專利名稱：一種含有抱莖苦荬菜提取物的制劑及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，確切地說它是一種含有中藥抱莖苦荬菜提取物的制劑及其制備方法。
背景技術(shù)：
抱莖苦荬菜是菊科抱莖苦荬菜[Ixeris sonchifia(Bge.)Hance]一年生草本植物的全草，又名苦碟子。盛產(chǎn)于我國東北、華北等地?！冬F(xiàn)代中藥學(xué)大辭典》記載，抱莖苦荬菜味苦、辛，具清熱解毒、排毒、止痛之功效。民間主要用于治療闌尾炎、扁桃體炎、無名腫痛等癥。
全世界苦荬菜屬植物共有50余種，主要分布于中國、日本、朝鮮越南以及前蘇聯(lián)等地。我國共有苦荬菜屬植物20余種。
苦荬菜屬植物在我國有悠久的藥用歷史，主要藥理作用有抗腫瘤、抗炎、鎮(zhèn)痛、鎮(zhèn)靜及心血管等方面的活性，馮玉書[中草藥通訊1979(3)31、沈陽藥學(xué)院學(xué)報(bào)。1981，1323等]人證明，抱莖苦荬菜的提取物具有增加冠脈流量，增加心肌營養(yǎng)性血流量，降低心肌耗氧量，改善心肌循環(huán)等作用；對血液系統(tǒng)能顯著抑制血小板聚集功能，明顯增加纖溶酶的活性，而這些作用是防治血栓閉塞性疾病的基礎(chǔ)。抱莖苦荬菜的提取物無論在有氧、不同程度缺氧以及無氧條件下，均能使心肌乳酸含量顯著降低，減輕或防止心肌細(xì)胞酸中毒，有利于心肌細(xì)胞功能的恢復(fù)[]沈陽藥學(xué)院學(xué)報(bào)1982，1630]；同時(shí)降低心肌代謝，增加側(cè)枝循環(huán)，改善心肌缺氧，使心肌供血有明顯改善。
中國專利[申請?zhí)?1114136.0]公開了碟荬靈注射液及其制備方法；中國專利[申請?zhí)?2109228.1]公開了一種治療心腦血管疾病的提取物；中國專利[申請?zhí)?3133969.7]公開了苦碟子藥物制劑及其制備方法；中國專利[申請?zhí)?2109532.9]公開了一種治療心腦血管和眼底病的中藥針劑及其制備方法；中國專利[申請?zhí)?3110991.6]公開了苦碟子液體藥物制劑及其制備方法；中國專利[申請?zhí)?3110992.6]公開了苦碟子固體藥物制劑及其制備方法；中國專利[申請?zhí)?3133846.1]公開了抱莖苦荬菜內(nèi)酯及其衍生物組合物和它的制備方法及其應(yīng)用。
本發(fā)明的抱莖苦荬菜提取物具有區(qū)別于上述專利涉及到提取物或制劑的顯著特點(diǎn)，如有效成分木犀草素7-O-葡萄糖醛酸含量高達(dá)25％，純度高，產(chǎn)品質(zhì)量高，質(zhì)量容易控制，制備方法先進(jìn)，療效優(yōu)越，經(jīng)藥理實(shí)驗(yàn)證明具有突出的預(yù)防和治療腦血管疾病的作用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供一種含有抱莖苦荬菜提取物，它的制劑及其制備方法。
本發(fā)明提供一種用中藥抱莖苦荬菜經(jīng)過提取加工制備的中藥提取物，該提取物含有有效成分黃酮和腺苷，提取物中黃酮成分的重量占提取物重量的百分比不少于80％，其中黃酮類有效成分木犀草素7-O-葡萄糖醛酸的含量不少于提取物重量的24％，提取物中腺苷的含量不少于提取物重量的0.18％。該提取物可通過采用選自粉碎、壓榨、煅燒、研磨、過篩、滲漉、萃取、水提、醇提、水沉、醇沉、酯提、酮提、層析、過濾等方法得到、以該提取物為活性物質(zhì)可制成藥物制劑，所述提取物可以是浸膏形式的物質(zhì)，可以是干浸膏也可以是流浸膏，可以是粉末狀物質(zhì)，根據(jù)制劑的不同需要制成不同的狀態(tài)。
本發(fā)明還提供用本發(fā)明的抱莖苦荬菜提取物經(jīng)過加工制備的適合服用的任何單位劑量形式的藥物制劑，這些藥物制劑選自以下劑型片劑、糖衣片劑、薄膜衣片劑、腸溶衣片劑、膠囊劑、硬膠囊劑、軟膠囊劑、口服液、口含劑、顆粒劑、沖劑、丸劑、散劑、膏劑、丹劑、混懸劑、粉劑、溶液劑、注射劑、栓劑、軟膏劑、硬膏劑、霜?jiǎng)婌F劑、滴劑、貼劑，需要時(shí)可以制成緩釋制劑、腸溶制劑。本發(fā)明的制劑，優(yōu)選的是注射劑型，如水針、小輸液、大輸液和粉針劑，更優(yōu)選的是注射用粉針劑。
本發(fā)明的含有抱莖苦荬菜提取物藥物制劑，在制備成藥物制劑時(shí)可加入藥物可接受的載體，所述藥物可接受的載體選自抗氧劑、鏊合劑、表面活性劑、填充劑、崩解劑、潤濕劑、分散劑、潤滑劑、溶劑、緩釋材料、腸溶材料、PH調(diào)節(jié)劑、矯味劑、色素等，常用的載體如甘露糖醇、右旋糖苷、乳糖、葡萄糖、山梨醇、甘露醇、木糖醇、注射用水、注射用乙醇、氯化鈉、硅衍生物、纖維素及纖維素衍生物、亞硫酸鈉、焦亞硫酸鈉、藻酸鹽、明膠、聚乙烯吡咯烷酮、甘油、土溫80、瓊脂、碳酸鈣、碳酸氫鈣、聚乙二醇、環(huán)糊精、β-環(huán)糊精、磷脂類材料、高嶺土、滑石粉、硬脂酸鈣、硬脂酸鎂等。
本發(fā)明的含有抱莖苦荬菜提取物藥物制劑，是通過將抱莖苦荬菜原料經(jīng)過提取或其他方式加工，制成藥物活性物質(zhì)，隨后，以該活性物質(zhì)為原料，需要時(shí)加入藥物可接受的載體，按照制劑學(xué)的常規(guī)技術(shù)制成藥物制劑。
本發(fā)明的制劑是單位劑量形式，每一制劑單位中可含有抱莖苦荬菜提取物8-600mg，其余為藥物可接受的載體，所述每一制劑單位，是指每粒膠囊，或每片片劑、每袋顆粒、每丸丸劑、每一安瓶口服液，每瓶注射劑等。也可指每次服用劑量。
本發(fā)明還提供本發(fā)明的抱莖苦荬菜提取物的制備方法，該方法包括以下步驟a.將干燥的抱莖苦荬菜全草切成段，碾碎；b.用水或有機(jī)溶劑回流提取，提取液減壓濃縮，調(diào)節(jié)pH，加入絮凝劑，靜置；c.上清液濃縮，加入乙醇，靜置，濾過，濾液回收乙醇至無醇味，得流浸膏；d.加水溶解流浸膏，通過柱色譜，用水和有機(jī)溶劑洗脫，收集有機(jī)溶劑洗脫液，濃縮；e.濃縮液加入有機(jī)溶劑溶解，減壓濃縮、干燥。
本發(fā)明的制備方法優(yōu)選的包括以下步驟a.將干燥的抱莖苦荬菜全草切成3-5cm段，碾碎，用原生藥重量5-30倍量的水或有機(jī)溶劑加熱回流提取2-3次，每次1-3小時(shí)，得提取液；b.提取液減壓濃縮至1ml中相當(dāng)于原生藥0.3-0.5g濃度，調(diào)節(jié)pH到5，加入絮凝劑，靜置12h，上清液濃縮至比重為1.12-1.18，得濃縮液；c.濃縮液加入4倍量95％的乙醇，靜置18h，濾過，濾液回收乙醇至無醇味，得流浸膏；d.加水溶解流浸膏，通過選擇性吸附黃酮的柱色譜，用水和不同濃度的有機(jī)溶劑洗脫，收集有機(jī)溶劑洗脫液，濃縮至稠浸膏；e.稠浸膏加入有機(jī)溶劑溶解，溶液于低于60℃的條件下減壓濃縮、干燥后得本發(fā)明所述的抱莖苦荬菜提取物。
以上步驟中所述的有機(jī)溶劑選自脂肪族低級醇或脂肪族低級酮如乙醇、丙酮。所述的絮凝劑選自明膠、海藻酸鈉、瓊脂、甲殼素及其衍生物，ZTC1+1等，優(yōu)選殼聚糖。所述的選擇性吸附黃酮的柱色譜選自聚酰胺柱色譜或大孔樹脂柱色譜，優(yōu)選聚酰胺柱色譜。在步驟b中的有機(jī)溶劑為乙醇，優(yōu)選的為60-95％的乙醇，步驟e中所述的有機(jī)溶劑為丙酮，優(yōu)選為80-100％丙酮。步驟e具有重要作用，是抱莖苦荬菜提取物總黃酮成分含量不低于80％的重要保證。
本發(fā)明抱莖苦荬菜提取物的制備方法操作簡便，無苛刻的設(shè)備要求，宜于工業(yè)化生產(chǎn)。
對本發(fā)明進(jìn)行了以下藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)以證明其有益效果。
實(shí)驗(yàn)一、抱莖苦荬菜提取物對犬腦血流量及腦血管阻力的影響1試驗(yàn)材料1.1實(shí)驗(yàn)藥物1、自制，批號020501。人用量為60mg/日。使用時(shí)用0.9％氯化鈉注射液配成所需濃度。
2、陽性對照藥碟脈靈注射液，通化華夏藥業(yè)有限責(zé)任公司生產(chǎn)，規(guī)格10ml/支，2.5mg/10ml，靜脈給藥，一次10-50ml，用5％葡萄糖或0.9％氯化鈉注射液稀釋后應(yīng)用。批號020918。
1.2主要儀器及試劑1、Maclab/8e多導(dǎo)生理分析系統(tǒng)澳大利亞ADI公司生產(chǎn)。
2、MFV-1200型電磁流量計(jì)日本光電公司生產(chǎn)。
3、FR-025T流量計(jì)探頭日本光電公司生產(chǎn)。
4、戊巴比妥鈉，丹麥進(jìn)口分裝，由中國醫(yī)藥公司上?；瘜W(xué)試劑采購供應(yīng)站分裝，批號970213。
5、肝素鈉注射液，由上海生物化學(xué)制藥廠生產(chǎn)，2ml/瓶，12500U/2ml，批號021118-24。
6、0.9％氯化鈉注射液，四川科大藥廠生產(chǎn)，批號021218-24。
1.3實(shí)驗(yàn)動(dòng)物健康雜種犬雌雄不限，購自湖南益陽實(shí)驗(yàn)動(dòng)物養(yǎng)殖場。購買后分籠飼養(yǎng)，自由攝食飲水，室溫控制在18-22℃，室內(nèi)通風(fēng)良好。
2試驗(yàn)方法與結(jié)果2.1實(shí)驗(yàn)方法取健康雜種犬30條，♀、♂兼用，體重9-12kg，隨機(jī)分為五組，1.生理鹽水對照組靜脈給予等體積生理鹽水(2ml/kg)。2.抱莖苦荬菜提取物小劑量組給予1.6mg/kg藥物，用藥量相當(dāng)于人臨床用藥的等效劑量(成人用藥量為60mg/日，按體表面積比值折算，犬用藥的等效劑量為60×0.32/12＝1.6mg/kg)。3.抱莖苦荬菜提取物中劑量組給予3.2mg/kg藥物，相當(dāng)于人臨床用藥等效劑量2倍。4.抱莖苦荬菜提取物大劑量組給予6.4mg/kg藥物，相當(dāng)于人臨床用藥等效劑量4倍。5.碟脈靈注射液陽性對照組給予0.67mg/kg給予，相當(dāng)于人臨床用藥等效劑量2倍(成人用藥量為12.5mg/日，按體表面積比值折算，則犬用藥的等效劑量為12.5×0.32/12＝0.33mg/kg)。
動(dòng)物自小隱靜脈按30mg/kg靜脈注射3％戊巴比妥鈉麻醉，仰臥固定于手術(shù)臺上。分離一側(cè)股靜脈，結(jié)扎遠(yuǎn)側(cè)端，插輸液管備用。分離一側(cè)股動(dòng)脈，插入充滿肝素生理鹽水溶液的動(dòng)脈插管，經(jīng)壓力換能器記錄平均動(dòng)脈壓(MAP)。將針狀電極插入四肢皮下，記錄標(biāo)準(zhǔn)II導(dǎo)心電圖(ECG)。沿頸正中線切開皮膚，分離左側(cè)頸總動(dòng)脈，結(jié)扎進(jìn)入顱內(nèi)之前的頸外動(dòng)脈及椎動(dòng)脈，保留頸內(nèi)動(dòng)脈，頸總動(dòng)脈掛2.5mm電磁流量計(jì)探頭測量頸內(nèi)動(dòng)脈流量，以此代表腦血流量。腦血流量以100g腦組織每分鐘血流毫升數(shù)表示。腦血流量(ml/100g·min)＝頸內(nèi)動(dòng)脈流量×100/一側(cè)腦重。腦血管阻力(kPa.ml/100g·min)＝平均血壓(MAP)/腦血流量。手術(shù)10min待動(dòng)物各項(xiàng)觀察指標(biāo)穩(wěn)定后，股靜脈緩慢注射給藥，給藥體積2ml/kg，生理鹽水對照組給予等容積生理鹽水，記錄藥前及藥后1、5、30、60、120min的血壓、頸內(nèi)動(dòng)脈流量、心電圖。實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)處死動(dòng)物，取腦組織稱重。
2.2實(shí)驗(yàn)結(jié)果2.2.1抱莖苦荬菜提取物對犬腦血流量的影響由表1可見，對照組給予生理鹽水后腦血流量變化不明顯，與給藥前比較無顯著性差異。抱莖苦荬菜提取物三個(gè)劑量組動(dòng)物給藥后1min、5min、30min時(shí)均可見腦血流量增加，與生理鹽水對照組及給藥前比較差異有顯著性，P＜0.01。抱莖苦荬菜提取物大劑量組(6.4mg/kg)動(dòng)物于給藥后60min仍有作用，與生理鹽水對照組及給藥前比較P＜0.05。陽性對照組于給藥后1min、5min、30min時(shí)亦可見動(dòng)物腦血流量增加，與對照組及給藥前比較P＜0.01。
表1 抱莖苦荬菜提取物對犬腦血流量的影響(ml/100g.min)(x±SD n＝6)給藥劑量給藥后組別 (mg/kg)給藥前1min5min30min 60min 120min生理鹽水 50.21 49.36 48.24 51.12 48.10 49.87對照組±7.68±7.78 ±8.16 ±7.41 ±8.14 ±9.81注射用 1.6 48.86 75.12 78.38 64.87 56.68 51.37抱莖苦荬 ±9.24±8.58##**±6.08##**±7.40#*±7.33 ±9.94菜提取物注射用 3.2 51.79 78.22 80.47 68.51 57.25 53.22抱莖苦荬 ±8.37±7.24##**±8.01##**±9.20#*±8.24 ±7.25菜提取物注射用 6.4 49.71 81.74 83.19 73.30 62.58 56.77抱莖苦荬 ±7.81±9.47##**±7.21##**±8.88##**±9.23#*±9.48菜提取物碟脈靈 0.67 49.60 77.47 79.55 68.47 56.41 54.36注射液±9.71±7.32##**±8.11##**±9.23#*±7.41±8.74與給前比較#P＜0.05##P＜0.01與對照組比較*P＜0.05**P＜0.012.2.2抱莖苦荬菜提取物對犬腦血管阻力的影響由表2可見，對照組給予生理鹽水后腦血管阻力變化不明顯，與給藥前比較無顯著性差異。抱莖苦荬菜提取物三個(gè)劑量組動(dòng)物給藥后1min、5min、30min時(shí)均可見腦血管阻力降低，與生理鹽水對照組及給藥前比較差異有顯著性，P＜0.05或P＜0.01。陽性對照組于給藥后1min、5min、30min時(shí)亦可見腦血管阻力降低，與對照組及給藥前比較P＜0.01或P＜0.05。
表2 抱莖苦荬菜提取物對犬腦血管阻力的影響(kPa.ml/100g·min)(x±SD n＝6)給藥劑量給藥后組別 (mg/kg)給藥前 1min 5min 30min60min120min生理鹽水 0.0580.0590.0590.0580.0570.058對照組±0.010 ±0.009 ±0.008 ±0.011 ±0.010 ±0.009注射用 1.6 0.0550.0450.0430.0510.0520.055抱莖苦荬 ±0.011 ±0.012##**±0.012##**±0.009 ±0.012 ±0.009菜提取物注射用 3.2 0.0570.0440.0420.0470.0500.056抱莖苦荬 ±0.012 ±0.010##**±0.013##**±0.010#*±0.007 ±0.008菜提取物注射用 6.4 0.0550.0420.0041 0.0450.0490.051抱莖苦荬 ±0.007 ±0.013##**±0.011##**±0.014##**±0.018 ±0.014菜提取物碟脈靈 0.67 0.0560.0440.0440.0480.0510.053注射液±0.013 ±0.011##**±0.008##**±0.013#*±0.008 ±0.009與給藥前比較#P＜0.05##P＜0.01與對照組比較*P＜0.05**P＜0.013實(shí)驗(yàn)結(jié)論抱莖苦荬菜提取物能使犬腦血流量增加、腦血管阻力降低，具有增加腦血流量的作用。
實(shí)驗(yàn)二、抱莖苦荬菜提取物對腦缺血模型大鼠腦含水量、腦指數(shù)及腦組織過氧化脂質(zhì)含量的影響1試驗(yàn)材料1.1實(shí)驗(yàn)藥物1、抱莖苦荬菜提取物自制，批號020501。人用量為60mg/日。使用時(shí)用0.9％氯化鈉注射液配成所需濃度。
2、陽性對照藥碟脈靈注射液，通化華夏藥業(yè)有限責(zé)任公司生產(chǎn)，規(guī)格10ml/支，2.5mg/10ml，靜滴，一次10-50ml，用5％葡萄糖或0.9％氯化鈉注射液稀釋后應(yīng)用。批號020918。
1.2主要儀器及試劑1、7230型分光光度計(jì)上海分析儀器廠生產(chǎn)。
2、戊巴比妥鈉，丹麥進(jìn)口分裝，由中國醫(yī)藥公司上海化學(xué)試劑采購供應(yīng)站分裝，批號970213。
3、0.9％氯化鈉注射液，四川科大藥廠生產(chǎn)，批號021218-24。
4、四乙氧基丙烷Fluck產(chǎn)品。批號001101。
1.3實(shí)驗(yàn)動(dòng)物SD大鼠，清潔級，購自上海西普爾-必凱實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司，合格證號滬動(dòng)合證字153號。購買后置于清潔級動(dòng)物室分籠飼養(yǎng)，室溫控制在18-22℃，自由攝食飲水。
2試驗(yàn)方法與結(jié)果2.1實(shí)驗(yàn)方法取大鼠70只，體重275±25g，隨機(jī)分為7組1、假手術(shù)對照組。2、腦缺血模型組。3、抱莖苦荬菜提取物小劑量組給予5.4mg/kg藥物，相當(dāng)于人臨床用藥等效劑量(成人用藥量為60mg/日，按體表面積比值折算，大鼠用藥的等效劑量為60×0.018×5＝5.4mg/kg)。4、抱莖苦荬菜提取物中劑量組給予10.8mg/kg藥物，相當(dāng)于人臨床用藥等效劑量2倍。5、抱莖苦荬菜提取物大劑量組給予21.6mg/kg藥物，相當(dāng)于人臨床用藥等效劑量4倍。6、抱莖苦荬菜提取物灌胃給藥對照組給予10.8mg/kg藥物，相當(dāng)于人臨床用藥等效劑量2倍。7、碟脈靈注射液陽性對照組給予2.25mg/kg給予，相當(dāng)于人臨床用藥等效劑量2倍(成人用藥量為12.5mg/日，按體表面積比值折算，大鼠用藥的等效劑量為12.5×0.018×5＝1.125mg/kg)。灌胃組灌胃給藥，1日1次，連續(xù)7天；其余各組靜脈注射給藥，假手術(shù)對照組及腦缺血模型組給予生理鹽水。末次給藥后30分鐘，參照有關(guān)文獻(xiàn)方法結(jié)扎大鼠雙側(cè)頸總動(dòng)脈，形成急性實(shí)驗(yàn)性不完全性腦缺血模型。假手術(shù)組對照組(以下簡稱對照組)不結(jié)扎動(dòng)脈。雙側(cè)頸總動(dòng)脈結(jié)扎3小時(shí)后斷頭，開顱取腦。取一側(cè)腦組織稱濕重，計(jì)算腦指數(shù)(腦指數(shù)＝腦重×100/體重)然后在110℃烤箱烤至恒重，稱干重，計(jì)算腦含水量(腦含水量％＝(濕重-干重)/濕重×100％)。另一側(cè)腦組織取部分腦組織稱重后在冰水浴中勻漿，用硫代巴比妥酸法測丙二醛(MDA)含量，以此作為腦組織中過氧化脂質(zhì)含量。另取部分腦組織10％福爾馬林固定，常規(guī)脫水，石蠟包埋制片，HE染色，光鏡下組織形態(tài)學(xué)觀察。
2.2實(shí)驗(yàn)結(jié)果2.2.1抱莖苦荬菜提取物對腦缺血模型大鼠腦含水量及腦指數(shù)的影響由表3可見，腦缺血模型組大鼠腦含水量及腦指數(shù)明顯增高，與對照組比較P＜0.01。抱莖苦荬菜提取物組三個(gè)劑量組可顯著降低腦缺血大鼠腦含水量及腦指數(shù)，與腦缺血模型組大鼠比較P＜0.05或P＜0.01。同劑量的抱莖苦荬菜提取物注射給藥作用優(yōu)于灌胃給藥。碟脈靈注射液陽性對照組亦可顯著降低腦缺血大鼠腦含水量及腦指數(shù)，與腦缺血模型組大鼠比較P＜0.05或P＜0.01。
表3 抱莖苦荬菜提取物對腦缺血模型大鼠腦含水量及腦指數(shù)的影響(x±SDn＝10)組別 給藥劑量(mg/kg)給藥途徑腦含水量％ 腦指數(shù)％對照組 iv 75.6±2.5 0.65±0.03模型組 iv 84.8±2.1##0.74±0.04##抱莖苦荬菜提取物 5.4 iv 80.9±3.8*0.70±0.03*抱莖苦荬菜提取物 10.8 iv 79.6±3.4**0.68±0.03*抱莖苦荬菜提取物 21.6 iv 77.8±2.2**0.66±0.02**抱莖苦荬菜提取物 10.8 ig 80.4±2.9*0.71±0.02*碟脈靈注射液 2.25 iv 78.6±2.7**0.68±0.03*與對照組比較#P＜0.05##P＜0.01與模型組比較*P＜0.05**P＜0.012.2.2抱莖苦荬菜提取物對腦缺血模型大鼠腦組織過氧化脂質(zhì)含量的影響由表4可見，腦缺血模型組大鼠腦組織過氧化脂質(zhì)含量明顯增高，與對照組比較P＜0.01。抱莖苦荬菜提取物組三個(gè)劑量組可顯著降低腦缺血大鼠過氧化脂質(zhì)含量，與腦缺血模型組大鼠比較P＜0.01。同劑量的抱莖苦荬菜提取物注射給藥作用優(yōu)于灌胃給藥。陽性對照組碟脈靈注射液亦可顯著降低腦缺血大鼠過氧化脂質(zhì)含量，與腦缺血模型組大鼠比較或P＜0.01。
表4 抱莖苦荬菜提取物對腦缺血模型大鼠過氧化脂質(zhì)含量的影響(x±SDn＝10)組別 給藥劑量(mg/kg)給藥途徑MDA(mmol/g組織濕重)對照組 iv 401.4±36.7模型組 iv 502.7±41.8**抱莖苦荬菜提取物 5.4 iv 443.7±27.9**抱莖苦荬菜提取物 10.8 iv 438.5±26.9**抱莖苦荬菜提取物 21.6 iv 422.0±31.7**抱莖苦荬菜提取物 10.8 ig 441.8±28.6**碟脈靈注射液 2.25 iv 437.7±33.4**與對照組比較##＜0.01與模型組比較**P＜0.012.2.3抱莖苦荬菜提取物對腦缺血模型大鼠腦組織形態(tài)學(xué)影響觀察鏡下見對照組大鼠腦組織神經(jīng)細(xì)胞正常，核膜清楚，核仁明顯。神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞核仁清楚，胞漿透亮，細(xì)胞膜及核膜清楚。毛細(xì)血管和小血管腔較窄。腦缺血模型組的大鼠組織發(fā)生明顯的病理性改變，神經(jīng)細(xì)胞胞漿和核仁濃縮，染色深，整個(gè)胞體變小，小血管周圍的空隙增寬，神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞腫脹。抱莖苦荬菜提取物三個(gè)劑量組的腦組織神經(jīng)細(xì)胞濃縮及深染較腦缺血模型組明顯減輕，神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞腫脹及間質(zhì)疏松程度均明顯輕于模型組對照組。碟脈靈注射液陽性對照組亦有同樣作用。表明抱莖苦荬菜提取物能使腦組織病理改變減輕，對大鼠缺血性腦組織的病理變化有一定的保護(hù)作用。(見病理報(bào)告單及附圖
)3實(shí)驗(yàn)結(jié)論抱莖苦荬菜提取物能改善腦缺血模型大鼠腦由于腦缺血缺氧所致的腦水腫改變，能降低腦缺血大鼠的腦含水量及腦指數(shù)。能降低由于腦缺血缺氧導(dǎo)致的腦組織過氧化脂質(zhì)含量升高。能減輕腦缺血大鼠腦組織的病理損傷。對大鼠腦缺血缺氧有一定的保護(hù)作用。
實(shí)驗(yàn)三、抱莖苦荬菜提取物對腦缺血模型腦血管通透性的影響1試驗(yàn)材料1.1實(shí)驗(yàn)藥物1、抱莖苦荬菜提取物自制，批號020501。人用量為60mg/日。使用時(shí)用0.9％氯化鈉注射液配成所需濃度。
2、陽性對照藥碟脈靈注射液，通化華夏藥業(yè)有限責(zé)任公司生產(chǎn)，規(guī)格10ml/支，2.5mg/10ml，靜滴，一次10-50ml，用5％葡萄糖或0.9％氯化鈉注射液稀釋后應(yīng)用。批號020918。
1.2主要儀器及試劑1、7230型分光光度計(jì)上海分析儀器廠生產(chǎn)。
2、戊巴比妥鈉，丹麥進(jìn)口分裝，由中國醫(yī)藥公司上?；瘜W(xué)試劑采購供應(yīng)站分裝，批號970213。
3、0.9％氯化鈉注射液，四川科大藥廠生產(chǎn)，批號021218-24。
4、伊文思藍(lán)BDH進(jìn)口分裝，上?；瘜W(xué)試劑采購供應(yīng)站分裝，批號000126。
5、甲酰胺溶液北京昌平石鷹化工廠，批號996123。
1.3實(shí)驗(yàn)動(dòng)物SD大鼠，清潔級，購自上海西普爾-必凱實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司，合格證號滬動(dòng)合證字153號。購買后置于清潔級動(dòng)物室分籠飼養(yǎng)，室溫控制在18-22℃，自由攝食飲水。
2試驗(yàn)方法與結(jié)果2.1實(shí)驗(yàn)方法取大鼠70只，雄性大鼠，體重286±26g，隨機(jī)分為7組1、假手術(shù)對照組。2、腦缺血模型組。3、抱莖苦荬菜提取物小劑量組給予5.4mg/kg藥物，相當(dāng)于人臨床用藥等效劑量(成人用藥量為60mg/日，按體表面積比值折算，大鼠用藥的等效劑量為60×0.018×5＝5.4mg/kg)。4、抱莖苦荬菜提取物中劑量組給予10.8mg/kg藥物，相當(dāng)于人臨床用藥等效劑量2倍。5、抱莖苦荬菜提取物大劑量組給予21.6mg/kg藥物，相當(dāng)于人臨床用藥等效劑量4倍。6、抱莖苦荬菜提取物灌胃給藥對照組給予10.8mg/kg藥物，相當(dāng)于人臨床用藥等效劑量2倍。7、碟脈靈注射液陽性對照組給予2.25mg/kg給予，相當(dāng)于人臨床用藥等效劑量2倍(成人用藥量為12.5mg/日，按體表面積比值折算，大鼠用藥的等效劑量為12.5×0.018×5＝1.125mg/kg)。末次給藥后30分鐘，對照組于股靜脈注射伊文思藍(lán)50mg/kg，不結(jié)扎雙側(cè)頸總動(dòng)脈；缺血模型組及各給藥組則在結(jié)扎頸總動(dòng)脈前5分鐘由股靜脈注射相同劑量伊文思藍(lán)。給伊文思藍(lán)3小時(shí)后，斷頭取腦，稱重，分別浸泡于甲酰胺溶液中，在45℃恒溫箱中溫育72小時(shí)，待腦組織中色素全部浸出，取色素液用7210型分光光度計(jì)，620nm進(jìn)行比色，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出腦內(nèi)伊文思藍(lán)的含量，以μg/g腦濕重表示。
2.2實(shí)驗(yàn)結(jié)果由表5可見，腦缺血模型組大鼠腦中伊文思藍(lán)含量明顯增高，與對照組比較P＜0.01。抱莖苦荬菜提取物組三個(gè)劑量組可顯著降低腦缺血大鼠腦中伊文思藍(lán)含量，與腦缺血模型組大鼠比較P＜0.01。同劑量的抱莖苦荬菜提取物注射給藥作用優(yōu)于灌胃給藥。陽性對照組碟脈靈注射液亦可顯著降低腦缺血大鼠腦中伊文思藍(lán)含量，與腦缺血模型組大鼠比較P＜0.01。
表5 抱莖苦荬菜提取物對腦缺血模型大鼠腦組織伊文思藍(lán)含量的影響(x±SDn＝10)組別 給藥劑量(mg/kg) 給藥途徑 伊文思藍(lán)(μg/g)對照組 iv 4.97±0.17模型組 iv 8.64±0.25##抱莖苦荬菜提取物 5.4iv 6.89±0.33**抱莖苦荬菜提取物 10.8 iv 5.98±0.47**抱莖苦荬菜提取物 21.6 iv 4.96±0.38**
抱莖苦荬菜提取物 10.8 ig 6.68±0.56**碟脈靈注射液 2.25 iv 6.31±0.62**與對照組比較##P＜0.01與模型組比較**P＜0.013實(shí)驗(yàn)結(jié)論抱莖苦荬菜提取物能減少腦缺血模型大鼠腦組織中伊文思藍(lán)的含量，減輕由于腦缺血缺氧導(dǎo)致的毛細(xì)血管通透性的增加，對大鼠腦缺血缺氧有一定的保護(hù)作用。，實(shí)驗(yàn)四、抱莖苦荬菜提取物對小鼠腦缺血缺氧的影響1試驗(yàn)材料1.1實(shí)驗(yàn)藥物1、抱莖苦荬菜提取物自制，批號020501。人用量為60mg/日。使用時(shí)用0.9％氯化鈉注射液配成所需濃度。
2、陽性對照藥碟脈靈注射液，通化華夏藥業(yè)有限責(zé)任公司生產(chǎn)，規(guī)格10ml/支，2.5mg/10ml，靜滴，一次10-50ml，用5％葡萄糖或0.9％氯化鈉注射液稀釋后應(yīng)用。批號020918。
1.2實(shí)驗(yàn)動(dòng)物昆明種小鼠18-22g，♀、♂兼?zhèn)洌珊厢t(yī)藥工業(yè)研究所提供，合格證號041。動(dòng)物自由攝食與飲水，實(shí)驗(yàn)室溫度22-25℃，濕度55-65％。
1.3儀器及主要試劑分析天平，上海第二分析天平生產(chǎn)。注射器1ml，0.25ml。秒表，上海秒表廠生產(chǎn)。氰化鉀，上海試劑廠產(chǎn)品。生理鹽水，湖南中醫(yī)學(xué)院附一院制劑室生產(chǎn)，規(guī)格500ml/瓶。
2試驗(yàn)方法與結(jié)果2.1對小鼠腦循環(huán)性缺氧存活時(shí)間的影響小鼠，50只，♀、♂各半，隨機(jī)分為5組1.對照組(生理鹽水)；2.抱莖苦荬菜提取物小劑量組給予7.8mg/kg藥物，用藥量相當(dāng)于人臨床用藥的等效劑量(成人用藥量為60mg/日，按體表面積比值折算，小鼠用藥的等效劑量為60×0.0026×50＝7.8mg/kg)。3.抱莖苦荬菜提取物中劑量組給予15.6mg/kg藥物，相當(dāng)于人臨床用藥等效劑量2倍。4.抱莖苦荬菜提取物大劑量組給予31.2mg/kg藥物，相當(dāng)于人臨床用藥等效劑量4倍。5.碟脈靈注射液陽性對照組給予3.25mg/kg給予，相當(dāng)于人臨床用藥等效劑量2倍(成人用藥量為12.5mg/日，按體表面積比值折算，小鼠用藥的等效劑量為12.5×0.0026×50＝1.625mg/kg)。每天給藥一次，給藥體積為20ml/kg。連續(xù)給藥3天，末次給藥后30min，小鼠經(jīng)乙醚麻醉后，分離雙側(cè)頸總動(dòng)脈并穿線結(jié)扎，觀察結(jié)扎雙側(cè)頸總動(dòng)脈后動(dòng)物存活時(shí)間。以完全阻斷雙側(cè)頸總動(dòng)脈血流開始計(jì)時(shí)，至小鼠10秒內(nèi)呼吸2次為止，為小鼠缺血后存活時(shí)間，試驗(yàn)結(jié)果見表6。抱莖苦荬菜提取物可明顯延長小鼠腦缺血后存活的時(shí)間，其中劑量為7.8，15.6，31.2mg/kg，差異具有顯著性意義。
表6 抱莖苦荬菜提取物對小鼠腦缺血后存活時(shí)間的影響(n＝10，x±SD)劑量存活時(shí)間組別(mg/kg)(min)對照組 5.21±1.31碟脈靈注射液 3.257.11±1.48**抱莖苦荬菜提取物 7.8 6.42±1.14*抱莖苦荬菜提取物 15.66.50±1.33*抱莖苦荬菜提取物 31.27.52±1.45**與對照組比較*P＜0.05，**P＜0.012.2對斷頭小鼠張口呼吸持續(xù)時(shí)間的影響小鼠，50只，♀、♂各半，隨機(jī)分為5組1.對照組(生理鹽水)；2.抱莖苦荬菜提取物小劑量組給予7.8mg/kg藥物，用藥量相當(dāng)于人臨床用藥的等效劑量(成人用藥量為60mg/日，按體表面積比值折算，小鼠用藥的等效劑量為60×0.0026×50＝7.8mg/kg)。3.抱莖苦荬菜提取物中劑量組給予15.6mg/kg藥物，相當(dāng)于人臨床用藥等效劑量2倍。4.抱莖苦荬菜提取物大劑量組給予31.2mg/kg藥物，相當(dāng)于人臨床用藥等效劑量4倍。5.碟脈靈注射液陽性對照組給予3.25mg/kg給予，相當(dāng)于人臨床用藥等效劑量2倍(成人用藥量為12.5mg/日，按體表面積比值折算，小鼠用藥的等效劑量為12.5×0.0026×50＝1.625mg/kg)。每天給藥一次，給藥體積為20ml/kg，連續(xù)給藥3天，末次給藥后30min用剪刀在小鼠雙耳連線處快速斷頭，立即用秒表記錄斷頭小鼠的張口動(dòng)作持續(xù)時(shí)間，結(jié)果抱莖苦荬菜提取物(15.6，31.2mg/kg)與對照組比較，能明顯延長斷頭小鼠張口呼吸動(dòng)作持續(xù)時(shí)間。見表7。
表7 抱莖苦荬菜提取物對小鼠斷頭張口呼吸動(dòng)作持續(xù)時(shí)間的影響(n＝10，x±SD)劑量 張口呼吸持續(xù)時(shí)間組別(mg/kg) (秒)對照組 15.2±6.1碟脈靈注射液 3.25 20.6±4.9*抱莖苦荬菜提取物 7.8 18.1±3.8抱莖苦荬菜提取物 15.6 20.1±4.2*抱莖苦荬菜提取物 31.2 22.0±4.0**與對照組比較*P＜0.05，**P＜0.012.3對氰化鉀中毒缺氧小鼠存活時(shí)間的影響小鼠，50只，♀、♂各半，隨機(jī)分為5組1.對照組(生理鹽水)；2.抱莖苦荬菜提取物小劑量組給予7.8mg/kg藥物，用藥量相當(dāng)于人臨床用藥的等效劑量(成人用藥量為60mg/日，按體表面積比值折算，小鼠用藥的等效劑量為60×0.0026×50＝7.8mg/kg)。3.抱莖苦荬菜提取物中劑量組給予15.6mg/kg藥物，相當(dāng)于人臨床用藥等效劑量2倍。4.抱莖苦荬菜提取物大劑量組給予31.2mg/kg藥物，相當(dāng)于人臨床用藥等效劑量4倍。5.碟脈靈注射液陽性對照組給予3.25mg/kg給予，相當(dāng)于人臨床用藥等效劑量2倍(成人用藥量為12.5mg/日，按體表面積比值折算，小鼠用藥的等效劑量為12.5×0.0026×50＝1.625mg/kg)。每天給藥一次，給藥體積為20ml/kg，連續(xù)給藥3天，末次給藥后30min，小鼠尾靜脈注射氰化鉀(5mg/kg)，立即記錄小鼠存活時(shí)間，結(jié)果見表8。抱莖苦荬菜提取物(15.6，31.2mg/kg)可明顯延長小鼠氰化鉀中毒缺氧的存活時(shí)間。
表8 抱莖苦荬菜提取物對氰化鉀中毒缺氧小鼠存活時(shí)間影響(n＝10，x±SD)劑量 存活時(shí)間組別(mg/kg) (秒)對照組 36.1±11.1碟脈靈注射液3.25 46.2±9.5*抱莖苦荬菜提取物7.8 43.0±10.3抱莖苦荬菜提取物15.6 46.4±10.1*抱莖苦荬菜提取物31.2 52.3±11.2**與對照組比較*P＜0.05，**P＜0.013實(shí)驗(yàn)結(jié)論實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示小鼠靜脈注射給予抱莖苦荬菜提取物(7.8，15.6，31.2mg/kg，qd×3d)能延長小鼠頸動(dòng)脈結(jié)扎后的存活時(shí)間，能延長小鼠斷頭張口呼吸動(dòng)作的持續(xù)時(shí)間，能延長小鼠氰化鉀中毒性缺氧的存活時(shí)間。提示抱莖苦荬菜提取物對小鼠腦缺血缺氧具有一定的保護(hù)作用。
實(shí)驗(yàn)五、抱莖苦荬菜提取物活血化瘀作用試驗(yàn)研究1試驗(yàn)材料1.1實(shí)驗(yàn)藥物1、抱莖苦荬菜提取物自制，批號020501。人用量為60mg/日。使用時(shí)用0.9％氯化鈉注射液配成所需濃度。
2、陽性對照藥碟脈靈注射液，通化華夏藥業(yè)有限責(zé)任公司生產(chǎn)，規(guī)格10ml/支，2.5mg/10ml，靜滴，一次10-50ml，用5％葡萄糖或0.9％氯化鈉注射液稀釋后應(yīng)用。批號020918。
1.2實(shí)驗(yàn)動(dòng)物KM小鼠，18-22g，♀、♂各半，由湖南醫(yī)藥工業(yè)研究所提供，合格證號041。SD大鼠，200-250g，♀、♂各半，由湖南醫(yī)藥工業(yè)研究所提供，合格證號039。日本大耳白家兔，2.0-2.5kg，♂，由湖南中醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，合格證號醫(yī)動(dòng)字第20-003號。動(dòng)物自由攝食與飲水，實(shí)驗(yàn)室溫度22-25℃，濕度55-65％。
1.3儀器及主要試劑LD4-2A離心機(jī)，北京醫(yī)用離心機(jī)廠，LBY-S5型血栓測定儀，北京普利生公司產(chǎn)品，LBY-NJ2型血小板聚集儀，北京普利生公司產(chǎn)品，LBY-N7型血液流變儀，北京普利生公司產(chǎn)品，TN-扭力天平，上海第二天平廠，TG-T29B型光電分析天平，上海天平儀器廠，ADP，北京普利生公司產(chǎn)品，批號030112，規(guī)格40μM×1ml，枸櫞酸鈉，上海化學(xué)試劑廠，批號011013。腎上腺素，由天津金耀氨基酸有限公司(原人民制藥廠)生產(chǎn)，規(guī)格1mg/1ml/支，批號021102。
2試驗(yàn)方法與結(jié)果2.1對血瘀證大鼠血液流變學(xué)的影響大鼠，200-250g，60只，♀、♂各半，隨機(jī)分為6組，分別給予下列藥物(1)對照組(生理鹽水)；(2)血瘀證模型組(生理鹽水)；(3)碟脈靈注射液組(2.25mg/kg)；(4)-(6)抱莖苦荬菜提取物低、中、高劑量組(5.4，10.8，21.6mg/kg)，每天靜脈注射給藥一次，每次給藥體積為10ml/kg，連續(xù)給藥3天，第3天給藥后，除對照組外，其余各組動(dòng)物皮下注射0.1％腎上腺素0.8ml/kg，共2次，兩次間隔4小時(shí)，在兩次注射腎上腺素之間(前后各間隔2小時(shí))，將大鼠浸入冰水中5分鐘，處置后禁食不禁水，于次晨頸動(dòng)脈取血，肝素抗凝，用LBY-N7型血液流變儀測定全血粘度高切、中切、低切及血漿粘度。試驗(yàn)結(jié)果見表9。抱莖苦荬菜提取物(5.4，10.8，21.6mg/kg)具有不同程度的降低全血比粘度及血漿比粘度，改善血液流變性的作用。
表9 抱莖苦荬菜提取物對血瘀證大鼠血液流變性的影響(n＝10，x±SD)
劑量 全血粘度組別 血漿粘度(mg/kg) 高切中切 低切對照組 3.916±1.0545.945±1.19213.031±1.9861.679±0.310模型組 5.495±1.147△△8.155±1.189△△15.949±2.325△△2.114±0.388△碟脈靈注射液2.25 4.483±0.949*6.715±1.081*12.850±1.860**1.600±0.298**抱莖苦荬菜提5.44.816±0.8567.219±1.36713.372±1.843*1.872±0.334取物抱莖苦荬菜提10.8 4.059±1.130*6.329±1.453**13.024±21.30**1.655±0.405*取物抱莖苦荬菜提21.6 3.836±1.015**6.141±1.089**12.790±1.190**1.576±0.292**取物與對照組比較△P＜0.05，△△P＜0.01；與模型組比較*P＜0.05，**P＜0.01。
2.2對家兔血小板聚集及血栓形成的影響家兔，2.0-2.5kg，50只，♂，隨機(jī)分為5組1.對照組(生理鹽水)；2.抱莖苦荬菜提取物小劑量組給予2.8mg/kg藥物，用藥量相當(dāng)于人臨床用藥的等效劑量(成人用藥量為60mg/日，按體表面積比值折算，兔用藥的等效劑量為60×0.07/1.5＝2.8mg/kg)。3.抱莖苦荬菜提取物中劑量組給予5.6mg/kg藥物，相當(dāng)于人臨床用藥等效劑量2倍。4.抱莖苦荬菜提取物大劑量組給予11.2mg/kg藥物，相當(dāng)于人臨床用藥等效劑量4倍。5.碟脈靈注射液陽性對照組給予1.17mg/kg給予，相當(dāng)于人臨床用藥等效劑量2倍(成人用藥量為12.5mg/日，按體表面積比值折算，小鼠用藥的等效劑量為12.5×0.07/1.5＝0.58mg/kg)。每天靜脈給藥一次，每次給藥體積為4ml/kg，連續(xù)給藥3天，末次給藥后60min，頸動(dòng)脈取血，測定血小板聚集率、及血栓各指標(biāo)。①血小板聚集率測定取血3.6ml，以3.8％枸櫞酸鈉(1∶9)(V∶V)抗凝，1000rpm，離心5min，取上層血漿0.2ml作為富含血小板血漿(PRP)，剩余血漿以4000rpm，離心15min，制備貧血小板血漿(PPP)。由PPP調(diào)PRP，使血小板數(shù)為2×108/L，將PRP2ml加入測定管內(nèi)，置于LBY-NJ2型血小板聚集儀中，37℃保溫1min，經(jīng)PPP標(biāo)定后，以40μM ADP30μl作為誘導(dǎo)劑測定1min、3min、5min血小板聚集率及最大聚集率(MPAR)。②血栓測定末次給藥60min后，取血1.8ml置硅化膠管中，以LBY-S5血栓測定儀，37℃，17rpm旋轉(zhuǎn)15min以形成血栓，取出血栓用濾紙吸干血測定血栓長度及濕重，然后將血栓條置于80℃烘箱中烘烤4h，稱其干重。試驗(yàn)結(jié)果見表10、表11。抱莖苦荬菜提取物(2.8，5.6，11.2mg/kg)具有不同程度的降低血小板聚集率，抑制血栓形成的作用。
表10 抱莖苦荬菜提取物對家兔血小板聚集率(％)的影響(n＝10，x±SD)劑量血小板聚集率(％)組別(mg/kg) 1min3min 5min MA對照組 43.61±8.25 62.81±8.54 56.95±7.84 66.03±7.88碟脈靈注射液1.1734.36±6.62*46.59±7.10**40.04±7.54**50.59±6.64**抱莖苦荬菜提2.8 38.34±7.04 56.49±7.92 49.65±6.77*63.21±8.42取物抱莖苦荬菜提5.6 33.38±5.68**49.88±6.66**42.14±6.06**57.46±5.47*取物抱莖苦荬菜提11.232.10±6.64**44.08±7.98**39.09±6.60**50.43±6.62**取物與對照組比較*P＜0.05，**P＜0.01表11 抱莖苦荬菜提取物對家兔血栓形成的影響(n＝10，x±SD)劑量 血栓長度 濕重干重組別(mg/kg) (cm) (mg)(mg)對照組 4.49±1.05 236.1±55.6 66.9±15.8碟脈靈注射液1.172.88±1.30**137.2±69.0**39.4±17.5**抱莖苦荬菜提2.8 3.99±0.77 178.3±44.5*52.9±17.2取物抱莖苦荬菜提5.6 3.12±1.47*170.1±68.9*49.3±18.9*
取物抱莖苦荬菜提11.22.43±1.19**122.5±60.1**33.4±15.4**取物與對照組比較*P＜0.05，**P＜0.01。
2、3對小鼠凝血時(shí)間及出血時(shí)間的影響KM小鼠，18-22g，50只，♀、♂各半，隨機(jī)分為5組，每組10只，分別給予下列藥物(1)對照組(生理鹽水)；(2)碟脈靈注射液組(3.25mg/kg)；(3)-(5)抱莖苦荬菜提取物低、中、高劑量組(7.8，15.6，31.2mg/kg)。每天靜脈注射給藥一次，給藥體積為20ml/kg，連續(xù)給藥3天，末次給藥后60分鐘，測定凝血時(shí)間及出血時(shí)間。①凝血時(shí)間測定以毛細(xì)玻管法內(nèi)恥取血至毛細(xì)管內(nèi)血柱達(dá)5cm，每隔30秒折斷毛細(xì)玻管一小段，檢查有無出現(xiàn)血凝絲，計(jì)算從毛細(xì)玻管采血到出現(xiàn)血凝絲的時(shí)間，即為凝血時(shí)間。②出血時(shí)間測定末次給藥后60分鐘，以利剪將小鼠尾部約5mm處橫斷，使血液自行溢出開始計(jì)時(shí)，每隔30秒用濾紙吸去血滴一次，直到血液自然停止(濾紙吸附時(shí)無血)時(shí)為止，計(jì)錄出血時(shí)間。結(jié)果見表12。小鼠靜脈抱莖苦荬菜提取物(7.8，15.6，31.2mg/kg)，能不同程度的延長小鼠出血時(shí)間及凝血時(shí)間。
表12 抱莖苦荬菜提取物對小鼠凝血時(shí)間及出血時(shí)間的影響(n＝10，x±SD)劑量凝血時(shí)間 出血時(shí)間組別(mg/kg) (min) (min)對照組 2.20±0.35 7.35±0.78碟脈靈注射液3.252.60±0.39*8.45±1.32*抱莖苦荬菜提取物7.8 2.45±0.44 7.70±1.16抱莖苦荬菜提取物15.62.75±0.68*8.35±0.94*抱莖苦荬菜提取物31.22.80±0.67*8.95±1.34*與對照組比較*P＜0.05，**P＜0.01
3實(shí)驗(yàn)結(jié)論大鼠靜脈抱莖苦荬菜提取物(5.4，10.8，21.6mg/kg)能降低血液粘度及血漿粘度。家兔靜脈抱莖苦荬菜提取物(2.8，5.6，11.2mg/kg)能抑制ADP誘導(dǎo)的家兔血小板聚集及血栓形成。小鼠靜脈抱莖苦荬菜提取物(7.8，15.6，31.2mg/kg)能延長凝血時(shí)間及出血時(shí)間。以上結(jié)果提示，抱莖苦荬菜提取物具有活血化瘀的作用。
本發(fā)明的抱莖苦荬菜提取物具有顯著的藥理活性，能使犬腦血流量增加、腦血管阻力降低，具有增加腦血流量的作用。對大鼠腦缺血所致腦含水量及腦指數(shù)的升高有顯著降低作用；對大鼠腦缺血所致的腦組織過氧化脂質(zhì)含量升高及毛細(xì)血管通透性增加有顯著降低作用；能減輕腦缺血大鼠腦組織的病理損傷；對大鼠腦缺血缺氧有一定的保護(hù)作用。能明顯延長小鼠頸總動(dòng)脈結(jié)扎后存活時(shí)間，延長小鼠斷頭張口呼吸動(dòng)作持續(xù)時(shí)間，延長小鼠氰化鉀中毒性缺氧的存活時(shí)間，對小鼠腦缺血缺氧有一定的保護(hù)作用。能降低血瘀證大鼠血液粘度及血漿粘度。降低家兔血小板聚集率，降低家兔血栓長度及重量；延長小鼠凝血時(shí)間及出血時(shí)間，具有活血化瘀的作用。該提取物可以用來預(yù)防和治療腦血管疾病。
具體實(shí)施例方式以下通過實(shí)施例進(jìn)一步說明本發(fā)明實(shí)施例1、干燥的抱莖苦荬菜全草10kg，切成3-5cm段，碾碎，用原生藥重量16倍量的水加熱回流提取，熱提3次(7倍量，5倍量，4倍量)，分別提取1h、0.5、0.5小時(shí)，然后提取液減壓濃縮為1ml相當(dāng)于原生藥0.3-0.5g，調(diào)節(jié)pH5，加入殼聚糖，靜置12h，上清夜?jié)饪s至比重為1.12-1.18，加入4倍量95％的乙醇，靜置18h，濾過，回收乙醇至無醇味，流浸膏加適量水溶解，通過聚酰胺柱色譜，用水洗脫，棄去，60％7醇洗脫，收集洗脫液，濃縮至比重為1.18-1.20，加入90％丙酮溶解，濾過，溶液于低于60℃的條件下減壓濃縮、干燥后得抱莖苦荬菜提取物150g。
實(shí)施例2、干燥的抱莖苦荬菜全草50kg，切成3-5cm段，碾碎，用原生藥重量13倍量的水加熱回流提取，熱提3次(7倍量，3倍量，3倍量)，分別提取1h、0.5、0.5小時(shí)，然后提取液減壓濃縮為1ml相當(dāng)于原生藥0.4g，調(diào)節(jié)pH5，加入殼聚糖，靜置12h，上清夜?jié)饪s至比重為1.12-1.18，加入4倍量95％的乙醇，靜置18h，濾過，回收乙醇至無醇味，流浸膏加適量水溶解，通過聚酰胺柱色譜，用5％乙醇洗脫，棄去，60％乙醇洗脫，收集洗脫液，濃縮至比重為1.12-1.16，加入95％丙酮溶解，濾過，溶液于低于60℃的條件下減壓濃縮、干燥后得抱莖苦荬菜提取物600g。
實(shí)施例3膠囊劑[處方]抱莖苦荬菜提取物120g制成膠囊1000粒[制法]將抱莖苦荬菜提取物120g，加入藥用輔料微晶纖維素等混勻，制粒，干燥，裝入膠囊即可。
實(shí)施例4丸劑[處方]抱莖苦荬菜提取物240g制成丸劑1000袋[制法]將抱莖苦荬菜提取物240g，加入藥用輔料糊精、微晶纖維素等，制成泛丸，干燥，分裝即可。
實(shí)施例5片劑[處方]抱莖苦荬菜提取物120g制成片劑1000片[制法]將桑抱莖苦荬菜提取物120g，加入藥用輔料微晶纖維素等混勻，制粒，干燥，加入適量潤滑劑，壓片即可。
實(shí)施例6顆粒劑 抱莖苦荬菜提取物240g制成顆粒劑1000袋[制法]將抱莖苦荬菜提取物240g，加入藥用輔料糊精、甜味劑等混勻，制粒，干燥，裝袋即可。
實(shí)施例7口服液[處方]抱莖苦荬菜提取物240g制成口服液1000支[制法]將抱莖苦荬菜提取物100g，溶解于水，加入適量矯味劑，滅菌，灌裝即可。
實(shí)施例8注射液[處方]抱莖苦荬菜提取物10g制成注射液1000支[制法]將抱莖苦荬菜提取物10g，溶解于注射用水，調(diào)節(jié)pH7.2，5萬分子量中空纖維超濾，加注射用水至2000ml，1萬分子量中空纖維超濾，加入0.1％焦亞硫酸鈉穩(wěn)定劑，0.22μm微孔濾膜濾過，灌裝，滅菌，即可。
實(shí)施例9[處方]抱莖苦荬菜提取物10g制成凍干粉針1000支[制法]將抱莖苦荬菜提取物10g，溶解于注射用水，調(diào)節(jié)pH7.2，加入0.1％焦亞硫酸鈉穩(wěn)定劑，3％甘露醇支持劑，攪拌溶解，再加入0.05％活性炭處理，紙板濾過，5萬分子量中空纖維超濾，加注射用水至2000ml，1萬分子量中空纖維超濾，再經(jīng)0.22μm微孔濾膜濾過，分裝于西林瓶中，每支2ml，于-50℃予凍3小時(shí)，隨后抽真空(真空度為10pa)，升溫干燥，最終溫度為35℃干燥30小時(shí)，即得凍干粉針劑制品。
權(quán)利要求
1.一種抱莖苦荬菜提取物，含有有效成分黃酮和腺苷，其特征在于，提取物中黃酮成分不少于80％，其中黃酮木犀草素7-O-葡萄糖醛酸不少于24％，提取物中腺苷不少于0.18％。
2.權(quán)利要求1的抱莖苦荬菜提取物在制備預(yù)防和/或治療腦血管疾病的藥物中的應(yīng)用。
3.含有權(quán)利要求1的抱莖苦荬菜提取物的藥物制劑。
4.權(quán)利要求3的藥物制劑，是適合服用的藥物劑型，選自片劑、膠囊劑、口服液、口含劑、顆粒劑、沖劑、丸劑、散劑、膏劑、丹劑、混懸劑、粉劑、注射用水針劑、注射用小輸液劑、注射用大輸液劑、注射用粉針劑。
5.權(quán)利要求1的抱莖苦荬菜提取物的制備方法，其特征在于，包括以下步驟，a.將干燥的抱莖苦荬菜全草切成段，碾碎；b.用水或有機(jī)溶劑回流提取，提取液減壓濃縮，調(diào)節(jié)pH，加入絮凝劑，靜置；c.上清液濃縮，加入乙醇，靜置，濾過，濾液回收乙醇至無醇味，得流浸膏；d.加水溶解流浸膏，通過柱色譜，用水和有機(jī)溶劑洗脫，收集有機(jī)溶劑洗脫液，濃縮；e.濃縮液加入有機(jī)溶劑溶解，減壓濃縮、干燥。
6.權(quán)利要求5的抱莖苦荬菜提取物的制備方法，其特征在于，步驟a是將干燥的抱莖苦荬菜全草切成3-5cm段，碾碎；步驟b是用原生藥重量5-30倍量的水或有機(jī)溶劑加熱回流提取2-3次，每次1-3小時(shí)，提取液減壓濃縮至1ml中相當(dāng)于原生藥0.3-0.5g濃度，調(diào)節(jié)pH到5，加入絮凝劑，靜置12h；步驟c是將上清液濃縮至比重為1.12-1.18，加入4倍量95％的乙醇，靜置18h，濾過，濾液回收乙醇至無醇味，得流浸膏；步驟d是加水溶解流浸膏，通過選擇性吸附黃酮的柱色譜，用水和不同濃度的有機(jī)溶劑洗脫，收集有機(jī)溶劑洗脫液，濃縮至稠浸膏；步驟e是加入有機(jī)溶劑溶解稠浸膏，溶液于低于60℃的條件下減壓濃縮、干燥。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的制備方法，其特征在于，所述的有機(jī)溶劑選自脂肪族低級醇，低級酮，所述絮凝劑選自明膠，海藻酸鈉，瓊脂，甲殼素及其衍生物，ZTC1+1，所述選擇性吸附黃酮的柱色譜選自聚酰胺柱色譜，大孔樹脂柱色譜。
8.根據(jù)權(quán)利要求7的制備方法，所述的脂肪族低級醇是乙醇，脂肪族低級酮是丙酮，所述的甲殼素及其衍生物是殼聚糖。
9.權(quán)利要求8的制備方法，在步驟b中的有機(jī)溶劑為乙醇，步驟e中的有機(jī)溶劑為丙酮。
10.權(quán)利要求9的制備方法，步驟e中的丙酮為80-100％的丙酮。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種含有中藥抱莖苦荬菜提取物的制劑及其制備方法，本發(fā)明的抱莖苦荬菜提取物，其特征是，總黃酮成分不少于80％，其中黃酮木犀草素7－O－葡萄糖醛酸不少于24％，腺苷不少于0.18％，本發(fā)明的抱莖苦荬菜提取物可制成注射用或口服的藥物制劑。
文檔編號A61P9/00GK1616036SQ200410078168
公開日2005年5月18日 申請日期2004年9月20日 優(yōu)先權(quán)日2004年9月20日
發(fā)明者洪春力 申請人:洪春力