專利名稱：皂苷類化合物治療心血管疾病的新用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及甾體皂苷類化合物Methylprotodioscin(MPD)與Pseudoprotodioscin(PPD)以單體形式或者以不同比例組成的混合物在防治心肌梗塞等心血管疾病中的應(yīng)用。本發(fā)明以薯蕷屬植物為原料，通過多種分離方法，純化精制得到單體化合物MPD和PPD。將二者分別以單體形式或者以不同比例組成的混合物形式，對大鼠以及犬進行抗急性心肌梗塞的藥理實驗。結(jié)果表明，MPD、PPD，以及兩者按不同比例組成的混合物，均可有效地減少心肌梗塞范圍，提示具有明顯的治療冠心病的作用和良好的研究開發(fā)前景。
背景技術(shù)：
及文獻地奧心血康有擴張冠脈血管，改善大鼠心肌缺血作用，用于治療冠心病，是現(xiàn)在市售最好的防治心腦血管疾病中藥制劑之一。文獻報道其中主要含有甾體皂苷類化學(xué)成分[1]，中國藥典2000年版規(guī)定采用薄層層析(TLC)與原料藥材穿山龍或者黃山藥對照進行鑒別，含量測定則采取酸水解法將總皂苷水解后用重量法測定總皂苷元的重量[2]。有關(guān)單一呋甾皂苷類化合物以及兩個單體呋甾皂苷類化合物以不同比例組成的混合物是否對心肌梗塞有緩解作用未見文獻報道，也未見發(fā)表有關(guān)專利。我們以薯蕷屬多種植物為原料，通過多種分離方法，純化精制得到Methylprotodioscin(MPD)、Pseudoprotodioscin(PPD)以及其他多種具有上列結(jié)構(gòu)通式(I)或(II)的呋甾皂苷類化合物純品[3-9]，并用合成方法合成了其中的MPD[10]。隨后通過薄層層析(TLC)和高效液相色譜(HPLC)對照，確認在地奧心血康中也存在MPD及PPD等呋甾皂苷類化學(xué)成分?？紤]到地奧心血康的臨床應(yīng)用特點，我們決定將上述單一呋甾甾體皂苷類化合物MPD、PPD及兩者不同比例的混合物，與地奧心血康對照，采用大鼠及犬心肌梗塞動物模型進行試驗，探討并比較它們的作用，發(fā)現(xiàn)MPD、PPD以及兩者以不同比例組成的呋甾皂苷類混合物對因人工結(jié)扎造成的大鼠及犬心肌梗塞模型均有明顯的緩解效果，與地奧心血康相比沒有統(tǒng)計學(xué)差異。
參考文獻[1]李伯剛，周正質(zhì).新藥與臨床.1994.3(13)2 中華人民共和國藥典(2000版，一部)[3]胡柯，三種抗癌中草藥的活性成分研究(沈陽藥科大學(xué)博士論文，1998)[4]沈平，圓果三角葉薯蕷和彎蕊開口箭活性成分的研究(沈陽藥科大學(xué)博士論文，2002)[5]劉宏偉，海綿、福州薯蕷和齒葉黃杞的化學(xué)成分及抗癌活性研究(沈陽藥科大學(xué)博士論文，2002)[6]Hu，k.，Dong，A.J.，Yao，X.S.，Et al.，Antineoplastic Angents II.Four FurostanolGlycosides from Rhizomes of Dioscorea collettii var.hypoglauca，Planta Med.，1997，63，161-165[7]Hu，k.，Dong，A.J.，Yao，X.S.，Et al.，A Furostanol Glycoside from Dioscorea collettiivar.hypolauca，Phytochemistry，1997，44(7)，1339-1342[8]Hu，k.，Yao，X.S.，Methyl protogracillin(NSC-698792)the spectrum of cytotoxictyagainst 60 human cancer cell lines in the National Cancer Institute’s anticancer drugscreen panel，Anti-Cancer Drugs，2001，12(6)，541-547[9]Liu，H.W.，Kobayshi，H，Qu，G.X.，Yao，X.S.A new furostanol saponin from Dioscoreafutshauensis.Chin.Chem.Lett.，2002，13(3)，241-244. Maosheng Cheng，Qianli Wang，Quan Tian，Hongyan Song，Yongxiang Liu，Qiang Li，Xin Xu，Hongdong Miao，Xinsheng Yao，and Zhen Yang.Total Synthesis of Methyl ProtodioscinAPotent Agent with Anti-tumor Activity.J.Org.Chem.

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明申請通式為(I)或(II)的甾體皂苷類化合物在防治心肌梗塞等心血管疾病中的新用途。
R1＝β-D-葡萄糖
R2＝直鏈糖鏈或支鏈糖鏈，其糖鏈組成糖的類型包括β-D-葡萄糖、α-D-葡萄糖、α-L-鼠李糖、β-D-半乳糖、α-D-半乳糖、β-D-甘露糖、α-D-甘露糖、β-D-阿拉伯糖、α-D-阿拉伯糖、β-D-木糖、α-D-木糖、β-D-核糖、α-D-核糖、β-D-來蘇糖、α-D-來蘇糖、α-D-夫糖以及上述各個六碳醛糖相對應(yīng)的6-去氧糖及2，6-二去氧糖。
R3＝H，CH3通式為(I)的甾體皂苷類化合物Methylprotodioscin(MPD)在防治心肌梗塞等心血管疾病中的應(yīng)用，其結(jié)構(gòu)為通式(I)中R1＝β-D-glucose R3＝OCH3通式為(II)的甾體皂苷類化合物Pseudoprotodioscin(PPD)在在防治心肌梗塞等心血管疾病中的應(yīng)用，其結(jié)構(gòu)為通式(II)中，R1＝β-D-glucose


圖1為本發(fā)明MPD對大鼠心肌梗塞范圍的的影響圖2為本發(fā)明重復(fù)實驗MPD對大鼠心肌梗塞范圍的影響圖3為本發(fā)明MPD對犬心肌梗塞范圍的影響圖4為本發(fā)明各給藥組犬急性心肌缺血程度(N-ST)的比較(心外膜電圖標(biāo)測)圖5為本發(fā)明各給藥組犬急性心肌缺血范圍(∑-ST)的比較(心外膜電圖標(biāo)測)圖6為本發(fā)明給藥組犬冠脈流量變化比較圖7為本發(fā)明給藥組犬心肌耗氧量變化比較圖8為本發(fā)明MPD相關(guān)各組梗塞面積百分比
具體實施例方式
實施例1甾體皂苷類化合物Methyl Protodioscin(MPD)的提取分離取薯蕷屬植物穿龍薯蕷(Discorea nipponica) 的新鮮根莖70kg，用80％乙醇加熱回流提取，濃縮提取液，所得提取物混懸于水中，得到水溶解部分和水不溶解部分。將水溶解部分通過D101大孔吸附樹脂柱，先經(jīng)用水洗脫，然后分別用10％、50％及95％乙醇洗脫。50％乙醇洗脫液蒸發(fā)濃縮后，再經(jīng)硅膠柱層析(200-300目)，以氯仿-甲醇-水(8∶2.5∶0.01)至甲醇梯度洗脫，洗脫液減壓回收，合并餾分46~50所析出的結(jié)晶并進行重結(jié)晶得到化合物MPD(192.6g)。
實施例2甾體皂苷類化合物Pseudoprotodioscin(PPD)的提取分離取薯蕷屬植物福州薯蕷(Discorea futschauensis)的根莖3kg，用75％乙醇加熱回流提取，濃縮提取液，所得提取物混懸于3000ml水中，用等體積的水飽和正丁醇萃取兩次，萃取液蒸發(fā)濃縮后，再經(jīng)硅膠柱層析(200-300目)，以氯仿-甲醇-水(8∶2.∶0.1)至甲醇梯度洗脫，洗脫液減壓回收，合并餾分8~17，再通過ODS柱層析，以甲醇-水(1∶1；65∶35；80∶20)梯度洗脫，收集65％甲醇洗脫部分，經(jīng)Rp-18高效液相制備(70％甲醇)，收集40分鐘左右出現(xiàn)的色譜峰，減壓干燥得到化合物Pseudoprotodioscin(100mg)。
實施例1、2中甾體皂苷類化合物Methyl Protodioscin(MPD)和Pseudoprotodioscin(PPD)的理化常數(shù)化合物Methyl Protodioscin(MPD)白色粉末，mp230-233℃(dec)，[α]25D-88.7°(c0.80pyridine)。Liebermann-Burchard、Molish和Ehrlich反應(yīng)均呈陽性。酸水解檢出葡萄糖和鼠李糖。IRmax3400-3450(OH)，2950，1380，1040(glycosylC-O)。
FAB-MS1085(M+Na)+，1062(M+H)+，1031(M+H-CH3OH)+，869(M+H-CH3OH-Glc)+，723(M+H-CH3OH-Glc-Rha)+，577(M+H-CH3OH-Glc-Rha×2)+，415(M+H-CH3OH-Glc×2-Rha×2)+，397(M+H-CH3OH-H2O-Glc×2-Rha×2)+；1H-NMR(C5D5N)δ0.87(3H，s，CH3-18)，0.98(3H，d，CH3-27)，1.08(3H，s，CH3-19)，1.03(3H，d，CH3-21)，1.26(3H，d，J＝6.2Hz)，1.28(3H，d，J＝6.2Hz)。13C-NMR數(shù)據(jù)見表2.化合物Pseudoprotodioscin(PPD)白色粉末，mp174-176℃(dec)，[α]25D-64.1°(c0.003pyridine)。Liebermann-Burchard、Molish和Ehrlich反應(yīng)均呈陽性。酸水解檢出葡萄糖和鼠李糖。IRmax3420(OH)，2940(CH)，1645，1450，1375，1335，1225，1115，1070，1045，920，890。ESI-MS1053(M+Na)+，1029(M-H)-，883(M-H-146)-，737(M-H-146×2)-。1H-NMR(C5D5N)δ0.72(3H，s，CH3-18)，1.01(3H，d，J＝6.6Hz，CH3-27)，1.05(3H，s，CH3-19)，1.63(3H，s，CH3-21)，1.62(3H，d，J＝6.0Hz)，1.76(3H，d，J＝6.3Hz)，4.83(1H，d，J＝7.5Hz)，4.94(1H，d，J＝6.6Hz)，5.32(1H，brs，H-6)，5.85(1H，s)，6.39(1H，s)。13C-NMR數(shù)據(jù)見表1表1 Pseudoprotodiosc in(PPD)的13C-NMR數(shù)據(jù)(C5D5N)No.Aglycone moietyNo. Sugar moiety1 38.0 Glc(inner)2 30.7 1 100.83 78.5 2 79.04 39.5 3 77.55 141.3 4 79.16 122.3 5 78.37 32.9 6 62.88 32.0 Rha(1-2)9 50.8 1 102.510 37.6 2 73.011 21.8 3 73.312 40.1 4 74.613 43.9 5 70.014 55.4 6 19.115 35.0 Rha(1-4)16 85.0 1 103.417 65.0 2 73.018 14.6 3 73.319 19.9 4 74.420 104.1 5 70.921 12.3 6 19.022 152.9Glc(-26)23 34.0 1 105.424 24.2 2 75.725 32.0 3 79.126 75.5 4 72.227 17.9 5 78.56 63.4aRecorded on a Bruker-300(75MHz for13C)NMR spectrometer.
表2 MPD的13C-NMR數(shù)據(jù)(C5D5N)Aglycone moiety Sugar moietyPosition Position137.2 Glc(inner)230.2 1 100.3378.2 2 78.0439.0 3 78.25140.9 4 78.76121.9 5 77.0732.2 6 61.4831.7 Rha(1→2)950.4 1 102.110 37.6 2 72.611 21.1 3 72.812 40.5 4 74.213 40.8 5 69.614 56.6 6 18.615 32.4 Rha(1→4)16 81.4 1 103.017 64.2 2 72.618 16.3 3 72.919 19.5 4 74.020 40.8 5 70.521 16.3 6 18.722 112.7 26-O-Glc23 30.9 1 105.024 28.2 2 75.325 34.3 3 78.626 75.3 4 71.827 17.2 5 78.722-O-CH347.3 6 63.0aRecorded on a Bruker-500(125MHz for13C)NMR spectrometer.
實施例3甾體皂苷類化合物MPD對大鼠、犬急性心肌梗塞的影響摘要目的探討MPD注射劑對急性心肌梗塞的療效及作用機制。方法采用冠狀動脈結(jié)扎急性心肌梗塞模型，觀察MPD注射劑對大鼠和犬心肌梗塞范圍、冠脈流量和心肌耗氧量等指標(biāo)的影響。結(jié)果MPD注射劑可減小實驗大鼠和犬心肌梗塞范圍，改善心臟功能等作用。
結(jié)論MPD注射劑對心肌梗塞明顯的治療作用。
關(guān)健詞MPD心肌梗塞MPD屬皂苷類單體化合物，本實驗觀測MPD對于實驗性心肌梗塞的療效及機制。
1實驗材料1.1實驗動物Wistar大鼠，雄性，體重(200±20g)，由北京市通利實驗動物養(yǎng)殖廠提供[京物許字(2000)第010號]。
健康成年雜種犬6只，體重(15.05±0.80kg)，雌雄兼用，由北京市通利實驗動物養(yǎng)殖廠提供[京動許字(2000)第010號]。
1.2藥物與試劑MPD深圳中藥與天然藥物研究中心姚新生院士提供。
0.9％氯化鈉注射液北京雙鶴藥業(yè)股份有限公司提供，批號030208612。
地奧心血康成都地奧制藥集團有限公司提供，批號0208096。
鹽酸地爾硫片天津田邊制藥有限公司提供，批號0003003。
硝基四氮唑藍(N-BT)購自解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥材供應(yīng)站，批號971120。
1.3主要儀器多道生理記錄儀(RM-6000型，日本光電)；電動呼吸機(SC-3型，上海)；電磁流量計(MF-1100型，日本光電)；壓力換能器(MPU-0.5A)；載波放大器(AP-601G)；微分器(ED-601G)；血氧儀(AVL912型，瑞士)。多媒體彩色病理圖像分析系統(tǒng)，MPIAS-500型。
2實驗方法2.1心肌梗塞模型造模型方法3.5％水合氯醛按10ml/kg體重將大鼠麻醉，接呼吸機，備皮，打開胸腔，分開心包膜，暴露心臟，結(jié)扎冠狀動脈左前降支根部。
3％戊巴比妥鈉按1ml/kg將犬麻醉，開胸，暴露心臟，做心包床，放置心外膜電極，結(jié)扎冠狀動脈左前降支。股靜脈插管給藥，頸動脈插管、頸外靜脈插管至冠狀靜脈竇，分別取血測動靜脈血氧含量。
2.2分組2.2.1預(yù)實驗將20只大鼠隨機分為模型對照組(尾靜脈注射生理鹽水3ml/kg)和MPD組(40mg/kg)，每組10只。
2.2.2重復(fù)實驗將50只大鼠隨機分為模型對照組(尾靜脈給生理鹽水3ml/kg)，地奧心血康組(灌胃給藥40mg/kg)，MPD高劑量組(尾靜脈注射80mg/kg)、中劑量組(40mg/kg)、低劑量組(20mg/kg)5組，每組10只。造模成功后30分鐘給藥1次，24小時后處死動物，觀測結(jié)果。
2.2.3犬6只，隨機分模型對照組(股靜脈給藥生理鹽水1ml/1kg)，陽性藥對照組(鹽酸地爾硫注射液0.5mg/kg)，MPD組(股靜脈給20mg/kg)三組，每組2只。測藥前、給藥即刻和藥后5、15、30、60、120、180min，N-ST、∑-ST，冠狀靜脈竇及動脈血氧含量以及心梗范圍等數(shù)據(jù)。
2.3觀測指標(biāo)心外膜電圖N-ST和∑-ST的變化心肌梗塞范圍測定(N-BT染色法)動物處死后，立即取下心臟，生理鹽水沖冼，用濾紙吸去水分，在結(jié)扎線以下，從心尖起平行切成等厚4片，置于硝基四氮唑藍染液中，常溫避光2分鐘，用多媒體彩色病理圖像分析系統(tǒng)測量每個切片的面積、心肌梗塞面積(N-BT非染色區(qū))，計算心室肌總面積、心室肌梗塞總面積，計算心肌梗塞面積/心室面積(％)。
2.4統(tǒng)計學(xué)處理采用SPSS10.0進行統(tǒng)計處理，數(shù)據(jù)以X±SD表示。
3實驗結(jié)果3.1預(yù)實驗MPD對大鼠心肌梗塞范圍的影響如表1、圖1示模型對照組心肌梗塞范圍達心室的41.20±12.25(％)，表明造模成功；MPD組心肌梗塞范圍達心室的33.4±8.09(％)，與模型對照組比較有顯著性差異。
表1預(yù)實驗對大鼠心肌梗塞范圍的影響(X±SD)心肌梗塞面積/心室面積分組 例數(shù) 劑量(/kg)(％)模型對照組10 3ml 41.20±12.25MPD組 10 40mg33.40±8.09**注與模型對照組比較**P＜0.013.2重復(fù)實驗MPD對大鼠心肌梗塞范圍的影響如表2、圖2所示模型對照組心肌梗塞范圍達心室的40.99±6.64(％)，表明造模成功；地奧心血康組心肌梗塞范圍為心室的27.24±10.24(％)MPD組心肌梗塞范圍減小，與模型對照組相比，高劑量組(30.62±9.46％)有極顯著性差異，中劑量組(32.32±6.92％)有顯著性差異，低劑量組(37.89±8.41％)有減小趨勢，但無統(tǒng)計學(xué)意義。
表2重復(fù)實驗對大鼠心肌梗塞范圍的影響(X±SD)分 組 例數(shù)劑量(/kg)心肌梗塞面積/心室面積(％)模型對照組 10 3ml 40.99±6.64地奧心血康組 10 40mg 27.24±10.24**MPD高劑量組10 80mg 30.62±9.46**MPD中劑量組10 40mg 32.32±6.92*MPD低劑量組10 20mg 37.89±8.41注與模型對照組比較 *P＜0.05 **P＜0.013.3 MPD對犬心肌梗塞范圍的影響如表3、圖3所示模型對照組心肌梗塞范圍梗塞區(qū)/心臟為6.45±1.03(％)、梗塞區(qū)/心室16.21±1.00(％)，MPD組心肌梗塞范圍梗塞區(qū)/心臟2.74±0.33(％)、梗塞區(qū)/心室7.30±0.97(％)，兩組比較有顯著差異。鹽酸地爾硫組較模型對照組亦有明顯差異。
表3對犬心肌梗塞范圍的影響(X±SD)分組 例數(shù)劑量(/kg)梗塞區(qū)/心臟(％)梗塞區(qū)/心室(％)模型對照組 2 1ml 6.45±1.03 16.21±1.00鹽酸地爾硫組 2 0.5mg1.81±0.79** 4.36±1.15**MPD組2 20mg 2.74±0.33** 7.30±0.97**注與模型對照組比較 **P＜0.01
3.4 MPD對犬心外膜電圖的影響如圖4、5示MPD組對N-ST的影響與對照組比較未見明顯變化。但兩治療組∑-ST均有減少，與對照組比較有顯著性差異。
3.5 MPD對犬冠脈流量及心肌耗氧量的影響如圖6、7示MPD組對冠脈流量及心肌耗氧量未見明顯影響，與對照組比較無明顯差異。
4討論地奧心血康有擴張冠脈血管，改善心肌缺血的作用，常用于治療冠心病，為本實驗的陽性對照藥。MPD屬皂苷類化合物，兩次實驗的結(jié)果表明MPD對冠狀動脈結(jié)扎大鼠心肌梗塞有改善作用，MPD高劑量組心梗范圍減小，較模型對照組有極顯著性差異，中劑量組有顯著性差異，低劑量組則有下降趨勢。高、中、低劑量組對于心肌梗塞范圍的影響有量效趨勢。實驗還表明地奧心血康組對大鼠心肌梗塞亦有改善作用，兩藥比較未見顯著性差異。犬心肌梗塞實驗也表明MPD靜脈給藥有明確治療心肌梗塞作用。
實施例4甾體皂苷類化合物PPD對大鼠急性心肌梗塞的影響目的研究PPD對急性心肌梗塞的治療作用。方法采用結(jié)扎冠脈造成急性心肌梗塞模型，觀察PPD對大鼠心肌梗塞范圍的影響。結(jié)果PPD、MPD對心肌梗塞范圍有明顯的影響。結(jié)論MPD、PPD可減小實驗大鼠心肌梗塞范圍(P＜0.05)，MPD略優(yōu)于PPD。
1實驗材料1.1實驗動物Wistar大鼠，雄性，體重(170±20g)，由北京市通利實驗動物養(yǎng)殖廠提供[京物許字(2000)第010號]。
1.2藥物與試劑MPD、PPD深圳中藥與天然藥物研究中心姚新生院士提供。
0.9％氯化鈉注射液北京雙鶴藥業(yè)股份有限公司提供，批號030208612。
硝基四氮唑藍(N-BT)購自解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥材供應(yīng)站，批號971120。
1.3主要儀器電動呼吸機(SC-3型，上海)；多媒體彩色病理圖像分析系統(tǒng)，MPIAS-500型。
2實驗方法2.1心肌梗塞模型造模型方法3.5％水合氯醛按10ml/kg體重將大鼠麻醉，接呼吸機，備皮，打開胸腔，分開心包膜，暴露心臟，結(jié)扎冠狀動脈左前降支根部。
2.2分組2.2.1實驗一將12只大鼠隨機分為模型對照組(灌服生理鹽水5ml/kg)和PPD組(灌胃給藥40mg/5ml/kg)。結(jié)扎后給藥1次，24小時后處死動物，觀測結(jié)果。
2.2.2實驗二(重復(fù)實驗)將24只大鼠隨機分為模型對照組(灌服生理鹽水5ml/kg)、MPD、PPD組(灌胃給藥40mg/5ml/kg)。結(jié)扎后給藥1次，24小時后處死動物，觀測結(jié)果。
2.3觀測指標(biāo)心肌梗塞范圍測定(N-BT染色法)動物處死后，立即取下心臟，生理鹽水沖冼，用濾紙吸去水分，在結(jié)扎線以下，從心尖起平行切成等厚5片，置于硝基四氮唑藍染液中，常溫避光2分鐘，用多媒體彩色病理圖像分析系統(tǒng)測量每個切片的面積、心肌梗塞面積(N-BT非染色區(qū))，計算心室肌總面積、心室肌梗塞總面積，計算心肌梗塞面積/心臟總面積(％)。
2.4統(tǒng)計學(xué)處理采用SPSS10.0進行統(tǒng)計處理，數(shù)據(jù)以X±SD表示。
3實驗結(jié)果3.1實驗一PPD對大鼠心肌梗塞范圍的影響如表1所示模型對照組心肌梗塞范圍達心室的42.48±3.88(％)，表明造模成功，PPD組心肌梗塞范圍為心室的36.25±7.20(％)，二者與模型對照組相比，有顯著性差異(P＜0.05)。
表1 MPD、SPR和PPD對大鼠心肌梗塞范圍的影響(X±SD)分組 例數(shù)劑量(/kg)心肌梗塞面積/心室面積(％)模型對照組6 5ml 42.48±3.88PPD組 6 40mg 36.25±7.20*注與模型對照組比較*P＜0.053.1實驗二MPD、PPD對大鼠心肌梗塞范圍的影響(重復(fù)實驗)如表2所示，重復(fù)實驗中可以看出，MPD、PPD皆可明顯減少心肌梗塞范圍，其中以MPD有更明顯的減少心肌梗塞面積作用，術(shù)中死亡率更低。
表2 MPD、PPD對大鼠心肌梗塞范圍的影響(X±SD)分組 例數(shù)劑量(/kg)梗塞面積/全心面積(％)術(shù)中死亡率模型對照組9 5ml 41.06±4.98 55.6％(5/9)MPD組 8 40mg 33.71±6.73** 0％(0/8)PPD組 7 40mg 36.31±1.90* 14.3％(1/7)注與模型對照組比較*P＜0.05 **P＜0.014結(jié)論實驗一結(jié)果表明PPD對大鼠心肌梗塞有改善作用，較模型對照組有顯著性差異。為進一步驗證實驗結(jié)果，進行了實驗二，并增加了MPD組。結(jié)果表明MPD和PPD灌胃給藥皆可使心肌梗塞范圍減小，較模型對照組有顯著性差異；MPD略優(yōu)于PPD。
實施例5甾體皂苷類化合物MPD、PPD不同比例組成的混合物對大鼠急性心肌梗塞的影響目的研究MPD與PPD合用對急性心肌梗塞的協(xié)同治療作用。方法采用結(jié)扎冠脈造成急性心肌梗塞模型，觀察MPD、PPD按一定配比合用后對大鼠心肌梗塞范圍的影響。結(jié)果MPD、PPD合用較單用對心肌梗塞有更好的作用。結(jié)論MPD、PPD合用有協(xié)同作用。
1實驗材料1.1實驗動物Wistar大鼠，雄性，體重(170±20g)，由北京市通利實驗動物養(yǎng)殖廠提供[京物許字(2000)第010號]。
1.2藥物與試劑MPD、PPD深圳中藥與天然藥物研究中心姚新生院士提供，MPD+PPD合用兩者的比例為1∶10.9％氯化鈉注射液北京雙鶴藥業(yè)股份有限公司提供，批號030208612。
硝基四氮唑藍(N-BT)購自解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥材供應(yīng)站，批號971120。
1.3主要儀器電動呼吸機(SC-3型，上海)，多媒體彩色病理圖像分析系統(tǒng)，MPIAS-500型。
2實驗方法2.1心肌梗塞模型造模型方法3.5％水合氯醛按10ml/kg體重將大鼠麻醉，接呼吸機，備皮，打開胸腔，分開心包膜，暴露心臟，結(jié)扎冠狀動脈左前降支根部。
2.2分組將33只大鼠隨機分為模型對照組(灌服生理鹽水5ml/kg)和MPD、PPD組和MPD+PPD組(灌胃給藥40mg/5ml/kg)。結(jié)扎后給藥1次，24小時后處死動物，觀測結(jié)果。
2.3觀測指標(biāo)心肌梗塞范圍測定(N-BT染色法)動物處死后，立即取下心臟，生理鹽水沖冼，用濾紙吸去水分，在結(jié)扎線以下，從心尖起平行切成等厚5片，置于硝基四氮唑藍染液中，常溫避光2分鐘，用多媒體彩色病理圖像分析系統(tǒng)測量每個切片的面積、心肌梗塞面積(N-BT非染色區(qū))，計算心室肌總面積、心室肌梗塞總面積，計算心肌梗塞面積/心臟總面積(％)。
2.4統(tǒng)計學(xué)處理采用SPSS10.0進行統(tǒng)計處理，數(shù)據(jù)以X±SD表示。
3實驗結(jié)果如表1、圖1所示模型對照組心肌梗塞范圍達心室的41.06±1.66(％)，表明造模成功；MPD組心肌梗塞范圍為心室的36.24±3.74(％)，PPD組心肌梗塞范圍為心室的36.31±1.90(％)，二者與模型對照組相比，有顯著性差異(P＜0.05)，其中又以MPD+PPD為最好。
表1 PPD、MPD合用對大鼠心肌梗塞范圍的影響(X±S)組別 動物數(shù)劑量(/kg)梗塞面積(％)模型對照組9 5ml 41.06±4.98MPD組 8 40mg 36.24±3.74*PPD組 7 40mg 36.31±1.90*MPD+PPD 9 40mg 32.74±4.90*注與模型對照組比較*P＜0.054結(jié)論MPD、PPD單用及合用皆有明顯的治療實驗性大鼠心肌梗塞的作用，兩者按一定比例合用后可產(chǎn)生協(xié)同作用，在同等劑量下能達到更好的治療作用。
權(quán)利要求
皂苷類化合物治療心血管疾病的新用途1利用多種分離手段從中藥、天然藥物中提取分離，或者通過合成及半合成手段獲得具有通式(I)或(II)的甾體皂苷類化合物，以單體化合物或者不同比例混合組成的復(fù)方在防治心肌梗塞等心血管疾病中的應(yīng)用。具有下列通式(I)或(II)甾體皂苷類化合物結(jié)構(gòu) 通式(I)或(II)中R1＝β-D-葡萄糖R2＝直鏈糖鏈或支鏈糖鏈，其糖鏈組成糖的類型包括β-D-葡萄糖、α-D-葡萄糖、α-L-鼠李糖、β-D-半乳糖、α-D-半乳糖、β-D-甘露糖、α-D-甘露糖、β-D-阿拉伯糖、α-D-阿拉伯糖、β-D-木糖、α-D-木糖、β-D-核糖、α-D-核糖、β-D-來蘇糖、α-D-來蘇糖、α-D-夫糖以及上述各個六碳醛糖相對應(yīng)的6-去氧糖及2，6-二去氧糖。R3＝H或CH31-1、一種如權(quán)利要求1所述通式為(I)的甾體皂苷類化合物Methylprotodioscin(MPD)在防治心肌梗塞等心血管疾病中的應(yīng)用，其結(jié)構(gòu)為通式(I)中，R1＝β-D-glucose R3＝CH31-2、一種如權(quán)利要求1所述的通式為(II)的甾體皂苷類化合物Pseudoprotodioscin(PPD)在防治心肌梗塞等心血管疾病治療中的應(yīng)用，其結(jié)構(gòu)為通式(II)中，R1＝β-D-glucose
2如權(quán)利要求1所述通式為(I)、(II)的甾體皂苷類化合物在防治心肌梗塞等心血管疾病中的應(yīng)用，其特征是采用某個該類單體化合物或者該類化合物中不同單體按照不同比例組成的混合物制成的制劑，可用于防治心肌梗塞，冠心病，心絞痛，心率不齊，心肌缺血，高血壓，高血脂，血液粘稠等多種心血管疾病。
全文摘要
本發(fā)明涉及具有通式(I)，(II)的甾體皂苷類化合物在防治心肌梗塞等心血管疾病中的應(yīng)用。利用多種分離手段，從中藥及天然藥物中提取分離，或者通過合成以及半合成手段獲得具有通式(I)和(II)的甾體皂苷類化合物。采用單體化合物或者不同比例組成的混合物，按照常規(guī)方法制成口服或者非口服制劑，用于防治心肌梗塞，冠心病，心絞痛，心率不齊，心肌缺血，高血壓，高血脂，血液粘稠等多種心血管疾病。通式(I)通式(II)(如圖)通式(I)，(II)中R
文檔編號A61P9/00GK1562064SQ20041002655
公開日2005年1月12日 申請日期2004年3月22日 優(yōu)先權(quán)日2004年3月22日
發(fā)明者姚新生, 李連達, 王乃利, 張榮利, 陳海峰, 沈平, 曲戈霞 申請人:深圳中藥及天然藥物研究中心