專利名稱：丹參酮納米制劑及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及丹參酮納米制劑及其制備方法，尤其是丹參酮IIA、丹參酮I的納米制劑及其制備方法。
背景技術(shù)：
丹參酮的三維結(jié)構(gòu)和分子的能量函數(shù)決定了其為高熔點物質(zhì)，且難溶于水。例如丹參酮IIA的熔點是485.7K，丹參酮I的熔點是495.4K，隱丹參酮的熔點是464.6K(參見“丹參酮同系物的熱力學(xué)研究”《中國藥科大學(xué)學(xué)報》1988；19(2)90-92)。丹參酮IIA的親水/疏水指數(shù)為79/401＝0.1970，丹參酮I的親水/疏水指數(shù)為80/377＝0.2122。它們在水中的溶解度既取決于親水/疏水指數(shù)，也取決于它們的三維結(jié)構(gòu)，如A環(huán)為芳環(huán)的丹參酮I是一個接近于完全平面的分子，更難溶于水，這些脂溶性化合物一旦進入體液內(nèi)，在水分子的驅(qū)動下將會產(chǎn)生疏水相互作用(參見J.Fisher & J.R.P. Arnold(李艷梅譯)《生物學(xué)中的化學(xué)》pp.86-89科學(xué)出版社2000北京)。用脂溶性溶劑如乙醇等從丹參藥材Salviamiltiorrhiza中容易提取分離到的結(jié)晶狀丹參酮(參見Luo Houwei Wu BaojingYong Zhongen et al。；Pigments from Salvia miltiorrhiza《Phytochemistry》1985 24(4)815-817)，這種結(jié)晶形態(tài)與其在植物體內(nèi)分布或出現(xiàn)于中藥湯劑內(nèi)的物質(zhì)形態(tài)有很大區(qū)別。有實驗表明丹參酮存在的物質(zhì)形態(tài)與其藥理活性有密切關(guān)系。
近10年來，由于細(xì)胞生物學(xué)和分子生物學(xué)的發(fā)展，發(fā)現(xiàn)了越來越多的“新靶點”，導(dǎo)致對丹參酮藥理作用的新認(rèn)識。如丹參酮IIA在0.5μg/ml下對5例急性早幼粒細(xì)胞白血病(APL)患者有誘導(dǎo)分化作用，對人肝癌細(xì)胞株SMMC-7721也具有逆轉(zhuǎn)和促分化作用(參見梁勇 羊裔明 袁淑蘭等 丹參酮IIA誘導(dǎo)早幼粒細(xì)胞白血病細(xì)胞分化及其分子機制研究《中華血液學(xué)雜志》200021(1)23-26；袁淑蘭 黃韌敏 王修杰等 丹參酮對人肝癌細(xì)胞某些表型的逆轉(zhuǎn)作用《腫瘤》1997，17(5)268-270)。南韓學(xué)者也發(fā)現(xiàn)丹參酮IIA在1μg/ml劑量下對人的白血病細(xì)胞，HL60及K562均可通過活化Caspase酶而導(dǎo)致細(xì)胞凋亡。
但是，由于丹參酮的親水指數(shù)如此之低，要做成水溶性制劑存在困難，上述眾多生物活性的發(fā)現(xiàn)，均為采用先將丹參酮按一定比例溶于二甲亞砜(DMSO)，而后用水稀釋的方法。二甲亞砜可引起數(shù)種動物水晶體混濁，其全身應(yīng)用未得到衛(wèi)生管理部門的批準(zhǔn)。
也有將丹參酮IIA磺化作成丹參酮IIA磺酸鈉鹽，并用于108例冠心病患者，發(fā)現(xiàn)可減輕心絞痛和改善缺血性心電圖(參見Shanghai Cooperative group for thestudy of Tanshinone IIA《J.Traditional Chinese Medicine》1984，420)。由于其在血液中半衰期短，快相和慢相分別為26及108分鐘，因此必須用160mg/250ml/日這一較大劑量進行靜脈滴注(參見35硫-丹參酮IIA磺酸鈉在大鼠體內(nèi)的分布排泄和代謝的研究，《中成藥研究》1979，28-12)。此外，磺酸鈉鹽為離子型化合物，較難通過以脂質(zhì)及蛋白質(zhì)成分為基礎(chǔ)的生物膜結(jié)構(gòu)系統(tǒng)。對結(jié)核菌的抑菌活性實驗證明，丹參酮IIA及丹參酮IIA磺酸鹽，其MIC分別為0.31μg/ml和≥5μg/ml，抑菌效果相差很大(參見羅厚蔚 高紀(jì)偉 鄭家潤，丹參酮類及有關(guān)化合物抑菌作用的構(gòu)效關(guān)系《中國藥科大學(xué)學(xué)報》1988，19(4)258-262)。
CN00119579.4中公開一種丹參酮微粉制劑，將丹參酮先進行微波輻射，再與親水性輔料共同研磨，通過微波輻射使丹參酮從結(jié)晶態(tài)轉(zhuǎn)向無定形態(tài)，以促進其溶出度。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的技術(shù)方案如下本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是研制一種能夠治療人類疾病尤其是白血病的丹參酮制劑，該制劑所用輔料必須符合人用藥品的標(biāo)準(zhǔn)，生物利用度提高，既能保留丹參酮可順利通過細(xì)胞膜的本質(zhì)特性，又能分散在水介質(zhì)中，便于臨床注射或靜脈滴注。
本發(fā)明要解決的技術(shù)問題還包括所述丹參酮制劑的制備方法不僅可保留并促進現(xiàn)有技術(shù)中丹參酮制劑的藥理活性顯現(xiàn)，而且應(yīng)能取代用DMSO配制后用水稀釋的丹參酮制劑，并使其活性顯著提高。同時該制劑的制備方法應(yīng)可以在工業(yè)上應(yīng)用。
為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明的技術(shù)方案為一種丹參酮納米制劑，其特征在于按重量計，由丹參酮5.0～10％和聚乙二醇4000或聚乙二醇6000 90～95％組成的共融物粉劑，為納米溶液的前體。
根據(jù)前述丹參酮納米制劑，其特征在于丹參酮為5.0～10％丹參酮IIA或5.0～10％丹參酮I；與聚乙二醇6000 90～95％組成的共融物粉劑。
所述丹參酮納米制劑，其特征在于丹參酮5.0～10％與聚乙二醇4000或聚乙二醇6000 90～95％組成的共融物粉劑，可以溶于生理鹽水，形成納米膠體。
所述丹參酮納米制劑，其特征在于共融物納米粉劑，溶于生理鹽水，放置1天后，形成膠體顆粒小于100納米的納米膠體。
丹參酮納米制劑制備方法，其特征在于按重量計，取丹參酮5.0～10％和聚乙二醇4000或6000 90～95％；先將聚乙二醇4000或6000加熱至70～90℃融化；向融化的聚乙二醇4000或聚乙二醇6000中加入丹參酮，攪拌，形成丹參酮-聚乙二醇共融物；冷卻后研磨，過200～300目篩。
根據(jù)所述丹參酮納米制劑的制備方法，其特征在于按重量計，取丹參酮IIA或丹參酮I 5.0～10％，聚乙二醇6000為90～95％；先將聚乙二醇6000加熱至70～90℃融化后；加入丹參酮IIA或丹參酮I攪拌，形成丹參酮IIA-聚乙二醇共融物或丹參酮I-聚乙二醇共融物；冷卻后，用球磨機研磨，以350～550轉(zhuǎn)/分的轉(zhuǎn)速，研磨1～4小時，過300目篩，溶于生理鹽水，放置后，形成膠體顆粒小于100納米的納米膠體。
根據(jù)所述丹參酮納米制劑的制備方法，其特征在于按重量計，取丹參酮IIA或丹參酮I 5.0～10％，聚乙二醇6000為90～95％；先將聚乙二醇6000加熱至80℃融化后；加入丹參酮IIA或丹參酮I攪拌，形成丹參酮IIA-聚乙二醇共融物或丹參酮I-聚乙二醇共融物；冷卻后，用球磨機研磨，以400～500轉(zhuǎn)/分的轉(zhuǎn)速，研磨2.5～3.5小時，過300目篩，溶于生理鹽水，放置后，形成膠體顆粒小于100納米的納米膠體。
根據(jù)所述丹參酮納米制劑的制備方法，其特征在于按重量計，取丹參酮IIA或丹參酮I 5.0～10％，聚乙二醇6000為90～95％；先將聚乙二醇6000加熱至80℃融化后；加入丹參酮IIA或丹參酮I攪拌，形成丹參酮IIA-聚乙二醇共融物或丹參酮I-聚乙二醇共融物；冷卻后，用球磨機研磨，以450轉(zhuǎn)/分的轉(zhuǎn)速，研磨3小時，過300目篩后，溶于生理鹽水，放置1天后，形成膠體顆粒小于100納米的納米膠體。
前述丹參酮納米制劑的制備方法中，用電子顯微鏡觀察納米膠體溶液，其特征在于試樣不用負(fù)染色染料進行染色。
所述丹參酮、丹參酮IIA、丹參酮I均為丹參提取物。
目前有關(guān)“納米微?！钡亩x是用電子顯微鏡能看到的微粒稱為納米微粒。
本發(fā)明篩選取聚乙二醇4000～6000作為固體親水性分散劑，其可以與丹參酮、丹參酮IIA或者丹參酮I形成的相應(yīng)的單一的共融物，不但熔點低，而且具有親水性。實驗表明，其在共融物中所占的比例越大，丹參酮類成份的分散度就越大，這有利于降低分子間的非鍵作用力，包括范德華相互作用和靜電作用力。
在制成低熔點共融物后，冷卻固化，再將其粉碎成大約0.5cm3團塊，然后用QM-1SP2/2L型行星式球磨機(南京大學(xué)儀器廠制造)以350-550轉(zhuǎn)/分的轉(zhuǎn)速研磨2～4小時，完成研磨后，過200～300目篩，過篩后的微粉經(jīng)光學(xué)顯微鏡觀察，其大小可達到微米/亞微米級。丹參酮、丹參酮IIA或者丹參酮I與聚乙二醇4000或6000形成的共融物，經(jīng)過研磨后，粒度更微小，比表面積增大。當(dāng)?shù)⑼镁垡叶?000～6000為5.0～10％90～95％時形成的共融物微粉，在水中的分散可瞬間完成，并通過疏水相互作用，形成小于100納米以下的膠體態(tài)顆粒。該膠體液貯存穩(wěn)定性良好。
運用差示掃描熱量儀(型號NETZSCH DSC 204)，測定了不同條件下，形成單一的丹參酮-聚乙二醇共融物的熔點。例如作為對照參數(shù)，丹參酮IIA熔點為218.5℃，參見圖11；當(dāng)分散劑占95％時，過300目篩的5％丹參酮IIA-聚乙二醇6000共融物，熔點下降至58.9℃，參見圖12；過200目篩的5％丹參酮IIA-聚乙二醇6000共融物，熔點下降至59.1℃，參見圖13；過200目篩的10％丹參酮IIA-聚乙二醇6000共融物，熔點下降至59.7℃，參見圖14。而且，在對丹參酮IIA-聚乙二醇6000共融物上述試驗中，程序升溫一直至250℃，均未發(fā)現(xiàn)有熔點為218.5℃的單一的丹參酮IIA的熱譜曲線。
上述實驗中，熔點下降達Δ＝159.5℃，表明用聚乙二醇-6000作為固體分散劑，既能降低丹參酮IIA分子之間的非鍵能，不會因溫度過高而導(dǎo)致化學(xué)成分的變化或結(jié)構(gòu)破壞，同時又使丹參酮IIA與聚乙二醇-6000形成的共融物具有強的親水性。而且，上述實驗還表明在共融體中，已不存在丹參酮的結(jié)晶，而是形成了丹參酮IIA與聚乙二醇-6000的共融物。
丹參酮IIA結(jié)晶體通過單純研磨也可使其微粉化，但由于其很高的疏水性，并不能使其與水形成膠體溶液。我們曾研究過丹參酮IIA結(jié)晶在甲醇溶液與不同比例的生理鹽水稀釋過程中所出現(xiàn)的由“微結(jié)晶”轉(zhuǎn)變成納米微粒的動態(tài)變化。取結(jié)晶狀態(tài)的丹參酮IIA，按甲醇∶丹參酮＝2ml∶2mg配制成儲備液存放，然后用Ringer’s生理鹽水按儲備液與Ringer’s生理鹽水1∶1；1∶5；和1∶50三種不同比例配制成試樣，分別在第1天，第5天和第10天取上述樣品按常規(guī)染色制樣方法(參見洪濤主編《生物醫(yī)學(xué)超微結(jié)構(gòu)與電子顯微鏡技術(shù)》科學(xué)出版社，1980 p177北京)，制備成透射電鏡試樣，與此方法不同之處是試樣不做染色操作，原因是負(fù)染色染料所形成的反差與丹參酮膠體顆粒的反差非常接近，會將丹參酮膠體顆粒的圖象掩蓋。
用透射電子顯微鏡觀察丹參酮IIA在不同比例的Ringer’s生理鹽水條件下形成膠體顆粒的過程，實驗結(jié)果如下1，丹參酮IIA結(jié)晶粉末分散在甲醇后的一段時間內(nèi)仍然是以結(jié)晶狀態(tài)存在，其二維尺寸約為1.65μm(寬)×4.4μm(長)，與其處于固體狀態(tài)下相比結(jié)晶的尺寸減小到微米數(shù)量級，該過程大約可持續(xù)10天左右。2，Ringer’s生理鹽水的比例對丹參酮結(jié)晶的分散速度和膠粒的形成具有直接的影響，生理鹽水比例增大如在1∶50中，能加快丹參酮結(jié)晶的分散速度和膠粒的形成。3，在分散介質(zhì)中的呈棒狀的丹參酮結(jié)晶顆粒當(dāng)其寬度處于50-60nm時將不再分散成更小的結(jié)晶顆粒，但開始失去結(jié)晶特有的形態(tài)，逐漸的被分散形成直徑小于5nm的微膠粒并積聚成團塊，在團塊中的微粒進而積聚形成直徑約為20nm的膠粒，再積聚成直徑約為60nm膠粒，這個過程大約為期10天左右，但受到Ringer’s生理鹽水的比例影響，水比例增大能加快丹參酮結(jié)晶的分散速度和膠粒的形成。4，直徑約為60nm膠粒的特征是彼此挨個相連接成鏈狀并有纏饒結(jié)構(gòu)形態(tài)，其中個體的特征是邊緣清晰大小規(guī)則，呈橢圓球形，直徑約為60nm，橢圓球形的長軸是沿著膠粒彼此相連的方向。以上試驗說明丹參酮微晶在生理鹽水中通過疏水相互作用，可以形成直徑小于100納米的膠體顆粒的納米膠體溶液，但是需要放置10天，時間過長，不便于臨床使用，而且甲醇有毒性不允許用于人體。更重要的是，當(dāng)?shù)⑼狪IA結(jié)晶粉末以微晶狀態(tài)分散在甲醇中時，體外實驗觀察沒有顯示出應(yīng)有的藥理活性；只有當(dāng)其形成納米膠粒時，才呈現(xiàn)藥理活性。
用透射電子顯微鏡(TEM)觀察丹參酮IIA-聚乙二醇-6000共融物形成的膠體微粒在透射電鏡下的圖象。取丹參酮IIA-聚乙二醇-6000共熔物經(jīng)過研磨的微粉制劑，按50μg/ml，20μg/ml，2μg/ml的比例，用生理鹽水配制成溶液，靜置1天，經(jīng)過疏水相互作用，將上述溶液按前述方法，制備成透射電鏡試樣，用透射電子顯微鏡進行觀察，結(jié)果顯示本發(fā)明的制備方法不僅可以達到膠粒小于100納米的納米膠粒溶液，而且極大地縮短了膠體溶液形成過程的時間，更具有實用性。
本發(fā)明解決了一種久未解決的丹參酮制劑的水溶性問題，研制一種能夠治療人類疾病尤其是白血病的丹參酮制劑，制備丹參酮-聚乙二醇融合物所用輔料聚乙二醇符合人用藥品的標(biāo)準(zhǔn)，該制劑的生物利用度提高，既保留了丹參酮可順利通過細(xì)胞膜的本質(zhì)特性，又能分散在水介質(zhì)中。丹參酮-聚乙二醇納米粉劑加生理鹽水后，至少可保持穩(wěn)定400小時以上，可方便地用于臨床注射或靜脈滴注。
本發(fā)明解決的技術(shù)問題還包括所述丹參酮制劑的制備方法不僅可保留并促進現(xiàn)有技術(shù)中丹參酮制劑的藥理活性顯現(xiàn)，而且完全能夠取代用DMSO配制后用水稀釋的丹參酮制性，并使其活性顯著提高。同時該制劑的制備方法可以在工業(yè)上應(yīng)用。


圖1丹參酮IIA-聚乙二醇-6000 2mg共融物微粒溶于20ml生理鹽水，形成原液后立即制備成透射電鏡試樣進行觀察的照片(放大倍率40000X)可見到該共熔物粒度大約在0.20×0.05μm-5×0.5μm范圍。
圖2上述原液與生理鹽水為1∶1(V/V，下同)時，制備1天后的透射電鏡照片，可見到丹參酮IIA膠粒已經(jīng)或正在形成(放大倍率80000X)圖3原液與生理鹽水為1∶1時，制備1天后的透射電鏡照片，可以見到丹參酮IIA聚乙二醇共融物粒度大約在0.1×0.05-0.35×0.15μm，(放大倍率40000X)。
圖4原液與生理鹽水為1∶5時，制備1天后的透射電鏡照片，丹參酮IIA聚乙二醇膠粒正在形成，膠粒直徑分布約為30-100nm，它們之間互相連接，(放大倍率80000X)圖5原液與生理鹽水為1∶5，制備1天后的透射電鏡照片，丹參酮IIA聚乙二醇膠粒正在形成，膠粒直徑分布約為25-50nm，它們互相連接并有纏饒，(放大倍率80000X)圖6原液與生理鹽水為1∶5時，制備1天后的透射電鏡照片，丹參酮IIA聚乙二醇膠粒度大約在0.1×0.05-0.35×0.15μm，(放大倍率40000X)圖7原液與生理鹽水為1∶50，制備1天后的透射電鏡照片，有許多直徑小于5nm膠粒分布，還有直徑為20nm膠粒分布，以及少數(shù)大于80nm膠粒，(放大倍率80000X)圖8原液與生理鹽水為1∶50，制備1天后的透射電鏡照片，有直徑小于5nm膠粒分布并有聚集成直徑約為60nm膠粒(圖中深色顆粒)，(放大倍率80000X)圖9原液與生理鹽水為1∶50，制備1天后的透射電鏡照片，直徑約為60nm膠粒互相連接并有纏繞，(放大倍率80000X)圖10原液與生理鹽水為1∶50，制備1天后的透射電鏡照片，直徑約為80nm膠粒正在形成，(放大倍率80000X)圖11差示掃描熱量儀測定丹參酮IIA熔點圖，圖面顯示其熔點為218.5℃圖12差示掃描熱量儀測定過300目篩的5％丹參酮IIA-聚乙二醇6000共融物熔點圖，圖面顯示其熔點為58.9℃，圖13差示掃描熱量儀測定過200目篩的5％丹參酮IIA-聚乙二醇6000共融物熔點圖，圖面顯示其熔點為59.1℃。
圖14差示掃描熱量儀測定過200目篩10％丹參酮IIA-聚乙二醇6000共融物熔點圖，圖面顯示其熔點為59.7℃圖15高效液相法測定丹參酮IIA-聚乙二醇微粉水液濃度變化16高效液相法測定丹參酮IIA-聚乙二醇微粉水液400小時濃度變化圖具體實施方式
丹參酮IIA、丹參酮I的樣品純度在90±5％，其提取分離方法可依據(jù)文獻Luo Houwei Wu Baojing Yong Zhongen et al。；Pigments from Salvia miltiorrhizaPhytochemistry 1985 24(4)815-817。
聚乙二醇-6000，M.W.6000左右，日本進口分裝，上海化學(xué)試劑廠，批號80-08-22。
實施例1取丹參酮IIA 5克，聚乙二醇-6000 95克首先使聚乙二醇-6000加熱至80℃使其全部融化，再加進丹參酮IIA攪拌至結(jié)晶體消失并形成均勻的共融物為止。冷卻后，用球磨機研磨，以450轉(zhuǎn)/分的轉(zhuǎn)速，研磨2.5小時，過300目篩，溶于生理鹽水，放置1天后，形成膠體顆粒小于100納米的納米膠體溶液。
實施例2取丹參酮I 5克，聚乙二醇-4000 95克首先使聚乙二醇-4000加熱至70℃使其全部融化，再加進丹參酮I攪拌至結(jié)晶體消失并形成均勻的共融物為止。冷卻后，用球磨機研磨，以350轉(zhuǎn)/分的轉(zhuǎn)速，研磨3小時，過300目篩，溶于生理鹽水，放置1天后，形成膠體顆粒小于100納米的納米膠體溶液。
實施例3取丹參酮IIA 10克(純度為90％)，聚乙二醇-4000 185克首先使聚乙二醇-6000加熱至70℃使其全部融化，再加進丹參酮IIA攪拌至結(jié)晶體消失并形成均勻的共融物為止。冷卻后，用球磨機研磨，以550轉(zhuǎn)/分的轉(zhuǎn)速，研磨1小時，過200目篩，溶于生理鹽水，放置1天后，形成膠體顆粒小于100納米的納米膠體溶液。
實施例4取丹參酮I 20克，聚乙二醇-6000 185克。
首先使聚乙二醇-6000加熱至90℃使其全部融化，再加進丹參酮I攪拌至結(jié)晶體消失并形成均勻的共融物為止。冷卻后，用球磨機研磨，以400轉(zhuǎn)/分的轉(zhuǎn)速，研磨2小時，過300目篩，溶于生理鹽水，放置后，形成膠體顆粒小于100納米的納米膠體溶液。
實施例5在DSC方法中除測到丹參酮IIA與PEG的共融物的熔點外，未見到丹參酮IIA的熔點，說明丹參酮IIA已被PEG所完全分散。
膠體溶液的穩(wěn)定性——膠體液中丹參酮IIA的含量測定為了考察由丹參酮膠體微粒與按一定比例的水溶液，在一定條件下通過疏水相互作用后所形成的膠體溶液的穩(wěn)定狀態(tài)，采用高效液相方法對膠體溶液中的丹參酮IIA含量，作了測定。
稱取實施例1中制備的丹參酮IIA-聚乙二醇微粉4.1mg，溶于2.0ml水中，其中丹參酮IIA含量是5％，每次進樣量為10微升，按照濃度與峰面積線形關(guān)系方程式，Y＝1E+06+91318，其中Y峰面積，X濃度，相關(guān)系數(shù)R2＝0.999，求得的濃度為max＝387microM，min＝301microM。實驗分兩次進行，第一次在不同間隔時間內(nèi)測定了13次，觀察了71小時內(nèi)的濃度改變，第二次在不同間隔時間內(nèi)測定了12次，觀測了400小時內(nèi)的濃度變化，參見圖15、16。圖15中的峰代表圖16中各點的濃度。由圖可見在400小時內(nèi)的濃度變化約在10％以內(nèi)，說明膠體狀態(tài)是穩(wěn)定的。測定的具體條件如下Beckman System Gold Liquid chromatograph配備以125 Solvent modulepump及166 UV-VIS檢測器，分析柱是250×4.6mm Beckman Ultrasphere C18(5μm)。流動相由溶劑A(0.075％三氟乙酸)與溶劑B(乙腈)梯度洗脫0-5min，0％B；5-25min，0-70％B；40-41min，70％B.流量保持1.0ml min-1測定波長為280nm。
實施例6透射電子顯微鏡(TEM)觀察丹參酮IIA-聚乙二醇-6000共融物形成的膠體微粒在透射電鏡下的圖象。
取實施例1中制備的丹參酮IIA-聚乙二醇-6000共熔物經(jīng)過研磨的微粉制劑，按50μg/ml，20μg/ml，2μg/m的比例，用生理鹽水配制成溶液，靜置1天。將上述溶液按前述方法，制備成透射電鏡試樣，用透射電子顯微鏡進行觀察。
實驗證明經(jīng)研磨的丹參酮IIA-聚乙二醇-6000共熔物的粒度比未經(jīng)研磨的體積明顯減?。徊煌壤纳睇}水對膠粒形成的速度與所形成膠粒的大小有影響；上述不同比例的樣品都能在制備后的一天時間內(nèi)形成膠粒，粒徑能達到60nm。
圖1為用丹參酮IIA-聚乙二醇-6000 2mg共熔物微粒溶于20ml生理鹽水的形成原液后立即制備成透射電鏡試樣進行觀察的照片(放大倍率40000X)可見到該共熔物粒度大約在0.20×0.05μm-5×0.5μm范圍。
圖2為原液∶生理鹽水＝1∶1時，在制備1天后的透射電鏡照片，可見到丹參酮IIA膠粒已經(jīng)或正在形成，大小不等，其中大的膠粒直徑約100nm，較小的直徑約60-20nm不等，它們之間互相連接并有纏繞，(放大倍率80000X)圖3為原液∶生理鹽水＝1∶1時，在制備1天后的透射電鏡照片，可以見到丹參酮IIA聚乙二醇共融物粒度大約在0.1×0.05-0.35×0.15μm，(放大倍率40000X)。
圖4為原液∶生理鹽水＝1∶5時，在制備1天后的透射電鏡照片，丹參酮IIA聚乙二醇膠粒正在形成，膠粒直徑分布約為30-100nm，它們之間互相連接，(放大倍率80000X)圖5為原液∶生理鹽水＝1∶5制備1天后的透射電鏡照片，丹參酮IIA聚乙二醇膠粒正在形成，膠粒直徑分布約為25-50nm，它們互相連接并有纏饒，(放大倍率80000X)圖6為原液∶生理鹽水＝1∶5時，在制備1天后的透射電鏡照片，丹參酮IIA聚乙二醇膠粒度大約在0.1×0.05-0.35×0.15μm，(放大倍率40000X)圖7為原液∶生理鹽水＝1∶50制備1天后的透射電鏡照片，有許多直徑小于5nm膠粒分布，還有直徑為20nm膠粒分布，以及少數(shù)大于80nm膠粒，(放大倍率80000X)圖8為原液∶生理鹽水＝1∶50制備1天后的透射電鏡照片，有直徑小于5nm膠粒分布并有聚集成直徑約為60nm膠粒(圖中深色顆粒)，(放大倍率80000X)圖9為原液∶生理鹽水＝1∶50制備1天后的透射電鏡照片，直徑約為60nm膠粒互相連接并有纏繞，(放大倍率80000X)圖10為原液∶生理鹽水＝1∶50制備1天后的透射電鏡照片，直徑約為80nm膠粒正在形成，(放大倍率80000X)實施例7藥效實驗委托四川大學(xué)華西醫(yī)院腫瘤研究所進行藥效實驗。
取上述實施例中制備的5％與10％的丹參酮IIA-PEG6000共融物微粉制劑，溶于生理鹽水，劑量為折算成IIA 0.5μg/ml；對照品為溶于DMSO的丹參酮IIA0.5μg/ml。研究對HL-60細(xì)胞系的體外誘導(dǎo)分化作用，實驗證明5％與10％的丹參酮IIA-PEG6000共融物微粉制劑與對照品相比，其活性有顯著改進。
權(quán)利要求
1.一種丹參酮納米制劑，其特征在于按重量計，由丹參酮5.0～10％和聚乙二醇4000或聚乙二醇6000 90～95％組成的共融物粉劑，為納米溶液的前體。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述丹參酮納米制劑，其特征在于丹參酮為5.0～10％丹參酮IIA或5.0～10％丹參酮I；與聚乙二醇6000 90～95％組成的共融物粉劑。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述丹參酮納米制劑，其特征在于丹參酮5.0～10％與聚乙二醇4000或聚乙二醇6000 90～95％組成的共融物粉劑，可以溶于生理鹽水，形成納米膠體。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述丹參酮納米制劑，其特征在于共融物納米粉劑，溶于生理鹽水，放置1天后，形成膠體顆粒小于100納米的納米膠體。
5.一種丹參酮納米制劑的制備方法，其特征在于按重量計，取丹參酮5.0～10％和聚乙二醇4000或聚乙二醇6000 90～95％；先將聚乙二醇4000或聚乙二醇6000加熱至70～90℃融化；向融化的聚乙二醇4000或聚乙二醇6000中加入丹參酮，攪拌，形成丹參酮-聚乙二醇共融物；冷卻后研磨，過200～300目篩。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述丹參酮納米制劑的制備方法，其特征在于按重量計，取丹參酮IIA或丹參酮I 5.0～10％，聚乙二醇6000為90～95％；先將聚乙二醇6000加熱至70～90℃融化后；加入丹參酮IIA或丹參酮I攪拌，形成丹參酮IIA-聚乙二醇共融物或丹參酮I-聚乙二醇共融物；冷卻后，用球磨機研磨，以350～550轉(zhuǎn)/分的轉(zhuǎn)速，研磨1～4小時，過300目篩，溶于生理鹽水，放置后，形成膠體顆粒小于100納米的納米膠體。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述丹參酮納米制劑的制備方法，其特征在于按重量計，取丹參酮IIA或丹參酮I 5.0～10％，聚乙二醇6000為90～95％；先將聚乙二醇6000加熱至80℃融化后；加入丹參酮IIA或丹參酮I攪拌，形成丹參酮IIA-聚乙二醇共融物或丹參酮I-聚乙二醇共融物；冷卻后，用球磨機研磨，以400～500轉(zhuǎn)/分的轉(zhuǎn)速，研磨2.5～3.5小時，過300目篩，溶于生理鹽水，放置后，形成膠體顆粒小于100納米的納米膠體。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述丹參酮納米制劑的制備方法，其特征在于按重量計，取丹參酮IIA或丹參酮I 5.0～10％，聚乙二醇6000為90～95％；先將聚乙二醇6000加熱至80℃融化后；加入丹參酮IIA或丹參酮I攪拌，形成丹參酮IIA-聚乙二醇共融物或丹參酮I-聚乙二醇共融物；冷卻后，用球磨機研磨，以450轉(zhuǎn)/分的轉(zhuǎn)速，研磨3小時，過300目篩后，溶于生理鹽水，放置1天后，形成膠體顆粒小于100納米的納米膠體。
9.根據(jù)權(quán)利要求6～8之一所述丹參酮納米制劑的制備方法，用電子顯微鏡觀察納米膠體溶液，其特征在于試樣不用負(fù)染色染料進行染色。
全文摘要
一種可注射用的丹參酮5.0～10％和聚乙二醇4000～6000 90～95％組成的共融物的納米粉劑，能速溶于生理鹽水，放置后形成的膠體顆粒小于100納米膠粒，該膠體液可穩(wěn)定存放；其制備方法為先將聚乙二醇4000～6000加熱至70～90℃融化；向融化的聚乙二醇4000～6000中加入丹參酮攪拌，形成丹參酮－聚乙二醇共融物；冷卻后研磨，過200～300目篩。
文檔編號A61K9/16GK1391889SQ0213786
公開日2003年1月22日 申請日期2002年7月2日 優(yōu)先權(quán)日2002年7月2日
發(fā)明者羅厚蔚, 陳 峰 申請人:羅厚蔚, 陳 峰