專利名稱：Ⅱ型膠原蛋白口服薄膜制劑的制作方法
國外研究資料表明服用雞骨來源的II型膠原蛋白(type IICollagen)用于治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(RA)安全、有效。通過有效的數(shù)據(jù)測試，包括紅腫、觸痛關(guān)節(jié)記數(shù)、握緊強(qiáng)度、50步行走時(shí)間、晨僵周期、疼痛程度的病理評價(jià)，在受試的患者完成3個(gè)月的治療程序后，有80％的患者降低了紅腫和觸痛關(guān)節(jié)計(jì)數(shù)，其下降比率為紅腫計(jì)數(shù)平均下降61％，觸痛關(guān)節(jié)計(jì)數(shù)平均下降54％，其它有效數(shù)據(jù)也發(fā)生明顯改變。在受試期間，沒有副作用發(fā)生。在嚴(yán)重的RA患者中，采用雙盲實(shí)驗(yàn)，60位患者服用3個(gè)月后，全部病人的關(guān)節(jié)腫脹和關(guān)節(jié)疼痛明顯減輕，臨床觀察未發(fā)現(xiàn)明顯的副作用。經(jīng)過對270多例的II期臨床研究，結(jié)果顯示其明顯的藥效作用和安全性。其800例患者III期臨床研究也顯示了明顯的藥效作用和安全性結(jié)果，有效率為83％。
近年來許多學(xué)者通過研究和臨床實(shí)踐，認(rèn)為RA是一種自身免疫性疾病，其免疫發(fā)病機(jī)制被普遍承認(rèn)。由于外來因素的作用，免疫系統(tǒng)的反應(yīng)導(dǎo)致異常免疫而形成類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎這類自身免疫性疾病，造成T細(xì)胞對自身組織抗原產(chǎn)生活性并攻擊、損傷健康組織和器官。研究發(fā)現(xiàn)，在RA病灶區(qū)，II型膠原蛋白明顯減少，而通過口服與攻擊組織相關(guān)的某種特異性蛋白(如II型膠原蛋白)，能使體內(nèi)對II型膠原蛋白的異常反應(yīng)恢復(fù)到認(rèn)同，從而起到治療RA的作用。雞II型膠原蛋白的有效性和安全性已被動物實(shí)驗(yàn)和臨床研究證實(shí)。
本專利中使用的雞II型膠原蛋白制備工藝為，將清洗后的雞軟骨攪碎勻漿、酶解、透析、層析純化，得到的雞II型膠原蛋白純度達(dá)98％。
由于II型膠原蛋白的特性且治療劑量每次僅需口服60至100多微克，研制其滿意的制劑是個(gè)難題，以往研制的凍干粉劑、膠囊、片劑均不令人滿意。雖然II型膠原蛋白在水中有相當(dāng)程度的溶解度，但不穩(wěn)定，故不宜制成水溶液制劑。凍干粉劑雖然保持了原料藥的原狀，其不足是患者服用不便，且生產(chǎn)成本高。膠囊和片劑雖便于病人服用，但由于輔料量大，且其中須有固體才能制備，而II型膠原蛋白在制劑中僅占千分之一左右甚至更少，因此不但存在生產(chǎn)中與輔料混勻困難的問題，也不利于質(zhì)量控制中的II型膠原蛋白含量測定。顆粒劑比膠囊和片劑的缺點(diǎn)還嚴(yán)重，如用大量輔料則更難混勻，如按膠囊和片劑的輔料量生產(chǎn)則包裝困難。
迄今II型膠原蛋白的制劑大多為膠囊，但有關(guān)研制者們忽視了一個(gè)重要的問題，那就是該制劑的膠囊外殼本身的藥效作用。因?yàn)橹谱隹招哪z囊的主要原料是明膠，也就是膠原蛋白(Collagen)，其中含大量II型膠原蛋白或類似物。雖然膠囊外殼的質(zhì)量只占很少部分，但主藥在一粒膠囊中只有100微克左右，膠囊外殼的問題就突出了。基于以上原因，II型膠原蛋白膠囊在臨床試驗(yàn)所顯示的藥效作用不僅來自II型膠原蛋白，還來自膠囊外殼，因此，以此來評價(jià)II型膠原蛋白的作用是不可靠的。美國的Autoimmune公司在II型膠原蛋白膠囊的臨床試驗(yàn)中，安慰劑也顯示了治療作用，造成該項(xiàng)研究相當(dāng)嚴(yán)重的損失，是很好的教訓(xùn)。因此，膠囊劑型對II型膠原蛋白尤其不適合。
為了解決以上各種不足和缺陷，本發(fā)明針對II型膠原蛋白制劑的特殊性研制了口服薄膜制劑。其創(chuàng)新在于，將II型膠原蛋白與輔料制備成溶液，主藥與輔料的混合完全處于液體狀態(tài)，然后制成膜劑。本發(fā)明具有以下優(yōu)點(diǎn)(1)II型膠原蛋白與輔料的混合完全在溶液中進(jìn)行，均勻度極好，利于生產(chǎn)達(dá)到高質(zhì)量穩(wěn)定；(2)制劑的輔料少，且全部能溶于水，而制劑中II型膠原蛋白的含量達(dá)0.8％，利于質(zhì)量控制；(3)避免了其膠囊制劑在臨床試驗(yàn)和臨床使用中膠囊外殼的治療作用，使臨床試驗(yàn)和臨床使用對II型膠原蛋白的評價(jià)可靠；(4)生產(chǎn)工藝簡便、設(shè)備較簡單，生產(chǎn)成本低；(5)服用和攜帶方便，有利于患者使用。
藥效學(xué)研究表明，雞II型膠原蛋白給藥后對角叉菜膠致大鼠足跖腫脹、大鼠棉球肉芽腫有極顯著抑制作用，對大鼠佐劑關(guān)節(jié)炎有顯著的預(yù)防和治療作用。實(shí)例說明1.雞II型膠原蛋白的提取工藝取冷凍雞軟骨解凍，去除軟骨上附著的結(jié)帶組織和肌肉組織，用蒸餾水沖洗后，加入2MgCl2的0.05M Tris-HCl(pH7.5)溶液，搗碎勻漿，于4℃攪拌24小時(shí)。離心取沉淀，混勻懸浮在含有2mg/ml胃蛋白酶的0.2M醋酸溶液中，4℃攪拌60小時(shí)，離心取上清液，調(diào)pH中性，加入固體NaCl至終濃度20％，離心取沉淀，溶于0.2M醋酸溶液，加入固體NaCl至終濃度10％，離心取沉淀，溶于0.2％醋酸溶液。樣品在0.02M Na2HPO4溶液(pH8)中透析后，上DEAE纖維層析柱，用0.2M NaCl溶液(Tris，pH7.5)洗脫，將洗脫液透析后，離心取沉淀，繼而用蒸餾水在4℃透析后，將樣品真空冷凍干燥，得雞II型膠原蛋白，其純度達(dá)98％。2.雞II型膠原蛋白薄膜的制備取聚乙烯醇3g、甘油1ml和適量注射用水，混合攪拌膨脹后，于90℃水浴上加熱使溶解，趁熱過80目篩，得無色透明液體，流通蒸氣100℃滅菌30分鐘，冷卻至適當(dāng)溫度。無菌操作，將潔凈的雞II型膠原蛋白24mg(按純品計(jì)算)在溶液狀態(tài)下與上液等溫混勻，加注射用水至50ml，保溫50℃左右，在涂有少量液狀石蠟的平板玻璃上制成24000平方毫米的膜，在超凈臺上吹干，紫外線照射正、反面各10分鐘，切割成100平方毫米的小片，每片含II型膠原蛋白100微克。3.雞II型膠原蛋白對動物模型的藥效雞II型膠原蛋白灌胃給藥0.12、0.03、0.01mg/kg/day均能明顯抑制大鼠角叉菜引起的足跖腫脹，均能極顯著抑制大鼠慢性棉球肉芽腫組織增生，對誘導(dǎo)大鼠佐劑關(guān)節(jié)炎產(chǎn)生明顯的免疫口服耐受。
權(quán)利要求
1.將II型膠原蛋白與聚乙烯醇、甘油、水在溶液狀態(tài)下混勻后，涂膜制成的II型膠原蛋白口服薄膜制劑。
2.權(quán)利要求1中的配方為II型膠原蛋白120mg，聚乙烯醇15g，甘油5ml，注射用水加至250ml。
3.權(quán)利要求2中的成分比例可改變適用，例如改變II型膠原蛋白、注射用水的用量等。
4.權(quán)利要求1中的劑型可改變物理性狀適用，例如制成細(xì)棒、顆粒或改變其硬度等。
5.權(quán)利要求2中的聚乙烯醇用羥丙纖維素、羥丙甲纖維素、羧甲基纖維素等類似性質(zhì)的輔料混合、代替或混合代替同樣適用。
6.權(quán)利要求2中的甘油用類似性質(zhì)的材料混合、代替或混合代替同樣適用。
7.權(quán)利要求2中的注射用水可用其它純凈水代替，例如蒸餾水等。
8.權(quán)利要求1中的II型膠原蛋白主要指雞軟骨來源的II型膠原蛋白，其它動物來源的II型膠原蛋白同樣適用。
9.權(quán)利要求1中的劑型具有治療和預(yù)防類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎及其相關(guān)癥狀的藥物作用和價(jià)值。
全文摘要
II型膠原蛋白是治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的安全、有效的藥物。由于其特殊性，研制滿意的制劑相當(dāng)困難，其以往劑型均存在缺陷。本發(fā)明將II型膠原蛋白制成口服薄膜制劑，解決了該藥物其它劑型的不足之處，使該藥物的臨床治療效果可靠，生產(chǎn)質(zhì)量穩(wěn)定。
文檔編號A61P19/00GK1435256SQ0214899
公開日2003年8月13日 申請日期2002年11月18日 優(yōu)先權(quán)日2002年11月18日
發(fā)明者徐起初 申請人:徐起初