專利名稱：有整聯(lián)蛋白抑制劑性質(zhì)的肽和肽模擬結(jié)合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及式I化合物及其鹽B-Q-X1I式中B是一種生物活性的細(xì)胞粘附介導(dǎo)分子，Q不存在或者是一種有機(jī)間隔分子，和X1是一種錨固分子，選自基團(tuán)-Lys-(CO-CH2-(CH2)n-PO3H2)2(i)-Lys-[Lys-(CO-CH2-(CH2)n-PO3H2)2]2(ii)或-Lys-(Lys[-Lys-(CO-CH2-(CH2)n-PO3H2)2]2)2(iii)，且n在每種情況下都彼此獨(dú)立地是0、1、2或3，其中，基團(tuán)B的一個(gè)游離氨基和間隔分子Q或錨固分子X1的一個(gè)游離羧基，或者基團(tuán)Q的一個(gè)游離氨基和基團(tuán)X1的一個(gè)游離羧基彼此像肽一樣連接。
類似的化合物公開于DE 19932796、DE 19755800和DE 19831710中。
本發(fā)明是以尋找有寶貴性質(zhì)的新型化合物、尤其可用于醫(yī)藥生產(chǎn)的化合物的目標(biāo)為基礎(chǔ)的。
已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，式I化合物及其鹽有非常有價(jià)值的藥理學(xué)性質(zhì)，兼?zhèn)淞己玫目赡褪苄?。它們尤其可用作整?lián)蛋白抑制劑，具體地說，抑制αvβ3或αvβ5整聯(lián)蛋白受體與配體的相互作用，例如纖維蛋白原與β3整聯(lián)蛋白受體的結(jié)合。這些化合物在整聯(lián)蛋白αvβ3、αvβ5、αIIbβ3、αvβ1、αvβ6和αvβ8的情況下顯示特定的活性。
這種作用可以，例如，按照J(rèn).W.Smithetal.在J.Biol.Chem.265，12267-12271(1990)中所述的方法證實(shí)。
P.C.Brooks，R.A.Clark和D.A.Cheresh在Science264，569-71(1994)描述了血管形成的發(fā)展對(duì)血管整聯(lián)蛋白與細(xì)胞外基質(zhì)蛋白之間的相互作用的依賴性。P.C.Brooks，A.M.Montgomery，M.Rosenfeld，R.A.Reisfeld，T.-Hu，G.Klier和D.A.Cheresh在Cell79，1157-64(1994)描述了借助于環(huán)狀肽抑制這種相互作用從而誘導(dǎo)血管形成性血管細(xì)胞的凋亡的可能性。
能阻斷整聯(lián)蛋白受體與配體的相互作用例如纖維蛋白原與纖維蛋白原受體(糖蛋白IIb/IIIa)的相互作用的式I化合物，作為GPIIb/IIIa拮抗劑，防止了腫瘤細(xì)胞通過轉(zhuǎn)移擴(kuò)散。
腫瘤細(xì)胞從局部腫瘤向血管系統(tǒng)中的擴(kuò)散是通過腫瘤細(xì)胞與血小板的相互作用而經(jīng)由微聚集體(微血栓)的形成發(fā)生的。腫瘤細(xì)胞因在微聚集體中的保護(hù)而受屏蔽，而且不被免疫系統(tǒng)的細(xì)胞所認(rèn)識(shí)。這些微聚集體會(huì)附著到血管壁上，因此，有利于腫瘤細(xì)胞進(jìn)一步穿透到該組織中。
由于微血栓的形成是通過結(jié)合到活化血小板上的纖維蛋白原受體的纖維蛋白原傳遞的，因而，GPIIb/IIIa拮抗藥可以視為有效的轉(zhuǎn)移抑制劑。
磷酸基用來使這些肽離子型地或吸附性地結(jié)合到諸如含有氧化物的植入物的生物相容性表面上，例如金屬表面(如鈦或鈦合金例如TiAl6V4)，或含陽離子的表面，例如無定形或燒結(jié)磷酸鈣(如羥基磷灰石、骨骼、牙齒)或磷酸鈣粘固劑(如Biocement D)。
因此，本發(fā)明具體地涉及用于通過X1的官能團(tuán)與生物相容性表面進(jìn)行離子型或吸附性結(jié)合用的式I化合物。
現(xiàn)在，本發(fā)明的肽使得生物材料、尤其人體和動(dòng)器的植入物的生物機(jī)能化借助于其涂層成為可能，主要是使那些在每一種情況下都應(yīng)當(dāng)影響該對(duì)應(yīng)生物材料的整合的受刺激細(xì)胞種類的粘附成為可能。利用這樣的涂層，可以實(shí)現(xiàn)各種在摻入體內(nèi)之后具有改善的長期穩(wěn)定性的生物材料/植入物的整合加速和強(qiáng)化。
本發(fā)明的肽解選擇性地結(jié)合整聯(lián)蛋白。在固定到生物相容性表面例如植入物上之后，它們刺激攜帶整聯(lián)蛋白的細(xì)胞的粘附。
在該化合物涂布到這些表面上之后，就會(huì)選擇性地刺激那些也應(yīng)影響植入物在植入天然組織中之后的整合的細(xì)胞種類的結(jié)合。在成骨細(xì)胞、破骨細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞中，這些是例如攜帶αv的細(xì)胞種類。
因此，本發(fā)明涉及作為植入物中用于選擇性富集細(xì)胞的整聯(lián)蛋白抑制劑的式I化合物。
在錨固到生物相容性表面上之后，作為藥物活性化合物，式I化合物可以用于人體醫(yī)藥和獸醫(yī)藥中，具體地說，它們可以作為整聯(lián)蛋白抑制劑用于治療植入物引起的疾病、缺陷和炎癥，例如生物材料和植入物的整合不足和延遲，植入物引起的血栓形成、骨骼和牙齒缺損、以及溶骨性疾病例如骨質(zhì)疏松癥、血栓形成、心肌梗塞、動(dòng)脈硬化，用于幫助愈合過程的創(chuàng)傷愈合，也用于加速和增強(qiáng)該植入物或生物相容性表面整合到該組織中的過程。
式I化合物可以作為有抗微生物作用的物質(zhì)用于使用生物材料、植入物、導(dǎo)管或心臟起搏器的手術(shù)。在此，它們有防腐作用。抗微生物活性的藥效可以用P.Valentin-Weigund et al.，在Infection andImmunity，2851-2855(1988)中所述的程序證實(shí)。
因此，本發(fā)明涉及作為整聯(lián)蛋白抑制劑的式I化合物，它用于治療植入物引起的疾病、缺乏和炎癥，治療溶骨性疾病例如骨質(zhì)疏松癥、血栓形成、心肌梗塞和動(dòng)脈硬化，也用于加速和增強(qiáng)植入物或生物相容性表面與組織的整合過程。
本發(fā)明一步涉及式I化合物在制造一種藥物中的用途，該藥物用于治療植入物引起的疾病、缺陷和炎癥，治療溶骨性疾病例如骨質(zhì)疏松癥、血栓形成、心肌梗塞和動(dòng)脈硬化，以及用于加速和增強(qiáng)植入物或生物相容性表面整合到組織中的過程。
攜帶膦酸錨固劑的對(duì)應(yīng)肽可以離子型地結(jié)合到具有含氧化物表面的載體例如植入物、親和色譜材料、或微量滴定板上，或結(jié)合到含陽離子表面上例如無定形或燒結(jié)磷酸鈣(例如羥基磷灰石、骨骼、牙齒)或者磷酸鈣粘固劑(例如Bio-cement D)上。
本發(fā)明也涉及式I化合物用于通過離子型或吸附型結(jié)合而涂布人和動(dòng)物器官的植入物的用途。
以上和以下提到的氨基酸殘基的縮略語代表下列氨基酸基團(tuán)Abu 4-氨基丁酸Aha 6-氨基己酸Ala 丙氨酸Asn 天冬酰胺Asp 天冬氨酸Arg 精氨酸Cys 半胱氨酸Dab 2，4-二氨基丁酸DaP 2，3-二氨基丙酸Gln 谷氨酰胺Glp 焦谷氨酸Glu 谷氨酸Gly 甘氨酸His 組氨酸homo-Phe 高苯丙氨酸Ile 異亮氨酸Leu 亮氨酸Lys 賴氨酸Met 甲硫氨酸Nle 正亮氨酸Orn 鳥氨酸Phe 苯丙氨酸Phg 苯甘氨酸4-Hal-Phe 4-鹵代苯丙氨酸Pro 脯氨酸Ser 絲氨酸Thr 蘇氨酸Trp 色氨酸Tyr 酪氨酸Val 纈氨酸此外，以下縮略語的含義如下Ac乙?；鵅OC 叔丁氧羰基CBZ或Z芐氧羰基DCCI 二環(huán)己基碳二亞胺DMF 二甲基甲酰胺EDCI N-基-N，N’-二(二甲基氨基丙基)碳二亞胺Et乙基FCA 熒光素羧酸FITC 熒光素異硫氰酸酯Fmoc 9-芴基甲氧羰基FTH熒光素硫脲HOBt 1-羥基苯并三唑Me 甲基MBHA 4-甲基二苯甲胺Mtr4-甲氧基-2，3，6-三甲基苯磺?；鵋ATU 0-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N，N，N’，N’-四甲基脲·六氟磷酸鹽HONSu N-羥基琥珀酰亞胺OtBu 叔丁酯Oct辛酰基OMe甲酯OEt乙酯POA苯氧乙?；鵓bf五甲基苯并呋喃基Pmc2，2，5，7，8-五甲基苯并二氫吡喃-6-磺?；鵖al水楊酰基Su 琥珀?；鵗IPS 三異丙基甲硅烷TFA三氟乙酸TMSBr 三甲基甲硅烷基溴Trt三苯甲基如果以上提到的氨基酸能以多種對(duì)映體形式出現(xiàn)，則所有這些形式及其混合物(例如DL形式)在以上和以下都作為式I化合物的一部分包括在內(nèi)。此外，可以給諸如作為式I化合物的氨基酸提供本身已知的對(duì)應(yīng)保護(hù)基團(tuán)。
首先，諸如在非肽αvβ3拮抗劑的情況下進(jìn)行的精氨酸側(cè)鏈修飾(例如R.Keenan et al.，Abstr.Pap.211th ACS National Meeting(New Orleans，USA)1996，MEDI236)也可以用于環(huán)狀肽例如除胍基外的苯并咪唑衍生物的情況。
在本發(fā)明的化合物中也包括“藥物前體衍生物”，即能在體內(nèi)迅速裂解而給出本發(fā)明的活性化合物的、用諸如烷基或?；?、糖或寡肽修飾的式I化合物。
本發(fā)明進(jìn)一步涉及一種適用于人體和動(dòng)物器官的植入物，其組成為一種載體基質(zhì)和圍繞這種基質(zhì)的一層生物活性的細(xì)胞粘附介導(dǎo)分子，該圍繞層是從式I化合物形成的，而且在載體基質(zhì)與這種化合物之間存在一種離子鍵或吸附鍵。優(yōu)選地，該載體基質(zhì)和/或其表面由一種金屬或金屬氧化物組成。特別優(yōu)選的是，該載體基質(zhì)和/或其表面由一種骨骼或牙齒代用材料例如磷酸鈣混合物組成。
本發(fā)明進(jìn)一步涉及權(quán)利要求1的式I化合物及其鹽的制備工藝，其特征在于，使一種可以被提供保護(hù)基團(tuán)的生物活性分子B和一種提供了保護(hù)基團(tuán)的間隔-錨固分子(Q-X1)或錨固分子(X1)彼此以肽方式連接，然后脫除保護(hù)基團(tuán)，和/或在于，使式I[sic]的一種堿性或酸性化合物通過用一種酸或堿處理轉(zhuǎn)化成其鹽之一。
在以上和以下，基團(tuán)B、Q和X1具有式I所指出的含義，除非另有專門說明。
B優(yōu)選是一種環(huán)狀-(Arg-Gly-Asp-Z1)-， Thr-Trp-Tyr-Lys-Ile-Ala-Phe-Gln-Arg-Asn-Arg-Lys-，Trp-Tyr-Lys-Ile-Ala-Phe-Gln-Arg-Asn-Arg-Lys-，Tyr-Lys-Ile-Ala-Phe-Gln-Arg-Asn-Arg-Lys-，Thr-Trp-Tyr-Lys-Ile-Ala-Phe-Gln-Arg-Asn-Arg-，Thr-Trp-Tyr-Lys-Ile-Ala-Phe-Gln-Arg-Asn-或一種Thr-Trp-Tyr-Lys-Ile-Ala-Phe-Gln-Arg-殘基，式中Z1在每一種情況下都彼此獨(dú)立地是一種氨基殘基或者一種二肽或三肽殘基，且其中氨基酸彼此獨(dú)立地選自下列組成的一組Ala，Asn，Asp，Arg，Cys，Gln，Glu，Gly，His，Homo-Phe，Ile，Leu，Lys，Orn，Met，Phe，Phg，Pro，Ser， Thr，Trp，Tyr，Val。
Q不存在或者是一種有機(jī)間隔分子。優(yōu)選，這是一個(gè)m-，[CO-CH2(O-CH2CH2)y-NH-]m-， [CO-(CH2)z-CO-]-，[NH-(CH2)z-NH-]-，[CO-CH2-(OCH2CH2)y-O-CH2-CO-]-或一個(gè)[NH-CH2CH2-(OCH2CH2)y-NH-]-基團(tuán)及其組合，其中，權(quán)利要求3中主張的數(shù)值范圍適用于指數(shù)m、x、y和z。以上提到的、m可以采用1-8的值、x可以采用1-5的值、y和z可以采用1-6的值的化合物已經(jīng)證明是特別有利的。
X1是一種錨固分子，優(yōu)選來自基團(tuán)-Lys-(CO-CH2-(CH2)n-PO3H2)2，-Lys-[Lys-(CO-CH2-(CH2)n-PO3H2)2]2或-Lys-(Lys[-Lys-(CO-CH2-(CH2)n-PO3H2)2]2)2，式中n因情況而異，可以彼此獨(dú)立地是0、1、2、或3。
在Z1的含義中提到的氨基酸和氨基酸殘基也可以是衍生化的，且優(yōu)選是N-甲基、N-乙基、N-丙基、N-芐基或Cα甲基衍生物。也優(yōu)選的是Asp和Glu的衍生物，特別是側(cè)鏈羧基的甲酯、乙酯、丙酯、丁酯、叔丁酯、新戊酯或芐酯，以及Arg的衍生物，Arg可以在-NH-C(＝NH)-NH2基團(tuán)上被乙?；?、苯甲酰基、甲氧羰基或乙氧羰基取代。
X優(yōu)選是H2N-C(＝NH)-NH-，Het-NH-，H2N-C(＝NH)-，A-C(＝NH)-NH或一個(gè)Het基團(tuán)。Y優(yōu)選是-(CH2)n-或 -(CH2)s-CH(R4)-(CH2)t-或-(CH2)p-Het1(CH2)q-基團(tuán)。
Z優(yōu)選是N-R2或CH-R2，其中R2優(yōu)選可以是H原子或有1-4個(gè)C原子的烷基。
R3優(yōu)選是一個(gè)H原子、Ar、Het或A基團(tuán)，其中A、Ar和Het有以上或以下指出的含義之一。
R4優(yōu)選是一個(gè)H原子、A、Ar、OH、OA、OAr、芳烷基、Hal、CN、NO2、CF3或OCF3基團(tuán)。芳烷基優(yōu)選是芐基、苯乙基、苯丙基或萘甲基，特別優(yōu)選的是芐基。
A優(yōu)選是COOH、NH2或有1-6個(gè)C原子的烷基，該烷基是無取代的或者被COOH或NH2取代的。A優(yōu)選是甲基，進(jìn)而是乙基、丙基、正丁基、異丁基、仲丁基或叔丁基，此外也可以是正戊基，1-，2-或3-甲基丁基，1，1-、1，2-或2，2-二甲基丙基，1-乙基丙基，己基，1-、2-、3-或4-甲基戊基，1，1-、1，2-、1，3-、2，2-、2，3-或3，3-二甲基丁基，1-或2-乙基丁基，1-乙基-1-甲基丙基，1-乙基-2-甲基丙基，1，1，2-或1，2，2-三甲基丙基。A特別優(yōu)選是甲基。
Ar優(yōu)選是苯基，該苯基是無取代的或者被A、OH、OA、CF3、OCF3、CN、NO2或Hal一取代、二取代或三取代，該苯基還可以被苯基以能產(chǎn)生一種無取代或有取代的聯(lián)苯基這樣一種方式取代，后一個(gè)苯基被A、OH、OA、NH2、OCF3、CN、NO2或Hal一取代、二取代或三取代。
因此，Ar優(yōu)選是苯基，鄰、間或?qū)谆交?，鄰、間或?qū)σ一交?，鄰、間或?qū)Ρ交?、鄰、間或?qū)Ξ惐交?、間或?qū)κ宥』交?，鄰、間或?qū)αu基苯基，鄰、間或?qū)籽趸交?、間或?qū)σ已趸交?、間或?qū)θ谆交?、間或?qū)θ籽趸交?，鄰、間或?qū)Ψ交?，鄰、間或?qū)β缺交?，鄰、間或?qū)︿灞交?，鄰、間或?qū)ο趸交?，鄰、間或?qū)Π被交?br> Het是一個(gè)飽和的、部分不飽和的或完全不飽和的單環(huán)式或雙環(huán)式5元-10元雜環(huán)基，其中可以存在1-3個(gè)N和/或1個(gè)S或O原子，且該雜環(huán)基可以被CN、Hal、OH、NH2、COOH、OA、CF3、A、NO2、Ar或OCF3-取代或二取代。
Het優(yōu)選是一個(gè)有鄰、間或?qū)ξ蝗〈倪拎せ?，一個(gè)有2-、4-、5-或6-取代的嘧啶基，或一個(gè)有3-、4-、5-或6-取代的噠嗪基，它們優(yōu)選是無取代的或者被一個(gè)甲基、乙基或丙基或者一個(gè)甲基氨基、乙基氨基或丙基氨基取代[涉及所提到的所有三種雜芳香族]，以及一個(gè)2-取代的苯并咪唑基，它是無取代的或者被一個(gè)3-甲基、3-乙基或3-芐基取代，以及被一個(gè)2-取代的二氫咪唑基、四氫嘧啶或四氫吡啶基取代。
Het中優(yōu)選含有的實(shí)例是 Het1是一個(gè)有1-4個(gè)N、O和/或S原子的5元或6元芳香族雜環(huán)，該雜環(huán)可以是無取代的或者是被F、Cl、Br、A、OA或OCF3-取代或二取代。
Het1優(yōu)選是一個(gè)2，4-、3，5-或2，5-二取代的吡啶基，或一個(gè)2，4-、2，5-、2，6-或4，6-二取代的嘧啶基，一個(gè)2，4-或2，5-二取代的1，3-噁唑基或1，3-噻唑基。
OA優(yōu)選是甲氧基、乙氧基、丙氧基或丁氧基，此外，也可以是戊氧基或乙氧基。
Hal優(yōu)選是F、Cl或Br，但也可以是I。
指數(shù)n、m、o、p、q、s和t有權(quán)利要求2中指出的含義，除非另有專門說明。
式I化合物可以有一個(gè)或多個(gè)手性中心，因此，呈各種不同的立體異構(gòu)體形式。式I包括所有這些形式。
因此，本發(fā)明具體地涉及那些其中所提到的基團(tuán)中至少一種有以上所指出的優(yōu)選含義之一的式I化合物。
特別優(yōu)選的式I化合物是下列a)環(huán)狀-(Arg-Gly-Asp-D-Phe-Lys(NεH-[CO-(CH2)5-NH]2-Lys-[Lys-(CO-CH2-(CH2)n-PO3H2)2]2))；b)環(huán)狀-(Arg-Gly-Asp-D-Phe-Lys(NεH-[CO-(CH2)5-NH]3-Lys-[Lys-(CO-CH2-(CH2)n-PO3H2)2]2))；c)環(huán)狀-(Arg-Gly-Asp-D-Phe-Lys(NεH-[CO-CH2(-O-CH2CH2)6-NH]2-Lys-[Lys-(CO-CH2-(CH2)n-PO3H2)2]2))；
式中n是1。
式I化合物及其制備用起始物質(zhì)還可以用本身已知的方法例如文獻(xiàn)上所述(如見標(biāo)準(zhǔn)著作，例如Houben-Weyl，Methoden derorganischen Chemie[Methods of Organic Chemistry]，Georg-Thieme-Verlag，Stuttgart；)即在已知的和適用于所提到的反應(yīng)的反應(yīng)條件下制備的。在這種情況下也可以使用本身已知的變化，但在此不予贅述。
如果希望，該起始物質(zhì)也可以就地生成，使得它們不從反應(yīng)混合物中分離出來，而是立即進(jìn)行一步反應(yīng)以給出式I化合物。
片段偶合或配體與接頭之間的偶合一般是在惰性溶劑進(jìn)行的，把羧酸片段(膦酸接頭，例如HO-[CO-(CH2)5-NH]2-Lys-[Lys-(CO-CH2-CH2-PO3(C2H5)2)2]2)溶解于有HATU、HOAt和2，4，6-三甲基吡啶的DMF中，再用一種胺片段(環(huán)狀肽，例如c[R((Pbf)G(OtBu)fK])處理。
適用惰性溶劑是，例如，烴如乙烷、石油醚、苯、甲苯或二甲苯；氯代烴如三氯乙烯、1，2-二氯乙烷、四氯化碳、氯仿或二氯甲烷；醇如甲醇、乙醇、異丙醇、正丙醇、正丁醇或叔丁醇；醚如二乙醚、二異丙醚、四氫呋喃(THF)或二噁烷；二醇醚如乙二醇-甲醚或-乙醚、乙二醇二甲醚(diglyme)；酮如丙酮或丁酮；酰胺如乙酰胺、N-甲基吡咯烷酮、二甲基乙酰胺或二甲基甲酰胺(DMF)；腈如乙腈；亞砜如二甲基亞砜(DMSO)、二硫化碳；羧酸如甲酸或乙酸；硝基化合物如硝基甲烷或硝基苯；酯如乙酸乙酯，水或所提到的溶劑的混合物。
環(huán)狀化合物可以通過線型化合物的環(huán)化來制備，例如，DE 43 10643、Houben-Weyl，1.c.，卷15/II，pp.1-806(1974)或S.Zimmer，E.Hoffmann，G.Jung和H.Kessler，Liebig’s Ann.Chem.1993，497-501中所述。線型肽可以，例如，按照R.B.Merrifield，Angew.Chemie 1985m，97，801-812進(jìn)行合成。
開鏈線型化合物例如式I化合物還可以用慣常的氨基酸和肽合成方法，例如，按照Merrifield(也見，例如，B.F.Gysin和R.B.Merrifie1d，J.Am.Chem.Soc.94，3012ff.(1972))的固相合成法制備。
式I化合物還可以通過溶劑解尤其水解或通過氫解而使其從其功能衍生物中釋放來獲得。
溶劑解或氫解用的優(yōu)選起始物質(zhì)是那些不含一個(gè)或多個(gè)游離氨基和/或羥基，而是含有相應(yīng)的被保護(hù)的氨基和/或羧基者，優(yōu)選是那些不攜帶與N原子鍵合的H原子而攜帶氨基保護(hù)基團(tuán)者，例如那些與式I對(duì)應(yīng)但不含NH2基團(tuán)而含有NHR’基團(tuán)(其中，R’是氨基保護(hù)基團(tuán)，例如BOC或CBZ團(tuán))者。
進(jìn)而，起始物質(zhì)優(yōu)選是那些不攜帶羥基的H原子而攜帶羥基保護(hù)基者，例如那些與式I對(duì)應(yīng)但不含羥苯基基團(tuán)而含有R”O(jiān)-苯基基團(tuán)(其中，R”是羥基保護(hù)基團(tuán))者。
在該起始物質(zhì)的分子中，也可以存在多個(gè)相同或不同的受保護(hù)氨基和/或羥基基團(tuán)。若所存在的保護(hù)基團(tuán)彼此不同，則在很多情況下它們可以選擇性地脫除。
“氨基保護(hù)基團(tuán)”這一表達(dá)是普遍知道的，而且涉及那些適用于保護(hù)(封閉)氨基基團(tuán)免于化學(xué)反應(yīng)但在該分子中其它位置上進(jìn)行了所希望的化學(xué)反應(yīng)之后可以容易地脫除的基團(tuán)。這種類型的典型基團(tuán)，具體地說，是無取代的或有取代的?；⒎蓟?、芳烷氧甲基或芳烷基基團(tuán)。由于保護(hù)基團(tuán)是在所希望的反應(yīng)(或反應(yīng)序列)之后脫除的，因而，其性質(zhì)和大小本來并不重要；然而，優(yōu)選的是那些有1-20個(gè)、尤其1-8個(gè)C原子者?！磅；鶊F(tuán)”之一表達(dá)要在最廣泛的意義上與本發(fā)明的工藝聯(lián)系起來解釋。它包括從脂肪族、芳脂族、芳香族或雜環(huán)族羧酸或磺酸衍生的酰基基團(tuán)，具體地說，也包括烷氧羰基、芳氧羰基、尤其芳烷氧羰基。這種類型的?；鶊F(tuán)實(shí)例是鏈烷?；缫阴；⒈；?、丁?；环纪轷；绫揭阴；?；芳?；绫郊柞；蚣谆郊柞；环佳趸溚轷；鏟OA；烷氧羰基例如甲氧羰基、乙氧羰基、2，2，2-三氯乙氧羰基、BOC、2-碘乙氧羰基；芳烷氧羰基例如CBZ(“芐酯基”)、4-甲氧基芐氧羰基、FMOC；芳基磺?；鏜tr、Pbf或Pmc。優(yōu)選的氨基保護(hù)基團(tuán)是BOC和Mtr，此外還有CBZ、Fmoc、芐基和乙?；?。
“羥基保護(hù)基團(tuán)”這一表達(dá)同樣是普遍知道的，而且涉及那些適用于保護(hù)羥基基團(tuán)免于化學(xué)反應(yīng)但在該分子中其它位置上已經(jīng)進(jìn)行了所希望的化學(xué)反應(yīng)之后可容易地脫除的基團(tuán)。這種類型的典型基團(tuán)是以上提到的無取代或有取代芳基、芳烷基或?；鶊F(tuán)，此外還有烷基基團(tuán)。該羥基保護(hù)基的性質(zhì)和大小并不重要，因?yàn)樗鼈冊(cè)谒Ｍ幕瘜W(xué)反應(yīng)或反應(yīng)序列之后還要脫除；優(yōu)選的是含有1-20個(gè)、尤其1-10個(gè)C原子的基團(tuán)。羥基保護(hù)基實(shí)例，除其它外，有芐基、對(duì)硝基芐基、對(duì)甲苯磺?；⑹宥』鸵阴；?，特別好的是芐基和叔丁基。天冬氨酸和谷氨酸中的COOH優(yōu)選以其叔丁酯的形式(例如Asp(OtBu))保護(hù)。
式I化合物從其功能衍生物中的釋放，因所使用的保護(hù)基團(tuán)而異，是諸如使用強(qiáng)酸、適宜地使用TFA或過氯酸、但也使用其它強(qiáng)無機(jī)酸例如鹽酸或硫酸、強(qiáng)有機(jī)羧酸例如三氯乙酸或磺酸例如苯磺或?qū)Ρ交撬徇M(jìn)行的。額外惰性溶劑的存在是可以的，但并非總是必要的。適用惰性溶劑優(yōu)選是有機(jī)溶劑，例如，羧酸如乙酸、醚如四氫呋喃或二噁烷、酰胺如DMF、鹵代烴如二氯甲烷，此外還有醇如甲醇、乙醇或異丙醇，以及水。此外，以上所述溶劑的混合物也是適用的。TFA優(yōu)選以過量使用而不添加進(jìn)一步的溶劑，過氯酸優(yōu)選以乙酸與70％過氯酸之比為9∶1的混合物形式使用。裂解反應(yīng)溫度適當(dāng)?shù)卦诖蠹s0℃與大約50℃之間，反應(yīng)優(yōu)選在15℃-30℃之間(室溫)進(jìn)行。
基團(tuán)BOC、OtBu和Mtr可以，例如，優(yōu)選用TFA在二氯甲烷中、或用大約3-5N HCl在二噁烷中于15-30℃脫除，F(xiàn)MOC基團(tuán)可以使用二甲胺、二乙胺或哌啶在DMF中的大約5-50％溶液于15-30℃脫除。
三苯甲基基團(tuán)用于組氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺和半胱氨酸等氨基酸的保護(hù)。因所希望的最終產(chǎn)物而異，脫除是用TFA/10％苯硫酚進(jìn)行的，三苯甲基基團(tuán)從以上提到的所有氨基酸上脫除；當(dāng)使用TFA/茴香醚、TFA/硫代茴香醚或TFA/TIPS/H2O時(shí)，三苯甲基基團(tuán)只從His、Asn和Gln上脫除，但仍留在Cys側(cè)鏈上。
Pbf(五甲基苯并呋喃基)基團(tuán)用于保護(hù)Arg。脫除是，例如，用TFA在二氯甲烷中進(jìn)行的。
可氫解脫除的保護(hù)基團(tuán)(例如CBZ或芐基)可以，例如，通過在一種催化劑(例如一種貴金屬催化劑如鈀，適當(dāng)?shù)剌d帶于一種載體如碳上)的存在下用氫處理來脫除。在這種情況下，適用溶劑是以上指出的那些，具體地說，例如，醇類如甲醇或乙醇，或酰胺類如DMF。通常，氫解是在大約0℃-100℃之間的溫度和大約1-200巴之間的壓力、優(yōu)選在10-30℃和1-10巴進(jìn)行。例如，CBZ基團(tuán)的氫解在甲醇中用5-10％Pd/C或者在甲醇/DMF中用甲酸銨(代替氫)和Pt/C于10-30℃容易地進(jìn)行。
式I的堿可以用一種酸，例如通過相當(dāng)量的該酸和該堿在一種惰性溶劑如乙醇中反應(yīng)和隨后的蒸發(fā)，轉(zhuǎn)化成相關(guān)的酸加成鹽?？捎糜诖朔磻?yīng)的酸，具體地說，是那些能給出生理上可接受鹽者。因此，可以使用無機(jī)酸例如硫酸、硝酸、氫鹵酸如鹽酸或氫溴酸、磷酸如正磷酸、氨基磺酸、此外還可以使用有機(jī)酸，具體地說，脂肪族、脂環(huán)族、芳脂族、芳香族或雜環(huán)的一元或多元羧酸、磺酸或硫酸，例如甲酸、乙酸、丙酸、新戊酸、二乙基乙酸、丙二酸、琥珀酸、戊二酸、富馬酸、馬來酸、乳酸、酒石酸、蘋果酸、檸檬酸、葡糖酸、抗壞血酸、煙酸、酸異煙酸、甲磺酸或乙磺酸、乙二磺酸、2-羥基乙磺酸、苯磺酸、對(duì)甲苯磺酸、萘-磺酸和萘二磺酸、十二烷基硫酸。與生理上不可接受酸的鹽例如苦味酸鹽可以用于式I化合物的分離和/或純化。
另一方面，式I的酸可以通過與一種堿反應(yīng)而轉(zhuǎn)化成其生理上可接受金屬鹽或銨鹽之一。在這種情況下，適用鹽具體地是鈉鹽、鉀鹽、鎂鹽、鈣鹽、銨鹽，以及有取代銨鹽例如二甲銨鹽、二乙銨鹽或二異丙銨鹽、一乙醇銨鹽、二乙醇銨鹽或二異丙醇銨鹽，環(huán)己基銨鹽或二環(huán)己基銨鹽，二芐基乙二銨鹽，進(jìn)而，例如，精氨酸或賴氨酸的鹽。
以上和以下所有溫度都用℃表示。在下列實(shí)施例中，“慣常后處理”系指必要時(shí)加水，必要時(shí)因最終產(chǎn)物的構(gòu)成而異把該混合物調(diào)整到2-10之間的pH且用乙酸乙酯或二氯甲烷萃取，將有機(jī)相分離、用硫酸鈉干燥、蒸發(fā)，殘?jiān)霉枘z色譜法和/或結(jié)晶法純化。硅膠柱的Rf值洗脫劑為乙酸乙酯/甲醇＝9∶1。
在下列系統(tǒng)中在HPLC上的RT＝保留時(shí)間(分鐘)[A]柱YMC ODS A RP 5C18，250×4.6mm洗脫劑A0.1％TFA水溶液洗脫劑B0.1％TFA乙腈溶液流動(dòng)速率1ml/min梯度0-50％B/30min。同[A]
梯度5-50％B/30min。同[A]；梯度10-50％B/30min。
質(zhì)譜法(MS)EI(電子撞擊電離)M+FAB(快原子轟擊)(M+H)+ESI(電噴電離)(M+H)+DMPP樹脂代表4-(2’，4’-二甲氧基苯基羥甲基)苯氧基樹脂，它使得能夠諸如合成有側(cè)鏈保護(hù)的肽；TCP樹脂系指三苯甲基氯-聚苯乙烯樹脂。
下列實(shí)施例一方面描述片段偶合和膦酸酯裂解，另一方面描述所選擇的有膦酸接頭的環(huán)狀肽衍生物的合成。借助于實(shí)施例7-9，詳細(xì)解釋了用金屬或骨骼代用材料制成的各種成形物品的涂布工藝。
實(shí)施例1溶液中的片段偶合將0.2mmol羧酸片段(膦酸衍接物，例如HO-[CO-(CH2)5-NH]2-Lys-[Lys-(CO-CH2-CH2-PO3(C2H5)2)2]2)，0.98eq HATU，1.1eq HOAT和10eq2，4，6-三甲基吡啶溶解于2mlDMF中。1.5小時(shí)后，添加1eq胺片段(環(huán)狀肽，例如c[R(Pbf)G(OtBu)fK])?；旌衔镌谑覝叵聰嚢?4小時(shí)，產(chǎn)物用制備型HPLC純化。
實(shí)施例2膦酸酯在膦酸接頭上裂解有膦酸酯基團(tuán)的肽溶解于或適當(dāng)時(shí)懸浮于無水CHCl3與TMSBr的10∶1混合物的超聲波浴中。在超聲波浴中攪拌3天且適當(dāng)時(shí)偶爾使沉淀物漿狀化之后，將溶劑蒸出。殘?jiān)鼉龈擅揌2O。
用慣常技術(shù)脫除酸性側(cè)鏈保護(hù)基團(tuán)。
實(shí)施例3膦酸接頭的合成按照Fmoe方法，用固相肽合成法合成了膦酸接頭(見G.B.Fields，R.L.Nobie，Int.J.Pept.ProteinRes.1990，35，161-214)。
偶合的最后一個(gè)結(jié)構(gòu)單元是3-(二乙基膦?；?丙酸。
3-(二乙基膦?；?丙酸的合成3-溴丙酸芐酯在一個(gè)配備氯化鈣管的250ml圓底燒瓶中，在攪拌下，使58.3mmol 3-溴丙酰氯(10.0g)和1eq芐醇(6.3g)溶解于100ml干燥DCM中。2天后，向該混合物中添加200ml CHCl3，有機(jī)相用飽和NaHCO3溶液萃取2次。用MgSO4干燥后蒸出溶劑，得到無色液體狀產(chǎn)品。
產(chǎn)率13.8g(56.8mmol，97％)Rf＝0.75(H∶EA 1∶1).NMR(CDCl3)1H(250MHz)δ＝7.35(s，5H；H ar)，5.16(s，2H；CH2-OCO)，3.58(t，3J(H，H)＝7Hz，2H；CH2Br)，2.95(t，3J(H，H)＝7Hz，2H；CH2CO).GC-MSm+＝242.0.
3-(二乙基磷酰基)丙酸芐酯在一個(gè)以壓力平衡用氣球密封的蒸餾裝置中，在攪拌下，將56.8mmol 3-溴丙酸芐酯(13.8g)和1.7eq亞磷酸三乙酯(16.0g)加熱到140℃。反應(yīng)期間生成的溴乙烷連續(xù)蒸出并收集在一冷卻到0℃的接收瓶中。4小時(shí)后，剩余的油狀殘留物在高真空下經(jīng)由Vigreux柱分餾；產(chǎn)物是無色油狀物。
產(chǎn)率12.1g(40.3mmol，71％)，稍有雜質(zhì)，Rf＝0.33(A∶H＝2∶3)。
為了提高純度，產(chǎn)物適當(dāng)時(shí)可用急驟色譜法(洗脫劑A∶H＝2∶3)純化。NMR(CDCl3)1H(250MHz)＝7.31(s，5H；H ar)，5.10(s，2H，CH2-OCO)，4.05(m，4H；CH2OP)，2.61(m，2H；CH2CO)，2.04(m，2H；CH2P)，1.26(t，3J(H，H)＝7Hz，6H；CH3).31P(101.256MHz)δ＝28.5(s).GC-MSm+＝300.0.
3-(二乙基膦?；?丙酸將40.3mmol 3-(二乙基膦酰基)丙酸芐酯(12.1g)溶解于100ml乙醇中，添加2g催化劑(5％Pd/C)。在H2氣氛下攪拌4小時(shí)后，把活性炭濾出、并蒸出溶劑。得到無色油狀產(chǎn)物，該產(chǎn)物在室溫下慢慢凝固成一種無色固體。該產(chǎn)物稍微沾染3-(二乙基膦?；?丙酸乙酯，后者適當(dāng)時(shí)可通過與水和乙烷一起搖蕩若干次而轉(zhuǎn)移到有機(jī)相中和去除。
產(chǎn)率8.2g(39.0mmol，97％).NMR(CDCl3)1H(250MHz)δ＝10.6O(bs，1H；COOH)，4.07(m，4H；CH2O)，2.59(m，2H；CH2CO)，2.06(m，2H；CH2P)，1.29(t，3J(H，H)＝7Hz，6H；CH3).13C(62.896MHz)δ＝174.5(d，J(C，P)＝18.5Hz；COOH)，62.1(d，J(C，P)＝6.6Hz；CH2-O)，27.1(d，J(C，P)＝3.8Hz；CH2-COOH)，2.07(d，J(C，P)＝144.9Hz；CH2-P)，16.2(d，J(C，P)＝6.1Hz；CH3).31P(101.256MHz)δ＝29.5(s).
有膦酸接頭的環(huán)狀肽的分析數(shù)據(jù)實(shí)施例4(間隔物中的2-氨基乙酸)環(huán)狀-(Arg-Gly-Asp-DPhe-Lys(NεH-[CO-(CH2)5-NH]2-Lys-[Lys-(CO-CH2-CH2-PO3H2)2]2))MS(ESI)m/z(％)1756.9(100)[m-H+]，1778.8(48)[m+Na+-2H+]，1794.9(18)[m+K+-2H+].NMR([D6]DMSO)31P(101.256MHz)δ＝29.63(s，1P)，29.59(s，1P)，29.57(s，1P)，29.38(s，1P).
實(shí)施例5(間隔物中的3-氨基己酸)環(huán)狀-(Arg-Gly-Asp-DPhe-Lys(NεH-[CO-(CH2)5-NH]3-Lys-[Lys-(CO-CH2-CH2-PO3H2)2]2))MS(ESI)m/z(％)934.9(100)[m-2H+]，1870.O(27)[m-H+].NMR([D6]DMSO)31P(101.256MHz)δ＝29.57(s，1P)，29.51(s，2P)，29.33(s，1P).
實(shí)施例6(間隔物中的2-七甘醇氨基羧酸)環(huán)狀-(Arg-Gly-Asp-DPhe-Lys(NεH-[CO-CH2(-O-CH2CH2)6-NH]2-Lys-[Lys-(CO-CH2-CH2-PO3H2)2]2))MS(ESI)m/z(％)1086.4(100)[m-2H+]，1097.7(73)[m+Na+-3H+].NMR([D6]DMSO)31P(101.256MHz)δ＝29.66(s，1P)，29.61(s，1P)，29.59(s，1P)，29.45(s，1P).
此外，以上提到的肽全部都用1H NMR譜法(250MHz)表征，并得到預(yù)期譜圖。
實(shí)施例7直徑10mm且高1-2mm的Ti或TiAl6V4成形物品用60℃蒸餾水于超聲波浴中預(yù)清洗15分鐘，然后用丙酮洗滌30分鐘，然后用蒸餾水洗滌2次，并在烘箱中干燥8小時(shí)。
將該成形物品轉(zhuǎn)移到48孔板(Costar公司，“所處理的非組織培養(yǎng)物”Art.No.3574)。為了使生物活性的細(xì)胞粘附介導(dǎo)分子B(其中，B可以是按照權(quán)利要求2的一種環(huán)狀肽、肽模擬物或線型肽)附著到所準(zhǔn)備的成形物品上，制備一種含有分子B的儲(chǔ)備溶液(“B溶液”)，使其在緩沖劑水溶液Tris-HCl(10mM，pH8.7)、Tris-HClO4(10mM，pH8.7)或PBS(pH7.4)之一中的最終濃度的1mM。然后，用PBS(pH7.4)稀釋，配制在每種情況下“B溶液”最終濃度為1nm、10nm、100nm、1μm、10μm和100μm的濃度系列。該成形物品每一個(gè)都覆蓋250μl各B溶液，然后在室溫下培養(yǎng)18-24小時(shí)。為了除去未結(jié)合的B分子，各樣品用PBS(pH7.4)洗滌3次，并在PBS(pH7.4)中于4℃貯存過程。
通過添加250μl 5％BSA(牛血清清蛋白)溶液(pH7.4)到每一個(gè)成形物品上、然后在室溫下培養(yǎng)2小時(shí)、用PBS(pH7.4)洗滌一次，使非特異性細(xì)胞結(jié)合位點(diǎn)封閉。
用對(duì)應(yīng)緩沖溶液(Tris-HCl 10mM，pH8.7；Tris-HClO410mM，pH8.7；PBS，pH7.4)代替B溶液處理的Ti和TiAl6V4成形物品用來作為陰性對(duì)照組。
這些成形物品上所得到涂層的程度通過分析進(jìn)行評(píng)價(jià)，生物學(xué)活性是借助于細(xì)胞粘附試驗(yàn)體外確定的。
實(shí)施例8通過切削出直徑10mm的圓柱體、隨后用Buehler ISOMET低速鋸鋸成厚度100μm，生產(chǎn)直徑10mm、高度100μm、作為天然骨骼代用材料模型的象牙狀物品。然后，這些樣品用60℃蒸餾水在超聲波浴中清洗10分鐘，此后用蒸餾水洗滌2次，在烘箱中干燥8小時(shí)。
用B溶液涂布成形物品的程序同實(shí)施例7中所述。
這些成形物品上所得到涂層的程度通過分析進(jìn)行評(píng)價(jià)，生物學(xué)活性是借助于細(xì)胞粘附試驗(yàn)體外確定的。
實(shí)施例9通過切削出直徑10mm的圓柱體、隨后用Buehler ISOMET低速鋸鋸成厚度100μm，生產(chǎn)直徑10mm、高度100μm、商業(yè)上可得骨骼代用材料Endobone(購自Biomet Merek公司，德國)的成形物品。然后，這些樣品用60℃蒸餾水在超聲波浴中清洗10分鐘，此后用蒸餾水洗滌2次，在烘箱中干燥8小時(shí)。
這些成形物品上所得到涂層的程度通過分析進(jìn)行評(píng)價(jià)，生物學(xué)活性是借助于細(xì)胞粘附試驗(yàn)體外確定的。
細(xì)胞粘附試驗(yàn)實(shí)施例研究了小鼠MC3T3 H1成骨細(xì)胞培養(yǎng)物在體外條件下對(duì)有RGD肽涂層的材料表面的粘附。在這種試驗(yàn)中，接種50000細(xì)胞/cm2，并在無血清培養(yǎng)基中于37℃/95％大氣濕度下培養(yǎng)1小時(shí)之后確定粘附細(xì)胞的比例。
細(xì)胞粘附率[％]＝粘附細(xì)胞/接種細(xì)胞×100肽細(xì)胞粘附率[％]環(huán)狀-(Arg-Gly-Asp-DPhe-Lys(NεH-[CO-(CH2)5-NH]2-Lys-[Lys-(CO-CH2-CH2-PO3H2)2]2))75環(huán)狀-(Arg-Gly-Asp-DPhe-Lys(NεH-[CO-(CH2)5-NH]3-Lys-[Lys-(CO-CH2-CH2-PO3H2)2]2))6權(quán)利要求
1.式I化合物及其鹽B-Q-X1I式中B是一種生物活性的細(xì)胞粘附介導(dǎo)分子，Q不存在或者是一種有機(jī)間隔分子，和X1是一種錨固分子，選自基團(tuán)-Lys-(CO-CH2-(CH2)n-PO3H2)2(i)-Lys-[Lys-(CO-CH2-(CH2)n-PO3H2)2]2(ii)或-Lys-(Lys[-Lys-(CO-CH2-(CH2)n-PO3H2)2]2)2(iii)，且n在每種情況下都彼此獨(dú)立地是0、1、2或3，其中，基團(tuán)B的一個(gè)游離氨基和間隔分子Q或錨固分子X1的一個(gè)游離羧基，或者基團(tuán)Q的一個(gè)游離氨基和基團(tuán)X1的一個(gè)游離羧基彼此像肽一樣連接。
2.按照權(quán)利要求1的化合物，其中，基團(tuán)B選自基團(tuán)環(huán)狀-(Arg-Gly-Asp-Z1) (iv) 和Thr-Trp-Tyr-Lys-Ile-Ala-Phe-Gln-Arg-Asn-Arg-Lys (vi)Trp-Tyr-Lys-Ile-Ala-Phe-Gln-Arg-Asn-Arg-Lys (vii)Tyr-Lys-Ile-Ala-Phe-Gln-Arg-Asn-Arg-Lys (viii)Thr-Trp-Tyr-Lys-Ile-Ala-Phe-Gln-Arg-Asn-Arg (ix)Thr-Trp-Tyr-Lys-Ile-Ala-Phe-Gln-Arg-Asn (x)Thr-Trp-Tyr-Lys-Ile-Ala-Phe-Gln-Arg (xi)式中Z1在每種情況下都彼此獨(dú)立地是一種氨基酸殘基或一種二肽或三肽殘基，其中，該氨基酸彼此獨(dú)立地選自下列組成的一組Ala，Asn，Asp，Arg，Cys，Gln，Glu，Gly，His，Homo-Phe，Ile，Leu，Lys，Met，Orn，Phe，Phg，Pro，Ser，Thr，Trp，Tyr，Val，其中，對(duì)于(v)來說X是H2N-C(＝NH)-NH，Het-NH-，H2N-C(＝NH)-，A-C(＝NH)-NH-或Het-，Y是-(CH2)n-或 -(CH2)s-CH(R4)-(CH2)t-或-(CH2)p-Het1(CH2)q-，Z是N-R2或CH-R2，R2是H或有1-4個(gè)C原子的烷基，R3是H，Ar，Het或A，R4是H，A，Ar，OH，OA，OAr，芳烷基，Hal，CN，NO2，CF3或OCF3，A是COOH、NH2、或者有1-6個(gè)C原子的無取代或被COOH或NH2取代的烷基，Ar是無取代的或者被A、OH、OA、CF3、OCF3、CN、NO2或Hal一取代、二取代或三取代的苯基，該苯基還可以被苯基以能產(chǎn)生一種無取代或有取代的聯(lián)苯基這樣一種方式取代，后一個(gè)苯基被A、OH、OA、NH2、OCF3、CN、NO2或Hal一取代、二取代或三取代，Hal是F、Cl、Br或I，Het是一種飽和的、部分不飽和的或完全不飽和的單環(huán)式或雙環(huán)式的有5-10元的雜環(huán)基，其中可以存在1-3個(gè)N和/或1個(gè)S或O原子，且該雜環(huán)基可以被CN、Hal、OH、NH2、COOH、OA、CF3、A、NO2、Ar或OCF3一取代或二取代，Het1是一種有1-4個(gè)N和/或S原子的5元或6元芳香族雜環(huán)，該雜環(huán)可以是無取代的或者被F、Cl、Br、A、OA或OCF3一取代或二取代，n是4，5或6，m，o，p，q是0，1或2，s，t是0，1，2，3，4或5
3.按照權(quán)利要求1或2的化合物，其中，Q選自基團(tuán)[CO-(CH2)x-NH-]m， (xii)[CO-CH2(-O-CH2CH2)y-NH-]m(xiii)[CO-(CH2)z-CO-](xiv)[NH-(CH2)z-NH-](xv)[CO-CH2-(OCH2CH2)y-O-CH2-CO-](xvi)[NH-CH2CH2-(OCH2CH2)y-NH-] (xvii)及其組合其中，m在每種情況下都彼此獨(dú)立地是1-20，x是1-12，y是1-50且z是1-12。
4.按照權(quán)利要求1或2的化合物，其中，Q選自基團(tuán)[CO-(CH2)x-NH-]m， (xviii)[CO-CH2(-O-CH2CH2)y-NH-]m(xix)[CO-(CH2)z-CO-] (xx)[NH-(CH2)z-NH-] (xxi)[CO-CH2-(OCH2CH2)y-O-CH2-CO-] (xxii)[NH-CH2CH2-(OCH2CH2)y-NH-](xxiii)及其組合其中m在每種情況下都彼此獨(dú)立地是1-8，x是1-5，y是1-6且z是1-6。
5.按照權(quán)利要求1的式1[sic]化合物a)環(huán)狀-(Arg-Gly-Asp-DPhe-Lys(NεH-[CO-(CH2)5-NH]2-Lys-[Lys-(CO-CH2-(CH2)n-PO3H2)2]2))；b)環(huán)狀-(Arg-Gly-Asp-DPhe-Lys(NεH-[CO-(CH2)5-NH]3-Lys-[Lys-(CO-CH2-(CH2)n-PO3H2)2]2))；c)環(huán)狀-(Arg-Gly-Asp-DPhe-Lys(NεH-[CO-CH2(-O-CH2CH2)6-NH]2-Lys-[Lys-(CO-CH2-(CH2)n-PO3H2)2]2))；其中n是1。
6.按照權(quán)利要求1-5之一的化合物，作為藥劑，用于治療植入物引起的疾病、缺陷和炎癥，治療溶骨性疾病例如骨質(zhì)疏松癥、血栓形成、心肌梗塞和動(dòng)脈硬化，也用于加速和增強(qiáng)植入物或生物相容性表面整合到組織中的過程。
7.適用于人體和動(dòng)物器官的植入物，由一種載體基質(zhì)和圍繞這種基質(zhì)的一層生物活性的細(xì)胞粘附介導(dǎo)分子組成，其特征在于，該圍繞層是從按照權(quán)利要求1-5的化合物形成的，在載體基質(zhì)與這種化合物之間存在一種離子鍵或吸附鍵。
8.按照權(quán)利要求7的植入物，其特征在于，該載體基質(zhì)和/或其表面是一種金屬或一種金屬氧化物。
9.按照權(quán)利要求7的植入物，其特征在于，該載體基質(zhì)和/或其表面是一種骨骼或牙齒代用材料。
10.按照權(quán)利要求9的植入物，其特征在于，該骨骼或牙齒代用材料由磷酸鈣混合物組成。
11.按照權(quán)利要求1的化合物及其鹽的制備工藝，其特征在于，使一種可以被提供保護(hù)基團(tuán)的生物活性分子B與一種提供了保護(hù)基團(tuán)的間隔-錨固分子(Q-X1)或錨固分子(X1)彼此以肽方式連接，然后脫除該保護(hù)基團(tuán)，和/或在于，使式I的堿性或酸性化合物通過用一種酸或堿處理而轉(zhuǎn)化成其鹽之一。
12.按照權(quán)利要求1-5之一的化合物在制造一種藥物中的用途，該藥物用于治療植入物引起的疾病、缺陷和炎癥，治療溶骨性疾病例如骨質(zhì)疏松癥、血栓形成、心肌梗塞和動(dòng)脈硬化，也用于加速和增強(qiáng)植入物或生物相容性表面整合到組織中的過程。
13.按照權(quán)利要求1-5之一的化合物用于通過離子型或吸附型結(jié)合而涂布人體和動(dòng)物器官的植入物的用途。
全文摘要
本發(fā)明涉及式(I)B－Q－X
文檔編號(hào)A61P19/10GK1447699SQ01814238
公開日2003年10月8日 申請(qǐng)日期2001年8月2日 優(yōu)先權(quán)日2000年8月17日
發(fā)明者J·邁爾, B·尼斯, M·達(dá)爾, G·霍爾茨曼, H·凱斯勒, M·康德萊納, U·埃爾澤爾, C·吉布森, G·蘇爾約克 申請(qǐng)人:默克專利股份公司