專利名稱：借助梯度的脂質(zhì)體中藥物裝填的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明的優(yōu)先權(quán)本發(fā)明要求2002年11月26日申請(qǐng)的美國臨時(shí)申請(qǐng)?zhí)?0/429,122的優(yōu)先權(quán)。
背景技術(shù)：
脂質(zhì)體是含有包載(entrap)的含水性體積的完全密閉的脂雙層膜。脂質(zhì)體可以是單層脂質(zhì)體(unilamellar vesicles)(具有單一膜雙層)或多層脂質(zhì)體(multilamellar vesicles)(特征在于各自與下一個(gè)通過含水層而分開的多個(gè)膜雙層的洋蔥樣結(jié)構(gòu))。所述雙層由具有疏水性“尾”區(qū)和親水性“頭”區(qū)的兩個(gè)脂單層組成。膜雙層的結(jié)構(gòu)如此，使得脂單層的疏水性(非極性)“尾”朝向脂雙層的中心，而親水性“頭”朝向含水相。
Bangham等(J.Mol.Biol.，1965，13238-252)的最初的脂質(zhì)體制劑涉及將磷脂懸浮于有機(jī)溶劑中，然后將其蒸發(fā)至干，在反應(yīng)容器上形成磷脂膜。接著，加入適當(dāng)量的含水相，使混合物膨脹，并且通過機(jī)械方法分散得到的由多層脂質(zhì)體(MLVs)構(gòu)成的脂質(zhì)體。這種制劑為開發(fā)Papahadjopoulos等(Biochim.Biophys，Acta.，1967，135624-638)描述的小的超聲處理過的單層脂質(zhì)體和大的單層脂質(zhì)體提供了基礎(chǔ)。
制備大單層脂質(zhì)體(LUVs)的技術(shù)，例如反相蒸發(fā)，輸注方法和洗滌劑稀釋可被用來制備脂質(zhì)體。文獻(xiàn)中可以查到有關(guān)綜述文章和制備脂質(zhì)體的其他方法，Liposomes，Marc Ostro，編著，Marcel Dekker，Inc.，New York，1983，第一章。還可以參見Szoka Jr.等，(1980，Ann.Rev.Biophys.Bioeng.，9467)。生成LUVs的特別優(yōu)選的方法描述于Cullis等，PCT公開No.87/00238，1986年1月16日，標(biāo)題是″制備單層脂質(zhì)體的擠出技術(shù)″。
用來制備囊泡的其他技術(shù)包括生成反相蒸發(fā)囊泡(REV)的那些技術(shù)，Papahadjopoulos等，美國專利No.4,235,871。能使用的另一類脂質(zhì)體是特征在于具有基本上相等層狀溶質(zhì)分布的那些。根據(jù)Lenk等人的美國專利No.4,522,803中的定義，這類脂質(zhì)體命名為穩(wěn)定多層脂質(zhì)體(SPLV)，并且如Fountain等人的美國專利No.4,588,578所述，包括單層脂質(zhì)體，和如上所述冷凍并解凍的多層脂質(zhì)體(FATMLV)。
在脂質(zhì)體-藥物送遞系統(tǒng)中，生物活性物質(zhì)、如藥物被包載到脂質(zhì)體中之后對(duì)要治療的患者施用。例如，參見Rahman等，美國專利No.3,993,754；Sears，美國專利4,145,410；Paphadjopoulos等，美國專利No.4,235,871；Schneider，美國專利No.4,224,179；Lenk等，美國專利No.4,522,803；和Fountain等，美國專利No.4,588,578?；蛘?，如果活性物質(zhì)是親脂性的，則它可與脂雙層發(fā)生締合。典型地，術(shù)語″包載″包括脂質(zhì)體含水體積中的藥物以及與脂雙層締合的藥物。
多柔比星是一種廣泛使用的抗腫瘤藥物，屬于真菌波塞鏈霉菌(Streptomyces peucetius)產(chǎn)生的蒽環(huán)類抗生素。多柔比星被用來治療各種腫瘤、白血病、肉瘤和乳腺癌。多柔比星(以及其他抗腫瘤藥物)通常給藥劑量可見毒性包括骨髓抑制、脫發(fā)、粘膜炎和胃腸毒性，包括惡心、嘔吐和厭食。最嚴(yán)重的多柔比星毒性是接受大于每平方米體表面積550mg劑量的患者中1-10％發(fā)生導(dǎo)致充血性心衰的積蓄性劑量依賴性不可逆心肌病。這些毒性嚴(yán)重限制象多柔比星這樣的抗腫瘤藥物的臨床使用。
根據(jù)很多研究人員所確認(rèn)的，使用抗腫瘤物質(zhì)的癌癥治療在很多情況下能通過應(yīng)用傳統(tǒng)方法將抗腫瘤物質(zhì)包載在脂質(zhì)體中包囊來顯著改善，而不是將游離的物質(zhì)直接施用到體內(nèi)。參見，例如，F(xiàn)orssen，等，(1983)，Cancer Res.，43546；和Gabizon等，(1982)，CancerRes.，424734。與直接施用相比，這些物質(zhì)被動(dòng)摻入脂質(zhì)體中能改變它們的抗腫瘤活性、清除率、組織分布和毒性。參見，例如，Rahman等，(1982)，Cancer Res.，421817；Rosa，等，(1982)，Transportin BiomembranesModel Systems and Reconstitution，R.Antoline等，編著，Raven Press，New York.243-256；Rosa，等，(1983)，Pharmacology，26221；Gabizon等，(1983)，Cancer Res.，434730；Forssen等，上文；Gabizon，等，上文；和Olson，等，(1982)，Br.J.Cancer Clin.Oncol.，18167。收集的證據(jù)表明，利用不同組成和大小的脂質(zhì)體，通過引導(dǎo)藥物離開靶器官能減小多柔比星的急性和慢性毒性。例如，已知蒽環(huán)類抗生素柔紅霉素和多柔比星和它們藥學(xué)可接受衍生物和鹽的心臟的毒性能通過被動(dòng)脂質(zhì)體包囊而顯著減小。參見，例如，F(xiàn)orssen，等，上文，Olson等，上文；和Rahman等，上文。這種毒性的緩沖顯示主要由于減小在心臟中的積累，與心臟毒性減小有關(guān)(Rahman等，(1980)，Cancer Res.，401532；Olson等，上文；Berman等，1983，Cancer Res.，435427；和Rahman等，(1985)，Cancer Res.，45796)。這種毒性通常是游離多柔比星積蓄性劑量極限(Minow等，1975，Cancer Chemother。Rep。6195)。在脂質(zhì)體中摻入高毒性抗腫瘤物質(zhì)還能降低這樣的物質(zhì)接觸施用中所涉及的人的風(fēng)險(xiǎn)。
雖然上述研究清楚地確認(rèn)使用脂質(zhì)體包囊的抗腫瘤藥物例如多柔比星的可能性，但是商業(yè)上還沒有獲得上述類型脂質(zhì)體的脂質(zhì)體制劑。例如，這些制劑很多由于與穩(wěn)定性、包載率、規(guī)?；a(chǎn)的可能性以及使用的脂質(zhì)的成本相關(guān)的問題而具有可疑的制藥潛能。另外，遇到了與將藥物進(jìn)行包囊的效率相關(guān)的問題。這樣的問題伴隨著迄今為止使用的被動(dòng)包載方法。
與先前含有抗腫瘤藥物的脂質(zhì)體相關(guān)的另一個(gè)問題是以前抗腫瘤藥物的脂質(zhì)體制劑中沒有一種能完全滿足基本的穩(wěn)定性要求?？鼓[瘤藥物在脂質(zhì)體制劑中的保留通常以小時(shí)計(jì)，而藥物應(yīng)用通常要求一年或更長時(shí)間的穩(wěn)定性。此外，脂質(zhì)成分的化學(xué)穩(wěn)定性由于高比例的非常不飽和脂質(zhì)例如心磷脂而值得懷疑。其他問題包括帶負(fù)電荷脂質(zhì)的高成本和規(guī)?；瘑栴}。因?yàn)榭鼓[瘤藥物例如多柔比星具有兩親性質(zhì)的事實(shí)，它可滲透雙層膜使得脂質(zhì)體制劑由于藥物從囊泡滲漏而不穩(wěn)定(Gabizon等，1982，上文；Rahman等，1985，上文；和Ganapathi等，1984，Biochem.Pharmacol.，33698)。
Mayer等發(fā)現(xiàn)通過使用跨膜離子梯度能減小與抗腫瘤藥物的有效脂質(zhì)體包載相關(guān)的問題(參見PCT申請(qǐng)86/01102，1986年2月27日)。除了誘導(dǎo)多柔比星吸收之外，這樣的跨膜梯度還起到延長藥物在脂質(zhì)體中停留的作用。
據(jù)報(bào)道，在先前靜脈內(nèi)給藥的人臨床試驗(yàn)中，脂質(zhì)體本身沒有明顯毒性。Richardson等，(1979)，Br.J.Cancer 4035；Ryman等，(1983)，″Targeting of Drugs″，G.Gregoriadis，等，編著，pp235-248，Plenum，N.Y.；Gregoriadis G.，(1981)，Lancet 2241，和Lopez-Berestein等，(1985)J.Infect.Dis.，151704。據(jù)報(bào)道，脂質(zhì)體主要在通過sinosoidal毛細(xì)管連接的網(wǎng)狀內(nèi)皮組織器官，例如肝，脾和骨髓中集中，并且由這些器官中的吞噬細(xì)胞吞噬。
利用脂質(zhì)體施用抗腫瘤藥物已經(jīng)產(chǎn)生有關(guān)藥物包囊和包載率以及治療期間藥物釋放的問題。關(guān)于包囊，需要不斷提高包載率以使向患者治療期送遞的脂載量最小化。另外，高包載率意味著只有少量藥物在包囊過程中損失，而當(dāng)與目前癌癥治療中使用的昂貴藥物聯(lián)系在一起時(shí)，這具有非常重要的優(yōu)勢(shì)。關(guān)于藥物釋放，發(fā)現(xiàn)很多抗腫瘤藥物、例如多柔比星在包囊之后從傳統(tǒng)脂質(zhì)體中快速釋放。這樣的快速釋放減小了脂質(zhì)體包囊對(duì)藥效的有益作用，并且加速藥物向循環(huán)中的釋放，引起毒性，因此通常是不期望的。因此，本領(lǐng)域工作者不斷努力發(fā)現(xiàn)減小抗腫瘤藥物和其他藥物從脂質(zhì)體釋放速度的途徑。
除了這些與包囊和釋放相關(guān)的問題之外，存在發(fā)現(xiàn)向醫(yī)師提供包含抗腫瘤藥物的脂質(zhì)體的商業(yè)上可接受途徑的重要問題。雖然在“根據(jù)需要”的基礎(chǔ)上的脂質(zhì)體的制備和裝填在實(shí)驗(yàn)室規(guī)模下是可接受的程序，但是在臨床實(shí)施中一般不令人滿意。因此，顯著而不斷需求這樣的方法，即有或沒有包囊藥物的脂質(zhì)體能通過常規(guī)商業(yè)分布通道運(yùn)載、儲(chǔ)存并且移動(dòng)而沒有實(shí)質(zhì)性損失。
50Mm檸檬酸梯度裝填的柔紅霉素DaunoXome已經(jīng)商品化。脂質(zhì)pegylated的脂質(zhì)體多柔比星Doxil也已經(jīng)商品化，但是其中多柔比星藥物是針對(duì)硫酸銨離子梯度裝載，而不是酸梯度裝填。
Moynihan等人的公開的PCT專利申請(qǐng)WO99/13816公開了脂質(zhì)體喜樹堿制劑及其制備方法。該方法包括用含有pH范圍是2.0至7.4的賦形劑的水溶液使脫水的脂質(zhì)體(膜或粉末)水合，形成脂質(zhì)體分散體系。這里公開的為了水合目的的優(yōu)選的水溶液是檸檬酸或硫酸的酸、鈉鹽或銨鹽形式的緩沖溶液。這里公開的優(yōu)選緩沖液是＞5mM，更優(yōu)選50mM，檸檬酸(pH 2.0-5.0)，檸檬銨(pH 2.0-5.5)，或硫酸銨(pH 2.0-5.5)，參見第12頁，第12-23行。公開的PCT專利申請(qǐng)WO99/13816還描述，一旦加填完，使用硫酸銨猝滅脂質(zhì)體配制。
但是公開的PCT專利申請(qǐng)WO 99/13816沒有教導(dǎo)或提示施用脂質(zhì)體制劑時(shí)獲得最初梯度。另外，該篇公開的PCT專利申請(qǐng)沒有教導(dǎo)或提示能使用非50mM(或高于5mM)的檸檬酸而同時(shí)保持裝填相對(duì)大量藥物的能力(GI147211，一種喜樹堿類似物)。該篇公開的PCT專利申請(qǐng)沒有教導(dǎo)或提示能在這樣的脂質(zhì)體制劑中應(yīng)用除了喜樹堿之外的藥物。
發(fā)明概述提供了將藥物(例如抗腫瘤藥物)在脂質(zhì)體中包囊的方法，優(yōu)選具有高藥物∶脂質(zhì)之比。通過使用跨膜pH梯度通過活性機(jī)理裝填藥物的方法能制備脂質(zhì)體。使用這項(xiàng)技術(shù)，捕獲率達(dá)到100％。使用的藥物∶脂質(zhì)之比高于對(duì)于舊的傳統(tǒng)脂質(zhì)體制劑使用的比例，并且藥物從脂質(zhì)體的釋放率減小。裝填之后，使用在低溫下可滲透的堿的猝滅劑猝滅殘留的酸。因此殘留的酸性減小并且提高化學(xué)穩(wěn)定性(例如抗水解)。這樣，在給藥之前保持脂質(zhì)體和藥物兩者的穩(wěn)定性。但是體內(nèi)施用脂質(zhì)體時(shí)存在pH梯度，因?yàn)殁鐒┛焖僖莩鲋|(zhì)體。
本發(fā)明提供形成具有內(nèi)低/外高pH梯度的梯度裝填脂質(zhì)體的方法。該方法包括(a)在至多大約60mM的酸水溶液中，在其中藥物的質(zhì)子化形式帶電荷并且不能透過脂質(zhì)體膜、并且其中藥物的非質(zhì)子化形式不帶電荷并且能透過脂質(zhì)體膜的溫度下，使脂質(zhì)體溶液與藥物接觸；(b)將溶液冷卻至藥物的非質(zhì)子化形式不能透過脂質(zhì)體膜的溫度；和(c)使溶液與弱堿接觸，所述的弱堿量可有效提高內(nèi)部脂質(zhì)體的pH以提供具有內(nèi)低/外高pH梯度的梯度裝填脂質(zhì)體。
本發(fā)明還提供制備藥物組合物的方法。該方法包括(a)在至多大約60mM的酸水溶液中，在其中藥物的質(zhì)子化形式帶電荷并且不能透過脂質(zhì)體膜、并且其中藥物的非質(zhì)子化形式不帶電荷并且能透過脂質(zhì)體膜的溫度下，使脂質(zhì)體溶液與藥物接觸；(b)將溶液冷卻至藥物的非質(zhì)子化形式不能透過脂質(zhì)體膜的溫度；(c)使溶液與弱堿接觸，所述的弱堿量可有效提高內(nèi)部脂質(zhì)體的pH以提供具有內(nèi)低/外高pH梯度的梯度裝填脂質(zhì)體；和(d)使脂質(zhì)體與藥學(xué)可接受載體組合，得到藥物組合物。
本發(fā)明還提供一種方法，包括對(duì)哺乳動(dòng)物施用本發(fā)明的藥物組合物。
本發(fā)明還提供一種治療癌癥患者的方法。該方法包括對(duì)哺乳動(dòng)物施用本發(fā)明的藥物組合物，其中所述藥物是抗腫瘤藥物。
本發(fā)明還提供具有內(nèi)低/外高pH梯度的梯度裝填的脂質(zhì)體，其中通過包括下面步驟的方法制備所述梯度裝填的脂質(zhì)體(a)在至多大約60mM的酸水溶液中，在其中藥物的質(zhì)子化形式帶電荷并且不能透過脂質(zhì)體膜、并且其中藥物的非質(zhì)子化形式不帶電荷并且能透過脂質(zhì)體膜的溫度下，使脂質(zhì)體溶液與藥物接觸；(b)將溶液冷卻至藥物的非質(zhì)子化形式不能透過脂質(zhì)體膜的溫度；和(c)使溶液與弱堿接觸，所述的弱堿量可有效提高內(nèi)部脂質(zhì)體的pH以提供具有內(nèi)低/外高pH梯度的梯度裝填脂質(zhì)體。
附圖的簡(jiǎn)要描述參照下面的描述和詳細(xì)說明這些實(shí)施方案的附圖，可以更好地理解本發(fā)明的實(shí)施方案，在附圖中


圖1詳細(xì)說明長春瑞濱脂質(zhì)體對(duì)小鼠中的人乳腺腫瘤MaTu生長的作用。
圖2詳細(xì)說明通過本發(fā)明的方法制備脂質(zhì)體制劑的方塊流程圖。
本發(fā)明的詳細(xì)描述說明書中引用的″一個(gè)實(shí)施方案″、″實(shí)施方案″、″一個(gè)例舉的實(shí)施方案″，等指描述的實(shí)施方案可以包括特定特征、結(jié)構(gòu)或特性，但是每一個(gè)實(shí)施方案可以不必須包括特定特征、結(jié)構(gòu)或特性。并且，這樣的短語不一定指相同的實(shí)施方案。此外，當(dāng)所描述的特定特征、結(jié)構(gòu)或特性與某實(shí)施方案相關(guān)聯(lián)時(shí)，可以根據(jù)本領(lǐng)域技術(shù)人員的知識(shí)改變與其他實(shí)施方案相關(guān)聯(lián)的這樣的特征、結(jié)構(gòu)或特性，不管是否得到過明確描述。
本發(fā)明提供在顯示出跨膜pH梯度的脂質(zhì)體中抗腫瘤藥物的有效包載。本發(fā)明的脂質(zhì)體制劑在施用時(shí)提供基本上具有原來pH梯度的脂質(zhì)體。本發(fā)明的脂質(zhì)體具有顯著高于舊的傳統(tǒng)脂質(zhì)體系統(tǒng)的藥物脂質(zhì)比。本發(fā)明的脂質(zhì)體制劑可以用作包載藥物例如抗腫瘤藥物的藥物載體系統(tǒng)。本發(fā)明的脂質(zhì)體具有改善的藥物動(dòng)力學(xué)，提高的藥效(生物活性)，低毒性，并且與游離藥物相比提供改善的治療指數(shù)。正因?yàn)榇巳?，?dāng)本發(fā)明的脂質(zhì)體制劑用作包載毒性抗腫瘤藥物例如蒽環(huán)類抗菌素(例如，多柔比星、表柔比星和柔紅霉素)；蒽二酮類(例如，米托蒽醌)；長春花生物堿(例如，長春新堿和長春堿)；抗腫瘤抗生素；烷基化試劑(例如，環(huán)磷酰胺和氮芥鹽酸鹽)；和嘌呤或嘧啶衍生物(例如，5-氟尿嘧啶)的藥物載體系統(tǒng)時(shí)，這樣的脂質(zhì)體制劑能用來減小抗腫瘤藥物的毒性作用。
本發(fā)明涉及制備脂質(zhì)體制劑的新方法，涉及從該方法獲得的脂質(zhì)體制劑以及藥物治療方法，包括施用脂質(zhì)體制劑。當(dāng)描述所述方法，從這樣的方法獲得的產(chǎn)物，包括這樣的產(chǎn)物的制劑和使用這種產(chǎn)品的方法時(shí)，除非另有說明，下面的術(shù)語具有下面的定義。
定義根據(jù)這里使用的，術(shù)語″脂質(zhì)體″指單層脂質(zhì)體或多層脂質(zhì)體，例如美國專利No.4,753,788中描述的。
″單層脂質(zhì)體″也稱作″單層脂質(zhì)體″，是包括限定單一封閉含水隔間的一個(gè)脂雙層膜的球形囊泡。雙層膜包括兩層脂質(zhì)內(nèi)層和外層(小葉)。脂質(zhì)分子的外層的取向是，它們的親水性頭部朝向外部含水環(huán)境，并且它們的疏水性尾部朝向脂質(zhì)體內(nèi)部。脂質(zhì)層的內(nèi)層直接位于外層的下面，脂質(zhì)的取向是，它們的頭部朝向脂質(zhì)體含水內(nèi)部，并且它們的尾部朝向脂質(zhì)外層的尾部。
″多層脂質(zhì)體″也稱作″多層脂質(zhì)體″或″多腔室囊泡″，包括多于一個(gè)的脂雙層膜，膜限定多于一個(gè)的封閉含水隔間。膜共中心排列，使得不同的膜通過含水隔室分開，很象洋蔥。
術(shù)語藥物包括但不限于止痛劑、麻醉劑、抗痤瘡藥、抗生素、抗菌劑、抗癌藥、抗膽堿能藥物、抗凝劑、抗運(yùn)動(dòng)障礙藥、止吐藥、抗纖維化藥、抗真菌藥、抗青光眼藥、抗炎藥、抗腫瘤藥、抗骨質(zhì)疏松藥、抗變型性骨炎藥、抗帕金森病藥、抗芽孢形成藥、退熱藥、殺菌劑、抗血栓形成藥，抗病毒藥、鈣調(diào)節(jié)藥、角質(zhì)軟化劑或硬化藥。
本文使用的術(shù)語″包囊″和″包載″指在脂質(zhì)體中摻入的或者與脂質(zhì)體締合的藥物。藥物可以與脂雙層締合或者存在于脂質(zhì)體的含水內(nèi)部中，或者兩種情況都有。在一個(gè)實(shí)施方案中，包囊的藥物采取在脂質(zhì)體內(nèi)部沉淀的鹽的形式。藥物本身也可以在脂質(zhì)體內(nèi)部沉淀。
本文所使用的術(shù)語“賦形劑”、“抗衡離子”和“抗衡離子賦形劑”是指可以啟動(dòng)或者加快藥物裝填的物質(zhì)，它還可以啟動(dòng)或加快藥劑在脂質(zhì)體內(nèi)部水中沉淀析出。賦形劑的實(shí)例包括但并不限于下述離子的酸、鈉鹽或銨鹽形式單價(jià)陰離子例如氯離子、醋酸根、乳糖酸根、甲酸根；二價(jià)陰離子例如天冬氨酸根、琥珀酸根和硫酸根；三價(jià)離子例如檸檬酸根和磷酸根。優(yōu)選的賦形劑包括檸檬酸鹽和硫酸鹽。
“磷脂”是指任何一種能夠形成脂質(zhì)體的磷脂或者它們的聯(lián)合物。磷脂酰膽堿(PC)適合用于本發(fā)明中，磷脂酰膽堿包括那些來自雞蛋、大豆或者其它植物來源的磷脂酰膽堿或者部分或完全合成的、或者具有可變脂質(zhì)鏈長度和不飽和度的磷脂酰膽堿。合成、半合成和天然磷脂酰膽堿產(chǎn)品包括但并不僅僅限于二硬脂酰基磷脂酰膽堿(DSPC)、氫化大豆磷脂酰膽堿(HSPC)、大豆磷脂酰膽堿(大豆PC)、卵磷脂酰膽堿(卵PC)、氫化卵磷脂酰膽堿(HEPC)、二棕櫚酰磷脂酰膽堿(DPPC)以及二肉豆蔻酰磷脂酰膽堿(DMPC)是適合用于本發(fā)明中的磷脂酰膽堿。所有的這些磷脂可商購得到。優(yōu)選的PC是HSPC和DSPC；最優(yōu)選的是HSPC。
另外，磷脂酰甘油(PG)和磷酸(PA)也是適合用于本發(fā)明中的磷脂，其包括但并不僅僅限于二肉豆蔻酰磷脂酰甘油(DMPG)、二月桂酰磷脂酰甘油(DLPG)、二棕櫚酰磷脂酰甘油(DPPG)、二硬脂酰磷脂酰甘油(DSPG)、二肉豆蔻磷脂酸(DMPA)、二硬脂酰磷脂酸(DSPA)、二月桂酰磷脂酸(DLPA)、以及二棕櫚酰磷脂酸(DPPA)。當(dāng)在制劑中使用時(shí)，二硬脂酰磷脂酰甘油(DSPG)是最優(yōu)選的帶負(fù)電荷脂質(zhì)。其它適宜的磷脂包括磷脂酰乙醇胺、磷脂酰肌醇以及含有月桂酸、肉豆蔻酸、硬脂酰和棕櫚酸鏈的磷脂酸。另外，本發(fā)明還預(yù)期了可以合并入含有磷脂的聚乙二醇(PEG)。
本文所使用的術(shù)語“非腸道”是指靜脈內(nèi)給藥(IV)、肌內(nèi)給藥(IM)、皮下給藥(SubQ)或者腹膜內(nèi)給藥(IP)。
術(shù)語“改善了的治療指數(shù)”是指相對(duì)于游離藥物而言具有更高的治療指數(shù)。治療指數(shù)可以表示為50％動(dòng)物的致死劑量相對(duì)于有效劑量的比值。
本文使用的″治療″或″處理″指(i)防止發(fā)生病理狀態(tài)(例如，乳腺癌)(例如預(yù)防)或與此相關(guān)的癥狀；(ii)抑制病理狀態(tài)或者阻止其發(fā)展或者與此相關(guān)的癥狀；或者(iii)減輕病理狀態(tài)或者與此相關(guān)的癥狀。
本發(fā)明涉及任選地在脂質(zhì)體制劑中包括膽固醇。已知膽固醇提高脂質(zhì)體穩(wěn)定性并且防止磷脂變?yōu)橹鞍椎捏w內(nèi)損失。
本發(fā)明涉及有效的任何合適的脂質(zhì)∶藥物之比。優(yōu)選的脂質(zhì)∶藥物摩爾比包括大約5∶1至大約100∶1，更優(yōu)選大約10∶1至大約40∶1。最優(yōu)選的脂質(zhì)∶藥物摩爾比包括大約15∶1至大約25∶1。優(yōu)選的脂質(zhì)體制劑包括磷脂∶膽固醇摩爾比范圍是1.5∶0.5至2∶1.5。最優(yōu)選的脂質(zhì)體制劑是2∶1PC∶膽固醇，有或沒有1-4摩爾百分比的磷脂酰甘油。最優(yōu)選的脂質(zhì)體大小是小于100nm。優(yōu)選的藥物裝填率是大約70％或更大的包囊的藥物百分比。制備膠囊包括脂質(zhì)體內(nèi)部含水空間存在分子，膜雙層內(nèi)部或外部小葉存在的分子，部分包埋在雙層外部小葉內(nèi)并且部分在脂質(zhì)體外部的分子，和與脂質(zhì)體表面締合的分子，例如，通過靜電相互作用。
通常，本發(fā)明制備包埋的(embodied)制劑的方法從形成脂質(zhì)體的溶液的制備開始。這通過例如下面的操作進(jìn)行稱量一定量的磷脂酰膽堿、任選的膽固醇和任選的磷脂酰甘油，將它們?nèi)芙庥谟袡C(jī)溶劑中，有機(jī)溶劑優(yōu)選是氯仿和甲醇1∶1混合物(v/v)或者是凈氯仿。將溶液蒸發(fā)形成固體脂質(zhì)相，例如膜或粉末，例如，使用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器，噴霧干燥器或其他裝置。然后使用含有pH范圍是2.0至7.4的賦形劑的水溶液將膜或粉末水合，形成脂質(zhì)體分散液。用于水合作用目的的優(yōu)選的水溶液是檸檬酸或硫酸的酸、鈉鹽或銨鹽形式的緩沖溶液。優(yōu)選的緩沖液是至多大約60mM，檸檬酸(pH 2.0-5.0)，檸檬酸銨(pH2.0-5.5)或硫酸銨(pH 2.0-5.5)。本領(lǐng)域技術(shù)人員明白可以使用其他陰離子酸緩沖液，例如磷酸。根據(jù)使用的磷脂，將緩沖液中分散的脂質(zhì)膜或粉末加熱至大約25℃至大約70℃。
通過本發(fā)明的方法形成的脂質(zhì)體在親水性試劑的存在下被凍干或脫水。
通過劇烈攪拌分散體系，優(yōu)選通過使用薄膜蒸發(fā)儀如美國專利No.4,935,171所述，或者通過搖動(dòng)或渦流混合，形成多室脂質(zhì)體。
通過對(duì)脂質(zhì)固相的含水分散體系施加剪切力，例如，通過超聲處理或者使用微流化儀器例如勻化器或French壓力機(jī)，形成單層脂質(zhì)體。使用注射、冷凍和解凍、從脂質(zhì)透析出洗滌劑溶液或者用來制備脂質(zhì)體的其他方法也能施加剪切力。使用各種各樣的公知的技術(shù)能控制脂質(zhì)體的大小，包括剪切力施加時(shí)間。優(yōu)選地，在3,000至14,000psi，優(yōu)選10,000至14,000psi的壓力和大約脂質(zhì)聚集轉(zhuǎn)變溫度的溫度下，使用勻化器以形成具有小于200納米直徑的單層脂質(zhì)體。
未捕獲的賦形劑可以被去除或者不被去除，或者利用透析、大小排阻柱色譜法(Sephadex G-50樹脂)或超濾(100,000-300,000截留分子量)，用9％蔗糖的緩沖液從脂質(zhì)體分散體系中交換。然后對(duì)每一個(gè)小單層脂質(zhì)體制劑活性裝填藥物，對(duì)抗例如膜電勢(shì)的梯度進(jìn)行大約10-30分鐘，所述的膜電位是由于外部pH用氫氧化鈉滴定至5.0范圍或更高產(chǎn)生的。藥物裝填步驟中的溫度范圍一般是大約50℃至70℃之間，脂質(zhì)∶藥物之比在5∶1至100∶1之間。通過用換為9％蔗糖的緩沖液，利用透析、大小排阻柱色譜法(Sephadex G-50樹脂)或超濾(100,000-300,000截留分子量)從脂質(zhì)體分散體系中去除沒有捕獲的藥物。一般在大約55℃至65℃通過由乙酸纖維素或聚醚砜構(gòu)成的0.22微米過濾器過濾。
如上所述，一般使用公知的裝填方法將藥物裝填到預(yù)先形成的脂質(zhì)體中(參見，例如Deamer等，BBA 274323-335(1972)；Forssen美國專利No.4,946,683；Cramer等BBRC 75295-301(1977)；Bally美國專利No.5,077,056)。裝填通過pH梯度。優(yōu)選以大約pH 2-3的內(nèi)部pH開始。賦形劑是裝填過程中的抗衡離子，并且當(dāng)它在脂質(zhì)體內(nèi)部接觸藥物時(shí)，賦形劑可以引起藥物實(shí)質(zhì)性部分的沉淀。藥物本身也可以在脂質(zhì)體內(nèi)部沉淀。這種沉淀作用保護(hù)藥物和脂質(zhì)不降解(例如，水解)。賦形劑例如檸檬酸鹽或硫酸鹽可以沉淀藥物，并且能在脂質(zhì)體內(nèi)部和梯度(pH或氨)一起被利用，以促進(jìn)藥物裝填。
通過pH梯度的藥物裝填包括脂質(zhì)體內(nèi)部含水空間的低pH，通過設(shè)計(jì)，這種內(nèi)部酸度在藥物裝填過程中不完全中和。這種殘留的內(nèi)部酸度能引起脂質(zhì)體制劑中的化學(xué)不穩(wěn)定性(例如，脂質(zhì)水解)，導(dǎo)致貯存期的有限性。為了終止這種殘留的內(nèi)部酸度，在藥物裝填之后，以能足以將殘留的內(nèi)部酸度減小至最小值(例如pH是4或高于4)的有效量加入膜可滲透堿，例如胺(例如，銨鹽或烷基胺)?？梢允褂玫匿@鹽包括具有一價(jià)或多價(jià)抗衡離子的那些，例如，包括但不限于硫酸銨、氫氧化銨、乙酸銨、氯化銨、磷酸銨、檸檬酸銨、琥珀酸銨、乳糖酸銨、碳酸銨、酒石酸銨和草酸銨。也能使用膜滲透性任何烷基胺化合物的類似物鹽，包括但不限于甲胺、乙胺、二乙胺、乙二胺和丙胺。儲(chǔ)藏期間，例如在2-8℃，脂質(zhì)體制劑將保持猝滅狀態(tài)，相對(duì)于沒有猝滅的制劑來說，減小了賦形劑或藥物的水解傾向。但是，當(dāng)注射時(shí)，這種猝滅的物質(zhì)從脂質(zhì)體中快速滲漏出來，恢復(fù)殘留梯度，該梯度對(duì)于藥物在體內(nèi)的停留是必需的。
脂質(zhì)體的治療應(yīng)用包括通常以游離形式有毒性的藥物的遞送。在脂質(zhì)體形式中，毒性藥物可以背離能產(chǎn)生毒性的敏感組織并且朝向它們能發(fā)揮它們的治療作用的選擇的區(qū)域。通過增強(qiáng)的藥物動(dòng)力學(xué)曲線，脂質(zhì)體在治療上還能用于在延長的時(shí)間期間緩慢釋放藥物，從而減少給藥次數(shù)。另外，脂質(zhì)體能提供形成用于靜脈內(nèi)遞送的疏水性藥物的含水分散體系的方法。
脂質(zhì)體的遞送途徑還能影響它們?cè)隗w內(nèi)的分布。被動(dòng)送遞脂質(zhì)體包括利用各種給藥途徑，例如，腸胃外，但是也可以利用其他有效給藥形式，例如動(dòng)脈內(nèi)注射、吸入劑罩、口服活性制劑、透皮離子透入法(iotophoresis)或栓劑。各種途徑在脂質(zhì)體定位產(chǎn)生差異。
本發(fā)明還提供抑制腫瘤生長、藥物抗性和藥物過敏性兩者的方法，所述方法是通過向腫瘤、優(yōu)選哺乳動(dòng)物中的腫瘤遞送治療或有效量的脂質(zhì)體喜樹堿。因?yàn)樗幬锏慕o藥方案對(duì)于內(nèi)科醫(yī)師是公知的，用于哺乳動(dòng)物特別是人治療上面提到的疾病或癥狀的有效或治療性脂質(zhì)體藥物制劑的量對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員是顯而易見的。根據(jù)要治療的病癥的性質(zhì)和程度，給藥形式、途徑和部位以及待治療的具體患者可以確定制劑各種劑量的最佳給藥量和給藥間隔，并且通過常規(guī)技術(shù)能確定這樣的最適條件。本領(lǐng)域技術(shù)人員還明白，本領(lǐng)域技術(shù)人員使用常規(guī)的治療判定實(shí)驗(yàn)方法能確定治療的最佳過程，即對(duì)于確定天數(shù)的每天用藥次數(shù)。
本發(fā)明包括與所有的癌癥相關(guān)的腫瘤生長的抑制，包括多藥物抗性癌癥。在抑制方面所述脂質(zhì)體制劑對(duì)其特別有用的癌癥是卵巢癌、小細(xì)胞肺癌(SCLC)，非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)、結(jié)腸癌、乳腺癌和頭和頸癌。另外，描述的和要求的制劑能與現(xiàn)存抗癌治療聯(lián)合應(yīng)用。例如，這里描述的制劑能與紫杉烷類聯(lián)合使用，例如(1)與紫杉醇(紫杉醇)和鉑絡(luò)合物聯(lián)合治療卵巢癌；(2)與5FU和亞葉酸或左旋咪唑聯(lián)合治療結(jié)直腸癌；和(3)與順鉑和依托泊苷聯(lián)合治療SCLC。
本發(fā)明的含有治療藥物(例如抗腫瘤藥物)和其藥物制劑的脂質(zhì)體以及通過其方法制備的脂質(zhì)體能在動(dòng)物(包括人)中治療性應(yīng)用來治療需要下面各項(xiàng)的感染或病癥(1)反復(fù)給藥，(2)生物活性形式的藥物的持續(xù)釋放，或者(3)與所研究的游離藥物相比毒性降低并且有合適的藥效。這樣的病癥包括但不限于腫瘤，例如能用抗腫瘤藥物治療的那些。
含有藥物(例如抗腫瘤藥物)及其藥物制劑的脂質(zhì)體的給藥方式確定將要對(duì)其送遞化合物的生物體中的部位和細(xì)胞。本發(fā)明的脂質(zhì)體可以單獨(dú)給藥，但是一般以根據(jù)想要的給藥途徑和標(biāo)準(zhǔn)醫(yī)療實(shí)踐選擇的藥學(xué)載體混合給藥。制劑可以是腸胃外注射的，例如靜脈內(nèi)注射。對(duì)于腸胃外給藥，可以使用例如含有其他溶質(zhì)如足夠的鹽或葡萄糖，以制備等滲溶液的其他溶質(zhì)的滅菌水溶液形式。例如，以至少大約20mg/m2的劑量作為60分鐘靜脈內(nèi)輸入，可以施用多柔比星脂質(zhì)體。它們還可以通過注射用于腹膜灌洗或鞘內(nèi)給藥。它們也可以例如在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移部位皮下給藥。根據(jù)制劑的特定性質(zhì)，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以想到其他應(yīng)用。
對(duì)于口服給藥方式，可以以片劑、膠囊、錠劑、糖錠劑、粉末劑、糖漿、酏劑、水溶液和混懸液的形式使用本發(fā)明的脂質(zhì)體治療藥物(例如，抗腫瘤藥物)。在片劑情況下，能使用的載體包括乳糖、檸檬酸鈉和磷酸的鹽。片劑中通常使用各種崩解劑例如淀粉和潤滑劑例如硬脂酸鎂、月桂基硫酸鈉和滑石。對(duì)于以膠囊形式口服給藥，有用的稀釋劑是乳糖和高分子量聚乙二醇。當(dāng)含水懸浮液對(duì)于口服使用是必需的時(shí)，活性成分與乳化劑和懸浮劑混合。如果期望，可以加入一些甜味劑和/或調(diào)味劑。
對(duì)于局部給藥方式，可以將本發(fā)明的治療藥物(例如抗腫瘤藥物)制劑摻入到如凝膠、油、乳狀液等這樣的劑型中。這樣的制劑可以作為乳膏、糊劑、軟膏、凝膠、洗劑等直接施用給藥。
對(duì)于對(duì)人給藥以治愈、減輕、阻滯或預(yù)防性治療腫瘤疾病、處方醫(yī)生將最終確定給定的人受治療者的抗腫瘤藥物的合適的劑量，預(yù)期該劑量根據(jù)個(gè)體的年齡、體重和個(gè)體反應(yīng)以及患者疾病的性質(zhì)和嚴(yán)重性而不同。脂質(zhì)體形式的藥物劑量一般大約為游離藥物所使用的劑量。但是在某些情況下，必須施用這些限制之外的劑量。
下面提供的例舉的實(shí)施方案中的特定范圍和值只是為了詳細(xì)說明的目的，而不是限制如權(quán)利要求書定義的本發(fā)明的范圍。
本發(fā)明的例舉性實(shí)施方案[1]本發(fā)明提供形成具有內(nèi)低/外高pH梯度的梯度裝填的脂質(zhì)體的改進(jìn)方法，該方法包括(a)在至多大約60mM的酸水溶液中，在其中藥物的質(zhì)子化形式帶電荷并且不能透過脂質(zhì)體膜、并且其中藥物的非質(zhì)子化形式不帶電荷并且能透過脂質(zhì)體膜的溫度下，使脂質(zhì)體溶液與藥物接觸；(b)將溶液冷卻至藥物的非質(zhì)子化形式不能透過脂質(zhì)體膜的溫度下；和(c)使溶液與弱堿接觸，所述弱堿的量足以有效提高內(nèi)部脂質(zhì)體的pH以提供具有內(nèi)低/外高pH梯度的梯度裝填的脂質(zhì)體。本發(fā)明還提供實(shí)施方案[1]的方法，其中脂質(zhì)體包括磷脂酰膽堿。本發(fā)明還提供實(shí)施方案[1]-[2]任一項(xiàng)的方法，其中脂質(zhì)體包括選自二硬脂酰磷脂酰膽堿、氫化大豆磷脂酰膽堿、氫化卵卵磷脂、二棕櫚酰磷脂酰膽堿、二肉豆蔻酰磷脂酰膽堿和二反式油酰(dielaidoyl)磷脂酰膽堿的磷脂酰膽堿。本發(fā)明還提供實(shí)施方案[1]-[3]任一項(xiàng)的方法，其中脂質(zhì)體進(jìn)一步包括膽固醇。本發(fā)明還提供實(shí)施方案[1]-[4]任一項(xiàng)的方法，其中脂質(zhì)體進(jìn)一步包括磷脂酰甘油。本發(fā)明還提供實(shí)施方案[1]-[5]任一項(xiàng)的方法，其中脂質(zhì)體進(jìn)一步包括非磷脂酰脂質(zhì)。本發(fā)明還提供實(shí)施方案[6]的方法，其中所述非磷脂酰脂質(zhì)包括鞘磷脂。本發(fā)明還提供實(shí)施方案[1]-[7]任一項(xiàng)的方法，其中脂質(zhì)體進(jìn)一步包括選自二肉豆蔻酰磷脂酰甘油，二月桂酰磷脂酰甘油，二棕櫚酰磷脂酰甘油和二硬脂酰磷脂酰甘油的磷脂酰甘油。本發(fā)明還提供實(shí)施方案[1]-[8]任一項(xiàng)的方法，其中脂質(zhì)體包括磷脂酰膽堿，并且進(jìn)一步包括膽固醇。本發(fā)明還提供實(shí)施方案[1]-[9]任一項(xiàng)的方法，其中脂質(zhì)體包括磷脂酰膽堿，并且進(jìn)一步包括膽固醇，其中磷脂酰膽堿與膽固醇的摩爾比是大約1∶0.01至大約1∶1。本發(fā)明還提供實(shí)施方案[1]-[10]任一項(xiàng)的方法，其中脂質(zhì)體包括磷脂酰膽堿，并且進(jìn)一步包括膽固醇，其中磷脂酰膽堿與膽固醇的摩爾比是大約1.5∶1.0至大約3.0∶1.0。本發(fā)明還提供實(shí)施方案[1]-[11]任一項(xiàng)的方法，其中脂質(zhì)體是單層的并且小于大約100nm。本發(fā)明還提供實(shí)施方案[1]-[12]任一項(xiàng)的方法，其中脂質(zhì)體與藥物的重量比為多至大約200∶1。本發(fā)明還提供實(shí)施方案[1]-[13]任一項(xiàng)的方法，其中脂質(zhì)體與藥物的重量比是大約1∶1至大約100∶1。本發(fā)明還提供實(shí)施方案[1]-[14]任一項(xiàng)的方法，其中脂質(zhì)體與藥物的重量比是大約1∶1至大約50∶1。本發(fā)明還提供實(shí)施方案[1]-[15]任一項(xiàng)的方法，其中所述酸具有小于大約1×10-2的酸解離常數(shù)。本發(fā)明還提供實(shí)施方案[1]-[16]任一項(xiàng)的方法，其中所述酸具有小于大約1×10-4的酸解離常數(shù)。本發(fā)明還提供實(shí)施方案[1]-[17]任一項(xiàng)的方法，其中所述酸具有小于大約1×10-5的酸解離常數(shù)。本發(fā)明還提供實(shí)施方案[1]-[18]任一項(xiàng)的方法，其中所述酸具有對(duì)于脂質(zhì)體的大于大約1×10-4cm/sec的滲透系數(shù)。本發(fā)明還提供實(shí)施方案[1]-[19]任一項(xiàng)的方法，其中所述酸選自甲酸，乙酸、丙酸、丁酸、戊酸、檸檬酸、草酸，琥珀酸、乳酸、蘋果酸、酒石酸、富馬酸、苯甲酸、烏頭酸、藜蘆酸、磷酸、硫酸及其組合。本發(fā)明還提供實(shí)施方案[1]-[20]任一項(xiàng)的方法，其中所述酸是檸檬酸。本發(fā)明還提供實(shí)施方案[1]-[21]任一項(xiàng)的方法，其中使用至多大約50mM的酸。本發(fā)明還提供實(shí)施方案[1]-[22]任一項(xiàng)的方法，其中當(dāng)藥物溶解于含水基質(zhì)中時(shí)，以帶電荷狀態(tài)存在。本發(fā)明還提供實(shí)施方案[1]-[23]任一項(xiàng)的方法，其中所述藥物是包含至少一個(gè)能被質(zhì)子化的非環(huán)或環(huán)氨基有機(jī)化合物。本發(fā)明還提供實(shí)施方案[1]-[24]任一項(xiàng)的方法，其中所述藥物是包含至少一個(gè)伯胺基團(tuán)，至少一個(gè)仲胺基團(tuán)，至少一個(gè)叔胺基團(tuán)，至少一個(gè)季胺基團(tuán)，或者它們的任意組合的有機(jī)化合物。本發(fā)明還提供實(shí)施方案[1]-[25]任一項(xiàng)的方法，其中所述藥物是抗腫瘤藥物。本發(fā)明還提供實(shí)施方案[1]-[26]任一項(xiàng)的方法，其中所述藥物是兩種或多種抗腫瘤藥物的組合。本發(fā)明還提供實(shí)施方案[1]-[27]任一項(xiàng)的方法，其中所述藥物是可電離的堿性抗腫瘤藥物。本發(fā)明還提供實(shí)施方案[1]-[28]任一項(xiàng)的方法，其中所述藥物是蒽環(huán)類化療藥物、蒽二酮、兩親性藥物或長春花生物堿。本發(fā)明還提供實(shí)施方案[29]的方法，其中所述蒽環(huán)類化療藥物選自多柔比星、表柔比星和柔紅霉素。本發(fā)明還提供實(shí)施方案[29]的方法，其中所述蒽二酮是米托蒽醌。本發(fā)明還提供實(shí)施方案[29]的方法，其中所述兩親性藥物是親脂性胺。本發(fā)明還提供實(shí)施方案[20]的方法，其中所述長春花生物堿選自長春新堿和長春堿。本發(fā)明還提供實(shí)施方案[1]-[28]任一項(xiàng)的方法，其中所述藥物是抗腫瘤抗生素。本發(fā)明還提供實(shí)施方案[1]-[34]任一項(xiàng)的方法，其中所述藥物不是喜樹堿或者其類似物。本發(fā)明還提供實(shí)施方案[1]-[28]任一項(xiàng)的方法，其中所述藥物是烷基化試劑。本發(fā)明還提供實(shí)施方案[36]的方法，其中所述烷基化試劑選自環(huán)磷酰胺和氮芥鹽酸鹽。本發(fā)明還提供實(shí)施方案[1]-[28]任一項(xiàng)的方法，其中所述藥物是嘌呤或嘧啶衍生物。本發(fā)明還提供實(shí)施方案[38]的方法，其中所述嘌呤或嘧啶衍生物是5-氟尿嘧啶。本發(fā)明還提供實(shí)施方案[1]-[39]任一項(xiàng)的方法，其中步驟(a)中的溫度是大約40℃至大約70℃。本發(fā)明還提供實(shí)施方案[1]-[40]任一項(xiàng)的方法，其中步驟(a)中的溫度是大約50℃至大約60℃。本發(fā)明還提供實(shí)施方案[1]-[41]任一項(xiàng)的方法，其中步驟(b)中溶液冷卻至大約0℃至大約30℃的溫度。本發(fā)明還提供實(shí)施方案[1]-[42]任一項(xiàng)的方法，其中通過包括下面步驟的方法制備步驟(a)中的溶液(i)使脂質(zhì)體接觸酸的水溶液；(ii)將溶液均勻化；和(iii)任選地去除任何外部的酸。本發(fā)明還提供實(shí)施方案[43]的方法，其中通過將外部的酸過濾在步驟(iii)中去除外部的酸。本發(fā)明還提供實(shí)施方案[1]-[44]任一項(xiàng)的方法，其中所述弱堿是膜可滲透胺。本發(fā)明還提供實(shí)施方案[1]-[45]任一項(xiàng)的方法，其中所述弱堿是銨鹽或烷基胺。本發(fā)明還提供實(shí)施方案[1]-[46]任一項(xiàng)的方法，其中所述弱堿是帶有一價(jià)或多價(jià)抗衡離子的銨鹽。本發(fā)明還提供實(shí)施方案[1]-[47]任一項(xiàng)的方法，其中所述弱堿選自硫酸銨、氫氧化銨、乙酸銨、氯化銨、磷酸銨、檸檬酸銨、琥珀酸銨、乳糖酸銨、碳酸銨、酒石酸銨、和草酸銨以及它們的組合。本發(fā)明還提供實(shí)施方案[1]-[47]任一項(xiàng)的方法，其中所述弱堿是選自甲胺、乙胺、二乙胺、乙二胺和丙胺的烷基-胺。本發(fā)明還提供實(shí)施方案[1]-[49]任一項(xiàng)的方法，進(jìn)一步包括，在步驟(c)期間或之后，去除任何沒有裝填的藥物。本發(fā)明還提供實(shí)施方案[50]的方法，其中通過交叉過濾或透析去除沒有裝填的藥物。本發(fā)明還提供實(shí)施方案[1]-[51]任一項(xiàng)的方法，進(jìn)一步包括，在步驟(c)之后，將脂質(zhì)體脫水。本發(fā)明還提供實(shí)施方案[52]的方法，其中脫水是在低于大約1大氣壓的壓力下進(jìn)行的。本發(fā)明還提供實(shí)施方案[52]的方法，其中脫水通過脂質(zhì)體的事先冷凍進(jìn)行。本發(fā)明還提供實(shí)施方案[52]的方法，其中脫水在一種或幾種保護(hù)性單糖、一種或幾種保護(hù)性雙糖或者它們的組合的存在下進(jìn)行。本發(fā)明還提供實(shí)施方案[55]的方法，其中保護(hù)性糖選自海藻糖、蔗糖、麥芽糖和乳糖。本發(fā)明還提供實(shí)施方案[52]的方法，進(jìn)一步包括在脫水之后將脂質(zhì)體再次水合。本發(fā)明還提供實(shí)施方案[1]-[57]任一項(xiàng)的方法，其中脂質(zhì)體是單層脂質(zhì)體。本發(fā)明還提供實(shí)施方案[1]-[57]任一項(xiàng)的方法，其中脂質(zhì)體是多層脂質(zhì)體。本發(fā)明還提供實(shí)施方案[1]-[59]任一項(xiàng)的方法，其中大約90wt％以上的藥物被捕獲到脂質(zhì)體中。本發(fā)明還提供實(shí)施方案[1]-[60]任一項(xiàng)的方法，進(jìn)一步包括，在步驟(c)之后，使脂質(zhì)體與藥學(xué)可接受載體接觸。本發(fā)明還提供實(shí)施方案[1]-[61]任一項(xiàng)的方法，其中所述酸以大約20mM至大約60mM存在。本發(fā)明還提供一種制備藥物組合物的方法，包括(a)在至多大約60mM的酸水溶液中，在其中藥物的質(zhì)子化形式帶電荷并且不能透過脂質(zhì)體膜、并且其中藥物的非質(zhì)子化形式不帶電荷并且能透過脂質(zhì)體膜的溫度下，使脂質(zhì)體溶液與藥物接觸；(b)將溶液冷卻至藥物的非質(zhì)子化形式不能透過脂質(zhì)體膜的溫度；(c)使溶液與弱堿接觸，所述的弱堿的量可有效提高內(nèi)部脂質(zhì)體的pH以提供具有內(nèi)低/外高pH梯度的梯度裝填的脂質(zhì)體；和(d)使脂質(zhì)體與藥學(xué)可接受載體混合提供藥物組合物。本發(fā)明還提供一種方法，包括對(duì)哺乳動(dòng)物施用實(shí)施方案[63]的藥物組合物。本發(fā)明還提供一種治療患有癌癥的哺乳動(dòng)物的方法，該方法包括對(duì)哺乳動(dòng)物施用實(shí)施方案[63]的藥物組合物，其中所述藥物是抗腫瘤藥物。本發(fā)明還提供實(shí)施方案[65]的方法，其中所述癌癥是腫瘤，卵巢癌、小細(xì)胞肺癌(SCLC)、非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)、白血病、肉瘤、結(jié)直腸癌、頭部癌癥、頸部癌癥或乳腺癌。本發(fā)明還提供實(shí)施方案[65]的方法，其中脂質(zhì)體制劑抗腫瘤藥物的施用具有比和游離形式的抗腫瘤藥物施用相關(guān)的毒性分布更低的毒性分布。本發(fā)明還提供實(shí)施方案[67]的方法，其中所述毒性選自胃腸毒性和積蓄性劑量依賴性不可逆心肌病。本發(fā)明還提供實(shí)施方案[65]的方法，其中所述抗腫瘤藥物的施用具有比和游離形式的抗腫瘤藥物施用相關(guān)的不期望的副作用較低的發(fā)生率、嚴(yán)重程度或者這些組合的不期望的副作用。本發(fā)明還提供實(shí)施方案[69]的方法，其中不期望的副作用選自骨髓抑制、脫發(fā)、粘膜炎、惡心、嘔吐和厭食。通過包括下面的步驟的方法制備的具有內(nèi)低/外高pH梯度的梯度裝填脂質(zhì)體，其中所述方法包括(a)在至多大約60mM的酸水溶液中，在其中藥物的質(zhì)子化形式帶電荷并且不能透過脂質(zhì)體膜，并且其中藥物的非質(zhì)子化形式不帶電荷并且能透過脂質(zhì)體膜的溫度下，使脂質(zhì)體溶液與藥物接觸；(b)將溶液冷卻至藥物的非質(zhì)子化形式不能透過脂質(zhì)體膜的溫度；和(c)使溶液與弱堿接觸，所述的弱堿的量可有效提高內(nèi)部脂質(zhì)體的pH以提供具有內(nèi)低/外高pH梯度的梯度裝填脂質(zhì)體。
給出下面的實(shí)施例只是為了詳細(xì)說明的目的，而不是要限制本發(fā)明的范圍。
用已知的動(dòng)物模型排列能確定制劑的最大耐受劑量。例如可以采用實(shí)驗(yàn)B確定。
實(shí)驗(yàn)方法B-最大耐受劑量(MTD)通過I.V.給藥對(duì)裸鼠(NCr.nu/nu-小鼠)施用各種制劑，然后測(cè)定各種制劑的最大耐受劑量(MTD)。典型地，給出劑量范圍直到發(fā)現(xiàn)MTD，每個(gè)劑量組2只小鼠。通過評(píng)價(jià)體重、致死率、行為變化和/或尸體解剖狀況來判斷MTD估計(jì)值。實(shí)驗(yàn)的典型時(shí)間是對(duì)小鼠觀察四周，每周測(cè)定體重兩次。
用已知的動(dòng)物模型排列能確定制劑的抗癌活性。例如，利用實(shí)驗(yàn)A對(duì)大鼠測(cè)定。
實(shí)驗(yàn)方法A-乳腺癌異種移植物模型對(duì)裸鼠皮下移植MaTu或MT-3人乳腺癌細(xì)胞，并且接著用制劑和鹽水對(duì)照物處理。植入腫瘤之后第十天開始治療，包括分別以各種藥物的MTD一次或者每天一次連續(xù)三天對(duì)動(dòng)物給藥。在研究期間的幾個(gè)時(shí)間點(diǎn)測(cè)定腫瘤體積并且在植入腫瘤之后大約34天結(jié)束研究。以相對(duì)腫瘤體積中值(各腫瘤大小測(cè)量是相對(duì)于研究的第十天測(cè)定的腫瘤的大小)對(duì)各種分析物質(zhì)作圖。圖1給出含有長春瑞濱制劑的代表性數(shù)據(jù)。
參照下面的實(shí)施例進(jìn)一步明確本發(fā)明。本領(lǐng)域技術(shù)人員明白，不脫離本發(fā)明的目的和利益，可以對(duì)材料和方法進(jìn)行很多改進(jìn)。
實(shí)施例脂質(zhì)體制備的一般方法制備含有不同摩爾比的包括氫化大豆磷脂酰膽堿(HSPC)、膽固醇(Chol)和二硬脂酰磷脂酰甘油(DSPG)的磷脂的噴霧干燥脂質(zhì)粉末。所研究的脂質(zhì)比為HSPC∶Chol∶DSPG為a).2∶1∶0b).2∶1∶0.1噴霧干燥脂質(zhì)粉末的制備稱量出所有的脂質(zhì)組分，在圓底燒瓶中混和，向脂質(zhì)粉末中加入氯仿∶甲醇為1∶1(v/v)的溶劑，最終脂質(zhì)濃度為大約200mg/ml。然后施用YAMATO GB-21噴霧干燥器在指定參數(shù)設(shè)定下將該脂質(zhì)溶液噴霧干燥形成脂質(zhì)粉末。通過將脂質(zhì)放置在真空下的盤式干燥器中3-5天除去脂質(zhì)粉末中的殘余溶劑。
藥物的儲(chǔ)備溶液的制備稱量出所需藥物，溶解于注射用水(WFI)中。藥物儲(chǔ)備溶液的濃度通常為大約20mg/ml。制備得到長春瑞濱(NAV)、表柔比星(EPR)、米托蒽醌(MITO)、長春新堿(VCR)以及多柔比星(DOXO)的儲(chǔ)備溶液。
抗衡離子的儲(chǔ)備溶液的制備根據(jù)預(yù)先測(cè)得的濃度，稱量出抗衡離子，然后溶解于WFI中。如果需要的話，將抗衡離子溶液的最終pH調(diào)節(jié)至指定pH。制備得到下述抗衡離子的溶液∶檸檬酸(CA)、硫酸銨((NH4)2SO4)、檸檬酸三銨((NH4)3檸檬酸)和乳糖酸(LBA)。
由脂質(zhì)薄膜或噴霧干燥脂質(zhì)粉末通過探針超聲處理制備載藥前脂質(zhì)體(空脂質(zhì)體)稱量出脂質(zhì)薄膜或脂質(zhì)粉末，然后用所需抗衡離子溶液水合，脂質(zhì)濃度為100mg/ml至150mg/ml(取決于試驗(yàn)設(shè)計(jì))。水合溶液經(jīng)探針超聲處理直到溶液轉(zhuǎn)為透明。超聲處理的常用溫度為65℃，一般超聲處理的時(shí)間為15-20分鐘。結(jié)束超聲處理后，脂質(zhì)體通過下述清洗步驟之一處理a)冷卻脂質(zhì)體至環(huán)境溫度，將透明溶液裝填到sephadexG-50柱上用9％蔗糖進(jìn)行緩沖交換；或者b)結(jié)束超聲處理后，立即用相同的抗衡離子溶液將該脂質(zhì)體溶液按1∶3稀釋，然后稀釋溶液經(jīng)超濾(U.F.)進(jìn)行清洗/用9％蔗糖進(jìn)行緩沖交換。通過U.F.方法，脂質(zhì)體的最終脂質(zhì)濃度保持在50mg/ml左右。
由噴霧干燥脂質(zhì)粉末通過均化制備脂質(zhì)體稱量出脂質(zhì)粉末，用所需抗衡離子溶液水合，脂質(zhì)濃度為50mg/ml至75mg/ml。水合溶液使用Niro均化器在10,000PSI、大約55℃下進(jìn)行均化直到溶液轉(zhuǎn)為透明。通常均化步驟進(jìn)行大約10次。結(jié)束均化后，將脂質(zhì)體溶液經(jīng)過超濾進(jìn)行清洗/用9％蔗糖進(jìn)行緩沖交換。
載藥脂質(zhì)體的制備量取適宜量的空脂質(zhì)體，向該空脂質(zhì)體中加入計(jì)算量的藥物儲(chǔ)備溶液，通常最初的脂質(zhì)∶藥物重量比為20∶1。然后體系在55℃下保溫，施用氫氧化鈉調(diào)節(jié)系統(tǒng)的pH至所需pH，通常為pH 5.8至pH 6.5。系統(tǒng)通常的裝填/保溫時(shí)間為20-30分鐘。然后載藥后脂質(zhì)體通過柱分離法或者通過U.F.步驟進(jìn)行用9％蔗糖或用指定緩沖液(用于猝滅)的緩沖交換以除去任何未被裝填的游離藥物。脂質(zhì)體通過0.22微米乙酸纖維素過濾器在環(huán)境溫度下過濾。
實(shí)施例1.長春瑞濱脂質(zhì)體NAV儲(chǔ)備溶液為大約36mg/ml?？罩|(zhì)體中的脂質(zhì)濃度為33.2mg/ml。量取適宜量的空脂質(zhì)體，向該空脂質(zhì)體中加入計(jì)算量的藥物儲(chǔ)備溶液，脂質(zhì)∶藥物重量比為20∶1。體系然后在55℃下保溫，使用氫氧化鈉調(diào)節(jié)體系的pH至pH 6.0。將體系在55℃下保溫20分鐘進(jìn)行藥物裝填。然后載藥后的脂質(zhì)體經(jīng)過清洗步驟并借助用9％蔗糖進(jìn)行緩沖交換除去未被裝填的游離藥物。如果進(jìn)行猝滅，那么用于緩沖交換的溶液應(yīng)該是指定的猝滅劑溶液。脂質(zhì)體在環(huán)境溫度下通過0.22微米乙酸纖維素過濾器過濾。有關(guān)脂質(zhì)體特征的結(jié)果如下表所示。通過測(cè)試A獲得的效能結(jié)果如圖1所示。相對(duì)于相當(dāng)劑量的游離藥物(商品Navelbine)而言，單劑量的脂質(zhì)體制劑顯示出顯著提高的效能。相對(duì)于游離藥物而言，通過測(cè)試B獲得的脂質(zhì)體中的MTD也有所提高(從xx mg/kg到y(tǒng)y mg/kg)。
實(shí)施例2米托蒽醌脂質(zhì)體MITO儲(chǔ)備溶液為大約20mg/ml。空脂質(zhì)體中的脂質(zhì)濃度為50mg/ml。量取適宜量的空脂質(zhì)體，向該空脂質(zhì)體中加入計(jì)算量的藥物儲(chǔ)備溶液，脂質(zhì)∶藥物重量比為20∶1。體系在55℃下保溫，使用氫氧化鈉調(diào)節(jié)體系的pH至pH 8.0。將體系在55℃下保溫20分鐘進(jìn)行藥物裝填。然后載藥后脂質(zhì)體經(jīng)過清洗步驟并借助9％蔗糖進(jìn)行緩沖交換除去未被裝填的游離藥物。如果進(jìn)行猝滅，那么用于緩沖交換的溶液應(yīng)該是指定的猝滅劑溶液。脂質(zhì)體在環(huán)境溫度下通過0.22微米乙酸纖維素過濾器過濾。有關(guān)脂質(zhì)體特征的結(jié)果如下表所示。
實(shí)施例3表柔比星脂質(zhì)體EPR儲(chǔ)備溶液為大約20mg/ml?？罩|(zhì)體中的脂質(zhì)濃度為50mg/ml。量取適宜量的空脂質(zhì)體，向該空脂質(zhì)體中加入計(jì)算量的藥物儲(chǔ)備溶液，脂質(zhì)∶藥物重量比為20∶1。體系然后在55℃下保溫，使用氫氧化鈉調(diào)節(jié)體系的pH至pH 6.0。將體系在55℃下保溫20分鐘進(jìn)行藥物裝填。然后載藥后脂質(zhì)體經(jīng)過清洗步驟并借助用9％蔗糖進(jìn)行緩沖交換除去未被裝填的游離藥物。如果進(jìn)行猝滅，那么用于緩沖交換的溶液應(yīng)該是指定的猝滅劑溶液。脂質(zhì)體在環(huán)境溫度下通過0.22微米乙酸纖維素過濾器過濾。有關(guān)脂質(zhì)體特征的結(jié)果如下表所示。
實(shí)施例4下面對(duì)用于人體治療或預(yù)防的含有本發(fā)明脂質(zhì)體的代表性藥物劑型進(jìn)行解釋說明。
(i)注射劑1(1mg/ml)mg/ml‘治療劑’ 1.0磷脂酰膽堿 40膽固醇 10蔗糖 900.1N氫氧化鈉溶液(pH調(diào)節(jié)至7.0-7.5)q.s.
注射用水 q.s.至1ml(ii)注射劑2(10mg/ml)mg/ml‘治療劑’ 10磷脂酰膽堿 60膽固醇 15陰離子性的磷脂 30.1N氫氧化鈉溶液(pH調(diào)節(jié)至7.0-7.5)q.s.
蔗糖 90注射用水 q.s.至1ml上述制劑可以通過藥學(xué)領(lǐng)域眾所周知的常規(guī)方法制備得到。
本文所引用的所有出版物、專利文獻(xiàn)在此引入作為參考，就好像將其單獨(dú)引入作為參考一樣。本發(fā)明已經(jīng)參考各種具體和優(yōu)選的實(shí)施方案和方法進(jìn)行了描述，然而應(yīng)該理解，只要不偏離本發(fā)明的主旨和范圍，可以對(duì)其進(jìn)行各種變型和改良。
應(yīng)該理解的是，本發(fā)明的某些特征為了清楚起見是在各個(gè)單獨(dú)實(shí)施方案中進(jìn)行描述的，它們也可以組合出現(xiàn)在同一實(shí)施方案中。相反，本發(fā)明有些不同的特征為了簡(jiǎn)潔起見是在單獨(dú)的實(shí)施方案中進(jìn)行描述的，它們也可以分開出現(xiàn)或者再次對(duì)其進(jìn)行任意組合。
權(quán)利要求
1.形成具有內(nèi)低/外高pH梯度的梯度裝填的脂質(zhì)體的方法，該方法包括(a)在至多大約60mM的酸水溶液中，在其中藥物的質(zhì)子化形式帶電荷并且不能透過脂質(zhì)體膜、并且其中藥物的非質(zhì)子化形式不帶電荷并且能透過脂質(zhì)體膜的溫度下，使脂質(zhì)體溶液與藥物接觸；(b)將溶液冷卻至藥物的非質(zhì)子化形式不能透過脂質(zhì)體膜的溫度；和(c)使溶液與弱堿接觸，所述弱堿的量可有效提高內(nèi)部脂質(zhì)體的pH以提供具有內(nèi)低/外高pH梯度的梯度裝填的脂質(zhì)體。
2.權(quán)利要求1的方法，其中所述的脂質(zhì)體包括磷脂酰膽堿。
3.權(quán)利要求1的方法，其中所述的脂質(zhì)體包括選自二硬脂酰磷脂酰膽堿、氫化大豆磷脂酰膽堿、氫化卵磷脂酰膽堿、二棕櫚酰磷脂酰膽堿、二肉豆蔻酰磷脂酰膽堿和二反式油酰磷脂酰膽堿的磷脂酰膽堿。
4.權(quán)利要求1的方法，其中所述的脂質(zhì)體進(jìn)一步包括膽固醇。
5.權(quán)利要求1的方法，其中所述的脂質(zhì)體進(jìn)一步包括磷脂酰甘油。
6.權(quán)利要求1的方法，其中所述的脂質(zhì)體進(jìn)一步包括非磷脂酰脂質(zhì)。
7.權(quán)利要求6的方法，其中所述的非磷脂酰脂質(zhì)包括鞘磷脂。
8.權(quán)利要求1的方法，其中所述的脂質(zhì)體進(jìn)一步包括選自二肉豆蔻酰磷脂酰甘油、二月桂酰磷脂酰甘油、二棕櫚酰磷脂酰甘油和二硬脂酰磷脂酰甘油的磷脂酰甘油。
9.權(quán)利要求1的方法，其中所述的脂質(zhì)體包括磷脂酰膽堿，并且進(jìn)一步包括膽固醇。
10.權(quán)利要求1的方法，其中所述的脂質(zhì)體包括磷脂酰膽堿，并且進(jìn)一步包括膽固醇，其中磷脂酰膽堿與膽固醇的摩爾比是大約1∶0.01至大約1∶1。
11.權(quán)利要求1的方法，其中所述的脂質(zhì)體包括磷脂酰膽堿，并且進(jìn)一步包括膽固醇，其中磷脂酰膽堿與膽固醇的摩爾比是大約1.5∶1.0至大約3.0∶1.0。
12.權(quán)利要求1的方法，其中所述的脂質(zhì)體是單層的并且小于大約100nm。
13.權(quán)利要求1的方法，其中所述的脂質(zhì)體與藥物的重量比為至多大約200∶1。
14.權(quán)利要求1的方法，其中所述的脂質(zhì)體與藥物的重量比是大約1∶1至大約100∶1。
15.權(quán)利要求1的方法，其中所述的脂質(zhì)體與藥物的重量比是大約1∶1至大約50∶1。
16.權(quán)利要求1的方法，其中所述酸具有小于大約1×10-2的酸解離常數(shù)。
17.權(quán)利要求1的方法，其中所述酸具有小于大約1×10-4的酸解離常數(shù)。
18.權(quán)利要求1的方法，其中所述酸具有小于大約1×10-5的酸解離常數(shù)。
19.權(quán)利要求1的方法，其中所述酸具有對(duì)于脂質(zhì)體大于大約1×10-4m/sec的滲透系數(shù)。
20.權(quán)利要求1的方法，其中所述酸選自甲酸、乙酸、丙酸、丁酸、戊酸、檸檬酸、草酸、琥珀酸、乳酸、蘋果酸、酒石酸、富馬酸、苯甲酸、烏頭酸、藜蘆酸、磷酸、硫酸及其組合。
21.權(quán)利要求1的方法，其中所述酸是檸檬酸。
22.權(quán)利要求1的方法，其中使用至多大約50mM的酸。
23.權(quán)利要求1的方法，其中當(dāng)藥物溶解于含水介質(zhì)中時(shí)，以帶電荷狀態(tài)存在。
24.權(quán)利要求1的方法，其中所述藥物是包含至少一個(gè)能被質(zhì)子化的非環(huán)或環(huán)氨基有機(jī)化合物。
25.權(quán)利要求1的方法，其中所述藥物是包含至少一個(gè)伯胺基團(tuán)、至少一個(gè)仲胺基團(tuán)、至少一個(gè)叔胺基團(tuán)、至少一個(gè)季胺基團(tuán)或者它們的任意組合的有機(jī)化合物。
26.權(quán)利要求1的方法，其中所述藥物是抗腫瘤藥物。
27.權(quán)利要求1的方法，其中所述藥物是兩種或多種抗腫瘤藥物的組合。
28.權(quán)利要求1的方法，其中所述藥物是可電離的堿性抗腫瘤藥物。
29.權(quán)利要求1的方法，其中所述藥物是蒽環(huán)類化療藥物，蒽二酮、兩親性藥物或長春花生物堿。
30.權(quán)利要求29的方法，其中所述蒽環(huán)類化療藥物選自多柔比星，表柔比星和柔紅霉素。
31.權(quán)利要求29的方法，其中所述蒽二酮是米托蒽醌。
32.權(quán)利要求29的方法，其中所述兩親性藥物是親脂性胺。
33.權(quán)利要求29的方法，其中所述長春花生物堿選自長春新堿和長春堿。
34.權(quán)利要求1的方法，其中所述藥物是抗腫瘤抗菌素。
35.權(quán)利要求1的方法，其中所述藥物不是喜樹堿或者其類似物。
36.權(quán)利要求1的方法，其中所述藥物是烷基化試劑。
37.權(quán)利要求36的方法，其中所述烷基化試劑選自環(huán)磷酰胺和氮芥鹽酸鹽。
38.權(quán)利要求1的方法，其中所述藥物是嘌呤或嘧啶衍生物。
39.權(quán)利要求38的方法，其中所述嘌呤或嘧啶衍生物是5-氟尿嘧啶。
40.權(quán)利要求1的方法，其中步驟(a)中的溫度是大約40℃至大約70℃。
41.權(quán)利要求1的方法，其中步驟(a)中的溫度是大約50℃至大約60℃。
42.權(quán)利要求1的方法，其中步驟(b)中溶液被冷卻至大約0℃至大約30℃的溫度。
43.權(quán)利要求1的方法，其中通過包括下面步驟的方法制備步驟(a)中的溶液(i)使脂質(zhì)體與酸的水溶液接觸；(ii)將溶液均勻化；和(iii)任選地去除任何外部酸。
44.權(quán)利要求43的方法，其中通過過濾外部酸而在步驟(iii)中去除外部酸。
45.權(quán)利要求1的方法，其中所述弱堿是膜可滲透胺。
46.權(quán)利要求1的方法，其中所述弱堿是銨鹽或烷基胺。
47.權(quán)利要求1的方法，其中所述弱堿是帶有一價(jià)或多價(jià)抗衡離子的銨鹽。
48.權(quán)利要求1的方法，其中所述弱堿選自硫酸銨、氫氧化銨、乙酸銨、氯化銨、磷酸銨、檸檬酸銨、琥珀酸銨、乳糖酸銨、碳酸銨、酒石酸銨和草酸銨，以及它們的組合。
49.權(quán)利要求1的方法，其中所述弱堿是選自甲胺、乙胺、二乙胺，乙二胺和丙胺的烷基-胺。
50.權(quán)利要求1的方法，進(jìn)一步包括，在步驟(c)期間或之后去除任何沒有裝填的藥物。
51.權(quán)利要求50的方法，其中沒有裝填的藥物的去除采用通過交叉過濾或透析去除沒有裝填的藥物。
52.權(quán)利要求1的方法，進(jìn)一步包括，在步驟(c)之后使脂質(zhì)體脫水。
53.權(quán)利要求52的方法，其中脫水是在低于大約1大氣壓的壓力下進(jìn)行的。
54.權(quán)利要求52的方法，其中脫水通過脂質(zhì)體的事先冷凍進(jìn)行。
55.權(quán)利要求52的方法，其中脫水在一種或多種保護(hù)性單糖、一種或多種保護(hù)性雙糖或者它們的組合的存在下進(jìn)行。
56.權(quán)利要求55的方法，其中保護(hù)性糖選自海藻糖、蔗糖、麥芽糖和乳糖。
57.權(quán)利要求52的方法，進(jìn)一步包括在脫水之后將脂質(zhì)體再次水合。
58.權(quán)利要求1的方法，其中脂質(zhì)體是單層脂質(zhì)體。
59.權(quán)利要求1的方法，其中脂質(zhì)體是多層脂質(zhì)體。
60.權(quán)利要求1的方法，其中大約90wt％以上的藥物被捕獲到脂質(zhì)體中。
61.權(quán)利要求1的方法，進(jìn)一步包括，在步驟(c)之后，使脂質(zhì)體與藥學(xué)可接受載體接觸。
62.權(quán)利要求1的方法，其中所述酸以大約20mM至大約60mM存在。
63.制備藥物組合物的方法，包括(a)在至多大約60mM的酸水溶液中，在其中藥物的質(zhì)子化形式帶電荷并且不能透過脂質(zhì)體膜、并且其中藥物的非質(zhì)子化形式不帶電荷并且能透過脂質(zhì)體膜的溫度下，使脂質(zhì)體溶液與藥物接觸；(b)將溶液冷卻至藥物的非質(zhì)子化形式不能透過脂質(zhì)體膜的溫度；(c)使溶液與弱堿接觸，所述弱堿的量可有效提高內(nèi)部脂質(zhì)體的pH以提供具有內(nèi)低/外高pH梯度的梯度裝填的脂質(zhì)體；和(d)使脂質(zhì)體與藥學(xué)可接受載體混合提供藥物組合物。
64.一種方法，包括對(duì)哺乳動(dòng)物施用權(quán)利要求63的藥物組合物。
65.治療患有癌癥的哺乳動(dòng)物的方法，該方法包括對(duì)哺乳動(dòng)物施用權(quán)利要求63的藥物組合物，其中所述藥物是抗腫瘤藥物。
66.權(quán)利要求65的方法，其中所述癌癥是腫瘤、卵巢癌、小細(xì)胞肺癌(SCLC)、非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)，白血病、肉瘤、結(jié)直腸癌、頭部癌癥、頸部癌癥或乳腺癌。
67.權(quán)利要求65的方法，其中通過脂質(zhì)體制劑的抗腫瘤藥物的施用具有比和游離形式的抗腫瘤藥物施用相關(guān)的毒性分布更低的毒性分布。
68.權(quán)利要求67的方法，其中所述毒性選自胃腸毒性和積蓄性劑量依賴性不可逆心肌病。
69.權(quán)利要求65的方法，其中抗腫瘤藥物的施用具有比和游離形式的抗腫瘤藥物施用相關(guān)的不期望的副作用較低的發(fā)生率、嚴(yán)重程度或其組合的不期望的副作用。
70.權(quán)利要求69的方法，其中不期望的副作用選自骨髓抑制、脫發(fā)、粘膜炎、惡心、嘔吐和厭食。
71.通過包括下面步驟的方法制備的具有內(nèi)低/外高pH梯度的梯度裝填的脂質(zhì)體，所述方法包括(a)在至多大約60mM的酸水溶液中，在其中藥物的質(zhì)子化形式帶電荷并且不能透過脂質(zhì)體膜、并且其中藥物的非質(zhì)子化形式不帶電荷并且能透過脂質(zhì)體膜的溫度下，使脂質(zhì)體溶液與藥物接觸；(b)將溶液冷卻至藥物的非質(zhì)子化形式不能透過脂質(zhì)體膜的溫度；和(c)使溶液與弱堿接觸，所述弱堿的量可有效提高內(nèi)部脂質(zhì)體的pH以提供具有內(nèi)低/外高pH梯度的梯度裝填的脂質(zhì)體。
全文摘要
提供了一種將藥物(例如抗腫瘤藥)包囊在優(yōu)選具有高藥物脂質(zhì)比的脂質(zhì)體中的方法。脂質(zhì)體可以通過一種借助于利用跨膜pH梯度的活性機(jī)理裝填藥物的方法制備得到。利用這種方法，捕獲效率達(dá)到100％。所使用的藥物脂質(zhì)比高于現(xiàn)有的傳統(tǒng)脂質(zhì)體制劑，降低了藥物從脂質(zhì)體的釋放速率。裝填后，殘余酸用在低溫下可滲透的堿猝滅劑猝滅。于是降低了殘余酸度，因而提高了化學(xué)穩(wěn)定性(例如防止水解)，保持了脂質(zhì)體和藥物在給藥之前的穩(wěn)定性。當(dāng)脂質(zhì)體在體內(nèi)施用時(shí)，由于猝滅劑迅速逸出脂質(zhì)體，所以存在pH梯度。
文檔編號(hào)A61K31/55GK1717221SQ200380104175
公開日2006年1月4日 申請(qǐng)日期2003年11月26日 優(yōu)先權(quán)日2002年11月26日
發(fā)明者M·蘇里文, S·楊, 胡寧, G·M·詹森 申請(qǐng)人:吉里德科學(xué)公司