專利名稱：Hpv－16和hpv－18l1vlp疫苗的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及來自人乳頭瘤病毒(HPV)的病毒樣顆粒(VLP)及其醫(yī)藥用途，具體地講，本發(fā)明涉及提供對由異源HPV型引起的感染和/或疾病的保護作用。
背景技術(shù)：
乳頭瘤病毒是小DNA腫瘤病毒，具有高度物種專一性。迄今為止，有記載的個體人乳頭瘤病毒(HPV)基因型已超過100種。HPV通?；?qū)ζつw專一(例如HPV-1和HPV-2)，或者對粘膜表面專一(例如HPV-6和HPV-11)，而且一般會引起持續(xù)數(shù)月或數(shù)年的良性腫瘤(疣)。此類良性腫瘤可能引起患者的不安，但除了少數(shù)例外情況，并不會對生命造成威脅。
一些HPV還與癌有關(guān)，被稱作致癌HPV型。HPV-16和HPV-18與宮頸癌之間存在的關(guān)聯(lián)是HPV與人類癌癥間最為肯定的關(guān)聯(lián)。在發(fā)展中國家，宮頸癌是最為普遍的惡性腫瘤，全球每年大約新增500,000病例。
與癌有特殊關(guān)聯(lián)的其它HPV型別有31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、66和68。
已經(jīng)有人提出，HPV的病毒樣顆粒(VLP)有可能成為治療HPV的疫苗。動物研究表明，VLP對其它HPV型別感染不產(chǎn)生交叉保護作用，參見例如Suzich，J.A.等，Proc Natl Acad Sci，9211553-11557，1995；和Breitburd，Seminars in Cancer Biology，第9卷，第431-445頁，1999。
依然需求抵抗多種HPV型的疫苗。
本發(fā)明滿足了此需求。
發(fā)明概述第一方面，本發(fā)明涉及包含HPV 16 VLP和HPV 18 VLP的混合物在預(yù)防由一組不包括16型和18型在內(nèi)的致癌HPV型中的一種或多種HPV型引起的感染或疾病中的用途。
本發(fā)明還涉及包含HPV 16 VLP和HPV 18 VLP的混合物在制備用于預(yù)防由一組不包括16型和18型在內(nèi)的致癌HPV型中的一種或多種HPV型引起的感染或疾病的藥物中的用途。
第二方面，本發(fā)明涉及包含HPV 16 VLP和HPV 18 VLP的混合物在預(yù)防由以下HPV型的組中的一種或多種HPV型引起的感染或疾病中的用途31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、66、68。
本發(fā)明還涉及HPV 16 VLP和HPV 18 VLP的混合物在制備用于預(yù)防由以下HPV型的組中的一種或多種HPV型引起的感染或疾病的藥物中的用途31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、66、68。
第三方面，本發(fā)明涉及HPV 16 VLP在預(yù)防由以下HPV型的組中的一種或多種HPV型引起的感染或疾病中的用途31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、66、68。
本發(fā)明還涉及HPV 16 VLP在制備用于預(yù)防由以下HPV型的組中的一種或多種HPV型引起的感染或疾病的藥物中的用途31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、66、68。
第四方面，本發(fā)明涉及HPV 18 VLP在預(yù)防由以下HPV型的組中的一種或多種HPV型引起的感染或疾病中的用途31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、66、68。
本發(fā)明還涉及HPV 18 VLP在制備用于預(yù)防由以下HPV型的組中的一種或多種HPV型引起的感染或疾病的藥物中的用途31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、66、68。
更具體地講，本發(fā)明涉及一種誘發(fā)針對一種或多種HPV型的免疫應(yīng)答的方法，所述HPV型選自不包括16型和18型在內(nèi)的所有致癌HPV型，所述方法包括給予受試者一種包含HPV 16 VLP的組合物。優(yōu)選的方法是HPV型別選自以下型別的方法18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、66和68。優(yōu)選的另一種方法是一種誘發(fā)針對一種或多種選自以下HPV型別的免疫應(yīng)答的方法HPV31、HPV33、HPV35、HPV52和HPV58。最優(yōu)選的方法是一種誘發(fā)針對一種或多種選自以下HPV型別的免疫應(yīng)答的方法HPV31、HPV35和HPV58。在另一個實施方案中，用于所述方法的組合物還包含HPV18 VLP和/或佐劑。在又一個實施方案中，所誘發(fā)的免疫應(yīng)答可預(yù)防由所列HPV型引起的感染。
在一個進一步的實施方案中，本發(fā)明涉及一種誘發(fā)針對一種或多種HPV型的免疫應(yīng)答的方法，所述HPV型選自不包括16型和18型在內(nèi)的所有致癌HPV型，所述方法包括給予受試者一種含有HPV 18 VLP的組合物。優(yōu)選的方法是一種誘發(fā)針對一種或多種選自以下HPV型別的免疫應(yīng)答的方法31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、66和68，所述方法包括給予受試者一種包含HPV 18 VLP的組合物。優(yōu)選的方法是一種誘發(fā)針對一種或多種選自HPV45和HPV58的HPV型的免疫應(yīng)答的方法。在另一個實施方案中，用于所述方法的組合物還包含HPV 16 VLP和/或佐劑。在又一個實施方案中，所誘發(fā)的免疫應(yīng)答可預(yù)防由所列HPV型引起的感染。
優(yōu)選的是如上所述的方法，該方法中誘發(fā)針對已確定的具體組別中的1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12等任何HPV型別的免疫應(yīng)答(適合優(yōu)選組的各個型別)。
發(fā)明詳述在本發(fā)明中，我們驚奇地發(fā)現(xiàn)，使用HPV 16 VLP和HPV 18 VLP對由一種或多種致癌HPV型(不包括16型和18型)的組引起的感染提供交叉保護作用，致癌型是那些能夠引起癌癥的型別。致癌型的組別包括以下型別或者由以下型別組成31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68、73、82、26、53和66。特別是，使用HPV 16VLP和HPV 18 VLP對由一組以下HPV型別引起的感染和/或疾病提供交叉保護作用31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、66和68，在下文稱為“高危癌型”組(the group of‘high risk cancertypes’)。對高危癌型的所有組別的保護作用、對某些具體型別以及對各型別的各種組合的保護作用已得到確認。分別使用HPV 16 VLP和HPV 18 VLP，除“同源”保護效果外，還發(fā)現(xiàn)對HPV 16和HPV 18有效果。因此，HPV 16 VLP和HPV 18 VLP兩者都可用于抗HPV 16、HPV 18和其它HPV型的疫苗中。
本文所用的交叉保護作用是指，由一組致癌HPV型引起的感染(偶發(fā)感染或者持續(xù)感染)和/或由HPV感染引起的癌癥的發(fā)生率，在一組接種HPV 16 VLP和/或HPV 18 VLP、優(yōu)選16型和18型的個體中比未接種的組低。對一種型別、或者多種型別的組中的完全交叉保護作用并不是本發(fā)明所必需的——事實上，任何水平的交叉保護作用都會提供一定益處。優(yōu)選所觀察到的交叉保護作用水平是，接種疫苗組的感染和/或疾病要比未接種疫苗組的感染和/或疾病少5％，更優(yōu)選可達10％、可達15％、可達20％、可達25％、可達30％、可達35％、可達40％、可達45％、可達50％、可達55％、可達60％、可達65％、可達70％、可達80％、可達90％或者甚至可達100％。
在接種疫苗組和對照組中，可以通過檢測各種致癌型特異性核酸的存在，對交叉保護作用進行評價。例如可以使用WO03014402及其中的參考文獻中介紹的技術(shù)進行檢測，特別是使用WO99/14377和Kleter等[Journal of Clinical Microbiology(1999)，37(8)2508-2517]中介紹的LiPA系統(tǒng)，對HPV DNA進行非特異性擴增及其后對DNA型別進行檢測，上述文獻的全部內(nèi)容都通過引用結(jié)合到本文中。然而，任何合適的方法都可以用于檢測樣品中的HPV DNA，例如用對每種目標HPV型特異性的引物，通過例如型特異性PCR檢測樣品中的HPV DNA。合適的引物為技術(shù)人員所知，或者如果已知致癌HPV型的序列則可以容易地構(gòu)建。
在女性人群中，優(yōu)選對HPV感染呈血清陰性的或者對HPV 16和HPV 18呈血清陰性的女性，優(yōu)選性行為前的青春期女性中，觀察到適當?shù)慕徊姹Ｗo作用。
交叉保護作用(根據(jù)接種疫苗組與對照組觀察到的保護作用所作出的評價)優(yōu)選見于不是16型和18型的任一種致癌型，例如以下高危癌型的組中的任一個31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、66或68，或者統(tǒng)稱為高危癌型組，例如任何2、3、4、5、6、7、8、9、10或11型，或者事實上是所有的高危癌型。具體考慮了高危癌型中2、3、4、5、6、7、8、9、10和11型的所有可能的組合，而且同樣地，本文也對VLP型別的各種不同“組別”加以逐個考慮，通過與安慰劑組的比較，可以對其交叉保護作用的水平進行分析。優(yōu)選使用HPV 16 VLP和/或HPV 18 VLP對由HPV型的任何這樣的組引起的HPV感染提供預(yù)防作用。
本發(fā)明對由下述HPV型別的優(yōu)選組別引起的感染和/或疾病適當?shù)靥峁┙徊姹Ｗo作用A組 包含一種或多種以下HPV型別的組31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、66、68。
B組 包含31型及一種或多種以下HPV型別的所述A組的組33、35、39、45、51、52、56、58、59、66、68。
C組 包含33型及一種或多種以下HPV型別的所述A組或所述B組的組35、39、45、51、52、56、58、59、66、68。
D組 包含35型及一種或多種以下HPV型別的所述A-C組的組39、45、51、52、56、58、59、66、68。
E組 包含39型及一種或多種以下HPV型別的所述A-D組的組45、51、52、56、58、59、66、68。
F組 包含45型及一種或多種以下HPV型別的所述A-E組的組51、52、56、58、59、66、68。
G組 包含51型及一種或多種以下HPV型別的所述A-F組的組52、56、58、59、66、68。
H組 包含52型及一種或多種以下HPV型別的所述A-G組的組56、58、59、66、68。
I組 包含56型及一種或多種以下HPV型別的所述A-H組的組58、59、66、68。
J組 包含58型及一種或多種以下HPV型別的所述A-I組的組59、66、68。
K組 包含59型及一種或多種以下HPV型的所述A-J組的組66、68。
L組 包含66型及68型的所述A-K組的組。
具體地講，我們已確定了在人群中，與接種包含HPV 16 VLP和HPV 18 VLP的疫苗的女性相比，安慰劑組中感染至少一組高危癌型的可能性要高38％。因此，本發(fā)明特別涉及包含HPV 16 VLP和HPV 18 VLP的組合物在預(yù)防人群被一種或多種高危癌型感染中的用途。在預(yù)防人群被由多種高危癌型組成的組感染時，所述組合物比安慰劑在預(yù)防感染方面，優(yōu)選有效達20％或至少20％(up to or atleast 20％)，更優(yōu)選有效達25％或至少25％，最優(yōu)選有效達30％或至少30％，在預(yù)防感染方面，適當時優(yōu)選有效達34％或至少34％，在預(yù)防感染方面，最優(yōu)選有效達38％或至少38％。
本發(fā)明優(yōu)選涉及一種包含HPV 16 VLP和HPV 18 VLP的組合物，所述組合物用于制備用于預(yù)防由一種或多種HPV 31、33、35、52和58引起的感染的藥物。
我們已確定了在人群中，與接種HPV 16 VLP和HPV 18 VLP疫苗的女性相比，安慰劑組中感染至少一組HPV 31、33、35、52和58型的可能性要高43％。因此，本發(fā)明特別涉及一種包含HPV 16 VLP和HPV 18 VLP的組合物在預(yù)防人群被一種或多種HPV 31、33、35、52和58感染中的用途。在預(yù)防人群被由HPV 31、33、35、52或58組成的組感染時，優(yōu)選所述組合物比安慰劑有效達10％或至少10％，更優(yōu)選有效達15％或至少15％，更優(yōu)選有效達20％或至少20％，有效25％、有效30％、有效37％，或者在預(yù)防感染時，適當有效達43％或至少43％。
本發(fā)明優(yōu)選涉及一種包含HPV 16 VLP和HPV 18 VLP的組合物，所述組合物用于制備預(yù)防由一種或多種HPV 31、35和58引起的感染的藥物。
我們已確定了在人群中，與接種HPV 16 VLP和HPV 18 VLP疫苗的女性相比，安慰劑組中感染至少一組HPV 31、35和58型的可能性要高58％。因此，本發(fā)明特別涉及一種包含HPV 16 VLP和HPV 18 VLP的組合物在預(yù)防人群被一種或多種HPV 31、35和58感染中的用途。在預(yù)防人群被由HPV 31、35或58組成的組感染時，優(yōu)選所述組合物比安慰劑有效達15％或至少15％，優(yōu)選有效達20％或至少20％，優(yōu)選有效可達25％，可達30％、可達35％、可達40％、可達45％、可達49％、可達55％或者甚至更高有效，在預(yù)防感染時，適當有效達58％或至少58％。
本發(fā)明優(yōu)選涉及一種包含HPV 16 VLP和HPV 18 VLP的組合物，所述組合物用于制備預(yù)防由一種或多種HPV 45和59引起的感染的藥物。
具體地講，我們已確定了在人群中，與接種包含HPV 16 VLP和HPV 18 VLP的疫苗的女性相比，安慰劑組中感染至少一組(或多組)HPV 45和HPV 59型的可能性要高33％。因此，本發(fā)明特別涉及一種包含HPV 16 VLP和HPV 18 VLP的組合物在預(yù)防人群被一種或多種HPV 45和HPV 59感染中的用途。在預(yù)防人群被由HPV45和HPV 59組成的組感染時，優(yōu)選所述組合物比安慰劑有效達20％或至少20％，優(yōu)選有效達25％或至少25％，更優(yōu)選有效達30％，預(yù)防感染時，更優(yōu)選有效達33％或至少33％。
本發(fā)明優(yōu)選涉及預(yù)防人群感染HPV的方法，其中接種HPV 16VLP、HPV 18 VLP或其混合物時，可對被下述各種HPV型的各組感染提供交叉保護作用所有致癌HPV型(16型和18型除外)；上述A-L段落所確定的任一組；高危癌型組；HPV 31、35、58的組；HPV 31、33、35、52、58的組；HPV 45和59的組；對各組中的全部成員所獲得的保護作用統(tǒng)統(tǒng)大于安慰劑中所觀察到的保護作用。
優(yōu)選包含HPV 16 VLP和HPV 18 VLP的組合物對至少一種HPV35和HPV 52感染提供交叉保護作用。
優(yōu)選HPV 16 VLP和HPV 18 VLP的組合物也對HPV 16和/或HPV 18感染，優(yōu)選對HPV 16和HPV 18兩者感染提供交叉保護作用。
本發(fā)明還涉及HPV 16 VLP在預(yù)防一種或多種高危癌型組感染中的用途，優(yōu)選所述組由HPV 31、33、35、52、58組成，或者所述組由31、35、58組成。
本發(fā)明還涉及HPV 16 VLP在制備用于預(yù)防一種或多種高危癌型組感染的藥物中的用途，優(yōu)選所述組由HPV 31、33、35、52、58組成，或者所述組由HPV 31、35和58組成。
本發(fā)明還涉及HPV 18 VLP在預(yù)防一種或多種高危癌型組感染中的用途，優(yōu)選所述組由HPV 45和59組成。
本發(fā)明的HPV 16 VLP可以在無任何其它HPV VLP型存在的情況下使用，或者可以與其它HPV VLP型聯(lián)合應(yīng)用。優(yōu)選HPV 16 VLP與HPV 18 VLP聯(lián)合應(yīng)用。
本發(fā)明的HPV 18 VLP可以在無任何其它HPV VLP型存在的情況下使用，或者可以與其它HPV VLP型聯(lián)合應(yīng)用。優(yōu)選HPV 18 VLP與HPV 16 VLP聯(lián)合應(yīng)用。
優(yōu)選HPV 16 VLP、HPV 18 VLP及其組合用于對不同的致癌型、優(yōu)選高危癌型、準確地講是對HPV 31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、66、68型提供保護作用。
除交叉保護作用外，優(yōu)選本發(fā)明的免疫原性組合物，最優(yōu)選HPV16 VLP和HPV 18 VLP的組合，用于成年女性和10歲以上青春期女性的主動免疫，以預(yù)防一種或多種下述感染或疾病HPV-16和HPV-18感染、HPV-16和HPV-18持續(xù)感染和與HPV-16和HPV-18相關(guān)的子宮頸瘤。
本發(fā)明的免疫原性組合物優(yōu)選用于預(yù)防與其它(非HPV 16、18)致癌型感染相關(guān)的子宮頸瘤。
HPV VLP和制備VLP的方法已為本領(lǐng)域所熟知。VLP通?？捎刹《镜腖1結(jié)構(gòu)蛋白和任選的L2結(jié)構(gòu)蛋白構(gòu)建，參見例如WO9420137和WO9405792。任何合適的HPV VLP都可以用于本發(fā)明以提供交叉保護作用，例如L1 VLP或L1+L2 VLP。
優(yōu)選VLP是僅有L1的VLP。
VLP可包含全長L1蛋白。
用于形成VLP的L1蛋白優(yōu)選是截短的L1蛋白。優(yōu)選截短去除了細胞核定位信號。優(yōu)選截短是C末端截短。優(yōu)選C末端截短去除了少于50個氨基酸，更優(yōu)選少于40個氨基酸。當VLP為HPV 16 VLP時，則優(yōu)選C末端截短自HPV 16L1去除了34個氨基酸。當VLP為HPV 18 VLP時，則優(yōu)選C末端截短自HPV 18 L1去除了35個氨基酸。
截短的L1蛋白適宜為功能性L1蛋白衍生物。功能性L1蛋白衍生物能夠產(chǎn)生免疫應(yīng)答(必要時，適當加入佐劑)，所述免疫應(yīng)答能夠識別由全長L1蛋白和/或從L1蛋白獲得的HPV型組成的VLP。
本發(fā)明的VLP也可含有其它類型的功能性蛋白衍生物，包括全長突變體或者截短的HPV L1蛋白，例如缺失、置換或插入突變體。合適的衍生物還包括密碼子優(yōu)化序列。L1蛋白或衍生物也可以是融合蛋白，例如L1蛋白與L2蛋白或早期蛋白的融合蛋白。L1蛋白或功能性蛋白衍生物能夠形成VLP，而且VLP的形成可通過例如電子顯微鏡術(shù)和動態(tài)激光散射等標準技術(shù)進行評價。
VLP可用任何合適的細胞底物例如酵母細胞或昆蟲細胞(例如桿狀病毒細胞)制備，而且VLP的制備技術(shù)已為本領(lǐng)域所熟知，例如WO9913056和US6245568及其中引用的參考文獻，所述文獻的全部內(nèi)容通過引用結(jié)合到本文中。
VLP優(yōu)選通過解裝配和重裝配技術(shù)制備，該技術(shù)可以提供更穩(wěn)定和/或更均質(zhì)的乳頭瘤病毒VLP。例如McCarthy等，1998，“Quantitative Disassembly and Reassembly of Human PapillomavirusType 11 Viruslike Particles in Vitro”J.Virology 72(1)33-41，該文獻中描述了從昆蟲細胞純化的重組L1 HPV 11 VLP的解裝配和重裝配以獲得VLP的均質(zhì)制劑。WO9913056和US6245568也描述了制備HPV VLP的解裝配/重裝配方法。
本發(fā)明HPV VLP的優(yōu)選制備方法可參見WO9913056或US6245568。
本發(fā)明的VLP也可與佐劑混合。本發(fā)明的疫苗可含有合適的佐劑或免疫刺激劑，例如但不限于任何來源的解毒脂質(zhì)A及脂質(zhì)A的無毒衍生物、皂苷以及其它能夠刺激TH1型應(yīng)答的試劑。
長期以來，已知腸細菌脂多糖(LPS)是免疫系統(tǒng)的一種有效的刺激物，雖然其在佐劑中的應(yīng)用由于其毒性效應(yīng)而一直被縮減。Ribi等(1986，Immunology and Immunopharmacology of bacterial endotoxins，Plenum Publ.Corp.，NY，第407-419頁)已經(jīng)描述了通過從還原末端葡糖胺除去核心糖基團和除去磷酸酯而產(chǎn)生的LPS的一種無毒衍生物-單磷酰脂質(zhì)A(MPL)，MPL具有以下結(jié)構(gòu)
一種進一步解毒形式的MPL通過從二糖主鏈的3位除去?；湺a(chǎn)生，稱為3-O-去酰化單磷酰脂質(zhì)A(3D-MPL)。它可以用GB2122204B中所述的方法來純化和制備，該文獻也公開了二磷酰脂質(zhì)A及其3-O-去?；凅w的制備。
一種優(yōu)選形式的3D-MPL為直徑小于0.2μm的小粒徑的乳液形式，其生產(chǎn)方法在WO 94/21292中公開。在WO 9843670A2中描述了包含單磷酰脂質(zhì)A和表面活性劑的水性制劑。
待配制到本發(fā)明的組合物中的細菌脂多糖衍生佐劑可以從細菌來源純化和加工，或者它們可以是合成的。例如，在Ribi等1986(參見上文)中描述了純化單磷酰脂質(zhì)A，而在GB 2220211和US 4912094中描述了來源于沙門氏菌(Salmonella sp.)的3-O-去酰化單磷酰脂質(zhì)A或二磷酰脂質(zhì)A。其它純化的和合成的脂多糖已有描述(Hilgers等，1986.Int.Arch.Allergy.Immunol.，79(4)392-6；Hilgers等，1987，Immunology，60(1)141-6；和EP 0 549 074 B1)。特別優(yōu)選的細菌脂多糖佐劑為3D-MPL。
因此，可以用于本發(fā)明的LPS衍生物是在結(jié)構(gòu)上與LPS或MPL或3D-MPL類似的那些免疫刺激劑。在本發(fā)明的另一方面，所述LPS衍生物可以是?；瘑翁?，它是MPL上述結(jié)構(gòu)的亞部分。
皂苷在文獻Lacaille-Dubois，M和Wagner H.(1996，A review ofthe biological and pharmacological activities of saponins.Phytomedicine第2卷，第363-386頁)中有描述。皂苷是在植物界和海洋動物界中廣泛分布的類固醇或三萜類糖苷。皂苷以在水中形成膠體溶液(振搖時可產(chǎn)生泡沫)以及沉淀膽固醇而著稱。當皂苷接近細胞膜時，可在膜上形成導(dǎo)致細胞膜破裂的孔狀結(jié)構(gòu)。例如，紅細胞的溶解就是此現(xiàn)象的一個實例，這是皂苷的一個確定的特性，但并不是其全部的特性。
已知皂苷為供系統(tǒng)給藥用的疫苗中的佐劑。本領(lǐng)域已對各種皂苷的佐劑和溶血活性進行了廣泛深入的研究(Lacaille-Dubois和Wagner，參見上文)。例如，在US 5,057,540和“Saponins as vaccineadjuvants”，Kensil，C.R.，Crit Rev Ther Drug Carrier Syst，1996，12(1-2)1-55；和EP 0362279B1中描述了Quil A(來源于南美皂樹QuillajaSaponaria Molina的樹皮)及其級分。包含Quil A級分的稱為免疫刺激復(fù)合物(Immune Stimulating Complexes)(ISCOMS)的顆粒性結(jié)構(gòu)具有溶血作用并且已經(jīng)用于疫苗的生產(chǎn)(Morein，B.，EP 0 109 942 B1、WO 96/11711、WO 96/33739)。溶血性皂苷QS21和QS17(Quil A的HPLC純化級分)被描述為有效的系統(tǒng)佐劑，其生產(chǎn)方法在美國專利第5,057,540號和EP 0 362 279 B1中公開。已經(jīng)用于系統(tǒng)疫苗接種研究的其它皂苷包括來源于其它各種植物例如絲石竹屬(Gypsophila)和肥皂草屬(Saponaria)的皂苷(Bomford等，Vaccine，10(9)572-577，1992)。
一種增強性系統(tǒng)包括無毒脂質(zhì)A衍生物和皂苷衍生物的組合，特別是WO 94/00153中公開的QS21和3D-MPL的組合，或者QS21被膽固醇猝滅的較低反應(yīng)原性組合物，正如WO 96/33739中所公開的。
WO 95/17210描述了一種含有QS21和3D-MPL水包油型乳液的特別有效的佐劑制劑，而且是一種優(yōu)選制劑。
因此，在本發(fā)明的一個實施方案中，可提供以解毒脂質(zhì)A或脂質(zhì)A的無毒衍生物為佐劑的疫苗，更優(yōu)選以單磷酰脂質(zhì)A或其衍生物為佐劑的疫苗。
優(yōu)選疫苗還含有皂苷，更優(yōu)選為QS21。
優(yōu)選制劑還含有了水包油型乳劑。本發(fā)明還提供制備疫苗制劑的方法，所述方法包括將本發(fā)明的L2肽和藥用賦形劑例如3D-MPL混合在一起。
根據(jù)本發(fā)明，優(yōu)選存在于加入佐劑的疫苗制劑中的附加成分包括非離子去垢劑，例如在此所描述的辛基酚聚氧乙烯醚和聚氧乙烯酯，特別是叔辛基酚聚氧乙醇(Triton X-100)和聚氧乙烯脫水山梨醇單油酸酯(吐溫80)，以及在此所描述的膽鹽或膽酸衍生物，特別是脫氧膽酸鈉或?；敲撗跄懰徕c。因此，特別優(yōu)選的制劑包括3D-MPL、Triton X-100、吐溫80和脫氧膽酸鈉，其與L2抗原制劑聯(lián)用來提供合適的疫苗。
在本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方案中，所述疫苗包含一種包括膽固醇、皂苷和LPS衍生物的泡狀佐劑制劑。在這一點上，優(yōu)選的佐劑制劑包括含有膽固醇、具有優(yōu)選包含二油酰磷脂酰膽堿的脂質(zhì)雙分子層的單層脂質(zhì)體，其中皂苷和LPS衍生物與脂質(zhì)雙分子層結(jié)合或嵌入其內(nèi)。更優(yōu)選地，這些佐劑制劑含有作為皂苷的QS21以及作為LPS衍生物的3D-MPL，其中，QS21∶膽固醇之比為1∶1至1∶100(重量/重量)，最優(yōu)選為1∶5(重量/重量)。EP 0 822 831 B中描述了此類佐劑制劑，所述文獻的公開內(nèi)容通過引用結(jié)合到本文中。
本發(fā)明的疫苗適合與鋁聯(lián)用，并且適合吸附或者部分吸附在鋁佐劑上。所述佐劑適合為鋁鹽，優(yōu)選與3D MPL聯(lián)用，例如磷酸鋁和3D MPL。氫氧化鋁任選與3D MPL聯(lián)用也是優(yōu)選的。
在本發(fā)明中，最優(yōu)選的是VLP與鋁鹽或者與鋁鹽+3D MPL聯(lián)用。優(yōu)選氫氧化鋁作為鋁鹽。
所述疫苗還可含有作為穩(wěn)定劑的鋁或者鋁化合物。
本發(fā)明的疫苗可通過以下任何途徑供給例如口服、局部、皮下、粘膜(特別是陰道內(nèi))、靜脈內(nèi)、肌內(nèi)、鼻內(nèi)、舌下、真皮內(nèi)及通過栓劑供給。
疫苗還可選擇性與例如早期抗原等其它HPV抗原或者非HPV抗原配制在一起或者共同給藥。這些非HPV抗原可對其它疾病提供適當?shù)谋Ｗo作用，所述其它疾病最優(yōu)選為性傳播疾病，例如單純皰疹病毒、EBV、衣原體和HIV。我們特別優(yōu)選的是，所述疫苗包含gD或其HSV的截短物。這樣的話，該疫苗對HPV和HSV兩者都提供保護作用。
疫苗組分的劑量因個體的病癥、性別、年齡和體重、給藥途徑以及疫苗的HPV的情況而變化。用量還因VLP型別的數(shù)目而變化。遞藥量適合為適于產(chǎn)生免疫性保護應(yīng)答的疫苗量。每劑疫苗適合包含每種VLP 1-100μg，優(yōu)選5-80μg，更優(yōu)選每種VLP 5-30μg，最優(yōu)選每種VLP 5-20μg，每種VLP尤其優(yōu)選為5μg、6μg、10μg、15μg或者20μg。
對于本發(fā)明的所有疫苗，優(yōu)選所述疫苗用于給10-15歲、優(yōu)選10-13歲青春期少女接種。在pap涂片異常，或者在切除由HPV引起的病變的手術(shù)后，或者HPV癌型呈血清陰性以及DNA陰性時，也可將所述疫苗給予成年女性。
所述疫苗優(yōu)選按2劑或3劑方案接種，例如分別按0月、1個月方案或者0月、1個月或6個月方案接種。該疫苗接種方案適合在5-10年后、優(yōu)選10年后進行一次加強注射。
所述疫苗優(yōu)選為液體疫苗制劑，雖然所述疫苗可凍干并在給藥前重建。
本發(fā)明中所用的免疫原(HPV 16 VLP和/或HPV 18 VLP)優(yōu)選作為疫苗使用，也可用合適的賦形劑配制成疫苗。因此，本發(fā)明尤其涉及HPV 16或HPV 18疫苗(例如僅L1的疫苗)在預(yù)防HPV感染中的用途。
因此，參考下述非限制性實施例對本發(fā)明作具體的說明。
實施例1使用HPV 16 L1 VLP和HPV 18 L1 VLP的混合物給年齡介于15-25歲之間的健康女性進行免疫。受試女性為1)HPV-16和HPV-18呈血清陰性；2)對高危HPV宮頸感染呈陰性(通過HPV PCR檢測)；3)一生中有6個或更少性伴侶；4)PAP涂片正常。
所述混合物每劑0.5ml中包含20μg HPV-16 L1 VLP、20μgHPV-18 L1 VLP，并配以佐劑500μg氫氧化鋁及50μg 3D MPL。安慰劑組僅注射500μg的氫氧化鋁。
對高危癌癥HPV型的疫苗功效(V.E.)進行評價，其中V.E.表示疫苗組與安慰劑組比較，對感染的保護作用增加的百分比。
在接種疫苗組和對照組中，可以通過檢測各種致癌型特異性核酸的存在，對交叉保護作用進行評價。例如可以使用WO03014402及其中的參考文獻中介紹的技術(shù)進行檢測，特別是使用WO99/14377和Kleter等[Journal of Clinical Microbiology(1999)，37(8)2508-2517]中介紹的LiPA系統(tǒng)，對HPV DNA進行非特異性擴增及其后對DNA型別進行檢測，上述文獻的全部內(nèi)容都通過引用結(jié)合到本文中。
然而，任何合適的方法都可以用于檢測樣品中的HPV DNA，例如用對每種目標HPV型特異性的引物，通過例如型特異性PCR檢測樣品中的HPV DNA。合適的引物為技術(shù)人員所知，或者如果已知致癌HPV型的序列則可以容易地構(gòu)建。
針對所有12種高危癌型、HPV-16種系相關(guān)型(各組別；31、35和58；以及31、33、35、52和58)和HPV-18種系相關(guān)型(45和59)的感染進行疫苗功效的評價。
對“ITT”(Intention To Treat的縮寫，計劃治療(ITT)人群代表所有接受至少一劑疫苗的個體)進行初步分析。這一分析數(shù)據(jù)見表1。
表2和表3給出的結(jié)果與“ATP”(According To Protocol的縮寫)組即符合該項試驗所有標準的患者有關(guān)。表2為中點分析，其數(shù)據(jù)采自所有患者，在這一時間點至少有50％的人群處于首次疫苗接種后18個月。表3給出了最終結(jié)果，所有數(shù)據(jù)采自首次疫苗接種(0月)后18個月的受試者。在ATP組中，所有患者均在0月、1個月和6個月接受了3劑疫苗，并且在6個月時血清仍呈陰性。
正如表1給出的數(shù)據(jù)所證明的那樣，用HPV 16 VLP和HPV18VLP混合物進行免疫，對其它HPV型別提供了明顯的交叉保護作用。在這一點上，因樣品數(shù)量太少而無法提供精確的統(tǒng)計學分析，然而所得數(shù)據(jù)卻證明了積極的趨勢，并提示用HPV 16 VLP和HPV 18 VLP進行免疫，對其它HPV型別的感染都將有效。
當研究進一步深入時，這一點得到了證實。
表2說明HPV 16和HPV 18對一組高危癌型31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、66和68提供統(tǒng)計學上的顯著性交叉保護作用。
表3說明除HPV-18相關(guān)型(其顯示非常強的趨勢)之外，對以下組別有統(tǒng)計學上的顯著性交叉保護作用HPV 31、35、58；HPV 31、33、35、52、58；和所評價的12種高危HPV型(非HPV-16/18型)。
表1
9、12、15、18個月時從患者中取樣，并且對上述具體型別的HPV感染進行試驗。
表2-三劑后在預(yù)防意外異源感染方面的疫苗功效表2針對HPV-16種系相關(guān)型、HPV-18種系相關(guān)型、HPV-16和/或HPV-18種系相關(guān)型以及不包括HPV-16和HPV-18在內(nèi)的所有高危型感染的疫苗功效-ATP群體(6-18個月)
N＝特定人群的受試者人數(shù)；n＝意外感染HPV的受試者人數(shù)；AR＝發(fā)病率＝n/N；95％CI＝95％置信區(qū)間；下限＝1-exp(log(arv/arp)+1.96*sqrt(1/nV-1/Nv+1/np-1/Np))上限＝1-exp(log(arv/arp)-1.96*sqrt(1/nv-1/Nv+1/np-1/Np))當疫苗組病例數(shù)＝0；下限*＝1-exp(log(arv*/arp*)+1.96*sqrt(1/(nv+0.5)-1/(Nv+0.5)+1/(np+0.5)-1/(Np+0.5)))
上限*＝1-exp(log(arv*/arp*)-1.96*sqrt(1/(nv+0.5)-1/(Nv+0.5)+1/(np+0.5)-1/(Np+0.5)))其中arv＝疫苗接受者的發(fā)病率arp＝安慰劑接受者的發(fā)病率nv＝疫苗接受者的病例數(shù)Nv＝疫苗接受者的病例數(shù)或非病例數(shù)np＝安慰劑接受者的病例數(shù)Np＝安慰劑接受者的病例數(shù)和非病例數(shù)HPV-16相關(guān)型HPV-16種系相關(guān)型35、31、58而不考慮其它HPV型HPV-16相關(guān)型*HPV-16種系相關(guān)型35、31、58、33、52而不考慮其它HPV型HPV-18相關(guān)型HPV-18種系相關(guān)型45、59而不考慮其它HPV型HPV-16和/或HPV-18相關(guān)型HPV-16和/或HPV-18種系相關(guān)型35、31、58、45、59而不考慮其它HPV型HPV-16和/或HPV-18相關(guān)型*HPV-16和/或HPV-18種系相關(guān)型35、31、58、33、52、45、59而不考慮其它HPV型**＝不包括HPV-16和HPV-18在內(nèi)的高危型表3
18個月時從患者中取樣，并且對上述具體型別的HPV感染進行試驗。
權(quán)利要求
1.一種包含HPV 16 VLP和HPV 18 VLP的組合物在制備用于預(yù)防由一組致癌HPV型中的一種或多種HPV型引起的感染和/或疾病的藥物中的用途，所述組不包括HPV 16型和HPV 18型。
2.權(quán)利要求1的組合物在預(yù)防由HPV型31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、66、68的組中的一種或多種HPV型引起的感染和/或疾病中的用途。
3.權(quán)利要求2的用途，用于預(yù)防由HPV 31、HPV 33、HPV 35、HPV 52和HPV 58的組中的一種或多種HPV型引起的感染和/或疾病。
4.權(quán)利要求3的用途，用于預(yù)防由HPV 31、HPV 35和HPV 58的組中的一種或多種HPV型引起的感染和/或疾病。
5.前述權(quán)利要求中任一項的用途，其中就所述組HPV型中的所有成員而論，通過將接種疫苗群體與未接種疫苗群體即安慰劑組進行比較，確定預(yù)防作用的程度。
6.前述權(quán)利要求中任一項的用途，其中所提供的預(yù)防作用比安慰劑至少好15％。
7.前述權(quán)利要求中任一項的用途，其中將所述HPV VLP和佐劑聯(lián)合應(yīng)用。
8.權(quán)利要求7的用途，其中所述佐劑為鋁鹽和3D-MPL的組合。
9.權(quán)利要求8的用途，其中所述佐劑為氫氧化鋁和3D MPL的組合。
10.前述權(quán)利要求中任一項的用途，其中所述VLP包含L1蛋白或其免疫原性片段，但不含有L2蛋白。
11.一種誘發(fā)針對一組致癌HPV型中的一種或多種HPV型的免疫應(yīng)答的方法，所述組不包括HPV 16型和HPV 18型，所述方法包括給予受試者一種包含HPV 16 VLP和HPV 18 VLP的組合物。
12.一種預(yù)防由一組致癌HPV型中的一種或多種HPV型引起感染和/或疾病的方法，所述組不包括HPV 16型和HPV 18型，所述方法包括給予受試者一種包含HPV 16 VLP和HPV 18 VLP的組合物。
13.權(quán)利要求11或12的方法，其中所述HPV型選自31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、66和68型。
14.權(quán)利要求11-13中任一項的方法，其中所述HPV型選自以下的HPV型HPV 31、HPV 33、HPV 35、HPV 52和HPV 58。
15.權(quán)利要求11-14中任一項的方法，其中所述HPV型選自HPV 31、HPV 35和HPV 58。
16.權(quán)利要求11-15中任一項的方法，其中所述組合物還包含佐劑。
17.權(quán)利要求16的方法，其中所述佐劑包括鋁鹽和3D MPL。
18.權(quán)利要求17的方法，其中所述鋁鹽是氫氧化鋁。
19.一種用于預(yù)防受試群體被一種或多種HPV型感染的方法，所述HPV型選自不包括16型和18型在內(nèi)的致癌HPV型，所述方法包括給予受試者一種包含HPV 16 VLP和HPV 18 VLP的組合物，其中給予所述組合物預(yù)防所述群體的感染和/或疾病比給予安慰劑要好，達15％或至少15％。
20.HPV 16 VLP和HPV 18的混合物在制備用于預(yù)防人群被一組不包括16型和18型在內(nèi)的致癌HPV型引起的感染和/或疾病的藥物中的用途，其中所述人群中所觀察到的感染和/或疾病的水平明顯低于安慰劑組所觀察到的水平。
21.一種包含HPV 16 VLP和HPV 18 VLP的疫苗組合物，所述組合物對16型和18型除外的致癌HPV型引起的感染和/或疾病有交叉保護作用。
全文摘要
本發(fā)明涉及應(yīng)用HPV 16 VLP和HPV 18 VLP提供對其它HPV型引起的感染和/或疾病的交叉保護作用。
文檔編號A61K39/12GK1747745SQ200380109729
公開日2006年3月15日 申請日期2003年12月18日 優(yōu)先權(quán)日2002年12月20日
發(fā)明者G·杜賓, B·因尼斯, M·M·斯勞伊, M·A·C·維滕多夫 申請人:葛蘭素史密絲克萊恩生物有限公司