專利名稱：匹伏阿德福韋的晶型的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及9-[2-[[雙(新戊酰氧基)甲氧基]氧膦基]甲氧基]乙基]腺嘌呤的晶型E。9-[2-[[雙(新戊酰氧基)甲氧基]氧膦基]甲氧基]乙基]腺嘌呤通用名為匹伏阿德福韋(Adefovir dipivoxil，簡稱AD)。另外，本發(fā)明還涉及E型匹伏阿德福韋在治療病毒性肝炎等肝臟疾病中的應(yīng)用，含有E型匹伏阿德福韋的藥物組合物和制備E型匹伏阿德福韋的方法。
另外，專利CN1251592A提供的制備AD結(jié)晶的方法中使用了昂貴、易燃對人體有害的有機(jī)溶劑如正丁醚、乙酸異丙酯等。
本發(fā)明另一個目的是提供制備基本不含水及其它溶劑的E型匹伏阿德福韋的方法。
本發(fā)明另一個目的提供含有E型匹伏阿德福韋的藥物組合物。
另外，本發(fā)明還有一個目的是含有E型匹伏阿德福韋的組合物在治療病毒性肝炎等肝臟疾病中的應(yīng)用。
E型匹伏阿德福韋的特征本發(fā)明提供非溶劑化的E型匹伏阿德福韋，使用Cu-Ka輻射，其X-射線衍射圖見

圖1，以度表示的2θ在7.4、7.8、10.1、12.4、15.2、16.4、17.3、18.0、18.6、20.1、20.4、21.3、21.6、22.3、22.8、23.4、24.4、26.1、27.5、28.5、30.1有吸收峰。相對于專利CN1251592A報道的非溶劑化的晶型“形態(tài)1”，其典型的特征為，在15.2，16.4有吸收峰，而專利中“形態(tài)1”有吸收峰的12.7、15.7、20.7位置，本發(fā)明的E型匹伏阿德福韋無吸收峰。
本發(fā)明的E型匹伏阿德福韋的DSC圖譜見圖2，其吸熱轉(zhuǎn)變在約94℃，而專利中“形態(tài)1”的吸熱轉(zhuǎn)變在約102℃。
本發(fā)明的E型匹伏阿德福韋用KBr壓片測得的紅外吸收圖譜見圖3，其特征為在約3323cm-1、3166cm-1、1652cm-1、1592cm-1處有吸收峰。
E型匹伏阿德福韋的性質(zhì)及其藥效學(xué)研究一、溶解性參照中國藥典2000年版二部凡例進(jìn)行試驗，方法精密稱取E型匹伏阿德福韋適量，緩慢加入一定量的溶劑，每隔5分鐘強(qiáng)力振搖30秒，觀察30分鐘內(nèi)的溶解情況，結(jié)果見表1。
表1 匹伏阿德福韋溶解度試驗

E型匹伏阿德福韋極易溶于甲醇，易溶于無水乙醇，在0.1N HCl溶液中溶解，在水及0.1N NaOH溶液中難溶。二、穩(wěn)定性1、光照試驗將E型匹伏阿德福韋原料均勻分?jǐn)傊脸谂囵B(yǎng)皿中，厚度≤5mm，調(diào)節(jié)距離，使光照強(qiáng)度為4500±500Lx，分別于5，10天取樣檢測，并與0天的結(jié)果進(jìn)行對照。結(jié)果見表2。10天的x-射線衍射圖見圖4。
表2 光照試驗(4500±500lx)

注溫度變化23～26℃；相對濕度變化56％～63％2、高溫試驗將E型匹伏阿德福韋原料放置于密封潔凈玻璃瓶中，置于60℃恒溫干燥箱中，分別于5，10天取樣檢測，并與0天的結(jié)果進(jìn)行對照。結(jié)果見表3。10天的x-射線衍射圖見圖5。
表3 高溫試驗(60℃)

注相對濕度變化54％～62％3、高濕試驗將E型匹伏阿德福韋原料均勻分?jǐn)傊脸谂囵B(yǎng)皿中，厚度≤5mm，置于室溫(25℃左右)，相對濕度為75±5％的恒溫恒濕培養(yǎng)箱中，分別于5，10天取樣進(jìn)行測定，并與0天的結(jié)果進(jìn)行對照。結(jié)果見表4。10天的x-射線衍射圖見圖7。
表4 高濕試驗(室溫，相對濕度75±5％)

注溫度變化23～26℃4、加速試驗將E型匹伏阿德福韋原料用聚乙烯薄膜塑料袋密封包裝，置于40±2℃，相對濕度為75±5％的恒溫恒濕培養(yǎng)箱中，放置六個月，分別于1，2，3，6個月末取樣檢測，并與0月的結(jié)果進(jìn)行對照。結(jié)果見表5。6個月的X-射線衍射圖見圖7。
表5 加速試驗(40℃，相對濕度75％)

由上述結(jié)果可知，本發(fā)明得到的E型匹伏阿德福韋在光照試驗和高溫試驗中(60℃)，外觀和含量均無較大改變，說明其性質(zhì)穩(wěn)定；本品在高濕試驗中其外觀和含量均沒有明顯變化，但有一定吸濕性，其熔點降低。本品在高濕空氣中，易轉(zhuǎn)化為含結(jié)晶水的結(jié)晶。所以，為了防止本品與水結(jié)合，應(yīng)密封保存。除高濕條件外，沒有發(fā)現(xiàn)晶型的轉(zhuǎn)變，表明在干燥條件下，此結(jié)晶形態(tài)穩(wěn)定。三、藥效學(xué)研究E型匹伏阿德福韋能夠被制成一種有效治療動物，特別是人病毒性肝炎等肝臟疾病的制劑，對E型匹伏阿德福韋進(jìn)行藥效學(xué)研究，結(jié)果如下1、體外抗病毒試驗在乙型肝炎病毒基因轉(zhuǎn)染的人肝癌細(xì)胞系2.2.15細(xì)胞中，研究匹伏阿德福韋對細(xì)胞的毒性和對HBsAg、HBeAg及HBV DNA分泌的抑制效果。兩批試驗表明匹伏阿德福韋16.0μg/ml開始兩倍稀釋，加入細(xì)胞培養(yǎng)8天，對細(xì)胞半數(shù)中毒濃度TC50為20μg/ml，最大無毒濃度TC0為10μg/ml。最大無毒濃度時對HBsAg分泌的抑制率為15.3±6.9％；對細(xì)胞HBeAg分泌無抑制作用，對HBV DNA的抑制率為59.3％，抑制HBV DNA的IC50為6.1μg/ml。
2、體內(nèi)抗病毒試驗在鴨乙型肝炎病毒感染鴨體內(nèi)進(jìn)行治療試驗，觀察藥效。試驗結(jié)果表明鴨乙型肝炎病毒感染鴨在感染后第7天口服匹伏阿德福韋，30mg/Kg組一天2次，10天給藥后對鴨血清DHBV-DNA水平的抑制效果顯著，三批試驗統(tǒng)計學(xué)處理結(jié)果都有非常顯著作用(P＜0.01)。15mg/Kg組給藥后第10天對感染鴨血清DHBV-DNA水平也有顯著抑制效果，統(tǒng)計學(xué)處理兩批(P＜0.05)，一批(P＜0.01)。但停藥3天抑制％與對照組對比，僅1批效果顯著(P＜0.01)。7.5mg/Kg組一天2次10天對感染鴨血清DHBV-DNA效果不穩(wěn)定。試驗說明有效劑量在15-30mg/Kg 1天2次10天組。30mg/Kg口服1天2次10天未見毒付反應(yīng)。
E型匹伏阿德福韋的制備方法據(jù)文獻(xiàn)1、2、3報道，制備匹伏阿德福韋的方法主要有兩種，一種為在N，N-二甲基甲酰胺中，加入9-(2-膦酰甲氧乙基)-腺嘌呤(PMEA)與新戊酸氯甲酯，用N，N-二環(huán)己基-4-嗎啉作縮合劑，三乙胺作催化劑，反應(yīng)制得。另一種為在1-甲基-2-吡咯烷酮中，加入9-(2-膦酰甲氧乙基)-腺嘌呤與新戊酸氯甲酯，三乙胺作縮合劑，反應(yīng)制得。為了提高產(chǎn)物的純度，本發(fā)明對9-(2-膦酰甲氧乙基)-腺嘌呤進(jìn)行了純化。本發(fā)明對這兩種方法的后處理進(jìn)行優(yōu)化改進(jìn)，減低了成本，提高了收率，避免了使用對人體有害的有機(jī)溶劑正丁醚、乙酸異丙酯等，并且獲得了新晶型E型匹伏阿德福韋，使本發(fā)明更適宜于工業(yè)化生產(chǎn)。
方法一根據(jù)文獻(xiàn)1、2報道的方法，先制得9-(2-膦酰甲氧乙基)-腺嘌呤，然后用N，N-二甲基甲酰胺作溶劑，N，N-二環(huán)己基-4-嗎啉作縮合劑，三乙胺作催化劑，使9-(2-膦酰甲氧乙基)-腺嘌呤與新戊酸氯甲酯反應(yīng)，反應(yīng)完全后，用甲苯提取產(chǎn)物，然后濃縮甲苯，得到含有AD的油狀物。本發(fā)明采用向含有AD的油狀物中加入適量水或向油狀物中加入一定量的有機(jī)溶劑，攪拌使油狀物溶解在溶劑中，然后加入水，攪拌至有大量白色固體析出，過濾，將濾餅溶于甲醇中，加無水硫酸鎂干燥后，減壓蒸干，即得E型匹伏阿德福韋。用HPLC法檢測，純度達(dá)98.0％以上。
其中，加入的水量為PMEA投入量的1～30倍(包括以下提到的加入的量均以重量計)，以使析出的固體容易攪拌。向油狀物中加入的有機(jī)溶劑對匹伏阿德福韋有較好的溶解性，如甲醇、乙醇、丙酮等，加入有機(jī)溶劑的量一般為PMEA量的0.5～5倍，加入水的量一般為加入水量的5～20倍。干燥劑為無水硫酸鎂或無水硫酸鈉等能夠干燥甲醇中水分并且不與匹伏阿德福韋反應(yīng)的固體干燥劑，或分子篩。其加入的量以能夠?qū)⒓状贾兴滞耆稍餅闇?zhǔn)，一般為PMEA量的2～10倍。減壓的真空度一般為-0.1MPa，也可以較低，均可達(dá)到很好的制備效果。蒸干時的外浴溫度一般為30～60℃。甲醇溶劑的量一般為PMEA的1～10倍，使濾出固體溶解并便于操作即可。
方法二用1-甲基-2-吡咯烷酮作溶劑，三乙胺作縮合劑，使9-(2-膦酰甲氧乙基)-腺嘌呤與新戊酸氯甲酯反應(yīng)，反應(yīng)完全后，加入乙酸乙酯，用水洗滌，濃縮乙酸乙酯，得到含有AD的油狀物。由油狀物制得E型匹伏阿德福韋的方法同方法一。純度達(dá)98.0％以上。
本發(fā)明的制劑包含E型匹伏阿德福韋和一種或多種藥用賦形劑的組合物，視需要，還可含其它治療成分。其賦形劑包括粘合劑、稀釋劑、崩解劑、防腐劑、分散劑、助流劑和潤滑劑等。本發(fā)明的制劑包括片劑和膠囊。這些組合物可以是含E型匹伏阿德福韋約5～250mg的片劑或膠囊。
其片劑可通過任選地與一種或多種賦形劑一起制粒壓模而成，視需要可以對片劑進(jìn)行包衣或壓花。膠囊也一樣可以與一種或多種賦形劑混合，由制?；虿恢屏Ｌ畛溆谀z囊殼制得。
圖2是本發(fā)明E型匹伏阿德福韋差示掃描量熱測定圖(DSC圖)。
圖3是本發(fā)明E型匹伏阿德福韋紅外吸收光譜圖。
圖4是本發(fā)明E型匹伏阿德福韋強(qiáng)光照射10天的x-射線衍射圖。
圖5是本發(fā)明E型匹伏阿德福韋60℃考察10天的x-射線衍射圖。
圖6是本發(fā)明E型匹伏阿德福韋高濕考察10天的x-射線衍射圖。
圖7是本發(fā)明E型匹伏阿德福韋置40℃環(huán)境中考察6月的x-射線衍射圖。
實施例2匹伏阿德福韋晶形E的制備在10L反應(yīng)鍋中，將純化的9-(2-膦酰甲氧乙基)-腺嘌呤0.5Kg(1.8mol)懸浮于5L N，N-二甲基甲酰胺中，攪拌，加入1.044KgN，N-二環(huán)己基-4-嗎啉、三乙胺100ml及1.382Kg(9.2mol)新戊酸氯甲酯，升溫至50℃，保溫攪拌3小時，濾去不溶物，濾液在真空度-0.1Mpa下減壓濃縮，濃縮液用甲苯提取(10L×2)。在真空度-0.1Mpa下減壓回收甲苯，向剩余的油狀液中加入純水5L，攪拌5小時，有大量白色固體析出，濾出，將其溶解在1.5L無水甲醇中，加無水硫酸鎂1.0Kg攪拌2小時，過濾，母液加入活性碳50g，于50℃脫色10min，外浴50℃，減壓蒸干得白色固體，50～70℃干燥8小時，即得匹伏阿德福韋結(jié)晶E 553g，收率58％，Mp.92～94℃，HPLC法測含量為98.6％。
實施例3匹伏阿德福韋晶形E的制備在10L反應(yīng)鍋中，將純化的9-(2-膦酰甲氧乙基)-腺嘌呤0.5Kg(1.8mol)懸浮于5L N，N-二甲基甲酰胺中，攪拌，加入1.044KgN，N-二環(huán)己基-4-嗎啉、三乙胺100ml及1.382Kg(9.2mol)新戊酸氯甲酯，升溫至50℃，保溫攪拌3小時，濾去不溶物，在真空度-0.1Mpa下減壓濃縮，濃縮液用甲苯提取(10L×2)。在真空度-0.1Mpa下減壓回收甲苯，向剩余油狀液中加入乙醇0.5L，攪拌使油狀物溶解，然后加入水4L，攪拌5小時，有大量白色固體析出，濾出，將其溶解在1.5L無水甲醇中，加無水硫酸鎂1.0Kg，干燥水分，過濾，母液加入活性碳50g，于50℃脫色10min，外浴60℃，在真空度-0.1Mpa下減壓蒸干得白色固體，50～70℃干燥8小時，即得匹伏阿德福韋結(jié)晶E 548g。收率57％，Mp.92～94℃，HPLC法測含量為99.3％。
實施例4匹伏阿德福韋晶形E的制備在10L反應(yīng)鍋中，將純化的9-(2-膦酰甲氧乙基)-腺嘌呤0.5Kg(1.8mol)加入1-甲基-2-吡洛烷酮中，氮?dú)獗Ｗo(hù)，然后加入三乙胺0.927Kg(9mol)，攪拌下加入新戊酸氯甲酯1.377Kg(1.296mol)，升溫至60℃，反應(yīng)2小時，加入6.8L乙酸乙酯終止反應(yīng)，攪拌半小時，過濾，母液用水洗滌(5L×2)，在真空度-0.1Mpa下減壓回收乙酸乙酯，向剩余的油狀液中加入純水5L，攪拌4小時，有大量白色固體析出，濾出固體，溶解于1.5L無水甲醇中，加無水硫酸鎂1.0Kg，干燥2小時，過濾，母液加入活性碳50g，于50℃脫色10min，外浴50℃，在真空度-0.1Mpa下減壓蒸干得白色固體，50～70℃干燥8小時，得匹伏阿德福韋結(jié)晶E 534g。收率56％。Mp.92～94℃。
實施例5片劑的制備按下述方法用幾種賦形劑將E型匹伏阿德福韋配制成每片含10mg的片劑。

含E型匹伏阿德福韋的片劑的制造方法是將上述賦形劑與E型匹伏阿德福韋混合均勻，加入1％羥甲基纖維素鈉溶液適量，制成軟材，過篩制粒，濕顆粒烘干，過篩整粒，加入硬脂酸鎂和滑石粉混合均勻，壓片。
實施例6
膠囊的制備按下述方法用幾種賦形劑將E型匹伏阿德福韋配制成每粒含10mg的膠囊。

含E型匹伏阿德福韋的膠囊的制造方法是將上述賦形劑與E型匹伏阿德福韋混合均勻，加入1％羥甲基纖維素鈉，制成濕顆粒，烘干，過篩整粒，加入硬脂酸鎂，混合均勻，插入膠囊制得?；虿恢屏?，將E型匹伏阿德福韋與上述賦形劑混合均勻，過篩，直接插囊制得。
參考文獻(xiàn)1、劉曉輝，王琳，貫寶和等藥學(xué)學(xué)報1996；31(2)112～117；2、張勇，李欣，宮平等沈陽藥科大學(xué)學(xué)報2001；18(2)95～973、中國專利，公開號CN1251592A
權(quán)利要求
1.一種匹伏阿德福韋的晶型，其特征在于所述晶狀匹伏阿德福韋為不含水及其它結(jié)晶化溶劑的結(jié)晶，稱之為晶型E。
2.如權(quán)利要求1所述的晶型，其特征在于，其使用Cu-Ka輻射、以度2θ表示的X-射線粉末衍射光譜在約15.2及16.4有峰。
3.如權(quán)利要求1所述的晶型，其特征在于，其DSC吸熱轉(zhuǎn)變在約94℃。
4.如權(quán)利要求1所述的晶型，其特征在于，紅外吸收圖譜約在3323cm-1、3166cm-1、1652cm-1、1592cm-1處有吸收峰。
5.一種匹伏阿德福韋晶型的制備方法，其特征在于向含匹伏阿德福韋的油狀物中，加入水，攪拌使析出固體，回收固體，使溶于甲醇中，用干燥劑干燥后，減壓蒸干，制得匹伏阿德福韋晶型E。
6.一種匹伏阿德福韋晶型的制備方法，其特征在于向含匹伏阿德福韋的油狀物中，加入有機(jī)溶劑使油狀物溶解，再加入水，攪拌使析出固體，回收固體，使溶于甲醇中，用干燥劑干燥后，減壓蒸干，制得匹伏阿德福韋晶型E。
7.含有權(quán)利要求1-4任意一項所定義的匹伏阿德福韋晶型，并混有一種或多種藥用賦形劑的組合物。
8.如權(quán)利要求7所述的組合物，其特征在于含5～250mg匹伏阿德福韋晶型E的組合物制成片劑。
9.如權(quán)利要求7所述的組合物，其特征在于含5～250mg匹伏阿德福韋晶型E的組合物制成膠囊。
10.權(quán)利要求1-4任意一項所定義的匹伏阿德福韋晶型，作為活性成分在制備治療病毒性肝炎疾病藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明涉及9－[2－[[雙(新戊酰氧基)甲氧基]氧膦基]甲氧基]乙基]腺嘌呤(Adefovir dipivoxil，匹伏阿德福韋)的晶型。另外，本發(fā)明還涉及匹伏阿德福韋晶型在治療病毒性肝炎等肝臟疾病中的應(yīng)用，含有匹伏阿德福韋晶型的藥物組合物和制備匹伏阿德福韋晶型的方法。
文檔編號A61P1/16GK1396170SQ0213790
公開日2003年2月12日 申請日期2002年7月8日 優(yōu)先權(quán)日2002年7月8日
發(fā)明者張喜全, 張愛明, 徐健 申請人:江蘇正大天晴藥業(yè)股份有限公司