450mg NaBH4。繼續(xù)攪拌1小時后還原反應(yīng)結(jié)束，將反應(yīng)液用5ml丙酮處理然后濃縮至少量體積，用100ml水稀釋并用二氯甲烷萃取。干燥并濃縮后，得到3.9g基本純凈的70；NMRδ3.90(m，1，17αH)，0.82(d，3，7αCH3)，0.73(s，3，18CH3)；Rf0.39(庚烷/乙酸乙酯1/1)原料Rf0.65。
71將2.5ml三甲基氯硅烷的20ml乙醚溶液于0℃下滴加到4.7g 70和2.6g咪唑在50ml DMF中的混合物中。攪拌1小時后，將反應(yīng)液用冰水稀釋并將產(chǎn)物用乙酸乙酯萃取。干燥并將有機相濃縮后，將殘余物用80％含水乙醇在冰浴中研磨然后過濾，于50℃下真空干燥得到5.2g 71；NMRδ3.76(t，1，17αH)，0.65(s，3，18CH3)，0.80(d，3，7αCH3)，5.60(s，1，H4)；Rf0.86(庚烷/乙酸乙酯1/1)原料Rf0.37。
73將4.4g叔丁醇鉀和16.2g甲基三苯基溴化鏻的130ml甲苯懸浮液在氮氣氛下于100℃加熱0.5小時。將該黃色的混合物冷卻至50℃并加入4.6g甾族化合物71的20ml甲苯溶液。將反應(yīng)液于100℃下繼續(xù)攪拌1小時，冷卻然后倒入500ml冰水中。將產(chǎn)物用甲苯萃取然后洗滌、干燥和濃縮。將殘余物用甲苯/硅膠進行色譜分離以除去大部分反應(yīng)物雜質(zhì)。將得到的粗品72(6.3g)溶于20ml THF并加入18ml 1MTBAF的THF溶液。攪拌0.5小時后，將混合物用水稀釋并用乙酸乙酯萃取。將得到的產(chǎn)物通過色譜純化，得到4.7g 73，Mp 177-180；NMRδ4.77和4.86(AB，2，亞甲基H)5.60(s，1，H4)，3.72(m，1，17αH)0.70(s，3，18CH3)，0.77(d，3，7α-CH3)；Rf0.10(庚烷/乙酸乙酯9/1)原料Rf0.73。
74將2.45g高碘酸在12ml水和12ml甲醇的混合物中的溶液加入到4.7g 73的40ml二氯甲烷溶液中。將該混合物攪拌45分鐘然后用水稀釋。將產(chǎn)物用二氯甲烷萃取。將有機層用5％硫代硫酸鈉水溶液和水洗滌數(shù)次然后濃縮。將殘余物通過硅膠柱色譜純化得到2.6g 74；NMRδ0.73(s，3，18CH3)，0.79(d，3，7αCH3)，5.88(s，1，H4)，4.83，4.94(AB，2，亞甲基H)，3.78(m，1，17αH)；Rf0.25(庚烷/乙酸乙酯6/4)原料Rf0.48。
75將2.6g 74、7ml原甲酸三甲酯、480mg對甲苯磺酸和50ml甲醇的混合物在室溫下攪拌并同時通過tlc監(jiān)測反應(yīng)。2.5小時后，將反應(yīng)液倒入飽和碳酸氫鈉水溶液中并用乙酸乙酯萃取。干燥并真空濃縮后，得到3.1gΔ5，6和Δ5(10)縮酮的1/1的混合物；Rf0.46(庚烷/乙酸乙酯6/4)原料Rf0.25；NMR(1/1縮酮的混合物)δ3.15，3.22，3.24(單峰，6，OCH3的信號)，0.77，0.87(2xd，3，7αCH3)，0.65，0.71(2xs，3，18CH3)。
76將粗產(chǎn)物75溶于60ml丙酮。向其中加入3.7g N-甲基嗎啉-N-氧化物和75mg四丙基過釕酸銨。將混合物攪拌2小時，然后加入1g硅膠和60ml庚烷。攪拌15分鐘后，將反應(yīng)液用硅藻土過濾并將濾液濃縮至干。將殘余物通過短的硅膠柱得到1.9gΔ5(10)和Δ5，6縮酮的混合物形式的酮76；NMR的典型信號在δ0.82，0.93(2xd，3，7αCH3)，0.79，0.85(2xs，3，18CH3)，3.15，3.22，3.25(s，6，OCH3的信號)，4.70，4.85和4.87和4.93(2x AB，2，亞甲基H)；Rf0.58(庚烷/乙酸乙酯6/4)，原料Rf0.45。
77將500mg 76的10ml THF溶液和0.4ml DMPU于-40℃下滴加到1.6ml 1M六甲基二硅氮烷基鋰的10ml THF溶液中。繼續(xù)攪拌45分鐘后，加入120μl碘甲烷。于-20℃下繼續(xù)1小時，然后將反應(yīng)液倒入水中并將產(chǎn)物用乙酸乙酯萃取。將洗滌、干燥和將有機相濃縮后得到的物質(zhì)通過硅膠柱，得到510mg雙鍵異構(gòu)體混合物形式的16α-甲基衍生物77；Rf0.56(庚烷/乙酸乙酯7/3)，原料Rf0.48。NMRδ1.15，1.17(2xd，16αCH3)。
78通過將7.1ml 1.6M BuLi的己烷溶液于-60℃下滴加到0.46ml 1，2-二溴乙烷的10ml THF溶液中制備乙炔基鋰。攪拌0.5小時后，加入500mg甾族化合物77的10ml THF溶液，將反應(yīng)混合物攪拌0.5小時并同時使溫度在該期間內(nèi)升溫至室溫。然后加入水并將產(chǎn)物用乙酸乙酯萃取。將所得到的物質(zhì)通過短的硅膠柱，得到540mg雙鍵異構(gòu)體混合物形式的78。NMRδ2.74和2.76(2xs，1，乙炔)，1.17，1.19(2xd，3，16αCH3)，0.78，0.88(2xd，3，7αCH3)；Rf0.50(庚烷/乙酸乙酯7/3)，原料Rf0.60。
79向440mg 78的20ml丙酮溶液中加入4ml 4N HCl。攪拌1小時后反應(yīng)結(jié)束，將混合物倒入飽和碳酸氫鈉水溶液中并用乙酸乙酯萃取。洗滌、干燥和濃縮后，得到380mg基本純凈的79，將其直接用于隨后的步驟；NMRδ5.88(s，1，H-4)，5.90(AB，2，亞甲基)，2.76(s，1，乙炔)，1.18(d，3，16αCH3)，0.88(s，3，18-CH3)，0.79(d，3，7αCH3)。
80向280mg 79在30ml液氨和10ml THF的混合物中的溶液中于-40℃下加入小片的鋰直至藍(lán)色能夠持續(xù)15分鐘。然后通過加入固體氯化銨迅速除去過量的鋰并使氨蒸發(fā)。向殘余物中加入100ml水并將該混合物用乙酸乙酯萃取。洗滌、干燥和濃縮后得到的有機物含有幾乎純凈的80；Rf0.57(庚烷/乙酸乙酯6/4)，NMRδ4.78，4.88(AB，2，亞甲基)，2.66(s，1，乙炔)，1.19(d，3，16αCH3)，0.86(s，3，18CH3)，0.90(d，3，7αCH3)。
81向160mg 80的10ml THF溶液中于0℃下小批量地加入LiAlH4直至還原反應(yīng)結(jié)束。然后加入0.1ml飽和硫酸鈉水溶液和少量固體硫酸鈉。將該混合物攪拌15分鐘然后用硅藻土過濾。將濾液濃縮并將殘余物通過填充有反相C-18硅膠的制備型HPLC柱純化，用乙腈-水作為洗脫劑，得到55mg 81，Mp 198-199℃；Rf0.33(庚烷/乙酸乙酯6/4)原料0.57。NMRδ3.67(m，1，3αH)，4.70，4.82(AB，2，亞甲基)2.65(s，1，乙炔)，1.18(d，3，16αCH3)，0.83(s，3，18CH3)，0.89(d，3，7αCH3)。
實施例8在結(jié)合試驗和反式激活試驗中測試化合物的雌激素受體活性。
通過測定對來自重組CHO細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)人雌激素受體的競爭性結(jié)合來評估試驗化合物與雌二醇(E2)相比，對存在于用人雌激素受體穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的重組中國倉鼠卵巢(CHO)細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中的雌激素受體的相對親和性(效力比)。從用人雌激素受體穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的重組CHO細(xì)胞制備細(xì)胞溶質(zhì)。該細(xì)胞系由Department of Biotechnology and Biochemistry(BBC)(N.V.Organon)制備，其名稱為CHO-ER(2B1)。參考化合物為炔雌醇和雌三醇。
用穩(wěn)定共轉(zhuǎn)染人雌激素受體α(hERα)或β受體(hERβ)、大鼠催產(chǎn)素啟動子(RO)和蟲螢光素酶報道基因(LUC)的重組中國倉鼠卵巢(CHO)細(xì)胞在體外生物試驗中測定化合物的抗雌激素活性。將試驗化合物抑制由雌激素Org 2317(雌二醇，1，3，5(10)-雌三烯-3，17β-二醇)通過雌激素受體介導(dǎo)的蟲螢光素酶的反式激活的抗雌激素活性(效力比)與標(biāo)準(zhǔn)物Org 34790(ICI 164.384；(7α，17β)-N-丁基-3，17-二羥基-N-甲基雌-1，3，5(10)-三烯-7-十一烷酰胺)進行比較。
試驗介質(zhì)用人雌激素受體、大鼠催產(chǎn)素啟動子和蟲螢光素酶報道基因共轉(zhuǎn)染的完整重組CHO細(xì)胞。細(xì)胞系由Department ofBiotechnology and Biochemistry(BBC)(N.V.Organon)生產(chǎn)，其名稱為CHO-ERRO 2B1-1E9。
結(jié)果如下表中所示。
數(shù)據(jù)用參考化合物在試驗中的活性的百分比表示。
表
n.t.r.無可用試驗結(jié)果
權(quán)利要求
1.非芳香族雌激素甾族化合物，其特征在于其符合通式I， 式I其中R1是H、(C1-C3)烷基或(C2-C3)酰基；R2是H、α-(C1-C3)烷基、α-(C2-C3)鏈烯基或α-(C2-C3)鏈炔基；R3是H或位于甾族骨架的16位的(C1-C2)烷基；R4是乙炔基；R5是H、(C1-C3)烷基或(C2-C3)?；?；R6是(C1-C5)烷基、(C2-C5)鏈烯基、(C2-C5)鏈炔基或(C1-C5)亞烷基，這些基團各自可以被氯或氟取代。
2.權(quán)利要求1所述的非芳香族雌激素甾族化合物，其特征在于，R1是H；R2是H；R3是H、16α-甲基或16α-乙基；R4是乙炔基；R5是H；R6是丙烯基、烯丙基或丁烯基。
3.含有權(quán)利要求1或2所述的非芳香族雌激素甾族化合物和可藥用輔劑的藥物組合物。
4.權(quán)利要求1或2所述的非芳香族雌激素甾族化合物在生產(chǎn)用于治療雌激素缺乏依賴型疾病的藥物中的用途。
全文摘要
本發(fā)明公開了新的、選擇性的雌激素型化合物，該化合物具有含有非芳香族的A－環(huán)的甾族骨架并且在3位碳原子上帶有游離或封閉的羥基。該雌激素符合通式(I)，其中R
文檔編號A61P5/00GK1637016SQ20041009461
公開日2005年7月13日 申請日期2000年8月28日 優(yōu)先權(quán)日1999年9月6日
發(fā)明者H·J·J·魯澤, G·H·維那曼, W·G·E·J·斯庫恩 申請人:阿克佐諾貝爾公司