專利名稱：人絨毛膜促性腺激素和黃體生成激素在控制性超排卵中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及體內(nèi)外輔助生殖技術(shù)(ART)領(lǐng)域，特別是使用促性腺激素的控制性超排卵(controlled ovarian hyperstimulation，COH)。
背景技術(shù)：
采用輔助生殖技術(shù)(ART)，例如體外受精(IVF)或IVF與卵子胞漿內(nèi)單精子注射(ICSI)結(jié)合以及胚胎移植(ET)治療不孕癥，需要COH來增加卵母細(xì)胞的數(shù)量(1)。COH的標(biāo)準(zhǔn)方案(2)包括一個向下調(diào)節(jié)的階段，在這個階段中，通過給予促性腺激素釋放激素(GnRH)激動劑來抑制內(nèi)源性黃體生成激素(LH)，接著的是一個刺激階段，在這一階段中，每日給予卵泡刺激素(FSH)，通常約150IU/天，誘導(dǎo)卵泡發(fā)育(卵泡生成)。也可采用有FSH活性的其他分子。另一種選擇是在自然月經(jīng)或誘導(dǎo)月經(jīng)后開始刺激，通常在給予FSH的約第6或7天開始，通過給予GnRH拮抗劑來防止出現(xiàn)LH峰。在輔導(dǎo)生殖技術(shù)的超排卵方案中，主要目的是獲得多卵泡發(fā)育。當(dāng)至少有3個卵泡＞16毫米(其中一個是18毫米)時，給予單丸劑(single bolus)hCG(5-10,000IU)引發(fā)排卵。注射hCG后36-38小時定為回收卵母細(xì)胞的時間。
本發(fā)明使用GnRH激動劑與拮抗劑的基本原理是防止在不適當(dāng)?shù)臅r間出現(xiàn)可能導(dǎo)致未成熟排卵和卵泡黃體化的LH峰(3)。GnRH激動劑療法已普遍應(yīng)用在臨床上。業(yè)已發(fā)現(xiàn)，長時間治療方案(即在周期的黃體中期先開始誘導(dǎo)排卵或之前開始的方案)更容易給患者安排給藥時間、卵泡產(chǎn)率更高、臨床整體結(jié)果更好(4)。采用GnRH拮抗劑在臨床上相對較新穎，但預(yù)計(jì)可獲得相似的有益效果，還有治療周期更短的優(yōu)點(diǎn)。
延長給予GnRH激動劑或給予GnRH拮抗劑的時間，內(nèi)源性LH會被大大抑制。這種與卵泡發(fā)育相矛盾的情形與自然周期不同。自然周期的LH水平慢慢遞增，幾天后在中期達(dá)到高峰。
有人探究了LH和絨毛膜促性腺激素(CG)在誘導(dǎo)排卵與輔助生殖技術(shù)中的作用。眾所周知及本技術(shù)領(lǐng)域公認(rèn)誘導(dǎo)排卵的技術(shù)和方法與COH方案截然不同，盡管二者都可能涉及給予FSH。
Hillier等人證實(shí)了極低水平的LH足以生成卵泡(5)。
Esposito等人研究了內(nèi)源性LH在以rFSH刺激的ART周期中的作用。他們得出這樣的結(jié)論當(dāng)血清LH濃度高于0.5-1.0IU/L時卵泡流體雌二醇水平、卵母細(xì)胞產(chǎn)率和受精都有提高(6)。
WO 00/67778(Applied Research System)公開了在刺激階段使用LH在誘導(dǎo)排卵中誘導(dǎo)卵泡生成，特別是促進(jìn)單個優(yōu)勢卵泡的發(fā)育。
歐洲重組人LH研究集團(tuán)報導(dǎo)了與僅接受rhFSH的對照組相比，把rhLH(75和225IU/天)給予低促性腺素性功能減退癥婦女以支持rhFSH誘導(dǎo)的卵泡發(fā)育，其卵泡數(shù)量增多，卵泡直徑增大(7)。
Filicori等人研究了低劑量hCG作為LH的替代品在控制性超排卵中的作用(Filicori等；J.Clin.Endocrinol.Metab.84 1999；2659-2663)。hCG的給予(50IUhCG/天)與FSH的給予同時開始，連續(xù)每日給予hCG，直至用hCG丸劑引發(fā)排卵。接受hCG的組與僅接受FSH的組所得到的小卵泡(＜10毫米)、中卵泡(10-14毫米)和大卵泡(＞14毫米)數(shù)量接近，但hCG治療組的FSH的累計(jì)劑量與FSH的刺激時問均減少。
Messinis等人報導(dǎo)了無卵性婦女(世界衛(wèi)生組織I組)的誘導(dǎo)排卵，采用的療法是在刺激階段給予日劑量hMG(FSH和LH各75IU)，在黃體期給予單劑量或多劑量hCG。結(jié)果發(fā)現(xiàn)在黃體期接受多劑量hCG的患者妊娠率比僅接受誘導(dǎo)/引發(fā)排卵的單劑量hCG的對照組有顯著上升(8)。
當(dāng)然，適當(dāng)?shù)穆雅莅l(fā)育是輔助生殖技術(shù)方法獲得成功的基本條件。然而，有某些情況排卵與受精都完成了，但胚胎的不適當(dāng)著床卻導(dǎo)致無法懷孕。另一些情況是懷孕最初三個月自然早產(chǎn)(流產(chǎn))。這兩個問題都與子宮內(nèi)膜的情況有關(guān)，子宮內(nèi)膜對激素水平相當(dāng)敏感。由此可見，即使卵泡發(fā)育、排卵和受精都發(fā)生了，但仍不保證成功懷孕，因?yàn)槌Ｓ龅街才c早產(chǎn)問題。
一些患者容易流產(chǎn)或無法著床的問題最后都可得到解決，但這樣做需要重復(fù)多個ART周期，結(jié)果對患者的生理和心理產(chǎn)生負(fù)面作用。對于另一些患者，這些問題是使她們不能懷孕的一個永久障礙。
因此，有必要提供提高著床率以及降低早產(chǎn)率，特別是與COH結(jié)合的方法。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的一個目的在于提供一種給予促性腺激素進(jìn)行COH，從而提高著床率和降低流產(chǎn)率的改進(jìn)方法。
本發(fā)明的另一個目的在于提供一種為ART的多卵母細(xì)胞回收提供多卵泡的方法。
本發(fā)明的另一個目的在于提供一種例如通過提高著床率和/或降低流產(chǎn)率以使不進(jìn)行COH的患者如自然排卵周期后的患者或者接受誘導(dǎo)排卵的患者增加妊娠率的方法。
本發(fā)明的第一方面在于提供人絨毛膜促性腺激素(hCG)或其類似物在制備促進(jìn)人患者胚胎著床和/或降低胚胎流產(chǎn)率的藥物中的應(yīng)用，所述的藥物在排卵或引發(fā)排卵之前給予。
本發(fā)明的第二方面在于提供hCG或其類似物在促進(jìn)人患者胚胎著床和/或降低胚胎流產(chǎn)率中的應(yīng)用，所述的hCG或其類似物在排卵或引發(fā)排卵之前給予。
本發(fā)明的第三方面在于提供hCG或其類似物在制備結(jié)合COH供采用FSH或其類似物的人患者用，以輔助著床和/或降低流產(chǎn)率的藥物中的應(yīng)用，所述的藥物在開始FSH治療之后第10天之前開始給予。
本發(fā)明的第四方面在于提供hCG或其類似物在結(jié)合控制性超排卵(COH)供采用FSH或其類似物的人患者用，以輔助著床和/或降低流產(chǎn)率中的應(yīng)用，所述的hCG或其類似物在開始FSH治療之后第10天之前開始給予。
本發(fā)明的第五方面在于提供一種藥物組合物，其用于輔助胚胎著床和/或降低流產(chǎn)率，任選地最好與COH結(jié)合，所述的藥物組合物每劑量含有25-1000IU hCG或其類似物。
本發(fā)明的第六方面在于提供人黃體生成激素(hLH)或其類似物在制備結(jié)合控制性超排卵(COH)供采用FSH或其類似物的人患者用，以輔助著床和/或降低流產(chǎn)率的藥物中的應(yīng)用，所述的藥物在開始FSH治療之后第10天之前，優(yōu)選在開始FSH治療之后第3天與第10天之間的時間內(nèi)開始給予。
本發(fā)明的第七方面在于提供hLH或其類似物在結(jié)合COH供采用FSH或其類似物的人患者用，以輔助著床和/或降低流產(chǎn)率中的應(yīng)用，所述的LH在開始FSH治療之后第10天之前，優(yōu)選在開始FSH治療之后第3天與第10天之間的時間內(nèi)開始給予。
本發(fā)明的另一方面在于提供LH或其類似物在制備促進(jìn)人患者胚胎著床和/或降低胚胎流產(chǎn)率的藥物中的應(yīng)用，所述的藥物在排卵或引發(fā)排卵之前給予。
本發(fā)明的另一方面在于提供LH或其類似物在促進(jìn)人患者胚胎著床和/或降低胚胎流產(chǎn)率中的應(yīng)用，所述的LH或其類似物在排卵或引發(fā)排卵之前給予。
本發(fā)明的另一方面在于提供一種藥物組合物，其用于輔助胚胎著床和/或降低流產(chǎn)率，任選地最好與COH結(jié)合，所述的藥物組合物每劑量含有150-1000IU LH或其類似物。
本發(fā)明的另一方面在于提供結(jié)合COH供采用FSH或其類似物的人患者用，以輔助著床和/或降低流產(chǎn)率的hCG或其類似物或者LH或其類似物，所述的hCG或其類似物或者LH或其類似物在開始FSH治療之后第10天之前開始給予。
在另一實(shí)施例中，本發(fā)明提供促進(jìn)人患者胚胎著床和/或降低胚胎流產(chǎn)率的hCG或其類似物或者LH或其類似物，所述的hCG或者LH或其類似物在排卵或引發(fā)排卵之前給予。
本發(fā)明的另一方面在于提供一種促進(jìn)患者著床和/或降低流產(chǎn)率的方法，所述方法與采用FSH或其類似物的COH結(jié)合，所述方法包括把hCG或其類似物或者LH或其類似物給予患者，其中所述的給予在開始FSH治療之后第10天之前開始。
本發(fā)明還提供一種促進(jìn)患者著床和/或降低流產(chǎn)率的方法，所述方法包括把hCG或其類似物或者LH或其類似物給予患者，其中所述的hCG或者LH或其類似物在排卵或引發(fā)排卵之前給予。
本發(fā)明的另一方面在于提供一種用于COH的試劑盒，該試劑盒含有每日12或以上，最好14或以上劑量FSH，優(yōu)選約75-200IU FSH/天，更好是約150IU FSH/天，以及每日4-8、5-8或6-8劑量hCG，例如，每日4、5、6、7或8劑量hCG，優(yōu)選約25-1000IU hCG/天，更好是約50-100IU hCG/天。
本發(fā)明的再一方面提供一種輔助胚胎著床和/或降低流產(chǎn)率的試劑盒，該試劑盒含有每日4-8、5-8或6-8劑量hCG，例如，每日4、5、6、7或8劑量hCG，約25-1000IU hCG/天，優(yōu)選約50-100IU hCG/天。這些試劑盒可以或不必與COH聯(lián)用。
本發(fā)明的試劑盒和藥物組合物最好設(shè)計(jì)成用在本發(fā)明的方法與應(yīng)用中使用。
具體實(shí)施例方式
人絨毛膜促性腺激素(hCG)是一種在懷孕期間由胎盤產(chǎn)生的異源二聚體糖化肽激素。受精后它很快在血清中出現(xiàn)，當(dāng)LH分泌減少后起著維持黃體的作用，以支持雌激素和孕酮持續(xù)分泌以及防止來月經(jīng)。因?yàn)樗灰愿咚酱嬖谟趹言袐D女中，所以不能將它看成在自然排卵周期中有重要作用。眾所周知，LH/hCG的受體存在于性腺、子宮、輸卵管、胎盤以及子宮內(nèi)膜細(xì)胞與子宮肌層細(xì)胞中(9)。hCG的半衰期在促性腺激素中是最長的(10)。
本發(fā)明人意外地發(fā)現(xiàn)，在ART周期的刺激階段中給予低劑量hCG或類似物，例如通過輔助或改善著床和/或降低流產(chǎn)率而對妊娠率具有有益的效果。術(shù)語“低劑量”包括在一特定患者中，比一般用來在排卵前引發(fā)卵泡成熟即最后的卵泡成熟所用的劑量(“卵泡(或排卵)引發(fā)劑量”)少的劑量。hCG的卵泡/排卵引發(fā)劑量(一般在5,000至10,000IU hCG范圍內(nèi))隨各個患者而變化。
從以上關(guān)于標(biāo)準(zhǔn)COH治療方案的討論中可知，給予該“高劑量”或排卵引發(fā)劑量的hCG在本技術(shù)領(lǐng)域中通常稱為排卵引發(fā)步驟、卵母細(xì)胞成熟步驟或排卵刺激步驟。然而，這樣一個給予高劑量hCG的排卵刺激或引發(fā)步驟或者卵母細(xì)胞成熟步驟只有在COH方案刺激階段中，即在給予FSH或其類似物以誘導(dǎo)卵泡生成的階段中有足夠的卵泡發(fā)育才能進(jìn)行。本發(fā)明的方法和應(yīng)用與現(xiàn)有技術(shù)的治療方案相比，主要差別在于在刺激階段中即有足夠的卵泡發(fā)育之前以及發(fā)生排卵或引發(fā)排卵之前給予hCG，而給予的劑量低于誘導(dǎo)卵母細(xì)胞成熟和刺激排卵的劑量，即低于排卵引發(fā)劑量。本發(fā)明的這種療法在著床和流產(chǎn)方面具有明顯優(yōu)點(diǎn)。所以，根據(jù)本發(fā)明，在有足夠的卵泡發(fā)育之前以及最后給予引發(fā)排卵的高劑量hCG以引發(fā)卵母細(xì)胞成熟和排卵之前，在刺激階段中給予低劑量hCG，并與COH方案結(jié)合。
在本發(fā)明的這些方面中，如果患者不進(jìn)行COH，也可在卵泡生成階段中以及已達(dá)到足夠的卵泡發(fā)育之前給予低劑量hCG。hCG的這些劑量低于排卵引發(fā)劑量。如上所述，這些患者可能有一個自然排卵周期，此時，不必最后給予排卵引發(fā)劑量的hCG。然而，一些不進(jìn)行COH而又可根據(jù)本發(fā)明的方法給予低劑量hCG來治療的患者可能無自然排卵周期(例如，那些進(jìn)行誘導(dǎo)排卵的患者)，在此情況下，判斷達(dá)到足夠的卵泡發(fā)育之后即可給予排卵引發(fā)劑量的hCG。
如上所述，本發(fā)明還提供在本發(fā)明的方法和應(yīng)用中給予LH而不是hCG。如本文關(guān)于hCG所述，LH的給予也是在周期和卵泡發(fā)育階段進(jìn)行的。
在本發(fā)明所述的各種情況中使用hCG時，所用的劑量應(yīng)在25-4000IU hCG/天的范圍內(nèi)，優(yōu)選在25-1000IU hCG/天的范圍內(nèi)，更好是在30-1000或30-500IU hCG/天的范圍內(nèi)，最好在50-100IU或75-125IU或75-100IU hCG/天或者在75或100至500或者75或100至1000IU hCG/天的范圍內(nèi)。這些劑量均低于排卵引發(fā)劑量，如上所述，本文將它們稱為“低劑量”hCG。如果使用hCG類似物，應(yīng)給予相當(dāng)于這些hCG劑量的等效劑量。
如上所述，本發(fā)明還提供可含有在本發(fā)明的方法與應(yīng)用中用的上述劑量的hCG(或者本文上下文所述劑量的LH)的藥物組合物或試劑盒。
在本發(fā)明的這些方面中，如果hCG(或其類似物)與采用FSH或其類似物的COH聯(lián)用，hCG(或其類似物)應(yīng)在開始FSH治療之后第10天之前，更好是在開始FSH治療之后第9天之前開始給予。hCG優(yōu)選在開始FSH治療之后至少3天才開始給予，例如在開始FSH治療之后第3天至第10天之間，更好是在開始FSH治療之后至少5或6天才開始給予。hCG最好應(yīng)在開始FSH治療之后第7或8天或者約第7或8天才開始給予。所以，在卵泡期中給予hCG，給予hCG的優(yōu)選時間點(diǎn)是在周期的卵泡中期或者在卵泡中期的前后時間，即開始FSH治療之后至少5、6、7或8天。
根據(jù)本發(fā)明，hCG的給予可以是單丸劑，在此情況下，它最好應(yīng)該在開始FSH治療之后在第7或8天或者約第7或8天給予，而劑量優(yōu)選應(yīng)含有100-1000IU hCG，更好是含有100-500IU hCG或者150-600IU hCG，最好含有約250IU hCG。以單丸劑給予對醫(yī)護(hù)人員和患者都很方便。
另一方面，根據(jù)本發(fā)明，可以每日給予hCG直至用普通hCG丸劑引發(fā)卵泡成熟或誘導(dǎo)/引發(fā)排卵。對于每日給予，劑量應(yīng)在25-4000IU hCG/天的范圍內(nèi)，優(yōu)選在25-1000IU hCG/天的范圍內(nèi)，更好是在30-1000或30-500IU hCG/天的范圍內(nèi)，最好在50-100IU或75-125IU hCG/天或者在75-100或者75或100至500或者75或100至1000IU hCG/天的范圍內(nèi)。業(yè)已發(fā)現(xiàn)，從開始FSH治療之后第7天開始并采用50-100IU hCG/天的劑量的每日方案特別有效。給予hCG的次數(shù)也可以減少，例如每2天、每3天、或每4天，優(yōu)選每2天給予hCG，直至引發(fā)排卵。在這些方案中，也可用上述列出的那些劑量，雖然本發(fā)明的優(yōu)選劑量是50-200IUhCG。
從以上討論清楚可見，本發(fā)明所用的hCG(或LH)在發(fā)生排卵之前或在例如用排卵引發(fā)劑量的hCG引發(fā)排卵之前給予，并且持續(xù)至發(fā)生排卵或引發(fā)排卵。在本發(fā)明的全部方案中，如果認(rèn)為對患者有利，有需要的話，在排卵后可繼續(xù)給予hCG(或LH)。
給予“卵泡/排卵引發(fā)劑量”的hCG而引發(fā)排卵的時間對ART方案領(lǐng)域的技術(shù)人員而言是公知的，也是可以確定的。通常，當(dāng)認(rèn)為卵泡發(fā)育對所選用的那種方案是足夠的，就引發(fā)排卵。卵泡發(fā)育水平一般通過測定卵泡尺寸(例如用超聲波)和患者的血清雌二醇(E2)水平來確定。如果所述的方案是COH，那幺因?yàn)檫@些方法的目的是多卵泡發(fā)育，產(chǎn)生遞增數(shù)目的成熟卵泡/卵母細(xì)胞，它們一般在體外受精，再植入患者體內(nèi)，所以引發(fā)排卵的時間可能與如果所述的方案是誘導(dǎo)排卵的時間稍微不同，在誘導(dǎo)排卵方案中，其目的是產(chǎn)生1個或者最多2個成熟卵泡，它們在體內(nèi)排卵和受精。例如，在有關(guān)COH方案的實(shí)施例中，當(dāng)檢測到至少有2個卵泡的直徑≥18mm，而且血清雌二醇水平達(dá)到300pg/ml時，可用5,000至10,000，例如10,000IU hCG引發(fā)排卵。另一個選擇是在有關(guān)COH方案的實(shí)施例中，當(dāng)最大卵泡的平均直徑達(dá)到至少18mm，至少有另外2個卵泡的平均直徑≥16mm(即至少3個卵泡≥16mm，其中一個≥18mm)，同時對于存在的卵泡數(shù)目，雌二醇(E2)水平在可接受的范圍之內(nèi)(約150pg/ml/成熟卵泡)時，可引發(fā)排卵。對于誘導(dǎo)排卵，當(dāng)至少有1個卵泡17mm時，可給予排卵引發(fā)劑量的hCG(如果超過3個卵泡均15mm，就不必給予)。
hCG在體內(nèi)的半衰期相對較長。因此，當(dāng)用多劑量時必須注意累計(jì)劑量不能到達(dá)不合要求的高水平。優(yōu)選的血清hCG水平在給予誘導(dǎo)排卵丸劑之前基本上不高于50IU/L，更好是不高于25IU/L，最好不高于約10IU/L。如果hCG水平基本上高于這一水平，結(jié)果可能引致未成熟黃體化。Mannaerts等人報導(dǎo)了在肌內(nèi)和皮下注射之后單次劑量靜脈推注hCG的藥物動力學(xué)(11)。
在本發(fā)明中FSH(或類似物)與COH技術(shù)或方案聯(lián)用的情況中，合適的劑量和給予方案對本領(lǐng)域技術(shù)人員而言是顯而易見的，可使用任何合適的劑量與給予方案。例如，F(xiàn)SH可每日給予，給予的劑量是或約75至250或者75至200IU/天，優(yōu)選是或約150至200/天，最好是或約150IU/天。一些患者對FSH的應(yīng)答較差，最好用最高600IU/天的日劑量。一個典型方案是這樣的患者以150IU FSH/天開始，3或4天后進(jìn)行超聲波評估卵泡發(fā)育。如果卵泡發(fā)育是足夠的，可維持150IU FSH/天的劑量。如果卵泡發(fā)育是不足夠的，可將劑量增大到225、300、375、450、525或600IU FSH/天。最好繼續(xù)給予FSH，直至給予排卵引發(fā)劑量的hCG。理想的情況是FSH的累計(jì)劑量不應(yīng)超過6000IU/周期。
本文關(guān)于著床與妊娠效果所用的術(shù)語“提高率”、“促進(jìn)”、“輔助”、“增加率”等等包括例如當(dāng)與一個或多個未經(jīng)治療的患者的著床或妊娠水平或發(fā)生率相比，或者當(dāng)與同一個患者在較早時間點(diǎn)(例如與“基準(zhǔn)”水平相比較)所觀察到的著床或妊娠水平或發(fā)生率相比，接受本發(fā)明方法治療的該個體或該組患者的著床或妊娠發(fā)生率有任何可測到的改善或提高。例如，在hCG或LH與COH聯(lián)用的實(shí)施例中，相關(guān)比較是對接受這些實(shí)施例的方法治療的患者與接受常規(guī)COH治療的該組患者或者與接受常規(guī)COH治療的同一個患者作比較。這種改善或提高最好具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P值優(yōu)選小于0.05。測定具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的結(jié)果的方法已為人公知，本技術(shù)領(lǐng)域已有記載，可采用任何一種合適的方法。
本文關(guān)于流產(chǎn)效果所用的術(shù)語“降低”、“減少”等指例如當(dāng)與一個或多個未經(jīng)治療的患者的流產(chǎn)發(fā)生率相比，或者當(dāng)與同一個患者在較早時間點(diǎn)(例如與“基準(zhǔn)”水平相比較)所觀察到的流產(chǎn)發(fā)生率相比，接受本發(fā)明方法治療的該個體或該組患者的流產(chǎn)發(fā)生率有任何可測到的降低或減少。例如，在hCG或LH與COH聯(lián)用的實(shí)施例中，相關(guān)比較是對接受這些實(shí)施例的方法治療的患者與接受常規(guī)COH治療的該組患者或與接受常規(guī)COH治療的同一個患者作比較。這種降低最好具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P值優(yōu)選小于0.05。最優(yōu)選的是，本發(fā)明所述的應(yīng)用和方法能夠預(yù)防流產(chǎn)。所以這些術(shù)語也包括預(yù)防流產(chǎn)。
本發(fā)明的hCG(或LH)應(yīng)用可用于被認(rèn)為其不孕可能是因?yàn)樵绠a(chǎn)或無法著床所致的任何患者上，而不論該患者是否有正在接受其他外源性促性腺激素。
流產(chǎn)定義為胎兒具有獨(dú)立生存能力之前娩出。早產(chǎn)指那些在胎兒發(fā)育最初1個月中發(fā)生的流產(chǎn)。本發(fā)明的方法和應(yīng)用對降低早產(chǎn)水平特別有用。
本發(fā)明的hCG(當(dāng)然還有LH)應(yīng)用與COH結(jié)合通常會與體外受精技術(shù)聯(lián)用。不過，本文所述的hCG(和LH)應(yīng)用與COH結(jié)合也可與體內(nèi)受精聯(lián)用。
另外，本發(fā)明的hCG(和LH)應(yīng)用還可與體內(nèi)受精結(jié)合用在不進(jìn)行COH的患者中，例如，包括自然排卵以及例如用抗雌激素或芳香酶抑制劑誘導(dǎo)排卵的方案(即不給予外源性促性腺激素的方案)。當(dāng)用在不接受其他外源性促性腺激素的患者中時，hCG應(yīng)在任何一個給定周期中預(yù)計(jì)要排卵之前開始給予，最好在月經(jīng)之后第6、7或8天或者約第6、7或8天開始給予?？山o予單丸劑(例如上述關(guān)于給予單丸劑所述的劑量，特別是100-500IU hCG)，或者可每日給予(例如上述關(guān)于每日給予所述的劑量，特別是50-100IU hCG)，或者每2天給予(例如上述劑量，特別是50-200IU hCG)，直至自然排卵或有需要時用上述排卵引發(fā)劑量的hCG引發(fā)排卵。
在hCG(或LH)用于不進(jìn)行COH的患者的本發(fā)明實(shí)施例中，這些患者可選擇地用外源性促性腺激素(例如外源性FSH)進(jìn)行誘導(dǎo)排卵。所用的合適的hCG(或LH)劑量如本文上下文所述。如上所述，在適當(dāng)時間點(diǎn)用高劑量hCG引發(fā)排卵。
這樣，如上所示，將意識到，本發(fā)明的hCG(或LH)應(yīng)用與采用FSH的COH方案結(jié)合是有利的，hCG(或LH)還可用來提高不進(jìn)行COH方案，但希望提高成功受孕機(jī)會的人患者的胚胎著床率和/或降低流產(chǎn)率。這些患者(或她們的配偶)通常有一些生育問題，即不孕或生育能力低。另外，患者也可能不存在排卵和受精等明顯生育問題，但由于容易早產(chǎn)和/或無法著床而導(dǎo)致不育。高齡婦女例如超過35歲的婦女一般會有著床和流產(chǎn)率高的問題，她們也非常適合用該方法進(jìn)行治療。這些患者可以自然排卵，或者可用誘導(dǎo)排卵方案進(jìn)行誘導(dǎo)排卵而不用COH方案，例如，使用芳香酶抑制劑等(芳香酶抑制劑刺激內(nèi)源性FSH分泌)，或者以上討論的給予外源性FSH的誘導(dǎo)排卵方案。這樣一些誘導(dǎo)排卵方案都是本領(lǐng)域的標(biāo)準(zhǔn)方案，已有完整的敘述。
在不采用COH方案的應(yīng)用中，一般從月經(jīng)開始那天計(jì)算給予hCG(或LH)的時間，雖然在采用FSH的誘導(dǎo)排卵方案中，給予的時間可從開始FSH治療那天計(jì)算。月經(jīng)后或開始FSH治療之后的適當(dāng)時間參見上述討論。如上所述，hCG(或LH)是在卵泡期排卵(可以是自然排卵或者用排卵引發(fā)劑量的hCG引發(fā)排卵)之前開始給予，排卵期排卵之前優(yōu)選是周期的排卵中期，例如月經(jīng)后5至8天，例如月經(jīng)后第6、7或8天，或者開始FSH治療之后至少5或6天，例如開始FSH治療之后5、6、7或8天。由此可見，盡管這些患者的治療方案與那些進(jìn)行采用FSH的COH方案的患者不同，但給予hCG(或LH)的優(yōu)選時間是相似的，即在周期的排卵中期或排卵中期的前后時間。
當(dāng)LH與不涉及COH的方法聯(lián)用時，給予LH的優(yōu)選時間可參照hCG。LH優(yōu)選每日或每半日給予，日劑量是125-7000IU LH或150-1000IU LH，更好是150-700或350-700IU LH?？蛇x用的其他劑量是10-200IU LH、10-150IU LH或者20-100IU LH/天。150IU LH的日劑量對本發(fā)明的方法特別有效，是優(yōu)選使用的劑量。根據(jù)本發(fā)明，給予LH對至少有35歲的婦女特別有效。
用于本發(fā)明的LH、FSH和hCG可以配成適合任何便利途徑給藥，通常與藥學(xué)上可接受的載體、稀釋劑或賦形劑合用。LH、FSH和hCG的適當(dāng)制劑和給藥途徑在本技術(shù)領(lǐng)域是公知的，也已有記載，可采用任何合適的途徑和制劑。所以，本發(fā)明的藥物組合物一般含有藥學(xué)上可接受的載體、稀釋劑或賦形劑，以及適當(dāng)?shù)幕钚猿煞帧?br> 如上所述，可從本文所述的方法和應(yīng)用獲益的患者是某些形式的不孕或生育能力低的任何患者，或者是希望降低流產(chǎn)率和/或減少不適當(dāng)著床相關(guān)問題的任何患者，例如那些不適當(dāng)著床和/或流產(chǎn)風(fēng)險高的患者，如至少有35歲的患者或者過去曾有著床和/或流產(chǎn)問題的患者。合適的患者可以有自然排卵周期或可以進(jìn)行誘導(dǎo)排卵或COH方案。
根據(jù)本發(fā)明，給予hCG(或LH)對那些正接受GnRH激動劑或拮抗劑治療的患者是有用的。根據(jù)本發(fā)明，hCG或LH給予與IVF或IVF/ICSI結(jié)合特別有用。該方法可提高著床率和懷孕過了最初3個月的妊娠率。使用hCG或LH甚至可幫助一些以前被確診為由于非排卵問題而導(dǎo)致無法進(jìn)行IVF方案的患者著床。
本發(fā)明的hCG或LH應(yīng)用對治療低內(nèi)源性LH水平的患者，如低促性腺素性功能減退癥患者特別有用。
本發(fā)明的hCG或LH應(yīng)用也可用在那些例如以前在標(biāo)準(zhǔn)COH或誘導(dǎo)排卵方案中僅用FSH無法懷孕或無法保持懷孕的患者中。
其他適用的患者例如是那些多囊性卵巢疾病(PCOD)患者、黃體期和免疫因子不足的患者以及35歲和以上的患者(“高齡”患者)?；颊叩哪挲g優(yōu)選不超過45歲，更好是不超過42歲。
所用的hCG可以從任何資源中獲得，只要它沒有受到任何會顯著影響其作用的物質(zhì)(尤其是其他促性腺激素)污染。雖然因?yàn)橹亟MhCG(rhCG)的純度高而被優(yōu)選使用，但也可用尿hCG。這樣條件同樣適用于本發(fā)明所用的hLH的資源。
hCG類似物包括具有與hCG相同的生理、生物化學(xué)或生物作用，和/或與hCG的相同受體結(jié)合的全部分子。眾所周知，黃體生成激素(LH)與hCG有一些相同的生理作用。
hCG類似物中有些包括單鏈hCG，其中β-亞基的C末端與α-亞基的N末端融合(Sugahara等人，PNAS，92，1995，2041-2045)。已被公開的其他類似物的例子可參見歐洲專利EP 0322226(Applied Research System)、WO 92/22568(新澤西醫(yī)學(xué)和牙科大學(xué)(University of Medicine & Dentistry of New Jersey))、WO96/05224(華盛頓大學(xué))、WO 90/09800(華盛頓大學(xué))、WO 93/06844(華盛頓大學(xué))、WO 98/43999(華盛頓大學(xué))、WO 99/25849(華盛頓大學(xué))。
hCG可用任何一種合適的技術(shù)進(jìn)行檢測，例如Vaitukaitis等人(12)所述的放射性免疫檢測法和ELISA試驗(yàn)(13)。hCG的生物活性可用任何一種合適的技術(shù)進(jìn)行測定，例如小鼠萊迪希細(xì)胞生物檢測法(Leydig cell bioassay)(14)。
如上所述，在ART周期的后刺激階段使用LH或其類似物是有益的。在COH方案(即在LH與COH聯(lián)用的實(shí)施例)中，LH應(yīng)在開始FSH給予后第10天之前開始給予。因?yàn)長H的半衰期較短，所以最好每日給予或每半日給予。在本發(fā)明中LH與COH聯(lián)用的情況中，給予LH的優(yōu)選時間如上述hCG一樣。在最優(yōu)選的COH改進(jìn)方案中，LH在開始FSH治療之后第6或7天或者約第6或7天開始給予。LH最好應(yīng)在開始FSH治療之后3天后才給予?？擅咳战o予日劑量125-7000IU LH或150-1000IU LH，更好是150-700或350-700IU LH，直至誘導(dǎo)排卵?？蛇x用的其他劑量是10-200IU LH、10-150IU LH或者20-100IU LH/天。150IU LH的日劑量對本發(fā)明的方法特別有效，是優(yōu)選使用的劑量。
在本發(fā)明中當(dāng)LH用于不進(jìn)行COH的患者時，可使用相似的H劑量。
LH類似物包括具有與LH相同的生理、生物化學(xué)或生物作用，和/或與LH的相同受體結(jié)合的全部分子。眾所周知，hCG與LH有一些相同的生理作用。已被公開的一些LH類似物的例子可參見歐洲專利EP 0322226(Applied Research Systems)，WO 92/22568(新澤西醫(yī)學(xué)和牙科大學(xué))，WO 96/05224(華盛頓大學(xué))，WO 90/09800(華盛頓大學(xué))，WO 93/06844(華盛頓大學(xué))，WO 98/43999(華盛頓大學(xué))，WO 99/25849(華盛頓大學(xué))，WO 00/61586(Akxo Nobel)。
在采用FSH的本發(fā)明實(shí)施例中，本領(lǐng)域技術(shù)人員懂得，F(xiàn)SH可以生物活性類似物來代替，或者以刺激內(nèi)源性FSH分泌的化合物來代替。后一種情況包括芳香酶抑制劑和抗雌激素如他莫西芬(tamoxifen)和氯芪酚檸檬酸鹽(CC)。這些化合物通過消除雌激素施加在下丘腦的負(fù)反饋(或者通過拮抗雌激素受體，作用與CC和他莫西芬一樣，或者通過大大降低雌激素濃度，作用與芳香酶抑制劑一樣)來刺激內(nèi)源性FSH分泌。
FSH與本發(fā)明的hCG應(yīng)用聯(lián)用的優(yōu)選形式稱為FSH-CTP。這種長效的人FSH已在WO 93/06844中描述，它有一個野生型FSHα-亞基和一個β-亞基，該β-亞基由在其羧基末端上與hCGβ-亞基(天然hCGβ序列殘基位置112-118至位置145)的羧基末端肽(CTP)融合的野生型FSHβ-亞基組成。其他種類的FSH類似物包括例如單鏈FSH類似物，其中β-亞基與hCG的CTP融合，其再與FSHα-亞基融合，如WO96/05224所述(單鏈FSH-CTP)。
如以上關(guān)于LH和hCG所述，本發(fā)明方法所用的FSH可以從任何資源中獲得。這些資源是誘導(dǎo)排卵和COH程序領(lǐng)域技術(shù)人員所公知的?？捎肍SH尿制劑，例如FSH和LH活性之比為1∶1的hMG。因?yàn)橹亟MFSH(rFSH)的純度高，所以優(yōu)選使用rFSH。
在IVF的誘導(dǎo)排卵和COH的刺激階段中，用人絕經(jīng)期促性腺激素(hMG)取代了FSH。hMG是自絕經(jīng)后婦女尿液中提取而得到的相對較粗的激素提取物，它具有FSH和LH活性(1∶1)。非專屬性hMG可能含有少至2％活性激素，因此，高達(dá)98％蛋白質(zhì)含量可能是尿污染物。當(dāng)本發(fā)明的方法選用hMG而不用FSH時，如上所述，補(bǔ)充hCG也證明了有利于比如輔助著床和/或預(yù)防或減少流產(chǎn)。hCG應(yīng)在開始hMG治療之后第10天之前開始給予，更好是在開始hMG治療之后第9天之前開始給予，最好是在開始hMG治療之后第7或8天或者約第7或8天之前開始。hCG最好在開始hMG治療之后3天后才開始給予。劑量和給藥方案參照hCG與FSH聯(lián)用的劑量和給藥方案。優(yōu)選劑量是150IU/天，更好是50或100IU hCG/天。
本發(fā)明的方法也可以hMG作為hLH的資源，即hMG可用作尿hLH的資源。
現(xiàn)在，本發(fā)明將以下列非限制性的實(shí)施例作進(jìn)一步描述。
實(shí)施例實(shí)施例1刺激方案對照組1月經(jīng)第1天，給患者每日注射曲普瑞林(decapeptyl)(0.1毫克)脫敏。14天后，進(jìn)行聲像圖檢查，不存在囊腫，用rFSH(150至200IU/天)開始刺激。7天后，通過聲像圖檢查卵泡生長，并測定E2血濃度。每日對患者進(jìn)行檢查，當(dāng)檢測到至少有2個卵泡的直徑≥18mm，同時血清E2的水平達(dá)到300pg/mL時，用10,000IU hCG引發(fā)排卵。
對照組2在對照組1的第7天，對照組2除了接受rFSH外，還接受hMG(150IU/天)。
實(shí)驗(yàn)組在對照組的第7天，實(shí)驗(yàn)組每日接受50-100IU hCG，并給合rFSH，直至按上述方法引發(fā)排卵。
卵母細(xì)胞在體外受精。4小時后，將它們洗凈，置于培養(yǎng)液(ISM1)中。20小時后，檢查受精，使胚胎在同一培養(yǎng)液中培養(yǎng)至48小時。然后，將它們轉(zhuǎn)移到第二種培養(yǎng)液(ISM2)中。再取出2個最好的胚胎移植在患者體內(nèi)，繼續(xù)培養(yǎng)直到胚泡形成(5-6天)。
結(jié)果實(shí)驗(yàn)結(jié)果列于表1、表2和表3中。表1和表2所示為對照組1(僅給予rFSH)與實(shí)驗(yàn)組(給予rFSH+hCG)的比較結(jié)果。表3所示為對照組2(給予rFSH+hMG)與實(shí)驗(yàn)組(給予rFSH+hCG)的比較結(jié)果。
在刺激階段中所用的時間沒有差異。接受hCG的實(shí)驗(yàn)組E2水平上升。兩組的移植率差別不大接受hCG92％，對照組86％，(p＝0.1)。兩組從超數(shù)胚胎獲得的胚泡形成幾乎相等(接受hCG185/411＝45％，對照組292/627＝46.5％，p＝0.622)。hCG組的著床率(接受hCG24.5％，對照組14.6％，p＝0.0134)與每次移植妊娠率(接受hCG37.5％，對照組23.6％，p＝0.0246)增加，每次移植平均1.9個胚胎。
表1刺激階段使用rFSH的低劑量hCG實(shí)驗(yàn)結(jié)果

表2刺激階段使用rFSH的低劑量hCG實(shí)驗(yàn)結(jié)果

表3刺激階段使用rFSH的低劑量hCG與hMG實(shí)驗(yàn)結(jié)果

實(shí)施例2以下研究對僅用FSH進(jìn)行COH來治療的患者與采用FSH和在第6天開始給予LH來治療的患者的妊娠結(jié)果進(jìn)行比較。
經(jīng)過陰性定量測定血清妊娠測試后，在估計(jì)排卵后7至8天以每日0.5毫克劑量的促性腺激素釋放激素激動劑(GnRH-a)Lupron使合符條件的參與者的垂體進(jìn)行脫敏，直至血清雌二醇(E2)水平＜75pg/mL完成脫敏。那時，以每日225IU的起始劑量皮下注射重組人FSH開始治療。最初5個治療日保持此劑量，如果覺得患者的卵巢應(yīng)答較慢，可每隔1至2天將劑量增大75至150IU/天。FSH的最高容許劑量是450IU/天，最高累計(jì)劑量每周期不能超過6,000IU。對那些隨機(jī)接受FSH和r-hLH的患者而言，在刺激第6天以每日150IU的劑量開始r-hLH治療。r-hLH的劑量不變。到達(dá)下調(diào)之后，在整個刺激周期以每日0.25毫克的劑量連續(xù)進(jìn)行Lupron(醋酸亮丙瑞林)治療，直到給予hCG。在整個刺激周期中評估雌二醇水平和超聲波測量以確定患者對治療的應(yīng)答。連續(xù)每日給予FSH或FSH加上r-hLH，直至認(rèn)為卵泡的發(fā)育是足夠的。當(dāng)最大卵泡的平均直徑≥18mm，并且至少有另外2個卵泡的平均直徑≥16mm時，滿足hCG給予(用于引發(fā)排卵)的標(biāo)準(zhǔn)。對于存在的卵泡數(shù)目，患者的E2水平也要在研究人員可接受的范圍之內(nèi)(約150pg/ml/成熟卵泡)時。在那時，該患者接受單次肌內(nèi)注射10,000USP單位的hCG進(jìn)行卵泡成熟的最后階段。根據(jù)研究位點(diǎn)的習(xí)慣做法，給予hCG之后用超聲波監(jiān)測34至36小時，期間經(jīng)陰道回收卵母細(xì)胞。然后，按照標(biāo)準(zhǔn)程度在每個位點(diǎn)進(jìn)行卵子胞漿內(nèi)單精子注射(ICSI)。取卵后2至3天可替換最多3個胚胎。所有在回收卵母細(xì)胞當(dāng)天傍晚開始接受hCG的患者以在油中的天然孕酮給黃體期提供支持，持續(xù)最少7天；接著，研究人員可選擇使用孕酮栓劑。黃體期的總支持時間由研究人員視情況而定。
進(jìn)行胚胎移植的全部患者接受注射hCG，15至17天后采集血樣本以測定血清β-hCG水平。如果測試結(jié)果呈陽性(生化妊娠)，2至7天后再重復(fù)測試。
在給予hCG后15至17天(當(dāng)患者來復(fù)診進(jìn)行妊娠測試時)或者來月經(jīng)一個星期內(nèi)，使全部患者進(jìn)行包括一般身體檢查和臨床實(shí)驗(yàn)測試在內(nèi)的治療后復(fù)診。對于已受孕的全部患者，在給予hCG后35至42天對她們進(jìn)行超聲波掃描，并記錄胎囊數(shù)目和胎兒心臟活動(“臨床妊娠”)。如果有臨床妊娠，對這些婦女跟蹤監(jiān)測，以確定妊娠結(jié)果。
將患者分成35歲和以上(“高齡患者”)和35歲以下，對數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。臨床妊娠數(shù)據(jù)見表4。35歲和以上患者用FSH+LH治療，其妊娠結(jié)果有明顯改善(FSH+LH48.8％，僅FSH21.6％)。

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權(quán)利要求
1.人絨毛膜促性腺激素(hCG)或其類似物在制備結(jié)合控制性超排卵(COH)供采用FSH或其類似物的人患者用，以輔助著床和/或降低流產(chǎn)率的藥物中的應(yīng)用，所述的藥物在開始FSH治療之后第10天之前開始給予。
2.如權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，所述的藥物在開始FSH治療之后第9天之前開始給予。
3.如權(quán)利要求1或2所述的應(yīng)用，其特征在于，所述的藥物在開始FSH治療之后至少3天才給予。
4.如權(quán)利要求1、2或3所述的應(yīng)用，其特征在于，所述的藥物在開始FSH治療之后第7或8天或者約第7或8天開始給予。
5.如權(quán)利要求1至4中任何一項(xiàng)所述的應(yīng)用，其特征在于，所述的藥物以25-1000IUhCG/天的劑量給予。
6.如權(quán)利要求1至5中任何一項(xiàng)所述的應(yīng)用，其特征在于，所述的藥物以50-100IUhCG/天的劑量給予。
7.如權(quán)利要求1至6中任何一項(xiàng)所述的應(yīng)用，其特征在于，所述的藥物以單丸劑給予。
8.如權(quán)利要求7所述的應(yīng)用，其特征在于，所述的單丸劑在開始FSH治療之后第7或8天或者約第7或8天給予，該丸劑含有100-500IUhCG。
9.如權(quán)利要求1至6中任何一項(xiàng)所述的應(yīng)用，其特征在于，所述的藥物每日給予，直至誘導(dǎo)排卵。
10.如權(quán)利要求1至9中任何一項(xiàng)所述的應(yīng)用，其特征在于，COH與體外受精或體內(nèi)受精結(jié)合進(jìn)行。
11.如權(quán)利要求1至10中任何一項(xiàng)所述的應(yīng)用，其特征在于，患者具有內(nèi)源性黃體生成激素(LH)水平低的缺點(diǎn)。
12.如權(quán)利要求1至11中任何一項(xiàng)所述的應(yīng)用，其特征在于，患者以前僅用卵泡刺激素(FSH)無法懷孕或無法保持懷孕。
13.如權(quán)利要求1至12中任何一項(xiàng)所述的應(yīng)用，其特征在于，所述的hCG是重組hCG。
14.如權(quán)利要求1至12中任何一項(xiàng)所述的應(yīng)用，其特征在于，所述的hCG是尿hCG。
15.如權(quán)利要求1至12中任何一項(xiàng)所述的應(yīng)用，其特征在于，使用所述hCG類似物，所述的類似物是單鏈hCG。
16.人絨毛膜促性腺激素(hCG)或其類似物，或者人黃體生成激素(hLH)或其類似物在制備促進(jìn)人患者胚胎著床和/或降低胚胎流產(chǎn)率的藥物中的應(yīng)用，所述的藥物在排卵或引發(fā)排卵之前給予。
17.如權(quán)利要求16所述的應(yīng)用，其特征在于，所述的藥物在月經(jīng)后第7或8天或者約第7或8天以單丸劑給予。
18.如權(quán)利要求16所述的應(yīng)用，其特征在于，所述的藥物在月經(jīng)后第7或8天或者約第7或8天開始每日給予，直至發(fā)生排卵。
19.如權(quán)利要求16至18中任何一項(xiàng)所述的應(yīng)用，其特征在于，所述的hCG如權(quán)利要求13至15中任何一項(xiàng)所限定。
20.一種與COH聯(lián)用以輔助著床和/或降低流產(chǎn)率的藥物組合物，其特征在于，所述的藥物組合物每劑量含有25-1000IUhCG或其類似物，或者125-7000IULH或其類似物。
21.如權(quán)利要求20所述的藥物組合物，其特征在于，所述的藥物組合物每劑量含有75-125IUhCG或其類似物。
22.如權(quán)利要求20或21所述的藥物組合物，其特征在于，所述的hCG如權(quán)利要求13至15中任何一項(xiàng)所限定。
23.人黃體生成激素(hLH)或其類似物在制備結(jié)合控制性超排卵(COH)供采用FSH或其類似物的人患者用，以輔助著床和/或降低流產(chǎn)率的藥物中的應(yīng)用，所述的藥物在開始FSH治療之后第10天之前開始給予。
24.如權(quán)利要求23所述的應(yīng)用，其特征在于，所述的藥物以125-7000IUhLH/天的劑量給予。
25.如權(quán)利要求23或24所述的應(yīng)用，其特征在于，所述的藥物給予方式如權(quán)利要求2至4或者權(quán)利要求9至12中任何一項(xiàng)所限定。
26.如權(quán)利要求23或24所述的應(yīng)用，其特征在于，所述的藥物給予方式如權(quán)利要求2至4或者權(quán)利要求9至12中任何一項(xiàng)所限定，并且患者至少35歲。
27.如權(quán)利要求16至18或者23至26中任何一項(xiàng)所述的應(yīng)用，其特征在于，所述的hLH是重組hLH。
28.如權(quán)利要求16至18或者23至26中任何一項(xiàng)所述的應(yīng)用，其特征在于，所述的hLH是尿hLH。
29.如權(quán)利要求16至18或者23至26中任何一項(xiàng)所述的應(yīng)用，其特征在于，使用hLH類似物。
30.如權(quán)利要求1至15或者23至29中任何一項(xiàng)所述的應(yīng)用，其特征在于，使用FSH類似物，所述的類似物是FSH-CTP，或者FSH以芳香酶抑制劑或氯芪酚檸檬酸鹽來代替。
31.一種用于COH的試劑盒，其特征在于，所述的試劑盒含有每日12或以上劑量FSH或其類似物以及每日4至8劑量hCG或其類似物。
32.一種輔助胚胎著床和/或降低流產(chǎn)率的試劑盒，其特征在于，所述的試劑盒含有每日4至8劑量hCG或其類似物，hCG的日劑量約25-1000IU/天。
全文摘要
本發(fā)明提供一種可提高胚胎著床率和/或降低流產(chǎn)率的方案，其中在卵泡期給予人絨毛膜促性腺激素(hCG)或者黃體生成激素(LH)或其生物類似物。
文檔編號A61K9/16GK1553810SQ02817575
公開日2004年12月8日 申請日期2002年9月12日 優(yōu)先權(quán)日2001年9月12日
發(fā)明者Y·麥那佐, Y 麥那佐 申請人:應(yīng)用研究系統(tǒng)Ars股份公司