專利名稱：一種治療前列腺增生癥的藥物及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種冶療前列腺增生癥的藥物及其制備方法，屬于中醫(yī)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
良性前列腺增生癥(BPH)是老年男性的常見病，發(fā)病率隨年齡增加而增高，國內(nèi)夏同禮等對321例尸檢結(jié)果顯示，前列腺增生發(fā)生率為，51～60歲20％，61～70歲50％，71～80歲57.1％，81歲以上為83.3％。BPH可引起患者排尿困難，淋漓不盡，尿頻尿急，夜尿曾多等，進一步發(fā)展可導(dǎo)致尿潴留，腎功能不全，嚴重尿路感染等并發(fā)癥，嚴重影響患者的生活質(zhì)量。其發(fā)病機理與治療一直是醫(yī)藥工作者的研究熱點，又是難點。其治療手段很多，但現(xiàn)有治療BPH的各種手段中，手術(shù)治療帶有一定的創(chuàng)傷性，并發(fā)癥多，且老年人對手術(shù)和麻醉的耐受性差；物理治療如微波、射頻、高能聚焦等遠期療效尚不肯定；在藥物治療方面，經(jīng)過檢索原部頒標(biāo)準(zhǔn)、國家新藥注冊數(shù)據(jù)(1985-2000年)光盤，對治療前列腺曾生用藥進行了分析，主要品種列表如下


國家藥品監(jiān)督管理局南方醫(yī)藥經(jīng)濟研究所通過對全國10個典型城市及地區(qū)(包括京、瀘、穗、西安、哈、長沙、武漢、長春、渝、佳木斯)共79家醫(yī)院、零售藥店(其中綜合醫(yī)院23家屬、中醫(yī)院20家、零售藥店36家)進行了前列腺增生用藥的市場調(diào)查。調(diào)查結(jié)果表明(1)按各品種的銷售當(dāng)量比率計算，市場占有率較高的品種主要有非那甾胺(23.49％)、坦索羅辛(14.27％)、特拉唑嗪片(11.96％)、酚芐明(11.53％)、舍尼通(9.84％)、前列康(9.21％)、黃酮哌酯片(6.67％)、前列通(3.13％)、前列回春膠囊(1.76％)、桑塔前列泰(0.81％)、安尿通(0.67％)、氟他胺(0.58％)、保前列(0.49％)、尿塞通(0.35％)、尿通(0.35％)、護前列(0.23％)。其中，前列腺增生用藥西藥品種的市場占有率較高。
(2)從調(diào)查城市不同消費層次前列腺增生患者的比例情況看，長期服用高價前列腺增生西藥(主要包括非那甾胺、坦索羅辛、特拉咪嗪片、黃酮哌酯片、桑塔前列泰、氟地胺，每日消費6.52～12.50元)的患者比率為57.78％，長期服用高價前列腺增生中成藥或植物藥(主要包括舍尼通、前列回春膠囊、保前列、護前列，每日消費8.29～27.3元)的患者比率為12.32％；長期服用低價(每日消費2.18～2.52元，主要包括前列康、前列通)和中低價(每日消費4.56～6.60元，主要包括尿塞通、尿通)前列腺增生中成藥或植物藥的患者比率為12.82％。由此可見，前列腺增生用藥層次屬高消費。
藥物治療如保列治、高特靈、哈樂等雖然療效肯定，但價格昂貴，需長期服藥，一般患者難以承受，并可引起如頭痛、直立性低血壓、甚至性欲低下、陽痿等令人不能接受的副作用。中藥對前列腺增生癥已有較系統(tǒng)的認識，已積累了豐富的臨床治療經(jīng)驗。目前已有國家標(biāo)準(zhǔn)的治療前列腺增生的中藥新藥中，其處方藥味組成均較復(fù)雜，其藥味均在5～10味之間。如前列舒樂顆粒由淫羊藿、黃芪、蒲黃、車前草、川牛膝五味藥組成；前列舒丸(水蜜丸)由熟地黃、薏苡仁、冬瓜子、山茱萸、山藥、牡丹皮、蒼術(shù)、桃仁、澤瀉等藥味組成；前列通片由前列通干浸膏、八角茴香油、肉桂油、琥珀組成；前列泰片由益母草、蓄、紅花、油菜蜂花粉、知母、黃柏組成；前列通膠囊由桃仁、沒藥、丹參、赤芍、紅花、澤蘭、王不留行、皂角刺、敗醬草、蒲公英、川楝子、白芷、石葦、枸杞子組成；翁瀝通膠囊由薏苡仁、浙貝母、川木通等11味藥組成；前列通瘀膠囊由赤芍、土鱉蟲、桃仁、夏枯草、白芷、黃芪、通草等11味藥組成；癃閉舒膠囊由補骨脂、益母草、金錢草、海金砂、琥珀、山慈菇等藥組成；蛾苓丸由雌性柞蠶蛾等組成(具體藥味不祥)；僅澤桂癃爽膠囊藥味偏少，但也由澤蘭、肉桂、皂角利三味藥組成。目前市場雖有開發(fā)研究治療前列腺增生癥的中成藥，但仍不能滿足患者的需要。因此，研究開發(fā)高效、價廉、副作用小的治療藥物勢在必行。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種更為有效的治療前列腺增生癥的中藥組合物；本發(fā)明的又一目的是提供上述藥物的制備方法。
傳統(tǒng)中醫(yī)無前列腺增生癥(BPH)的病名，一般根據(jù)BPH患者排尿困難的臨床表現(xiàn)，如排尿費力、中斷、尿不盡、夜尿次數(shù)增多，甚或排尿點滴而出或閉而不通等，將其歸為中醫(yī)“癃閉”范疇，認為本病屬“虛實夾雜”。概括目前對本病的病機認識包括腎虛血瘀、膀胱氣化不利、下焦?jié)駸?、脾腎氣虛等。中醫(yī)治則治法包括利濕通淋、補益脾腎、活血化瘀、溫陽以利氣化等。
然而，其基本病理變化為增大的前列腺使后尿道受壓、變窄、彎曲、延長，造成膀胱流出道梗阻，從而出現(xiàn)排尿困難的一系列癥狀。同時，肛門指診也可觸及增大而質(zhì)韌的前列腺。
本發(fā)明人根據(jù)其病理變化認為，其基本病機為瘀血阻滯、水道不通，應(yīng)為中醫(yī)“癓積”范疇(“癓積”為氣血凝聚而成)。基于對前列腺增生癥基本病機嶄新認識，抓住瘀血阻滯、水道不通的根本病機，確立化瘀散結(jié)、通竅利水為基本治則。精選具有化瘀散結(jié)、通竅利水的蒲黃、螻蛄兩味藥組方。
本發(fā)明的目的是這樣實現(xiàn)的一種治療前列腺增生癥的藥物，由中藥材的提取物以及輔劑組成，其劑型為口服劑型，其特征是，所述中藥材的提取物分別為蒲黃經(jīng)乙醇的提取物，以及與蒲黃等重量份的螻蛄經(jīng)乙醇提取，再經(jīng)分離脂肪后的提取物。
上述蒲黃提取采用8-10倍量60-95％的乙醇，優(yōu)選為8-10倍量60-80％的乙醇，最優(yōu)選為10倍量的60％的乙醇；上述螻蛄提取采用8-10倍量60-90％的乙醇，優(yōu)選為8-10倍量70-80％的乙醇，最優(yōu)選取為8倍量80％的乙醇。
蒲黃，為香蒲科植物水濁香蒲、東方香蒲或同屬植物的干燥花粉。性味甘、平，有活血化瘀，通利水道之功?！吨兴幋筠o典》“涼血止血，活血消瘀”。《本草匯言》云“血之下者可利，血之滯者可行”。《本草正義》謂其“能導(dǎo)瘀結(jié)而治氣凝滯之痛”。《日華子本草》載“治血運血，兒枕急痛，小便不利”。《本經(jīng)》載“主心腹膀胱寒熱，利小便”?！端幮员静荨份d“利水道”?！督饏T要略》也用蒲灰散(蒲黃、滑石)治療因瘀血夾熱致小便不利?，F(xiàn)今也有學(xué)者用蒲黃治療前列腺增生癥(BPH)的研究報道，如張菊蘭用蒲灰散加減治療前列腺增生癥急性尿潴留患者24例，〔中醫(yī)雜志，1994，(9)519〕。
螻蛄，為螻蛄科動物螻蛄或華北螻蛄的干燥體。咸、寒。歸胃，膀胱經(jīng)。有通竅利水、消腫散結(jié)之功效?！侗静蒌撃俊ぞ硭氖弧はN蛄》載“利大小便，通石淋，治瘰疬、骨鯁?！薄侗窘?jīng)》載“味咸，性寒，歸膀胱經(jīng)，功能利水消腫，治小便不通?！薄侗静輩R言》認為“螻蛄性善鉆利，故本藥主水臟雍逆，水道不通，二便閉，脹欲死。”《本草從新》載“通便而二陰皆利，逐水而十種俱平，貼瘰癘頗效，化骨哽殊靈?！薄侗静菥V目》引《普濟方》治小便不利“用螻蛄，推車客(蜣螂)各7枚，……一服神效?！薄侗静菥V目》引《葛洪方》治小便不得“用大螻蛄兩枚，取下體，以一升水漬之，去皮飲之，須臾便通?！薄妒備洝分兄涡”悴煌ā爸T藥無效，可用活螻蛄1枚，加麝香少許共研，取汁用水調(diào)下，小便即通?！薄断x類藥的應(yīng)用》中也講道“螻蛄是一味利水通便的佳藥”。《鮒溪單方選》“癃閉，百藥不效，螻蛄燒灰，酒服即通，此以濕熱攻濕熱，借其竄利行水之性耳?！睂O海鳴等用中藥湯劑加螻蛄琥珀散治療尿潴留，其中有因前列腺增生癥所致者[中西醫(yī)結(jié)合應(yīng)用臨床急救，1996，(1)32-32]。
綜上所述，我們根據(jù)古今文獻記載，結(jié)合本病的基本病機的新認識，確定以蒲黃活血化瘀，通利水道為君，以螻蛄通竅利水、消腫散結(jié)為臣。全方共奏化瘀散結(jié)、通竅利水之功，主治瘀血阻滯型前列腺增生癥。
本發(fā)明的又一目的是這樣實現(xiàn)的一種上述藥物的制備方法，包括下列步驟a)稱取等重量的中藥材蒲黃、螻蛄備用；b)將上述蒲黃采用8-10倍量的60％-95％的乙醇浸泡1-2小時，回流提取2-3次，每次1小時，過濾，棄去藥渣，合并濾液，濾液回收盡乙醇后，得到蒲黃醇提液；c)將上述螻蛄采用8-10倍量的60％-90％的乙醇浸泡1-2小時，回流提取2-3次，每次1.5-2小時，過濾，棄去藥渣，合并濾液，濾液回收盡乙醇，在1-4℃冷凍8-12小時，分離除去脂肪油層，得到螻蛄去油醇提液；d)將上述蒲黃醇提液和螻蛄去油醇提液分別或者混合進行減壓濃縮，加入輔料，再經(jīng)干燥后，制成口服劑型。
優(yōu)選地，該制備方法包括以下步驟a)稱取等重量的中藥材蒲黃、螻蛄備用；b)將上述蒲黃用濾布包裹，并采用8-10倍量的60-80％的乙醇浸泡1-1.5小時，回流提取2-3次，每次1小時，過濾，濾液回收盡乙醇后，得到蒲黃醇提液；c)將上述螻蛄采用8-10倍量的70％-80％的乙醇浸泡1-2小時，回流提取2-3次，每次1.5小時，過濾，棄去藥渣，合并濾液，濾液經(jīng)回收盡乙醇，在1-4℃冷凍12小時，分離除去脂肪油層，得到螻蛄去油醇提液；d)將上述蒲黃醇提液和螻蛄去油醇提液分別或者混合進行減壓濃縮，加入輔料，再經(jīng)干燥后，制成口服劑型。
最優(yōu)選地，該制備方法包括以下步驟
a)稱取等重量的中藥材蒲黃、螻蛄備用；b)將上述蒲黃用濾布包裹，并采用10倍量的60％的乙醇浸泡1小時，回流提取3次，每次1小時，過濾，棄去藥渣，合并濾液，濾液經(jīng)回收盡乙醇后，得到蒲黃醇提液；c)將上述螻蛄采用8倍量的80％的乙醇浸泡1小時，回流提取2次，每次1.5小時，過濾，棄去藥渣，合并濾液，濾液經(jīng)回收盡乙醇后，在1-4℃冷凍12小時，分離除去脂肪油層，得到螻蛄去油醇提液；d)將上述蒲黃醇提液和螻蛄去油醇提液分別或者混合，在溫度為70-80℃，真空度0.02-0.04MP下進行減壓濃縮，加入重量比為4∶1的微晶纖維素和磷酸氫鈣作為輔料，再經(jīng)干燥后，粉碎制粒，制成膠囊。
以下是關(guān)于本發(fā)明制備工藝的研究，涉及藥用成分的提取、分離、濃縮和輔料的選擇、加入量以及制劑成型工藝等等。
1處方蒲黃833g螻蛄833g微晶纖維素96g磷酸氫鈣24g制成膠囊1000粒(以下稱前列通爽膠囊)2劑型選擇依據(jù)該處方來源于臨床驗方，臨床用于良性前列腺增生引起的排尿困難、排尿不盡，需要較長時間服藥。處方中螻蛄有特殊氣味，且含較多油脂，如果制成液體制劑，有較多不溶物，且氣臭難以掩蓋，故宜制成固體制劑。為掩蓋螻蛄的特殊氣味，可選擇包衣片或膠囊劑。根據(jù)預(yù)試驗結(jié)果，處方中藥物浸膏粘度大，干膏收率為12％左右，臨床日服劑量為20g，則日服浸膏量為2.4g，加入部分輔料可以制成膠囊劑，故擬將本處方制成膠囊劑，既可掩蓋螻蛄的不良氣味，方便患者長期服用，病人易于接受，同時達到儲運、攜帶方便的目的。
3提取工藝的研究3.1處方中藥材的前處理3.1.1蒲黃藥材的前處理本實驗所用蒲黃應(yīng)符合中國藥典2000年版一部第290頁蒲黃炮制項下的規(guī)定。
3.1.2螻蛄的前處理本試驗所用螻蛄應(yīng)符合中藥材部頒標(biāo)準(zhǔn)第1冊第101頁螻蛄炮制項下規(guī)定。
3.2工藝路線的設(shè)計及其依據(jù)3.2.1文獻資料中處方中各藥味的成分及性質(zhì)蒲黃中主要含黃酮類化合物異鼠李素-3-O-新橙皮苷糖苷、柚皮素、槲皮素、香蒲新苷、山奈酚-3-O-2-L-鼠李糖(1→6)-β-D-葡萄糖、異鼠李素-3-O-2-L-鼠李糖(1→2)β-D-葡萄糖、山奈酚-3-O-2-L-吡喃鼠李糖基-β-D-吡喃葡萄糖苷、槲皮素-3-O-2-L吡喃鼠李糖(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖苷等。有天門冬氨酸、蘇氨酸、絲氨酸、谷氨酸、丙氨酸、蛋氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、胱氨酸等。還含微量元素有鋁、鈣、鐵、鉀、錳、鈉、磷、鋅等；此外尚含谷甾醇、正二十五烷、琥珀酸等多種有機酸，及棕櫚酸、硬脂酸和油酸的甘油酸等[1]。其中黃酮類成分為蒲黃中活血化瘀主要有效成分，活血化瘀又與本制劑功能主治直接相關(guān)，故應(yīng)針對黃酮類化合物進行提取，蒲黃中黃酮類成分包括苷及苷元，可考慮用較高濃度乙醇提取。
螻蛄，經(jīng)文獻檢索，尚無其化學(xué)成分研究的報道。經(jīng)對其化學(xué)成分的初步研究，螻蛄內(nèi)可能含內(nèi)酯類、生物堿類化合物。
由于螻蛄化學(xué)成分未見報道，為了確定螻蛄與主治功能相對應(yīng)的有效部位，故對螻蛄采用不同的提取方法，篩選有效浸出物。
3.2.2螻蛄有效部位藥效學(xué)篩選采用系統(tǒng)提取法提取螻蛄的不同部位，通過觀察不同提取部位對小鼠前列腺增生的影響及對NE誘導(dǎo)的家兔離體膀胱三角肌收縮的影響，從而確定與本方功能主治有關(guān)的螻蛄的有效提取物。
螻蛄供試部位的提取以300克螻蛄藥材為原料分別用8倍量石油醚、醋酸乙酯、80％乙醇以及水作為溶劑，在相同工藝條件下(即浸泡1小時，回流提取1.5小時，過濾)，得到石油醚部位(A部位)、醋酸乙酯部位(B部位)、乙醇部位(C部位)和水部位(D部位)。
試驗一A、B、C、D提取部位對小鼠前列腺增生的影響實驗材料(1)試藥螻蛄各提取部位A、B、C、D部位，照處方(每日蒲黃、螻蛄各10g)，成人(60Kg)日用量為20g原生藥。按各提取物收率，試驗時用蒸餾水配成相應(yīng)濃度(分別相當(dāng)于臨床日用量的18、9倍)的藥液備用，小鼠灌胃量為0.25ml/10g體重。
非那雄胺(商品名保列治)，美國默沙東公司，批號215735，(95)衛(wèi)藥準(zhǔn)字J-15號。用生理鹽水配成相當(dāng)于臨床日用量18倍量的藥液作為陽性對照藥，備用，小鼠灌胃量為0.25ml/10g。
丙酸睪酮注射液，廣州明興制藥廠，批號020401，粵衛(wèi)藥準(zhǔn)字(1996)第103043號。臨用前和滅菌食用油配制成1mg/ml的藥液作為造模劑，小鼠皮下注射量為10mg/kg。
(2)動物昆明種雄性小鼠，體重18～24g。由成都中醫(yī)藥大學(xué)實驗動物中心提供，合格證號為川實動管6號。實驗在成都中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院實驗動物觀察室進行，合格證川實動管第2001-7號。
方法與結(jié)果取健康雄性小鼠250只，在動物實驗觀察室中適應(yīng)性飼養(yǎng)兩天后，將體重不合格者剔除，選取體重18～22克的小鼠，按表1所示隨機分為11組，每組14-20只。每組動物每日灌胃給藥1次，空白組和模型組動物給予相同體積的生理鹽水，模型組動物同時皮下注射丙酸睪酮，連續(xù)10天，末次給藥后24小時處死，摘除前列腺，計算前列腺指數(shù)。
表12-1A、B、C、D提取部位對小鼠前列腺增生的影響組別 動物(只) 前列腺指數(shù)空白對照組18 9.60±4.33模型對照組17 19.14±3.13*陽性對照組15 14.37±3.41*A大劑量組 11 13.25±4.82*
A中劑量組 10 12.93±2.61*B大劑量組 11 11.25±2.21*B中劑量組 11 11.55±2.46*C大劑量組 11 14.33±4.14*C中劑量組 10 14.91±6.93D大劑量組 10 15.50±7.15D中劑量組 10 37.70±47.66注與模型對照組相比較，*p＜0.05由上表可知，A、B無論大劑量組還是中劑量組均對昆明種小鼠前列腺增生有明顯作用，而D組大劑量組對昆明種小鼠前列腺增生有減小作用，中劑量組無效，其中，B的作用趨勢最過明顯。在此基礎(chǔ)上，再做A、B對NE誘導(dǎo)的家兔離體膀胱三角肌收縮的影響。
試驗二A、B提取部位對NE誘導(dǎo)的家兔離體膀胱三角肌收縮的影響實驗材料(1)試藥螻蛄提取部位A、B，臨用時配制成一定濃度；重酒石酸去甲腎上腺素由上海禾豐制藥有限公司提供，批準(zhǔn)文號滬衛(wèi)藥準(zhǔn)字(1995)第010044號；高特靈；Kreb液(每1000毫升含Nacl 5.54g，Kcl 0.35g，Cacl20.28g，KH2PO40.16g，MgSO40.29g，NaHCO32.1g，Glu2.1g)。
實驗器材麥?zhǔn)显〔?，L型通氣鉤，肌張力換能器，恒溫水浴鍋，表面皿，手術(shù)器械，氧氣發(fā)生器，細玻管，BL-410生物信號系統(tǒng)。
(2)動物家兔，雌雄兼有，體重1.5～2.0Kg，健康合格，由四川省醫(yī)學(xué)科學(xué)院實驗動物中心提供，合格證號為醫(yī)動字第2410618號。實驗在成都中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院實驗動物觀察室進行，合格證川實動管第2001-7號。
方法與結(jié)果取家兔，猛擊頭部致死。打開腹腔，暴露膀胱，分離出兩側(cè)輸尿管，在輸尿管平面以下，輸精管平面以上取下膀胱三角肌，置于通氧的37.5℃的Kreb氏液中，沿著肌纖維的紋理剪成寬3-4mm，長約6-8mm肌片，將三角肌條片兩端結(jié)扎，一端固定在玻璃通氣鉤上，垂直地懸于盛有40mlKreb液的麥?zhǔn)显〔壑?，恒?7.5℃，并不斷通以氧氣。另一端系于張力換能器上，標(biāo)本負荷2g張力。待三角肌條在浴管中穩(wěn)定1小時后，加入NE(終濃度為10-5mol/L)，記錄5分鐘，再分別加入不同提取部位的藥物A、B(終濃度為2％)和陽性藥高特靈(終濃度為10-7mol/L)，觀察藥物的拮抗作用，記錄10分鐘。計算抑制度給NE后的肌張力一給藥后肌張力。
用SPSS10.0對實驗結(jié)果(抑制度)進行統(tǒng)計分析。結(jié)果見下表表12-2A、B提取部位對家兔離體膀胱三角肌收縮的影響試驗次數(shù) 劑量(終濃度) 抑制度空白組 72％ 0.2176±0.09陽性組 92％ 0.9778±0.74*A部位72％ 0.5508±
0.32B部位 6 2％ 0.8673±0.18**注與空白組相比較，*p＜0.05，**p＜0.01由上表可以看出，與空白組相比較，A部位，B部位對由NE引起的家兔離體膀胱三角肌的收縮有明顯的對抗作用，其中，B部位對NE引起的家兔離體膀胱三角肌的收縮有極明顯的對抗作用。
由以上實驗數(shù)據(jù)顯示，B樣效果明顯優(yōu)于A、C、D三個樣品，即以醋酸乙酯提取部位較好。由于生產(chǎn)上最好用無毒、不易燃、價廉、資源豐富的水或乙醇進行提取，故考慮采用較高濃度的乙醇代替醋酸乙酯進行提取。預(yù)試驗中發(fā)現(xiàn)，用較高濃度乙醇提取，回收乙醇后，有脂肪油析出，如果不除去，將對成型帶來不利影響，并帶來較大異味，故考慮將油除去。
因此選用高濃度乙醇提取物(去脂肪油后)、醋酸乙酯提取物、脂肪油進行藥效學(xué)比較實驗，并對化學(xué)成分的變化上進行分析。
試驗三B、E、F提取部位對小鼠前列腺增生的影響螻蛄供試部位的提取300克螻蛄藥材用80％的乙醇10倍量提取兩次，每次1.5小時，過濾，合并提取液，回收盡乙醇，冷藏12h，用260目的篩網(wǎng)，濾去上層油層(樣品E)，得到下層溶液(樣品F)。
實驗材料(1)試藥螻蛄各提取部位B、E、F部位，按各提取物收率，試驗時用蒸餾水配成相應(yīng)濃度(分別相當(dāng)于臨床日用量的18、9倍)的藥液備用，小鼠灌胃量為0.25ml/10g體重。
非那雄胺(商品名保列治)，美國默沙東公司，批號215735，(95)衛(wèi)藥準(zhǔn)字J-15號。用生理鹽水配成相當(dāng)于臨床日用量18倍量的藥液作為陽性對照藥，備用，小鼠灌胃量為0.25ml/10g。
丙酸睪酮注射液，廣州明興制藥廠，批號020401，粵衛(wèi)藥準(zhǔn)字(1996)第103043號。
臨用前和滅菌食用油配制成1mg/ml的藥液作為造模劑，小鼠皮下注射量為10mg/kg。
(2)動物昆明種雄性小鼠，體重18～24g。由成都中醫(yī)藥大學(xué)實驗動物中心提供、合格證號為川實動管6號。實驗在成都中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院實驗動物觀察室進行，合格證川實動管第2001-7號。
方法與結(jié)果取健康雄性小鼠150只，在動物實驗觀察室中適應(yīng)性飼養(yǎng)兩天后，將體重不合格者剔除，選取體重18～22克的小鼠，按表所示隨機分為8組，每組15只。每組動物每日灌胃給藥1次，空白組和模型組動物給予相同體積的生理鹽水，模型組動物同時皮下注射丙酸睪酮，連續(xù)10天，末次給藥后24小時處死，摘除前列腺，計算前列腺指數(shù)。
表12-3B、E、F提取部位對小鼠前列腺增生的影響組別 動物(只) 前列腺指數(shù)空白對照組 159.34±3.14模型對照組 1520.33±4.75*陽性對照組 1513.65±3.58*F大劑量組 1512.11±3.55*F中劑量組 1511.34±3.24*B大劑量組 1511.47±3.44*B中劑量組 1511.66±2.91*E大劑量組 1518.38±4.22E中劑量組 1518.84±5.11注與模型對照組相比較，*p＜0.05由上表可知，B、F無論大劑量組還是中劑量組均對昆明種小鼠前列腺增生有明顯作用，而E組大劑量組及中劑量組無效，即可用高濃度乙醇提取物(去脂肪油)代替醋酸乙酯提取物進行提取。
試驗四B、F提取部位TLC比較由于B、F在藥效上接近，故對它們進行TLC分析，初步比較它們在化學(xué)成分上的差異。
稱取已經(jīng)干燥至恒重的B、F樣各1g用80％的乙醇5ml超聲提取0.5h，濾過，濾液及為供試品溶液，照TLC法，吸取上述兩種溶液各10μ1點于同一硅膠GF254上，用氯仿-甲醇-冰乙酸(20∶5∶0.3)展開，取出，晾干置于紫外光λ＝254nm下檢視。
結(jié)果B、F在TLC主要斑點的Rf值基本相同，可初步判斷兩者成分大致一致。
3.2.3蒲黃、螻蛄混合提取后脂肪油中黃酮類成分TLC分析蒲黃中主要含有黃酮類成分，可采用乙醇進行提??；螻蛄采用乙醇提取，回收乙醇后，冷凍析出脂肪油，去掉脂肪油后，取下層水液作為藥用。可考慮兩者混合提取，但脂肪油在析出過程中，可能會帶走蒲黃提取物中的成分，故應(yīng)進行研究。
稱取蒲黃藥材50g和螻蛄藥材50g一起置于2000ml圓底燒瓶中用80％的乙醇浸泡1h，回流提取2次，每次1h，回收乙醇至無醇味，于4℃冷藏過夜。用260目的篩網(wǎng)過濾，得脂肪油層和下層溶液。取油2g溶于5ml甲醇溶液中制成供試品溶液，精密稱取異鼠李素-3-0-新橙皮糖苷配成1mg/ml的對照品溶液，精密吸取供試品溶液和對照品溶液分別20μl點于同一硅膠G板上。展開劑為醋酸乙酯-丁酮-甲酸-水＝(5∶3∶1∶1)，展開，取出，晾干，噴20％的硫酸乙醇溶液，熱風(fēng)顯色至斑點清晰。
結(jié)果由TLC圖譜可知，脂肪油中含有蒲黃中的黃酮類成分，兩者混合提取，在脂肪油析出的過程中造成了蒲黃中黃酮類成分的損失。
所以應(yīng)將兩味藥分開提取，應(yīng)分別進行相應(yīng)的提取工藝研究。
3.3提取工藝條件選定的依據(jù)3.3.2螻蛄醇提工藝研究考察3.3.2.1螻蛄提取溶媒考察以上藥效學(xué)篩選研究表明，醋酸乙酯提取物及高濃度乙醇提取物(去脂肪油后)均具有較好的藥效作用，故以醋酸乙酯的提取物量作為指標(biāo)，對60％-90％乙醇提取濃度進行了考察。
稱取螻蛄藥材100g 4份，分別用60％、70％、80％、90％的乙醇8倍量浸泡1h，回流提取2次，每次2小時。濾過，合并濾液。減壓回收乙醇至無醇味，得樣品溶液，將樣品溶液冷藏(4℃)過夜，次日用260目的篩網(wǎng)過濾，除去油層，下層樣品溶液用等量的醋酸乙酯提取2次，每次靜止30min，合并提取液，減壓回收醋酸乙酯得流浸膏，將流浸膏置于真空干燥箱中，干燥至恒重，計算醋酸乙酯提取量。
表12-4 螻蛄提取溶媒考察醇濃度(％) 60 70 8090醋酸乙酯提取8.28.5 9.4 6.7量(g/100g)結(jié)果表明從醋酸乙酯提取量來看，用80％的乙醇提取較好。因此選用80％的乙醇作為提取溶媒。
3.3.2.2螻蛄吸取乙醇量的研究考察稱取螻蛄藥材20g三份，分別加入80％乙醇200ml，浸泡，每隔1h過濾，稱螻蛄藥材的重量，以吸醇量不再增加及藥材浸透為度，計算其吸醇率。
表12-5 不同浸泡時間80％乙醇吸取量時間(小時)1.0 2.0 3.0 吸醇率(％)平均值(％)第一 202.0螻蛄重量(g) 59.8 60.2 60.3份第二 209.0螻蛄重量(g) 59.2 59.9 60.1 204.0份第三 204.0螻蛄重量(g) 58.1 60.3 61.0份結(jié)果表明螻蛄藥材浸泡1小時后其吸醇率為藥材量的兩倍。
3.3.2.3螻蛄醇提工藝的正交實驗考察對影響藥物提取的80％乙醇用量、提取時間及提取次數(shù)等主要因素進行正交試驗篩選，選用L9(3)4正交表進行實驗，因素水平安排見表12-6。
表12-6 80％乙醇提取正交因素水平表因素水平A溶媒用量(倍) B提取時間(小時) C提取次數(shù)1 6 1.0 12 8 1.5 23 10 2.0 3實驗方法選擇80％乙醇用量、提取時間、提取次數(shù)三個因素，每因素選擇三個水平，按L9(3)4正交表安排實驗。每份取100g藥材，共計9份，用80％乙醇提取，合并取提取液，減壓回收盡乙醇，得樣品溶液，取樣品溶液冷藏(4℃)過夜，次日用260目的篩網(wǎng)過濾，棄去上層油層，下層溶液用等量的醋酸乙酯提取兩次，每次靜止30min，合并提取液，減壓回收提取液，干燥至恒重，稱量，計算醋酸乙酯提取率作為考察指標(biāo)。結(jié)果如下表12-7表12-7用80％的乙醇提取其正交試驗表及結(jié)果試驗號ABCD(空白)醋酸乙酯提取量(g)1 1111 8.82 1222 9.03 1333 11.64 2123 9.85 2231 9.46 2312 8.97 3132 10.08 3213 9.29 3321 9.5K1/3 9.8 9.5 8.9 9.2K2/3 9.4 9.2 9.4 9.3K3/3 9.6 10.0 10.3 10.2R 0.43 0.8 1.4 0.9表12-8方差分析表誤差來源I nMSF PA 0.282320.14150.1614＞0.05B 0.968920.48440.5540＞0.05C 2.895621.44781.6557＞0.05誤差1.748920.8744結(jié)果表明由80％的乙醇提取正交實驗結(jié)果分析來看，由極差R值顯示，各因素影響大小為C＞B＞A，又由方差分析表看，各因素均無顯著性影響(P*＞0.05)，考慮大生產(chǎn)條件與實驗室提取條件的較大差異，為確保盡可能的提取出有效成分以及節(jié)約能源。經(jīng)綜合考慮，故確定螻蛄提取工藝為A2B2C2，既用8倍量的80％的乙醇提取2次，每次1.5小時。
3.3.2.4螻蛄正交試驗最佳方案驗證試驗稱取螻蛄藥材100g三份，用80％的乙醇浸泡1h，回流提取2次，每次1.5h，濾過，合并濾液，減壓回收盡乙醇，得樣品溶液。將樣品溶液冷藏(4℃)過夜，次日用260目的篩網(wǎng)過濾，除去上層油層，下層溶液用等量的醋酸乙酯提取2次，每次靜止30min，收集醋酸乙酯提取液，減壓回收醋酸乙酯得流浸膏，將流浸膏減壓干燥至恒重，稱取其重量，計算醋酸乙酯提取物得率。結(jié)果如下表表12-9 螻蛄80％醇提取最佳工藝驗證實驗試驗號藥材量醋酸乙酯提取物(g)1 100 9.82 100 9.73 100 9.9結(jié)果表明三個驗證試驗醋酸乙酯提取物的量相差不大，說明該工藝穩(wěn)定可行。故確定螻蛄醇提工藝為用80％乙醇8倍量提取2次，每次1.5h，過濾，合并提取液，減壓回收盡乙醇，冷藏過夜，次日用260目的篩網(wǎng)過濾，除去脂肪油層，下層溶液供藥用。
3.3.2.5螻蛄醇提冷藏時間和冷藏溫度的單因素考察(1)稱取螻蛄藥材100g四份，用8倍量80％的乙醇浸泡1h，回流提取2次，每次1.5h，濾過，合并濾液，減壓回收緊乙醇，得樣品溶液，將1#、2#、3#樣品溶液分別置于1-4℃的冷藏室分別冷藏4h、8h、12h、16h，冷藏后用260目的篩網(wǎng)濾過，將脂肪油層減壓干燥至恒重，結(jié)果如下表。
表12-10螻蛄醇提冷藏時間考察表試驗號 冷藏時間(h) 上層油重(g)1 4 52 8 83 12104 1610.5結(jié)果冷藏12h，基本能將脂肪油全部析出，并能除去。
(2)稱取螻蛄藥材100g三份，，用8倍量80％的乙醇浸泡1h，回流提取2次，每次1.5h，濾過，合并濾液，減壓回收盡乙醇，得樣品溶液，將1#、2#、3#樣品溶液置于-4-0℃、1-4℃、4-8℃下冷藏12h后，用260目的篩網(wǎng)濾過，將脂肪油減壓干燥至恒重，結(jié)果如下表表12-11螻蛄醇提冷藏溫度的考察試驗號 冷藏溫度(℃)油的重量(g)1 -4-0下層水溶液已結(jié)冰2 1-4 9.53 4-8 2由上表得螻蛄醇提減壓回收乙醇后，冷藏條件為于1-4℃下冷藏12h后去油。
螻蛄提取工藝為用80％乙醇8倍量提取2次，每次1.5h，過濾，合并提取液，減壓回收盡乙醇，于1-4℃冷藏12h后，用260目的篩網(wǎng)過濾，除去脂肪油層，下層溶液供藥用。
3.3.3蒲黃醇提工藝研究考察3.3.3.1乙醇濃度的單因素考察蒲黃活血化瘀的作用與本方功能主治直接相關(guān)，黃酮類成分為蒲黃活血化瘀的主要有效成分，異鼠李素-3-0-新橙皮糖苷為蒲黃中具有代表性的黃酮類化合物，故以其為指標(biāo)對蒲黃的提取工藝進行了考察。
稱取蒲黃藥材50g各六份，分別加入10倍量的水、20％乙醇、40％乙醇、60％乙醇、80％乙醇、95％乙醇，浸泡1h，回流提取兩次，每次2h，濾過，合并濾液，攪勻取部分高速離心(離心5min，轉(zhuǎn)速10000轉(zhuǎn)/min)，上清液用微孔濾膜濾過，濾液作為供試品溶液。分別吸取對照品溶液和供試品溶液各20μl，注入液相色譜，測定，計算即得；測定結(jié)果見表12-12。
表12-12不同乙醇濃度對蒲黃提取異鼠李素-3-O-新橙皮糖苷提取率的影響異鼠李素-3-O-新異鼠李素-3-O-新橙皮糖苷實驗方案橙皮糖苷理論含量 提取率％提取量(mg/50g)(mg/50g)水提84.25 46.5 55.1920％乙醇84.25 48.8 57.9240％乙醇84.25 52.0 61.7260％乙醇84.25 72.0 85.4680％乙醇84.25 63.0 74.7895％乙醇84.25 59.6 70.74(注本實驗所用蒲黃中異鼠李素-3-O-新橙皮糖苷含量為0.17％)結(jié)果表明，從異鼠李素-3-O-新橙皮糖苷提取率來看，用60％醇提異鼠李素-3-O-新橙皮糖苷提取率較高，因此選用60％的乙醇提取。
3.3.3.2蒲黃醇提前浸泡時間的單因素考察稱取蒲黃藥材100g各三份，加入10倍量的60％乙醇，分別浸泡0.5h、1.0h、1.5h，回流提取兩次，每次1.5h，濾過，合并濾液，混勻后，取部分濾液高速離心(離心5min，轉(zhuǎn)速為10000轉(zhuǎn)/min)離心后上清液用微孔濾膜濾過，濾液作為供試品溶液，分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各20μl注入液相色譜儀中，測定，計算異鼠李素-3-O-新橙皮糖苷提取率，測定結(jié)果見表12-13。
表12-13不同浸泡時間對異鼠李素-3-O-新橙皮糖苷提取率的影響異鼠李素-3-O-新異鼠李素-3-O-新實驗方案 橙皮糖苷理論含量 橙皮糖苷取量 提取率％(mg/100g) (mg/100g)浸泡0.5h 168.5 113.9 67.60浸泡1.0h 168.5 144.7 85.89浸泡1.5h 168.5 143.1384.94(注本實驗所用蒲黃中異鼠李素-3-O-新橙皮糖苷含量為0.17％)結(jié)果表明，從異鼠李素-3-O-新橙皮糖苷提取率來看，浸泡1h和1.5h后差異都不大，為了節(jié)約時間，所以選擇60％乙醇浸泡時間為1h。
3.3.3.3蒲黃吸取乙醇率研究考察稱取蒲黃藥材50g各三份，分別加入250ml 60％乙醇，浸泡，每隔1h記錄蒲黃粉重量。以吸醇量不再增加及藥材浸透為度，計算其吸醇率。
表12-14蒲黃藥材吸取60％乙醇研究考察時間(小時) 1.02.0 3.0 吸醇率(％)平均值(％)第一 301.8蒲黃粉重量(g) 198.7 200.0 199.7份第二 301.0蒲黃粉重量(g) 199.6 199.8 200.3 301.3份第三 300.6蒲黃粉重量(g) 197.9 199.2 199.8份結(jié)果顯示，藥材60％乙醇的吸取率為301.3％藥材，即吸醇率為藥材的3倍量，因此藥材第一次提取時應(yīng)多加3倍量的60％乙醇。
3.3.3.4蒲黃藥材包煎提取的單因素考察稱取蒲黃藥材100g兩份，一份直接置于3000ml的圓底燒瓶中，用60％的乙醇10倍量浸泡1小時，回流提取2次，每次1.5小時；另一份用350目的濾布將藥材包裹起來，置于圓底燒瓶中，用60％的乙醇10倍量浸泡1小時，回流提取2次，每次1.5小時。濾過，合并濾液，混勻后取部分高速離心(離心5min，轉(zhuǎn)速為10000轉(zhuǎn)/min)，離心后取上清夜用微孔濾膜濾過，濾液作為供試品溶液。分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液20μl注入液相色譜儀中，測定，計算。其于提取液減壓回收，計算結(jié)果如下表12-15表12-15蒲黃藥材包煎提取的單因素考察異鼠李素-3-O-新橙皮異鼠李素-3-O-新橙皮糖苷提取實驗方案 提取率％糖苷理論含量 量(mg/100g)
(mg/100g)不包煎 168.5140.3383.28包煎 168.5132.6978.74(注本實驗所用蒲黃中異鼠李素-3-O-新橙皮糖苷含量為0.17％)由于蒲黃藥材本身為花粉，是很細的粉未，如不包裹大工業(yè)化生產(chǎn)時沒法過濾，因此本實驗考察包煎提取是否影響異鼠李素-3-O-新橙皮糖苷提取率。結(jié)果表明包煎對異鼠李素-3-O-新橙皮糖苷提取率影響不大。因此蒲黃提取時采用包煎。
3.3.3.5蒲黃醇提工藝條件的正交試驗考察對影響藥物提取的60％乙醇用量、提取時間及提取次數(shù)等主要因素進行正交試驗篩選，選用L9(3)4正交表進行實驗，因素水平安排見表12-16。
表12-1660％乙醇提取正交因素水平表因素水平A溶媒用量(倍)B提取時間(小時)C提取次數(shù)1 61.012 81.523 10 2.03實驗方法選擇60％乙醇用量、提取時間、提取次數(shù)三個因素，每因素選擇三個水平，按L9(3)4正交表安排實驗。每份取100g藥材，共計9份，用350目的濾布包裹，用60％乙醇提取，合并提取液，混勻，取部分提取液高速離心(離心5min，轉(zhuǎn)速為10000轉(zhuǎn)/min)，離心后上清夜用微孔濾膜濾過，濾液即為供試品溶液，精密吸取對照品溶液和供試品溶液各20μl注入液相色譜中，測定，計算。測定供試品溶液中異鼠李素-3-O-新橙皮糖苷的含量作為考察指標(biāo)。
HPLC色譜條件Kromasil ODS C18柱(250×4.6mm，5μm)；流動相乙晴-水-磷酸(15∶85∶0.5)；檢測波長為254nm；柱溫45℃；流速為1.00ml/min。
對照品溶液精密稱取異鼠李素-3-O-新橙皮糖苷適量，制成0.071mg/ml的對照品溶液。
供試品溶液的制備 取部分提取液高速離心5min，轉(zhuǎn)速為10000轉(zhuǎn)/min，取上清夜用微孔濾膜濾過，濾液即為供試品溶液儀器試劑 島津LC-10ATP泵，SPD-10AVP檢測器，乙氰(色譜純，迪馬公司)，其于試劑都為分析純，水(雙蒸水)自制。
測定法 分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各20μl，注入液相色譜儀，測定，采用外標(biāo)法計算，即得。
表12-17正交試驗結(jié)果分析實際提取量試驗號 A B C D(空白)(mg/100生藥材)11 1 1 1 106.7821 2 2 2 137.6931 3 3 3 138.9642 1 2 3 120.3252 2 3 1 141.3862 3 1 2 130.5073 1 3 2 166.9283 2 1 3 129.45
9 3 3 2 1 150.71K1/3127.81 131.34 122.25132.96K2/3130.73 136.17 136.24145.04K3/3149.03 140.06 149.09129.58R21.22 8.72 26.84 15.83注本實驗所用蒲黃藥材中異鼠李素-3-O-新橙皮糖苷含量為0.17％表12-18方差分析表誤差來源 I n MS F GA 795.89 2 397.9 1.99＞0.05B 117.05 2 58.52 0.2933 ＞0.05C 1083.952 541.97 2.72＞0.05誤差 399.02 2 199.51以上結(jié)果表明以異鼠李素-3-O-新橙皮糖苷提取率計算，極差值(R)表明，各因素影響順序C＞A＞B；但方差分析結(jié)果表明，A，B，C三因素均無顯著性意義，考慮大生產(chǎn)條件與實驗室提取條件的較大差異，為確保盡可能的提取出有效成分，經(jīng)綜合考慮，故確定蒲黃提取工藝為A3B1C3，既用10倍量的60％的乙醇提取3次，每次1小時。
3.3.3.6最佳工藝驗證實驗為了保證提取工藝的合理可行，稱取100g蒲黃藥材，按上述確定的提取工藝條件，進行驗證實驗。
對照品溶液濃度為0.071mg/ml的異鼠李素-3-O-新橙皮糖苷對照品溶液。
供試品溶液的制備 用60％乙醇提取，合并取提取液，取部分提取液高速離心5min，轉(zhuǎn)速為10000轉(zhuǎn)/min，取上清夜用微孔濾膜濾過，濾液即為供試品溶液。
儀器試劑 島津LC-10ATP泵，SPD-10AVP檢測器，乙腈(色譜純，迪馬公司)，其于試劑都為分析純，水(重蒸餾水)自制。
測定法 分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各20μl，注入液相色譜儀，測定，采用外標(biāo)法計算，即得。
表12-19蒲黃60％乙醇提取最佳工藝驗證試驗表異鼠李素-3-O-新 異鼠李素-3-O-新試驗號 藥材量 橙皮糖苷提取量 橙皮糖苷提取率(mg) (％)1 100 141.82 84.172 100 143.31 85.053 100 138.11 81.97結(jié)果表明三個驗證試驗結(jié)果相差不大，說明該工藝穩(wěn)定可行。
綜上所述，可確定蒲黃的提取條件為，加入10倍量60％乙醇(第一次加入13倍量，含3倍量的藥材吸醇量)，浸泡1h，提取3次，每次1h。
4分離、濃縮與干燥工藝的研究4.1分離、濃縮工藝研究4.1.1蒲黃分離、濃縮工藝研究稱取蒲黃藥材10kg，用350目的濾布包裹，加60％的乙醇浸泡1h，回流提取3次，每次1h(提取溫度為75-85℃)，合并提取液，用400目濾布濾過，濾液回收盡乙醇(溫度70-80℃)，減壓濃縮(溫度70-80℃、真空度為0.02-0.04)至比重為1.15-1.20(60℃測)，得流浸膏，精密量取部分流浸膏測異鼠李素-3-O-新橙皮糖苷的提取率。
表12-20 蒲黃中試提取液中異鼠李素-3-O-新橙皮糖苷的提取率異鼠李素-3-O-新橙皮糖 異鼠李素-3-O-新橙皮糖蒲黃藥材量 提取率(％)苷理論含量(g/10kg) 苷實際提取量(g/10kg)10kg 16.32 11.75 72(注本試驗藥材中異鼠李素-3-O-新橙皮糖苷的含量為0.16％)4.1.2螻蛄分離、濃縮工藝研究稱取螻蛄藥材10kg，加80％的乙醇浸泡1h，回流提取2次，每次1.5h(溫度為70-80℃)，合并提取液，用260目濾布濾過，濾液回收乙醇(溫度70-80℃)，減壓濃縮(溫度70-80℃、真空度為0.02-0.04MP)至比重為1.01得樣品溶液，將樣品溶液置于溫度為1-4℃的環(huán)境下冷藏12h，后用260目的篩網(wǎng)過濾除去油層，下層樣品溶液減壓濃縮(溫度70-80℃、真空度為0.02-0.04MP)至比重為1.10-1.15(60℃測)。
將以上兩味藥提取液濃縮到相應(yīng)比重后，混合，加入輔料，干燥，制粒。
4.2干燥工藝研究4.2.1樣品減壓干燥時添加輔料的種類研究考察在前期醇提工藝的研究過程中，發(fā)現(xiàn)樣品吸濕性很厲害，因為兩味藥均為乙醇提取，由于粘稠度大，故不適于噴霧干燥，可采用減壓干燥。
為了利于干燥，可在干燥前加入一定的輔料，再進行干燥。實驗方法為按醇提正交試驗的最佳工藝分別提取200g蒲黃和螻蛄藥材，濃縮至大致相應(yīng)比重后，混勻，分為四份，第一份加入12g可溶性淀粉；第二份加入12g微晶纖維；第三份加入12g乳糖；第四份加入12g磷酸氫鈣。將輔料和浸膏混勻后置于真空干燥器中(溫度為70℃，真空度為0.08Mpa)干燥得干膏。將干膏研細(相對濕度為40％)，精密稱取2.0g于已經(jīng)干燥至恒重的稱量瓶中，將稱量瓶置于相對濕度為70％的干燥器中，在72h內(nèi)考察其吸濕率。具體數(shù)據(jù)如下表表12-21添加輔料的種類樣品在72h內(nèi)在相對濕度為70％的干燥器中的吸濕率樣品 第一份第二份第三份 第四份稱量瓶空 40.8415 42.1784 40.819436.8473重樣品2.38952.32203.3984 2.2919重放置放置 吸濕 放置 吸濕 放置 吸濕 放置 吸濕時間后重 率％ 后重 率％ 后重 率％ 后重 率％1h 43.2517 0.86 44.5275 1.16 44.2435 1.33 39.1699 0.762h 43.2699 1.63 44.5416 1.77 44.2582 2.15 39.1884 1.193h 43.2857 2.29 44.5594 2.54 44.2728 2.34 39.1929 1.764h 43.2954 2.69 44.5742 3.17 44.2957 3.04 39.2091 2.298h 43.3673 5.74 44.6273 5.46 44.3469 6.19 39.2812 3.85
18h44.44558.9844.70588.84 44.427 9.76 39.36296.1827h43.509911.67 44.747810.6544.532513.0639.43879.2651h43.632516.80 44.826014.0244.621716.9439.527411.8972h43.687419.10 44.857915.4044.651219.0139.575012.75結(jié)果表明浸膏加微晶纖維和磷酸氫鈣吸濕率較底。由于磷酸氫鈣加入量太大(超過了1.5g/日用量)，故考慮以微晶纖維為主，磷酸氫鈣為輔按一定比例混合作為輔料進行考察。
4.2.2微晶纖維、磷酸氫鈣的加入量及比例實驗方法按工藝分別提取250g蒲黃和250g螻蛄藥材，得混合后的浸膏，將其均分為四份。第一份加入12g微晶纖維，第二份加入9g微晶纖維，第三份加入9.6g微晶纖維和2.4g磷酸氫鈣，第四份加入8g微晶纖維和4g磷酸氫鈣。將四份樣品置于真空干燥箱中干燥，得干膏。將干膏研細(相對濕度為40％)，精密稱取2.0g于已經(jīng)干燥至恒重的稱量瓶中，將稱量瓶置于相對濕度為70％的干燥器中，在72h內(nèi)考察其吸濕率。
表12-22添加不同的輔料量和不同輔料比例在相同條件下其吸濕率樣品 第一份 第二份 第三份 第四份放置放置 吸濕 放置 吸濕 放置 吸濕 放置 吸濕時間后重 率％ 后重 率％ 后重 率％ 后重 率％1h 43.71441.67 36.98192.87 45.07601.65 46.44841.382h 43.73482.39 37.00173.73 45.09712.38 46.46962.023h 43.75713.18 37.02324.67 45.11823.13 46.49322.694h 43.77973.97 37.04295.52 45.13693.78 46.51433.358h 43.82735.64 37.163910.7845.21786.62 46.66787.9418h 43.94749.86 37.221813.2945.314410.0146.72359.6127h 44.017312.3237.318717.5045.367311.8746.830712.8251h 44.078214.4637.423322.0445.423713.8446.917815.4272h 44.190818.4137.443422.9245.525717.4247.028418.73結(jié)果表明浸膏中加入微晶纖維∶磷酸氫鈣(4∶1)可達到較好干燥效果，并使吸濕性較小。
5制劑成型工藝研究5.1制粒工藝研究因為浸膏中加入的輔料中含有較多的微晶纖維，使干膏的干壓性能良好，并有良好的成型性，故可將干膏粉碎過5號篩后，直接干法制粒即可。
5.2顆粒臨界相對濕度的研究實驗方法取7個底部分別盛有不同濃度的硫酸溶液的玻璃干燥器，放入25℃恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)恒溫24小時，此時干燥器內(nèi)的相對濕度分別為一定值。取7個已恒重的稱量瓶底部分別加入2g顆粒，準(zhǔn)確稱重后分別置于上述玻璃干燥器中(稱量瓶蓋打開)，于25℃恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)保存96小時(吸濕基本平衡)，以水分含量為縱坐標(biāo)，相對濕度為橫坐標(biāo)作曲線，從曲線上可得顆粒的臨界相對濕度為52％，吸濕性得到較好的改善。
表12-23各種相對濕度條件下顆粒的吸濕率
H2SO4∶H2O 相對濕度 吸濕前浸膏重吸濕后浸膏重 吸濕百分率V∶V (％) (g) (g) (％)79.6∶100202.0608 2.0647 0.1969.4∶100302.0689 2.0865 0.8559.2∶100402.0597 2.0847 2.0549.1∶100502.0597 2.1503 4.2038.9∶100602.0632 2.1704 5.8928.7∶100 70 2.0514 2.23489.2518.5∶100 80 2.0642 2.391916.17結(jié)果顆粒臨界相對濕度為52％。表明本品在溫度25℃，相對濕度52％以下的環(huán)境下，顆粒吸濕性較小。顆粒分裝時，環(huán)境濕度必須控制在52％以下。
5.3顆粒流動性測定測定休止角為保證工業(yè)化生產(chǎn)時分劑量的準(zhǔn)確性，要求填充顆粒有良好的流動性。取制粒后顆粒15g，采用固定圓錐底法測定休止角。
表12-24顆粒休止角試驗號1 2 3休止角(°)3634 37從上表可知，顆粒休止角均小于40°，流動性較好，可滿足工業(yè)大生產(chǎn)的要求。
5.4堆密度測定及空膠囊型號的確定堆密度的測定采用量筒法測定，結(jié)果見下表。
表12-25堆密度測定結(jié)果試驗號 1 2 3 平均堆密度(g/mm3)0.580 0.585 0.581 0.582本膠囊按臨床用量及上述試驗結(jié)果擬定裝0.32g。依據(jù)本品顆粒的平均堆密度0.582g/mm3，結(jié)合空膠囊規(guī)格型號及近似的可裝容量，1號膠囊的容積為0.55ml，可裝容量為0.55×0.582g/mm3＝0.41g，本品0.32g可以裝下，最后確定1號空心膠囊。
四、具體實施方法制劑處方如下蒲黃833g 螻蛄833g 微晶纖維素96g 磷酸氫鈣24g制成1000粒膠囊或1000片包衣片制法以上兩味，蒲黃用布包好，加入10倍量60％乙醇浸泡1小時后提取3次，每次1小時，濾過，合并濾液，減壓回收盡乙醇并濃縮至相對密度1.15-1.20(60℃測)；螻蛄加8倍量80％的乙醇浸泡1小時，提取2次，每次提取1.5小時，濾過，合并濾液，減壓回收盡乙醇并濃縮至相對密度1.01(60℃測)，冷藏12h，除去上層油，減壓濃縮至比重為1.10-1.15(60℃測)，將螻蛄樣品溶液和蒲黃提取物混合，加入輔料(微晶纖維素和磷酸氫鈣)，真空干燥，粉碎，制粒，裝入膠囊，制成1000粒，即得；或者真空干燥后，粉碎，壓片制得包衣片1000片。
按制劑工藝路線，經(jīng)三批中試，平均收膏率(除去脂肪油后)為12.0％(加入一定重量輔料，干燥后，稱重，再減去輔料重量，計算而得。)，則833×2×12％＝199.92g，應(yīng)得199.92g干膏，加入微晶纖維96g、磷酸氫鈣24g，則199.92+96+24＝319.92g。擬裝0.32g/粒，則319.92÷0.32＝1000粒。
原方一日服用生藥材20g，而每粒膠囊(或包衣片)相當(dāng)于1666/1000＝1.666g生藥材，日服劑量為20/1.666＝12粒，若日服三次，則每次服用量為4粒/次。
裝量本膠囊(或包衣片)每粒裝0.32g/粒。
中試規(guī)模生產(chǎn)研究資料及相關(guān)生產(chǎn)數(shù)據(jù)中試規(guī)模生產(chǎn)相關(guān)生產(chǎn)數(shù)據(jù)根據(jù)篩選出的工藝條件，在成都恩威制藥集團研究所中試中心進行放大中試生產(chǎn)，連續(xù)試制三批中試樣品，中試生產(chǎn)數(shù)據(jù)見下表。
表12-38 中試生產(chǎn)數(shù)據(jù)

結(jié)果表明，該工藝連續(xù)生產(chǎn)的穩(wěn)定性好，工藝條件易控制可行。設(shè)備為通用制藥設(shè)備，適合工業(yè)生產(chǎn)。
中試樣品進行質(zhì)量考察，符合質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)要求，檢查結(jié)果見下表。
表12-39 中試成品質(zhì)量檢驗結(jié)果

以上工藝表明
本品按中國藥典2000年版制劑通則膠囊劑項下有關(guān)規(guī)定、本品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)草案、中國藥典2000年版微生物限度檢查法進行檢查，結(jié)果符合規(guī)定。
本制劑工藝穩(wěn)定，重現(xiàn)性較好。
三批中試樣品的異鼠李素-3-O-新橙皮糖苷轉(zhuǎn)移率分析(1)030805共投藥材20kg，其中蒲黃10kg，蒲黃藥材中異鼠李素-3-O-新橙皮糖苷含量為0.19％，故應(yīng)含異鼠李素-3-O-新橙皮糖苷19g，共得成品3.84kg，每g顆粒含異鼠李素-3-O-新橙皮糖苷量為3.71mg，故共含異鼠李素-3-O-新橙皮糖苷14.25g，轉(zhuǎn)移率為14.25/19＝75.00％。
(2)030807共投藥材20kg，其中蒲黃10kg，蒲黃藥材中異鼠李素-3-O-新橙皮糖苷含量為0.19％，故應(yīng)含異鼠李素-3-O-新橙皮糖苷19g，共得成品3.92kg，每g顆粒含異鼠李素-3-O-新橙皮糖苷量為3.83mg，故共含異鼠李素-3-O-新橙皮糖苷15.01g，轉(zhuǎn)移率為15.01/19＝79.00％。
(3)030809共投藥材20kg，其中蒲黃10kg，蒲黃藥材中異鼠李素-3-O-新橙皮糖苷含量為0.19％，故應(yīng)含異鼠李素-3-O-新橙皮糖苷19g，共得成品3.86kg，每g顆粒含異鼠李素-3-O-新橙皮糖苷量為3.89mg，故共含異鼠李素-3-O-新橙皮糖苷15.01g，轉(zhuǎn)移率為15.01/19＝79.00％。
前列通爽膠囊，由成都和康藥業(yè)有限責(zé)任公司研制，功能化瘀散結(jié)，通竅利水，主治前列腺增生癥，由成都百康醫(yī)藥工業(yè)藥理毒理研究院承擔(dān)主要藥效學(xué)實驗研究(略去該實驗報告，僅將其“目錄”附后)，報告結(jié)果如下(一)前列腺增生模型試驗(1)丙酸睪丸素致大鼠前列腺增生試驗結(jié)果顯示，6.66和3.33g/kg前列通爽膠囊均可顯著降低前列腺重量和前列腺指數(shù)(P＜0.01)，對模型動物前列腺病理組織變化有顯著改善作用(P＜0.01)。
(2)家兔前列腺增生模型尿流動力學(xué)試驗結(jié)果顯示，6.67～1.67g/kg前列通爽膠囊能顯著改善前列腺增生家兔的排尿功能(P＜0.01)，顯著減小前列腺重量、系數(shù)和體積，改善模型動物前列腺病理組織變化(P＜0.01)。
(二)活血化瘀試驗(1)大鼠血液流變學(xué)試驗顯示，6.67～1.67g/kg前列通爽膠囊分別能明顯、顯著或極顯著降低血瘀模型大鼠全血粘度、血漿粘度和纖維蛋白原等各項血粘度指標(biāo)(P＜0.05、P＜0.01或P＜0.001)，顯著改善血瘀模型大鼠血液粘滯的狀態(tài)。
(2)改善小鼠微循環(huán)障礙試驗顯示，6.67～3.33g/kg前列通爽膠囊具有明顯增加小鼠耳廓毛細血管網(wǎng)交點開放數(shù)(P＜0.05)，明顯或顯著對抗耳廓微靜脈和微動脈血管收縮，加快血流速度(p＜0.05和P＜0.01)，改善血流流態(tài)的作用(P＜0.05、P＜0.01或P＜0.001)。
(3)抗小鼠尾血栓形成試驗顯示，6.67～1.67g/kg前列通爽膠囊對角叉菜所致小鼠尾血栓形成均有極顯著、顯著或明顯抑制作用(P＜0.001、P＜0.01或P＜0.05)，最大血栓形成抑制率為70.11％。
(三)泌尿系統(tǒng)功能試驗(1)大鼠利尿試驗顯示，6.67～1.67g/kg前列通爽膠囊均不能明顯增加大鼠尿量(P＞0.05)。
(2)尿液成分分析試驗顯示，6.67～1.67/kg前列通爽膠囊分別能極顯著或明顯升高尿液PH值(P＜0.001或P＜0.05)，對大鼠尿液比重、尿膽原、尿糖、膽紅素、酮體、紅細胞、蛋白、亞硝酸鹽和白細胞均無明顯影響(P＞0.05)。
(四)抗炎試驗顯示6.67和3.33g/kg前列通爽膠囊均能顯著抑制小鼠棉球肉芽增生腫脹(P＜0.01)，但6.67～1.67g/kg前列通爽膠囊對二甲笨所致小鼠耳腫脹和角叉菜膠所致大鼠足腫脹均沒有明顯抑制作用(P＞0.05)。
(五)鎮(zhèn)痛試驗顯示6.67和3.33g/kg前列通爽膠囊分別能明顯減少醋酸所致的小鼠扭體次數(shù)(P＜0.05)，分別能明顯和顯著延長疼痛發(fā)作的潛伏期(P＜0.05和P＜0.01)，最高鎮(zhèn)痛率可達52.81％。對熱板所致小鼠疼痛有一定抑制的趨勢，但沒有統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)，最大鎮(zhèn)痛率為65.76％。
結(jié)論前列通爽膠囊具有抗前列腺增生，改善模型動物排尿功能，改善血液流變性和微循環(huán)障礙，對抗肉芽組織增生和鎮(zhèn)痛等作用。
同類產(chǎn)品主要從縮小前列腺體積的角度設(shè)計藥效學(xué)實驗方案，再配以鎮(zhèn)痛、抗炎、活血化瘀、利尿等實驗。但前列腺增生癥的基本病理環(huán)節(jié)為增大的前列腺壓迫尿道致后尿道狹窄、彎曲、變長，使尿道阻力增加，膀胱出口梗阻，進而表現(xiàn)為尿線變細、排尿費力、中斷、尿不盡、甚或尿潴留等。其基本的病理改變?yōu)橄履蚵纺蛞旱呐判拐系K，而不是尿液的生成障礙。本研究設(shè)計了睪酮致家兔前列腺增生的膀胱出口梗阻模型，并應(yīng)用先進的尿流動力學(xué)檢測儀檢測該制劑對上述模型尿流率、PQ值(反應(yīng)梗阻的程度)、尿道壓等參數(shù)的影響。其模型的設(shè)計及實驗方法的選擇更符合實際、接近臨床，與同類產(chǎn)品比較有一定的創(chuàng)新性。
本品經(jīng)過詳細的制備工藝研究及中試生產(chǎn)，證實了工藝是科學(xué)、可行的，藥效學(xué)研究證實本品具有與功能主治一致的藥理作用，毒理試驗表明本品基本無毒副作用，質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)可基本達到控制本品質(zhì)量的目的，3個月的初步穩(wěn)定性研究表明本品質(zhì)量穩(wěn)定。
該制劑在成都中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院經(jīng)臨床醫(yī)用多年。臨床研究表明其療效確切，起效快，不但可緩解BPH患者的各項主觀癥狀，而且對各項客觀指標(biāo)也有較好的改善作用。
此外，若將提取螻蛄的溶劑乙醇改用醋酸乙酯或石油醚代替，仍屬本專利的保護范圍；對螻蛄醇提液中脂肪的分離，若采用冷凍以外的普通分離方式，如萃取等，應(yīng)落入本發(fā)明的保護范圍；本發(fā)明處方中關(guān)于蒲黃與螻蛄等重量份的提法應(yīng)理解為大致相等，而不是一個絕對化既念(中藥材因產(chǎn)地、季節(jié)等因素的不同，其藥用成分的含量存在著差異)。
附前列通爽膠囊主要藥效學(xué)試驗報告目錄摘要20、前列通爽膠囊主要藥效學(xué)試驗資料及文獻資料20.1抗前列腺增生模型試驗(1)丙酸睪丸素引起大鼠前列腺增生試驗(2)家兔前列腺增生模型尿流動力學(xué)試驗20.2活血化瘀試驗(1)大鼠血液流變學(xué)試驗(2)改善小鼠微循環(huán)障礙試驗(3)抗小鼠尾血除形成試驗20.3改善泌尿系統(tǒng)功能試驗(1)大鼠利尿試驗(2)尿液成分分析試驗20.4抗炎試驗(1)二甲苯所致小鼠耳腫脹試驗
(2)大鼠角叉菜膠性足腫脹試驗(3)小鼠棉球肉芽腫脹試驗20.5鎮(zhèn)痛試驗(1)小鼠熱板鎮(zhèn)痛試驗(2)小鼠扭體鎮(zhèn)痛試驗20.6小結(jié)20.7主要參考資料
權(quán)利要求
1.一種治療前列腺增生癥的藥物，由中藥材的提取物以及輔劑組成，其劑型為口服劑型，其特征是，所述中藥材的提取物分別為蒲黃經(jīng)乙醇的提取物，以及與蒲黃等重量份的螻蛄經(jīng)乙醇提取，再經(jīng)分離脂肪后的提取物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的治療前列腺增生癥的藥物，其特征是，所述中藥材的提取物分別為蒲黃經(jīng)8-10倍量的60％-95％的乙醇的提取物，以及相應(yīng)螻蛄經(jīng)8-10倍量的60％-90％的乙醇提取，再經(jīng)冷凍分離脂肪油層后的提取物。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的治療前列腺增生癥的藥物，其特征是，所述中藥材的提取物分別為蒲黃經(jīng)8-10倍量的60％-80％的乙醇的提取物，以及相應(yīng)螻蛄經(jīng)8-10倍量的70％-80％的乙醇提取，再經(jīng)冷凍分離脂肪油層后的提取物。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的治療前列腺增生癥的藥物，其特征是，所述中藥材的提取物分別為蒲黃經(jīng)10倍量的60％的乙醇的提取物，以及相應(yīng)螻蛄經(jīng)8倍量的80％的乙醇提取，再經(jīng)冷凍分離脂肪油層后的提取物。
5.根據(jù)權(quán)利要求1或2或3或4所述的治療前列腺增生癥的藥物，其特征是，所述劑型為包衣片或膠囊；所述輔劑為微晶纖維素。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的治療前列腺增生癥的藥物，其特征是，所述輔劑還有磷酸氫鈣；所述各組分重量配比如下蒲黃原藥833份，螻蛄原藥833份，微晶纖維素96份，磷酸氫鈣24份。
7.一種如權(quán)利要求1所述的治療前列腺增生癥的藥物的制備方法，其特征是，包括下列步驟a)稱取等重量的中藥材蒲黃、螻蛄備用；b)將上述蒲黃采用8-10倍量的60％-95％的乙醇浸泡1-2小時，回流提取2-3次，每次1-2小時，過濾，棄去藥渣，合并濾液，濾液回收盡乙醇后，得到蒲黃醇提液；c)將上述螻蛄采用8-10倍量的60％-90％的乙醇浸泡1-2小時，回流提取2-3次，每次1.5-2小時，過濾，棄去藥渣，合并濾液，濾液回收盡乙醇，在1-4℃冷凍8-12小時，分離除去脂肪油層，得到螻蛄去油醇提液；d)將上述蒲黃醇提液和螻蛄去油醇提液分別或者混合進行減壓濃縮，加入輔料，再經(jīng)干燥后，制成口服劑型。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的治療前列腺增生癥的藥物的制備方法，其特征是，包括下列步驟a)稱取等重量的中藥材蒲黃、螻蛄備用；b)將上述蒲黃用濾布包裹，并采用8-10倍量的60-80％的乙醇浸泡1-1.5小時，回流提取2-3次，每次1小時，過濾，濾液回收盡乙醇后，得到蒲黃醇提液；c)將上述螻蛄采用8-10倍量的70％-80％的乙醇浸泡1-2小時，回流提取2-3次，每次1.5小時，過濾，棄去藥渣，合并濾液，濾液經(jīng)回收盡乙醇，在1-4℃冷凍12小時，分離除去脂肪油層，得到螻蛄去油醇提液；d)將上述蒲黃醇提液和螻蛄去油醇提液分別或者混合進行減壓濃縮，加入輔料，再經(jīng)干燥后，制成口服劑型。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的治療前列腺增生癥的藥物和制備方法，其特征是，包括下列步驟a)稱取等重量的中藥材蒲黃、螻蛄備用；b)將上述蒲黃用濾布包裹，并采用10倍量的60％的乙醇浸泡1小時，回流提取3次，每次1小時，過濾，棄去藥渣，合并濾液，濾液經(jīng)回收盡乙醇后，得到蒲黃醇提液；c)將上述螻蛄采用8倍量的80％的乙醇浸泡1小時，回流提取2次，每次1.5小時，過濾，棄去藥渣，合并濾液，濾液經(jīng)回收盡乙醇后，在1-4℃冷凍12小時，分離除去脂肪油層，得到螻蛄去油醇提液；d)將上述蒲黃醇提液和螻蛄去油醇提液分別或者混合，在溫度為70-80℃，真空度0.02-0.04MP下進行減壓濃縮，加入重量比為4∶1的微晶纖維素和磷酸氫鈣作為輔料，再經(jīng)干燥后，粉碎制粒，制成膠囊。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種治療前列腺增生癥的藥物及其制備方法。由中藥材的提取物以及輔劑組成，該中藥材提取物分別是蒲黃經(jīng)乙醇的提取物以及與蒲黃等重量份的螻蛄經(jīng)乙醇提取，再經(jīng)分離脂肪后的提取物。分別以8－10倍量的60－95％的乙醇浸取蒲黃制得蒲黃醇提液，以及以8－10倍量的60－90％的乙醇浸取螻蛄，經(jīng)分離除去脂肪，得到螻蛄去油醇提液。再將二者減壓濃縮，加入輔料，干燥后制成口服劑型。本發(fā)明經(jīng)臨床應(yīng)用證明，療效確切，起效快，可緩解前列腺增生癥患者各項主觀癥狀，而且對各項客觀指標(biāo)也有較好的改善作用。
文檔編號A61P13/00GK1583029SQ20041002269
公開日2005年2月23日 申請日期2004年6月4日 優(yōu)先權(quán)日2004年6月4日
發(fā)明者邵繼春, 陳謹, 李文軍 申請人:成都和康藥業(yè)有限責(zé)任公司