專利名稱：聚乙二醇-干擾素水溶液的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種穩(wěn)定的聚乙二醇—干擾素α(PEG-IFNα)水溶液制劑，不含表面活性劑和人血提取成分。這種制劑保持了聚乙二醇—干擾素的生物學活性和穩(wěn)定性。
背景技術(shù)：
干擾素是由細胞分泌的一類誘生性蛋白質(zhì)，具有廣譜的抗病毒、抗腫瘤和免疫調(diào)節(jié)功能，是目前公認的最為有效的抗病毒藥物之一，在國內(nèi)外已廣泛用于治療多種病毒性、腫瘤性疾病。但干擾素結(jié)構(gòu)不穩(wěn)定，長期使用易產(chǎn)生抗體；相對分子質(zhì)量小，在體內(nèi)易經(jīng)腎小球濾過排泄，導致體內(nèi)循環(huán)半衰期短。利用一些無毒且水溶性好的免疫惰性大分子聚合物(如聚乙二醇)對其進行修飾，可以表現(xiàn)出更大的臨床效力，其優(yōu)點主要表現(xiàn)為在體外有較好的物理及熱穩(wěn)定性，抗酶解能力提高，可溶性增加；在體內(nèi)循環(huán)半衰期明顯延長，免疫原性下降，生物利用度提高等。
目前國內(nèi)外市場銷售的干擾素劑型主要是粉針劑，使用時需要加入注射用水，給臨床使用帶來一些不便，更重要的是粉針劑的制造成本較高，價格昂貴，限制了干擾素的進一步推廣。水針劑型取代凍干劑型是生物制品的發(fā)展趨勢，許多醫(yī)藥公司都積極將細胞因子類蛋白質(zhì)藥物制成水針劑型，如G-CSF、EPO、胰島素等。對于干擾素，由于水針劑型無需溶解，可以直接使用，相對于凍干劑型，水針劑劑量更容易控制，使用更加方便，而且制造費用明顯降低，易于患者接受。研制開發(fā)干擾素水針劑型無疑具有重要意義。
干擾素溶液的生產(chǎn)存在一些問題，主要是由于其有效成分對某些物理和化學因素的敏感性引起的，而且至今尚未得到滿意的解決。與其它蛋白質(zhì)相似，水溶液中的干擾素受到化學降解機理的作用如蛋白酶解、氧化、二硫化物交換、寡聚、脫酰胺作用和β-消去，以及物理機理的作用如聚集、沉淀和吸附等等。因此，通常的干擾素制劑都含有用來抵消這些作用的添加劑。目前，已有干擾素水針劑產(chǎn)品上市，其中含有人血清白蛋白(HSA)作為穩(wěn)定劑。但是，該產(chǎn)品的生產(chǎn)工藝復雜，同時又存在病毒污染的危險，易形成聚集體而產(chǎn)生抗體。
中國專利申請CN96100545.9公開了一種干擾素溶液，其中采用吐溫20和80作為穩(wěn)定劑。
本申請人經(jīng)過長時間的研究和探討，出乎意料的發(fā)現(xiàn)了在pH6.8-7.5下穩(wěn)定的聚乙二醇—干擾素水溶液，而該溶液不需要采用表面活性劑和人血清白蛋白(HSA)作為穩(wěn)定劑。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的一個目的是提供一種穩(wěn)定的聚乙二醇—干擾素水溶液制劑。
本發(fā)明的其他目的，體現(xiàn)在本文對本發(fā)明的詳細描述中。
本發(fā)明涉及一種聚乙二醇—干擾素溶液制劑，含有(a)一種聚乙二醇—干擾素α溶液；(b)一種穩(wěn)定劑；(c)一種調(diào)節(jié)pH在6.8-7.5的緩沖液；(d)一種抑菌劑；(e)一種等滲劑。
本發(fā)明中所用的干擾素，可使用任何干擾素α，例如，歐洲專利No.43980中公開的干擾素α(其中稱為成熟人白細胞干擾素A，也參見J.Pharm.Biomed，Analysis Vol.7，No.2，233-238(1989)).
本發(fā)明中采用的干擾素α結(jié)合到聚合物上，例如聚亞烷基二醇(取代的或未取代的)如聚乙二醇上，形成聚乙二醇—干擾素α(PEG-干擾素α)。可用本技術(shù)領(lǐng)域中已知的各種接頭完成這種結(jié)合，如歐洲專利申請EP-A-0510356和A-0593868中公開的那些接頭。聚乙二醇的分子量可在300至45000道爾頓之間變化，一種或多種接頭、優(yōu)選一至三種接頭結(jié)合到干擾素α上。雖然本發(fā)明并不限于特定的聚乙二醇—干擾素α，優(yōu)選與干擾素α化學結(jié)合的聚乙二醇的平均分子量是40000，其中所述的優(yōu)選的聚乙二醇—干擾素α分子是單一聚乙二醇分子與單一干擾素α分子化學結(jié)合的分子。
用于本發(fā)明的優(yōu)選干擾素α是聚乙二醇—干擾素α2a或聚乙二醇—干擾素α2b。按照本發(fā)明，每毫升聚乙二醇—干擾素溶液制劑含有106-108IU、特別是1-18×106(IU)的聚乙二醇—干擾素α。
按照本發(fā)明，制劑中使用的穩(wěn)定劑為氨基酸，如甘氨酸，和/或葡萄糖，優(yōu)選甘氨酸和葡萄糖的組合。本發(fā)明溶液中穩(wěn)定劑的含量約為5-50mg/ml，優(yōu)選約為5-30mg/ml；當穩(wěn)定劑為甘氨酸和葡萄糖的組合時，甘氨酸和葡萄糖的比例范圍約為1.5-2.5∶1，優(yōu)選1.8-2∶1。
緩沖液可以是常用的緩沖液，優(yōu)選的緩沖液是磷酸鹽緩沖液，該緩沖液的適宜濃度約為10-20mmol/L，優(yōu)選濃度為10mmol/L；該聚乙二醇—干擾素溶液的pH為6.8-7.5，優(yōu)選pH為pH7.0-7.5，更優(yōu)選pH為pH7.0-7.4，最優(yōu)選pH為7.2。
本發(fā)明溶液中的抑菌劑為常用抑菌劑，如苯甲醇，含量約為5-20mg/ml，最佳為10mg/ml。等滲劑為常用等滲劑，如氯化鈉、甘露糖醇、甘油和氨基酸，氯化鈉或甘露糖醇是優(yōu)選的。達到等滲所需的這些輔助劑的量取決于溶液的組成，并且可用本領(lǐng)域的常規(guī)技術(shù)確定。
本發(fā)明所述的聚乙二醇—干擾素溶液制劑，不用HSA作為保護劑，主要特點表現(xiàn)為1.用簡單的氨基酸類代替復雜的賦形劑，利于更準確地監(jiān)測產(chǎn)品的質(zhì)量；2.葡萄糖作為一種還原糖，與溶液中的殘留氧一起維持有利于保持聚乙二醇—干擾素活性的氧化—還原電位；3.在pH5-6下干擾素α在玻璃表面上的吸附最大，本發(fā)明優(yōu)選的緩沖液為pH7.0-7.5，具有與血漿pH接近的pH值。
用下列實施例進一步闡述本發(fā)明。
實施例1PEG-IFN溶液組分 每毫升的量a.PEG-IFNα-2b 1-18×106IUb.磷酸氫二鈉 9.8mgc.磷酸二氫鈉 3.8mgd.甘氨酸 15.0mge.葡萄糖 8.0mgf.苯甲醇 10.0mgg.氯化鈉 5.0mgh.注射用水 適量加至1.0ml制備方法按處方b-h稱料，用無菌無熱原注射水溶解，加入處方a半成品溶液使稀釋至規(guī)定濃度。除菌過濾用0.22μm孔徑濾膜除菌過濾，保存于8±2℃，取樣作無菌和熱原檢查合格后分裝于密閉容器中。分裝在百級潔凈區(qū)進行，分裝于西林瓶中，單劑量裝每瓶1.1ml。分裝后成品置2-10℃下暗處保存。
實施例2PEG-IFNα溶液組分 每毫升的量a.PEG-IFNα-2a 1-18×106IUb.磷酸氫二鈉 9.8mgc.磷酸二氫鈉 3.8mgd.甘氨酸 15.0mg
e.葡萄糖 8.0mgf.苯甲醇 10.0mgg.氯化鈉 5.0mgh.注射用水 適量加至1.0ml制備方法方法同實施例1。
為比較的目的，按照實施例1中給出的方法制備含3×106IUPEG-IFNα-2a(I/3)、6×106IU PEG-IFNα-2a(I/6)、9×106IU PEG-IFNα-2a(I/9)和18×106PEG-IFNα-2aIU(I/18)的各種PEG-IFNα-2a溶液以及不含葡萄糖的相應溶液(II/3-18)于4和25℃下貯藏于暗處，貯藏18個月后，測定PEG-IFNα-2a的生物學活性。
表1 葡萄糖對PEG-IFNα-2a溶液穩(wěn)定性的影響溶液 18個月后PEG-IFNα-2a生物學活性保留百分比(％)4℃25℃I/ 86.4 62.5I/6 84.3 60.2I/9 88.6 61.0I/1888.0 66.5II/370.2 30.2II/672.1 28.6II/974.0 32.8II/18 74.6 36.9實施例3按照本發(fā)明的配方，配制干擾素α溶液溶液A組分 每毫升的量a.IFNα-2a1-18×106IUb.磷酸氫二鈉 9.8mgc.磷酸二氫鈉 3.8mg
d.甘氨酸 15.0mge.葡萄糖 8.0mgf.苯甲醇 10.0mgg.氯化鈉 5.0mgh.注射用水適量加至1.0ml制備方法方法同實施例1。
溶液A采用3、6、9和18×106IU干擾素α-2a。于4和25℃下貯藏于暗處，貯藏3個月后，測定IFNα-2a的生物學活性，所得結(jié)果列于下表2中。
表2.干擾素α與聚乙二醇結(jié)合前后溶液穩(wěn)定性的比較溶液3個月后PEG-IFNα-2a生物學活性保留百分比(％)4℃ 25℃A/3 73.215.6A/6 72.314.2A/9 75.645.3A/18 85.648.6I/3 98.390.3I/6 98.990.9I/9 100 95.2I/18 100 96.8從這些數(shù)據(jù)清楚地看出，干擾素與聚乙二醇結(jié)合后，其水溶液的穩(wěn)定性明顯優(yōu)于單純的干擾素溶液。
實施例4不含HSA的聚乙二醇—干擾素溶液見中國專利CN1141808A，該專利中使用非離子洗滌劑。本發(fā)明的獨特之處在于選擇甘氨酸和葡萄糖作為穩(wěn)定劑，(I)最大程度降低對人體的危害；(II)便于最終產(chǎn)品的質(zhì)量控制；(III)葡萄糖作為一種還原糖，與溶液中的殘留氧一起維持有利于保持聚乙二醇—干擾素活性的氧化—還原電位。
溶液B組分每毫升的量
a.PEG-IFNα-2a 1-18×106IUb.乙酸銨 1.0mgc.氯化鈉 5.0mgd.苯甲醇 10.0mge.吐溫80 0.05mgf.乙酸達pH5.0±0.1 適量g.NaOH 0.1N達pH5.0±0.1適量h.注射用水 達1.0ml溶液B相當于上面專利中所述的溶液，采用3、6、9和18×106IU，于4和25℃下貯藏于暗處，貯藏18個月后，測定IFNα-2a的生物學活性，所得結(jié)果列于下表3中。
表3.PEG-IFNα溶液穩(wěn)定性的比較溶液3個月后PEG-IFNα-2a生物學活性保留百分比(％)4℃ 25℃B/3 83.260.6B/6 84.364.2B/9 87.665.3B/1890.568.6B/3689.768.2I/3 86.462.5I/6 84.360.2I/9 88.661.0I/1888.066.5I/3689.667.1從上表的數(shù)據(jù)清楚地看出，本發(fā)明與中國專利CN1141808A比較，聚乙二醇-干擾素溶液的穩(wěn)定性無顯著差異，都可達到可接受的貯藏穩(wěn)定性。
權(quán)利要求
1.一種聚乙二醇—干擾素水溶液制劑，含有(a)一種聚乙二醇—干擾素α溶液；(b)一種穩(wěn)定劑；(c)一種調(diào)節(jié)pH在6.8-7.5的緩沖液，優(yōu)選pH為7.0-7.5；(d)一種抑菌劑；(e)一種等滲劑。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的聚乙二醇—干擾素水溶液制劑，其中該穩(wěn)定劑為氨基酸，如甘氨酸和/或葡萄糖。
3.根據(jù)權(quán)利要求1的聚乙二醇—干擾素水溶液制劑，其中該聚乙二醇—干擾素α為聚乙二醇—干擾素α-2a或聚乙二醇—干擾素α-2b。
4.根據(jù)權(quán)利要求1的聚乙二醇—干擾素水溶液制劑，其中該緩沖液為磷酸鹽緩沖液。
5.根據(jù)權(quán)利要求1的聚乙二醇—干擾素水溶液制劑，其中該抑菌劑為苯甲醇。
6.根據(jù)權(quán)利要求1的聚乙二醇—干擾素水溶液制劑，其中該等滲劑為氯化鈉或甘露醇。
7.根據(jù)權(quán)利要求1-6之一的聚乙二醇—干擾素水溶液制劑，其中聚乙二醇—干擾素α的量為106-108IU/ml；穩(wěn)定劑的量約為5-30mg/ml；緩沖液濃度約為10-20mmol/l；抑菌劑的濃度約為5-20mg/ml。
8.一種根據(jù)權(quán)利要求1或7的聚乙二醇—干擾素水溶液制劑，含有(a)聚乙二醇—干擾素α-2a溶液或聚乙二醇—干擾素α-2b溶液；(b)甘氨酸和葡萄糖；(c)磷酸鹽緩沖液；(d)苯甲醇；(e)氯化鈉或甘露醇。
9.一種根據(jù)權(quán)利要求1的聚乙二醇—干擾素水溶液制劑，每ml含有(a)1-18×106IU的聚乙二醇—干擾素α-2a溶液；(b)15mg甘氨酸和8mg葡萄糖；(c)10mmol/l磷酸鹽緩沖液；(d)10mg苯甲醇；(e)用量足以提供一種等滲溶液的氯化鈉或甘露醇。
10.一種根據(jù)權(quán)利要求1的聚乙二醇—干擾素水溶液制劑，每ml含有(a)1-18×106IU的聚乙二醇—干擾素α-2b溶液；(b)15mg甘氨酸和8mg葡萄糖；(c)10mmol/l磷酸鹽緩沖液；(d)10mg苯甲醇；(e)用量足以提供一種等滲溶液的氯化鈉或甘露醇。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種穩(wěn)定的聚乙二醇—干擾素水溶液，不含表面活性劑和人血提取成分。該水溶液含有一種聚乙二醇—干擾素α溶液，一種穩(wěn)定劑，一種緩沖液，一種抑菌劑以及一種等滲劑，該溶液的pH為6.8－7.5。
文檔編號A61P31/12GK1511585SQ02158970
公開日2004年7月14日 申請日期2002年12月31日 優(yōu)先權(quán)日2002年12月31日
發(fā)明者盛軍, 劉麗軍, 張雪梅, 朱迅, 張春麗, 王志武, 郭橋, 郭立君, 程曉耕, 盛 軍 申請人:長春生物制品研究所