專利名稱：從天然植物中藥有效成分中提取清音利嗓制品藥物的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種天然植物中藥有效成份中提取清音利嗓制品藥物的方法，屬于中藥提純萃取方面技術(shù)。其商品名為“金梔”。
背景技術(shù)：
咽部急慢性炎癥、粘膜糜爛、潰瘍咽部損傷是社會(huì)廣泛而難以治愈的頑固性疾病，人們常用的有清音丸各類含片都不是特效藥，人們迫切希望研制一種即治標(biāo)又治本，標(biāo)本兼治的特效原料藥問世。

發(fā)明內(nèi)容技術(shù)方案包括處方新工藝、工藝流程圖及各種毒理、藥理綜述。
技術(shù)解決方案是本發(fā)明的目的公開一種天然植物中藥有效成份中提取清音利嗓制品藥物的方法。
金銀花9.09％、訶子肉(制)12.13％、玄參6.06％、麥冬9.09％、北豆根6.06％、桔梗6.06％、薄荷葉6.06％、胖大海6.06％、金果欖6.06％、硼砂6.06％、黃連6.06％、射干6.06％、黃芩3.03％、梔子3.03％、錦燈籠3.03％、浙貝母3.03％、甘草3.03％復(fù)方清潔嗓音制品的藥理活性和制造方法中，經(jīng)過幾百次科學(xué)篩選，而使用17種植物復(fù)方，在細(xì)心、嚴(yán)格的條件下，應(yīng)用超臨界流體二氧化碳萃取17種植物揮發(fā)油，通過大孔樹脂吸附、洗脫、分離、純化植物成份，用氣相層析測(cè)定儀器進(jìn)行指痕圖譜定量測(cè)定，以保證制品的工藝穩(wěn)定和制品的質(zhì)量。對(duì)復(fù)方制品進(jìn)行清音、消炎藥理實(shí)驗(yàn)，為臨床治療咽喉腫痛、聲音嘶啞提供藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)依據(jù)，用巴豆油致炎后4小時(shí)內(nèi)造成豚鼠聲帶水腫的實(shí)驗(yàn)表明，復(fù)方制品有一定消炎作用，能使聲音嘶啞的豚鼠數(shù)量減少。病理切片，全鏡下觀察表明，復(fù)方制品可減少炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，減輕間質(zhì)中血管擴(kuò)張水腫，使咽部粘膜正常。對(duì)血管通透性影響的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，復(fù)方制品可降低小鼠血管通透性，減輕炎性分泌物透出，復(fù)方制品兩種劑量組對(duì)大鼠胸腔滲出液體積和胸腔滲出液中白細(xì)胞數(shù)影響，均明顯小于生理鹽水組，表明復(fù)方制品，可抑制大鼠白細(xì)胞游走，減少炎癥滲出液。對(duì)大鼠毛細(xì)血管通透性的影響的實(shí)驗(yàn)表明，復(fù)方制品能顯著抑制大鼠毛細(xì)血管通透性。
復(fù)方制劑中提取天然植物中藥有效成份中提取清音利嗓制品藥物的方法采用先進(jìn)的大孔樹脂吸附有效成份并使用氣相指痕光譜定量，保證藥品的穩(wěn)定性和高質(zhì)量。
本發(fā)明的創(chuàng)造性通過臨床毒理、藥理來體現(xiàn)。


圖1 本發(fā)明的工藝流程圖。
圖2 臨床對(duì)照?qǐng)DI。
圖3 臨床對(duì)照?qǐng)DII。
圖4 臨床對(duì)照?qǐng)DIII。
圖5 臨床對(duì)照?qǐng)DIV。
圖6 臨床對(duì)照?qǐng)DV。
圖7 臨床對(duì)照?qǐng)DVI。
圖8 臨床對(duì)照?qǐng)DVII。
圖9 臨床對(duì)照?qǐng)DVIII。
圖10 臨床對(duì)照?qǐng)DIX。
圖11 臨床對(duì)照?qǐng)DX。
圖12 臨床對(duì)照?qǐng)DXI。
其工藝流程描述如下(1)本發(fā)明處方金銀花129.8g、訶子肉(制)173.3g、玄參86.5g、麥冬129.8g、北豆根86.5g、桔梗86.5g、薄荷葉86.5g、胖大海86.5g、金果欖86.5g、硼砂86.5g、黃連86.5g、射干86.5g、黃芩43.3g、梔子43.3g、錦燈籠43.3g、浙貝母43.3g、甘草43.3g。
(2)溶劑超臨界萃取溶劑為二氧化碳，其余為水。
(3)提取液棕紅色液體。
揮發(fā)油棕色油狀物。
(4)物理參數(shù)超臨界萃取的壓力為1～10MPa，溫度為20～50℃；水提取、樹脂吸附、噴霧干燥的壓力均為常壓；其中，水提取的溫度為100℃，樹脂吸附的溫度為常溫，噴霧干燥的溫度為80～85℃。
(5)操作過程①金銀花、訶子肉(制)、玄參、麥冬、北豆根、桔梗、薄荷葉、胖大海、金果欖、硼砂、黃連、射干、黃芩、梔子、錦燈籠、浙貝母、甘草藥物破碎成直徑1～2cm的小塊，然后用二氧化碳超臨界萃取設(shè)備提取揮發(fā)油成分，得揮發(fā)油(1)。
②提取揮發(fā)油后的藥材加3倍量水煎煮3小時(shí)，濾過，得濾液(2)；藥渣加2倍量水煎煮2小時(shí)，濾過，得濾液(3)；藥渣再加1倍量水煎煮1小時(shí)，濾過，得濾液(4)。
③合并濾液(2)、(3)、(4)，靜置，取上清液，得提取液(5)。
④將提取液(5)用大孔樹脂進(jìn)行吸附。
⑤用65％乙醇將吸附在樹脂上的化學(xué)成份洗脫至乙醇中，得洗脫液(6)。
⑥減壓回收洗脫液(6)，得濃縮液(7)。
⑦將濃縮液(7)進(jìn)行噴霧干燥，得藥粉，再加入揮發(fā)油(1)，即得。
將金銀花9.09％、訶子肉(制)12.13％、玄參6.06％、麥冬9.09％、北豆根6.06％、桔梗6.06％、薄荷葉6.06％、胖大海6.06％、金果欖6.06％、硼砂6.06％、黃連6.06％、射干6.06％、黃芩3.03％、梔子3.03％、錦燈籠3.03％、浙貝母3.03％、甘草3.03％植物原料，用超臨界二氧化碳萃取，金銀花、訶子肉(制)、玄參、麥冬、北豆根、桔梗、薄荷葉、胖大海、金果欖、硼砂、黃連、射干、黃芩、梔子、錦燈籠、浙貝母、甘草植物揮發(fā)油成分，將氣態(tài)二氧化碳與植物成分分離、精餾后備用。再將金銀花、訶子肉(制)、玄參、麥冬、北豆根、桔梗、薄荷葉、胖大海、金果欖、硼砂、黃連、射干、黃芩、梔子、錦燈籠、浙貝母、甘草植物原料，每100kg加入300kg、200kg、100kg水，在100℃條件，分別提取3小時(shí)、2小時(shí)、1小時(shí)。合并水提取的濾液，通過大孔樹脂填充的柱子，用大孔樹脂吸附，用65％的乙醇將吸附在大孔樹脂上的成分洗脫至乙醇中，與精餾后備用的濾液合并，在85℃條件下，噴霧干燥，用氣相層析測(cè)定儀器進(jìn)行指痕圖譜成分定量測(cè)定后，制備成原料藥。
具體實(shí)施方式
金銀花129.8g、訶子肉(制)173.3g、玄參86.5g、麥冬129.8g、北豆根86.5g、桔梗86.5g、薄荷葉86.5g、胖大海86.5g、金果欖86.5g、硼砂86.5g、黃連86.5g、射干86.5g、黃芩43.3g、梔子43.3g、錦燈籠43.3g、浙貝母43.3g、甘草43.3g。
將金銀花、訶子肉(制)、玄參、麥冬、北豆根、桔梗、薄荷葉、胖大海、金果欖、硼砂、黃連、射干、黃芩、梔子、錦燈籠、浙貝母、甘草植物原料，用超臨界二氧化碳萃取17種植物揮發(fā)油成分，將氣態(tài)二氧化碳與植物成分分離、精餾后備用。再將金銀花、訶子肉(制)、玄參、麥冬、北豆根、桔梗、薄荷葉、胖大海、金果欖、硼砂、黃連、射干、黃芩、梔子、錦燈籠、浙貝母、甘草植物原料，每100kg加入300kg、200kg、100kg水，在100℃條件，分別提取3小時(shí)、2小時(shí)、1小時(shí)。合并水提取的濾液，通過大孔樹脂填充的柱子，用大孔樹脂吸附，用65％的乙醇將吸附在大孔樹脂上的成分洗脫至乙醇中，與精餾后備用的濾液合并，在85℃條件下，噴霧干燥，用氣相層析測(cè)定儀器進(jìn)行指痕圖譜成分定量測(cè)定后，制備成原料藥。
本發(fā)明的創(chuàng)造性通過毒理、藥理臨床來體現(xiàn)，實(shí)審時(shí)補(bǔ)充提供現(xiàn)簡(jiǎn)介如下從天然植物中藥有效成份中提取清音利嗓制品藥物的方法藥理作用金銀花、訶子肉(制)、玄參、麥冬、北豆根、桔梗、薄荷葉、胖大海、金果欖、硼砂、黃連、射干、黃芩、梔子、錦燈籠、浙貝母、甘草植物復(fù)方清潔嗓音制品(簡(jiǎn)稱復(fù)方制品)，對(duì)聲帶水腫模型豚鼠能明顯減少聲音嘶啞動(dòng)物數(shù)，明顯減少咽喉炎癥所致鼻、口腔分泌物，明顯減輕聲帶炎性水腫的病理學(xué)改變。具有顯著的抗炎、消腫作用，能顯著降低大鼠毛細(xì)血管通透性，對(duì)發(fā)熱大鼠具有顯著的解熱作用。對(duì)復(fù)方制品進(jìn)行清音、消炎、藥理實(shí)驗(yàn)，為臨床治療咽喉腫痛、聲音嘶啞提供藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
金銀花、訶子肉(制)、玄參、麥冬、北豆根、桔梗、薄荷葉、胖大海、金果欖、硼砂、黃連、射干、黃芩、梔子、錦燈籠、浙貝母、甘草植物復(fù)方清潔嗓音制品，批號(hào)940702。研細(xì)后配成水懸液供灌胃給藥用。
巴豆油用20％無水乙醇、73％乙醚、5％蒸餾水混合溶媒配成2％巴豆油制劑應(yīng)用。
小鼠、大鼠、Wistar種和豚鼠一、對(duì)聲帶水腫豚鼠聲音嘶啞的影響方法體重420～510克豚鼠隨機(jī)分組，每組雌雄近半。分別腹腔注射復(fù)方制品0.2g/kg、0.1g/kg和同容積生理鹽水每天一次，連注2天。末次給藥后，每鼠均捏壓頸背部皮膚使其嘶叫，進(jìn)行錄音，為致炎前嘶叫聲。末次藥后30分鐘，在不麻醉?xiàng)l件下，于腹側(cè)頸中部切開皮膚約1.5cm，分離肌肉，暴露氣管，將豚鼠倒置使頭部向下，用5號(hào)針頭刺入氣管，向喉部方向快速注射2％巴豆油0.1ml，停留1～2分鐘，其間縫合創(chuàng)口。然后將豚鼠頭部向上，將舌壓住，開口，用小型噴霧器插入口腔，向咽喉部噴霧2％巴豆油一次(約0.08～0.1ml)。致炎后每半小時(shí)向口腔內(nèi)注藥物2ml/kg。令自然吞服，口腔給藥共8次，總藥量為復(fù)方制品0.2g/kg、0.1g/kg，空白對(duì)照組為同容積生理鹽水。24小時(shí)后同前方法腹腔和口腔給藥。按前述方法于致炎后8、24、32小時(shí)進(jìn)行嘶叫錄音，比較各組動(dòng)物聲音嘶啞情況，用卡方法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)；同時(shí)記錄致炎后4、8、24、32小時(shí)鼻、口腔分泌物，按分泌物多少以++++++±-方式記錄，并相應(yīng)以4、3、2、1、0分進(jìn)行記分統(tǒng)計(jì)。32小時(shí)后處死豚鼠，剖取喉頭進(jìn)行聲帶病理切片檢查。
結(jié)果致炎后4小時(shí)內(nèi)就有喉頭水腫所致呼吸困難死亡，24小時(shí)內(nèi)總死亡數(shù)占25％。實(shí)驗(yàn)證明，巴豆油可致豚鼠聲帶水腫，造成多數(shù)豚鼠聲音嘶啞。復(fù)方制品有一定消炎作用，使聲音嘶啞動(dòng)物數(shù)減少(見表1)，復(fù)方制品大劑量組作用明顯，但仍沒達(dá)到統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著水平(P＞0.05)。各組動(dòng)物均于致炎后4小時(shí)鼻、口腔分泌物最多，而后逐漸減輕，給藥各組各時(shí)間分泌物均有減少(見表2)，復(fù)方制品大劑量組較好(P＞0.05)。
各組豚鼠均進(jìn)行聲帶病理切片，光鏡下做組織學(xué)檢查。復(fù)方制品小劑量組將予試的一只豚鼠加進(jìn)去，各組均為8只。結(jié)果生理鹽水即模型組8只中有6只聲帶粘膜下有大量炎細(xì)胞浸潤(rùn)，間質(zhì)疏松，血管擴(kuò)張充血，水腫，有的聲帶腔中可見炎性分泌物，另兩只粘膜亦可見炎細(xì)胞浸潤(rùn)。證明該方法可致豚鼠聲帶產(chǎn)生炎性水腫。從組織學(xué)上看到，復(fù)方制品大劑量組能明顯減輕炎性改變，證實(shí)了以上結(jié)果。
從上述豚鼠產(chǎn)生聲音嘶啞動(dòng)物數(shù)、鼻、口腔分泌物及聲帶病理組織學(xué)變化看出，本發(fā)明具有明顯的清音消炎作用，并看出隨劑量增加作用增強(qiáng)的量效關(guān)系。
表1 復(fù)方制品對(duì)巴豆油所致聲帶水腫豚鼠聲音嘶啞的影響
( )嘶啞動(dòng)物比值相應(yīng)的百分率(％)表2 復(fù)方制品對(duì)喉頭、口腔致炎豚鼠鼻、口腔分泌物的影響
復(fù)方制品對(duì)巴豆油所致聲帶炎癥的影響病理組織檢查，對(duì)豚鼠聲帶炎癥的實(shí)驗(yàn)共分3組2％巴豆油加生理鹽水；2％巴豆油加復(fù)方制品大劑量組；2％巴豆油加復(fù)方制品小劑量組。每組8只豚鼠，給藥32小時(shí)后取豚鼠聲帶，觀察聲帶形態(tài)學(xué)變化。
1.選擇材料豚鼠喉及聲帶組織2.選擇目的觀察復(fù)方制品對(duì)豚鼠聲帶炎的形態(tài)學(xué)變化，取喉頭，10％福爾馬林固定，石臘切片，HE染色，光鏡下觀察。
3.按不同劑量描述如下(1)大劑量組8只鏡下可見有2只聲帶上皮下方可見少許炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，間質(zhì)中血管輕度擴(kuò)張水腫，其它6只聲帶上皮有者偶見炎性細(xì)胞浸潤(rùn)(圖2、3、4、5、6)
(2)小劑量組8只鏡下可見5只聲帶粘膜下炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，血管擴(kuò)張、充血、水腫，其余3只基本正常，粘膜下有者亦偶見炎性細(xì)胞浸潤(rùn)(圖7、8、9、10)(3)生理鹽水組8只鏡下所見6只豚鼠聲帶粘膜下大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，間質(zhì)疏松，血管擴(kuò)張充血、水腫，有者聲帶腔中可見炎性分泌物，另2只粘膜亦可見炎性細(xì)胞浸潤(rùn)(圖11、12)(4)小結(jié)1.生理鹽水對(duì)巴豆油引起豚鼠聲帶炎無治療作用。
2.復(fù)方制品小劑量和清音丸對(duì)巴豆油引起豚鼠聲帶炎有一定治療作用。
3.復(fù)方制品大劑量對(duì)巴豆油引起豚鼠聲帶炎有較好的治療作用。
二、對(duì)血管通透性的影響小白鼠雌雄各半，體重18～22克，隨機(jī)分組。給藥組給予復(fù)方制品2.5g/kg和5.0g/kg，空白對(duì)照組給予等容量生理鹽水，灌胃給藥。于給藥后1小時(shí)，腹腔注射0.7％冰醋酸溶液0.1mg/10g，給冰醋酸后30分鐘后，尾靜脈注射1％伊文思蘭生理鹽水溶液0.1ml/10g，給染料30分鐘后處死動(dòng)物，將37℃生理鹽水5ml注入腹腔，輕揉1分鐘，抽取3ml腹腔液，離心3000轉(zhuǎn)/分，10分鐘，取上清液于721型分光光度計(jì)630nm處測(cè)得E值，由工作曲線求出含量，計(jì)算各組抑制率，結(jié)果見表3。
表4 復(fù)方制品對(duì)大鼠白細(xì)胞游走的影響
表3可見，復(fù)方制品兩種劑量組對(duì)小鼠腹腔液伊文思蘭濃度均明顯低于生理鹽水組(P＜0.05～0.01)，表明復(fù)方制品可降低小鼠血管通透性。
三、對(duì)白細(xì)胞游走的影響大白鼠雌雄兼用，體重240～260克，隨機(jī)分組。給藥組給予復(fù)方制品1.25g/kg和2.5g/kg，空白對(duì)照組給予等容量生理鹽水，灌胃給予。給藥后1小時(shí)，乙醚麻醉，向右側(cè)胸腔內(nèi)注射0.5％角叉菜膠液0.4ml/只，5小時(shí)后處死動(dòng)物，抽取胸腔液，測(cè)體積，計(jì)數(shù)胸腔白細(xì)胞數(shù)，結(jié)果見表4。
表3 復(fù)方制品對(duì)小白鼠血管通透性的影響
**P＜0.05 ***P＜0.01，與生理鹽水組比較表4可見，復(fù)方制品兩種劑量組對(duì)大鼠胸腔滲出液體積和胸腔滲出液中白細(xì)胞數(shù)均明顯小于生理鹽水組(P＜0.25-0.01)，表明復(fù)方制品可抑制大鼠白細(xì)胞游走，減少炎癥滲出液。
四、對(duì)大鼠毛細(xì)血管通透性的影響體重200-250克Wistar種大鼠，雌雄各半，隨機(jī)分組，每組12只。分別灌服復(fù)方制品0.6g/kg、0.3g/kg和同容積生理鹽水，每天一次，連續(xù)給藥3天，末次給藥后1小時(shí)，背部用電推去毛，皮內(nèi)注射50μg/ml磷酸組織胺(PH7.4)0.1ml/只，同時(shí)股靜脈注射1％伊文思蘭生理鹽水溶液5ml/kg，30分鐘后處死大鼠，剝?nèi)√m染皮膚，用21mm打孔器取蘭染區(qū)皮片，剪碎，放入5ml丙酮生理鹽水(7∶3)溶液中，浸泡提取24小時(shí)(多次振搖)，離心，取上清液，補(bǔ)加丙酮生理鹽水至5ml，用721分光光度計(jì)，于620nm處測(cè)定染料吸收度，以吸收度值來比較各組大鼠皮片蘭染程度。
結(jié)果生理鹽水組皮片染料吸收度為0.339，復(fù)方制品組吸收度值均顯著(P＜0.05)降低(見表5)。表明復(fù)方制品能顯著抑制大鼠毛細(xì)血管通透性。
表5 復(fù)方制品對(duì)大鼠毛細(xì)血管通透性的影響
*與生理鹽水組比較P＜0.05討論與小結(jié)一般咽喉炎癥具有咽喉腫痛，聲帶水腫而致聲音嘶啞，并常伴有發(fā)燒等癥。用嘶叫聲音尖脆的豚鼠，經(jīng)氣管向喉頭注射和向咽喉噴霧巴豆油，造成聲帶水腫和咽部炎癥。在致炎后32小時(shí)內(nèi)，生理鹽水組(模型組)可致75％以上豚鼠聲音嘶啞，鼻、口腔分泌物增多，聲帶呈炎性水腫的病理學(xué)改變。復(fù)方制品大劑量組使產(chǎn)生聲音嘶啞動(dòng)物數(shù)明顯減少22.2％和44.4％，鼻、口腔分泌物減少，聲帶炎性水腫的病理改變明顯減輕，證明復(fù)方制品具有清音消炎作用，有一定量效關(guān)系。實(shí)驗(yàn)還證明復(fù)方制品具有顯著降低大鼠毛細(xì)血管通透性，其復(fù)方制品的消炎作用與此作用有關(guān)。
復(fù)方清潔嗓音制品的臨床驗(yàn)證用于咽喉腫痛、音啞聲嘶，臨床觀察急性喉炎100例，驗(yàn)證結(jié)果如下。
診斷標(biāo)準(zhǔn)病史起病急，常有感冒、疲勞，發(fā)聲不當(dāng)，各種物理和化學(xué)刺激，外傷等誘因。
癥狀聲嘶，喉痛，咳嗽，咽癢并伴有發(fā)熱惡風(fēng)，全身不適等。
檢查喉粘膜彌漫性充血，腫脹，聲帶呈紅色，發(fā)聲時(shí)閉合不緊，其表面或有少許分泌物。
診斷時(shí)須有急性病史，聲嘶，喉粘膜充血腫脹等，方可診斷。
病標(biāo)準(zhǔn)根據(jù)上述診斷標(biāo)準(zhǔn)，凡診斷為急性喉炎，體溫37.5℃以下(含37.5℃)。發(fā)病2天以內(nèi)(包括2天)。年齡18-65歲之間病例。
療效判定標(biāo)準(zhǔn)1.臨床痊愈用藥3天以內(nèi)癥狀減輕，5天以內(nèi)癥狀及體征基本消失。
2.顯效用藥5天以內(nèi)癥狀減輕，部分體征消失。
3.有效用藥5天以內(nèi)癥狀及體征減輕。
4.無效用藥5天以內(nèi)癥狀及體征未能消失。
觀察結(jié)果(一)總療效1.兩組總體療效比較(見表6)表6 總療效表
由表1可見，復(fù)方制品組總顯效率為55.0％，對(duì)照組為40.0％，復(fù)方制品組總有效率為84.0％，對(duì)照組為76.7％，兩組總療效經(jīng)Ridit檢驗(yàn)，差異顯著(P＜0.05)，說明復(fù)方制品組優(yōu)于對(duì)照組。
2.兩組除開放病例療效比較(見表7)表7 兩組除開放病例療效比較
由表7可見，兩組除開放病例后，治療組總顯效率為56.7％，總有效率為85.6％。對(duì)照組總顯效率為40.0％，總有效率為76.7％，兩組療效經(jīng)Ridit檢驗(yàn)，有顯著性差異(P＜0.05)，說明復(fù)方制品組療效優(yōu)于對(duì)照組。
(二)兩組起效時(shí)間的比較(見表8)
表8 兩組起效時(shí)間的比較
兩組起效時(shí)間經(jīng)t檢驗(yàn)，P＜0.01，兩組有非常顯著性差異，復(fù)方制品組明顯優(yōu)于對(duì)照組。
(三)主要癥狀體征緩解情況1.兩組主要癥狀療效比較(見表9)表9 兩組主要癥狀療效的比較
由表9可見，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)X2檢驗(yàn)，復(fù)方制品組對(duì)輕型聲嘶、喉痛、咽干的消退作用明顯優(yōu)于或優(yōu)于對(duì)照組，P＜0.001或P＜0.05。
兩組對(duì)其它癥狀的改善作用相近，提示復(fù)方制品對(duì)輕度聲嘶、喉痛、咽干的治療作用優(yōu)于對(duì)照組。
2.兩組體征療效的比較(見表10)
表10 兩組主要體征療效的比較
由表10可見，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)X2檢驗(yàn)，復(fù)方制品組對(duì)輕、中、重度喉粘膜紅腫、聲帶充血的消退作用均明顯優(yōu)于或優(yōu)于對(duì)照組，P＜0.001或P＜0.05。提示復(fù)方制品對(duì)體征具有良好的改善作用。
理化檢查結(jié)果1.白細(xì)胞增高病例治療前后比較(見表11)表11 白細(xì)胞增高病例治療前后均數(shù)
表11、表12白細(xì)胞增高病例治療前后比較有顯著差異(P＜0.05)。
2.體溫療前、療后變化比較表12 兩組體溫療效比較
由表12可見，治療組療前、療后體溫變化經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，P＜0.01，有非常顯著性差異，說明復(fù)方制品組對(duì)體溫的療效顯著。
3.安全性檢測(cè)結(jié)果表13 安全性檢測(cè)結(jié)果
從表13肝功、尿素氮、尿常規(guī)檢查結(jié)果看，治療前與治療后均正常。血常規(guī)治療前WBC增高例數(shù)24例，治療后增高例數(shù)降至5例。
臨床對(duì)心臟不良反應(yīng)進(jìn)行了心悸、胸悶、氣短等癥狀方面觀察，結(jié)果表明無1例出現(xiàn)上述癥狀，提示復(fù)方制品對(duì)心臟無不良影響。
(四)副作用與不良反應(yīng)應(yīng)用復(fù)方制品期間，未發(fā)現(xiàn)任何毒副作用和不良反應(yīng)。
討論與結(jié)論1.總療效總顯效率55.0％，總有效率84.0％。
2.復(fù)方制品對(duì)急性喉炎之輕度聲嘶、喉痛、咽干及體征有顯著的改善作用。
3.復(fù)方制品治療急性喉炎病情程度與療效無顯著性差異。但從顯效率或總有效率來看，病情輕型優(yōu)于中、重型。
4.從治療時(shí)間與療效關(guān)系看，治療5天的療效明顯優(yōu)于3天的療效(P＜0.05)。
5.理化檢查結(jié)果證實(shí)，服食復(fù)方制品患者治療前后肝功、尿素氮、尿常規(guī)無變化，提示臨床用藥安全。白細(xì)胞計(jì)數(shù)(白細(xì)胞增高例數(shù))均值治療后較治療前顯著降低，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)t檢驗(yàn)(P＞0.05)，有顯著性差異。
6.服食復(fù)方制品期間，未發(fā)現(xiàn)任何毒副作用和不良反應(yīng)。
從天然植物中藥有效成份中提取清音利嗓制品藥物的方法治療急性咽炎30例臨床小結(jié)沈陽醫(yī)學(xué)院治療組與對(duì)照組病例均為隨機(jī)選擇患有急性咽炎的門診或病房住院患者。治療組(本發(fā)明)30例，其中男性9例，女性21例，年齡在18～65歲之間，平均年齡32.87±14.95歲，平均病程1.87±0.35天。病情總平均積分17.93±3.18。對(duì)照組(清音丸)30例，其中男性10例，女性20例，年齡在18～65歲之間，平均年齡39.43±13.75，平均病程1.90±0.31天。病情總平均積分18.90±2.58。
兩組病例在性別、年齡、病程及病情等方面經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理無顯著性差異，具有均衡性和可比性。
表14 兩組病例均衡性比較
由表15可見，治療組痊顯率73.3％，總有效率為93.3％。對(duì)照丸組痊顯率為66.7％，總有效率為90.0％。兩組臨床療效經(jīng)Ridit分析，u＝0.7758，P＞0.05無顯著性差異，提示兩組總體療效相近。
表15 兩組臨床療效比較
Ridit分析u＝0.7758 P＞0.05兩組臨床主要癥狀療效比較治療組咽痛、吞咽后疼痛、咽干及咽部灼熱等4個(gè)主要癥狀治療前平均積分與治療后平均積分比較，經(jīng)T檢驗(yàn)，T值分別為9.042、11.452、8.803和9.062，P值均小于0.001，有非常顯著性差異，提示治療組對(duì)上述4個(gè)癥狀有非常顯著的療效。與對(duì)照組比較，經(jīng)T檢驗(yàn)，咽痛癥狀有顯著性差異，P＜0.05，但對(duì)吞咽后疼痛、咽干和咽部灼熱3個(gè)癥狀無顯著性差異，P＜0.05。提示本發(fā)明對(duì)咽痛癥狀的療效優(yōu)于清音丸。
兩組主要體征療效的比較 治療組咽粘膜、淋巴濾泡、咽側(cè)索及軟腭等4個(gè)主要咽峽部體征治療前平均積分與治療后平均積分比較，經(jīng)T檢驗(yàn)，T值分別為12.833、13.210、14.718、7.509，P值均小于0.001，有非常顯著性差異。提示治療組藥物對(duì)上述4個(gè)咽部體征有非常顯著的療效。與對(duì)照組比較，咽粘膜、淋巴濾泡，P值小于0.05，有顯著性差異外，其它P值均大于0.05。提示治療組藥物對(duì)咽粘膜、淋巴濾泡的療效優(yōu)于對(duì)照組，對(duì)其它體征的療效與對(duì)照組相近。
兩組藥物對(duì)體溫和白細(xì)胞的影響 通過對(duì)體溫和白細(xì)胞升高患者治療前后平均值比較，經(jīng)T檢驗(yàn)，T值分別為6.071、9.556，P值均小于0.001，有非常顯著差異。提示治療組有明顯降低體溫和白細(xì)胞作用。與對(duì)照藥比較，經(jīng)T檢驗(yàn)，白細(xì)胞項(xiàng)，T值為3.286，P＜0.01，有非常顯著性差異，而體溫項(xiàng)，P＞0.05，無顯著性差異。提示治療組藥物降低白細(xì)胞作用優(yōu)于對(duì)照組，對(duì)體溫的改善作用與對(duì)照組相近。
表16 兩組藥物對(duì)體溫、白細(xì)胞的影響
注治療前后比較***P＜0.001，治療組間比較ΔP＜0.01兩組療程與療效的關(guān)系 治療組治療3天后總有效率為73.3％，治療5天后總有效率達(dá)93.3％，治療組不同治療時(shí)間療效經(jīng)Ridit分析，u＝3.9436，P＜0.001，有非常顯著差異，提示治療組治急性咽炎5天后的療效明顯優(yōu)于治療3天的療效。兩組組間治療3天的療效，經(jīng)Ridit分析，P值＜0.05，有顯著差異，提示本發(fā)明對(duì)急性咽炎3天的療效優(yōu)于清音丸。兩組治療5天的療效，經(jīng)Ridit分析，P值＞0.05，無顯著性差異。提示治療組與對(duì)照組對(duì)急性咽炎5天的療效兩者相近。
表17 兩組療程與療效的關(guān)系
組間比較*P＜0.001，組間比較ΔP＜0.05治療組(本發(fā)明)性別與療效的關(guān)系 治療組(本發(fā)明)男性總有效率為88.9％，女性總有效率為95.2％，經(jīng)Ridit分析，u＝2.4242，P＜0.05，有顯著性差異。提示本發(fā)明對(duì)女性患者療效優(yōu)于男性。
表18 治療組(本發(fā)明)不同性別與療效的關(guān)系
Ridit分析*P＜0.05毒副反應(yīng)治療組藥物在觀察治療期間，根據(jù)血、尿、便常規(guī)及肝、腎功能、心電圖等安全性檢查和患者主訴未發(fā)現(xiàn)毒副作用和不良反應(yīng)。
討論與小結(jié)1.本發(fā)明經(jīng)30例臨床觀察并與清音丸對(duì)照比較，結(jié)果顯示兩種藥物的總有效率分別為93.3％、90.0％；痊顯率分別為73.3％、66.7％，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，均無顯著性差異，說明兩藥總體療效基本相同。
2.本發(fā)明對(duì)咽痛、吞咽后疼痛、咽干及咽部灼熱等癥狀有非常明顯的療效，且對(duì)咽痛的療效還優(yōu)于清音丸。
3.本發(fā)明對(duì)咽粘膜、淋巴濾泡增生、咽側(cè)索、軟腭等咽峽部的炎性體征亦有非常明顯的療效。其中對(duì)咽粘膜、淋巴濾泡增生的改善作用優(yōu)于清音丸。
4.本發(fā)明有較為明顯的降低體溫和白細(xì)胞的作用，且降低白細(xì)胞的作用優(yōu)于清音丸，提示有較好的抗炎解熱作用。
5.本發(fā)明服用3天后即有較好的療效，5天的療效優(yōu)于3天的療效，其中3天時(shí)間的療效優(yōu)于清音丸。
6.本發(fā)明對(duì)女性的療效優(yōu)于男性，此結(jié)果可能與男性病例過少有關(guān)。
7.本發(fā)明經(jīng)30例臨床觀察，初步證明其對(duì)急性咽炎有較好的療效。既能改善其癥狀和體征，又有一定的抗炎作用，是一種無毒副作用、無不良反應(yīng)，服用方便的治療急性咽炎的有效中藥制劑。
從天然植物中藥有效成份中提取清音利嗓制品藥物的方法研究綜述本發(fā)明采用目前比較先進(jìn)的超臨界二氧化碳萃取技術(shù)與大孔樹脂吸附技術(shù)，工藝先進(jìn)，能使有效物質(zhì)最大限度的提取出來，又能排除掉無效物質(zhì)的干擾，從而使原料藥的純度大大的提高，相對(duì)其它制備工藝而言，發(fā)揮出更好的療效。
(一)制備工藝的研究(二)制劑的穩(wěn)定性研究通過我們對(duì)本品二年的穩(wěn)定性考察，各項(xiàng)檢測(cè)指標(biāo)均符合制劑穩(wěn)定性方面的要求。
(三)主要藥效學(xué)研究1.對(duì)聲帶水腫豚鼠聲音嘶啞的影響本品明顯的清音消炎作用，使聲音嘶啞動(dòng)物數(shù)減少，鼻、口腔分泌物減少，以大劑量組作用明顯。
2.對(duì)卡拉膠所致大鼠足跖腫脹的影響有顯著抑制腫脹的作用，表明有顯著的消炎作用。
3.對(duì)燙傷所致大鼠足跖腫脹的影響給藥組腫脹程度明顯減小，24小時(shí)后對(duì)腫脹的消退作用更為明顯。作用強(qiáng)于清音丸。
4.對(duì)大鼠毛細(xì)血管通透性的影響抑制大鼠毛細(xì)血管通透性。
5.對(duì)鮮啤酒酵母所致發(fā)熱大鼠的解熱降溫作用給藥組體溫明顯降低，本品降溫作用強(qiáng)于清音丸，且有明顯量效關(guān)系。
6.對(duì)小鼠熱板致痛的鎮(zhèn)痛作用使小鼠痛閾明顯增加，表明本品有明顯鎮(zhèn)痛作用，本發(fā)明略強(qiáng)于清音丸。
7.對(duì)化學(xué)物質(zhì)致痛作用(扭體法)，減少小鼠扭體次數(shù)，表明有明顯鎮(zhèn)痛作用，作用強(qiáng)度與清音丸相近。
8.另外做了對(duì)白細(xì)胞游走的影響及抑菌作用。
(四)動(dòng)物毒理學(xué)研究采用常規(guī)急性毒性試驗(yàn)方法，未能測(cè)出LD50，而測(cè)得小鼠灌胃一次最大耐受量為30g/kg，相當(dāng)于臨床成人一次用量的1250倍以上，提示臨床用藥安全。
(五)臨床研究先后由遼寧省衛(wèi)生廳批定的遼寧省中醫(yī)研究院和遼寧中醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院牽頭，由沈陽軍區(qū)總醫(yī)院、沈陽醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院、中國(guó)醫(yī)科大學(xué)附屬第二臨床醫(yī)院參加，進(jìn)行了本發(fā)明治療急性咽炎100例和急性喉炎100例的臨床觀察，并以清音丸為對(duì)照。
本發(fā)明治療急性咽炎有效率為94％，顯效以上率為76％，療效與清音丸相同，但就改變臨床癥狀(特別是咽痛)方面，本發(fā)明明顯優(yōu)于清音丸。
本發(fā)明治療急性喉炎有效率為84％，總療效優(yōu)于清音丸。
用藥期間未發(fā)現(xiàn)任何毒副作用和不良反應(yīng)。
權(quán)利要求
1.從天然植物中藥有效成份中提取清音利嗓制品藥物的方法，其特征在于將以下17味天然產(chǎn)物金銀花、訶子肉(制)、玄參、麥冬、北豆根、桔梗、薄荷葉、胖大海、金果欖、硼砂、黃連、射干、黃芩、梔子、錦燈籠、浙貝母、甘草，采用先進(jìn)的大孔樹脂吸附有效成份，并使用氣相指痕光譜定量。其重量百分比為由金銀花9.09％、訶子肉(制)12.13％、玄參6.06％、麥冬9.09％、北豆根6.06％、桔梗6.06％、薄荷葉6.06％、胖大海6.06％、金果欖6.06％、硼砂6.06％、黃連6.06％、射干6.06％、黃芩3.03％、梔子3.03％、錦燈籠3.03％、浙貝母3.03％、甘草3.03％。將金銀花、訶子肉(制)、玄參、麥冬、北豆根、桔梗、薄荷葉、胖大海、金果欖、硼砂、黃連、射干、黃芩、梔子、錦燈籠、浙貝母、甘草植物原料，用超臨界二氧化碳萃取17種植物揮發(fā)油成分，將氣態(tài)二氧化碳與植物成分分離、精餾后備用。再將17種植物原料，每100kg加入300kg、200kg、100kg水，在100℃條件，分別提取3小時(shí)、2小時(shí)、1小時(shí)。合并水提取的濾液，通過大孔樹脂填充的柱子，用大孔樹脂吸附，用65％的乙醇將吸附在大孔樹脂上的成分洗脫至乙醇中，與精餾后備用的濾液合并，在85℃條件下，噴霧干燥，用氣相層析測(cè)定儀器進(jìn)行指痕圖譜成分定量測(cè)定后，制備成原料藥；
2.按照權(quán)利要求所述1從天然植物中藥有效成份中提取清音利嗓制品藥物的方法，其特征在于所述的原料藥可以制備成片劑、丸劑、膠囊、口服液及針劑。
全文摘要
本發(fā)明涉及從一種天然植物中藥有效成分中提取清音利嗓制品藥物的方法，屬于天然產(chǎn)物藥理活性和分離與提純天然產(chǎn)物方法。其處方是金銀花9.09％、訶子肉(制)12.13％、玄參6.06％、麥冬9.09％、北豆根6.06％、桔梗6.06％、薄荷葉6.06％、胖大海6.06％、金果欖6.06％、硼砂6.06％、黃連6.06％、射干6.06％、黃芩3.03％、梔子3.03％、錦燈籠3.03％、浙貝母3.03％、甘草3.03％；積極效果是天然植物中藥有效成分中提取清音利嗓制品藥物的方法采用先進(jìn)的大孔樹脂吸附有效成分并使用氣相指痕光譜定量，保證藥品的穩(wěn)定性和高質(zhì)量。
文檔編號(hào)A61P11/04GK1650903SQ20041000115
公開日2005年8月10日 申請(qǐng)日期2004年2月2日 優(yōu)先權(quán)日2004年2月2日
發(fā)明者姜偉 申請(qǐng)人:姜偉