和厚樸酚在制備治療急性肺損傷藥物中的應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及和厚樸酚的應(yīng)用，特別涉及和厚樸酚在制備治療急性肺損傷藥物中的應(yīng)用。小鼠預(yù)先服用和厚樸酚，然后采用脂多糖誘導(dǎo)建立小鼠炎癥急性肺損傷模型，造模8小時(shí)后處死動(dòng)物制備支氣管肺泡灌洗液，用于檢測(cè)腫瘤壞死因子和白細(xì)胞介素6水平和超氧化物歧化酶活力，并計(jì)數(shù)白細(xì)胞和中性粒細(xì)胞的數(shù)量；收集肺組織測(cè)定濕干重比率，觀察組織病理學(xué)的變化。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，和厚樸酚顯著降低肺組織的濕干重比率，顯著改善肺組織的病理學(xué)損傷；和厚樸酚顯著升高支氣管肺泡灌洗液中超氧化物歧化酶的活力，顯著抑制腫瘤壞死因子和白細(xì)胞介素6的產(chǎn)生，顯著減少白細(xì)胞和中性粒細(xì)胞的數(shù)量。實(shí)驗(yàn)結(jié)果說(shuō)明，和厚樸酚對(duì)脂多糖誘導(dǎo)的小鼠急性肺損傷具有保護(hù)作用。
【專利說(shuō)明】和厚樸酚在制備治療急性肺損傷藥物中的應(yīng)用

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及和厚樸酚的應(yīng)用，特別涉及和厚樸酚在制備治療急性肺損傷藥物中的應(yīng)用。

【背景技術(shù)】
[0002]急性肺損傷(acute lung injury,ALI)是各種直接和間接致傷因素導(dǎo)致的肺泡上皮細(xì)胞及毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷，造成彌漫性肺間質(zhì)及肺泡水腫，導(dǎo)致的急性低氧性呼吸功能不全。以肺容積減少、肺順應(yīng)性降低、通氣/血流比例失調(diào)為病理生理特征，臨床上表現(xiàn)為進(jìn)行性低氧血癥和呼吸窘迫，肺部影像學(xué)上表現(xiàn)為非均一性的滲出性病變，其發(fā)展至嚴(yán)重階段(氧合指數(shù)< 200)被稱為急性呼吸窘迫綜合征(acute respiratory distresssyndrome, ARDS)。
[0003]急性肺損傷目前尚無(wú)特效的治療方法，主要根據(jù)其病理生理改變和臨床表現(xiàn)，采取針對(duì)性或支持性治療措施。初步使用的ALI治療藥物有血管舒張劑的吸入治療(一氧化氮吸入、前列環(huán)素吸入及外源性肺表面活性物質(zhì)等)、腎上腺糖皮質(zhì)激素、非留體類抗炎藥物、酮康唑等，但存在療效不滿意或嚴(yán)重的不良反應(yīng)等問(wèn)題，因此，迄今尚無(wú)強(qiáng)力的、安全有效的藥物治療手段。
[0004]厚樸為木蘭科植物厚樸或凹葉厚樸的干燥干皮、根皮及枝皮。其具燥濕消痰，下氣除螨之功效，用于濕滯傷中，脫痞吐瀉，食積氣滯，腹脹便秘，痰飲喘咳，為常用中藥?，F(xiàn)代藥理研究表明，厚樸具有影響胃腸活動(dòng)、抗菌、鎮(zhèn)咳、肌肉松弛和中樞抑制等作用。厚樸中藥效活性成分主要為厚樸酚與和厚樸酚，二者為同分異構(gòu)體。其中和厚樸酚其具有多重藥效藥理作用，包括抗氧化作用；抗菌、抗病毒作用；保肝、護(hù)肝作用；保護(hù)、營(yíng)養(yǎng)神經(jīng)作用；抗腫瘤作用。但和厚樸酚是否具有抗急性肺損傷作用，未見(jiàn)報(bào)道，本發(fā)明發(fā)現(xiàn)該藥具有抗急性肺損傷作用。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]發(fā)明目的
[0006]本發(fā)明提供和厚樸酚的新的應(yīng)用，即和厚樸酚在制備治療急性肺損傷藥物中的應(yīng)用
[0007]技術(shù)方案
[0008]和厚樸酚在制備治療急性肺損傷藥物中的應(yīng)用
[0009]有益效果
[0010]1、急性肺損傷(acute lung injury,ALI)是各種直接和間接致傷因素導(dǎo)致的肺泡上皮細(xì)胞及毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷，造成彌漫性肺間質(zhì)及肺泡水腫，導(dǎo)致的急性低氧性呼吸功能不全。以肺容積減少、肺順應(yīng)性降低、通氣/血流比例失調(diào)為病理生理特征，臨床上表現(xiàn)為進(jìn)行性低氧血癥和呼吸窘迫，肺部影像學(xué)上表現(xiàn)為非均一性的滲出性病變，其發(fā)展至嚴(yán)重階段(氧合指數(shù)< 200)被稱為急性呼吸窘迫綜合征(acute respiratory distresssyndrome, ARDS)。本發(fā)明的研究發(fā)現(xiàn)，小鼠預(yù)先服用和厚樸酚，然后采用脂多糖(LPS)誘導(dǎo)建立小鼠炎癥急性肺損傷(ALI)模型，造模8小時(shí)后處死動(dòng)物制備支氣管肺泡灌洗液(BALF)，用于檢測(cè)腫瘤壞死因子(TNF-α)和白細(xì)胞介素6 (IL-6)水平和超氧化物歧化酶(SOD)活力，以及計(jì)數(shù)白細(xì)胞和中性粒細(xì)胞的數(shù)量；收集肺組織測(cè)定濕干重(W/D)比率，觀察組織病理學(xué)的變化。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，小鼠預(yù)先服用和厚樸酚，顯著降低肺組織的W/D比率，顯著改善肺組織的病理學(xué)損傷；和厚樸酚顯著升高BALF中SOD的活力，顯著減少BALF中白細(xì)胞和中性粒細(xì)胞的數(shù)量，顯著抑制了腫瘤壞死因子(TNF-α)和白細(xì)胞介素6(IL-6)的產(chǎn)生。實(shí)驗(yàn)結(jié)果說(shuō)明，和厚樸酚對(duì)LPS誘導(dǎo)的小鼠ALI具有保護(hù)作用。

【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0011]圖1肺臟組織病理學(xué)改變，HE染色(X200):A:空白組；B:模型組；C:地塞米松組；D:和厚樸酌.(10mg/kg) ；E:和厚樸酌.(20mg/kg)

【具體實(shí)施方式】
[0012]I材料和方法
[0013]1.1動(dòng)物和分組
[0014]雌性BALb/c小鼠(體重18-20g)，由南京市江寧區(qū)青龍山動(dòng)物繁殖場(chǎng)提供，隨機(jī)分為空白組、模型組、和厚樸酚組(低、高劑量)和地塞米松組，每組10只。
[0015]1.2藥品與試劑
[0016]LPS和和厚樸酚，美國(guó)Sigma公司；地塞米松(DEX)，新鄉(xiāng)常樂(lè)制藥有限公司；小鼠腫瘤壞死因子(TNF-α)和白細(xì)胞介素6(IL-6)的ELISA試劑盒，美國(guó)B1legend公司；超氧化物歧化酶(SOD)試劑盒，南京建成生物工程研究所。
[0017]1.3 方法
[0018]1.3.1ALI模型的建立
[0019]小鼠禁食8h后，和厚樸酚組(10mg/kg，20mg/kg)按體重灌胃給藥，空白組和模型組灌胃相同體積的PBS，地塞米松組腹腔注射地塞米松2mg/kg。動(dòng)物給藥I小時(shí)后，用乙醚麻醉，模型組、和厚樸酚組(低、高劑量)和地塞米松組向鼻內(nèi)滴注LPS (用50 μ L PBS溶解)10 μ g誘導(dǎo)ALI，空白組滴鼻PBS50 μ L。
[0020]1.3.2支氣管肺泡灌洗液(BALF)的收集和細(xì)胞計(jì)數(shù)
[0021]于滴鼻8h后,處死動(dòng)物收集BALF,并于4?條件下3000r/min離心1min,取上清液于-70°C保存，用于測(cè)定腫瘤壞死因子(TNF-a)和白細(xì)胞介素6(IL-6)水平以及超氧化物歧化酶(SOD)活力。沉淀用PBS重懸后，經(jīng)過(guò)瑞氏-吉姆薩染色，計(jì)數(shù)白細(xì)胞和中性粒細(xì)胞的數(shù)量。
[0022]1.3.3肺臟濕干重(W/D)比率的檢測(cè)
[0023]取小鼠的左肺臟用PBS洗3次，吸干表面水分后稱重，然后于70°C烘干48h，再次稱重，計(jì)算W/D比率，以此測(cè)定肺臟的水腫情況。
[0024]1.3.4BALF中TNF- a和IL-6水平及SOD活性的檢測(cè)
[0025]按說(shuō)明書(shū)，使用ELISA試劑盒檢測(cè)BALF中致炎細(xì)胞因子TNF- a、IL-6的水平，使用超氧化物歧化酶試劑盒檢測(cè)BALF中SOD的活性。
[0026]1.3.5肺組織切片觀察
[0027]取小鼠右肺臟，用10%福爾馬林緩沖液固定，石蠟包埋后切片，做HE染色，光學(xué)顯微鏡下觀察。
[0028]1.3.6統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
[0029]所有數(shù)據(jù)均采用平均值土標(biāo)準(zhǔn)差表示，應(yīng)用SPSS13.0進(jìn)行單因素方差分析和t檢驗(yàn)。P < 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
[0030]2 結(jié)果
[0031]2.1對(duì)LPS誘導(dǎo)的ALI小鼠肺臟W/D比率的影響
[0032]實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表1，模型組小鼠肺臟的W/D比率極顯著高于空白組(P < 0.01)，而和厚樸酚組和DEX組的W/D比率均顯著低于模型組(P < 0.05或P < 0.01)。
[0033]表1肺干濕(W/D)比率
[0034]

【權(quán)利要求】
1.和厚樸酚在制備治療急性 肺損傷藥物中的應(yīng)用。
【文檔編號(hào)】A61P11/00GK104095831SQ201310111020
【公開(kāi)日】2014年10月15日 申請(qǐng)日期:2013年4月2日 優(yōu)先權(quán)日:2013年4月2日
【發(fā)明者】傅強(qiáng), 馬世平, 馬春華, 馬占強(qiáng) 申請(qǐng)人:中國(guó)藥科大學(xué)