專(zhuān)利名稱(chēng)：用作抗原載體的抗炎性脂肪醇和脂肪酸酯的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明領(lǐng)域本發(fā)明涉及治療T細(xì)胞介導(dǎo)性疾病的治療性制劑，具體地說(shuō)，本發(fā)明涉及抗炎免疫調(diào)節(jié)劑作為抗原載體的用途，其中所述抗炎免疫調(diào)節(jié)劑選自脂肪醇、其與C1-C6鏈烷酸的酯或脂肪酸與鏈烷醇或多元醇的酯，而所述抗原由與所述T細(xì)胞介導(dǎo)性疾病相關(guān)的炎性T細(xì)胞識(shí)別。
簡(jiǎn)寫(xiě)AA佐劑關(guān)節(jié)炎；CFA完全弗氏佐劑；EAE實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎；IFA不完全弗氏佐劑；MBP髓鞘堿性蛋白；MOG髓鞘少突神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞糖蛋白；OA油醇；PLP蛋白脂質(zhì)蛋白；SC皮下；TCRT細(xì)胞受體。
本發(fā)明背景淋巴細(xì)胞是免疫系統(tǒng)的重要細(xì)胞，負(fù)責(zé)獲得性免疫以及多樣性、特異性、記憶和自我/非我識(shí)別的免疫特性。成熟B細(xì)胞與其它淋巴細(xì)胞的區(qū)別在于成熟B細(xì)胞合成和展示用作抗體受體的膜結(jié)合免疫球蛋白(抗體)分子?？乖统墒煸魾細(xì)胞上的膜結(jié)合抗體的相互作用導(dǎo)致相應(yīng)特異性的B細(xì)胞克隆激活并分化，由此生產(chǎn)沒(méi)有膜結(jié)合抗體但分泌具有相同抗原結(jié)合特異性的抗體分子的B細(xì)胞克隆。
和B淋巴細(xì)胞一樣，T淋巴細(xì)胞也具有抗原膜受體。但是，與B細(xì)胞上的膜結(jié)合抗體不同，T細(xì)胞受體(TCR)不識(shí)別游離抗原。相反，TCR僅識(shí)別與主要組織相容性復(fù)合體(MHC)中的基因編碼的自體分子結(jié)合的抗原。為使大部分T細(xì)胞能夠識(shí)別，抗原必須和MHC分子一起展示在抗原提呈細(xì)胞(APC)或病毒感染細(xì)胞、癌細(xì)胞和移植物的表面。
和B細(xì)胞一樣，T細(xì)胞表達(dá)不同膜分子。所有的T細(xì)胞亞群都表達(dá)TCR(一種包括CD3在內(nèi)的多肽復(fù)合物)，大多數(shù)T細(xì)胞都可以根據(jù)存在兩種膜分子(CD4和CD8)中的哪一種來(lái)區(qū)分。表達(dá)膜糖蛋白分子CD4的T細(xì)胞局限于識(shí)別結(jié)合MHC II類(lèi)分子的抗原，而表達(dá)CD8(一種二聚體膜糖蛋白)的T細(xì)胞局限于識(shí)別結(jié)合MHC I類(lèi)分子的抗原。
一般來(lái)說(shuō)，表達(dá)CD4和表達(dá)CD8還定義了T淋巴細(xì)胞的兩個(gè)主要亞群。CD4+T細(xì)胞一般起T輔助(TH)細(xì)胞的作用，是II類(lèi)限制性的；CD8+T細(xì)胞一般起T細(xì)胞毒性(TC)細(xì)胞的作用，是I類(lèi)限制性的。
TH細(xì)胞由抗原提呈細(xì)胞上的抗原-MHC II類(lèi)復(fù)合體識(shí)別激活。激活后，TH細(xì)胞開(kāi)始分裂，并產(chǎn)生效應(yīng)細(xì)胞的克隆，每個(gè)克隆都是所述抗原-MHC II類(lèi)復(fù)合體特異性的。這些TH細(xì)胞分泌各種各樣的細(xì)胞因子，它們?cè)贐細(xì)胞、T細(xì)胞和其它參與免疫應(yīng)答的細(xì)胞的活化中起決定性作用。
TH細(xì)胞產(chǎn)生的細(xì)胞因子模式的變化可以改變其它白細(xì)胞發(fā)生的免疫應(yīng)答。因此，TH細(xì)胞依其活化時(shí)分泌的特征性細(xì)胞因子分為二類(lèi)(Mosmann and Coffman，1989)。TH1應(yīng)答產(chǎn)生支持炎癥并主要活化某些T細(xì)胞和巨噬細(xì)胞的細(xì)胞因子模式，而TH2應(yīng)答主要激活B細(xì)胞和依賴(lài)于抗體的免疫應(yīng)答。因此，TH1細(xì)胞分泌可誘導(dǎo)T細(xì)胞增殖的IL-2和介導(dǎo)組織炎癥的細(xì)胞因子(例如IFN-γ)。TH2細(xì)胞則不同，它分泌IL-4和IL-10，IL-4激活B細(xì)胞分泌某些類(lèi)型的IgG同種型抗體，并且抑制TH1炎性細(xì)胞因子的產(chǎn)生(Banchereau等，1994)，而IL-10抑制巨噬細(xì)胞產(chǎn)生炎性細(xì)胞因子，因此間接減少TH1細(xì)胞產(chǎn)生的細(xì)胞因子，并通過(guò)下調(diào)MHC II類(lèi)分子表達(dá)而影響抗原提呈細(xì)胞(Moore等，1993)。
自身免疫源于免疫系統(tǒng)對(duì)自體組分的不適宜反應(yīng)，導(dǎo)致T細(xì)胞或B細(xì)胞的自反應(yīng)性克隆活化，產(chǎn)生針對(duì)內(nèi)源抗原的體液或細(xì)胞介導(dǎo)的應(yīng)答，隨之損傷細(xì)胞、組織和器官。有時(shí)損傷由抗體引起，如自身免疫病Addison病、自身免疫性貧血(例如自身免疫性溶血性貧血和惡性貧血)、橋本氏甲狀腺炎和硬皮病。
很多自身免疫病，例如胰島素依賴(lài)性糖尿病(IDDM或I型糖尿病)、多發(fā)性硬化、類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和自身免疫性甲狀腺炎，其特征都是由內(nèi)源抗原激活的T細(xì)胞介導(dǎo)的組織損傷。這些針對(duì)自體抗原的免疫應(yīng)答是通過(guò)對(duì)自身反應(yīng)性T淋巴細(xì)胞的持續(xù)激活而得以維持的。
自身免疫病可分為器官特異性自身免疫病和全身性自身免疫病，在器官特異性自身免疫病中，免疫應(yīng)答是針對(duì)單一器官或腺體獨(dú)有的靶抗原，使得表癥很大程度上局限在該器官，而在全身性自身免疫病中，應(yīng)答是針對(duì)廣泛范圍的靶抗原，涉及許多器官和組織。器官特異性自身免疫病的實(shí)例包括胰島素依賴(lài)性糖尿病、多發(fā)性硬化、類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、甲狀腺炎和重癥肌無(wú)力，而全身性自身免疫病的實(shí)例包括系統(tǒng)性紅斑狼瘡和硬皮病。
正是TH1細(xì)胞導(dǎo)致器官特異性自身免疫病發(fā)病。例如，有強(qiáng)有力的證據(jù)顯示，免疫抗原(例如髓鞘堿性蛋白(MBP)或蛋白脂質(zhì)蛋白(PLP))特異性的CD4+TH1細(xì)胞引起小鼠實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎(EAE)。該病可通過(guò)MBP或PLP接種動(dòng)物的T細(xì)胞或所述動(dòng)物的克隆T細(xì)胞系由一只動(dòng)物傳給另一只動(dòng)物。TH1型應(yīng)答似乎還涉及其它T細(xì)胞介導(dǎo)性疾病，例如接觸性皮炎(Romagnani，1994)。
大多數(shù)器官特異性自身免疫病例是因?yàn)樽陨矸磻?yīng)性CD4+T細(xì)胞而發(fā)生。分析這些T細(xì)胞揭示，TH1/TH2平衡可能會(huì)影響是否發(fā)生自身免疫。TH1細(xì)胞涉及自身免疫的發(fā)生，而在某些情況下，TH2細(xì)胞不僅僅防止自身免疫的誘發(fā)，而且防止既有疾病的發(fā)展，并在異體移植耐受的誘生和維持中起保護(hù)作用。
已經(jīng)開(kāi)發(fā)了幾種治療自身免疫病的治療方法。各種自身抗原的鑒定和測(cè)序促成了調(diào)節(jié)自身免疫T細(xì)胞活性的新方法的產(chǎn)生。涉及自身免疫病發(fā)病的完整抗原或由其序列衍生的肽已提出用于治療自身免疫病。
適于免疫特異性治療自身免疫病的合成肽由涉及自身免疫病發(fā)病的T細(xì)胞識(shí)別。這些肽的序列可由涉及所述疾病的抗原序列中的病原性序列組成，或者可是其類(lèi)似物，在該序列中，一個(gè)或多個(gè)天然氨基酸殘基由不同的氨基酸殘基取代，特別是所謂的“變異肽”，其在病原性天然互作區(qū)(即接觸TCR的部位)的表位中含一個(gè)氨基酸取代，但在抗原限制位(即接觸MHC的部位)中沒(méi)有變異。
每一種自身免疫病有其理想的肽用于治療，這些肽可直接得自與所述疾病相關(guān)的抗原序列，或者是其變異肽或其它類(lèi)似物。因此，如多發(fā)性硬化(MS)這樣的疾病涉及與髓鞘堿性蛋白(MBP)、髓鞘少突神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞糖蛋白(MOG)和蛋白脂質(zhì)蛋白(PLP)等自身抗原反應(yīng)的T細(xì)胞，它就需要MBP、MOG或PLP肽或其類(lèi)似物來(lái)治療；重癥肌無(wú)力可用乙酰膽堿受體肽治療；甲狀腺炎用甲狀腺球蛋白肽治療；I型糖尿病用谷氨酸脫羧酶(GAD)肽或胰島素序列肽治療；系統(tǒng)性紅斑狼瘡用P53蛋白衍生肽治療；而Guillain-Barré綜合癥用髓鞘抗原P2肽治療。
近幾年，已提出與自身免疫病相關(guān)的病原性自身抗原衍生肽或其類(lèi)似物用于治療自身免疫病。例如，已描述人MBP序列衍生肽(US5,817,629、US 6,250,040)及其類(lèi)似物(US 5,948,764、US 6,329,499)用于治療多發(fā)性硬化；已提出65kD的人GAD異構(gòu)體和胰島素的肽類(lèi)似物用于治療糖尿病(分別為US 5,945,401和US 6,197,926)；已描述一種自身抗原或其片段用于治療眼色素層視網(wǎng)膜炎(US 5,961,977)。
在各種自身免疫病的每一種當(dāng)中，最好給予相關(guān)肽的佐劑溶液，所述佐劑應(yīng)當(dāng)活化抗炎TH2表型的T細(xì)胞。預(yù)期這樣可阻礙自身免疫進(jìn)程(參見(jiàn)Liblau等，1995)。還有不涉及自身免疫病治療的情況，其中活化特異性TH2表型T細(xì)胞是有用的。但是，涉及自身抗原的治療必須用不誘導(dǎo)TH1型免疫的佐劑進(jìn)行，TH1型免疫可能激活受治療患者的危險(xiǎn)的TH1自身免疫。因此，需要鑒別出能夠和誘導(dǎo)非炎性TH2型T細(xì)胞的特定抗原組合的佐劑。
佐劑依其特性為非特異性免疫調(diào)節(jié)劑。適于以上概述目的的佐劑應(yīng)是能夠與抗原或其它分子組合成治療性疫苗的非特異性免疫調(diào)節(jié)劑，以便誘導(dǎo)目的抗炎表型的特異性T細(xì)胞活化。
幾種適于治療T細(xì)胞介導(dǎo)性疾病(例如自身免疫病)的肽顯示在油性溶媒中以皮下(SC)給予小鼠有效，所述油性溶媒例如稱(chēng)為不完全弗氏佐劑(IFA)的礦物油乳濁液(Ben-Nun和Cohen，1982)。但是，IFA以及完全弗氏佐劑(CFA；含各種量滅活分枝桿菌生物體的礦物油制劑)不允許用于人類(lèi)，因?yàn)榈V物油在體內(nèi)不能降解。
本發(fā)明人先前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，包含10-20％植物和/或動(dòng)物來(lái)源的甘油三酯、1.2-2.4％植物和/或動(dòng)物來(lái)源的磷脂、2.25-4.5％滲透壓調(diào)節(jié)劑、0-0.05％防氧化劑并加無(wú)菌水至總共100ml的可代謝脂肪乳濁液，例如稱(chēng)為Intralipid和Lipofundin的脂質(zhì)乳濁液，可作為佐劑和特異性肽組合用于治療T細(xì)胞介導(dǎo)性疾病(例如自身免疫病)(WO97/020016)。
US 5,019,383描述了含肽殘基的合成疫苗，所述肽殘基偶聯(lián)至一個(gè)或多個(gè)至少12個(gè)碳原子的烷基或烯基或其它烴類(lèi)物質(zhì)，其中所述烷基或烯基可以為偶聯(lián)多功能基團(tuán)的一個(gè)或多個(gè)功能基團(tuán)的脂肪酸殘基，所述多功能基團(tuán)結(jié)合至所述肽殘基的N-末端氨基和/或C-末端羧基。
發(fā)現(xiàn)有效用于肽治療的可降解并起抗炎免疫調(diào)節(jié)劑作用的載體應(yīng)當(dāng)是非常理想的。
本發(fā)明概述現(xiàn)在已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，按照本發(fā)明，某些長(zhǎng)鏈脂肪醇、其與C1-C6鏈烷酸的酯、或長(zhǎng)鏈脂肪酸與鏈烷醇或多元醇的某些酯起抗炎免疫調(diào)節(jié)劑的作用，因此可作為佐劑和特異性抗原組合用于激活T細(xì)胞，以便治療自身免疫病和優(yōu)選需要TH2型免疫應(yīng)答的T細(xì)胞介導(dǎo)的免疫作用。
本發(fā)明因此在一個(gè)實(shí)施方案中涉及治療T細(xì)胞介導(dǎo)性疾病的治療性制劑，其含有炎性T細(xì)胞識(shí)別的抗原和載體，其中所述炎性T細(xì)胞與所述T細(xì)胞介導(dǎo)性疾病發(fā)病相關(guān)，而其中所述載體是選自以下的抗炎免疫調(diào)節(jié)劑(a)飽和或順式不飽和C10-C20脂肪醇或其與C1-C6鏈烷酸的酯；和(b)飽和或順式不飽和C10-C20脂肪酸酯，其中所述酯選自脂肪酸的C1-C6烷基酯、脂肪酸與具有至少兩個(gè)羥基的C1-C6多元醇的單酯以及脂肪酸與甘油的二酯。
和本發(fā)明載體一起使用的抗原由與自身免疫病或其它T細(xì)胞介導(dǎo)性疾病發(fā)病相關(guān)的炎性T細(xì)胞識(shí)別，并可以是肽或非肽抗原。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及以上定義的治療性制劑，其使個(gè)體T細(xì)胞細(xì)胞因子應(yīng)答由TH1向TH2轉(zhuǎn)換。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及以上定義的治療性制劑，其使IL-2和/或IFN-γT細(xì)胞細(xì)胞因子應(yīng)答下降，而IL-4和/或IL-10 T細(xì)胞細(xì)胞因子應(yīng)答增加。
在再另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及抗炎免疫調(diào)節(jié)劑和與T細(xì)胞介導(dǎo)性疾病發(fā)病相關(guān)的炎性T細(xì)胞識(shí)別的抗原一起用于生產(chǎn)用于治療所述T細(xì)胞介導(dǎo)性疾病的治療性制劑的用途，所述抗炎免疫調(diào)節(jié)劑選自(a)飽和或順式不飽和C10-C20脂肪醇或其與C1-C6鏈烷酸的酯；和(b)飽和或順式不飽和C10-C20脂肪酸酯，其中所述酯選自脂肪酸的C1-C6烷基酯、脂肪酸與具有至少兩個(gè)羥基的C1-C6多元醇的單酯以及脂肪酸與甘油的二酯。
在再另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及用于治療罹患T細(xì)胞介導(dǎo)性疾病的患者的方法，該方法包括給予所述患者含抗原(被與所述T細(xì)胞介導(dǎo)性疾病發(fā)病相關(guān)的炎性T細(xì)胞識(shí)別)和生物活性載體的治療性制劑，所述生物活性載體由選自以下的抗炎免疫調(diào)節(jié)劑的脂質(zhì)乳濁液組成(a)飽和或順式不飽和C10-C20脂肪醇或其與C1-C6鏈烷酸的酯；和(b)飽和或順式不飽和C10-C20脂肪酸酯，其中所述酯選自脂肪酸的C1-C6烷基酯、脂肪酸與具有至少兩個(gè)羥基的C2-C6多元醇的單酯以及脂肪酸與甘油的二酯。
附圖簡(jiǎn)述

圖1顯示了油醇(OA)對(duì)佐劑關(guān)節(jié)炎(AA)的劑量效應(yīng)作用。在誘生AA前14天皮下給予大鼠一次不同劑量的OA。
本發(fā)明詳述在本文的說(shuō)明書(shū)和權(quán)利要求書(shū)中，術(shù)語(yǔ)“載體”和“佐劑”作為同義詞使用，是指可與抗原組合成治療性疫苗誘導(dǎo)目的抗炎表型的特異性T細(xì)胞活化的非特異性免疫調(diào)節(jié)劑。
本發(fā)明提供一種作為佐劑和與T細(xì)胞介導(dǎo)性疾病發(fā)病相關(guān)的炎性T細(xì)胞識(shí)別的抗原一起用于生產(chǎn)治療所述T細(xì)胞介導(dǎo)性疾病的治療性制劑的抗炎免疫調(diào)節(jié)劑。
按照本發(fā)明使用的佐劑是選自以下的抗炎免疫調(diào)節(jié)劑(a)飽和或順式不飽和C10-C20脂肪醇或其與C1-C6鏈烷酸的酯；和(b)飽和或順式不飽和C10-C20脂肪酸酯，其中所述酯選自脂肪酸的C1-C6烷基酯、脂肪酸與具有至少兩個(gè)羥基的C2-C6多元醇的單酯以及脂肪酸與甘油的二酯。
按照本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案，所述佐劑為長(zhǎng)鏈飽和或不飽和C10-C20脂肪醇，優(yōu)選C16-C20脂肪醇，最優(yōu)選C18脂肪醇。按照本發(fā)明可使用的飽和脂肪醇的實(shí)例包括但不限于癸醇、月桂醇、肉豆蔻醇、硬脂醇和優(yōu)選的鯨蠟醇(也稱(chēng)作棕櫚醇)。所述不飽和脂肪醇優(yōu)選具有一個(gè)或多個(gè)順式雙鍵和16-18個(gè)碳原子，例如但不限于油醇(順式-9-十八碳烯醇)、亞油醇(順式-9，12-十八碳二烯醇)、γ-亞麻仁醇(順式-6，9，12-十八碳三烯醇)和亞麻仁醇(順式-9，12，15-十八碳三烯醇)。在優(yōu)選實(shí)施方案中，所述脂肪醇為鯨蠟醇、亞麻仁醇或最優(yōu)選的油醇。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的佐劑為以上定義的脂肪醇和C1-C6鏈烷酸(例如乙酸、丙酸、丁酸、戊酸和己酸)的酯。
在再一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的佐劑為飽和或順式不飽和C10-C20脂肪酸的酯，其中所述酯選自C1-C8烷基酯、脂肪酸與具有至少兩個(gè)羥基的C2-C6多元醇的單酯以及脂肪酸與甘油的二酯，其中甘油三個(gè)羥基中的一個(gè)或兩個(gè)與所述飽和或順式不飽和長(zhǎng)鏈脂肪酸酯化。
C10-C20脂肪酸優(yōu)選為C16-C20脂肪酸，最優(yōu)選為C18脂肪酸。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述C10-C20脂肪酸是飽和脂肪酸，例如但不限于癸酸、月桂酸、肉豆蔻酸、棕櫚酸、硬脂酸和花生酸。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述C10-C20脂肪酸是順式不飽和脂肪酸，例如但不限于棕櫚烯酸(順式-9-十六碳烯酸)、油酸(順式-9-十八碳烯酸)、順式-異油酸(順式-11-十八碳烯酸)、亞油酸(順式-9，12-十八碳二烯酸)、γ-亞麻酸(順式-6，9，12-十八碳三烯酸)、亞麻酸(順式-9，12，15-十八碳三烯酸)和花生四烯酸(順式-5，8，11，14-二十碳四烯酸)。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，所述脂肪酸為油酸。
飽和或順式不飽和C10-C20脂肪酸的烷基酯在烷基鏈中可具有1-6個(gè)碳原子，可為但不限于甲基或乙基。在優(yōu)選實(shí)施方案中，所述烷基酯為油酸甲酯或油酸乙酯。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的佐劑為飽和或順式不飽和C10-C20脂肪酸與具有至少兩個(gè)羥基的多元醇(例如C2-C8鏈烷二醇、甘油或糖類(lèi))的單酯。
所述C2-C8鏈烷二醇優(yōu)選為2-4個(gè)碳原子，更優(yōu)選為2個(gè)碳原子，其可以為1，2-乙二醇、1，3-丙二醇和1，4-丁二醇。這種酯的一個(gè)實(shí)例是1，2-乙二醇一油酸酯。
所述糖類(lèi)可以是例如但不限于單糖，例如核糖、果糖、葡萄糖、半乳糖或甘露糖。這種酯的一個(gè)實(shí)例是甘露糖一油酸酯。
按照本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案，所述佐劑為甘油和C10-C20脂肪酸的單酯或二酯。在單酸甘油酯(例如甘油一油酸酯)的情況下，獲得的酯將含有兩個(gè)自由羥基。雙酸甘油酯包含一個(gè)自由羥基而另兩個(gè)羥基都可以與2個(gè)C10-C20脂肪酸分子酯化(例如雙油酸甘油酯)，或者一個(gè)羥基與1個(gè)C10-C20脂肪酸分子酯化，第二個(gè)羥基與1個(gè)另一種羧酸分子(例如但不限于脂肪族C1-C6羧酸，例如乙酸、丙酸、丁酸和己酸))酯化。
本發(fā)明的抗炎免疫調(diào)節(jié)劑形成脂質(zhì)乳濁液，當(dāng)作為疫苗佐劑與被治療疾病所涉及的T細(xì)胞能與之反應(yīng)的抗原物質(zhì)一起使用時(shí)，用于介導(dǎo)治療前TH1 T細(xì)胞反應(yīng)向治療后TH2 T細(xì)胞反應(yīng)的轉(zhuǎn)換。這一發(fā)現(xiàn)證實(shí)，這樣的脂質(zhì)乳濁液是耐受抗原性的生物活性載體，可用于治療任何TH1介導(dǎo)疾病的疫苗中。在這樣的疫苗中，抗原提供療效的免疫特異性，而本發(fā)明的生物活性載體則提供了生物學(xué)效應(yīng)，即TH1→TH2轉(zhuǎn)換。由于本發(fā)明的所述生物活性載體介導(dǎo)的轉(zhuǎn)換，一系列自身反應(yīng)性疾病可以通過(guò)使用一種可誘導(dǎo)T細(xì)胞細(xì)胞因子轉(zhuǎn)換的抗原/載體組合加以治療。
包含抗原和所述抗炎免疫調(diào)節(jié)佐劑的治療性制劑按照本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選用途為治療由TH1細(xì)胞介導(dǎo)的器官特異性自身免疫病。這樣的疾病包括但不限于諸如多發(fā)性硬化、I型糖尿病、類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和甲狀腺炎等自身免疫病。
用于這種制劑的抗原是一種與所述自身免疫病發(fā)病相關(guān)的炎性T細(xì)胞識(shí)別的抗原，并可以是參與所述疾病進(jìn)程的完整蛋白、所述蛋白序列衍生的肽、在病原性自身抗原肽表位中具有單個(gè)氨基酸取代的變異肽或與所述疾病相關(guān)的炎性T細(xì)胞識(shí)別的任何其它肽。
因此，用于治療多發(fā)性硬化的抗原可以是MBP、MOG或PLP，或US 5,817,629所述的人MBP序列衍生的肽，例如肽MBP(75-95)、MBP(86-95)和MBP(82-98)，或US 5,948,764和6,239,499描述的其類(lèi)似物，或MOG肽或PLP肽或其類(lèi)似物。所述抗原還可以是共聚物1或Cop1，其是一種由以下4種氨基酸組成的隨機(jī)共聚物酪氨酸-谷氨酸-丙氨酸-賴(lài)氨酸，其與MBP在功能上可交叉反應(yīng)，并能夠在抗原提呈時(shí)與MHC II類(lèi)分子上的MBP競(jìng)爭(zhēng)。乙酸鹽形式的Cop1(通用名為Glatiramer乙酸鹽)已在幾個(gè)國(guó)家批準(zhǔn)用于治療MS，其商品名為COPAXONE(Teva Pharmaceuticals Ltd.，Petah Tikva，Israel的商標(biāo))。
對(duì)于I型糖尿病(IDDM)治療，所述肽可衍生自谷氨酸脫羧酶(GAD)或如US 5,945,401所述的GAD肽類(lèi)似物，或胰島素肽類(lèi)似物，例如包含天然胰島素B鏈序列殘基9-23的肽，其在12、13、15和/或16位變異，并可如US 6,197,926所述進(jìn)一步變異。
對(duì)其它自身免疫病治療，所述肽衍生自與所述疾病相關(guān)的抗原序列或其肽類(lèi)似物。因此，對(duì)于自身免疫性甲狀腺炎治療，所述肽衍生自甲狀腺球蛋白序列；對(duì)于類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，自身抗原可衍生自膠原蛋白II或分枝桿菌(例如結(jié)核分枝桿菌)，例如稱(chēng)為hsp60的60kDa熱激蛋白(其構(gòu)成在佐劑關(guān)節(jié)炎中由T淋巴細(xì)胞識(shí)別的分枝桿菌表位)或?qū)?yīng)的人HSP60或其肽；對(duì)于重癥肌無(wú)力治療，所述肽衍生自乙酰膽堿受體序列或如US 6,066,621所述的其類(lèi)似物；對(duì)于系統(tǒng)性紅斑狼瘡治療，所述肽可衍生P53蛋白序列；而對(duì)于Guillain-Barré綜合癥治療，所述肽可衍生自髓鞘抗原P2序列。
所述抗原可以為非肽抗原?？砂凑毡景l(fā)明使用的非肽抗原的實(shí)例包括但不限于治療磷脂綜合癥的磷脂、治療動(dòng)脈硬化的膽固醇以及治療系統(tǒng)性紅斑狼瘡的DNA分子。
該抗原是否為肽并不重要。因此，例如，對(duì)TH1介導(dǎo)的變態(tài)反應(yīng)，其結(jié)果是皮膚過(guò)敏和發(fā)炎，如接觸性皮炎，可以使用這樣的疫苗來(lái)治療包括刺激性抗原和本發(fā)明的可以引起細(xì)胞因子反應(yīng)從TH1型向TH2型轉(zhuǎn)換的生物活性載體。因此，雖然患者繼續(xù)維持針對(duì)抗原的高水平抗體，但造成皮膚發(fā)炎的炎癥性T細(xì)胞反應(yīng)受到抑制。
因而，本發(fā)明的耐受抗原性生物活性載體可以在需要對(duì)T細(xì)胞攻擊的抗原產(chǎn)生耐受的任何時(shí)候使用，即，當(dāng)疫苗被用以限制T細(xì)胞介導(dǎo)性疾病，特別是TH1細(xì)胞介導(dǎo)疾病的任何時(shí)候。如果可以確定在移植物排斥或移植物抗宿主疾病中是何種抗原激活此反應(yīng)，那么給予這樣的抗原和本發(fā)明的載體就可以指望促使從不希望的炎癥性TH1反應(yīng)向更為期望的TH2反應(yīng)轉(zhuǎn)換，不管在這種情況下能與T細(xì)胞反應(yīng)的抗原數(shù)目總體上的復(fù)雜性。
為了確定肽激活后T細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子，用體外激活測(cè)定法檢測(cè)患者外周血中的淋巴細(xì)胞。從置于fico-hypaque中的肝素化全血中分離外周血淋巴細(xì)胞，將其與5-50μg/ml濃度的測(cè)試肽培養(yǎng)。在不同時(shí)間收集培養(yǎng)T細(xì)胞上清液，按ELISA或生物測(cè)定法檢驗(yàn)不同細(xì)胞因子的活性。
本發(fā)明發(fā)現(xiàn)長(zhǎng)鏈脂肪醇及其酯以及某些脂肪酸酯可以有效地作為佐劑用于T細(xì)胞活化，這是完全出乎意料的。同樣，這些制劑為耐受抗原性生物活性抗炎免疫調(diào)節(jié)劑這一發(fā)現(xiàn)也是完全出乎意料的。
加入抗原和如本文所述使用免疫調(diào)節(jié)劑作為佐劑的優(yōu)勢(shì)在于以下事實(shí)治療可限于誘導(dǎo)保護(hù)性TH2免疫反應(yīng)所需的相對(duì)較短的接觸—如此誘導(dǎo)的特異性TH2免疫自身將積極抑制疾病。如果沒(méi)有所述抗原，則不得不長(zhǎng)期給予所述免疫調(diào)節(jié)劑，以便持續(xù)抑制炎癥，而且一旦停止治療，預(yù)計(jì)疾病將復(fù)發(fā)。持續(xù)給予單獨(dú)的抗炎劑的長(zhǎng)期作用可能不理想。因此，通過(guò)將本發(fā)明的免疫調(diào)節(jié)劑和特異性抗原組合在一起誘導(dǎo)對(duì)炎癥過(guò)程的積極且特異性調(diào)節(jié)是有利的。
本文引用的所有美國(guó)專(zhuān)利和其它參考文獻(xiàn)都在此引作參考，就如同在本文完全公開(kāi)一樣。
現(xiàn)在用以下的非限制性實(shí)施例闡述本發(fā)明。
實(shí)施例實(shí)施例1.油醇和其它藥物防佐劑關(guān)節(jié)炎(AA)的抗炎作用一個(gè)用于測(cè)試本發(fā)明藥物抗炎活性的模型是佐劑關(guān)節(jié)炎，它是一種用結(jié)核分枝桿菌(Mycobacterium tuberculosis)抗原接種某些大鼠品系誘發(fā)的實(shí)驗(yàn)性關(guān)節(jié)病(Pearson，1956)。該病用作人類(lèi)關(guān)節(jié)炎病(例如類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、Reiter綜合癥的反應(yīng)性關(guān)節(jié)炎、關(guān)節(jié)強(qiáng)直性脊椎炎和其它似乎由免疫系統(tǒng)介導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎)的模型(Pearson，1964)。佐劑關(guān)節(jié)炎也用作免疫介導(dǎo)炎癥(一般包括細(xì)胞介導(dǎo)的自身免疫反應(yīng)、移植排斥和變態(tài)反應(yīng))的模型。例如，可抑制佐劑關(guān)節(jié)炎的治療包括皮質(zhì)甾類(lèi)、環(huán)孢菌素A(Jaffee等，1989；Pollock等，1989)、咪唑硫嘌呤之類(lèi)的免疫抑制劑和其它廣泛用于治療自身免疫病的免疫抑制劑。因此，一種治療劑抑制佐劑關(guān)節(jié)炎就表明該藥物是潛在有效的廣譜抗炎藥。
如文獻(xiàn)所述(Pearson，1956)用1mg/0.1ml滅活結(jié)核分枝桿菌(Sigma)的IFA(Sigma)溶液在尾根處接種近交8-10周齡Lewis大鼠(Harlan-Olac Limited，Blackthorn，Oxon，UK)，以誘發(fā)AA。觀察到12-14天后肢體出現(xiàn)關(guān)節(jié)炎，如文獻(xiàn)所述(Holoshitz等，1983)分別對(duì)四肢每一條的炎癥嚴(yán)重性以0-4評(píng)分，求和得0-16的評(píng)分。通常在接種后26天左右觀察到關(guān)節(jié)炎發(fā)病高峰。
對(duì)照大鼠未治療或注射鹽水治療。通過(guò)將在誘發(fā)后第12天開(kāi)始每隔一天腹腔給予皮質(zhì)甾類(lèi)藥物地塞米松(200μg)進(jìn)行治療的大鼠組包括在內(nèi)，獲得免疫抑制的陽(yáng)性對(duì)照。在誘發(fā)AA前第14天或誘發(fā)AA后第12天皮下(SC)給予一次所述免疫調(diào)節(jié)劑。如下計(jì)算炎癥最強(qiáng)日檢測(cè)的炎癥抑制百分比 實(shí)驗(yàn)采用各100μl的甘油單油酸酯、油醇、亞麻仁醇、鯨蠟醇、甘露醇單油酸酯、油酸乙酯和油酸甲酯，結(jié)果顯示它們?nèi)慷加行?，產(chǎn)生超過(guò)66％的炎癥抑制，而油酸沒(méi)有作用。結(jié)果概述于表1。另兩個(gè)實(shí)驗(yàn)顯示500μl油醇抑制炎癥達(dá)96％和91％。
表1.各種藥物對(duì)佐劑關(guān)節(jié)炎炎癥的作用
實(shí)施例2.不同劑量油醇的抗AA作用為研究油醇對(duì)AA的劑量效應(yīng)作用，如以上實(shí)施例1所述，在誘發(fā)AA前第14天皮下給予Lewis大鼠一次10、50、100或500μl劑量的油醇。
圖1顯示了油醇的劑量效應(yīng)作用。由圖可見(jiàn)，油醇劑量增加抑制關(guān)節(jié)炎。在發(fā)病高峰日第26天，炎癥抑制達(dá)14％(10μl)、61％(50μl)、78％(100μl)和90％(500μl)。
實(shí)施例3.免疫調(diào)節(jié)劑作為佐劑治療EAE的用途已經(jīng)表明在以上實(shí)施例1測(cè)試的油醇和其它化合物是有效的抗炎免疫調(diào)節(jié)劑，現(xiàn)在的目的是測(cè)試其作為佐劑和與T細(xì)胞介導(dǎo)性疾病(例如自身免疫病)發(fā)病相關(guān)的炎性T細(xì)胞識(shí)別的抗原一起對(duì)治療所述T細(xì)胞介導(dǎo)性疾病的作用。
可通過(guò)用MBP的CFA溶液接種Lewis大鼠誘發(fā)EAE。為此，通過(guò)用25μg MBP(總共50μg)的CFA溶液(Sigma)注射每只爪墊，用豚鼠MBP(Sigma)接種7-9周齡的雌性Lewis大鼠。在接種后約12天發(fā)病，其特征是由于中樞神經(jīng)系統(tǒng)炎癥而導(dǎo)致的不同程度的麻痹。使用4級(jí)評(píng)分對(duì)大鼠麻痹評(píng)分0，無(wú)麻痹；1，尾無(wú)力(懸垂)；2，后肢麻痹；3，后肢和前肢麻痹；4，嚴(yán)重的全身麻痹(Lorentzen等，1995)。
EAE由識(shí)別MBP分子限定決定簇的T細(xì)胞引起。Lewis大鼠中的主MBP決定簇由包含MBP序列71-90的肽(后文稱(chēng)為p71-90肽)組成。
為了測(cè)試給予致腦炎的MBP p71-90肽和本發(fā)明的佐劑是否也可以抑制EAE的發(fā)生，在MBP接種當(dāng)天(第0天)和5天后(第5天)或MBP接種前第14天和第7天，皮下注射以100μl油醇或本發(fā)明的另一種免疫調(diào)節(jié)劑的石蠟油溶液乳化的p71-90肽或免疫調(diào)節(jié)劑的單獨(dú)的石蠟油溶液(沒(méi)有所述肽)來(lái)治療每組5-8只的Lewis大鼠。通過(guò)檢測(cè)發(fā)病率和疾病嚴(yán)重性評(píng)價(jià)p71-90/油醇或另一種免疫調(diào)節(jié)劑對(duì)EAE的治療作用。與對(duì)照治療相比用p71-90肽的石蠟油溶液或用沒(méi)有肽的免疫調(diào)節(jié)劑和石蠟油的最大麻痹程度下降，這表明諸如p71-90 MBP肽的相關(guān)肽的乳濁液和所述免疫調(diào)節(jié)劑能夠調(diào)節(jié)大鼠中的EAE。
實(shí)施例4.免疫調(diào)節(jié)劑作為佐劑治療AA的用途如以上實(shí)施例1所述，通過(guò)用含1mg滅活結(jié)核分枝桿菌的IFA溶液(Sigma；0.1ml的1mg/ml溶液)在尾根處接種7-9周齡雌性Lewis大鼠來(lái)誘發(fā)AA。以0-16評(píng)分對(duì)關(guān)節(jié)炎程度進(jìn)行評(píng)級(jí)。
為治療AA，在誘發(fā)AA后，用100μg重組hsp60(在Lewis大鼠佐劑關(guān)節(jié)炎中由T淋巴細(xì)胞識(shí)別的分枝桿菌表位(Van Eden等，1988))的PBS溶液、或其用100μl油醇或本發(fā)明另一種免疫調(diào)節(jié)劑的石蠟油溶液乳化的溶液、或用免疫調(diào)節(jié)劑的單獨(dú)的石蠟油溶液(無(wú)肽)，通過(guò)在AA誘發(fā)當(dāng)天(第0天)和7天后(第7天)或第-14天和第-7天皮下注射，治療每組5-8只7-9周齡的雌性Lewis大鼠。如實(shí)施例1所述評(píng)價(jià)對(duì)關(guān)節(jié)炎的治療作用。
實(shí)施例5免疫調(diào)節(jié)劑治療I型糖尿病的用途在NOD糖尿病小鼠模型中，胰臟中產(chǎn)生胰島素的β細(xì)胞的自身免疫破壞是由T淋巴細(xì)胞介導(dǎo)的。5-8周齡胰島周?chē)l(fā)生炎癥性浸潤(rùn)，到14-20周齡導(dǎo)致胰島素缺乏的β細(xì)胞損傷和外顯糖尿病都已顯現(xiàn)出來(lái)，到了35-40周齡則幾乎100％的雌性NOD小鼠都受到影響。
可用油醇或本發(fā)明的另一種免疫調(diào)節(jié)劑配制的60kDa hsp肽p277或其類(lèi)似物p277(Val6-Val11)(如WO 97/20016所述)進(jìn)行治療，但下文描述的是p277(Val6-Val11)的油醇溶液。
用100μg p277(Val6-Val11)的0.1ml PBS溶液或油醇脂質(zhì)乳濁液治療NOD雌性小鼠。6月齡時(shí)檢查糖尿病發(fā)病率和抗p277(Val6-Val11)抗體的產(chǎn)生率。糖尿病診斷依據(jù)是持續(xù)高葡萄糖血癥，間隔一周至少二次用Beckman Glucose Analyser II測(cè)得血糖水平超過(guò)11mmol/L。成功的肽治療如下評(píng)價(jià)維持正常血糖濃度(低于11mmol/L)，減輕胰島島內(nèi)炎癥(胰島炎)和誘導(dǎo)作為T(mén)H2型免疫反應(yīng)指標(biāo)的針對(duì)治療肽的抗體。
用p277(Val6-Val11)肽治療對(duì)糖尿病的保護(hù)依賴(lài)于對(duì)該肽的TH2免疫反應(yīng)性。因此，以ELISA來(lái)測(cè)定p277(Val6-Val11)免疫小鼠中抗體的產(chǎn)生情況。用10μg/ml p277(Val6-Val11)肽包被Maxisorp微量滴定板(Nunc)18小時(shí)，用7％奶粉封閉非特異性結(jié)合2小時(shí)。小鼠血清以1∶50稀釋后結(jié)合2小時(shí)，特異性結(jié)合通過(guò)加入堿性磷酸酶抗小鼠IgG(Serotec)保溫2小時(shí)和對(duì)硝基苯磷酸鹽底物(Sigma)保溫30分鐘進(jìn)行檢測(cè)。用ELISA讀數(shù)儀(Anthos)檢測(cè)OD＝405nm的光密度值。NOD小鼠用p277(Val6-Val11)的PBS溶液免疫后根本未表現(xiàn)處抗體反應(yīng)，而p277(Val6-Val11)的油醇溶液免疫后小鼠產(chǎn)生肽特異性抗體，提示治療效應(yīng)可能源自自身免疫性T細(xì)胞產(chǎn)生的主導(dǎo)性細(xì)胞因子的轉(zhuǎn)換。
如前所述，TH1細(xì)胞分泌誘導(dǎo)T細(xì)胞增殖的IL-2和介導(dǎo)組織炎癥的細(xì)胞因子(如IFN-γ)；而TH2細(xì)胞分泌IL-4，“協(xié)助”B細(xì)胞產(chǎn)生某些抗體同種型，主要是IgG1和IgG2b，而TH2細(xì)胞分泌的IL-10和其它細(xì)胞因子(例如IL-5)則“抑制”組織炎癥。
從TH1型反應(yīng)向TH2型反應(yīng)轉(zhuǎn)換的可能性得到了p277(Val6-Val11)治療后產(chǎn)生的抗體同種型分析的支持。如上所述用油中的p277(Val6-Val11)或PBS治療各組的3月齡NOD小鼠。治療后分析各只小鼠血清針對(duì)p277(Val6-Val11)的抗體同種型(每組12-15只小鼠)。使用采用同種型特異性顯影抗體試劑(Southern Biotechnology Associates，Birmingham，AL)的ELISA測(cè)定法對(duì)抗體同種型進(jìn)行檢測(cè)。治療后產(chǎn)生的抗p277抗體的抗體同種型分析表明它們無(wú)一例外屬I(mǎi)gG1和IgG2b類(lèi)，它們依賴(lài)于產(chǎn)生IL-4的TH2 T細(xì)胞，這證實(shí)了用所述免疫調(diào)節(jié)劑治療誘導(dǎo)TH1向TH2轉(zhuǎn)換。p277(Val6-Val11)治療不應(yīng)產(chǎn)生TH1型IgG2a抗體。產(chǎn)生針對(duì)治療所用特異性肽的抗體是一種信號(hào)，表明自身免疫T細(xì)胞反應(yīng)已經(jīng)從破壞性TH1炎癥模式轉(zhuǎn)向產(chǎn)生無(wú)害抗體以及抑制炎癥和組織損傷的TH2 T細(xì)胞反應(yīng)。
為證實(shí)細(xì)胞因子轉(zhuǎn)換事件，分析了p277(Val6-Val11)-油醇治療小鼠和對(duì)照小鼠中對(duì)p277(Val6-Val11)反應(yīng)活性的T細(xì)胞所產(chǎn)生的細(xì)胞因子。伴刀豆球蛋白A(ConA)是一種T細(xì)胞分裂原，用其刺激整個(gè)脾T細(xì)胞作為對(duì)照。
用p277(Val6-Val11)的油醇溶液或PBS的油醇溶液治療3月齡10只一組的NOD小鼠。5周后，取下各小鼠的脾，將脾細(xì)胞混合在一起。將脾細(xì)胞與ConA或p277(Val6-Val11)共溫育24小時(shí)(分泌IL-2和IL-4)或48小時(shí)(分泌IL-10和IFN-γ)。按照Pharmingen細(xì)胞因子ELISA方法采用Pharmingen成對(duì)抗體以ELISA計(jì)量培養(yǎng)上清中存在的細(xì)胞因子。Pharmingen重組小鼠細(xì)胞因子作為標(biāo)準(zhǔn)制備標(biāo)準(zhǔn)曲線。簡(jiǎn)言之，平底96孔微量滴定板用大鼠抗小鼠細(xì)胞因子單抗(mAb)4℃包被18小時(shí)，加入培養(yǎng)上清或重組小鼠細(xì)胞因子，置于4℃達(dá)18小時(shí)。沖洗該板，加入生物素化大鼠抗小鼠細(xì)胞因子單抗，室溫45分鐘，然后充分沖洗，加入抗生物素蛋白-堿性磷酸酶。沖洗此板，加入顯色底物(對(duì)硝基苯磷酸酯)，用ELISA讀數(shù)板于405nm對(duì)樣品讀數(shù)。對(duì)照小鼠脾細(xì)胞在與p277(Val6-Val11)溫育時(shí)分泌IL-2和IFN-Y，但在p277(Val6-Val11)或ConA作用下產(chǎn)生非常少的IL-4或IL-10。在p277(Val6-Val11)-油醇治療小鼠中，在p277(Val6-Val11)作用下IL-10和IL-4產(chǎn)量顯著升高，同時(shí)IL-2和IFN-γ產(chǎn)量下降，這證實(shí)了從TH1向TH2的轉(zhuǎn)換。
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權(quán)利要求
1.一種用于治療T細(xì)胞介導(dǎo)性疾病的治療性制劑，其包含抗原和載體，其中所述抗原是與所述T細(xì)胞介導(dǎo)性疾病發(fā)病相關(guān)的炎性T細(xì)胞識(shí)別的抗原，而其中所述載體是選自以下的抗炎免疫調(diào)節(jié)劑(a)飽和或順式不飽和C10-C20脂肪醇或其與C1-C6鏈烷酸的酯；和(b)飽和或順式不飽和C10-C20脂肪酸酯，其選自脂肪酸的C1-C6烷基酯、脂肪酸與具有至少兩個(gè)羥基的C2-C6多元醇的單酯以及脂肪酸與甘油的二酯。
2.權(quán)利要求1的治療性制劑，其中所述載體是飽和C10-C20脂肪醇。
3.權(quán)利要求2的治療性制劑，其中所述飽和C10-C20脂肪醇選自癸醇、月桂醇、肉豆蔻醇、鯨蠟醇和硬脂醇。
4.權(quán)利要求1的治療性制劑，其中所述載體是順式不飽和C16-C18脂肪醇。
5.權(quán)利要求4的治療性制劑，其中所述順式不飽和C16-C18脂肪醇選自油醇、亞油醇、γ-亞麻仁醇和亞麻仁醇。
6.權(quán)利要求1的治療性制劑，其中所述載體是飽和或順式不飽和C10-C20脂肪醇與C1-C6鏈烷酸的酯。
7.權(quán)利要求1的治療性制劑，其中所述載體是飽和或順式不飽和C10-C20脂肪酸酯，其選自脂肪酸的C1-C6烷基酯、脂肪酸與具有至少兩個(gè)羥基的多元醇的單酯以及脂肪酸與甘油的二酯。
8.權(quán)利要求7的治療性制劑，其中所述脂肪酸為飽和C10-C20脂肪酸。
9.權(quán)利要求8的治療性制劑，其中所述飽和脂肪酸選自癸酸、月桂酸、肉豆蔻酸、棕櫚酸、硬脂酸和花生酸。
10.權(quán)利要求7的治療性制劑，其中所述脂肪酸為順式不飽和C10-C20脂肪酸。
11.權(quán)利要求10的治療性制劑，其中所述順式不飽和C10-C20脂肪酸選自棕櫚烯酸、油酸、順式-異油酸、亞油酸、γ-亞麻酸、亞麻酸和花生四烯酸。
12.權(quán)利要求11的治療性制劑，其中所述脂肪酸烷基酯為油酸甲酯或油酸乙酯。
13.權(quán)利要求7-12任一項(xiàng)的治療性制劑，其中所述脂肪酸酯是脂肪酸與多元醇的單酯，所述多元醇選自C2-C8鏈烷二醇、甘油和糖。
14.權(quán)利要求13的治療性制劑，其中所述鏈烷二醇選自1，2-乙二醇、1，3-丙二醇和1，4-丁二醇。
15.權(quán)利要求13的治療性制劑，其中所述脂肪酸與甘油的單酯為甘油一油酸酯。
16.權(quán)利要求13的治療性制劑，其中所述糖為單糖，選自核糖、果糖、葡萄糖、半乳糖和甘露糖。
17.權(quán)利要求16的治療性制劑，其中所述脂肪酸單酯為甘露糖一油酸酯。
18.權(quán)利要求7-12任一項(xiàng)的治療性制劑，其中所述脂肪酸酯為脂肪酸與甘油的二酯。
19.權(quán)利要求18的治療性制劑，其中所述甘油二酯為甘油二油酸酯。
20.一種引起個(gè)體的T細(xì)胞細(xì)胞因子反應(yīng)從TH1向TH2轉(zhuǎn)換的治療性制劑，其包含抗原和載體，其中所述抗原被與T細(xì)胞介導(dǎo)性疾病發(fā)病相關(guān)的炎性T細(xì)胞識(shí)別，而其中所述載體是選自以下的抗炎免疫調(diào)節(jié)劑(a)飽和或順式不飽和C10-C20脂肪醇或其與C1-C6鏈烷酸的酯；和(b)飽和或順式不飽和C10-C20脂肪酸酯，其選自脂肪酸的C1-C6烷基酯、脂肪酸與具有至少兩個(gè)羥基的C2-C6多元醇的單酯以及脂肪酸與甘油的二酯。
21.權(quán)利要求20的治療性制劑，其中所述載體同權(quán)利要求2-19任一項(xiàng)的定義。
22.權(quán)利要求20或21的治療性制劑，其引起IL-2或IFN-γT細(xì)胞細(xì)胞因子反應(yīng)降低，而IL-4或IL-10 T細(xì)胞細(xì)胞因子反應(yīng)增強(qiáng)。
23.權(quán)利要求1-22任一項(xiàng)的治療性制劑，其中所述T細(xì)胞介導(dǎo)性疾病為自身免疫病，而所述抗原為肽。
24.權(quán)利要求23的治療性制劑，其中所述自身免疫病是一種器官特異性自身免疫病。
25.權(quán)利要求24的治療性制劑，其中所述器官特異性自身免疫病選自I型糖尿病、多發(fā)性硬化、類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和自身免疫性甲狀腺炎。
26.權(quán)利要求25的治療性制劑，其用于治療多發(fā)性硬化，其包含由髓鞘堿性蛋白(MBP)序列衍生的肽或其類(lèi)似物，所述肽或其類(lèi)似物被參與多發(fā)性硬化發(fā)病的T細(xì)胞識(shí)別。
27.一種載體和一種抗原一起用于生產(chǎn)治療T細(xì)胞介導(dǎo)性疾病的治療性制劑的用途，其中所述載體為選自以下的抗炎免疫調(diào)節(jié)劑(a)飽和或順式不飽和C10-C20脂肪醇或其與C1-C6鏈烷酸的酯；和(b)飽和或順式不飽和C10-C20脂肪酸酯，其選自脂肪酸的C1-C6烷基酯、脂肪酸與具有至少兩個(gè)羥基的C2-C6多元醇的單酯以及脂肪酸與甘油的二酯，而其中所述抗原被與所述T細(xì)胞介導(dǎo)性疾病發(fā)病相關(guān)的炎性T細(xì)胞識(shí)別。
28.權(quán)利要求27的用途，其中所述載體同權(quán)利要求2-19的任一項(xiàng)的定義。
29.用于治療罹患T細(xì)胞介導(dǎo)性疾病的患者的方法，該方法包括給予所述患者一種治療性制劑，其含有被與所述T細(xì)胞介導(dǎo)性疾病發(fā)病相關(guān)的炎性T細(xì)胞識(shí)別的抗原和由選自以下的抗炎免疫調(diào)節(jié)劑組成的載體(a)飽和或順式不飽和C10-C20脂肪醇或其與C1-C6鏈烷酸的酯；和(b)飽和或順式不飽和C10-C20脂肪酸酯，其選自脂肪酸的C1-C6烷基酯、脂肪酸與具有至少兩個(gè)羥基的C2-C6多元醇的單酯以及脂肪酸與甘油的二酯。
30.權(quán)利要求29的方法，其中所述載體同權(quán)利要求2-19任一項(xiàng)的定義。
全文摘要
本發(fā)明提供用于治療T細(xì)胞介導(dǎo)性疾病的治療性制劑，其包含抗原和載體，其中所述抗原被與所述T細(xì)胞介導(dǎo)性疾病發(fā)病相關(guān)的炎性T細(xì)胞識(shí)別，而其中所述載體為選自以下的抗炎免疫調(diào)節(jié)劑(a)飽和或順式不飽和C
文檔編號(hào)A61P19/00GK1514736SQ02811488
公開(kāi)日2004年7月21日 申請(qǐng)日期2002年4月11日 優(yōu)先權(quán)日2001年4月11日
發(fā)明者I·R·科亨, M·欽茨奇, R·馬加利特, I R 科亨, 永 , 鈉 申請(qǐng)人:耶達(dá)研究及發(fā)展有限公司