專利名稱：淫羊藿提取物在制備預(yù)防和治療抑郁癥藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及淫羊藿提取物的新用途，具體地說是涉及淫羊藿提取物在制備預(yù)防和治療抑郁癥藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
抑郁癥指情感性精神障礙綜合癥，以心境低落為主要特征。臨床主要表現(xiàn)為抑郁心情、疲勞感、快感缺乏、思維和運(yùn)動遲滯，伴有焦慮、睡眠障礙、食欲不振、絕望及自殺妄想等。臨床上抑郁癥常與其它嚴(yán)重疾病如心臟病、腦中風(fēng)、癌癥、免疫性疾病等并存。世界衛(wèi)生組織精神病流行情況調(diào)查報(bào)告顯示，抑郁癥已經(jīng)成為現(xiàn)代社會危害人類身心健康的常見病，且有愈加嚴(yán)重的趨勢。
目前臨床上常用的抗抑郁藥物大多為人工合成的有機(jī)物，有如下幾類(1)單胺氧化酶抑制劑(MAO-AI)(如嗎氯貝胺)；(2)5-羥色胺重?cái)z取抑制劑(SSRI)(如氟西汀)；(3)5-羥色胺-去甲腎上腺素重?cái)z取抑制劑(SNRI)；(4)雙重5-HT阻斷劑(奈法唑酮)；(5)NE和DA重?cái)z取抑制劑(如bupropin)。已有大量的研究和臨床資料表明，這些合成的抗抑郁藥大多具有難以克服的缺點(diǎn)，例如抗抑郁譜較窄、毒副作用較大、停藥后易復(fù)發(fā)等，即便是臨床首選西藥氟西汀，近來也不斷有其誘發(fā)自殺傾向的負(fù)面報(bào)道。如何保證并保持抗抑郁藥物的療效、同時降低其毒副作用，或者篩選出一種療效好且毒副作用小的新型抗抑郁藥物成為科研工作者所面臨的一個課題。
中醫(yī)上講抑郁癥是指情志不寧、氣機(jī)郁滯引起的一類病癥，與西醫(yī)上講的抑郁癥有很多共同之處。一部分傳統(tǒng)中藥名方具有與西藥相當(dāng)甚至更好的抗抑郁效果且安全可靠。但傳統(tǒng)中藥復(fù)方缺點(diǎn)在于起效較慢，組分復(fù)雜，活性成分不明確，難以制定和實(shí)施嚴(yán)格的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。因此找到療效確切的單體，成為解決應(yīng)用中藥治療抑郁癥的關(guān)鍵。
中藥材淫羊藿最早記載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，為傳統(tǒng)的補(bǔ)虛壯陽中藥，具有補(bǔ)腎陽、強(qiáng)筋骨、祛風(fēng)濕之功效。
淫羊藿的主要成分是淫羊藿總黃酮(包括淫羊藿苷、淫羊藿次苷等)和淫羊藿多糖。前人對淫羊藿，淫羊藿總黃酮提取物(包含淫羊藿苷)和單成分淫羊藿苷的研究已經(jīng)證明它們有多種生物學(xué)活性
淫羊藿具有明顯性激素樣作用，對心血管系統(tǒng)和免疫系統(tǒng)有調(diào)節(jié)作用，此外還有促進(jìn)骨細(xì)胞增殖，抗衰老等活性。
淫羊藿總黃酮具有性激素樣作用，對心血管系統(tǒng)和免疫系統(tǒng)有調(diào)節(jié)作用，可用以降血糖、降血脂、降血壓，改善腦血流量和腦缺血并改變血液流變學(xué)指標(biāo)，改善造血系統(tǒng)障礙，提高人體免疫力，此外還有促進(jìn)骨細(xì)胞增殖，抗衰老，抗炎，抗病毒等活性。
淫羊藿苷具有性激素樣作用，對心血管系統(tǒng)和免疫系統(tǒng)有調(diào)節(jié)作用，有促進(jìn)骨細(xì)胞增殖，抗衰老，抗炎，抗病毒等活性，此外還有抗腫瘤活性的報(bào)道。
近年來針對淫羊藿化學(xué)成分和藥理作用的研究十分活躍，受到國內(nèi)外廣泛關(guān)注。且淫羊藿在我國產(chǎn)地分布廣，產(chǎn)量大，具有巨大的研究和開發(fā)潛力。
此前，國內(nèi)外均無淫羊藿提取物、淫羊藿總黃酮、淫羊藿苷三者具有抗抑郁活性的相關(guān)報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
1、發(fā)明目的本發(fā)明的目的在于提供淫羊藿提取物的新用途，具體地說是指淫羊藿提取物包括活性成分淫羊藿總黃酮和淫羊藿苷在制備預(yù)防和治療抑郁癥的藥物中的應(yīng)用。
2、技術(shù)方案本發(fā)明人用中藥材淫羊藿分別經(jīng)水、75％乙醇、90％乙醇回流提取，再經(jīng)石油醚脫脂后分別用酸堿沉淀法、乙酸乙酯萃取法、鉛鹽沉淀法或用重結(jié)晶等方法獲得提取物，經(jīng)干燥可得到外觀為黃綠色粉末的總黃酮提取物，經(jīng)檢測其中含淫羊藿苷含量在5～90％。經(jīng)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，該總黃酮提取物具有抗抑郁活性；本發(fā)明人將該總黃酮提取物進(jìn)一步純化，用多種濃度甲醇水溶液反復(fù)提取純化，再經(jīng)HPLC分離得到外觀為淺黃綠色粉末，經(jīng)檢測，確定其為淫羊藿苷，含量達(dá)到98％以上。
淫羊藿苷的結(jié)構(gòu)式如下 淫羊藿提取物在制備預(yù)防和治療抑郁癥藥物中的應(yīng)用，該提取物包括活性成分淫羊藿總黃酮，還包括活性成分淫羊藿苷單體，在淫羊藿總黃酮提取物中含有5-90％的淫羊藿苷。
本發(fā)明人的實(shí)驗(yàn)研究表明，以淫羊藿苷為主要活性成分(5～90％)的淫羊藿總黃酮和淫羊藿苷單體都具有明顯的抗抑郁作用，其抗抑郁效果與目前臨床上廣泛使用的鹽酸氟西汀相似。中藥淫羊藿在很多中藥滋補(bǔ)方劑中都有應(yīng)用，由此可以推知淫羊藿苷作為藥物是相對安全的，且可通過動物的藥理和毒理實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證。
本發(fā)明所述中藥成分淫羊藿苷及含淫羊藿苷的淫羊藿總黃酮提取物經(jīng)過以下抑郁動物模型和有關(guān)抑郁的生化指標(biāo)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，驗(yàn)證了其抗抑郁效果(1)淫羊藿苷和淫羊藿總黃酮對小鼠懸尾不動時間的影響在小鼠懸尾行為絕望模型上，口服給予淫羊藿苷(100mg/kg、50mg/kg、25mg/kg)和淫羊藿總黃酮(200mg/kg、100mg/kg、50mg/kg)均可顯著縮短小鼠懸尾不動時間，顯示有抗抑郁作用。
(2)淫羊藿苷和淫羊藿總黃酮對小鼠強(qiáng)迫游泳不動時間的影響在小鼠強(qiáng)迫游泳行為絕望模型上，口服給予淫羊藿苷(100mg/kg、50mg/kg和25mg/kg)和淫羊藿總黃酮(200mg/kg、100mg/kg和50mg/kg)均可顯著縮短強(qiáng)迫游泳不動時間，顯示有抗抑郁作用。
(3)淫羊藿苷對慢性刺激應(yīng)激(CMS)大鼠蔗糖攝入量的影響在CMS模型上，口服給予淫羊藿苷(75mg/kg和37.5mg/kg)，可顯著逆轉(zhuǎn)CMS引起大鼠蔗糖攝入量的減少，進(jìn)一步證明淫羊藿苷具有抗抑郁作用。
(4)淫羊藿苷和淫羊藿總黃酮對抑郁動物體內(nèi)單胺氧化酶-A和B(MAO-A、MAO-B)活性的影響口服給予淫羊藿苷(100mg/kg、50mg/kg、25mg/kg)和淫羊藿總黃酮(200mg/kg、100mg/kg、50mg/kg)均可顯著抑制模型動物腦部MAO-A、MAO-B活性，表明淫羊藿苷和淫羊藿總黃酮可通過抑制MAO活性而達(dá)到抗抑郁的目的。
3、有益效果本發(fā)明提供的淫羊藿苷和含主要成分淫羊藿苷的淫羊藿總黃酮在制備預(yù)防和治療抗抑郁癥藥物中的新應(yīng)用，它具有以下優(yōu)點(diǎn)(1)藥效成分明確，淫羊藿苷為結(jié)構(gòu)穩(wěn)定的單體，易于該藥物進(jìn)行質(zhì)量控制，適合工業(yè)規(guī)?；a(chǎn)；(2)經(jīng)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證抗抑郁活性明顯；(3)該提取物為天然中藥成分，安全性好。
(4)淫羊藿在我國產(chǎn)地分布廣、產(chǎn)量大，藥源豐富，可以降低生產(chǎn)成本。
具體實(shí)施例方式
通過以下實(shí)施例來進(jìn)一步說明本發(fā)明的有益效果實(shí)施例1淫羊藿總黃酮(淫羊藿苷含量為55％)對小鼠懸尾模型行為指標(biāo)的影響動物模型小鼠懸尾模型原理抑郁癥的一個主要癥狀是動機(jī)行為的減少。懸尾實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ椭?，懸尾小鼠為克服不正常體位而掙扎活動，這是小鼠的動機(jī)行為，但活動到一定時間后，出現(xiàn)間斷性不動，顯示“失望”狀態(tài)。這里所指的不動性反映了一種被稱之為“行為絕望和扭曲(behavioral despair and variant)”或“對強(qiáng)壓環(huán)境適應(yīng)的失敗(failure to adapt to stress)”狀態(tài)，是一種消極的無動機(jī)絕望狀態(tài)。小鼠懸尾行為絕望模型對絕大多數(shù)抗抑郁藥敏感，并且操作簡單、快捷，因此被廣泛用于該類藥物的篩選。
實(shí)驗(yàn)藥物鹽酸氟西汀(fluoxetine，常州四藥廠)淫羊藿總黃酮(淫羊藿苷含量為55％)實(shí)驗(yàn)動物雄性ICR小鼠，25±2g，購于南京中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心。
動物飼養(yǎng)于25±1℃室內(nèi)，自由飲水進(jìn)食，適應(yīng)1周后隨機(jī)分組，每組15只。
動物分組情況C 生理鹽水對照組F 氟西汀給藥組(10mg/kg)YH淫羊藿總黃酮高劑量給藥組(200mg/kg)YM淫羊藿總黃酮中劑量給藥組(100mg/kg)YL淫羊藿總黃酮低劑量給藥組(50mg/kg)實(shí)驗(yàn)方法1)給藥劑量和方式陽性藥鹽酸氟西汀(10mg/kg)和樣品淫羊藿總黃酮提取物(淫羊藿苷含量55％)高(200mg/kg)、中(100mg/kg)、低(50mg/kg)劑量按所需濃度在生理鹽水中分散成混懸液。生理鹽水作為模型對照組藥物。所有藥液均采用灌胃方式給藥。給藥時間固定在每天的10:00，連續(xù)給藥14天，行為實(shí)驗(yàn)分別在第1、7、14天進(jìn)行，實(shí)驗(yàn)前一小時給藥。
2)小鼠開場行為實(shí)驗(yàn)在直徑80cm、高20cm的柱形箱內(nèi)設(shè)3個同心圓，直徑分別為14，28，42cm，將箱內(nèi)分為36個無壁小室。箱中心用一個懸掛在40cm高處的60W的電燈泡照亮，整個實(shí)驗(yàn)過程中，操作間保持黑暗。單只小鼠被放在整個裝置的中央，可自由活動。記錄3min內(nèi)小鼠的移動次數(shù)(小鼠四爪都跨越小室邊界的次數(shù))、豎起次數(shù)(小鼠前肢抬起、后肢站立的次數(shù))和理毛次數(shù)。
3)小鼠懸尾實(shí)驗(yàn)夾住小鼠尾端2cm的部位，使其倒掛于金屬桶中，頭部離桶底約5cm，觀察6min，記錄后4min內(nèi)的不動時間。
4)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用t-Student檢測方法對實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用MEAN±S.E.M表示。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果1)開場行為試驗(yàn)結(jié)果顯示，與不給藥的空白對照組相比，本實(shí)驗(yàn)3個劑量的淫羊藿總黃酮(淫羊藿苷含量55％)口服給藥對小鼠開場行為無顯著影響(實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)略)，說明淫羊藿總黃酮減少懸尾小鼠不動時間的抗抑郁作用與中樞神經(jīng)系統(tǒng)興奮性無關(guān)。
2)小鼠懸尾實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，3個劑量淫羊藿總黃酮(淫羊藿苷含量55％)口服給藥后均能不同程度地減少懸尾模型小鼠的絕對不動時間，并且隨給藥時間的延長藥效趨于穩(wěn)定并有增強(qiáng)趨勢。給藥2周后，3個劑量都達(dá)到顯著減少懸尾模型小鼠絕望時間的抗抑郁效果，低劑量(25mg/kg)給藥顯示出的效果最好，其藥效與陽性藥氟西汀相當(dāng)。數(shù)據(jù)詳見表1。
-5-表1淫羊藿總黃酮對懸尾實(shí)驗(yàn)中小鼠不動時間的影響組別給藥劑量不動時間(s)mg/kg 第1天 第7天第14天C 57.88±3.66 70.85±4.06 78.87±5.08F 1032.69±2.25*34.71±1.76**35.52±2.61*YH200 55.81±3.34 44.46±1.81*43.20±1.33*YM100 48.00±2.70 43.84±3.46 41.39±2.56*YL5044.49±2.91 30.08±1.90*36.76±2.69*與生理鹽水對照組比較*P＜0.05**P＜0.01實(shí)施例2淫羊藿總黃酮(淫羊藿苷含量為55％)對小鼠強(qiáng)迫游泳模型行為指標(biāo)的影響動物模型小鼠強(qiáng)迫游泳模型原理抑郁癥的一個主要癥狀是動機(jī)行為的減少。強(qiáng)迫游泳模型中，小鼠被迫在一局限的空間內(nèi)游泳，它們首先表現(xiàn)出掙扎和試圖逃跑的動機(jī)行為，隨后處于一種被稱為“絕望”的不動狀態(tài)。這里所指的不動性反映了一種被稱之為“行為絕望和扭曲(behavioral despair and variant)”或“對強(qiáng)壓環(huán)境適應(yīng)的失敗(failure to adapt to stress)”狀態(tài)，是一種消極的無動機(jī)絕望狀態(tài)。小鼠強(qiáng)迫游泳行為絕望模型對絕大多數(shù)抗抑郁藥敏感，并且操作簡單、快捷，因此被廣泛用于該類藥物的篩選。
實(shí)驗(yàn)藥物同實(shí)施例1實(shí)驗(yàn)動物同實(shí)施例1實(shí)驗(yàn)方法1)給藥方式和劑量同實(shí)施例12)開場行為試驗(yàn)同實(shí)施例13)小鼠強(qiáng)迫游泳試驗(yàn)將小鼠放入水深10cm燒杯(18cm高，14cm直徑)中，水溫25±1℃。觀察6min，記錄后4min內(nèi)的不動時間。
4)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用t-Student檢測方法對實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用MEAN±S.E.M表示。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果1)開場行為試驗(yàn)結(jié)果顯示，與不給藥的空白對照組相比，本實(shí)驗(yàn)3個劑量的淫羊藿總黃酮提取物(淫羊藿苷含量55％)口服給藥對小鼠開場行為無顯著影響(實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)略)，說明淫羊藿總黃酮減少強(qiáng)迫游泳小鼠不動時間的抗抑郁作用與中樞神經(jīng)系統(tǒng)興奮性無關(guān)。
2)小鼠強(qiáng)迫游泳試驗(yàn)結(jié)果顯示，3個劑量淫羊藿總黃酮(含淫羊藿苷55％)提取物口服給藥均能不同程度地減少強(qiáng)迫游泳模型小鼠的絕對不動時間，并且隨給藥時間的延長藥效趨于穩(wěn)定并有增強(qiáng)趨勢。給藥2周后，高、低2個劑量達(dá)到極顯著而中劑量達(dá)到顯著減少強(qiáng)迫游泳模型小鼠絕望時間的抗抑郁效果，高劑量效果為最好，與陽性藥鹽酸氟西汀相當(dāng)。數(shù)據(jù)詳見表2。
表2淫羊藿總黃酮提取物對強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)中小鼠不動時間的影響動物分組 劑量不動時間(s)mg/kg 第1天 第7天 第14天C138.63±3.40 161.63±3.02 60.85±2.91F10 124.61±5.24 100.89±3.67 101.95±3.97YH 200 117.57±5.05 107.79±3.46***106.80±4.02***YM 100 123.38±4.33 136.73±4.04 134.03±4.03*YL 50 110.11±2.66*110.54±3.82**109.97±4.35**與生理鹽水對照組比較*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001實(shí)施例3淫羊藿總黃酮(淫羊藿苷含量55％)對抑郁模型小鼠腦部MAO酶(包括MAO-A、MAO-B)活性的影響原理近年來對抗抑郁作用機(jī)理的研究表明，藥物的抗抑郁作用與生物體的單胺神經(jīng)元功能狀態(tài)密切相關(guān)通過抑制單胺氧化酶活性，可以選擇性抑制突觸間相關(guān)單胺遞質(zhì)的降解，增高其濃度，從而增強(qiáng)單胺神經(jīng)元功能。因此單胺氧化酶(MAO)的活性被認(rèn)為是抑郁病理的一個重要指標(biāo)。本發(fā)明人對小鼠的腦部的MAO-A和MAO-B的酶活性進(jìn)行了檢測。
實(shí)驗(yàn)材料與儀器實(shí)驗(yàn)材料鹽酸氟西汀(fluoxetine，常州四藥廠)阿米替林(常州四藥廠)牛血清蛋白(SIGMA公司產(chǎn)品)5-HT，芐胺(SIGMA公司產(chǎn)品)乙酸丁酯A.R.(上海凌峰化學(xué)試劑有限公司)環(huán)己烷A.R.(上海凌峰化學(xué)試劑有限公司)實(shí)驗(yàn)主要儀器WH-3微型旋渦混合儀上海滬西儀器廠XHF-1高速分散器(上海金達(dá)生化儀器廠)U-3000 spectrophotometer(Hitachi，Ltd.Tokyo Japan)TDA系列溫度顯示調(diào)節(jié)儀(寧波自動化儀表廠)(水浴鍋)TGL-16G臺式高速冷凍離心機(jī)上海安亭科學(xué)儀器廠實(shí)驗(yàn)動物雄性ICR小鼠，25±2g，購于南京中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心。
動物分組情況C 正常生理鹽水對照組M 模型生理鹽水對照組F 模型氟西汀給藥組(10mg/kg)YH模型淫羊藿總黃酮提取物高劑量給藥組(100mg/kg)YL模型淫羊藿總黃酮提取物低劑量給藥組(50mg/kg)實(shí)驗(yàn)方法1)給藥方式陽性藥鹽酸氟西汀(10mg/kg)和樣品淫羊藿總黃酮提取物(淫羊藿苷含量55％)高劑量按所需濃度在生理鹽水中分散成混懸液。生理鹽水作為模型對照組藥物。所有藥液均采用灌胃方式給藥。給藥時間固定在每天的10:00，連續(xù)給藥21天。每組動物數(shù)15只。
2)試驗(yàn)方法模型小鼠給藥21天后置冰盤中上眼球取血、斷頭處死，迅速于冰臺上取腦，于稱量紙上稱重，置-20℃冰箱保存，MAO酶活性采用紫外分光法測定。
3)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用t-Student檢測方法對實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用MEAN±S.E.M表示。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果
抑郁模型生理鹽水對照小鼠腦部MAO酶活力明顯高于空白生理鹽水對照組小鼠，有極顯著差異(P＜0.01)。而通過口服2個劑量淫羊藿總黃酮提取物21天后，抑郁模型小鼠腦部的MAO酶活力水平均被極顯著降低，效果優(yōu)于陽性藥鹽酸氟西汀。數(shù)據(jù)詳見表3表3淫羊藿總黃酮(淫羊藿苷含量55％)對小鼠腦部MAO酶活力的影響動物分組酶活力(U/g pro)抑制率(％)MAO-AMAO-B MAO-A MAO-BC 14.13±0.53 4.21±0.31M 19.03±0.17##7.80±0.29##F 10.80±0.34***5.19±0.35*43.3％33.4％YH 7.02±0.27***2.82±0.19***63.1％63.8％YL 9.59±0.20***4.14±0.35**49.6％46.9％與模型生理鹽水對照組比較*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001與同正常生理鹽水對照組比較##P＜0.01實(shí)施例4淫羊藿苷對小鼠懸尾模型中行為指標(biāo)的影響動物模型同實(shí)施例1原理同實(shí)施例1實(shí)驗(yàn)藥物鹽酸氟西汀(fluoxetine，常州四藥廠)阿米替林(常州四藥廠)淫羊藿苷單體(含量98％)實(shí)驗(yàn)動物雄性ICR小鼠，25±2g，購于南京中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心。
動物飼養(yǎng)于25±1℃室內(nèi)，自由飲水進(jìn)食，適應(yīng)1周后隨機(jī)分組。
分組情況C 生理鹽水對照組F 氟西汀給藥組(10mg/kg)AM阿米替林給藥組(10mg/kg)YH淫羊藿苷高劑量組給藥(100mg/kg)YM淫羊藿苷中劑量組給藥(50mg/kg)
YL淫羊藿苷低劑量組給藥(25mg/kg)實(shí)驗(yàn)方法1)開場行為實(shí)驗(yàn)同實(shí)施例12)小鼠懸尾實(shí)驗(yàn)同實(shí)施例13)給藥方式2種陽性藥和淫羊藿苷按上述濃度在生理鹽水分散成混懸液。生理鹽水作為模型對照組藥物。所有藥液均采用灌胃給藥方式給藥。給藥時間固定在每天的10:00，連續(xù)給藥21天，行為實(shí)驗(yàn)分別在第1、3、7、14、21天進(jìn)行，實(shí)驗(yàn)前一小時給藥。每組實(shí)驗(yàn)動物數(shù)15只。
4)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用t-Student檢測方法對實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用MEAN±S.E.M表示。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果1)開場行為實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明與空白對照組比較，本實(shí)驗(yàn)3個劑量淫羊藿苷口服給藥對小鼠開場行為無顯著影響，說明本實(shí)驗(yàn)中淫羊藿苷減少懸尾小鼠不動時間的抗抑郁作用與中樞神經(jīng)系統(tǒng)興奮性無關(guān)。
2)小鼠懸尾實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，3個劑量淫羊藿苷口服給藥后均能不同程度地減少懸尾模型小鼠的絕對不動時間，并且隨給藥時間的延長藥效藥效趨于穩(wěn)定并有增強(qiáng)趨勢。給藥3周后，3個劑量都達(dá)到顯著和極顯著減少模型動物絕望不動時間的抗抑郁效果，低劑量(25mg/kg)給藥顯示出的效果最好，其藥效與陽性藥氟西汀和阿米替林相當(dāng)。數(shù)據(jù)詳見表4。
表4淫羊藿苷對懸尾實(shí)驗(yàn)中小鼠不動時間的影響組別不動時間(s)第1天 第3天第7天 第14天 第21天C 80.3±1.4 62.5±1.669.8±1.8 87.8±2.6 96.1±2.5F 47.4±1.5***46.3±2.447.1±1.9*48.0±1.6**39.3±1.8***AM 49.7±2.0**50.2±1.838.1±1.5**54.1±1.9*45.0±2.6***YH 77.3±2.1 63.4±2.257.7±1.4 63.8±2.0*64.2±1.8**YM 64.9±2.1 68.1±1.656.9±1.9 64.1±2.1 66.3±2.4*YL 69.2±2.9 62.4±2.358.2±3.0 50.6±2.6*47.9±2.6***與生理鹽水對照組比較*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001
實(shí)施例5淫羊藿苷對小鼠強(qiáng)迫游泳模型中行為指標(biāo)的影響動物模型同實(shí)施例2原理同實(shí)施例2實(shí)驗(yàn)藥物與動物同實(shí)施例4實(shí)驗(yàn)方法1)開場行為實(shí)驗(yàn)同實(shí)施例12)小鼠強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)同實(shí)施例23)給藥方式同實(shí)施例44)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用t-Student檢測方法對實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用MEAN±S.E.M表示。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果1)開場行為實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明開場行為實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明與空白對照組比較，本實(shí)驗(yàn)3個劑量淫羊藿苷口服給藥對小鼠開場行為無顯著影響，說明本實(shí)驗(yàn)中淫羊藿苷減少強(qiáng)迫游泳小鼠不動時間的抗抑郁作用與中樞神經(jīng)系統(tǒng)興奮性無關(guān)。
2)小鼠強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，3個劑量淫羊藿苷口服給藥后均能不同程度地減少懸尾模型小鼠的絕對不動時間，并且隨給藥時間的延長藥效藥效趨于穩(wěn)定并有增強(qiáng)趨勢。給藥3周后，高、低劑量都達(dá)到顯著和極顯著減少模型動物絕望不動時間的抗抑郁效果，高劑量(100mg/kg)給藥顯示出的效果最好，其藥效優(yōu)于陽性藥氟西汀和阿米替林相當(dāng)。數(shù)據(jù)詳見表5表5淫羊藿苷對強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)小鼠不動時間的影響組別不動時間(s)樣本量15 第1天 第3天 第7天 第14天第21天C 96.5±2.4 104.5±3.1108.7±3.1128.9±6.2152.6±3.7F 75.8±2.5 94.8±3.6 100.5±4.0128.3±5.4159.0±3.6AM 63.4±2.9*61.5±3.0*79.2±3.2 104.0±3.6111.7±4.0*YH 98.8±3.8 94.4±3.2 130.0±3.3127.9±3.386.0±3.3***YM 86.6±2.9 133.7±3.3161.4±2.7179.2±3.0190.1±3.4YL 85.0±3.2 90.7±3.3 116.3±3.579.0±3.7 118.7±3.2*與生理鹽水對照組比較*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001實(shí)施例6淫羊藿苷對抑郁模型小鼠腦部MAO酶(包括MAO-A、B)活力的影響原理同實(shí)施例3。
實(shí)驗(yàn)材料與儀器同實(shí)施例3。
實(shí)驗(yàn)動物實(shí)驗(yàn)動物雄性ICR小鼠，25±2g，購于南京中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心。
動物分組情況C 正常生理鹽水對照組M 模型生理鹽水對照組F 模型氟西汀給藥組(10mg/kg)YH模型淫羊藿苷高劑量給藥組(50mg/kg)YL模型組淫羊藿苷低劑量給藥組(12.5mg/kg)給藥方式陽性藥鹽酸氟西汀，阿米替林和樣品淫羊藿苷按上述濃度在生理鹽水分散成混懸液。生理鹽水作為模型對照組藥物。所有藥液均采用灌胃給藥方式給藥。給藥時間固定在每天的10:00，連續(xù)給藥21天。每組動物數(shù)15只。
實(shí)驗(yàn)方法同實(shí)施例3。
統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用t-Student檢測方法對實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用MEAN±S.E.M表示。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果抑郁模型小鼠腦部MAO酶活力極顯著高于空白對照組，而口服給藥2個劑量淫羊藿苷21天后抑郁模型小鼠腦部的MAO酶活性水平都被極顯著降低。
效果都都優(yōu)于陽性藥。數(shù)據(jù)詳見表6。
表6淫羊藿苷對小鼠腦部MAO酶活性的影響組別酶活力(U/g pro)抑制率(％)MAO-A MAO-B MAO-A MAO-BC 41.88±0.49 38.00±0.64M 60.04±0.67###52.73±0.56###F 44.35±0.42***47.42±0.90 26.1％10.1％A 40.05±0.66***44.36±0.72**33.3％15.9％YH 31.83±0.41***33.35±0.88***35.3％36.7％YL 45.40±1.43**40.56±1.11**24.4％23.1％與模型生理鹽水對照組比較*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001與正常生理鹽水對照組比較###P＜0.001實(shí)施例7淫羊藿苷對CMS模型大鼠蔗糖水飲用量的影響動物模型CMS(慢性溫和刺激模型)模型原理CMS模型是近年來抑郁癥病理和藥理研究方面的一個得到廣泛認(rèn)同的模型，該模型模擬了一系列惡劣的生存環(huán)境對動物進(jìn)行刺激，在一個段較長的時間里，多種刺激循環(huán)組合進(jìn)行。與其它一些抑郁模型比較，CMS模型造模方式與人的抑郁癥的成因更加相似，可信度更高。且經(jīng)過驗(yàn)證，臨床應(yīng)用的絕大多數(shù)的抗抑郁藥如經(jīng)典抗抗抑郁藥如三環(huán)類抗抑郁藥、單胺氧化酶抑制劑、5-羥色胺重?cái)z取抑制劑等在該模型上均有效。目前，CMS模型已經(jīng)作為一個公認(rèn)的抗抑郁藥篩選模型得到廣泛應(yīng)用。
抑郁癥的一個主要行為癥狀是病態(tài)動物對環(huán)境改變的敏感度下降，對獎賞性刺激敏感度減小。CMS模型大鼠在斷水?dāng)嗍?8小時后給予1％蔗糖水1小時，動物相對蔗糖水?dāng)z入量(蔗糖水絕對攝入量g/大鼠體重kg)的大小可以表明其對獎賞性刺激的敏感度大小。
實(shí)驗(yàn)動物動物雄性SD大鼠，體重300-350g，南京中醫(yī)藥大學(xué)動物中心提供陽性藥物鹽酸氟西汀(fluoxetine，常州四藥廠)動物分組和劑量說明如下C 正常5％CMC-Na對照組M 模型5％CMC-Na對照組YC正常淫羊藿給藥對照組(25mg/kg)FC正常鹽酸氟西汀給藥對照組(7mg/kg)F 模型鹽酸氟西汀給藥組(7mg/kg)YH模型淫羊藿苷高劑量給藥組(35mg/kg)YL模型淫羊藿苷低劑量給藥組(17.5mg/kg)實(shí)驗(yàn)方法1)給藥方式陽性藥和淫羊藿苷按上述濃度在5％CMC-Na中分散成混懸液。5％CMC-Na作為模型對照組藥物。所有藥液均采用灌胃給藥方式給藥。給藥時間固定在每天的10:00，連續(xù)給藥6周(1周進(jìn)行一次糖水實(shí)驗(yàn))。
實(shí)驗(yàn)方法低頻頻閃，斷水?dāng)嗍常?5度斜籠，陌生動物配對，污籠，噪聲6種刺組合循環(huán)刺激造模，CMS模型成功后連續(xù)給藥6周(1周進(jìn)行一次糖水實(shí)驗(yàn))。
2)糖水實(shí)驗(yàn)具體步驟為斷水?dāng)嗍?8小時后于中午11-12點(diǎn)給予動物1％蔗糖水飲用，測定這1小時動物的相對蔗糖水?dāng)z入量(蔗糖水絕對攝入量g/大鼠體重kg)。
3)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)處理采用t-Student檢測方法對實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用MEAN±S.E.M表示。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果CMS模型大鼠給藥前相對蔗糖水?dāng)z入量顯著低于空白對照組大鼠，高、低兩個劑量的淫羊藿苷口服給藥均能不同程度增加大鼠相對蔗糖水的攝入量。并且隨給藥時間的延長藥效保持并有增強(qiáng)趨勢。6周給藥結(jié)果顯示，低劑量給藥效果較好，達(dá)到極其顯著，其效果接近陽性藥鹽酸氟西??；而正常淫羊藿給藥對照組的動物相對蔗糖水?dāng)z入量無顯著影響。數(shù)據(jù)詳見表9。
表9淫羊藿苷對CMS模型大鼠相對蔗糖水?dāng)z入量影響組別相對糖水?dāng)z入量(g/kg體重)0 1 23 45 6weekC 28.20±0.63 29.81±1.18 25.79±1.18 30.50±1.70 32.88±1.79 28.90±1.14 29.94±0.88YC 27.28±1.38 29.16±1.67 26.64±1.32 32.23±1.36 31.01±2.08 27.74±1.45 31.98±0.99FC 30.28±1.02 32.52±2.20 28.98±2.13 31.67±0.66 28.82±2.62 30.52±2.44 33.40±2.71M 20.77±1.37#21.33±1.00#19.69±1.29#22.36±1.46#22.22±0.75#21.52±0.89#18.67±1.01##F 19.90±1.18#27.92±2.40 30.57±0.89**32.47±1.16*36.76±1.68**35.58±1.99*37.64±1.51***YL 22.99±1.17#25.62±1.12 27.77±1.58 30.96±0.83*33.20±1.22**32.16±1.95*35.15±1.34***YH 19.20±1.59#24.96±2.01 25.47±1.63 24.33±1.07 29.12±1.59*29.78±2.82 31.76±2.24**與模型空白組比較*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001與正?？瞻讓φ战M比較#P＜0.05，##P＜0.0權(quán)利要求
1.淫羊藿提取物在制備預(yù)防和治療抑郁癥藥物中的應(yīng)用。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的淫羊藿提取物的應(yīng)用，其特征在于所述的提取物包括活性成分淫羊藿總黃酮在制備預(yù)防和治療抑郁癥藥物中的應(yīng)用
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的淫羊藿提取物的應(yīng)用，其特征在于所述的提取物還包括活性成分淫羊藿苷單體在制備預(yù)防和治療抑郁癥藥物中的應(yīng)用
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的淫羊藿提取物的應(yīng)用，其特征在于所述的淫羊藿總黃酮含有5-90％的活性成分淫羊藿苷。
全文摘要
本發(fā)明涉及淫羊藿提取物在制藥領(lǐng)域中的新用途，該提取物包括活性成分淫羊藿總黃酮和淫羊藿苷單體在制備預(yù)防和治療抑郁癥藥物中的應(yīng)用。淫羊藿總黃酮和淫羊藿苷單體經(jīng)藥效學(xué)試驗(yàn)的結(jié)果表明可顯著縮短小鼠懸尾不動時間和強(qiáng)迫游泳不動時間，可顯著逆轉(zhuǎn)CMS引起大鼠蔗糖攝入量的減少，顯示有抗抑郁作用，并可顯著抑制動物腦部單胺氧化酶A和B的活性，從而達(dá)到抗抑郁的目的。該藥物的藥效成分明確，淫羊藿苷為結(jié)構(gòu)穩(wěn)定的單體，易于該藥物的質(zhì)量控制，適合于工業(yè)規(guī)模化生產(chǎn)，并經(jīng)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證抗抑郁活性明顯，安全可靠，藥源豐富，從而降低生產(chǎn)成本。
文檔編號A61P25/00GK1628777SQ200410041720
公開日2005年6月22日 申請日期2004年8月18日 優(yōu)先權(quán)日2004年8月18日
發(fā)明者孔令東, 潘穎, 鐘海波 申請人:南京大學(xué)