專利名稱：人絨毛膜促性腺激素在控制性超排卵中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及體內(nèi)外輔助生殖技術(shù)(ART)領(lǐng)域，特別是使用促性腺激素的控制性超排卵(controlled ovarian hyperstimulation，COH)。
背景技術(shù)：
采用輔助生殖技術(shù)，例如體外受精(IVF)或IVF與卵子胞漿內(nèi)單精子注射(ICSI)結(jié)合以及胚胎移植(ET)治療不孕癥，需要COH來增加婦女配子的數(shù)量(1)。COH的標準方案(2)包括一個向下調(diào)節(jié)的階段，在這個階段中，通過給予促性腺激素釋放激素(GnRH)激動劑來抑制內(nèi)源性黃體生成激素(LH)，接著的是一個刺激階段，在這一階段中，每日給予卵泡刺激素(FSH)，通常約150IU/天，誘導(dǎo)卵泡發(fā)育(卵泡生成)。也可采用有FSH活性的其他分子。另一種選擇是在自然月經(jīng)或誘導(dǎo)月經(jīng)后開始刺激，通常在給予FSH的約第6或7天開始，通過給予GnRH拮抗劑來防止出現(xiàn)LH峰。在輔導(dǎo)生殖技術(shù)的超排卵方案中，主要目的是獲得多卵泡發(fā)育。當至少有3個卵泡＞16毫米(其中一個是18毫米)時，給予單丸劑(single bolus)hCG(5-10,000IU)引發(fā)排卵。注射hCG后36-38小時定為回收卵母細胞的時間。
本發(fā)明使用GnRH激動劑與拮抗劑的基本原理是防止在不適當?shù)臅r間出現(xiàn)可能導(dǎo)致未成熟排卵和卵泡黃體化的LH峰(3)。GnRH激動劑療法已普遍應(yīng)用在臨床上。業(yè)已發(fā)現(xiàn)，長時間治療方案(即在周期的黃體中期先開始誘導(dǎo)排卵或之前開始的方案)更容易給患者安排給藥時間、卵泡產(chǎn)率更高、臨床整體結(jié)果更好(4)。采用GnRH拮抗劑在臨床上相對較新穎，但預(yù)計可獲得相似的有益效果，還有治療周期更短的優(yōu)點。
延長給予GnRH激動劑或給予GnRH拮抗劑的時間，內(nèi)源性LH會被大大抑制。這種與卵泡發(fā)育相矛盾的情形與自然周期不同。自然周期的LH水平慢慢遞增，幾天后在中期達到高峰。
有人探究了絨毛膜促性腺激素(CG)在誘導(dǎo)排卵與輔助生殖技術(shù)中的作用。眾所周知及本技術(shù)領(lǐng)域公認誘導(dǎo)排卵的技術(shù)和方法與COH方案截然不同，盡管二者都可能涉及給予FSH。
Filicori等人研究了低劑量hCG作為LH的替代品在控制性超排卵中的作用(5)。hCG的給予(50IU hCG/天)與FSH的給予同時開始，連續(xù)每日給予hCG，直至用hCG丸劑引發(fā)排卵。接受hCG的組與僅接受FSH的組所得到的小卵泡(＜10毫米)、中卵泡(10-14毫米)和大卵泡(＞14毫米)數(shù)量接近，但hCG治療組的FSH的累計劑量與FSH的刺激時間均減少。
Messinis等人報導(dǎo)了無卵性婦女(世界衛(wèi)生組織I組)的誘導(dǎo)排卵，采用的療法是在刺激階段給予日劑量hMG(FSH和LH各75IU)，在黃體期給予單劑量或多劑量hCG。結(jié)果發(fā)現(xiàn)在黃體期接受多劑量hCG的患者妊娠率比僅接受誘導(dǎo)/引發(fā)排卵的單劑量hCG的對照組有顯著上升(6)。
當然，適當?shù)穆雅莅l(fā)育是輔助生殖技術(shù)方法獲得成功的基本條件。然而，有某些情況排卵與受精都完成了，但胚胎的不適當著床卻導(dǎo)致無法懷孕。另一些情況是懷孕最初三個月自然早產(chǎn)(流產(chǎn))。這兩個問題都與子宮內(nèi)膜的情況有關(guān)，子宮內(nèi)膜對激素水平相當敏感。
由此可見，即使卵泡發(fā)育、排卵和受精都發(fā)生了，但仍不保證成功懷孕，因為常遇到著床與早產(chǎn)問題。
一些患者容易流產(chǎn)或無法著床的問題最后都可得到解決，但這樣做需要重復(fù)多個ART周期，結(jié)果對患者的生理和心理產(chǎn)生負面作用。對于另一些患者，這些問題是使她們不能懷孕的一個永久障礙。
因此，有必要提供提高著床率以及降低早產(chǎn)率，特別是與COH結(jié)合的方法。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的一個目的在于提供一種給予促性腺激素進行COH，從而提高著床率和降低流產(chǎn)率的改進方法。
本發(fā)明的另一個目的在于提供一種例如通過提高著床率和/或降低流產(chǎn)率以使不進行COH的患者如自然排卵周期后的患者或者接受誘導(dǎo)排卵的患者增加妊娠率的方法。
本發(fā)明的第一方面在于提供人絨毛膜促性腺激素(hCG)或其類似物在制備促進人患者胚胎著床和/或降低胚胎流產(chǎn)率的藥物中的應(yīng)用，所述的藥物在排卵或引發(fā)排卵之前給予。
本發(fā)明的第二方面在于提供hCG或其類似物在促進人患者胚胎著床和/或降低胚胎流產(chǎn)率中的應(yīng)用，所述的hCG或其類似物在排卵或引發(fā)排卵之前給予。
本發(fā)明的第三方面在于提供hCG或其類似物在制備結(jié)合控制性超排卵(COH)供采用FSH或其類似物的人患者用，以輔助著床和/或降低流產(chǎn)率的藥物中的應(yīng)用，所述的藥物在開始FSH治療之后第10天之前開始給予。
本發(fā)明的第四方面在于提供hCG或其類似物在結(jié)合COH供采用FSH或其類似物的人患者用，以輔助著床和/或降低流產(chǎn)率中的應(yīng)用，所述的hCG或其類似物在開始FSH治療之后第10天之前開始給予。
本發(fā)明的第五方面在于提供一種藥物組合物，其用于輔助胚胎著床和/或降低流產(chǎn)率，任選地最好與COH結(jié)合，所述的藥物組合物每劑量含有25-1000IU hCG或其類似物。
本發(fā)明的另一方面在于提供結(jié)合COH供采用FSH或其類似物的人患者用，以輔助著床和/或降低流產(chǎn)率的hCG或其類似物，所述的hCG或其類似物在開始FSH治療之后第10天之前開始給予。
在另一實施例中，本發(fā)明提供促進人患者胚胎著床和/或降低胚胎流產(chǎn)率的hCG或其類似物，所述的hCG或其類似物在排卵或引發(fā)排卵之前給予。
本發(fā)明的另一方面在于提供一種促進人患者著床和/或降低流產(chǎn)率的方法，所述方法與采用FSH或其類似物的COH結(jié)合，所述方法包括把hCG或其類似物給予患者，其中所述的給予在開始FSH治療之后第10天之前開始。
本發(fā)明還提供一種促進患者著床和/或降低流產(chǎn)率的方法，所述方法包括把hCG或其類似物給予患者，其中所述的hCG或其類似物在排卵或引發(fā)排卵之前給予。
本發(fā)明的另一方面在于提供一種用于COH的試劑盒，該試劑盒含有每日12或以上，最好14或以上劑量FSH，優(yōu)選約75-200IU FSH/天，更好是約150IU FSH/天，以及每日4-8、5-8或6-8劑量hCG，例如，每日4、5、6、7或8劑量hCG，優(yōu)選約25-1000IU hCG/天，更好是約50-100IU hCG/天。
本發(fā)明的再一方面提供一種輔助胚胎著床和/或降低流產(chǎn)率的試劑盒，該試劑盒含有每日4-8、5-8或6-8劑量hCG，例如，每日4、5、6、7或8劑量hCG，約25-1000IU hCG/天，優(yōu)選約50-100IU hCG/天。這些試劑盒可以或不必與COH聯(lián)用。
本發(fā)明的試劑盒和藥物組合物最好設(shè)計成用在本發(fā)明的方法與應(yīng)用中使用。
具體實施例方式
人絨毛膜促性腺激素(hCG)是一種在懷孕期間由胎盤產(chǎn)生的異源二聚體糖化肽激素。受精后它很快在血清中出現(xiàn)，當LH分泌減少后起著維持黃體的作用，以支持雌激素和孕酮持續(xù)分泌以及防止來月經(jīng)。因為它只以高水平存在于懷孕婦女中，所以不能將它看成在自然排卵周期中有重要作用。眾所周知，hCG的受體存在于性腺、子宮、輸卵管、胎盤以及子宮內(nèi)膜細胞與子宮肌層細胞中(7)。hCG的半衰期在促性腺激素中是最長的(8)。
本發(fā)明人意外地發(fā)現(xiàn)，在ART周期的刺激階段中給予低劑量hCG或類似物，例如通過輔助或改善著床和/或降低流產(chǎn)率而對妊娠率具有有益的效果。術(shù)語“低劑量”包括在一特定患者中，比一般用來在排卵前引發(fā)卵泡成熟即最后的卵泡成熟所用的劑量(“卵泡(或排卵)引發(fā)劑量”)少的劑量。hCG的卵泡/排卵引發(fā)劑量(一般在5,000至10,000IU hCG范圍內(nèi))隨各個患者而變化。
從以上關(guān)于標準COH治療方案的討論中可知，給予該“高劑量”或排卵引發(fā)劑量的hCG在本技術(shù)領(lǐng)域中通常稱為排卵引發(fā)步驟、卵母細胞成熟步驟或排卵刺激步驟。然而，這樣一個給予高劑量hCG的排卵刺激或引發(fā)步驟或者卵母細胞成熟步驟只有在COH方案刺激階段中，即在給予FSH或其類似物以誘導(dǎo)卵泡生成的階段中有足夠的卵泡發(fā)育才能進行。本發(fā)明的方法和應(yīng)用與現(xiàn)有技術(shù)的治療方案相比，主要差別在于在刺激階段中即有足夠的卵泡發(fā)育之前以及發(fā)生排卵或引發(fā)排卵之前給予hCG，而給予的劑量低于誘導(dǎo)卵母細胞成熟和刺激排卵的劑量，即低于排卵引發(fā)劑量。本發(fā)明的這種療法在著床和流產(chǎn)方面具有明顯優(yōu)點。所以，根據(jù)本發(fā)明，在有足夠的卵泡發(fā)育之前以及最后給予引發(fā)排卵的高劑量hCG以引發(fā)卵母細胞成熟和排卵之前，在刺激階段中給予低劑量hCG，并與COH方案結(jié)合。
在本發(fā)明的這些方面中，如果患者不進行COH，也可在卵泡生成階段中以及已達到足夠的卵泡發(fā)育之前給予低劑量hCG。hCG的這些劑量低于排卵引發(fā)劑量。如上所述，這些患者可能有一個自然排卵周期，此時，不必最后給予排卵引發(fā)劑量的hCG。然而，一些不進行COH而又可根據(jù)本發(fā)明的方法給予低劑量hCG來治療的患者可能無自然排卵周期(例如，那些進行誘導(dǎo)排卵的患者)，在此情況下，判斷達到足夠的卵泡發(fā)育之后即可給予排卵引發(fā)劑量的hCG。
在本發(fā)明所述的各種情況中使用hCG時，所用的劑量應(yīng)在25-4000IU hCG/天的范圍內(nèi)，優(yōu)選在25-1000IU hCG/天的范圍內(nèi)，更好是在30-1000或30-500IU hCG/天的范圍內(nèi)，最好在50-100IU或75-125IU hCG/天或者在75-100IU hCG/天或者在75或100至500或者75或100至1000IU hCG/天的范圍內(nèi)。這些劑量均低于排卵引發(fā)劑量，如上所述，本文將它們稱為“低劑量”hCG。如果使用hCG類似物，應(yīng)給予相當于這些hCG劑量的等效劑量。
如上所述，本發(fā)明還提供可含有在本發(fā)明的方法與應(yīng)用中用的上述劑量的hCG的藥物組合物或試劑盒。
在本發(fā)明的這些方面中，如果hCG(或其類似物)與采用FSH或其類似物的COH聯(lián)用，hCG(或其類似物)應(yīng)在開始FSH治療之后第10天之前，更好是在開始FSH治療之后第9天之前開始給予。hCG優(yōu)選在開始FSH治療之后至少3天才開始給予，例如在開始FSH治療之后第3天至第10天之間，更好是在開始FSH治療之后至少5或6天才開始給予。hCG最好應(yīng)在開始FSH治療之后第7或8天或者約第7或8天才開始給予。所以，在卵泡期中給予hCG，給予hCG的優(yōu)選時間點是在周期的卵泡中期或者在卵泡中期的前后時間，即開始FSH治療之后至少5、6、7或8天。
根據(jù)本發(fā)明，hCG的給予可以是單丸劑，在此情況下，它最好應(yīng)該在開始FSH治療之后在第7或8天或者約第7或8天給予，而劑量優(yōu)選應(yīng)含有100-1000IU hCG，更好是含有100-500IU hCG或者150-600IU hCG，最好含有約250IU hCG。以單丸劑給予對醫(yī)護人員和患者都很方便。
另一方面，根據(jù)本發(fā)明，可以每日給予hCG直至用普通hCG丸劑引發(fā)卵泡成熟或誘導(dǎo)/引發(fā)排卵。對于每日給予，劑量應(yīng)在25-4000IU hCG/天的范圍內(nèi)，優(yōu)選在25-1000IU hCG/天的范圍內(nèi)，更好是在30-1000或30-500IU hCG/天的范圍內(nèi)，最好在50-100IU或75-125IU hCG/天或者在75-100或者75或100至500或者75或100至1000IU hCG/天的范圍內(nèi)。業(yè)已發(fā)現(xiàn)，從開始FSH治療之后第7天開始并采用50-100IU hCG/天的劑量的每日方案特別有效。給予hCG的次數(shù)也可以減少，例如每2天、每3天、或每4天，優(yōu)選每2天給予hCG，直至引發(fā)排卵。在這些方案中，也可用上述列出的那些劑量，雖然本發(fā)明的優(yōu)選劑量是50-200IUhCG。
從以上討論清楚可見，本發(fā)明所用的hCG在發(fā)生排卵之前或在例如用排卵引發(fā)劑量的hCG引發(fā)排卵之前給予，并且持續(xù)至發(fā)生排卵或引發(fā)排卵。在本發(fā)明的全部方案中，如果認為對患者有利，有需要的話，在排卵后可繼續(xù)給予hCG。
給予“卵泡/排卵引發(fā)劑量”的hCG而引發(fā)排卵的時間對ART方案領(lǐng)域的技術(shù)人員而言是公知的，也是可以確定的。通常，當認為卵泡發(fā)育對所選用的那種方案是足夠的，就引發(fā)排卵。卵泡發(fā)育水平一般通過測定卵泡尺寸(例如用超聲波)和患者的血清雌二醇(E2)水平來確定。如果所述的方案是COH，那么因為這些方法的目的是多卵泡發(fā)育，產(chǎn)生遞增數(shù)目的成熟卵泡/卵母細胞，它們一般在體外受精，再植入患者體內(nèi)，所以引發(fā)排卵的時間可能與如果所述的方案是誘導(dǎo)排卵的時間稍微不同，在誘導(dǎo)排卵方案中，其目的是產(chǎn)生1個或者最多2個成熟卵泡，它們在體內(nèi)排卵和受精。例如，在有關(guān)COH方案的實施例中，當檢測到至少有2個卵泡的直徑18mm，而且血清雌二醇水平達到300pg/ml時，可用5,000至10,000，例如10,000IU hCG引發(fā)排卵。另一個選擇是在有關(guān)COH方案的實施例中，當最大卵泡的平均直徑達到至少18mm，至少有另外2個卵泡的平均直徑16mm(即至少3個卵泡16mm，其中一個18mm)，同時對于存在的卵泡數(shù)目，雌二醇(E2)水平在可接受的范圍之內(nèi)(約150pg/ml/成熟卵泡)時，可引發(fā)排卵。對于誘導(dǎo)排卵，當至少有1個卵泡17mm時，可給予排卵引發(fā)劑量的hCG(如果超過3個卵泡均15mm，就不必給予)。
hCG在體內(nèi)的半衰期相對較長。因此，當用多劑量時必須注意累計劑量不能到達不合要求的高水平。優(yōu)選的血清hCG水平在給予誘導(dǎo)排卵丸劑之前基本上不高于50IU/L，更好是不高于25IU/L，最好不高于約10IU/L。如果hCG水平基本上高于這一水平，結(jié)果可能引致未成熟黃體化。Mannaerts等人報導(dǎo)了在肌內(nèi)和皮下注射之后單次劑量靜脈推注hCG的藥物動力學(xué)(9)。
在本發(fā)明中FSH(或類似物)與COH技術(shù)或方案聯(lián)用的情況中，合適的劑量和給予方案對本領(lǐng)域技術(shù)人員而言是顯而易見的，可使用任何合適的劑量與給予方案。例如，F(xiàn)SH可每日給予，給予的劑量是或約75至250或者75至200IU/天，優(yōu)選是或約150至200/天，最好是或約150IU/天。一些患者對FSH的應(yīng)答較差，最好用最高600IU/天的日劑量。一個典型方案是這樣的患者以150IU FSH/天開始，3或4天后進行超聲波評估卵泡發(fā)育。如果卵泡發(fā)育是足夠的，可維持150IU FSH/天的劑量。如果卵泡發(fā)育是不足夠的，可將劑量增大到225、300、375、450、525或600IU FSH/天。最好繼續(xù)給予FSH，直至給予排卵引發(fā)劑量的hCG。理想的情況是FSH的累計劑量不應(yīng)超過6000IU/周期。
本文關(guān)于著床與妊娠效果所用的術(shù)語“提高率”、“促進”、“輔助”、“增加率”等等包括例如當與一個或多個未經(jīng)治療的患者的著床或妊娠水平或發(fā)生率相比，或者當與同一個患者在較早時間點(例如與“基準”水平相比較)所觀察到的著床或妊娠水平或發(fā)生率相比，接受本發(fā)明方法治療的該個體或該組患者的著床或妊娠發(fā)生率有任何可測到的改善或提高。例如，在hCG與COH聯(lián)用的實施例中，相關(guān)比較是對接受這些實施例的方法治療的患者與接受常規(guī)COH治療的該組患者或者與接受常規(guī)COH治療的同一個患者作比較。這種改善或提高最好具有統(tǒng)計學(xué)意義，P值優(yōu)選小于0.05。測定具有統(tǒng)計學(xué)意義的結(jié)果的方法已為人公知，本技術(shù)領(lǐng)域已有記載，可采用任何一種合適的方法。
本文關(guān)于流產(chǎn)效果所用的術(shù)語“降低”、“減少”等指例如當與一個或多個未經(jīng)治療的患者的流產(chǎn)發(fā)生率相比，或者當與同一個患者在較早時間點(例如與“基準”水平相比較)所觀察到的流產(chǎn)發(fā)生率相比，接受本發(fā)明方法治療的該個體或該組患者的流產(chǎn)發(fā)生率有任何可測到的降低或減少。例如，在hCG與COH聯(lián)用的實施例中，相關(guān)比較是對接受這些實施例的方法治療的患者與接受常規(guī)COH治療的該組患者或與接受常規(guī)COH治療的同一個患者作比較。這種降低最好具有統(tǒng)計學(xué)意義，P值優(yōu)選小于0.05。最優(yōu)選的是，本發(fā)明所述的應(yīng)用和方法能夠預(yù)防流產(chǎn)。所以這些術(shù)語也包括預(yù)防流產(chǎn)。
本發(fā)明的hCG應(yīng)用可用于被認為其不孕可能是因為早產(chǎn)或無法著床所致的任何患者上，而不論該患者是否有正在接受其他外源性促性腺激素。
流產(chǎn)定義為胎兒具有獨立生存能力之前娩出。早產(chǎn)指那些在胎兒發(fā)育最初1個月中發(fā)生的流產(chǎn)。本發(fā)明的方法和應(yīng)用對降低早產(chǎn)水平特別有用。
本發(fā)明的hCG應(yīng)用與COH結(jié)合通常會與體外受精技術(shù)聯(lián)用。不過，本文所述的hCG應(yīng)用與COH結(jié)合也可與體內(nèi)受精聯(lián)用。
另外，本發(fā)明的hCG應(yīng)用還可與體內(nèi)受精結(jié)合用在不進行COH的患者中，例如，包括自然排卵以及例如用抗雌激素或芳香酶抑制劑誘導(dǎo)排卵的方案(即不給予外源性促性腺激素的方案)。當用在不接受...外源性促性腺激素的患者中時，hCG應(yīng)在任何一個給定周期中預(yù)計要排卵之前開始給予，最好在月經(jīng)之后第6、7或8天或者約第6、7或8天開始給予?？山o予單丸劑(例如上述關(guān)于給予單丸劑所述的劑量，特別是100-500IU hCG)，或者可每日給予(例如上述關(guān)于每日給予所述的劑量，特別是50-100IU hCG)，或者每2天給予(例如上述劑量，特別是50-200IU hCG)，直至自然排卵或有需要時用上述排卵引發(fā)劑量的hCG引發(fā)排卵。
在hCG用于不進行COH的患者的本發(fā)明實施例中，這些患者可選擇地用外源性促性腺激素(例如外源性FSH)進行誘導(dǎo)排卵。所用的合適的hCG劑量如本文上下文所述。如上所述，在適當時間點用高劑量hCG引發(fā)排卵。
這樣，如上所示，將意識到，本發(fā)明的hCG應(yīng)用與采用FSH的COH方案結(jié)合是有利的，hCG還可用來提高不進行COH方案，但希望提高成功受孕機會的人患者的胚胎著床率和/或降低流產(chǎn)率。這些患者(或她們的配偶)通常有一些生育問題，即不孕或生育能力低。另外，患者也可能不存在排卵和受精等明顯生育問題，但由于容易早產(chǎn)和/或無法著床而導(dǎo)致不育。高齡婦女例如超過35歲的婦女一般會有著床和流產(chǎn)率高的問題，她們也非常適合用該方法進行治療。
這些患者可以自然排卵，或者可用誘導(dǎo)排卵方案進行誘導(dǎo)排卵而不用COH方案，例如，使用芳香酶抑制劑等(芳香酶抑制劑刺激內(nèi)源性FSH分泌)，或者以上討論的給予外源性FSH的的誘導(dǎo)排卵方案。這樣一些誘導(dǎo)排卵方案都是本領(lǐng)域的標準方案，已有完整的敘述。
在不采用COH方案的應(yīng)用中，一般從月經(jīng)開始那天計算給予hCG的時間，雖然在采用FSH的誘導(dǎo)排卵方案中，給予的時間可從開始FSH治療那天計算。月經(jīng)后或開始FSH治療之后的適當時間參見上述討論。如上所述，hCG是在卵泡期排卵(可以是自然排卵或者用排卵引發(fā)劑量的hCG引發(fā)排卵)之前開始給予，排卵期排卵之前優(yōu)選是周期的排卵中期，例如月經(jīng)后5至8天，例如月經(jīng)后第6、7或8天，或者開始FSH治療之后至少5或6天，例如開始FSH治療之后5、6、7或8天。由此可見，盡管這些患者的治療方案與那些進行采用FSH的COH方案的患者不同，但給予hCG的優(yōu)選時間是相似的，即在周期的排卵中期或排卵中期的前后時間。
根據(jù)本發(fā)明，給予hCG對那些正接受GnRH激動劑或拮抗劑治療的患者是有用的。根據(jù)本發(fā)明，hCG給予與IVF或IVF/ICSI結(jié)合特別有用。該方法可提高著床率和懷孕過了最初3個月的妊娠率。使用hCG甚至可幫助一些以前被確診為由于非排卵問題而導(dǎo)致無法進行IVF方案的患者著床。
本發(fā)明的hCG應(yīng)用對治療低內(nèi)源性LH水平的患者，如低促性腺素性功能減退癥患者特別有用。
本發(fā)明的hCG應(yīng)用也可用在那些例如以前在標準COH或誘導(dǎo)排卵方案中僅用FSH無法懷孕或無法保持懷孕的患者中。
其他適用的患者例如是那些多囊性卵巢疾病(PCOD)患者、黃體期和免疫因子不足的患者以及35歲和以上的患者(“高齡”患者)?；颊叩哪挲g優(yōu)選不超過45歲，更好是不超過42歲。
所用的hCG可以從任何資源中獲得，只要它沒有受到任何會顯著影響其作用的物質(zhì)(尤其是其他促性腺激素)污染。雖然因為重組hCG(rhCG)的純度高而被優(yōu)選使用，但也可用尿hCG。
hCG類似物包括具有與hCG相同的生理、生物化學(xué)或生物作用，和/或與hCG的相同受體結(jié)合的全部分子。眾所周知，黃體生成激素(LH)與hCG有一些相同的生理作用，但對本發(fā)明的目的而言，hCG類似物不包括LH。
hCG類似物中有些包括單鏈hCG，其中β-亞基的C末端與α-亞基的N末端融合(Sugahara等人，PNAS，92，1995，2041-2045)。已被公開的其他類似物的例子可參見歐洲專利EP 0322226(Applied Research System)、WO 92/22568(新澤西醫(yī)學(xué)和牙科大學(xué)(University of Medicine & Dentistry of New Jersey))、WO96/05224(華盛頓大學(xué))、WO 90/09800(華盛頓大學(xué))、WO 93/06844(華盛頓大學(xué))、WO 98/43999(華盛頓大學(xué))、WO 99/25849(華盛頓大學(xué))。
hCG可用任何一種合適的技術(shù)進行檢測，例如Vaitukaitis等人(10)所述的放射性免疫檢測法和ELISA試驗(11)。hCG的生物活性可用任何一種合適的技術(shù)進行測定，例如小鼠萊迪希細胞生物檢測法(Leydig cell bioassay)(12)。
在采用FSH的本發(fā)明實施例中，本領(lǐng)域技術(shù)人員懂得，F(xiàn)SH可以生物活性類似物來代替，或者以刺激內(nèi)源性FSH分泌的化合物來代替。后一種情況包括芳香酶抑制劑和抗雌激素如他莫西芬(tamoxifen)和氯芪酚檸檬酸鹽(CC)。這些化合物通過消除雌激素施加在下丘腦的負反饋(或者通過拮抗雌激素受體，作用與CC和他莫西芬一樣，或者通過大大降低雌激素濃度，作用與芳香酶抑制劑一樣)來刺激內(nèi)源性FSH分泌。
FSH與本發(fā)明的hCG應(yīng)用聯(lián)用的優(yōu)選形式稱為FSH-CTP。這種長效的人FSH已在WO 93/06844中描述，它有一個野生型FSHα-亞基和一個β-亞基，該β-亞基由在其羧基末端上與hCGβ-亞基(天然hCGβ序列殘基位置112-118至位置145)的羧基末端肽(CTP)融合的野生型FSHβ-亞基組成。其他種類的FSH類似物包括例如單鏈FSH類似物，其中β-亞基與hCG的CTP融合，其再與FSHα-亞基融合，如WO96/05224所述(單鏈FSH-CTP)。
如以上關(guān)于hCG所述，本發(fā)明方法所用的FSH可以從任何資源中獲得。這些資源是誘導(dǎo)排卵和COH程序領(lǐng)域技術(shù)人員所公知的。可用FSH尿制劑，例如FSH和LH活性之比為1∶1的hMG。因為重組FSH(rFSH)的純度高，所以優(yōu)選使用rFSH。
在IVF的誘導(dǎo)排卵和COH的刺激階段中，用人絕經(jīng)期促性腺激素(hMG)取代了FSH。hMG是自絕經(jīng)后婦女尿液中提取而得到的相對較粗的激素提取物，它具有FSH和LH活性(1∶1)。非專屬性hMG可能含有少至2％活性激素，因此，高達98％蛋白質(zhì)含量可能是尿污染物。當本發(fā)明的方法選用hMG而不用FSH時，如上所述，補充hCG也證明了有利于比如輔助著床和/或預(yù)防或減少流產(chǎn)。hCG應(yīng)在開始hMG治療之后第10天之前開始給予，更好是在開始hMG治療之后第9天之前開始給予，最好是在開始hMG治療之后第7或8天或者約第7或8天之前開始。hCG最好在開始hMG治療之后3天后才開始給予。劑量和給藥方案參照hCG與FSH聯(lián)用的劑量和給藥方案。優(yōu)選劑量是150IU/天，更好是50或100IU hCG/天。
現(xiàn)在，本發(fā)明將以下列非限制性的實施例作進一步描述。
實施例刺激方案對照組1月經(jīng)第1天，給患者每日注射曲普瑞林(decapeptyl)(0.1毫克)脫敏。14天后，進行聲像圖檢查，不存在囊腫，用rFSH(150至200IU/天)開始刺激。7天后，通過聲像圖檢查卵泡生長，并測定E2血濃度。每日對患者進行檢查，當檢測到至少有2個卵泡的直徑18mm，同時血清E2的水平達到300pg/mL時，用10,000IU hCG引發(fā)排卵。
對照組2在對照組1的第7天，對照組2除了接受rFSH外，還接受hMG(150IU/天)。
實驗組在對照組的第7天，實驗組每日接受50-100IU hCG，并給合rFSH，直至按上述方法引發(fā)排卵。
卵母細胞在體外受精。4小時后，將它們洗凈，置于培養(yǎng)液(ISM1)中。20小時后，檢查受精，使胚胎在同一培養(yǎng)液中培養(yǎng)至48小時。然后，將它們轉(zhuǎn)移到第二種培養(yǎng)液(ISM2)中。再取出2個最好的胚胎移植在患者體內(nèi)，繼續(xù)培養(yǎng)直到胚泡形成(5-6天)。
結(jié)果實驗結(jié)果列于表1、表2和表3中。表1和表2所示為對照組1(僅給予rFSH)與實驗組(給予rFSH+hCG)的比較結(jié)果。表3所示為對照組2(給予rFSH+hMG)與實驗組(給予rFSH+hCG)的比較結(jié)果。
在刺激階段中所用的時間沒有差異。接受hCG的實驗組E2水平上升。兩組的移植率差別不大接受hCG92％，對照組86％，(p＝0.1)。兩組從超數(shù)胚胎獲得的胚泡形成幾乎相等(接受hCG185/411＝45％，對照組292/627＝46.5％，p＝0.622)。hCG組的著床率(接受hCG24.5％，對照組14.6％，p＝0.0134)與妊娠率(接受hCG37.5％，對照組23.6％，p＝0.0246)增加，每次移植平均1.9個胚胎。
表1刺激階段使用rFSH的低劑量hCG實驗結(jié)果

表2刺激階段使用rFSH的低劑量hCG實驗結(jié)果

表3刺激階段使用rFSH的低劑量hCG與hMG實驗結(jié)果

參考文獻1.Healy等；Lancet 343 1994；1539-1544。
2.例如EP 0 170 502(Serono實驗室有限公司)中描述的常規(guī)技術(shù)。
3.Filicori，M.；J.Clin.Endocrinol.Metab.81 1996；2413-6。
4.Filicori，M.等；Fertil.Steril.65 1996；387-93。
5.Filicori等；J.Clin.Endocrinol.Metab.84 1999；2659-2663。
6.Messinis et la.；Fertility & Sterility 50 1988；31-35。
7.Lei等；J.Clin.Endocrinol.Metab.75 1992；651-659。
8.Bennett等；Pharmacol.Rev.30 1979；247-292。
9.Mannaerts等；Human Reproduction 13 1998；1461-1464。
10.Vaitukaitis等；Am.J.Obstet.Gynecol.113 1972；751；Clin.Chem.311985；1749。
11.Tyrey等；Obstet.Gynecol.Clin.North Am.15 1988；457。
12.Robertson，W.R.和Binden，S.P；肽類激素的體外生物測定(The in vitrobioassay of peptide hormones).In Hutton，J.C.和Siddle，K.(編)，肽類激素的實踐進展(Peptide Hormones；a Practical Approach).IRL出版社，牛津(1990)。
權(quán)利要求
1.人絨毛膜促性腺激素(hCG)或其類似物在制備結(jié)合控制性超排卵(COH)供采用FSH或其類似物的人患者用，以輔助著床和/或降低流產(chǎn)率的藥物中的應(yīng)用，所述的藥物在開始FSH治療之后第10天之前開始給予。
2.如權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，所述的藥物在開始FSH治療之后第9天之前開始給予。
3.如權(quán)利要求1或2所述的應(yīng)用，其特征在于，所述的藥物在開始FSH治療之后至少3天才給予。
4.如權(quán)利要求1、2或3所述的應(yīng)用，其特征在于，所述的藥物在開始FSH治療之后第7或8天或者約第7或8天開始給予。
5.如權(quán)利要求1至4中任何一項所述的應(yīng)用，其特征在于，所述的藥物以25-1000IU hCG/天的劑量給予。
6.如權(quán)利要求1至5中任何一項所述的應(yīng)用，其特征在于，所述的藥物以50-100IU hCG/天的劑量給予。
7.如權(quán)利要求1至6中任何一項所述的應(yīng)用，其特征在于，所述的藥物以單丸劑給予。
8.如權(quán)利要求7所述的應(yīng)用，其特征在于，所述的單丸劑在開始FSH治療之后第7或8天或者約第7或8天給予，該丸劑含有100-500IU hCG。
9.如權(quán)利要求1至6中任何一項所述的應(yīng)用，其特征在于，所述的藥物每日給予，直至誘導(dǎo)排卵。
10.如權(quán)利要求1至9中任何一項所述的應(yīng)用，其特征在于，COH與體外受精或體內(nèi)受精結(jié)合進行。
11.如權(quán)利要求1至10中任何一項所述的應(yīng)用，其特征在于，患者具有內(nèi)源性黃體生成激素(LH)水平低的缺點。
12.如權(quán)利要求1至11中任何一項所述的應(yīng)用，其特征在于，患者以前僅用卵泡刺激素(FSH)無法懷孕或無法保持懷孕。
13.如權(quán)利要求1至12中任何一項所述的應(yīng)用，其特征在于，所述的hCG是重組hCG。
14.如權(quán)利要求1至12中任何一項所述的應(yīng)用，其特征在于，所述的hCG是尿hCG。
15.如權(quán)利要求1至12中任何一項所述的應(yīng)用，其特征在于，使用所述hCG的類似物，所述的類似物是單鏈hCG。
16.人絨毛膜促性腺激素(hCG)或其類似物在制備促進人患者胚胎著床和/或降低胚胎流產(chǎn)率的藥物中的應(yīng)用，所述的藥物在排卵或引發(fā)排卵之前給予。
17.如權(quán)利要求16所述的應(yīng)用，其特征在于，所述的藥物在月經(jīng)后第7或8天或者約第7或8天以單丸劑給予。
18.如權(quán)利要求16所述的應(yīng)用，其特征在于，所述的藥物在月經(jīng)后第7或8天或者約第7或8天開始每日給予，直至發(fā)生排卵。
19.如權(quán)利要求16至18中任何一項所述的應(yīng)用，其特征在于，所述的hCG如權(quán)利要求13至15中任何一項所限定。
20.如權(quán)利要求1至15中任何一項所述的應(yīng)用，其特征在于，使用FSH類似物，所述的類似物是FSH-CTP，或者FSH以芳香酶抑制劑或氯芪酚檸檬酸鹽來代替。
21.一種與COH聯(lián)用以輔助著床和/或降低流產(chǎn)率的藥物組合物，其特征在于，所述的藥物組合物每劑量含有25-1000IU hCG或其類似物。
22.如權(quán)利要求21所述的藥物組合物，其特征在于，所述的藥物組合物每劑量含有75-125IU hCG或其類似物。
23.如權(quán)利要求21或22所述的藥物組合物，其特征在于，所述的hCG如權(quán)利要求13至15中任何一項所限定。
24.一種用于COH的試劑盒，其特征在于，所述的試劑盒含有每日12或以上劑量FSH或其類似物以及每日4至8劑量hCG或其類似物。
25.一種輔助胚胎著床和/或降低流產(chǎn)率的試劑盒，其特征在于，所述的試劑盒含有每日4至8劑量hCG或其類似物，hCG的日劑量約25-1000IU/天。
全文摘要
本發(fā)明提供一種提高胚胎著床率和/或降低流產(chǎn)率的方案，其中在卵泡期給予人絨毛膜促性腺激素(hCG)或生物類似物。
文檔編號A61K9/20GK1553808SQ02817573
公開日2004年12月8日 申請日期2002年9月12日 優(yōu)先權(quán)日2001年9月12日
發(fā)明者Y·麥那佐, Y 麥那佐 申請人:應(yīng)用研究系統(tǒng)Ars股份公司