專利名稱：血漿制劑或血清制劑及其制造方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及安全性高的人及動物的血漿或血清及其制造方法。
背景技術(shù)：
人的血漿或血清及動物的血漿或血清有潛在地混入病毒的可能性。因而，由于血漿、血清及以其為原料制造的血液制劑的使用，如果是人，就不能否定有感染愛滋病毒及各種肝炎病毒等危險性高的病毒的可能性。
以前，提出了有關(guān)這些血液制劑使用的防止病毒感染的方法。例如作為使血液制劑中存在的病毒鈍化的方法，有公知的使用表面活性劑和亞甲藍的化學(xué)鈍化方法等?？墒遣徽撃欠N方法，由于蛋白質(zhì)活性降低，所用化學(xué)物質(zhì)的除去等，所以復(fù)雜的操作是必要的，另外，還有化學(xué)物質(zhì)殘留的缺點。
另一方面，利用膜去除病毒的方法，作為不使蛋白質(zhì)變性，也沒有實質(zhì)地使活性降低，提高對病毒的安全性的方法，與其他的方法相比是優(yōu)異的。例如在特開昭61-16837號公報及特開昭63-68176號公報中，記載了通過把血漿用具有特別性能的多孔質(zhì)中空絲處理，對于丙型肝炎病毒或愛滋病毒能確保高的安全性的方法。
同樣，在特開平1-192368號公報及特開平1-254205號公報中，公開了使用再生性纖維素的過濾膜的過濾方法及其系統(tǒng)。它們中的任何一個均提出了根據(jù)病毒的大小分離病毒的方法。另一方面，在特開平10-28581號公報中，公開了在溶液的特殊條件下，使用孔徑大于病毒粒徑的膜去除病毒的方法。
另外，在特開2000-334037號公報中，提出了著眼于包膜病毒和LDL(Low density lipoprotein低比重脂蛋白)結(jié)合，利用LDL去除用的膜除去病毒的方法。
可是，這些中的任一種方法均有缺點。上述專利文獻5及6是通過使病毒在特殊條件下凝集或者和其他的混合物結(jié)合，通過排除或吸附而除去的方法。這些方法存在能去除的病毒的種類很有限及由于條件的變動而使去除效果不確定的缺點。
另一方面，特開昭61-16837號公報及特開昭63-68176號公報是把病毒的粒徑和粒徑比病毒的粒徑小的蛋白質(zhì)根據(jù)其大小分離的方法。在該膜中，病毒的去除率、蛋白質(zhì)的透過性能都不能充分滿足。另一方面，特開平1-192368號公報及特開平1-254205號公報雖然針對病毒除去率是優(yōu)良的方法，但是在蛋白質(zhì)處理量上存在問題，尚不能實用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的課題是提供從有病毒污染可能性的血漿、血清中有效的去除病毒，并且工業(yè)可行的制造安全的血漿制劑、血清制劑的方法及由該方法制造的血漿制劑、血清制劑。
如上所述，使用膜不讓蛋白質(zhì)變性的同時提高對病毒的安全性的方法，一直以來都在被探討，可是，血漿、血清因為夾雜的蛋白質(zhì)很多，并且含有大量的高分子量的有用蛋白質(zhì)，所以提供一種在確保有用蛋白質(zhì)透過性的同時，確實的去除重篤病毒的方法是困難的。
本發(fā)明人等，為了解決上述課題重復(fù)各種研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)通過在使用病毒去除膜過濾作為原料的人或動物的血漿前，導(dǎo)入除去白細胞的工序，有效的去除病毒是可能的，從而完成了本發(fā)明。
即、本發(fā)明涉及(1)人或動物的血漿制劑或血清制劑的制造方法，是包括下述(a)工序及(b)工序的制造方法(a)從來自于人或動物的全血中分離血漿，使血漿中的白細胞減少的工序，(b)在(a)工序之后進行使用病毒去除膜的過濾工序。
(2)人或動物的血漿制劑或血清制劑的制造方法，是包括下述(a)工序及(b)工序的制造方法(a)從來自于人或動物的全血中立即分離血漿，分離后立即使血漿中的白細胞減少的工序，(b)在(a)工序之后進行使用病毒去除膜的過濾工序。
(3)上述(1)或(2)中記載的制造方法，其特征在于(b)工序的病毒去除膜的平均孔徑是100nm以下。
(4)上述(1)～(3)中任一項記載的制造方法，其中(a)工序是通過白細胞除去膜使白細胞減少的工序。
(5)上述(1)～(4)中任一項記載的制造方法，其特征在于(a)及(b)工序是在25～40℃的溫度環(huán)境下進行的。
(6)上述(1)～(5)中任一項記載的制造方法，其特征在于(a)及(b)工序是在98kPa以下的壓力環(huán)境下進行的。
(7)上述(1)～(6)中任一項記載的制造方法，其特征在于在(a)及(b)工序中，使之通過的血液量是100ml～500ml。
(8)上述(1)～(7)中任一項記載的制造方法，其特征在于(b)工序的處理時間是10-40分鐘。
(9)上述(1)～(8)中任一項記載的制造方法，其特征在于(b)工序中使用的病毒去除膜的平均孔徑是75nm以下。
(10)上述(1)～(9)中任一項記載的制造方法，其特征在于(b)工序中使用的病毒去除膜是平均孔徑為75nm的病毒去除膜和繼之以平均孔徑為35nm的病毒去除膜的組合。
(11)人或動物的血漿制劑或血清制劑，是通過包括下述(a)及(b)工序的工序來制造的(a)從來自于人或動物的全血中分離血漿，從血漿中使白細胞減少的工序，(b)在(a)工序之后進行使用病毒去除膜的過濾工序。
具體實施例方式
本發(fā)明是基于發(fā)現(xiàn)了在使用病毒去除膜過濾新鮮冷凍血漿的冷凍前的血漿之際，通過預(yù)先使白細胞減少，在確保有用物質(zhì)的透過性的同時，能夠確實有效的去除病毒而完成的。
另外，本發(fā)明發(fā)現(xiàn)了不從全血中進行白細胞去除，而是通過從全血中首先分離血漿后再使白細胞減少，確實有效的去除病毒。
作為本發(fā)明的人或動物的血漿制劑或血清制劑的制造原料的血漿或血清，優(yōu)選新鮮冷凍血漿的冷凍前的原料血漿。另外，由于冷凍前保存時間長的血漿所含蛋白質(zhì)、脂質(zhì)等結(jié)合，在過濾操作之際，會引起透過率降低及透過率透過量的降低，所以優(yōu)選冷凍前保存時間短的血漿。
在本發(fā)明中，減少白細胞的工序只要是能使白細胞減少的任何方法都可以。例如有超離心分離的方法等，可是優(yōu)選簡單的使用白細胞除去膜的方法。白細胞除去膜只要是使白細胞減少的膜，雖然可以不問材料等，可是，但還是優(yōu)選使用例如聚酯無紡布。
所謂本發(fā)明中的病毒去除膜，意味著是至少具有把病毒和蛋白質(zhì)根據(jù)其大小的不同而分離的功能的膜，不論是再生纖維素、聚乙烯、聚偏氟乙烯等材料，但再生纖維素由于對蛋白質(zhì)的吸附少而優(yōu)選。
另外，在現(xiàn)在使用的各種病毒去除膜中，表示其平均孔徑的方法和尺度尚未統(tǒng)一，但在本發(fā)明中所謂病毒去除膜的平均孔徑是把病毒去除膜的平均孔徑根據(jù)病毒去除性能作如下定義。
即、所謂平均孔徑Anm的病毒去除膜，意味著能有效去除具有粒徑Anm以上的粒徑的病毒。所謂有效去除，意味對數(shù)去除率(LRV＝-log10(過濾后病毒濃度/過濾前病毒濃度))為3以上，優(yōu)選4以上，更優(yōu)選6以上。例如所謂平均孔徑100nm的病毒去除膜，意味能有效去除粒徑100nm以上的病毒。
根據(jù)想去除的病毒的平均粒徑，來選擇使用的病毒去除膜。例如具有100nm平均孔徑的病毒去除膜，作為除去對象的病毒具體的是愛滋病毒(HIV，平均粒徑100-120nm)、假性狂犬病毒(PSR，平均粒徑120-200nm)、小鼠白血病病毒(MuLV，平均粒徑120-150nm)等。
為了從血漿或血清中除去愛滋病毒(HIV)，病毒去除膜的平均孔徑在100nm以下是有效的。再者，平均孔徑如果是75nm以下，因病毒混入的可能性更加降低而優(yōu)選，并且，也能去除含有100nm以下75nm以上粒子系的病毒，所得到的制劑的安全性增加。
蛋白質(zhì)的透過性越高越優(yōu)選，總蛋白質(zhì)透過率優(yōu)選70％以上，更優(yōu)選80％以上。
另外，病毒去除膜通過選擇適當?shù)目讖?，也可去除病原性因子和不要的血漿混入物。
本發(fā)明是由從新鮮血漿中(a)使用白細胞除去膜等減少白細胞的工序和(b)在(a)工序完成之后使用病毒去除膜過濾去除病毒的工序構(gòu)成的制造安全性高的血漿的方法，只要是能進行這些工序的裝置和操作均可，可是如果在具有(i)溫度控制裝置及(ii)加壓的制造氣氛的可能控制的條件下進行，操作結(jié)果的再現(xiàn)性可以被期待，過濾后的血漿的品質(zhì)因為穩(wěn)定，所以優(yōu)選。
根據(jù)溫度控制裝置((i))控制的溫度，只要是蛋白質(zhì)未變性的溫度不論幾度均可，但優(yōu)選25～45℃。過濾溫度如果小于25℃，血漿的粘度就會變高，因而過濾需要長的處理時間，在實用的時間范圍內(nèi)處理變得困難。因此，溫度優(yōu)選25℃以上。另一方面，處理溫度如果比45℃高，蛋白質(zhì)的質(zhì)量有因為熱而降低的可能，所以不優(yōu)選。更優(yōu)選30～37℃。
處理時的壓力如果在膜的耐壓以下，不論什么樣的值均可。如果是98KPa以下的壓力，因為蛋白質(zhì)的變性少，所以優(yōu)選。更優(yōu)選80KPa以下。
另外，本發(fā)明在把血漿從來自于人或動物的全血中分離之際，希望是立即分離血漿。所謂“立即”就是由于血漿中的蛋白質(zhì)凝集等原因而維持膜的透過率不降低的時間，通常在4小時以內(nèi)，優(yōu)選2小時以內(nèi)，更優(yōu)選1小時以內(nèi)，最優(yōu)選10分鐘以內(nèi)。
1次處理血漿的容量沒有特別的限制，可是因為從一個個體所能采集的血漿通常是100～500ml，所以100～500ml通常是1次處理的容量。如果是100ml以下，作為1次處理量在經(jīng)濟上不合算而不優(yōu)選，如果是500ml以上，從一個個體上采集，對個體的負擔(dān)大。更優(yōu)選200～400ml。
另外，處理時間根據(jù)處理的血漿量和膜的面積等決定，優(yōu)選設(shè)定成40分鐘以下。從個體采血同時過濾的情況下，定為40分鐘以下，是因為對個體的負擔(dān)小，同時考慮過長的過濾時間會有制劑變質(zhì)的可能性。
再者，在如上操作中，把減少白細胞后的血漿用孔徑為75nm的病毒去除膜過濾，繼之以用孔徑為35nm的病毒去除膜過濾后，丙型肝炎病毒(HCV，平均粒徑30-60nm)等的危險病毒被除去，能提供安全性更高的血漿制劑。
另外，也可以把預(yù)先自血漿中去除血纖維蛋白原的血清作為原料使用。或者通過在血漿制劑制造工序的任一工序中除去血纖維蛋白原等，同樣的能夠制造安全性高的血漿制劑。
實施例以下，舉實施例說明本發(fā)明。
實施例1使用Fresenius公司制造的血漿分離采取裝置AF104，把從獻血者的血液中分離的血漿立即用旭化成公司制造的白細胞除去膜[セパセル]過濾，再用旭化成公司制造的病毒去除膜[プラノバ]過濾。所使用的[プラノバ]是用膜面積為0.06m2、最初平均孔徑75nm的病毒去除膜過濾，繼之以35nm的病毒去除膜過濾。過濾使用JMS公司制造的泵OT-601，在一定的流速下進行。過濾溫度控制在35℃±2℃。
30分鐘處理血漿量250ml，壓力是0.3～0.6kg/cm2。蛋白質(zhì)的透過量記載于表1。根據(jù)表1，在用平均孔徑為75nm的病毒去除膜過濾的情況下，蛋白質(zhì)的透過量是75％以上，即使是平均孔徑為35nm，球蛋白及清蛋白是90％以上，F(xiàn)-VIII也是50％以上，從而可知沒有實用上的問題。
比較例1除不進行實施例1中的白細胞除去膜[セパセル]過濾及平均孔徑為75nm的病毒去除膜[プラノバ]過濾以外，其余和實施例1同樣的進行。用平均孔徑35nm、膜面積0.06m2的プラノバ過濾開始后，在過濾了50ml得時，因為壓力超過1.0kg/cm2，所以中止過濾。
表1

比較例2采集全血液后，加入抗凝固液，立即在4℃保存2小時。之后，用旭化成公司制造的白細胞去除膜[セパセル]去除白細胞，然后，通過離心分離來分離血漿。
分離的血漿采用和實施例1相同的條件，使用膜面積0.06m2、平均孔徑75nm的病毒去除膜[プラノバ]，在0.3kg/cm2的初期壓力下，開始過濾，在過濾了70ml的時候，壓力超過1.0kg/cm2，中止過濾。
產(chǎn)業(yè)上的利用可能性根據(jù)本發(fā)明得到的血漿制劑或血清制劑，對應(yīng)于過濾的病毒去除膜的平均孔徑，病毒的安全性提高，所以根據(jù)使用目的，可直接用于輸血，或者作為冷凍新鮮血漿保存，進而可作為輸血或分化制劑的原料血漿使用。
權(quán)利要求
1.人或動物的血漿制劑或血清制劑的制造方法，是含有下述(a)工序及(b)工序的制造方法(a)從來自于人或動物的全血中分離血漿，使血漿中的白細胞減少的工序，(b)在(a)工序之后進行使用病毒去除膜的過濾工序。
2.人或動物的血漿制劑或血清制劑的制造方法，是包括含有下述(a)工序及(b)工序的制造方法(a)從來自于人或動物的全血中立即分離血漿，分離后立即使血漿中的白細胞減少的工序，(b)在(a)工序之后進行使用病毒去除膜的過濾工序。
3.權(quán)利要求1或2中記載的制造方法，其特征在于(b)工序的病毒去除膜的平均孔徑是100nm以下。
4.權(quán)利要求1～3中任一項記載的制造方法，其中(a)工序是通過白細胞除去膜使白細胞減少的工序。
5.權(quán)利要求1～4中任一項記載的制造方法，其特征在于(a)工序及(b)工序是在25～40℃的溫度環(huán)境下進行的。
6.權(quán)利要求1～5中任一項記載的制造方法，其特征在于(a)工序及(b)工序是在98kPa以下的壓力環(huán)境下進行的。
7.權(quán)利要求1～6中任一項記載的制造方法，其特征在于在(a)工序及(b)工序中，使之通過的血液量是100ml～500ml。
8.權(quán)利要求1～7中任一項記載的制造方法，其特征在于(b)工序的處理時間是40分鐘以下。
9.權(quán)利要求1～8中任一項記載的制造方法，其特征在于(b)工序中使用的病毒去除膜的平均孔徑是75nm以下。
10.權(quán)利要求1～9中任一項記載的制造方法，其特征在于(b)工序中使用的病毒去除膜是平均孔徑為75nm的病毒去除膜和繼之以平均孔徑為35nm的病毒去除膜的組合。
11.人或動物的血漿制劑或血清制劑，是通過包括下述(a)工序及(b)工序的工序來制造的(a)從來自于人或動物的全血中分離血漿，從血漿中使白細胞減少的工序，(b)在(a)工序之后進行使用病毒去除膜的過濾工序。
全文摘要
本發(fā)明涉及病毒混入的可能性極低的血漿制劑、血清制劑及其制造方法。把血漿制劑、血清制劑的原料的血漿或血清在應(yīng)用病毒去除膜之前，通過除去血液中的夾雜物的白細胞，以防止網(wǎng)孔堵塞，高效率的制造病毒混入可能性極低的血漿制劑、血清制劑。因為難于發(fā)生網(wǎng)孔堵塞，所以隨著過濾的進行也沒有必要采用高壓力，實現(xiàn)高效率的過濾是可能的。
文檔編號A61K35/16GK1705490SQ20038010153
公開日2005年12月7日 申請日期2003年10月16日 優(yōu)先權(quán)日2002年10月16日
發(fā)明者佐藤裕, 佐藤哲男, T·比爾努夫, M·拉多塞維奇, H·A·高布蘭 申請人:旭化成制藥株式會社