專利名稱：一種除皺祛疤的注射劑及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種除皺祛疤的注射劑及其制備方法，屬于組織工程領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
二十年前人們采用注射牛的膠原蛋白來治療皺紋和疤痕，但其會出現(xiàn)過敏反應(yīng)，同時會被組織較快的吸收，只能維持幾個月的時間。為了克服這種過敏反應(yīng)的缺點，有些醫(yī)院采用自體皮制成膠原蛋白來注射，結(jié)果是制備過程需要大量的皮膚，而注射后仍會被組織很快的吸收。近年來許多人采用肉毒素注射來治療皺紋和疤痕，其結(jié)果也只能維持比較短的時間，并且治療后治療者的表情極不自然。

發(fā)明內(nèi)容
為了克服這些產(chǎn)品的不足之處，本發(fā)明的目的是提供一種高效、長久、愈后自然的除皺祛疤的注射劑。
本注射劑采用了人的自體皮膚經(jīng)過消化分離出真皮成纖維細(xì)胞，進(jìn)行體外擴(kuò)增，然后注射到治療者的皺紋或疤痕部位，這些細(xì)胞在其注射部位產(chǎn)生膠原組織，消除皺紋和填平疤痕。
本發(fā)明的另一個目的是提供這種注射劑的制備方法。
為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案一種除皺祛疤的注射劑，由1000萬-4000萬個真皮成纖維細(xì)胞和2-4ml濃度5％的葡萄糖注射液組成。
所述的真皮成纖維細(xì)胞是將來源于患者自體的真皮成纖維細(xì)胞經(jīng)體外擴(kuò)增、培養(yǎng)得到的。
一種除皺祛疤的注射劑的制備方法，是將來源于患者自體的真皮成纖維細(xì)胞在體外擴(kuò)增培養(yǎng)，再按照每1000萬-4000萬個真皮成纖維細(xì)胞加入2-4ml濃度5％的葡萄糖注射液，制成懸濁液。
本發(fā)明是一種用患者自體皮膚細(xì)胞在體外經(jīng)過增殖、培養(yǎng)后再次注射到皺紋、疤痕部位進(jìn)行修復(fù)的除皺祛疤產(chǎn)品，該產(chǎn)品在這些部位產(chǎn)生膠原蛋白從而使溝紋和疤痕長平，在消除皺紋和疤痕同時又能改善局部皮膚的環(huán)境，起到年輕美顏的作用。
本發(fā)明的優(yōu)點本發(fā)明使用的生物材料取自患者自體，無排斥反應(yīng)，無副作用，治療者用過后美容療效顯著，表情自然，且效果作用持久，可維持?jǐn)?shù)年。
下面
具體實施例方式
對本發(fā)明作進(jìn)一步說明。
具體實施例方式
實施例1、除皺祛疤的注射劑的制備一.自體健康細(xì)胞的提取用70％的酒精消毒耳后或胳膊內(nèi)側(cè)，然后用10％的利多卡因和十萬分之一的腎上腺素進(jìn)行局部表面麻醉。用取皮器將4平方毫米的表皮和真皮組織取下，放入組織保存液(DMEM和10％胎牛血清，美國Hyclone公司)中，將創(chuàng)傷部位做一針縫合，創(chuàng)可貼覆蓋。
二.細(xì)胞懸液的制備1.組織消化(Sanya CO2培養(yǎng)箱)將皮膚組織塊放置于35mm培養(yǎng)皿中加入2ml濃度為0.05％的胰酶/EDTA液，37℃，10分鐘；DMEM+10％FBS培養(yǎng)液終止。
2.細(xì)胞分離將消化后的組織塊剪碎并用吸管打散。
3.離心吹散后的細(xì)胞收集至離心管中，Backman公司控溫離心機(jī)，25℃，1000轉(zhuǎn)/min，離心5分鐘，棄去上清液。
4.原代細(xì)胞培養(yǎng)在離心管中加入加1ml低血清真皮細(xì)胞培養(yǎng)液(Sigma公司，美國)吹懸，接種入1×35mm培養(yǎng)皿；Sanya CO2培養(yǎng)箱，37℃，5％ CO2，進(jìn)行培養(yǎng)。
5.傳代細(xì)胞培養(yǎng)每隔2-3天換液1次，當(dāng)細(xì)胞達(dá)到50-70％匯集細(xì)胞后傳代。
6.配制注射劑在體外傳代至第4-6周后的真皮成纖維細(xì)胞，按每1000萬-4000萬個成纖維細(xì)胞加入2-4ml濃度為5％的葡萄糖注射液，配制成懸濁液。
三.產(chǎn)品檢測1.病毒檢測將皮膚組織進(jìn)行培養(yǎng)四周后，取1ml含有細(xì)胞的培養(yǎng)液送北京傳染病醫(yī)院進(jìn)行HIV和肝炎病毒的檢驗，確定此為無病毒細(xì)胞。
2.免疫反應(yīng)測試第四周將0.1ml細(xì)胞懸浮液對受術(shù)者進(jìn)行皮試(同青霉素皮試方法)，以確保無免疫反應(yīng)。
3.成品檢測1)外觀本品為淡白色混懸液。
2)無菌試驗按《中國生物制品規(guī)程》(2000版)通則《生物制品無菌試驗規(guī)程》A/B項進(jìn)行，結(jié)果符合無菌要求。
產(chǎn)品的儲存和運(yùn)輸應(yīng)在2℃-10℃、陰涼、干燥、清潔、避免陽光直射、無腐蝕性氣體、無重壓的環(huán)境中進(jìn)行。
實施例2、臨床報告一.病例標(biāo)準(zhǔn)(病例數(shù)28例)1.納入標(biāo)準(zhǔn)年齡在55歲以下(包括55歲)；皺紋者為額頭、眼周、口周皺紋；疤痕者為粉刺、創(chuàng)傷疤痕(大小范圍無要求)。
2.排除標(biāo)準(zhǔn)年齡在55歲以上患者；有自身免疫性疾??；有慢性皮膚病者；有傳染病者。
二.制備注射劑依照實施例1的方法進(jìn)行。
三.治療1.患者術(shù)前檢查血尿便常規(guī)、心電圖、肝腎功能、HIV、HbsAg。
2.將注射部位用70％的酒精消毒，局部注射1％的利多卡因，或者表皮用2.5％利多卡因和2.5％丙氨卡因軟膏麻醉。
3.將1.5ml細(xì)胞懸液吸入3ml的注射器中備用。
4.取2.2cm長的4.5號針頭，采用多點斜面(針頭與皮膚的角度20°-45°)將細(xì)胞懸液注入到真皮層的上層與中層，每個注射部位選取15-20點，每點注射細(xì)胞懸液0.05-0.1ml。注射時應(yīng)將注射部位表皮拉緊，使其發(fā)白，注射時應(yīng)使注射部位留有彌散空間。對皺紋或疤痕部全部注射，注射完后用冰袋外敷2小時。
術(shù)后24小時內(nèi)注射局部可能有輕度腫脹、麻木等感覺，一般無其它的局部和全身反應(yīng)。
療程一般皺紋注射2次，大的皺紋或瘢痕注射三次，每次注射間隔2-4周。
四、術(shù)后觀察、調(diào)護(hù)1.手術(shù)后，用冰袋敷注射處2小時。
2.觀察局部及全身的情況。
3.每天二次口服維生素C(每次200mg，每天共400mg)，或者局部搽含有維生素C的面霜，約6個月。
4.術(shù)后3天內(nèi)防曝曬及慎用刺激性化妝品。
五.療效分析經(jīng)過對28例的病例分析，其中一次注射的病例有20例，兩次注射的有8例，觀察時間6個月，結(jié)果為病人我感覺滿意的有24例(其滿意率為85.7％)，其皺紋、疤痕明顯消失，皮膚基質(zhì)狀況明顯得到改善。
其中有個別治療者至今已觀察二年，其皺紋、疤痕已完全消失，皮膚光滑而富有彈性。
權(quán)利要求
1.一種祛皺除疤的注射劑，其特征在于該注射劑由1000萬-4000萬個真皮成纖維細(xì)胞和2-4ml濃度5％的葡萄糖注射液組成。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的除皺祛疤的注射劑，其特征在于所述的真皮成纖維細(xì)胞是由來源于患者自體的真皮成纖維細(xì)胞經(jīng)體外擴(kuò)增、培養(yǎng)得到的。
3.一種祛皺除疤的注射劑的制備方法，其特征在于該方法是將來源于患者自體的真皮成纖維細(xì)胞在體外擴(kuò)增和培養(yǎng)，再按照每1000萬-4000萬個真皮成纖維細(xì)胞加入2-4ml濃度5％的葡萄糖注射液，制成懸濁液。
全文摘要
本發(fā)明涉及了一種祛皺除疤的注射液及其制備方法，屬于組織工程領(lǐng)域。該注射劑由1000萬－4000萬個真皮成纖維細(xì)胞和2－4ml濃度5％的葡萄糖注射液組成。其制備方法是將來源于患者自體的真皮成纖維細(xì)胞經(jīng)體外擴(kuò)增培養(yǎng)，再按照每1000萬－4000萬個真皮成纖維細(xì)胞，加入2－4ml濃度5％的葡萄糖注射液，制成懸濁液。本發(fā)明的優(yōu)點是使用的生物材料取自患者自體，無排斥反應(yīng)，無副作用，治療者用過后美容療效顯著，表情自然，且效果作用持久，可維持?jǐn)?shù)年。
文檔編號A61K45/00GK1486702SQ0315583
公開日2004年4月7日 申請日期2003年8月25日 優(yōu)先權(quán)日2003年8月25日
發(fā)明者韓斌, 韓 斌 申請人:北京以嶺生物工程有限公司