專利名稱：醋酸亮丙瑞林固體脂質納米?？诜苿┘捌渲苽浞椒?br> 技術領域：
本發(fā)明屬于多肽類化合物的固體脂質納米粒口服制劑及其制備方法，尤其是促性腺激素釋放激素類似物醋酸亮丙瑞林的固體脂質納米粒制劑及其制備方法。
背景技術：
人工合成促性腺激素釋放激素(GnRH)類似物是GnRH拮抗劑，屬于多肽類藥物，其吸收特征是半衰期短、血漿清除率高、分子量大、透膜能力差、易受體內酶和細菌以及體液的破壞、非注射給藥生物利用度低，一般都僅為百分之幾，如狗口服醋酸亮丙瑞林的生物利用度低于3％。醋酸亮丙瑞林是GnRH類似物，短時期作用能刺激性腺激素分泌，從而提高血中睪酮和二氫睪酮的濃度。用藥一周后，受體數目減少，促性腺激素分泌減少。用藥2-4周后，睪酮和二氫睪酮的濃度降至去勢水平。本品適用于不能或不愿作睪丸切除的前列腺患者，對乳癌也有療效。醋酸亮丙瑞林口服給予大鼠和人后，由于易遭受小腸中胰凝乳蛋白酶等酶的降解以及對生物膜的通透性差等原因，血藥濃度大多低于0.2ng/ml，口服無效。
目前，研究其口服給藥劑型仍較少。雖然在制備醋酸亮丙瑞林的口服制劑時，應用蛋白酶抑制劑、膽鹽、絡合劑等可以抑制酶的活性，使用滲透促進劑能夠提高藥物的吸收。但是蛋白酶抑制劑的長期應用可能會引起胃腸道正常生理尤其是消化功能的紊亂，小分子滲透促進劑的促吸作用與小腸生化和組織損傷有很大關系。
固體脂質納米粒與以磷脂為主要成分的脂質體雙分子層結構不同，固體脂質納米粒是由多種類脂材料如脂肪酸、脂肪醇、脂肪酸酯及磷脂等形成的固體顆粒，主要適合于難溶性藥物的包裹，用作靜脈注射或局部給藥。固體脂質納米粒用作水溶性多肽和蛋白質載體的研究較少，而且包封率低。

發(fā)明內容
本發(fā)明要解決的技術問題在于研究固體脂質納米粒作為水溶性多肽類大分子藥物的口服給藥載體。針對水溶性多肽醋酸亮丙瑞林的化學結構與理化性質，篩選合適的類脂材料與溶劑系統，研究類脂材料之間的協同與配比，進一步增加水溶性藥物的包封率。最終使藥物能夠持續(xù)緩慢釋放，提高血藥濃度、延長在血液中循環(huán)時間，顯著提高了醋酸亮丙瑞林的口服吸收生物利用度。本發(fā)明要解決的技術問題還涉及水溶性多肽醋酸亮丙瑞林固體脂質納米粒的制備方法，包括其的凍干制劑。
為解決上述問題，本發(fā)明提供如下技術方案。
一種醋酸亮丙瑞林的固體脂質納米粒，按重量計包括醋酸亮丙瑞林1份、脂肪酸1-100份、磷脂2-100份，含0.1％-5％親水性表面活性劑的pH3-6.9的磷酸鹽緩沖液適量。
當普朗流尼、吐溫80、芐澤、賣澤等親水性表面活性劑溶解于pH值范圍在3-6.9的緩沖液中，保證一分子醋酸亮丙瑞林攜帶一個或兩個單位正電荷，有利于藥物包封。
本發(fā)明可以使用常用的磷脂，包括大豆卵磷脂、蛋黃卵磷脂或合成磷脂。磷脂中磷脂酰膽堿的含量可在76％-100％間，優(yōu)選純度＞93％。
所述固體脂質納米?？梢允谴姿崃帘鹆?份、脂肪酸10-80份、磷脂10-80份、含1％-3％親水性表面活性劑的pH4.5-6.0磷酸鹽緩沖液適量，丙酮和/或氯仿適量。
所述固體脂質納米粒較好的配比是醋酸亮丙瑞林1份、脂肪酸20-60份、磷脂20-70份；脂肪酸選自硬脂酸、肉豆蔻酸、棕櫚酸、花生酸中的一種或幾種；磷脂選自大豆卵磷脂、蛋黃卵磷脂、合成磷脂中的一種或幾種；親水性表面活性劑選自普朗流尼、吐溫80、芐澤、賣澤中的一種或幾種；丙酮和氯仿比例為1-9∶9-1。
所述固體脂質納米粒更為理想的配比是醋酸亮丙瑞林1份、脂肪酸25-50份、磷脂30-60份；磷酸鹽緩沖液pH5.0-5.6；丙酮和氯仿比例為8-5∶2-3；脂肪酸選自硬脂酸；磷脂選自大豆卵磷脂、棕櫚酰磷脂酰膽堿；親水性表面活性劑選自普朗流尼和/或吐溫80。
本發(fā)明固體脂質納米粒最佳配比是醋酸亮丙瑞林1份、脂肪酸20-40份、磷脂20-40份。
前述固體脂質納米粒的制備方法包括如下步驟將按重量計醋酸亮丙瑞林1份、脂肪酸1-100份、磷脂2-100份，加熱至70-85℃形成油相；將1％-5％親水性表面活性劑溶解在70-85℃的pH3-6.9的磷酸鹽緩沖液中形成水相，在攪拌下將油相加至水相中形成初乳后，可采用高壓乳勻或乳化沉淀的方法，冷卻后形成醋酸亮丙瑞林的固體脂質納米粒，冷凍干燥或在3-5℃條件下保存。所述制備方法中，可以將溶解脂肪酸1-100份和磷脂2-100份的丙酮和/或氯仿溶液，加入含醋酸亮丙瑞林1份的水液，形成初乳，再將初乳加至含有1％-5％表面活性劑的pH3-6.9磷酸鹽緩沖液中，3-5℃條件下乳化，得含醋酸亮丙瑞林的固體脂質納米粒，冷凍干燥或3-5℃條件下保存。
前述固體脂質納米粒的凍干粉，基本上由醋酸亮丙瑞林的固體脂質納米粒與凍干劑右旋糖酐、單糖、雙糖和/或多糖組成；凍干劑的量按脂肪酸和磷脂的總重量計，1份總重量加入0.05-4.0份的凍干劑；較好的重量配比是，1份總重量加入0.2-1.0份的甘露醇和/或葡萄糖。
所述固體脂質納米粒的凍干粉的制備方法，取醋酸亮丙瑞林的固體脂質納米粒與凍干劑右旋糖酐、單糖、雙糖和/或多糖；凍干劑的量按脂肪酸和磷脂的總重量計，1份總重量加入0.05-4.0份的凍干劑，溶解后，冷凍干燥。
一種醋酸亮丙瑞林固體脂質納米粒的制備方法，經下述步驟制備，將亮丙瑞林1份、硬脂酸1-100份及磷脂5-100份，加熱至80℃形成油相，將水溶性表面活性劑(1％-5％)溶解在80℃緩沖液(pH3-6.9)中，在攪拌下將油相加至水相中，形成初乳。然后以高壓乳勻等方法進行分散。冷卻后形成硬脂酸納米粒。冷凍干燥或在4℃條件下保存。較好的亮丙瑞林固體脂質納米粒的制備方法是，將亮丙瑞林1份、硬脂酸10-30份及磷脂(5-40份)加熱至80℃形成油相，將水溶性表面活性劑(1％-2％)溶解在80℃磷酸鹽緩沖液(pH4-6.9)中，在攪拌下將油相加至水相中，形成初乳。然后以高壓乳勻等方法進行分散。冷卻后形成硬脂酸納米粒。冷凍干燥或在4℃條件下保存。
由于醋酸亮丙瑞林是堿性藥物，本發(fā)明選擇脂肪酸，而非脂肪醇或脂肪酸酯(例如山崳酸甘油酯)，作為納米粒的骨架材料，通過醋酸亮丙瑞林與脂肪酸形成離子對來提高其包封率。本發(fā)明采用的磷酸鹽緩沖液的pH值低于7，保證醋酸亮丙瑞林攜帶一個或兩個單位正電荷，有利于形成離子對。在處方中加入大量磷脂，改善納米粒強烈疏水性，進一步增加水溶性藥物的包封。通過納米粒的空間位阻來減少藥物的酶解，利用納米粒的親脂性和小粒徑通過淋巴循環(huán)增加藥物的吸收。納米粒中的藥物持續(xù)緩慢釋放，提高血藥濃度、延長在血液中循環(huán)時間，從而提高了醋酸亮丙瑞林的口服吸收生物利用度。
所述醋酸亮丙瑞林固體脂質納米粒的凍干粉，其特征在于包封率為70％-90％，因為本發(fā)明的優(yōu)點就是包封率提高，粒徑為20nm-1μm。納米粒中的藥物持續(xù)緩慢釋放，提高血藥濃度、延長在血液中循環(huán)時間，從而提高醋酸亮丙瑞林口服吸收生物利用度。
本發(fā)明醋酸亮丙瑞林固體脂質納米粒給大鼠灌胃給藥后，與皮下注射亮丙瑞林相比，相對生物利用度為12.47±1.75％，顯示出較平穩(wěn)和緩釋的血藥濃度經時變化，平均駐留時間為2.71±0.05h。如果灌胃給予亮丙瑞林溶液劑，則相對生物利用度只有0.85±0.59％。
本發(fā)明還解決了所述醋酸亮丙瑞林固體脂質納米粒及其凍干粉的可工業(yè)化生產的制備方法。


圖1、亮丙瑞林固體脂質納米粒以及亮丙瑞林溶液灌胃后與普通注射劑大鼠皮下注射的經時曲線(n＝3)具體實施方式
實施例1將醋酸亮丙瑞林10mg，硬脂酸100mg及大豆卵磷脂100mg加熱至80℃形成油相，將水溶性表面活性劑Tween 80(1％)溶解在80℃等滲磷酸鹽緩沖液(pH5.0)中形成水相，在攪拌下將油相加至水相中，形成初乳。然后以高壓乳勻等方法進行分散。冷卻后形成硬脂酸納米粒。加入甘露醇(3％)，溶解后冷凍干燥。將冷凍干燥的固體脂質納米粒在40℃貯存3個月后，醋酸亮丙瑞林含量為95.5％，且加入水重組得到的納米粒包封率為76％，粒徑為250nm。
實施例2將醋酸亮丙瑞林5mg溶解于水溶液(0.5ml)中，棕櫚酸100mg及蛋黃卵磷脂150mg溶于丙酮與氯仿(9∶1)的混合溶劑10ml，將醋酸亮丙瑞林水溶液加入含硬脂酸、磷脂的丙酮與氯仿混合溶劑中形成初乳，再滴加至含普羅流尼188(2％)的磷酸鹽緩沖液(pH5.6，40ml)中，4℃條件下乳化0.5h，繼續(xù)攪拌4h即得。加入葡萄糖(6％)，溶解后冷凍干燥。將冷凍干燥的固體脂質納米粒在室溫貯存1年后，醋酸亮丙瑞林含量為99.5％，且加入水重組得到的納米粒包封率為82％，粒徑為160nm。
實施例3將醋酸亮丙瑞林5mg，硬脂酸100mg及棕櫚酰磷脂酰膽堿50mg加熱至80℃形成油相，將水溶性表面活性劑賣澤(1.6％)溶解在80℃磷酸鹽緩沖液(pH6.0)中形成水相，在攪拌下將油相加至水相中，形成初乳。然后以高壓乳勻等方法進行分散。冷卻后形成硬脂酸納米粒混懸液。4℃保存半年，納米粒包封率為73％，粒徑為340nm。
實施例4醋酸亮丙瑞林固體脂質納米粒大鼠體內藥代動力學性質的考查a.給藥與取血方案15只大鼠禁食過夜，分為3組，每組5只，一組皮下注射醋酸亮丙瑞林溶液(113μg/kg)作為陽性對照；一組灌胃給予醋酸亮丙瑞林溶液(1.5mg/kg)作為陰性對照；一組灌胃給予硬脂酸納米粒(1.5mg/kg)。于不同時間0，0.5，1，1.5，2，4，6，8，12，24小時眼底靜脈叢取血0.5ml，離心取血清，應用放射免疫法測血清濃度。
b.經時曲線，參見圖1。
本發(fā)明醋酸亮丙瑞林固體脂質納米粒給大鼠灌胃給藥后，在0.5小時內到達血藥濃度峰值4.32±0.66ng/ml，1hr后血藥濃度降至2.77±1.11ng/ml，但維持該血藥濃度至4hr后才下降，顯示出較平穩(wěn)和緩釋的血藥濃度經時變化，平均駐留時間為2.71±0.05h。與皮下注射醋酸亮丙瑞林相比，相對生物利用度為12.47±1.75％。而灌胃給予醋酸亮丙瑞林溶液劑，相對生物利用度只有0.85±0.59％。
權利要求
1.一種醋酸亮丙瑞林的固體脂質納米粒，按重量計包括醋酸亮丙瑞林1份、脂肪酸1-100份、磷脂2-100份，含0.1％-5％親水性表面活性劑的pH3-6.9的磷酸鹽緩沖液適量。
2.權利要求1所述固體脂質納米粒，其特征在于醋酸亮丙瑞林1份、脂肪酸10-80份、磷脂10-80份、含1％-3％親水性表面活性劑的pH4.5-6.0磷酸鹽緩沖液適量，丙酮和/或氯仿適量。
3.權利要求2所述固體脂質納米粒，其特征在于醋酸亮丙瑞林1份、脂肪酸20-60份、磷脂20-70份；脂肪酸選自硬脂酸、肉豆蔻酸、棕櫚酸、花生酸中的一種或幾種；磷脂選自大豆卵磷脂、蛋黃卵磷脂、合成磷脂中的一種或幾種；親水性表面活性劑選自普朗流尼、吐溫80、芐澤、賣澤中的一種或幾種；丙酮和氯仿比例為1-9∶9-1。
4.權利要求3所述固體脂質納米粒，其特征在于醋酸亮丙瑞林1份、脂肪酸25-50份、磷脂30-60份；磷酸鹽緩沖液pH5.0-5.6；丙酮和氯仿比例為8-5∶2-3；脂肪酸選自硬脂酸；磷脂選自大豆卵磷脂、蛋黃卵磷脂、棕櫚酰磷脂酰膽堿；親水性表面活性劑選自普朗流尼和/或吐溫80和/或賣澤。
5.權利要求4所述固體脂質納米粒，其特征在于醋酸亮丙瑞林1份、脂肪酸20-40份、磷脂20-40份。
6.權利要求1-5之一所述固體脂質納米粒的制備方法，其特征在于包括如下步驟將按重量計醋酸亮丙瑞林1份、脂肪酸1-100份、磷脂2-100份，加熱至70-85℃形成油相；將1％-5％親水性表面活性劑溶解在70-85℃的pH3-6.9的磷酸鹽緩沖液中形成水相，在攪拌下將油相加至水相中形成初乳后，高壓乳勻或乳化沉淀，冷卻后形成醋酸亮丙瑞林的固體脂質納米粒，冷凍干燥或在3-5℃條件下保存。
7.權利要求1-5之一所述固體脂質納米粒的制備方法，其特征在于將溶解脂肪酸1-100份和磷脂2-100份的丙酮和/或氯仿溶液，加入含醋酸亮丙瑞林1份的水液，形成初乳，再將初乳加至含有1％-5％表面活性劑的pH3-6.9磷酸鹽緩沖液中，3-5℃條件下乳化，得含醋酸亮丙瑞林的固體脂質納米粒，冷凍干燥或3-5℃條件下保存。
8.權利要求1-5之一所述固體脂質納米粒的凍干粉，其特征在于基本由醋酸亮丙瑞林的固體脂質納米粒與凍干劑右旋糖酐、單糖、雙糖和/或多糖組成；凍干劑的量按脂肪酸和磷脂的總重量計，1份總重量加入0.05-4.0份的凍干劑。
9.權利要求8所述醋酸亮丙瑞林固體脂質納米粒的凍干粉，其特征在于凍干劑的量按脂肪酸和磷脂的總重量計，1份總重量加入0.2-1.0份的甘露醇和/或葡萄糖。
10.權利要求9所述固體脂質納米粒的凍干粉的制備方法，取醋酸亮丙瑞林的固體脂質納米粒與凍干劑右旋糖酐、單糖、雙糖和/或多糖；凍干劑的量按脂肪酸和磷脂的總重量計，1份總重量加入0.05-4.0份的凍干劑，溶解后，冷凍干燥。
全文摘要
一種醋酸亮丙瑞林固體脂質納米?？诜苿┘捌渲苽浞椒?，按重量計包括醋酸亮丙瑞林1份、脂肪酸1－100份、磷脂2－100份，含0.1％－5％親水性表面活性劑的pH3－6.9的磷酸鹽緩沖液適量；按1份脂肪酸和磷脂總重量加入0.01－2.0份凍干保護劑的比例，制成凍干粉，包封率為70％～90％，粒徑為20nm～1μm；納米粒中的藥物持續(xù)緩慢釋放，血藥濃度提高，在血液中循環(huán)時間延長，從而提高醋酸亮丙瑞林口服吸收生物利用度。
文檔編號A61P11/08GK1555886SQ20041001384
公開日2004年12月22日 申請日期2004年1月8日 優(yōu)先權日2004年1月8日
發(fā)明者平其能, 郭健新, 吳正紅, 宋贇梅 申請人:中國藥科大學