專利名稱：一種白細(xì)胞減少癥治療藥物及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種白細(xì)胞減少癥治療藥物及其制備方法，是以細(xì)菌多糖為原料制成的，屬于外用給藥制劑。
背景技術(shù)：
目前，全世界腫瘤、癌癥、血液系統(tǒng)疾病患者發(fā)病率逐年上升，在其治療過程中必須應(yīng)用放射、化學(xué)療法，抑制骨髓造血系統(tǒng)，損傷骨髓造血細(xì)胞，引起各種血細(xì)胞減少，導(dǎo)致造血功能障礙。其主要原因是放射、化學(xué)療法對(duì)骨髓細(xì)胞的毒性作用。多數(shù)抗癌藥對(duì)腫瘤細(xì)胞殺傷的選擇性差，放療、化療時(shí)間長、劑量大，對(duì)骨髓細(xì)胞的毒性作用強(qiáng)，而引起造血功能障礙，使粒系、紅系、巨系、淋系等血細(xì)胞減少(其中粒系減少量最為嚴(yán)重)。所以使用一些生血藥物和生物工程類-細(xì)胞因子(例rhGM-CSF基因重組巨噬細(xì)胞粒細(xì)胞集落刺激因子、EPO促紅細(xì)胞生成素等)，此類注射劑的副作用使患者發(fā)熱，產(chǎn)生熱原反應(yīng)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是克服現(xiàn)有生物工程類藥物對(duì)白細(xì)胞減少癥產(chǎn)生發(fā)熱、熱原反應(yīng)等缺陷。提供一種通過滴鼻或噴霧等外用給藥，無毒副作用，治療指數(shù)高的白細(xì)胞減少癥治療藥物。
本發(fā)明的另一目的是提供白細(xì)胞減少癥治療藥物的制備方法。
為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明的技術(shù)方案是該白細(xì)胞減少癥治療藥物是由下述重量配比的原料制成細(xì)菌多糖 0.05--0.4份低分子量右旋糖酐 8--12份甘氨膽酸鈉 3--7份 無菌水 300--700份；制備本發(fā)明藥物的配方優(yōu)選重量配比范圍是細(xì)菌多糖 0.1--0.2份 低分子量右旋糖酐 6--10份甘氨膽酸鈉 4--6份無菌水 400--600份；制備本發(fā)明藥物的配方最佳配比是細(xì)菌多糖0.1份、低分子量右旋糖酐10份、甘氨膽酸鈉5份、無菌水500份；所述的藥物制劑是滴鼻劑或噴霧劑。
一種白細(xì)胞減少癥治療藥物的制備方法，依次按下列步驟(1)制備細(xì)菌多糖①粘質(zhì)賽氏桿菌菌種接種于普通肉湯培養(yǎng)基中，溫度控制在28--30℃，24--30小時(shí)；②挑選單菌落于普通瓊脂培養(yǎng)基中培養(yǎng)，溫度為28--30℃，24--30小時(shí)；③接種于搖瓶培養(yǎng)液中，置于恒溫震蕩培養(yǎng)箱內(nèi)，振蕩次數(shù)80--130次/分鐘，20--25小時(shí)；④搖瓶培養(yǎng)液接種于發(fā)酵罐培養(yǎng)液中，溫度為28--30℃，40--48小時(shí)；⑤發(fā)酵液離心，濕菌體加入其5--8倍4℃丙酮，制成丙酮干粉；⑥丙酮干粉加入溶菌酶水溶液，溫度30--38℃，30分鐘；⑦離心，上清液加入固體0.2M三氯醋酸；⑧三氯醋酸提取液加入其10倍量的濃度為95％乙醇，產(chǎn)生沉淀物為細(xì)菌多糖，去離子水透析后，冷凍干燥；(2)制取細(xì)菌多糖藥劑①取細(xì)菌多糖凍干粉0.05--0.4重量份，低分子量右旋糖酐8--12重量份，于配液瓶內(nèi)，加入無菌水300--700重量份，攪拌使其溶解，除菌，分裝瓶，冷凍干燥；②促進(jìn)劑甘氨膽酸鈉3--7重量份于配液瓶內(nèi)，加入無菌水300--700重量份，攪拌使其溶解，調(diào)節(jié)pH至6.7--7.2之間，除菌，分裝開滴管中，密封；所述搖瓶培養(yǎng)液及發(fā)酵罐培養(yǎng)液的組成為蛋白凍5g/L、酵母膏3g/L、牛肉膏15g/L、氯化鈉3.5g/L、葡萄糖1g/L、磷酸氫二鉀3.68g/L、磷酸二氫鉀1.32g/L，pH7.0--7.2。
本發(fā)明白細(xì)胞減少癥治療藥物是采用滴鼻劑或噴霧劑，是外用給藥，無毒副作用，不僅能排除放射、化學(xué)療法導(dǎo)致骨髓細(xì)胞造血功能障礙，還能刺激巨噬細(xì)胞產(chǎn)生細(xì)胞因子(TNF、IL-1、IL-6、IL-8、IFNγ)使骨髓造血細(xì)胞分化，迅速恢復(fù)造血功能，促進(jìn)白細(xì)胞再生，綜合提高人體免疫力。
本發(fā)明選擇菌種活性高，治療指數(shù)高，無毒副作用，而且是鼻腔給藥，通過臨床觀察和動(dòng)物模型實(shí)驗(yàn)，治療腫瘤患者因放射、化學(xué)療法損傷骨髓造血系統(tǒng)，引起的白細(xì)胞減少癥，療效確切，給藥24小時(shí)后，白細(xì)胞數(shù)可升高0.5--1.0倍。
本發(fā)明具有以下優(yōu)點(diǎn)1、使用劑量低，生物活性高。隔日給藥一次，每次100μg；2、通過鼻粘膜吸收給藥，達(dá)到全身性用藥目的。使其給藥途徑簡單、方便、療程短、見效快、無毒副作用；3、治療腫瘤患者因放射、化學(xué)療法損傷骨髓造血干細(xì)胞引起的白細(xì)胞減少癥及造血功能障礙，療效確切，給藥24小時(shí)后，白細(xì)胞數(shù)即或升高0.5--1.0倍。
本發(fā)明藥物臨床觀察結(jié)果如下細(xì)菌多糖滴鼻劑組患者的白細(xì)胞數(shù)與基因重組巨噬細(xì)胞粒細(xì)胞集落刺激因子(rhGM-CSF)皮下注射組比較p＞0.05，無顯著性差別，細(xì)菌多糖滴鼻劑組白細(xì)胞數(shù)升高原水平30％以上的78例，白細(xì)胞數(shù)升高原水平30％以下的6例，白細(xì)胞數(shù)維持原水平的10例，白細(xì)胞數(shù)升高原水平50％以上的62例，顯效率為65.6％。見表1。
本發(fā)明藥物動(dòng)物實(shí)驗(yàn)如下1、該藥物滴鼻劑治療家兔白細(xì)胞減少癥的實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果說明該藥物滴鼻劑使白細(xì)胞升高倍數(shù)與劑量呈量效關(guān)系，結(jié)果見表2。
2、該藥物滴鼻劑恢復(fù)小鼠造血功能的作用證明該藥物滴鼻劑可恢復(fù)小鼠造血功能，中、高劑量組外周血白細(xì)胞數(shù)、骨髓中粒細(xì)胞％、粒系紅系比值、淋巴細(xì)胞％及骨髓有核細(xì)胞計(jì)數(shù)接近正常對(duì)照組。環(huán)磷酰胺模型組中外周血中白細(xì)胞數(shù)明顯減少，骨髓細(xì)胞中粒細(xì)胞％、紅細(xì)胞％、粒系∶紅系比值、淋巴％及骨髓有核細(xì)胞計(jì)數(shù)均明顯低于正常對(duì)照組，結(jié)果見表3。
表1細(xì)菌多糖滴鼻劑白細(xì)胞減少癥治療的臨床觀察結(jié)果 白細(xì)胞數(shù)(WBC×109x±s)給藥前(h)給藥后(h)n 24 2448 72對(duì)照組rhGM-CSF 100μg/d96 3.72±0.45 4.71±0.756.36±1.56 5.82±0.84滴鼻劑組 100μg/d 94 3.66±0.39 4.35±0.806.04±1.44 5.25±0.93細(xì)菌多糖滴鼻劑組與rhGM-CSF皮下注射組比較，p＞0.05治療白細(xì)胞減少癥的臨床效果無差別表2細(xì)菌多糖滴鼻劑治療家兔白細(xì)胞家減少癥的實(shí)驗(yàn)研究(白細(xì)胞數(shù)×109/L x±s)n＝7組別 給藥劑量 給藥次數(shù)/Kg 原水平造型后給藥1給藥2給藥3 給藥4 給藥5對(duì)照組 生理鹽水 8.12 8.05 8.15 8.19 8.03 8.09 8.11模型組 CY150mg 7.42 4.35 4.37 4.41 4.44 4.47 4.51對(duì)照藥組 rhGM-CSF3μg6.85 4.22 4.31 5.26 6.37(0.5) 6.71 *7.02(0.6)滴鼻劑 25μg 7.13 4.51 4.75 4.97 5.09(0.1) 5.23 *5.56(0.2)滴鼻劑 *50μg6.75 4.18 5.12 5.88 6.42(0.5) 6.75 *7.38(0.7)滴鼻劑 *100μg 7.02 4.49 5.73 7.41 9.15(1.0) 9.49 *9.94(1.2)*滴鼻劑中、高劑量組外周血白細(xì)胞數(shù)與對(duì)照組比較P＞0.05說明滴鼻劑可治療環(huán)磷酰胺引起的白細(xì)胞減少癥。環(huán)磷酰胺模型組外周血中白細(xì)胞數(shù)明顯減少，與正常對(duì)照組比較P＜0.05。( )內(nèi)為白細(xì)胞數(shù)升高的倍數(shù)。
表3細(xì)菌多糖滴鼻劑恢復(fù)小鼠造血功能的作用(x±s n＝10)給藥劑量白細(xì)胞數(shù) 骨髓細(xì)胞/Kg ×109/L粒細(xì)胞％紅細(xì)胞％粒系∶紅系淋巴％骨髓有核細(xì)胞計(jì)數(shù)×109/L對(duì)照組生理鹽水7.1±1.4580±13 29±5 2.75∶1 29±9 31.0±12.0□□組cy 150mg 1.9±0.1348±9 0 0.48∶0 8±5 0.3±0.1對(duì)照藥組 rhGM-CSF3ug 7.3±0.9064±10 2±13.2∶110±3 23.0±9.0□□組治療組細(xì)菌多糖 25μg 3.8±1.1053±8 0.9±0.40.58∶1 9±5 10.0±4.0*50μg 7.8±1.50*76±15*19±9 *4.0∶1 19±9 20.0±7.0*100μg 9.4±2.10*82±18*28±11 *2.9∶1 28±7 32.0±10.0*細(xì)菌多糖滴鼻劑中、高劑量組外周血白細(xì)胞數(shù)、骨髓中粒細(xì)胞％、粒系∶紅系比值、淋巴細(xì)胞％及骨髓有核細(xì)胞計(jì)數(shù)與對(duì)照組比較P＞0.05，無差別顯著性。
使用方法臨用前，開啟細(xì)菌多糖凍干粉一瓶，促進(jìn)劑滴管一支，將促進(jìn)劑溶液滴入細(xì)菌多糖凍干粉內(nèi)，使其溶解，滴入鼻腔，成人每次4--5滴，每日一次，隔日給藥。5次為一療程。規(guī)格每瓶0.6mg。


圖1是本發(fā)明制備方法的工藝流程圖。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例一，白細(xì)胞減少癥治療藥物—細(xì)菌多糖滴鼻劑是由下列組份原料制成(用量為重量份)細(xì)菌多糖0.1份、低分子量右旋糖酐10份、甘氨膽酸鈉5份、無菌水500份，其中低分子量右旋糖酐可由10份的甘露醇等量代替。
具體操作方法依次按下列步驟(1)制備細(xì)菌多糖①粘質(zhì)賽氏菌菌種接種于普通肉湯培養(yǎng)基中，28--30℃，24--30小時(shí)；②挑選單菌落細(xì)菌于普通瓊培養(yǎng)基中培養(yǎng)，28--30℃，24--30小時(shí)；③接種于搖瓶培養(yǎng)液中，置于恒溫震蕩培養(yǎng)箱內(nèi)，振蕩次數(shù)80--130次/分鐘，培養(yǎng)20--25小時(shí)；④搖瓶培養(yǎng)液接種于發(fā)酵灌培養(yǎng)液中，28--30℃，發(fā)酵40--48小時(shí)；⑤發(fā)酵液離心，濕菌體加入其5--8倍4℃丙酮制成丙酮干粉；⑥丙酮干粉加入溶菌酶水溶液，30--35℃，30分鐘；⑦離心，上清液加入固體0.2M三氯醋酸；⑧三氯醋酸提取液加入10倍量，濃度為95％乙醇，產(chǎn)生沉淀物為細(xì)菌多糖，去離子水透析后，冷凍干燥。
(2)制備細(xì)菌多糖滴鼻劑①取細(xì)菌多糖凍干粉300mg，低分子量右旋糖酐30g，于配液瓶內(nèi)，加入無菌水600ml，攪拌使其溶解，除菌，分裝1000瓶，冷凍干燥；②促進(jìn)劑甘氨膽酸鈉15g于配液瓶內(nèi)，加入無菌水1500ml攪拌使其溶解，調(diào)節(jié)pH6.7--7.2之間，除菌，分裝1000支滴管中，密封。
實(shí)施例二，細(xì)菌多糖噴霧劑是由下列組份原料制成(用量為重量份)細(xì)菌多糖0.2份、低分子量右旋糖酐20份、甘氨膽酸鈉10份、無菌水1000份。其制備方法與實(shí)施例一相同，只是分裝于噴霧瓶中。
權(quán)利要求
1.一種白細(xì)胞減少癥治療藥物，該藥物是由下述重量配比的原料制成細(xì)菌多糖0.05-0.4份 低分子量右旋糖酐8-12份甘氨膽酸鈉3-7份 無菌水300-700份。
2.據(jù)權(quán)利要求1所述的白細(xì)胞減少癥治療藥物，其特征在于各原料的重量配比是細(xì)菌多糖0.1--0.2份 低分子量右旋糖酐6-10份甘氨膽酸鈉4--6份 無菌水400-600份。
3.據(jù)權(quán)利要求1所述的白細(xì)胞減少癥治療藥物，其特征在于各原料的重量配比是細(xì)菌多糖0.1份、低分子量右旋糖酐10份、甘氨膽酸鈉5份、無菌水500份。
4.據(jù)權(quán)利要求1、2或3所述的白細(xì)胞減少癥治療藥物，其特征在于所述的藥物制劑是滴鼻劑。
5.據(jù)權(quán)利要求1、2或3所述的白細(xì)胞減少癥治療藥物，其特征在于所述的藥物制劑是噴霧劑。
6.據(jù)權(quán)利要求1、2或3所述的白細(xì)胞減少癥治療藥物，其特征在于所述低分子量右旋糖酐用甘露醇等量代替。
7.一種白細(xì)胞減少癥治療藥物的制備方法，依次按下列步驟(1)制備細(xì)菌多糖①粘質(zhì)賽氏桿菌菌種接種于普通肉湯培養(yǎng)基中，溫度控制在28-30℃24-30小時(shí)；②挑選單菌落于普通瓊脂培養(yǎng)基中培養(yǎng)，溫度為28-30℃，24-30小時(shí)；③接種于搖瓶培養(yǎng)液中，置于恒溫震蕩培養(yǎng)箱內(nèi)，振蕩次數(shù)為80--130次/分鐘，20--25小時(shí)；④搖瓶培養(yǎng)液接種于發(fā)酵罐培養(yǎng)液中，溫度為28-30℃，40--48小時(shí)；⑤發(fā)酵液離心，濕菌體加入其5-8倍量4℃丙酮，制成丙酮干粉；⑥丙酮干粉加入溶菌酶水溶液，溫度30--38℃，30分鐘；⑦離心，上清液加入固體0.2M三氯醋酸；⑧三氯醋酸提取液加入其10倍量的濃度為95％乙醇，產(chǎn)生沉淀物為細(xì)菌多糖，去離子水透析后，冷凍干燥；(2)制取細(xì)菌多糖藥劑①取細(xì)菌多糖凍于粉0.05--0.4重量份，低分子量右旋糖酐8--12重量份，于配液瓶內(nèi)，加入無菌水300-700重量份，攪拌使其溶解，除菌，分裝瓶，冷凍干燥；②促進(jìn)劑甘氨膽酸鈉3-7重量份于配液瓶內(nèi)，加入無菌水300--700重量份，攪拌使其溶解，調(diào)節(jié)pH至6.7-7.2之間，除菌，分裝開滴管中，密封。
8.據(jù)權(quán)利要求7所述的白細(xì)胞減少癥治療藥物的制備方法，其特征在于所述搖瓶培養(yǎng)液的組成為蛋白凍5g/L、酵母膏3g/L、牛肉膏15g/L、氯化鈉3.5g/L、葡萄糖1g/L、磷酸氫二鉀3.68g/L、磷酸二氫鉀1.32g/L，pH7.0--7.2。
9.據(jù)權(quán)利要求7所述的白細(xì)胞減少癥治療藥物的制備方法，其特征在于所述發(fā)酵罐培養(yǎng)液的組成為蛋白凍5g/L、酵母膏3g/L、牛肉膏15g/L、氯化鈉3.5g/L、葡萄糖1g/L、磷酸氫二鉀3.68g/L、磷酸二氫鉀1.32g/L，pH7.0--7.2。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種白細(xì)胞減少癥治療藥物及其制備方法，是以細(xì)菌多糖為原料制成的，屬于外用給藥制劑。由兩部分組成(1)細(xì)菌多糖凍干粉菌粉經(jīng)酶解、提取、冷凍干燥得細(xì)菌多糖。此制備方法保持較高的生物活性；(2)促進(jìn)劑由甘氨膽鈉、無菌水組成。臨床用(1)、(2)合并。本發(fā)明是治療腫瘤患者因放射、化學(xué)療法引起的白細(xì)胞減少癥的外用藥，可增加機(jī)體的免疫功能，具有成本低、劑量小、活性高、使用方便的特點(diǎn)。
文檔編號(hào)A61K31/721GK1562070SQ200410026969
公開日2005年1月12日 申請(qǐng)日期2004年4月21日 優(yōu)先權(quán)日2004年4月21日
發(fā)明者李延平, 劉義 申請(qǐng)人:廣東醫(yī)學(xué)院