專利名稱：一種可用于急性肺損傷的藥物組合物的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及生物制藥領域，涉及一種藥物組合物，更特別的，本發(fā)明涉及一種可用于治療急性肺損傷的藥物組合物。
背景技術：
嚴重急性呼吸綜合征(Severe Acute Respiratory Syndromes，SARS)曾波及全球30多個國家，總發(fā)病人數(shù)接近萬人，其具有強烈的傳染性，可迅速向周邊地區(qū)播散，死亡率超過10％。一旦再次爆發(fā)，將再一次嚴重危及整個人類的健康，引起恐慌。
大部分SARS感染者病情惡化后會表現(xiàn)出急性呼吸困難綜合癥(ARDS，Acute Respiratory Distress Syndrome)和急性肺損傷(ALI，Acute LungInjury)，一些重癥的患者還會出現(xiàn)休克或多器官功能障礙綜合征(MODS)。正是這些肺部的急性病變和嚴重損傷導致了SARS患者的最終死亡。
因此，本領域迫切需要開發(fā)一種新的能夠有效緩解和/或治療急性肺損傷的藥物。
腫瘤壞死因子(Tumor Necrosis Factor alpha，TNF-α)是機體內(nèi)的一種多功能免疫調(diào)節(jié)分子，它可以和細胞膜上的受體結合發(fā)揮作用，往往引起靶細胞的死亡(它的名稱即來源于此)或招引免疫效應細胞在局部的聚集，參與多種生理、病理與免疫過程。
通過對腫瘤壞死因子(Tumor Necrosis Factor alpha，TNF-α)與胸肺良惡性疾病關系研究證明，TNF與胸肺良惡性疾病的發(fā)生、發(fā)展均有一定關系。近年來，國內(nèi)外研究表明，肺泡巨噬細胞可產(chǎn)生TNF，因此推測它可能與胸肺疾病的發(fā)生、發(fā)展有著較為密切的關系。有研究揭示TNF在重癥肺炎發(fā)病機理中起重要作用，其可能的病理作用有(1)參與內(nèi)皮細胞的損害，促進微血栓形成；(2)降低肌細胞跨膜電位，Na+、K+泵失效；(3)誘發(fā)其他炎性介質(zhì)釋放，加重感染中毒反應。臨床研究顯示，通過對正常對照組、胸肺良性病變組、惡性病變組同時檢測血清和胸液中的TNF含量進行比較發(fā)現(xiàn)，良惡性病變患者血清與胸液中的TNF均明顯增高，與正常組中的含量水平存在著顯著的差異。
另外，TNF對繼發(fā)性細胞因子的釋放有重要作用。當各種TNF作用過重過久，肺毛細血管內(nèi)皮細胞、肺間質(zhì)和肺泡上皮細胞嚴重損害，最終產(chǎn)生ARDS。因此，調(diào)控體內(nèi)TNF的水平對肺損傷的防治有重要作用。
基于TNF的以上特征，本申請人旨在提供一種藥物組合物將TNFR-Ig融合蛋白與其他生物可接受的制劑混合，制備出在治療上有效的藥物制劑。TNFR-Ig融合蛋白作為一種半衰期長的能夠結合TNF因子的物質(zhì)，在體內(nèi)可以與細胞表面上的TNFR競爭性地結合周圍的TNF，有效減少結合于細胞上TNFR的TNF的數(shù)目，從而減少或消除由TNF所引發(fā)的炎癥反應，達到抑制由SARS等因素導致的急性肺損傷的目的。
對于TNFR-Ig融合蛋白的結構以及制備方法，可參見本申請人的中國專利申請01132074.5(申請日2001年10月31日)，其中有詳細的描述。
除了在本發(fā)明中所特別描述的以外，其它一些涉及的藥物制備技術、試劑、檢測方法等都是本領域中已知的，本領域中熟練的技術人員能夠獨立地或者通過參閱公開文獻或工具書加以重現(xiàn)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術問題在于提供一種可用于急性肺損傷的藥物組合物，所述藥物組合物中包含TNFR-Ig融合蛋白、海藻糖以及磷酸鹽緩沖液，以適當?shù)呐浔冗M行配制。
進一步的，在本發(fā)明所述的可用于急性肺損傷的藥物組合物中，含有TNFR-Ig融合蛋白30-70mg/ml，含有海藻糖30-70mg/ml，溶解在100mM的磷酸鹽緩沖液中。更進一步的，在本發(fā)明所述的可用于急性肺損傷的藥物組合物中，含有TNFR-Ig融合蛋白50mg/ml，含有海藻糖50mg/ml，溶解在100mM的磷酸鹽緩沖液中。
在本發(fā)明的一個方面，可將以上所述的任何一種可用于急性肺損傷的藥物組合物制成凍干制劑，在施用時用注射用蒸餾水重懸。采用的凍干方法是本技術領域研究人員常規(guī)使用的。
本發(fā)明所述的可用于急性肺損傷的藥物組合物在施用時，可采取肌內(nèi)給藥、靜脈內(nèi)給藥、皮下給藥或皮內(nèi)給藥的方式。進一步優(yōu)選的，可采用靜脈注射給藥的方式。
在本發(fā)明中，“本發(fā)明的藥物組合物”指用于治療急性肺損傷的，含有TNFR-Ig融合蛋白和藥學上可接受的載體的組合物。
在本發(fā)明中，“TNFR-Ig融合蛋白”指由腫瘤壞死因子受體的細胞外段與免疫球蛋白的Fc片段所形成的融合蛋白。優(yōu)選的TNFR是II型腫瘤壞死因子受體。此外，在TNFR和Ig部分之間宜具有長度為10-30個氨基酸的肽接頭。優(yōu)選的，本發(fā)明的藥物組合物可采用本申請人在中國專利申請01132074.5中所提供的TNFR-Ig融合蛋白。
海藻糖(α-D-吡喃葡糖基-(-吡喃葡糖苷))是天然存在的非還原型二糖。海藻糖的形式包括結晶型的海藻糖二水合物(TD)，非結晶型海藻糖(AT)，也可以是無水形式的海藻糖，即無水非晶型海藻糖(AAT)和無水結晶海藻糖(ACT)。本發(fā)明中可使用任何物理形式的海藻糖，包括無水、部分水合、完全水合的海藻糖。
在使用本發(fā)明的藥物組合物時，是將安全有效量藥物組合物用于哺乳動物，其中該安全有效量通常至少約10μg TNFR-Ig融合蛋白/Kg體重，而且在大多數(shù)情況下不超過約8mg TNFR-Ig融合蛋白/Kg體重，較佳地該劑量是約10μg/千克體重-約1mg/Kg體重。當然，具體劑量還應考慮給藥途徑、病人健康狀況、年齡等因素。
具體實施例方式
本發(fā)明的試驗結果已經(jīng)表明，本發(fā)明所述的藥物組合物是一種對于治療急性肺損傷非常有效的藥物。此外，通過有效中和體內(nèi)過高的TNF，可大大緩解SARS的臨床病癥，因此，應用重組人II型TNFR-Ig融合蛋白來治療SARS，對SARS的治療大有裨益，有助于提高治療效果，降低SARS患者死亡率。
下面結合具體實施例，進一步闡述本發(fā)明。應理解，這些實施例僅用于說明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。下列實施例中未注明具體條件的實驗方法，通常按照現(xiàn)有技術中的常規(guī)條件進行。
實施例1 本發(fā)明的藥物組合物的制備首先配制100mM的磷酸鹽緩沖液，并且調(diào)節(jié)緩沖液的PH值，使其在PH7.0左右。在磷酸鹽緩沖液中加入適量的海藻糖，使其達到50mg/ml，接著加入TNFR-Ig融合蛋白，使其達到50mg/ml，獲得的藥劑可以直接施用于哺乳動物(包括人)，如通過靜脈注射的方式。
另外，也可將本發(fā)明的藥物組合物制成凍干制劑，以便于運輸和貯藏。在需要施用時，可以用生理可用的溶劑將本發(fā)明的藥物組合物進行重懸，比如可以使用蒸餾水進行重懸。
實施例2 藥代動力學研究我們利用正常大鼠進行了本發(fā)明的藥物組合物與進口對照藥品(ENBRELTM)的藥代動力學比較研究。給予大鼠皮下一次注射本品或ENBRELTM，然后于給藥后不同時間采血，利用針對TNFR-Ig特異性的夾心ELISA法檢測大鼠血清中的藥物濃度進行分析。
結果顯示，本品與ENBRELTM的藥-時曲線下面積、半衰期、峰值濃度等指標上均無顯著差異。該結果提示，本品藥物動力學性質(zhì)與ENBRELTM基本相同。由于ENBRELTM已經(jīng)是一種研制技術成熟且上市的藥物，因此可見本發(fā)明的藥物組合物也達到了臨床所需的目的。
實施例3 毒性研究
1.急毒選擇20只正常的小鼠，給予小鼠皮下一次性注射相當于推薦臨床應用劑量的400倍的研究藥物，在14天的觀察期內(nèi)，全部動物存活且體重增加，無異常毒性反應現(xiàn)象。
2.長毒利用恒河猴進行了本品的4周長期毒性試驗，以觀察恒河猴皮下注射本發(fā)明的藥物組合物4周之后，對機體產(chǎn)生的毒性反應及其嚴重程度，提供毒性反應的靶器官及其損害的可逆性，確定無毒性反應的劑量，為擬定人用安全劑量提供參考。
結果顯示，在給予劑量分別為0、1、5和15mg/kg，每周注射2次，連續(xù)注射4周，動物的一般癥狀、血液學和血清生化指標、尿液分析、心電圖和病理檢查等均未發(fā)現(xiàn)有明顯異常，僅見給藥2周后部分動物血清中抗體產(chǎn)生。
上述結果與美國FDA公布的關于ENBRELTM的猴4周長期毒性試驗的結果非常接近。因此，在本試驗條件下，對恒河猴給藥4周是較安全的，安全劑量為15mg/kg。
實施例4 有效性試驗(1)急性肺損傷試驗對本發(fā)明的藥物組合物進行臨床前藥效學研究。使用內(nèi)毒素來誘導大鼠，使之產(chǎn)生急性肺損傷癥狀，然后用本發(fā)明的藥物組合物靜脈注射大鼠。
試驗結果表明，在本試驗中，該藥物最低在1mg/kg體重時可產(chǎn)生明顯的藥效作用。
(2)小鼠注射致死劑量TNF-α和TNFR-Ig融合蛋白的試驗在本試驗中，通過小鼠注射致死劑量TNF-α模型，研究了皮下注射本發(fā)明的藥物組合物的體內(nèi)中和TNFα的情況。
結果顯示，給予小鼠腹腔注射重組人TNF-α(R&D systems)10μg/只，小鼠均在24h內(nèi)死亡(20/20)。而24h前皮下注射本發(fā)明的藥物組合物(500μg/只)的一組小鼠中則無動物死亡(0/20)。該結果證明，本發(fā)明的藥物組合物確實可在體內(nèi)起到中和TNF-α的作用，且該藥物經(jīng)皮下注射后，至少24h后仍有藥理作用。另外兩組動物TNF-α給藥劑量提高至20μg，結果使用本發(fā)明的藥物組合物的一組動物中死亡7只(存活率65％)，EnbrelTM組動物死亡8只(存活率60％)；經(jīng)x2檢驗，兩組動物存活率無顯著差異。
綜上所述，靜脈注射TNFR-Ig融合蛋白可對內(nèi)毒素誘導的大鼠急性肺損傷起到防治作用，其作用與劑量呈正相關。
權利要求
1.一種可用于急性肺損傷的藥物組合物，其特征在于，所述藥物組合物中包含TNFR-Ig融合蛋白、海藻糖以及磷酸鹽緩沖液。
2.根據(jù)權利要求1所述的可用于急性肺損傷的藥物組合物，其特征在于，其中含有TNFR-Ig融合蛋白30-70mg/ml，含有海藻糖30-70mg/ml，溶解在100mM的磷酸鹽緩沖液中。
3.根據(jù)權利要求2所述的可用于急性肺損傷的藥物組合物，其特征在于，其中含有TNFR-Ig融合蛋白50mg/ml，含有海藻糖50mg/ml，溶解在100mM的磷酸鹽緩沖液中。
4.權利要求1-3中任何一種可用于急性肺損傷的藥物組合物，其特征在于，可將液態(tài)的藥物組合物制成凍干制劑，在施用時用蒸餾水重懸。
5.權利要求1-3中任何一種可用于急性肺損傷的藥物組合物，其特征在于，可采取肌內(nèi)給藥、靜脈內(nèi)給藥、皮下給藥或皮內(nèi)給藥。
6.根據(jù)權利要求5所述的可用于急性肺損傷的藥物組合物，其特征在于，采用靜脈注射的方式給藥。
全文摘要
本發(fā)明涉及生物制藥領域，關于一種可用于治療急性肺損傷的藥物組合物，其有效成分包含腫瘤壞死因子受 體－免疫球蛋白(TNFR－Ig)的融合蛋白。本發(fā)明的藥物組合物在體內(nèi)可以與細胞表面上的TNFR競爭性地結合周圍的TNF，減少結合于細胞上TNFR的TNF的數(shù)目，從而減少或消除由TNF所引發(fā)的炎癥反應，其對于治療嚴重急性呼吸綜合癥是非常有效的。
文檔編號A61P11/00GK1759885SQ20041006719
公開日2006年4月19日 申請日期2004年10月15日 優(yōu)先權日2004年10月15日
發(fā)明者劉慶法, 李春澍, 李銳 申請人:上海蘭生國健藥業(yè)有限公司