專利名稱：作為中性內(nèi)肽酶的抑制劑的環(huán)戊基－取代的戊二酰胺衍生物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及中性內(nèi)肽酶(NEP)的抑制劑、其用途、其制備方法、用于其制備中的中間體以及含有所述抑制劑的組合物。這些抑制劑在多種治療領(lǐng)域具有應用價值，包括治療女性性功能障礙(FSD)，特別是女性性覺醒紊亂(female sexual arousal disorder，F(xiàn)SAD)。
NEP抑制劑公開于WO 91/07386和WO 91/10644。
按照第一個方面，本發(fā)明提供了式(I)的化合物、其藥用鹽、溶劑化物、多晶型物或前藥在制備治療女性性功能障礙的藥物中的用途； 其中R1是C1-6烷基，其可以被一個或多個取代基取代，取代基可以相同或不同，選自鹵素、羥基、C1-6烷氧基、C2-6羥基烷氧基、C1-6烷氧基(C1-6烷氧基)、C3-7環(huán)烷基、C3-7環(huán)烯基、芳基、芳氧基、(C1-4烷氧基)芳氧基、雜環(huán)基、雜環(huán)基氧基、-NR2R3、-NR4COR5、-NR4SO2R5、-CONR2R3、-S(O)pR6、-COR7和-CO2(C1-4烷基)；或R1是C3-7環(huán)烷基、芳基或雜環(huán)基，它們各自可以被上述一個或多個取代基取代，這些取代基可以相同或不同，其中還包括C1-6烷基；或R1是C1-6烷氧基、-NR2R3或-NR4SO2R5；其中R2和R3各自獨立地是H、C1-4烷基、C3-7環(huán)烷基(任選地被羥基或C1-4烷氧基取代)、芳基、(C1-4烷基)芳基、C1-6烷氧基芳基或雜環(huán)基；或R2和R3與它們連接的氮原子一起形成吡咯烷基、1-哌啶基、4-嗎啉基、哌嗪基或N-(C1-4烷基)哌嗪基；R4是H或C1-4烷基；R5是C1-4烷基、CF3、芳基、(C1-4烷基)芳基、(C1-4烷氧基)芳基、雜環(huán)基、C1-4烷氧基或-NR2R3，其中R2和R3定義如上；R6是C1-4烷基、芳基、雜環(huán)基或NR2R3，其中R2和R3定義如上；而R7是C1-4烷基、C3-7環(huán)烷基、芳基或雜環(huán)基；p是0、1、2或3；n是0、1或2；-(CH2)n-連接任選地被如下基團取代C1-4烷基、被一個和多個氟原子或苯基取代的C1-4烷基、C1-4烷氧基、羥基、羥基(C1-3烷基)、C3-7環(huán)烷基、芳基或雜環(huán)基；Y是如下基團 其中A是-(CH2)q-，其中q是1、2、3或4以完成3至7元碳環(huán)，其可以是飽和或不飽和的；R8是H、C1-6烷基、-CH2OH、苯基、苯基(C1-4烷基)或CONR11R12；R9和R10各自獨立地是H、-CH2OH、-C(O)NR11R12、C1-6烷基、苯基(任選地被C1-4烷基、鹵素或C1-4烷氧基取代)、或苯基(C1-4烷基)(其中苯基任選地被C1-4烷基、鹵素或C1-4烷氧基取代)，或R9和R10一起形成二氧雜環(huán)戊烷；R11和R12，其可以相同或不同，是H、C1-4烷基、R13或S(O)rR13，其中r是0、1或2，而R13是任選地被C1-4烷基取代的苯基或者其中苯基任選地被C1-4烷基取代的苯基C1-4烷基；或者Y是基團-C(O)NR11R12，其中R11和R12定義如上，但R11和R12不都是H；或者Y是基團， 其中R14是H、CH2OH、或C(O)NR11R12，其中R11和R12定義如上；當存在時，R15可以與任何另一個R15相同或不同，是OH、C1-4烷基、C1-4烷氧基、鹵素或CF3；t是0、1、2、3或4；而R16和R17獨立地是H或C1-4烷基；或者Y是基團 其中B、D、E或F中的一個或兩個是氮原子，其它是碳原子；而R14至R17和t定義如上；或者Y是任選地被取代的5-7員雜環(huán)，其可以是飽和的、不飽和的或芳族的并含有氮原子、氧原子或硫原子，且任選地在該環(huán)中含有一個、兩個或三個其它氮原子，且其可以任選地是苯并稠合的并任選地被如下基團取代C1-6烷氧基；羥基；氧代基團；氨基；一或二-(C1-4烷基)氨基；C1-4烷酰基氨基；或C1-6烷基，其可以被一個或多個取代基取代，取代基可以相同或不同，選自；C1-6烷氧基、C1-6鹵代烷氧基、C1-6烷硫基、鹵素、C3-7環(huán)烷基、雜環(huán)基或苯基；或者C3-7環(huán)烷基、芳基或雜環(huán)基，其各自可以被一個或多個取代基取代，取代基可以相同或不同，選自；C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6鹵代烷氧基、C1-6烷硫基、鹵素、C3-7環(huán)烷基、雜環(huán)基或苯基；
其中當該雜環(huán)上存在氧代基團取代時，該環(huán)只含有一個或兩個氮原子且此氧代取代在該環(huán)中氮原子的鄰位；或者Y是-NR18S(O)uR19，其中R18是H或C1-4烷基；R19是芳基、芳基C1-4烷基或雜環(huán)基(優(yōu)選吡啶基)；而u是0、1、2或3。
式I的一些化合物公開于WO 91/10664和WO 91/07386，但是沒有教導它們可以用于治療女性性功能障礙。其余的式I化合物是新的。
因此，按照本發(fā)明的第二個方面，本發(fā)明提供了(新的)式(I)的化合物、其藥用鹽、溶劑化物、多晶型物或前藥，其中R1、n和Y定義如第一個方面，其條件是Y不是基團-C(O)NR11R12，且當R1是丙基或苯乙基時，R14不是-CH2OH。
按照本發(fā)明的第三個方面，本發(fā)明提供了(新的)式(I)的化合物、其藥用鹽、溶劑化物、多晶型物或前藥，其中R1、n和Y定義如第一個方面，其條件是Y不是基團-C(O)NR11R12，且R14不是H或-CH2OH。
在上述定義中，除非另行指出，具有三個或多個碳原子的烷基可以是直鏈或支鏈。術(shù)語芳基在本文中指芳族烴基如苯基或萘基，其可以任選地被如下基團取代，例如，一個或多個OH、CN、CF3、C1-C4烷基、C1-C4烷氧基、鹵素、氨基甲?；?、氨基磺酰基、氨基、一或二(C1-C4烷基)氨基或(C1-C4烷醇)氨基。
鹵素指氟、氯、溴或碘。
在上述定義中，除非另行說明，術(shù)語雜環(huán)基指5或6員含氮原子、氧原子或硫原子的雜環(huán)基團，除非另行說明，其可以是飽和的、不飽和的或芳族的，且其在該環(huán)上還可以任選地包括其它氧原子或一至三個氮原子，且其可以任選地苯并稠合或被如下基團取代，例如，一個或多個鹵素、C1-C4烷基、羥基、氨基甲?；?、芐基、氧代基團、氨基或一或二-(C1-C4烷基)氨基或(C1-C4烷醇)氨基。雜環(huán)的特別實例包括吡啶基、吡啶酮基、吡嗪基、嘧啶基、噠嗪基、吡咯基、咪唑基、吡唑基、三唑基、四唑基、呋喃基、四氫呋喃基、四氫吡喃基、二惡烷基、噻吩基、惡唑基、異惡唑基、噻唑基、惡二唑基、噻二唑基、吲哚基、異吲哚啉基、喹啉基、異喹啉基、喹喔啉基、喹唑啉基和苯并咪唑基，各自可以如上所述任選地被取代。
優(yōu)選的R1取代基是C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷氧基(C1-3)烷基、C1-6烷氧基C1-6烷氧基C1-3烷基或者被芳基取代的C1-6烷基。
更優(yōu)選的R1取代基是C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷氧基(C1-3)烷基(優(yōu)選甲氧基乙基)或C1-6烷氧基C1-6烷氧基C1-3烷基(優(yōu)選甲氧基乙氧基甲基)。
仍更優(yōu)選的R1取代基是C1-4烷基(優(yōu)選丙基)和C1-6烷氧基(C1-3)烷基(優(yōu)選甲氧基烷基，更優(yōu)選甲氧基乙基)。
當Y是下式基團 且該碳環(huán)是完全飽和的時，則優(yōu)選R9或R10之一是-CH2OH；-C(O)NR11R12；C1-6烷基；任選地被C1-4烷基取代的苯基；或苯基(C1-4烷基)，其中該苯基任選地被C1-4烷基取代。此外，優(yōu)選該碳環(huán)是5、6或7員，其中R9或R10之一是-C(O)NR11R12，另一個是C1-6烷基；任選地被C1-4烷基的苯基；或苯基(C1-4烷基)，其中該苯基任選地被C1-4烷基取代。更優(yōu)選，R9和R10與該環(huán)中的相鄰碳原子連接。更優(yōu)選R8是CH2OH。
當Y是基團-NR18S(O)uR19時，優(yōu)選R18是H。更優(yōu)選，R19是芐基或苯基。更優(yōu)選u是2。
優(yōu)選Y是任選地被取代的5-7員雜環(huán)。更優(yōu)選該環(huán)是任選地被取代的芳環(huán)，特別是吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、噠嗪基、吡唑基、三唑基、四唑基、惡二唑基、噻唑基、噻二唑基、惡唑基、異惡唑基、吲哚基、異吲哚啉基、喹啉基、異喹啉基、吡啶酮基、喹喔啉基或喹唑啉基[特別是惡二唑(優(yōu)選1，2，5-或1，3，4-惡二唑)、吡啶酮(優(yōu)選2-吡啶酮)或噻唑(優(yōu)選1，3，4-噻唑)]，其各自可以如第一方面所述被取代。優(yōu)選該雜環(huán)被一個或多個C1-6烷基、苯基或苯基C1-4烷基取代，更優(yōu)選被C1-4烷基或芐基取代。優(yōu)選Y是N-取代的吡啶酮，優(yōu)選被芐基或C1-4烷基取代。
優(yōu)選Y是在氮原子連接的內(nèi)酰胺。
優(yōu)選Y是 其中R14優(yōu)選CH2OH或C(O)NR11R12，特別是C(O)NR11R12。
優(yōu)選R16和R17是氫原子。優(yōu)選t是0。
優(yōu)選的化合物是式Ie 特別優(yōu)選的本發(fā)明的化合物是2-[(1-{(1-芐基-6-氧代-1，6-二氫-3-吡啶基)氨基]羰基}環(huán)戊基)-甲基]-4-甲氧基丁酸(實施例35)；2-{[1-({[3-(2-氧代-1-吡咯烷基)-丙基]氨基}羰基環(huán)戊基]-甲基}-4-苯基丁酸(實施例40)；(+)-2-{[1-({[2-(羥基甲基)-2，3-二氫-1H-茚-2-基]氨基}羰基)環(huán)戊基]甲基}-4-苯基丁酸(實施例44)；2-[(1-{[(5-甲基-1，3，4-噻二唑-2-基)氨基]羰基}環(huán)戊基)甲基]-4-苯基丁酸(實施例43)；順-3-(2-甲氧基乙氧基)-2-[(1-{[(4-{[(苯基磺?；?氨基]羰基}環(huán)己基)氨基]羰基}環(huán)戊基)甲基]丙酸(實施例38)；
(+)-2-{[1-({[2-(羥基甲基)-2，3-二氫-1H-茚-2-基]氨基}羰基)環(huán)戊基]-甲基}戊酸(實施例31)；(2R)-2-[(1-{[(5-乙基-1，3，4-噻二唑-2-基)氨基]羰基}環(huán)戊基)-甲基]戊酸或(-)-2-[(1-{[(5-乙基-1，3，4-噻二唑-2-基)氨基]羰基}環(huán)戊基)-甲基]戊酸(實施例29)；(2S)-2-[(1-{[(5-乙基-1，3，4-噻二唑-2-基)氨基]羰基}環(huán)戊基)-甲基]戊酸或(+)-2-[(1-{[(5-乙基-1，3，4-噻二唑-2-基)氨基]羰基}環(huán)戊基)-甲基]戊酸(實施例30)；2-({1-[(3-芐基苯氨基)羰基]環(huán)戊基}甲基)戊酸(實施例21)；2-[(1-{[1-(芐基-6-氧代-1，6-二氫-3-吡啶基)氨基]羰基}環(huán)戊基)-甲基]戊酸(實施例22)；2-{[1-({[(1R，3S，4R)-4-(氨基羰基)-3-丁基環(huán)己基]氨基}羰基)-環(huán)戊基)甲基}戊酸(實施例9)；反式-3-[1-({[2-(4-氯苯基)環(huán)丙基]氨基}羰基)環(huán)戊基]-2-(甲氧基甲基)丙酸(實施例46)；反式-3-[1-({[2-(4-甲氧基苯基)環(huán)丙基]氨基}羰基)環(huán)戊基]-2-(甲氧基乙基)丙酸(實施例47)；反式-3-[1-({[2-戊基環(huán)丙基]氨基}羰基)環(huán)戊基]-2-(甲氧基乙基)丙酸(實施例48)；3-[1-({[5-芐基-[1，3，4]-噻二唑-2-基]氨基}羰基)環(huán)戊基]-2-(甲氧基乙基)丙酸(實施例49)；3-[1({[4-丁基吡啶-2-基]氨基}羰基)環(huán)戊基]-2-(甲氧基乙基)丙酸(實施例50)；3-[1-({[4-苯基吡啶-2-基]氨基}羰基)環(huán)戊基]-2-(甲氧基乙基)丙酸(實施例51)；3-[1-({[1-羥基甲基-3-苯基環(huán)戊基]氨基}羰基)環(huán)戊基]-2-(甲氧基乙基)丙酸(實施例52)；2-{[1-({[2-(羥基甲基)-2，3-二氫-1H-茚-2-基]氨基}羰基)-環(huán)戊基]甲基}-4-甲氧基丁酸(實施例53)；
反式-3-[1-({[2-苯基環(huán)丙基]氨基}羰基)環(huán)戊基]-2-(甲氧基乙基)丙酸(實施例54)；(R)-2-{[1-({[2-(羥基甲基)-2，3-二氫-1H-茚-2-基]氨基}羰基)-環(huán)戊基]甲基}-4-甲氧基丁酸(實施例55)；及(S)-2-{[1-({[2-(羥基甲基)-2，3-二氫-1H-茚-2-基]氨基}羰基)-環(huán)戊基]甲基}-4-甲氧基丁酸(實施例56)。
為了避免歧義，除非另行說明，術(shù)語“被取代”指被一個或多個所定義的基團取代。在可以從一些供選擇的基團中選擇的基團中，所選擇的基團可以相同或不同。
為了避免歧義，術(shù)語“獨立地”指當一個以上的取代基選自一些可能的取代基時，這些取代基可以相同或不同。
含有堿性中心的式I化合物的藥用或獸藥用鹽是，例如，與無機酸如鹽酸、氫溴酸、氫碘酸、硫酸和磷酸形成的無毒酸加成鹽，與羧酸或與有機磺酸形成的酸加成鹽。實例包括鹽酸鹽、氫溴酸鹽、氫碘酸鹽、硫酸鹽或硫酸氫鹽、硝酸鹽、磷酸鹽或磷酸氫鹽、乙酸鹽、苯甲酸鹽、琥珀酸鹽、糖質(zhì)酸鹽、富馬酸鹽、馬來酸鹽、乳酸鹽、桔櫞酸鹽、酒石酸鹽、葡萄糖酸鹽、樟腦磺酸鹽、甲磺酸鹽、乙磺酸鹽苯磺酸鹽、對甲苯磺酸鹽和雙羥萘酸鹽。本發(fā)明的化合物還可以與堿提供藥用或獸藥用金屬鹽，特別是無毒堿金屬鹽和堿土金屬鹽。實例包括鈉、鉀、鋁、鈣、鎂、鋅、二醇胺(diolamine)、醇胺(olamine)、亞乙基二胺、氨丁三醇、膽堿、甲葡胺(megulamine)和二乙醇胺的鹽。對適宜的藥用鹽的綜述見Berge等，J.Pharm，Sci.，66，1-19，1977；P L Gould，International Journal of Pharmaceutics，33(1986)，201-217；和Bighley等，Encyclopedia of PharmaceuticalTechnology，Marcel Dekker Inc，New York 1996，13卷，453-497頁。優(yōu)選的鹽是鈉鹽。
本發(fā)明化合物的藥用溶劑化物包括其水合物。
下文中，本發(fā)明任何方面中限定的化合物、其藥用鹽、其溶劑化物及多晶型物(除了化學方法中的中間體化合物(被稱為“本發(fā)明的化合物”。
本發(fā)明的化合物可以具有一個或多個手性中心并因此存在一些立體異構(gòu)形式。所有的立體異構(gòu)體及其混合物包括在本發(fā)明的范圍內(nèi)。按照本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的方法，用制備HPLC和帶有手性固定相的柱可以分離或拆分外消旋化合物，得到單一的對映體。此外，可以拆分手性中間體化合物，并用來制備本發(fā)明的手性化合物。
在本發(fā)明的化合物以E和Z異構(gòu)體存在的情況下，本發(fā)明包括單一的異構(gòu)體及其混合物。
在本發(fā)明的化合物以互變異構(gòu)體的形式存在的情況下，本發(fā)明包括單一的互變異構(gòu)體及其混合物。
在本發(fā)明的化合物以旋光異構(gòu)體存在的情況下，本發(fā)明包括單一的異構(gòu)體及其混合物。
在本發(fā)明的化合物以非對映異構(gòu)體形式存在的情況下，本發(fā)明包括單一的非對映異構(gòu)體及其混合物。
非對映異構(gòu)體或者E和Z異構(gòu)體的分離，可以通過常規(guī)技術(shù)來實現(xiàn)，例如，通過分級結(jié)晶、色譜和H.P.L.C(見本文中實施例29和30)。本發(fā)明化合物或中間體的單一對映體可以有相應的光學純中間體來制備，或者通過使用適宜的手性載體拆分(例如，通過H.P.L.C)相應的外消旋體來制備，或者如果適當通過將相應的外消旋體與適宜的旋光活性堿反應形成的非對映異構(gòu)鹽分級結(jié)晶來制備。優(yōu)選的旋光活性堿是假麻黃鹼(見本文中制備例2)。
本發(fā)明的化合物可以以一種或多種互變異構(gòu)的形式存在。所有的互變異構(gòu)體及其混合物包括在本發(fā)明的范圍內(nèi)。例如，對2-羥基吡啶基的保護將也包括其互變異構(gòu)形式α-吡啶酮基。
本領(lǐng)域技術(shù)人員應領(lǐng)會一些被保護的本發(fā)明化合物的衍生物，其可能在最終脫保護階段前制備，本身可能不具有藥學活性，但是在某些情況下可以口服或非腸道給藥，并在此后在體內(nèi)代謝形成具有藥理學活性的本發(fā)明的化合物。因此，可以將這樣的衍生物描述為“前藥”。此外，本發(fā)明的某些化合物可以作為本發(fā)明其它化合物的前藥。
本發(fā)明化合物的所有被保護的衍生物和前藥包括在本發(fā)明的范圍內(nèi)。本發(fā)明化合物的適宜的前藥的實例描述于Drugs of Today，第19卷，第9期，1983，499-538頁和Topics in Chemistry，第31章，306-316頁以及“Design of Prodrugs”，H.Bundgaard編，Elsevier，1985，第1章(這些文獻中的公開內(nèi)容引入本文作為參考)。
本領(lǐng)域技術(shù)人員還應領(lǐng)會，被本領(lǐng)域技術(shù)人員看做“前體部分(pro-moieties)”的某些部分，例如，H.Bundgaard的“Design ofProdrugs”所述(該文獻的公開內(nèi)容引入本文作為參考)可以置于適當?shù)墓倌軋F上，當本發(fā)明的化合物中存在這樣的官能團時。
本發(fā)明化合物優(yōu)選的前藥包括酯、碳酸酯、半酯、磷酸酯、硝酸酯、硫酸酯、亞砜、酰胺、氨基甲酸酯、偶氮化合物、磷酰胺、糖甙、醚、縮醛和縮酮。
藥物代謝研究已表明，在體內(nèi)，式I的化合物可以形成式XXIII的化合物，這樣的化合物也是NEP的抑制劑。 具體地講，我們已發(fā)現(xiàn)(2R)-2-[(1-{[(5-乙基-1，3，4-噻二唑-2-基)氨基]羰基}環(huán)戊基)甲基]戊酸(實施例29)在體內(nèi)形成(2R)-1-(2-{[(5-乙基-1，3，4-噻二唑-2-基)氨基]羰基}戊基)-環(huán)戊烷甲酸。
本發(fā)明還包括本發(fā)明化合物的所有適宜的同位素變體。同位素變體定義為其中至少一個原子被具有相同原子序數(shù)但原子量彼此不同的、通常在自然界發(fā)現(xiàn)的原子代替的一種物質(zhì)?？梢該饺氡景l(fā)明化合物中的同位素的實例包括氫、碳、氮、氧、磷、硫和氯的同位素，分別如2H、3H、13C、14C、15N、17O、18O、31P、32P、35S、18F和36Cl。本發(fā)明的某些同位素變體，例如，摻入放射性同位素如3H或14C的那些，用于藥物和/或底物組織分布研究。氚代即3H和碳-14即14C同位素是特別優(yōu)選的，這是由于其易于制備和檢測。此外，用氘即2H取代，由于較大的代謝穩(wěn)定性可以帶來某些治療優(yōu)越性，例如，升高的體內(nèi)半衰期或降低劑量的要求，并因此在某些情況下可以是優(yōu)選的。本發(fā)明的化合物的同位素變體一般可以通過常規(guī)方法制備，例如，通過下文中實施例和制備例中描述的方法或者制備方法，使用適宜試劑的適當?shù)耐凰刈凅w。
本發(fā)明的化合物是鋅依賴性、中性內(nèi)肽酶EC.3.4.24.11.的抑制劑，并推測本發(fā)明的化合物能夠治療下述疾病。該酶參與一些生物活性寡肽的裂解，裂解疏水氨基酸殘基的氨基側(cè)鏈上的肽鍵。此類形式代謝的肽包括心鈉素(ANP)、鈴蟾肽、緩激肽、降鈣素基因相關(guān)肽、內(nèi)皮肽、腦啡肽、神經(jīng)降壓素、P物質(zhì)和血管活性腸肽。其中一些肽類具有強的血管舒張作用和神經(jīng)激素功能、利尿和促尿鈉排泄活性或調(diào)節(jié)行為的作用。因此，本發(fā)明的化合物通過抑制中性內(nèi)肽酶EC.3.4.24.11，可以加強生物活性肽的生物作用。
因此，具體地講，這些化合物在治療如下疾病中具有應用價值，包括高血壓、心力衰竭、、心絞痛、腎功能不全、急性腎衰竭、循環(huán)性水腫(cyclical oedema)、梅尼埃爾氏病、醛甾酮過多癥(原發(fā)的和繼發(fā)的)和尿鈣過多。此外，由于它們加強ANF作用的能力，這些化合物在治療青光眼中具有應用價值。作為它們抑制中性內(nèi)肽酶E.C.3.4.24.11的能力的進一步結(jié)果，本發(fā)明的化合物在其它治療領(lǐng)域具有活性，例如，包括治療月經(jīng)失調(diào)、早產(chǎn)、子癇前期、子宮內(nèi)膜異位和生殖紊亂(特別是男性和女性不育癥、多囊性卵巢綜合征、移植失敗)。另外，本發(fā)明的化合物可以治療哮喘、炎癥、白血病、疼痛、癲癇、情感紊亂、癡呆和老年性精神錯亂、肥胖和胃腸道紊亂(特別是腹瀉和應激性腸綜合征)、傷口愈合(特別是耱尿病和靜脈潰瘍和褥瘡)、膿毒性休克、胃酸分泌的調(diào)節(jié)，治療血血管緊張肽原酶過多、胰囊性纖維變性、再狹窄、糖尿病并發(fā)癥和動脈粥樣硬化。在優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明的化合物用于治療女性性功能障礙(FSD)優(yōu)選FSAD。
應領(lǐng)會本文中治療包括治愈、減輕和預防治療。
我們已發(fā)現(xiàn)本發(fā)明的化合物抑制中性內(nèi)肽酶。因此，按照另一個方面，本發(fā)明提供了本發(fā)明化合物在制備治療或預防其中通過抑制中性內(nèi)肽酶可以獲得有益的治療反應的病癥的藥物中的用途。
按照本發(fā)明，F(xiàn)SD可以定義為在性欲表達中女性難以或不能達到性滿足。FSD是若干不同女性性紊亂的集合術(shù)語(Leiblum，S.R.(1998)，“女性性紊亂的定義和分類(Definition and classificationof female sexual disorders)”，Int J.Impotence Res.，10，S104-S106；，Berman，J.R.，Berman，L.& Goldstein，I.(1999)，“女性性功能障礙分辨率、病生理、評價和治療選擇(Female sexualdysfunctionIncidence，pathophysiology，evaluations andtreatment options)”，Urology，54，385-391)。女性可能缺乏性欲、難以達到性興奮或性高潮、發(fā)生性交疼痛或者具有這些問題的復合形式。一些類型的疾病、藥物治療、外傷或心理問題能引起FSD。在研發(fā)中治療目標確定為FSD的特定亞類，主要是性欲和性覺醒紊亂。
FSD的分類最好通過對照正常女性性反應期來確定欲望、反應和高潮(Leiblum，S.R.(1998)，女性性紊亂的定義和分類，Int.J.Impotence Res.，10，S104-S106)。欲望或性欲驅(qū)使性表達。其跡象常包括當在感興趣的伴侶陪伴時或當接觸其它色情刺激時的性想法。反應是對性刺激的血管反應，其中一個重要的部分是生殖器充血，并包括陰道潤滑性增大、陰道延長以及生殖器感覺/敏感性的增高。高潮是在反應期間達到頂點的性緊張的釋放。
因此，在任何這樣的階段(一般是欲望、反應或高潮)中當女性具有不適或不滿足的反應時，就會發(fā)生FSD。FSD的類型包括性欲望過低病、性覺醒紊亂、高潮紊亂和性交疼痛病。雖然本發(fā)明的化合物會改善對性刺激的生殖器反應(例如在女性性覺醒紊亂中)，在此過程中其還可以改善與性交有關(guān)的疼痛、痛苦和不適，并因此治療其它女性性紊亂。
因此，按照本發(fā)明的另一個方面，提供了本發(fā)明的化合物在制備治療或預防性欲過低病、性覺醒紊亂、高潮紊亂和性交疼痛病，更優(yōu)選治療或預防性覺醒紊亂、高潮紊亂和性交疼痛病，并首選治療或預防性覺醒紊亂的藥物中的用途。
如果女性對性沒有或者很少有欲望，且沒有或只有很少的性想法或幻覺，則患有性欲過低病。由于自然絕經(jīng)或者由于手術(shù)絕經(jīng)，睪酮的水平低可以引起此種類型的FSD。其它原因包括疾病、藥物治療、疲勞、抑郁和焦慮。
女性性覺醒紊亂(FSAD)特征為對性刺激的不適當?shù)纳称鞣磻?。外陰部沒有正常性覺醒的充血。陰道壁不充分潤滑，于是發(fā)生性交疼痛。可能妨礙高潮。反應紊亂可能由絕經(jīng)期或生育后及步入期雌激素降低引起，也可能由與血管有關(guān)的疾病如糖尿病和動脈粥樣硬化引起。其它原因來自用利尿劑、抗組胺藥、抗抑郁藥如SSRIs或抗高血壓藥治療。
性交疼痛病(包括交媾困難和陰道痙攣)特征為性器插入導致的疼痛，并可能由降低潤滑性的藥物治療、子宮內(nèi)膜異位、骨盆炎性疾病、炎性腸疾病或尿道問題引起。
FSD的患病率難以評估，因為該術(shù)語涵蓋了若干類型的問題，其中一些難以檢測，且還因為對治療FSD的興趣是最近發(fā)生的。很多婦女的性問題或與女性衰老過程直接相關(guān)，或與慢性疾病如糖尿病和高血壓有關(guān)。
因為FSD由性反應周期的不同階段中表現(xiàn)出癥狀的若干亞類組成，所以沒有單一的治療方法。目前對FSD的治療主要集中在心理或關(guān)系問題。FSD的治療正逐漸展開，因為更多的臨床和基礎(chǔ)科學研究致力于調(diào)查此醫(yī)學問題。在病生理學中，女性性不適不都是生理性的，特別是對于某種程度上可能患有血管性功能障礙(例如FSAD)的個體，提出了整體上的女性性不適。對于治療FSD，目前沒有獲得許可的藥物。憑經(jīng)驗進行的藥物治療包括使用雌激素(局部或作為激素替代療法)、雄激素或改變心情的藥物如丁螺環(huán)酮或曲唑酮。由于療效低或不能接受的副作用，這些可供選擇的治療方法常常不令人滿意。
由于在藥理學治療FSD中最近才引起了人們的注意，故治療方法組成如下心理上的指導、非處方性交潤滑劑，以及研究性的候選療法，包括獲準治療其它疾病的藥物。這些藥物由激素藥物組成，或者是睪酮或者是雌激素和睪酮的聯(lián)合形式，以及最近采用的血管藥物，已證明它們在男性勃起障礙中有效。這些藥物中還沒有顯示出一個在治療FSD中是非常有效的。
如上所述，本發(fā)明的化合物特別用于治療女性性覺醒紊亂(FSAD)。
美國精神病學協(xié)會的診斷和統(tǒng)計手冊(DSM)IV將女性性覺醒紊亂(FSAD)定義為“直到完成性活動，獲得或維持性興奮的足夠潤滑膨脹反應的持久或經(jīng)常性的不能。該障礙必須引起顯著的痛苦或人際關(guān)系的困難?！痹撚X醒反應由骨盆中血管充血、陰道潤滑和外陰的膨脹組成。該紊亂引起顯著的痛苦和/或人際關(guān)系的困難。
FSAD是高發(fā)性性紊亂，影響絕經(jīng)前、接近絕經(jīng)和絕經(jīng)后(±HRT)婦女。其與伴發(fā)的紊亂有關(guān)，如抑郁、心血管疾病、糖尿病和UG紊亂。
FSAD的主要后果是缺乏愉悅的生殖器感覺。FSAD的繼發(fā)后果是性欲的降低、性交疼痛和難以達到高潮。
最近已假設(shè)對于至少部分患有FSAD癥狀的患者來說存在血管因素(Goldstein等，Int.J.Impot.Res.，10，S84-S90，1998)，動物試驗數(shù)據(jù)支持了此觀點(Park等，Int.J.Impot.Res.，9，27-37，1997)。
治療FSAD的候選藥物療效正存于調(diào)查中，它們主要是促進男性生殖器血液循環(huán)的勃起障礙療法。它們由兩種類型的制劑組成，口服或舌下藥物(阿撲嗎啡、酚妥拉明、磷酸二酯酶5型(PDE5)抑制劑如西地那非)，及給男性注射或經(jīng)尿道給藥的前列腺素(PGE1)，并給女性的生殖器局部使用。
本發(fā)明的化合物有利地提供了恢復正常性覺醒反應的方式，即增加生殖器血流，導致陰道、陰蒂和陰唇充血。這將通過血漿滲出物造成陰道潤滑的增加、陰道順從性的增加及生殖器敏感性的增加。因此，本發(fā)明的化合物提供了恢復或加強正常的性覺醒反應的方法。
不囿于任何理論，我們相信神經(jīng)肽如血管活性腸肽(VIP)是在控制女性性覺醒反應，特別是控制生殖器血流中的主要神經(jīng)遞質(zhì)候選者。VIP及其它神經(jīng)肽被NEP EC3.4.24.11降解/代謝。因此，NEP抑制劑將加強在覺醒釋放的VIP的內(nèi)源性血管舒張作用。這將導致對FSAD的治療，例如，通過提高的生殖器血流及由此產(chǎn)生的生殖器充血。我們發(fā)現(xiàn)NEP EC 3.4.24.11的選擇性抑制劑提高骨盆神經(jīng)刺激的及VIP誘導的陰道和陰蒂血流的增加。此外，選擇性NEP抑制劑提高分離的陰道壁的VIP和神經(jīng)介導的松弛。
因此，本發(fā)明由于其有助于提供恢復正常的性覺醒反應而有利，即增加生殖器血流，導致陰道、陰蒂和陰唇充血。這將通過血漿滲出物造成陰道潤滑的增加、陰道順從性的增加及生殖器敏感性的增加。因此，本發(fā)明的化合物提供了恢復或加強正常的性覺醒反應的方法。
有關(guān)NEP的背景資料已由Victor A.McKusick等在http//www3.ncbi.nlm.nih.gov/Omim/searchomim.htm上給出。從其中得到與NEP有關(guān)的如下信息“在人急性淋巴細胞白血病(ALL)的診斷中，普通的急性淋巴細胞白血病抗原是重要的細胞表面標記物。它存在于前B表型的白血病細胞上，其代表了85％的ALL病例。但是CALLA不限于白血病細胞，也發(fā)現(xiàn)于多種正常組織上。CALLA是大量存在于腎臟中的糖蛋白，其近端腎小管的刷狀緣和腎小球上皮上。Letarte等(1988)克隆了編碼CALLA的cDNA并指出從DNA序列推出的氨基酸序列與人的膜相關(guān)中性內(nèi)肽酶(NEP；EC 3.4.24.11)，也稱為腦啡肽酶的序列一致。NEP在疏水殘基的氨基側(cè)鏈裂解肽，并滅活一些肽激素，包括高血糖素、腦啡肽、P物質(zhì)、神經(jīng)降壓素、催產(chǎn)素和緩激肽。通過cDNA轉(zhuǎn)染分析，Shipp等(1989)證實了CALLA是以前被稱為腦啡肽酶的功能性中性內(nèi)肽酶。Barker等(1989)表明CALLA基因，其編碼100-kD II型跨膜糖蛋白，以大于45kb的單拷貝存在，其在惡性腫瘤表達細胞表面CALLA中不重排。通過研究體細胞雜種并就地雜交按區(qū)域定位在3q21-q27，確定該基因位于人第3對染色體上。Tran-Paterson等(1989)還通過人嚙齒類體細胞雜種DNA的Southern印跡分析指定該基因在第3對染色體上。D′Adamio等(1989)指出CALLA基因跨距超過80kb并由24個外顯子組成?！?、Barker，P.E.；Shipp，M.A.；D′Adamio，L.；Masteller，E.L.；Reinherz，E.L.，普通急性成淋巴細胞白血病抗原基因圖譜在染色體區(qū)域3(q21-q27)(The common acute lymphoblastic leukemiaantigen gene maps to chromosomal region 3(q21-q27))，J.Immun.142283-287，1989。
2、D′Adamio，L.；Shipp，M.A.；Masteller，E.L.；Reinherz，E.L.編碼普通急性成淋巴細胞白血病抗原(中性內(nèi)肽酶24.11)的基因結(jié)構(gòu)多樣的迷你外顯子及分離的5-引發(fā)未翻譯的區(qū)域(Organization of the gene encoding common acute lymphoblasticleukemia antigen(neutral endopeptidase 24.11)multipleminiexons and separate 5-prime untranslated regions)，Proc.Nat.Acad.Sci.867103-7107，1989。
3、Letarte，M.；Vera，S.；Tran，R.；Addis，J.B.L.；Onizuka，R.J.；Quackenbush，E.J.；Jongeneel，C.V.；Mcinnes，R.R.普通急性淋巴細胞白血病抗原等于中性內(nèi)肽酶(Common acutelymphocytic leukemia antigen is identical to neutralendopeptidase)，J.Exp.Med.1681247-1253，1988。
4、Shipp，M.A.；Vijayaraghavan，J.；Schmidt，E.V.；Masteller，E.L.；D’Adamio，L.；Hersh，L.B.；Reinherz，E.L.普通急性成淋巴細胞白血病抗原(CALLA)是活性中性內(nèi)肽酶24.11(“腦啡肽酶”)cDNA轉(zhuǎn)染分析提供的直接證據(jù)(Common acutelymphoblastic leukemia antigen(CALLA)is active neutralendopeptidase 24.11(“enkephalinase”)direct evidence by cDNAtransfection analysis)，Proc.Nat.Acad.Sci.86297-301，1989。
5、Tran-Paterson，R.；Willard，H.F.；Letarte，M.普通急性成淋巴細胞白血病抗原(中性內(nèi)肽酶--3.4.24.11)基因位于人第3對染色體(The common acute lymphoblastic leukemia antigen(neutral endopeptidase--3.4.24.11)gene is located on humanchromosome 3)，Cancer Genet.Cytogenet.42129-134，1989。
“(女性)生殖器由內(nèi)部和外部組成。內(nèi)部器官位于骨盆并由卵巢、輸尿管、子宮和陰道組成。外部器官在泌尿生殖器隔膜表面并在骨盆弓以下。它們包括陰阜、大陰唇和小陰唇、陰蒂、陰道前庭、陰道前庭球和較大的陰道前庭腺”(Gray′s Anatomy，C.D.Clemente，美國第13版)。
發(fā)現(xiàn)本發(fā)明化合物應用于下列患有FSD的亞人群年輕的、年老的、絕經(jīng)前的、接近絕經(jīng)的、進行或沒有進行激素替代治療的絕經(jīng)后婦女。
本發(fā)明的化合物應用于下列因素引起的FSD患者中i)血管病因的疾病，例如，心血管或動脈粥樣硬化病、膽固醇過多癥、吸煙、糖尿病、高血壓、放射性和會陰外傷、對iliohypogastric陰部血管系統(tǒng)的外傷。
ii)神經(jīng)病因的疾病，例如，脊髓損傷或者中樞系統(tǒng)的疾病，包括多發(fā)性硬化、糖尿病、帕金森氏病、腦血管傷害、外周神經(jīng)病、外傷或根治骨盆手術(shù)。
iii)激素/內(nèi)分泌病因的疾病，例如，丘腦下部/腦垂體/生殖腺軸的機能障礙，或卵巢機能障礙、胰腺的機能障礙、手術(shù)或醫(yī)藥性性腺切除、雄激素不足、催乳素循環(huán)水平高如催乳素過高、自然絕經(jīng)、卵巢衰竭性早產(chǎn)、甲狀腺機能亢進和減退。
iv)心理病因的疾病，例如，抑郁、強迫性疾病、焦慮、產(chǎn)后抑郁(“Baby Blues”)、情感和人際關(guān)系問題、行為焦慮、夫妻不和、機能障礙的體態(tài)、性恐怖、宗教壓抑或創(chuàng)傷經(jīng)歷。
v)藥物引起的性機能障礙，由于用選擇性5-羥色胺再吸收抑制劑(SSRis)治療及其它抗抑郁藥治療(三環(huán)類和強安定藥)、抗高血壓治療、抗交感神經(jīng)藥物、慢性口服避孕丸治療引起的。
本發(fā)明的化合物可以按照已知方式以多種路線來制備。在下列反應方案和下文中，除非另行說明，R1、n和Y如第-方面中所定義。這些方法構(gòu)成了本發(fā)明的另一個方面。
在整個申請文件中，用羅馬數(shù)字I、II、III、IV等指定通式。這些通式的下一級通式定義為Ia、Ib、Ic等、……Va、IVb、IVc等。
通式I的化合物可以按照反應方案1制備，通過式II的化合物(其中Prot是適當?shù)谋Ｗo基)與式III的伯胺反應得到式IV的化合物。脫保護后得到式I的化合物。
方案1 酸/胺偶聯(lián)步驟可以在適宜的溶劑中，在偶聯(lián)劑、任選的催化劑和過量的酸受體的存在下，通過式II的化合物與式III的化合物(或其胺鹽)反應來進行。一般來說，在-78至100℃的溫度下，將式II的化合物和式III的化合物的混合物用偶聯(lián)劑(例如二環(huán)己基碳二亞胺(DCC)、1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺(WSCDI)、苯并三唑-1-基二乙基磷酸酯、磷酰氯、四氯化鈦、磺酰氯氟、Lawesson′s試劑、PPACA、PYBOP或Mukaiyama′s試劑)，任選地在叔胺堿(例如，三乙胺、Hunig′s堿、吡啶或NMM)存在下，處理不超過24小時。優(yōu)選的反應條件包括式II的化合物(1-1.5當量)與式III的化合物(或其鹽1-1.5當量)，在1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(WSCDI)或N，N′-二環(huán)己基碳二亞胺(DCC)(1.1-1.3當量)、1-羥基苯并三唑水合物(HOBT)或二甲基氨基吡啶(DMAP)(1.05-1.2當量)、N-甲基嗎啉(NMM)或三乙胺(2.3-3當量)的存在下，在二甲基甲酰胺或二氯甲烷中，在室溫至90℃下，反應16-18小時。
或者，酸/胺偶聯(lián)步驟可以通過活化的中間體(如?；溥颉⒒旌纤狒蝓Ｂ?，在過量的酸受體存在下，在適宜的溶劑中進行。一般反應條件包括將式II的化合物用活化劑(例如，N，N′-羰基二咪唑、N，N′-羰基雙(3-甲基咪唑)三氟甲磺酸鹽、亞硫酰氯或草酰氯)任選地在叔胺堿(例如三乙胺、Hunig′s堿、吡啶或NMM)存在下處理不超過24小時，接著與式III的化合物(或其鹽)反應，該反應任選地在催化劑(例如4-二甲基氨基吡啶)或添加劑(例如羥基苯并三唑)的存在下，在適宜的溶劑(例如二氯甲烷、THF、乙酸乙酯、乙腈、DMF或甲苯)中，任選地在另一種胺堿的存在下，在-78℃至150℃下，進行不超過48小時。
優(yōu)選的反應條件包括式II化合物的酰氯(1-1.1當量)與式III的化合物(或其鹽，1至1.5當量)，在三乙胺或N-甲基嗎啉(1.4-10當量)的存在下，在二氯甲烷溶劑中，在室溫下反應24小時?；蛘?，就地用草酰氯在二氯甲烷中在催化量的二甲基甲酰胺存在下室溫下處理2小時，式II的化合物可以轉(zhuǎn)變?yōu)轷Ｂ?，或者在二氯甲烷和吡啶的混合物中?10℃下用亞硫酰氯處理式II的化合物3小時，接著加入三乙胺、4-二甲基氨基吡啶和式III的化合物，并讓此混合物在20℃下反應48小時。
式I的化合物可以由式IV的化合物通過脫保護來制備。酸基團的脫保護方法依賴于保護基。保護/脫保護方法的實例見“《有機合成中的保護基》(Protective groups in Organic synthesis)”，TW Greeneand PGM Wutz。
例如，當Prot是叔丁基時，脫保護條件包括式IV與三氟乙酸/二氯甲烷(1∶1-1.5體積)，在室溫下反應2-18小時，該反應任選地在碳正離子清除劑如苯甲醚(10當量)存在下進行。當Y含有羥基時，可能需要中間體三氟乙酸酯的堿水解。當Prot是叔丁基時，脫保護的其它方法包括將式IV用氫氯酸在二氯甲烷中在室溫下處理3小時。為了避免歧義，Prot作為叔丁基只是舉例而已，不是要限定為叔丁基。
或者，當Prot是叔丁基時脫保護可以通過將式IV的化合物用強酸(例如氫氯酸氣體或濃鹽酸，氫溴酸，磷酸，硝酸或硫酸，三氟乙酸，氯乙酸，對甲苯磺酸，三氟甲磺酸或冰醋酸)以催化量至過量的量處理來完成，該反應任選地在適宜的溶劑(例如甲苯，二氯甲烷，乙醚，乙醇，THF或己烷)中并任選地在水的存在下在溫度20℃至150℃下進行不超過48小時。
當Prot是叔丁基時，優(yōu)選的脫保護條件是將式IV的化合物用10倍過量的三氟乙酸在二氯甲烷中在室溫下處理24小時。
當Prot是芐基時，脫保護條件包括IV與鈀碳(5-10％)在乙醇水溶液(40-95％)中在15-60psi壓力下，在室溫下反應2小時至3天。
這些方法構(gòu)成了本發(fā)明的另一個方面。
式IV的化合物是新的并構(gòu)成了本發(fā)明的另一個方面。
式Ia的化合物，即其中Y是-NHSO2R19的通式I的化合物，可以按照反應方案2制備。通過式II的化合物與是VI的化合物反應，其中Prot2是適宜的胺保護基，先制備式V的化合物。優(yōu)選的反應條件類似于上述方案1中酸/胺偶聯(lián)步驟所述。式V化合物的選擇性胺脫保護得到式VII。式VII的化合物與R19SO2Cl在酸受體的存在下在適宜的溶劑中反應形成式IVa的化合物。式IVa的化合物在方案1的脫保護步驟中描述的類似條件下脫保護得到式Ia的化合物。
方案2 氨基脫保護的方法有利于保護基。保護/脫保護方法見《有機合成中的保護基》，TW Greene and PGM Wutz。例如，當Prot2是苯甲酰氧基羰基時，脫保護條件包括式V與鈀碳(10％)在乙醇中在室溫下反應18小時。
優(yōu)選的制備式IVa化合物的方法包括式VII與R19SO2Cl(1當量)在三乙胺(1.5-2.5當量)的存在下在二氯甲烷中在室溫下反應2至3天。
式Ib的化合物lb，即式I的化合物，其中n是0而Y是 可以按照反應方案3制備。
式II的化合物與式IIIa的化合物在與方案1的酸/胺偶聯(lián)條件類似的條件下反應得到式IX的化合物，其中Prot3是保護基，其可以在保護基Prot存在時選擇性地被除去。優(yōu)選的保護基Prot3是堿不穩(wěn)定性酯基團。接著，在堿性條件下處理式IX化合物得到式X的化合物。式X的化合物與式NHR11R12化合物在與方案1的酸/胺偶聯(lián)條件類似的條件下反應形成式IVb的化合物。將式IVb的化合物在與方案1的脫保護步驟中類似的條件下脫保護得到式Ib的化合物。
由IVb除去保護基Prot3的優(yōu)選條件包括將IVb用氫氧化鈉(1N)在甲醇中在室溫下處理22小時。
方案3
式IIIb的化合物，即通式III的化合物、其中n是2而Y是2-氧代-1-哌啶基，可以按照反應方案4制備。
方案4 式IIIc的化合物，其中r是1或2，可以按照反應方案5來制備。將式XII的化合物在胺部分用適宜的保護基Prot4進行保護形成式XIII的化合物。優(yōu)選的保護基是叔丁氧羰基。式XIII的化合物在一般的酸/胺偶聯(lián)條件下與NHR11R12反應形成式XIV的化合物，其脫保護后形成是IIIc的化合物。
方案5
引入叔丁氧羰基保護基的一般反應條件包括將式XII的化合物用(叔丁氧羰基)2O在二惡烷和2N氫氧化鈉中在室溫下處理18小時。
一般酸/胺偶聯(lián)條件包括將式XIII的化合物和NHR11R12用苯并三唑-1-基氧基三(吡咯烷基)六氟磷酸磷(PYBOP)、1-羥基苯并三唑水合物(HOBT)、Hünigs堿、胺(如三乙胺)在二甲基甲酰胺中在室溫下處理2小時。或者，式XIII的化合物和NHR11R12可以用1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽、HOBT、N-甲基嗎啉(NMM)在二甲基甲酰胺中在室溫下處理18小時。
當Prot3是叔丁氧羰基時，脫保護的一般反應條件包括XIV與氫氯酸或三氟乙酸在二氯甲烷中在室溫下反應2至4小時。
式IIId的化合物可以按照反應方案6制備。該保護基優(yōu)選叔丁氧羰基，如上所述，其可以在標準條件下除去。
方案6 式IIIe的化合物可以按照反應方案7，用如上所述的標準酸/胺偶聯(lián)反應來制備。保護基優(yōu)選芐氧羰基，其可以在標準條件下除去，一般在鈀碳(5-10％)上在乙醇中在室溫和50psi下處理4小時。
方案7
式IIIf的化合物可以按照反應方案8來制備。
方案8 按照反應方案9，式IIIg的化合物可以分兩步來制備。第一步，式XV的化合物可以由式XVI的化合物用與反應方案1描述的標準酸/胺偶聯(lián)條件類似的方法來制備。Prot5代表適宜的離去基團，優(yōu)選叔丁氧羰基。第二步包括除去Prot5。當Prot5是叔丁氧羰基時，則優(yōu)選的反應條件包括用氫氯酸在乙醚/乙酸乙酯中在室溫下處理18小時。
方案9
式IIIh的化合物可以按照方案10分三步來制備。
方案10 式IIIj的化合物可以按照反應方案11通過將硝基還原來制備。
方案11 制備式III的化合物的其它方法見下面方案12，其中Ra是C1-6烷基或烷氧基。
方案12 通式I的化合物在連接R1的碳原子具有手性中心。通式I的單一對映體可以通過化學工作者已知的多種方法獲得，如由相應的光學純中間體或者通過拆分。拆分的優(yōu)選方法是通過(+)-假麻黃鹼鹽(見本文制備例2)?；蛘?，手性式I的化合物可以由手性式II的化合物制備，如下所述。
一些式II的化合物是本領(lǐng)域已知的(見EP274234-B1和WO9113054)。其它式II的化合物可以以類似的方式來制備。
手性式IIa的化合物可以由式XVI的化合物VI如反應方案13所示來制備。
方案13
式II的化合物可以通過將式XVII的化合物用R1-XZ(其中XZ是鹵素)在任選地含有添加劑的強堿條件下在質(zhì)子惰性溶劑中處理來制備。
一般反應條件包括先將式XVII的化合物用至少2倍過量的強堿(例如二異丙基胺化鋰，六甲基乙硅烷疊氮化鋰、鈉或鉀，烷基鋰，烷基鎂或磷酸氮烯(phosphazene)堿)在非質(zhì)子溶劑(例如THF、乙醚、己烷、庚烷或乙基苯或者這些溶劑的混合物)中在-78℃至室溫下處理，任選地加有添加劑(例如TMEDA、DMPU或HMPA)，然后在-78℃下加入R1-XZ(例如烯丙基溴，丙基溴或甲基碘)并攪拌過夜同時升溫至室溫。適當?shù)靥幚淼玫绞絀I的化合物。
制備其中R1是烯丙基的式II化合物的優(yōu)選反應條件是，將式XVII的化合物(1摩爾當量)用二異丙基胺化鋰(2.3當量)在THF、正庚烷和乙基苯的混合物中在10℃下處理4小時。然后，在-10℃下加入烯丙基溴(1.2當量)，此反應混合物在-10℃下攪拌2小時，然后在4小時內(nèi)升溫至20℃，并在20℃下再攪拌15小時。
式IIb化合物的拆分可以直接有式II化合物進行，但是，優(yōu)選的方法形成式XIX的胺鹽(即RZ-NH3+)，接著重結(jié)晶以進行純化。
一般來說，鹽是三乙胺、異丙基胺、三乙醇胺或環(huán)己基胺鹽。一般反應條件包括式II與需要量的胺在適宜的溶劑(例如己烷、庚烷或甲苯)中是升高的溫度下反應，在24小時內(nèi)冷卻以引起結(jié)晶，接著用相同或不同的溶劑重結(jié)晶，任選地在較高的溫度下。
優(yōu)選的鹽是環(huán)己基胺鹽。優(yōu)選的反應條件包括將式II的化合物(1摩爾當量)用環(huán)己基胺(1.當量)在20℃下在庚烷中處理，接著用乙酸乙酯在70℃下重結(jié)晶，冷卻至50℃2小時誘發(fā)結(jié)晶，之后在2小時內(nèi)冷卻至20℃并攪拌0.5小時。
式XX的化合物(其中RYNH3+是手性陽離子)可以由式XIX的化合物通過在任選地含有水的適宜的溶劑系統(tǒng)中用強酸酸化來制備，接著將適當羧酸進行經(jīng)典的拆分。
一般反應條件包括將式XX的化合物在水和不可混合的有機溶劑(例如庚烷，甲苯，乙酸乙酯，乙醚或二氯甲烷)的雙相系統(tǒng)中，用強酸(例如氫氯酸，硫酸，對甲苯磺酸，三氟乙酸或磷酸)在溫度0℃至100℃下處理，得到游離的羧酸，接著用非外消旋的手性胺堿(例如α-甲基芐基胺、假麻黃堿、麻黃堿、去甲麻黃堿、金雞納樹皮生物堿、氨基酸酯、氨基醇如2-吡咯烷甲醇或奎寧-3-醇)處理，任選地在溶劑(例如酯、烷、芳烴、鹵代烷、醚和醇)中，在溫度0℃至150℃下，得到粗品鹽。然后，將此鹽用相同或不同的溶劑在溫度0℃至150℃下重結(jié)晶一次或多次，得到手性鹽。
優(yōu)選的鹽是假麻黃鹼鹽。優(yōu)選的反應條件包括將式XX化合物在水/正庚烷混合物中的懸浮液用稀氫氯酸在室溫下處理，直到水相的pH是3，得到游離酸，接著將所得羧酸用(1S，2S)-(+)-假麻黃鹼(1當量)在正庚烷中在80℃下處理，接著在2小時內(nèi)冷卻至45℃，以引起結(jié)晶，再在2小時內(nèi)冷卻至20℃并攪拌4小時。然后在80℃下用正庚烷重結(jié)晶，接著在2小時內(nèi)冷卻至60℃以引起結(jié)晶，再在2小時內(nèi)冷卻至20℃并攪拌1.5小時。
式IIa的化合物可以由式XX的化合物在任選地含有水的適宜的溶劑系統(tǒng)中用強酸酸化來制備。
一般反應條件包括將式XX的化合物在水和不可混合的有機溶劑(例如庚烷，甲苯，乙酸乙酯，乙醚或二氯甲烷)的雙相系中用強酸(例如氫氯酸，硫酸，對甲苯磺酸，三氟乙酸或磷酸)在溫度0℃至100℃下處理，得到式IIa的化合物。
優(yōu)選的反應條件包括將式XX化合物在水/正庚烷混合物中的懸浮液用稀氫氯酸在室溫下處理，直到水相的pH是pH3，得到游離酸。
式IIa的化合物可以通過將其中R1是不飽和的相應化合物氫化來制備。一般反應條件包括在氫氣氛中，在適宜的溶劑中，在催化劑(例如鈀、鉑、鎳、銥、銠或釕，它們?nèi)芜x地吸附在適宜的載體如碳、氧化鋁、硫酸鋇、碳酸鈣上，或者是鹽如氫氧化鈀，或鹽的混合物如H2PtCl6和SnCl2·2H2O，或是復合物如Wilkinson′s催化劑、Crabtree′s催化劑、CO2(CO)8、RhH(PPh3)4或[Co(CN)5]3-)在溫度室溫至150℃下并在30至150psi氫氣壓力下攪拌。
在優(yōu)選的方法中，式IIa的化合物，其中R1是丙基，可以通過將相應的烯丙基化合物氫化來制備。優(yōu)選的反應條件包括將該不飽和羧酸的乙醇溶液在氫氣氛下與9％w/w的5％鈀碳在室溫下攪拌24小時。
式XVIIa的化合物，即其中Prot是叔丁基的式XVII的化合物，可以分兩步由商購的式XXI的化合物按照反應方案14來制備。
方案14 式XXII的化合物可以由式XXI的化合物，通過將XXI用叔丁基陽離子源或叔丁醇化物處理來制備，該反應使用適宜的催化劑和/或脫水劑，在適宜的無水溶劑中，任選地在較高溫度下進行，或者通過激活羧酸接著與叔丁醇反應來制備。
一般反應條件包括將式XXI的化合物用催化量的酸(例如磷酸，氫氯酸，硫酸，硝酸，對甲苯磺酸或三氟乙酸)在異丁烯、叔丁醇、叔丁基鹵化物或叔丁基醚的存在下，在適宜的溶劑(例如二氯甲烷、THF或甲苯)中，在-20至150℃下處理不超過48小時。
另一種反應條件包括將式XXI的化合物聯(lián)合用叔胺堿(例如三乙胺、Hunig′s堿、吡啶或NMM)和脫水劑(例如二環(huán)己基碳二亞胺、氯甲酸烷基酯、二氯磷酸苯基酯、2-氯-1，3，5-三硝基苯、二-2-吡啶基碳酸酯、1，1′-羰基二咪唑、(三甲基甲硅烷基)乙氧基乙炔、N，N′-羰基雙(3-甲基咪唑)三氟甲磺酸鹽或偶氮基羧酸二乙基酯)和三苯基膦處理，接著加入叔丁醇，該反應任選地使用催化劑如4-二甲基氨基吡啶，在適宜的溶劑(例如二氯甲烷、THF或甲苯)，在-20至150℃下進行不超過48小時。
其它反應條件包括將式XXI的化合物用亞硫酰氯、草酰氯或Ghosez′s試劑，任選地在叔胺堿(例如三乙胺、Hunig′s堿、吡啶或NMM)存在下轉(zhuǎn)變?yōu)轷Ｂ?，接著用叔丁醇處理，任選地在催化劑如4-二甲基氨基吡啶的存在下，在適宜的溶劑(例如二氯甲烷、THF或甲苯)，在-20至150℃下反應不超過48小時。
優(yōu)選的反應條件包括將式XXI的化合物用異丁烯(5當量)、濃硫酸(0.15當量)和叔丁醇(0.16當量)在二氯甲烷中，在-10至25℃下攪拌24小時。
式XVIIa的化合物可以由式XXII的化合物通過用環(huán)戊烷羧酸在強堿條件下，在質(zhì)子惰性溶劑中處理來制備，該反應任選地在添加劑的存在下進行。
一般反應條件包括將環(huán)戊烷羧酸用至少2倍過量的強堿(例如二異丙基胺化鋰，六甲基乙硅烷疊氮化鋰、鈉或鉀，烷基鋰，烷基鎂或磷酸氮烯(phosphazene)堿)在非質(zhì)子溶劑(例如THF、乙醚、己烷、庚烷或乙基苯或者這些溶劑的混合物)中在-78℃至50℃下處理不超過24小時，該反應任選地加有添加劑(例如TMEDA、DMPU或HMPA)，接著加入式XXII的化合物并在-20℃下反應不超過24小時并適當?shù)靥幚怼?br> 優(yōu)選的反應條件包括將環(huán)戊烷羧酸用二異丙基胺化鋰(2.15當量)在THF、正庚烷和乙基苯的混合物中，在-15℃下處理3小時，接著用叔丁基-3-溴丙酸酯(1.06當量)在THF中在-15℃下處理15小時，然后升溫至室溫。
其它式II的化合物或者得自本領(lǐng)域已知的商業(yè)來源，或者可以由本領(lǐng)域已知的化合物制備，該制備使用本領(lǐng)域已知的方法，或者使用本文中描述的方法(見實施例和制備例部分)。
式(I)化合物的藥用鹽可以通過將式(I)化合物的溶液與所需的酸或堿(如果適當)混合從而容易地制備。此鹽可以從溶液中沉淀出并通過過濾收集，或者可以通過蒸發(fā)溶劑來回收。
本發(fā)明的化合物可以與一種或多種下列物質(zhì)聯(lián)合用于治療FSD1)一種或多種天然或合成的前列腺素或其酯。用于本文中的適宜的前列腺素包括化合物如前列地爾，前列腺素E1、前列腺素E0、13，14-二氫前列腺素E、前列腺素E2、eprostinol、天然合成及半合成的前列腺素及其衍生物，包括WO-00033825和/或2000年3月14日授權(quán)的US6,037,346公開的(將其全部引入本文作為參考)、PGE0、PGE1、PGA1、PGB1、PGF1α、19-羥基PGA1、19-羥基-PGB1、PGE2、PGB2、19-羥基-PGA2、19-羥基-PGB2、PGE3α、卡前列素氨丁三醇、地諾前列素、氨丁三醇、地諾前列酮、1ipoprost、吉美前列素，甲稀前列素、硫前列酮、噻前列素和莫西賽利。
2)一種或多種α-腎上腺素能受體拮抗劑化合物，也稱為腎上腺素能受體和或α-受體或α-阻斷劑。用于本文中的適宜的化合物包括α-腎上腺素能受體阻斷劑，如PCT申請WO99/30697(1998年6月14日公開)所述，其有關(guān)α-腎上腺素能受體的公開內(nèi)容引入本文作為參考，包括包括選擇性的α1-腎上腺素能受體或α2-腎上腺素能受體阻斷劑和非選擇性的腎上腺素能受體正丁基，適宜的α1-腎上腺素能受體阻斷劑包括酚妥拉明、酚妥拉明甲磺酸鹽、曲唑酮、阿夫唑嗪、吲哚拉明、萘哌地爾、坦洛新、達哌唑、苯氧芐氨、咪唑克生、依法克生、育亨賓鹼、蛇根木(rauwolfa)生物堿、Recordati 15/2739、SNAP1069、SNAP 5089、RS17053、SL 89.0591、多沙唑嗪、特拉唑嗪、阿巴諾喹和哌唑嗪；US6,037,346[2000年3月14日]中的α2-阻斷劑、地苯那明、托拉佐林、曲馬唑嗪和地苯拉明；如下敏感專利中描述的α-腎上腺素能受體4,188,390；4,026,894；3,511,836；4,315,007；3,527,761；3,997,666；2,503,059；4,703,063；3,381,009；4,252,721和2,599,000，其中各篇引入本文作為參考；α2-腎上腺素能受體阻斷劑包括可樂定、罌粟堿、罌粟堿鹽酸鹽，任選地在cariotonic試劑如pirxamine的存在下。
3)一種或多種NO-供體(NO-激動劑)化合物。用于本文中的適宜的NO-供體化合物包括有機硝酸酯，如單、二或三硝酸酯，或者有機硝酸酯包括甘油三硝酸酯(也稱為硝酸甘油)、異山梨醇5-單硝酸酯、異山梨醇二硝酸酯、季戊四醇四硝酸酯、赤蘚醇四硝酸酯、硝普化鈉(SNP)、3-(4-嗎啉基)sydnonimine、嗎多明、S-亞硝基-N-乙?；嗝拱?SNAP)、S-亞硝基-N-谷胱甘肽(SNO-GLU)、N-羥基-1-精氨酸、硝酸異戊酯、林西多明、林西多明鹽酸鹽、(SIN-1)S-亞硝基-N-半胱胺酸、diazenium diolates、(NONOates)、1，5-戊烷二硝酸酯、L-精氨酸(arginene)、人參、棗(zizphi fructus)、嗎多明、Re-2047、亞硝基化maxisylyte衍生物如PCT申請WO 0012075中描述的NMI-678-11和NMI-937。
4)一種或多種鉀離子通道啟動劑或調(diào)節(jié)劑。用于本文中的適宜的鉀離子通道啟動劑/調(diào)節(jié)劑包括尼可地爾、色滿卡林、左色滿卡林、比那地爾、cliazoxide、米諾地爾、charybdotoxin、格列本脲、4-氨基吡啶(amini pyridine)、BaCl2。
5)一種或多種多巴胺能試劑，優(yōu)選阿撲嗎啡或一種選擇性D2、D3或D2/D3激動劑，如普拉克索和羅匹尼羅(ropirinol)(在WO-0023056中要求保護)、PNU95666(在WO-0040226要求保護)。
6)一種或多種血管舒張藥。用于本文中的適宜的血管舒張藥包括尼莫地平、比那地爾、環(huán)扁桃酯、異克舒令、chloroprumazine、氟哌啶醇、Rec 15/2739、曲唑酮。
7)一種或多種血栓烷A2激動劑。
8)一種或多種CNS激活劑。
9)一種或多種麥角生物堿。適宜的麥角生物堿描述于2000年3月14日公布的US專利6,037,346，并包括乙酰二氫麥角胺、溴麥角林、溴麥角脲、氰麥角林、delorgotrile、地舒勒近、麥角新堿馬來酸鹽、麥角胺酒石酸鹽、乙舒麥角、麥角二乙胺、美舒麥角、甲基麥角胺、尼麥角林、培高利特、普羅麥角、丙麥角脲、特麥角脲。
10)一種或多種化合物，其調(diào)節(jié)尿鈉排泄因子特別是心房促尿鈉排泄因子(也稱為心房促尿鈉排泄肽因子)、B型和C型尿鈉排泄因子如抑制劑或中性內(nèi)肽酶的作用。
11)抑制血管緊張素轉(zhuǎn)化酶的一種或多種化合物，如enapril，及血管緊張素轉(zhuǎn)化酶和中性內(nèi)肽酶的聯(lián)合抑制劑，如omapatrilat。
12)一種或多種血管緊張素受體拮抗劑，如氯沙坦。
13)NO-合酶的一種或多種底物，如1-精氨酸。
14)一種或多種鈣離子通道阻斷劑，如氨氯地平。
15)一種或多種內(nèi)皮肽受體的拮抗劑及內(nèi)皮肽轉(zhuǎn)化酶的抑制劑。
16)一種或多種降低膽固醇試劑如他汀類(如atorvastatin/Lipitor-商標)和貝特類。
17)一種或多種抗血小板和抗血栓形成試劑，如tPA、uPA、華法令、水蛭素及其它凝血酶抑制劑、肝素、促凝血酶原激酶活化因子抑制劑。
18)一種或多種胰島素敏化試劑如rezulin，及降血糖試劑如格列吡嗪。
19)L-DOPA或卡比多巴。
20)一種或多種乙酰膽堿酯酶抑制劑，如donezipil。
21)一種或多種甾類或非甾類抗炎劑。
22)一種或多種雌激素受體調(diào)節(jié)劑和/或雌激素激動劑和/或雌激素拮抗劑，優(yōu)選雷洛昔芬或lasofoxifene，(-)-順-6-苯基-5-[4-(2-吡咯烷-1-基-乙氧基)-苯基]-5，6，7，8-四氫萘-2-醇及其藥用鹽，其制備詳見WO 96/21656。
23)大麻素受體的一種或多種調(diào)節(jié)劑。
24)一種或多種NPY(神經(jīng)肽Y)抑制劑，更具體地講NPY1或NPY5抑制劑，優(yōu)選NPY1抑制劑，優(yōu)選所述NPY抑制劑(包括NPY Y1和NPYY5)的IC50小于100nM，更優(yōu)選小于50nM。鑒定NPY抑制劑的試驗見WO-A-98/52890(見96，第2至28行)。
25)一種或多種血管活性腸肽(VIP)、VIP模擬物、VIP類似物，更特別是由一種或多種VIP受體亞型VPACl、VPAC或PACAP(垂體腺苷酸環(huán)化酶激活肽)介導的，一種或多種VIP受體激動劑或VIP類似物(如Ro-125-1553)或VIP片斷，與VIP聯(lián)合的一種或多種α-腎上腺素能受體拮抗劑(例如Invicorp，Aviptadil)。
26)一種或多種黑素腎上腺皮質(zhì)素(melanocortin)受體激動劑或調(diào)節(jié)劑或黑素腎上腺皮質(zhì)素提高劑，如melanotan11、PT-14、PT-141或如下專利中主張的化合物WO-09964002、WO-00074679、WO-09955679、WO-00105401、WO-00058361、WO-00114879、WO-00113112、WO-09954358。
27)一種或多種5-羥色胺受體激動劑、拮抗劑或調(diào)節(jié)劑，更具體地講是如下受體的激動劑、拮抗劑或調(diào)節(jié)劑5HT1A(包括VML 670)、5HT2A、5HT2C、5HT3和/或5HT6受體，包括WO-09902159、WO-00002550和/或WO-00028993中所述的。
28)一種或多種睪酮替代試劑(Inc脫氫雄稀二酮)，睪酮(Tostrelle)、二氫睪酮或睪酮埋植劑。
29)一種或多種雌激素，雌激素和甲羥孕酮或醋酸甲羥孕酮(MPA)(即作為聯(lián)合藥物形式)，或雌激素和甲基睪酮激素替代治療劑(如HRT，特別是Premarin、Cenestin、Oestrofeminal、Equin、Estrace、Estrofem、Elleste Solo、Estring、Eastraderm TTS、Eastraderm Matrix、Dermestril、Premphase、Preempro、Prempak、Premique、Estratest、Estratest HS、Tibolone)。
30)一種或多種去甲腎上腺素、多巴胺和/和5-羥色胺轉(zhuǎn)運蛋白的調(diào)節(jié)劑，如安非他酮、GW-320659。
31)一種或多種嘌呤能受體激動劑和/或調(diào)節(jié)劑。
32)一種或多種神經(jīng)激肽(NK)受體拮抗劑，包括WO-09964008中所述的。
33)一種或多種阿片受體激動劑、拮抗劑或調(diào)節(jié)劑，優(yōu)選ORL-1受體的激動劑。
34)催產(chǎn)素/后葉加壓素的一種或多種激動劑或調(diào)節(jié)劑，優(yōu)選選擇性催產(chǎn)素激動劑或調(diào)節(jié)劑。
35)一種或多種PDE抑制劑，更具體地講是PDE 2、3、4、5、7或8抑制劑，優(yōu)選PDE2或PDE5抑制劑并首選PDE5抑制劑(見下文)，所述抑制劑優(yōu)選對其相應酶的IC50小于100nM。用于本發(fā)明的適宜的cGMP PDE5抑制劑包括公開于EP-A-0463756的吡唑并[4，3-d]嘧啶-7-酮類；公開于EP-A-0526004的吡唑并[4，3-d]嘧啶-7-酮類；公開于國際專利申請WO 93/06104的吡唑并[4，3-d]嘧啶-7-酮類；公開于國際專利申請WO 93/07149的同分異構(gòu)的吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮類；公開于國際專利申請WO 93/12095的喹唑啉-4-酮類；公開于國際專利申請WO94/05661的吡啶并[3，2-d]嘧啶-4-酮類；公開于國際專利申請WO94/00453的嘌呤-6-酮類；公開于國際專利申請WO 98/49166的吡唑并[4，3-d]嘧啶-7-酮類；公開于國際專利申請WO 99/54333的吡唑并[4，3-d]嘧啶-7-酮類；公開于EP-A-0995751的吡唑并[4，3-d]嘧啶-4-酮類；公開于國際專利申請WO 00/24745的吡唑并[4，3-d]嘧啶-7-酮類；公開于EP-A-0995750的吡唑并[4，3-d]嘧啶-4-酮類；公開于國際專利申請WO95/19978的化合物；公開于國際專利申請WO99/24433的化合物和公開于國際專利申請WO 93/07124的化合物。公開于國際專利申請WO 01/27112吡唑并[4，3-d]嘧啶-7-酮類；公開于國際專利申請WO 01/27113的吡唑并[4，3-d]嘧啶-7-酮類；公開于EP-A-1092718的化合物和公開于EP-A-1092719的化合物。
用于本發(fā)明的其它適宜的PDE5抑制劑包括5-[2-乙氧基-5-(4-甲基-1-哌嗪基磺酰基)苯基]-1-甲基-3-正丙基-1，6-二氫-7H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-7-酮(昔地那非)，也稱為1-[[3-(6，7-二氫-1-甲基-7-氧代-3-丙基-1H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-5-基)-4-乙氧基苯基]磺?；鵠-4-甲基哌嗪(見EP-A-0463756)；5-(2-乙氧基-5-4-嗎啉基乙酰基苯基)-1-甲基-3-正丙基-1，6-二氫-7H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-7-酮(見EP-A-0526004)；3-乙基-5-[5-(4-乙基哌嗪-1-基磺酰基)-2-正丙氧基苯基]-2-(吡啶-2-基)甲基-2，6-二氫-7H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-7-酮(見WO98/49166)；3-乙基-5-[5-(4-乙基哌嗪-1-基磺酰基)-2-(2-甲氧基乙氧基)吡啶-3-基]-2-(吡啶-2-基)甲基-2，6-二氫-7H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-7-酮(見WO99/54333)；(+)-3-乙基-5-[5-(4-乙基哌嗪-1-基磺?；?-2-(2-甲氧基-1(R)-甲基乙氧基)吡啶-3-基]-2-甲基-2，6-二氫-7H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-7-酮，也稱為3-乙基-5-{5-[4-乙基哌嗪-1-基磺?；鵠-2-([(1R)-2-甲氧基-1-甲基乙基]氧基)吡啶3-基}-2-甲基-2，6-二氫-7H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-7-酮(見WO99/54333)；5-[2-乙氧基-5-(4-乙基哌嗪-1-基磺酰基)吡啶-3-基]-3-乙基-2-[2-甲氧基乙基]-2，6-二氫-7H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-7-酮，也稱為1-{6-乙氧基-5-[3-乙基-6，7-二氫-2-(2-甲氧基乙基)-7-氧代-2H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-5-基]-3-吡啶基磺酰基}-4-乙基哌嗪(見WO 01/27113，實施例8)；5-[2-異丁氧基-5-(4-乙基哌嗪-1-基磺?；?吡啶-3-基]-3-乙基-2-(1-甲基哌啶-4-基)-2，6-二氫-7H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-7-酮(見WO 01/27113，實施例15)；5-[2-乙氧基-5-(4-乙基哌嗪-1-基磺酰基)吡啶-3-基]-3-乙基-2-苯基-2，6-二氫-7H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-7-酮(見WO 01/27113，實施例66)；5-(5-乙?；?2-丙氧基-3-吡啶基)-3-乙基-2-(1-異丙基-3-氮雜環(huán)丁烷基)-2，6-二氫-7H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-7-酮(見WO 01/27112，實施例124)；5-(5-乙酰基-2-丁氧基-3-吡啶基)-3-乙基-2-(1-乙基-3-氮雜環(huán)丁烷基)-2，6-二氫-7H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-7-酮(見WO01/27112，實施例132)；(6R，12aR)-2，3，6，7，12，12a-六氫-2-甲基-6-(3，4-亞甲二氧基苯基)-吡嗪并[2′，1′；6，1]吡啶并[3，4-b]吲哚-1，4-二酮(IC-351)，即國際專利申請WO95/19978的實施例78和95的化合物，以及其中實施例1、3、7和8的化合物；2-[2-乙氧基-5-(4-乙基-哌嗪-1-基-1-磺酰基)-苯基]-5-甲基-7-丙基-3H-咪唑并[5，1-f][1，2，4]三嗪-4-酮(vardenafil)也稱為1-[[3-(3，4-二氫-5-甲基-4-氧代-7-丙基咪唑并[5，1-f]-as-三嗪-2-基)-4-乙氧基苯基]磺?；鵠-4-乙基哌嗪，即國際專利申請WO99/24433的實施例20、19、337和336的化合物；以及國際專利申請WO93/07124的實施例11的化合物(EISAI)；及Rotella D P，J.Med.Chem.，2000，43，1257的化合物3和14。
其它適宜的PDE5抑制劑還包括4-溴-5-(吡啶基甲基氨基)-6-[3-(4-氯苯基)-丙氧基]-3(2H)噠嗪酮；1-[4-[(1，3-苯并二氧雜環(huán)戊稀-5-基甲基)氨基]-6-氯-2-喹唑啉基]-4-哌啶-甲酸，單鈉鹽；(+)-順-5，6a，7，9，9，9a-六氫-2-[4-(三氟甲基)苯基甲基-5-甲基-環(huán)戊-4，5]咪唑并[2，1-b]嘌呤-4(3H)-酮；furazlocillin；順-2-己基-5-甲基-3，4，5，6a，7，8，9，9a-八氫環(huán)戊[4，5]-咪唑并[2，1-b]嘌呤-4-酮；3-乙酰基-1-(2-氯芐基)-2-丙基吲哚-6-甲酸酯；3-乙?；?1-(2-氯芐基)-2-丙基吲哚-6-甲酸酯；4-溴-5-(3-吡啶基甲基氨基)-6-(3-(4-氯苯基)丙氧基)-3-(2H)噠嗪酮；1-甲基-5(5-(4-嗎啉基)乙?；?2-正丙氧基苯基)-3-正丙基)-1，6-二氫-7H-吡唑并(4，3-d)嘧啶-7-酮；1-[4-[(1，3-苯并二氧雜環(huán)戊稀-5-基甲基)氨基]-6-氯-2-喹唑啉基]-4-哌啶甲酸，單鈉鹽；Pharmaprojects No.4516(Glaxo Wellcome)；Pharmaprojects No.5051(Bayer)；Pharmaprojects No.5064(Kyowa Hakko；見WO 96/26940)；Pharmaprojects No.5069(Schering Plough)；GF-196960(GlaxoWellcome)；E-8010和E-4010(Eisai)；Bay-38-3045 & 38-9456(Bayer)和Sch-51866。
如果使用活性試劑的聯(lián)合形式，則它們可以同時、分別或依次給藥。
本發(fā)明的化合物可以單獨使用，但是在人的治療中一般與適宜的藥物賦形劑、稀釋劑或載體混合給藥，根據(jù)預定的給藥途經(jīng)和標準制藥實踐，選擇賦形劑、稀釋劑或載體。
例如，本發(fā)明的化合物可以口服、頰部或舌下給藥，其劑型可以是片劑、膠囊(包括軟明膠膠囊)、卵形顆粒、酏劑、溶液劑或混懸劑，其中可以含有矯味劑或著色劑，它們可以即釋、延遲釋放、改性釋放、緩釋、雙重釋放、控釋或脈動式轉(zhuǎn)運應用。本發(fā)明的化合物還可以以快速分散或快速溶解的劑型給藥。
改性釋放和脈動式釋放劑型可以含有如即釋劑型中詳述的賦形劑，并同時含有作為釋放速度改性劑的其它賦形劑，它們包衣在改藥具上和/或包括在改藥具體內(nèi)。釋放速度改性劑包括但不僅限于羥基丙基甲基纖維素，甲基纖維素，羧甲基纖維素鈉，乙基纖維素，醋酸纖維素，聚氧乙烯，黃原膠，卡波姆，甲基丙烯酸銨共聚物，氫化蓖麻油，巴西棕櫚蠟，石蠟，鄰苯二甲酸醋酸纖維素，鄰苯二甲酸羥基丙基甲基纖維素，甲基丙烯酸共聚物及其混合物。改性釋放和脈沖式釋放劑型可以含有一種或者聯(lián)合的釋放速度改性賦形劑。釋放速度改性賦形劑可以存在于劑型中即在此骨架中，和/或在此劑型上即在表面或包衣上。
快速分散或溶解劑型(FDDFs)可以含有下列組分阿司帕坦，乙酰舒泛鉀，桔櫞酸，交聯(lián)羧甲基纖維素鈉，交聯(lián)聚維酮，抗壞血酸，丙烯酸乙酯，乙基纖維素，明膠，羥基丙基甲基纖維素，硬脂酸鎂，甘露醇，甲基丙烯酸甲酯，薄荷香料，聚乙二醇，火成二氧化硅，二氧化硅，淀粉羥乙酸鈉，硬脂基富馬酸鈉，山梨醇，木糖醇。本文中描述FDDFs使用的術(shù)語分散或溶解依賴于所用藥物的溶解性，即其中藥物是不溶的，則可以制備快速分散劑型，而其中藥物是可溶的，則可以制備快速溶解劑型。
本發(fā)明的組合物可以直接注射給藥?？梢耘渲圃摻M合物以進行非腸道、粘膜、肌內(nèi)、靜脈內(nèi)、靜脈內(nèi)、皮下、眼部、眼內(nèi)或透皮給藥。根據(jù)需要，該制劑可以以0.01至30mg/kg體重，如0.1至10mg/kg，更優(yōu)選0.1至1mg/kg體重。
術(shù)語“給藥”包括通過病毒或非病毒技術(shù)轉(zhuǎn)運。病毒轉(zhuǎn)運機制包括但不限于腺病毒載體，腺相關(guān)病毒(AAV)載體，皰疹病毒載體，逆轉(zhuǎn)錄病毒載體，慢病毒載體，及桿狀病毒載體。非病毒轉(zhuǎn)運機制包括脂類介導轉(zhuǎn)染，脂質(zhì)體，免疫脂質(zhì)體，脂質(zhì)轉(zhuǎn)染試劑，陽離子表面兩親物(CFAs)及其聯(lián)合形式。此類轉(zhuǎn)運機制的途經(jīng)包括但不限于粘膜、鼻內(nèi)、口服、非腸道、胃腸道、局部或舌下途經(jīng)。
此外，或者作為一種選擇，本發(fā)明的組合物(或其組分部分)可以通過直接注射給藥。此外或作為一種選擇，本發(fā)明的組合物(或其組分部分)可以局部給藥(優(yōu)選施用于生殖器)。此外或作為一種選擇，本發(fā)明的組合物(或其組分部分)可以通過吸入給藥。此外或作為一種選擇，本發(fā)明的組合物(或其組分部分)也可以通過如下一種或多種途經(jīng)給藥粘膜途經(jīng)，例如，鼻內(nèi)噴霧或者吸入用氣霧劑，或者作為例如通過口服途經(jīng)的可攝入溶液，或者通過非腸道途經(jīng)，例如，通過直腸、眼部(包括玻璃體內(nèi)或眼房內(nèi))、鼻內(nèi)、局部(包括頰部和舌下)、子宮內(nèi)、陰道內(nèi)和非腸道(包括皮下、腹膜內(nèi)、肌內(nèi)、靜脈內(nèi)、真皮內(nèi)、顱內(nèi)、氣管內(nèi)和硬膜外)透皮、腹膜內(nèi)、顱內(nèi)、腦室內(nèi)、腦內(nèi)、陰道內(nèi)、子宮內(nèi)、和非腸道(如靜脈內(nèi)、脊柱內(nèi)、皮下、透皮和肌內(nèi))途經(jīng)。
例如，本發(fā)明的藥物組合物可以按照每天1至10次的方案給藥，例如，每天1次或2次。對于特定患者來說，特定的劑量水平和給藥頻率是可變的，并將依賴于多種因素，包括所用特定化合物的活性、該化合物的代謝穩(wěn)定性和作用時間長短、年齡、體重、總的健康狀況、性別、飲食、給藥的方式和時間、排泄速度、聯(lián)用藥物、特定病癥的嚴重性以及進行治療的個體。
因此，術(shù)語“給藥”包括但不限于通過粘膜途經(jīng)轉(zhuǎn)運，例如，作為鼻內(nèi)噴霧劑或吸入用氣霧劑或者作為可攝入溶液；非腸道途經(jīng)，其中轉(zhuǎn)運通過注射形式，如靜脈內(nèi)、肌內(nèi)或皮下途經(jīng)。
此類片劑可以含有賦形劑如微晶纖維素，乳糖，桔櫞酸鈉，碳酸鈣，磷酸氫鈣和甘油，崩解劑如淀粉(優(yōu)選玉米、馬鈴薯或木薯淀粉)，淀粉羥乙酸鈉、交聯(lián)羧甲基纖維素鈉和某些復合硅酸鹽，及制粒粘合劑如聚乙烯吡咯烷酮，羥基丙基甲基纖維素(HPMC)，羥基丙基纖維素(HPC)，蔗糖，明膠和阿拉伯膠。此外，可以包括潤滑劑如硬脂酸鎂、硬脂酸、二十二烷酸甘油酯和滑石。
在明膠膠囊中，類似類型的固體組合物也可以作為填充劑。就此而言優(yōu)選的賦形劑包括乳糖、淀粉、纖維素、乳糖或高分子量聚乙二醇。對于含水混懸劑和/或酏劑，本發(fā)明的化合物可以與多種甜味劑或矯味劑、著色物質(zhì)或顏料混合，可以與乳化和/或助懸劑混合并可以與稀釋劑如水、乙醇、丙二醇和甘油及其混合物混合。
本發(fā)明的化合物也可以非腸道給藥，例如，靜脈內(nèi)、動脈內(nèi)、腹膜內(nèi)、鞘內(nèi)、心室內(nèi)、尿道內(nèi)、胸骨內(nèi)、顱內(nèi)、肌肉內(nèi)或皮下給藥，或者它們可以通過輸液技術(shù)給藥。此外，它們可以以埋植劑的形式給藥。對于此類非腸道給藥，它們最好以滅菌水溶液的形式使用，其中可以含有其它物質(zhì)，例如，使該溶液與血液等滲的足夠的鹽或葡萄糖。如果需要，水溶液應進行適當緩沖(優(yōu)選pH為3至9)。通過本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的標準制藥技術(shù)，容易在滅菌條件下完成適宜的非腸道制劑的制備。非腸道制劑可以配制為即釋、延遲釋放、改性釋放、緩釋、雙重釋放、控釋或脈動式釋放轉(zhuǎn)運的形式。
下列劑量水平及本文中其它劑量水平針對平均體重約65至70kg病人。本領(lǐng)域技術(shù)人員會容易地確定體重在此范圍外的患者，如兒童和老年人，所需的劑量水平。
為了給病人口服和非腸道給藥，本發(fā)明化合物或其鹽或溶劑化物的日劑量水平，通常為10至1000mg(以單劑量或均分劑量)。
因此，例如，本發(fā)明化合物或其鹽或溶劑化物的片劑或膠囊可以含有5至1000mg，如5mg至500mg的活性化合物，如果適當，每次服用一、二或多片(粒)。在任何情況下醫(yī)生會確定實際的劑量，該劑量對任何個體患者來說是最合適的，且它會隨特定患者的年齡、體重及反應而變化。上述劑量是一般情況的實例。當然，個別實例中可以允許較高或較低的劑量范圍，且這些在本發(fā)明的范圍內(nèi)。本領(lǐng)域技術(shù)人員還應意識到在治療某些病癥(包括FSD)中，本發(fā)明的化合物可以“基于要求”(即按照要求或需要)以單劑量的形式給藥。
本發(fā)明的化合物也可以通過鼻內(nèi)或吸入給藥，且方便地以干粉吸入劑或氣霧劑的形式，從加壓容器、泵、噴霧或霧化器中給藥，其使用適宜拋射劑，如二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷、氫氟烷如1，1，1，2-四氟乙烷(HFA 134A[商標]或1，1，1，2，3，3，3-七氟丙烷(HFA 227EA[商標])、二氧化碳或其它適宜的氣體。對于加壓氣霧劑，劑量單元可以通過提供閥以轉(zhuǎn)運計量的量來確定。加壓的容器、泵、噴霧或霧化器可以裝有活性化合物的溶液或懸浮液，如用乙醇和拋射劑的混合物作為溶劑，其中可以再含有潤滑劑，如脫水山梨醇三油酸酯。在吸入器或吹入器中使用的膠囊和藥筒(例如，由明膠制備)，可以配制為含有本發(fā)明化合物和適宜的粉末基質(zhì)如乳糖或淀粉的粉末混合物的形式。
氣霧劑或干粉制劑優(yōu)選做如下設(shè)計每個計量的劑量或“噴出”含有1至50mg的本發(fā)明化合物以轉(zhuǎn)運給患者。氣霧劑的總?cè)談┝繎獮?至50mg，其可以以單劑量或者通常以均分劑量全天給藥。
或者，本發(fā)明的化合物可以以栓劑或陰道栓的形式給藥，或者它們以凝膠、水凝膠、洗劑、溶液劑、霜劑、軟膏或撲粉的形式局部施用(優(yōu)選給生殖器施用)。本發(fā)明的化合物也可以真皮給藥。本發(fā)明的化合物還可以透皮給藥，例如，通過使用透皮貼劑。它們還可以通過眼、肺或直腸途經(jīng)給藥。
為了眼部使用，化合物可以在等滲的、pH已調(diào)節(jié)的、滅菌鹽水中配制為微粉化的混懸劑，或者優(yōu)選配制為在等滲的、pH已調(diào)節(jié)的滅菌鹽酸中的溶液劑，其中任選地加入防腐劑如苯扎氯銨?；蛘?，它們可以在軟膏基質(zhì)如凡士林中配制。
為了給皮膚局部施用(優(yōu)選給外陰)，本發(fā)明的化合物可以配制為含活性化合物的適宜軟膏，其中化合物懸浮于或溶解于，例如，一種或多種下列物質(zhì)的混合物中礦物油、液體凡士林、白凡士林、丙二醇、聚氧乙烯聚氧丙稀化合物、乳化蠟和水。或者，它們可以配制為適宜的洗劑或霜劑，其懸浮于或溶解于，例如，下列一種或多種物質(zhì)的混合物中礦物油、脫水山梨醇單油酸酯、聚乙二醇、液體石蠟、土溫60、鯨蠟基酯蠟、鯨蠟硬脂醇、2-辛基十二烷醇、芐醇和水。
本發(fā)明的化合物還可以與環(huán)糊精混合。已知環(huán)糊精能與藥物分子形成包合物和非包合復合物。藥物-環(huán)糊精復合物的形成可以改進藥物分子的溶解性、溶解速度、生物利用度和/和穩(wěn)定性。藥物-環(huán)糊精復合物一般對大多數(shù)劑型和給藥途經(jīng)都是有用的。作為與藥物直接復合的一種替代形式，環(huán)糊精可以用作輔劑，例如，作為載體、稀釋劑或助溶劑。α-、β-和γ-環(huán)糊精是最常用的，其適宜的實例見WO-A-91/11172、WO-A-94/02518和WO-A-98/55148。
在優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明的化合物進行系統(tǒng)給藥(如口服、頰部和舌下)，更優(yōu)選口服。優(yōu)選此系統(tǒng)(首選口服)給藥用于治療女性性功能障礙，優(yōu)選FSAD。
因此，在特別優(yōu)選的實施方案中，提供了本發(fā)明化合物在制備治療或預防FSD，更優(yōu)選FSAD的系統(tǒng)給藥(優(yōu)選口服)的藥物中的用途。
優(yōu)選的口服制劑使用即釋片劑；或快速分散或溶解劑型(FDDFs)。
在進一步優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明的化合物進行局部給藥，優(yōu)選直接針對女性的生殖器，特別是陰道。
由于NEP存在于整個體內(nèi)，本發(fā)明的化合物可以系統(tǒng)給藥并在女性生殖器內(nèi)獲得治療反應而不引起不開耐受的副作用，這是非常意外的。因此，在下文中的體內(nèi)(兔)結(jié)果中，系統(tǒng)給藥的本發(fā)明化合物在性覺醒(通過骨盆神經(jīng)刺激模擬)時增加了生殖器血流，而沒有負面影響心血管的參數(shù)，如引起顯著的低血壓或高血壓。
在接受性刺激的患者(我們所用“性刺激”包括視覺、聽覺或觸覺刺激)中，優(yōu)選用本發(fā)明的化合物治療FSD。該刺激可以在所述給藥前、后或期間。
因此，本發(fā)明化合物促進在女性生殖器中作為性覺醒的路徑/歷程，恢復或改進對性刺激的性覺醒反應。
因此，優(yōu)選的實施方案提供了本發(fā)明化合物在制備治療或預防受刺激的患者的FSD的藥物中的用途。
為了獸醫(yī)用途，本發(fā)明化合物以按照正常獸醫(yī)實踐來說適宜接受的制劑形式使用，且獸醫(yī)會決定對特定動物來說最適當?shù)慕o藥劑量方案和給藥途經(jīng)。
下列制劑實施例僅僅是舉例說明，而不是藥限制本發(fā)明的范圍。“活性組分”指本發(fā)明的化合物。
制劑1用下列組分制備片劑重量/mg活性組分250微晶纖維素 400火成二氧化硅10硬脂酸 5共計665
將各組分混合并壓制為片劑。
制劑2靜脈內(nèi)給藥制劑可以制備如下活性組分 100mg等滲鹽水 1,000ml用于給生殖器局部給藥的本發(fā)明化合物的一般制劑如下制劑3噴霧劑活性組分(1.0％)在異丙醇(30％)和水中。
制劑4泡沫劑活性組分，冰醋酸，苯甲酸，鯨蠟醇，對羥基苯甲酸甲酯，磷酸，聚乙烯醇，丙二醇，羧甲基纖維素鈉，硬脂酸，二乙基硬脂酰胺，Van Dyke香料No.6301，純水和異丁烷。
制劑5凝膠活性組分，琥珀辛酯鈉BP，異丙醇BP，丙二醇，氫氧化鈉，卡波姆934P，苯甲酸和純水。
制劑6霜劑活性組分，苯甲酸，鯨蠟醇，熏衣草，化合物13091，對羥基苯甲酸甲酯，對羥基苯甲酸丙酯，丙二醇，羧甲基纖維素鈉，十二烷基硫酸鈉，硬脂酸，三乙醇胺，冰醋酸，蓖麻油，氫氧化鉀，山梨酸和純水。
制劑7陰道栓活性組分，聚乙二醇1000單鯨蠟基醚BP，桔櫞酸，PEG 1500和1000及純水。
本發(fā)明還包括(i)含有本發(fā)明化合物以及藥用賦形劑、稀釋劑或載體的藥物組合物。
(ii)用作藥物的本發(fā)明化合物。
(iii)治療哺乳動物FSD的方法，該方法包括給所述哺乳動物使用有效量的本發(fā)明化合物。
(iV)治療FSD的藥物組合物，其中含有本發(fā)明的化合物以及藥用賦形劑、稀釋劑或載體。
(v)用于治療FSD的本發(fā)明的化合物。
本發(fā)明通過下列非限制性實施例來舉例說明，其中本文和整個申請文件中使用了下列縮寫和定義Arbacel_ 過濾劑br 寬Boc叔丁氧基羰基CDI羰基二咪唑δ化學位移d 雙峰Δ加熱DCCI 二環(huán)己基碳二亞胺DCM二氯甲烷DMFN，N-二甲基甲酰胺DMPU 1，3-二甲基-3，4，5，6-四氫-2-(1H)-嘧啶酮DMSO 二甲基亞砜ES+電噴射離子化陽性掃描ES-電噴射離子化陰性掃描Ex 實施例h 小時HMPA 六甲基磷酰胺HOBt 1-羥基苯并三唑
HPLC高壓液相色譜m/z 質(zhì)譜峰min 分鐘MS 質(zhì)譜NMR 核磁共振Prec前體Prep制備q 重峰s 單峰t 三重峰Tf 三氟甲磺酰基TFA 三氟乙酸THF 四氫呋喃TLC 薄層色譜TMEDA N，N，N′N′-四甲基亞乙基二胺TS+熱噴射離子化陽性掃描WSCDI 1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽1H核磁共振(NMR)譜在所有情況下與預計的結(jié)構(gòu)都一致。特征化學位移(δ)以低于四甲基硅烷的百萬份給出，用常規(guī)的縮寫來命名主要的峰如s，單峰；d，雙重峰；t，三重峰；q，四重峰；m，多重峰；br，寬峰。對于普通溶劑使用下列縮寫CDCl3，氘代氯仿；DMSO，二甲基亞砜?？s寫psi指磅每平方英寸而LRMS指低分辨率質(zhì)譜。當使用薄層色譜(TLC)時，它指硅膠TLC，其中使用硅膠60F254板，Rf是在TLC板上化合物向前移動的距離與以溶劑向前移動的距離比值。
粉末X射線衍射(PXRD)花樣用Siemens D5000粉末X射線衍射計檢測，該衍射計上裝備有角-角測角計、自動光束分散狹縫、二級單色儀和閃爍計數(shù)器。旋轉(zhuǎn)樣本，同時用銅K-α1X射線(波長＝1.5046埃)輻射，用石墨單色器(λ＝0.15405nm)過濾，X射線管在40kV/40mA下操作。給出了多種固體形式的PXRD花樣的主峰(以2θ)。
實施例12-({1-[(1，3-苯并二氧雜環(huán)戊稀-5-基氨基)羰基]環(huán)戊基}甲基)戊酸 將三氟乙酸(5ml)加入到制備例34的叔丁基酯(130mg，0.31mmol)的二氯甲烷(5ml)溶液中，并將此溶液室溫下攪拌4小時。此反應混合物減壓下濃縮并將此殘余物與甲苯和二氯甲烷共沸得到標題化合物，為清澈油狀物，112mg，1H NMR(CDCl3，400MHz)δ0.83(t，3H)，1.22-1.40(m，3H)，1.50-1.72(m，8H)，1.95(m，1H)，2.10(m，2H)，2.19(m，1H)，4.30(m，2H)，5.93(s，2H)，5.99(bs，1H)，6.74(m，3H)；LRMSm/z 380(MH-)。
實施例2至9按照類似于實施例1中描述的方法由所給出的前體由相應的叔丁基酯制備式的化合物Ic，即其中R1是丙基的通式I的化合物，。
1＝通過在硅膠上用乙酸乙酯∶戊烷作為洗脫劑再進行柱色譜純化。
2＝通過在硅膠上用二氯甲烷∶甲醇作為洗脫劑再進行柱色譜純化。
3＝用乙醚重結(jié)晶。
實施例102-{[1-({[2-(1H-吲哚-3-基)乙基]氨基}羰基)環(huán)戊基]甲基}戊酸 將三氟乙酸(2.61ml，33.9mmol)加入到制備例44的叔丁基酯(482mg，1.13mmol)和苯甲醚(1.23ml，11.3mmol)的二氯甲烷(4ml)溶液中，并將此反應室溫下攪拌4小時。將此混合物用水洗滌，然后用鹽水洗滌，干燥(硫酸鎂)，減壓濃縮并將此殘余物與甲苯共沸。將殘余的棕色油狀物在硅膠上通過柱色譜純化，用二氯甲烷∶甲醇(95∶5)作為洗脫劑，并用乙酸乙酯∶戊烷的洗脫梯度再過柱(30∶70至50∶50)得到標題化合物，為清澈泡沫，136mg，32％；1H NMR(CDCl3，400MHz)δ0.82(s，3H)，1.16-1.77(m，12H)，1.78-2.03(m，2H)，2.36(m，1H)，2.97(m，2H)，3.61(m，2H)，5.83(m，1H)，7.04(s，1H)，7.09-7.23(m，2H)，7.39(d，1H)，7.61(d，1H)，8.15(m，1H)；LRMSm/z 371.8(MH+)。
實施例112-{[-({[(3S)-1-芐基吡咯烷基]氨基}羰基)環(huán)戊基]甲基}戊酸 制備例45的叔丁基酯(70mg，0.16mmol)在三氟乙酸(1ml)和二氯甲烷(1ml)中的溶液室溫下攪拌2小時。將此反應減壓下濃縮并將此殘余物與二氯甲烷共沸。將此殘余物在水(1ml)和乙酸乙酯(5ml)之間分配，并用碳酸氫鈉溶液將水層的pH調(diào)節(jié)至6。分離水層，將有機相干燥(硫酸鈉)，減壓下蒸發(fā)并將此殘余物與二氯甲烷共沸得到標題化合物，為米色泡沫，45mg，73％；1H NMR(CDCl3，400MHz)δ0.84(t，3H)，1.20-2.95(m，19H)，3.52(m，1H)，3.75(m，1H)，3.95(m，1H)，4.25(m，1H)，4.45(m，1H)，6.96(bs，1H)，7.39(m，5H)；LRMSm/z 387(MH+)；分析實測值C，61.11；H，7.69；N，6.00。C23H34N2O3；CH2Cl2理論值C，61.14；H，7.70；N，5.94％。
實施例122-{[1-({[1-(羥基甲基)環(huán)戊基]氨基}羰基)環(huán)戊基]-甲基}戊酸 將制備例33的叔丁基酯(38mg，0.1mmol)在三氟乙酸(2ml)和二氯甲烷(2ml)中的溶液室溫下攪拌2小時。將此反應減壓下濃縮并將此殘余物與甲苯共沸，并再與二氯甲烷共沸得到無色膠狀物。將其懸浮于碳酸鉀(50mg，0.3mmol)的甲醇溶液中，并將此混合物室溫下攪拌2小時。減壓下除去甲醇，將殘余的含水混合物用水(20ml)稀釋，并用2N氫氯酸酸化至pH 2。將此溶液用乙酸乙酯(2×20ml)萃取，并將合并的有機溶液干燥(硫酸鎂)，并減壓下蒸發(fā)得到清澈油狀物，32mg，97％；1H NMR(CDCl3，400MHz)δ0.88(t，3H)，1.20-1.40(m，3H)，1.41-1.90(m，17H)，2.01-2.20(m，2H)，2.40(m，1H)，3.71(dd，2H)，5.80(bs，1H)；LRMSm/z 326.1(MH+)。
實施例13順-2-{[1-({[4-(羥基甲基)環(huán)己基]氨基}羰基)環(huán)戊基]甲基}戊酸 由制備例43的叔丁基酯，按照實施例12描述的方法，不同的是該產(chǎn)品在硅膠上通過柱色譜再進行純化，用二氯甲烷∶甲醇(95∶5)作為洗脫劑，得到此標題化合物，為無色膠狀物，68％；1H NMR(CDCl3，400MHz)δ0.87(t，3H)，1.21-1.40(m，6H)，1.52-1.70(m，15H)，1.92-2.11(m，3H)，2.39(m，1H)，3.55(d，2H)，4.01(m，1H)，5.90(m，1H)；LRMSm/z 340.3(MH+)。
實施例142-[1-({[2-(2-氧代-1-哌啶基)乙基]氨基}羰基)環(huán)戊基]甲基}戊酸 將氯化氫氣體通過制備例47的叔丁基酯(43mg，0.105mol)的二氯甲烷(10ml)冰冷的溶液，通入20分鐘。再將此溶液室溫下攪拌3小時。將此混合物減壓下濃縮并將此殘余物與二氯甲烷(3x)共沸，得到玻璃樣固體。粗品在硅膠上通過柱色譜純化，用二氯甲烷∶甲醇的洗脫梯度(95∶5至90∶10)得到標題化合物，6mg；1H NMR(CDCl3，400MHz)δ0.81(t，3H)，1.20-1.36(m，4H)，1.41-1.69(m，7H)，1.79(m，4H)，1.90-2.10(m，3H)，2.30(m，1H)，2.38(t，2H)，3.30-3.60(m，6H)，7.00(bs，1H)；LRMSm/z 351(M-H)-。
實施例152-({1-[({3-[(二甲基氨基)羰基]環(huán)己基}氨基)羰基]-環(huán)戊基}甲基)戊酸 由制備例42的叔丁基酯，按照類似于實施例14描述的方法，不同的是二氯甲烷∶甲醇∶乙酸(95∶3∶2)用作色譜洗脫劑得到此標題化合物，為固體，收率85％；1H NMR(CDCl3，400MHz)d0.89(t，3H)，1.09-1.76(m，12H)，1.80-2.17(m，10H)，2.37(m，1H)，2.68(m，1H)，2.95(s，3H)，3.04(s，3H)，3.83(m，1H)，6.06(m，1H)；LRMSm/z 381(MH+)；分析實測值C，63.31；H，9.17；N，6.53。C21H36N2O4；H2O理論值C，63.29；H，9.61；N，7.03％。
實施例162-{[1-({[(1R，2R)-2-苯基環(huán)丙基]氨基}羰基)環(huán)戊基]-甲基}戊酸 由制備例46的叔丁基酯，按照類似于實施例14描述的方法，定量得到此標題化合物，為橙色膠狀物；1H NMR(CDCl3，400MHz)δ0.90(t，3H)，1.12-2.14(m，17H)，2.38(m，1H)，2.87(m，1H)，6.10(s，1H)，7.13(m，3H)，7.25(m，2H)；LRMSm/z 344.3(MH+)。
實施例17(2R)-2-{[1-({{5-(環(huán)丙基甲基)-1，3，4-噻二唑-2-基]氨基}羰基)環(huán)戊基]甲基}戊酸 將制備例50的叔丁基酯(63mg，0.15mmol)在三氟乙酸(2ml)和二氯甲烷(2ml)中的溶液，室溫下攪拌2小時。將此混合物減壓下濃縮并將此殘余物在硅膠上通過柱色譜進行純化，用二氯甲烷∶甲醇(95∶5)作為洗脫劑洗脫得到標題化合物，為白色泡沫，46mg，83％；1H NMR(CD3OD，400MHz)δ0.38(m，2H)，0.62(m，2H)，0.82(t，3H)，1.12(m，1H)，1.26(m，2H)，1.38(m，1H)，1.52(m，1H)，1.78-1.78(m，6H)，1.90(m，1H)，2.23(m，4H)，2.92(d，2H)；LRMSm/z366.0(MH+)；[α]D＝-7.75°(c＝0.08，甲醇)。
實施例18(2R)-2-{[1-({[5-(乙氧基甲基-1，3，4-噻二唑-2-基]氨基}羰基)環(huán)戊基]甲基}戊酸 由制備例51的叔丁基酯，按照類似于實施例17描述的方法，得到此標題化合物，為白色泡沫，收率62％；1H NMR(CD3OD，400MHz)δ0.82(t，3H)，1.21-1.40(m，7H)，1.50(m，1H)，1.60-1.77(m，7H)，1.88(m，1H)，2.23(m，4H)，3.62(q，2H)；[α]D＝-6.08°(c＝0.25，甲醇)。
實施例19
2-({1-[(3-吡啶基氨基)羰基]環(huán)戊基}甲基)戊酸 將制備例52的芐基酯(130mg，0.33mmol)和10％鈀碳(20mg)在含水的95％乙醇(3ml)中的混合在15psi和室溫下氫化2小時。將此反應通過Arbocel_過濾，用乙醇洗滌，并將此濾液減壓下蒸發(fā)。將此殘余的膠狀物在硅膠上通過柱色譜純化，用二氯甲烷∶甲醇(95∶5)作為洗脫劑，得到標題化合物，103mg，83％；1H NMR(CDCl3，400MHz)δ0.90(t，3H)，1.38(m，2H)，1.44(m，1H)，1.58-1.82(m，8H)，2.19(m，1H)，2.39(m，2H)，2.52(m，1H)，6.88(m，1H)，7.67(m，1H)，7.82(d，1H)，8.38(d，1H)，9.78(s，1H)；LRMSm/z 305(MH+)。
實施例202-[(1-{[(4-丁基-2-吡啶基)氨基]羰基}環(huán)戊基)甲基]戊酸 由制備例55的芐基酯，按照類似于實施例19描述的方法，得到此標題化合物，收率92％；1H NMR(CDCl3，400MHz)δ0.90(m，6H)，1.28-1.50(m，5H)，1.58-1.81(m，10H)，2.20(m，1H)，2.40(m，2H)，2.58(m，3H)，6.70(d，1H)，7.68(d，1H)，8.22(s，1H)，9.90(bs，1H)。
實施例212-({1-[(3-芐基苯氨基)羰基]環(huán)戊基}甲基)戊酸 將制備例53的芐基酯(1.3mg，2.47mmol)和5％鈀碳(130mg)在水(10ml)和乙醇(40ml)中的混合物，在30psi和室溫下氫化2小時。此反應混合物通過Arbocel_過濾，將此濾液減壓濃縮，并將此殘余物用二氯甲烷研磨。將此殘余的膠狀物用乙醚研磨，然后用己烷研磨，并在50℃下干燥，得到標題化合物，為固體，0.79g，81％；1H NMR(CDCl3，300MHz)δ0.95(t，3H)，1.24-1.51(m，3H)，1.58-1.80(m，7H)，1.88(dd，1H)，2.15(m，2H)，2.24(m，1H)，2.48(m，1H)，4.00(s，2H)，6.98(d，1H)，7.24(m，6H)，7.40(m，3H)；分析實測值C，75.48；H，7.76；N，3.59。C25H31NO3；0.25H2O理論值C，75.44；H，7.98；N，3.51％。
實施例222-[(1-{[(1-芐基-6-氧代-1，6-二氫-3-吡啶基)氨基]羰基}-環(huán)戊基)-甲基]戊酸 由實施例56的芐基酯，按照類似于實施例21描述的方法，不同的是該產(chǎn)品在硅膠上通過柱色譜進行純化，用乙酸乙酯作為洗脫劑，得到此標題化合物，為白色泡沫，收率51％；1H NMR(CDCl3，300MHz)δ0.96(t，3H)，1.28-1.80(m，12H)，2.01(m，1H)，2.30-2.52(m，2H)，5.02(dd，2H)，6.60(d，1H)，7.27(m，5H)，7.70(s，1H)，8.34(s，1H)；分析實測值C，69.52；H，7.41；N，6.51。C24H30N2O4；0.25H2O理論值C，69.45；H，7.41；N，6.75。
實施例23順-2-({1-[({4-[(二甲基氨基)羰基]環(huán)己基}氨基)羰基]-環(huán)戊基}甲基)戊酸 將制備例58的芐基酯(150mg，0.33mmol)和10％鈀碳(20mg)在水(0.3ml)和乙醇(3.5ml)中的混合物，在15psi和室溫下氫化3天。此反應混合物通過Arbocel_過濾，并將此濾液減壓濃縮。將此殘余的膠狀物在硅膠上通過柱色譜純化，用二氯甲烷∶甲醇(95∶5)作為洗脫劑，得到標題化合物，85mg，65％；1H NMR(CDCl3，400MHz)δ0.84(t，3H)，1.29-1.96(m，18H)，2.01-2.23(m，4H)，2.37(m，1H)，2.62(m，1H)，2.96(s，3H)，3.03(s，3H)，3.96(m，1H)，5.98(m，1H)；LRMSm/z 381.8(MH+)；分析實測值C，63.81；H，9.58；N，6.99。C21H36N2O4；0.2CH2Cl2理論值C，64.06；H，9.23；N，7.05％。
實施例24順-2-({1-[({4-[(甲基氨基)羰基]環(huán)己基}氨基)羰基]環(huán)戊基}-甲基)戊酸
由制備例59的芐基酯，按照實施例23描述的方法，得到此標題化合物，為白色固體，收率34％；1H NMR(CDCl3，300MHz)δ0.90(t，3H)，1.26-2.02(m，20H)，2.19(m，3H)，2.39(m，1H)，2.82(d，3H)，4.00(m，1H)，5.69(m，1H)，6.00(d，1H)；LRMSm/z365(M-H)-。
實施例252-[(1-{[(5-芐基-3-吡啶基)氨基]羰基}環(huán)戊基)甲基]戊酸 將制備例54的芐基酯(850mg，1.76mmol)和5％鈀碳(100mg)在含水的20％乙醇(30ml)中的混合物，在30psi和室溫下氫化2小時。將此混合物通過Arbocel_過濾，將此濾液減壓下蒸發(fā)，并將此殘余物與二氯甲烷共沸得到標題化合物，為泡沫狀物質(zhì)，0.63g；1HNMR(CDCl3，300MHz)δ0.92(t，3H)，1.30-1.83(m，11H)，2.07(m，1H)，2.42(m，3H)，3.82(s，2H)，7.15-7.38(5H)，7.80(s，1H)，8.48(s，1H)，8.59(s，1H)，8.62(s，1H)；分析實測值C，72.29；H，7.70；N，6.90。C24H30N2O3；0.25H2O理論值C，72.24；H，7.70；N，7.02％。
實施例262-({1-[({1-芐基-2-氧代-2-氧代-2-[(3-吡啶基磺?；?氨基]乙基}氨基)-羰基]環(huán)戊基}甲基)戊酸 將制備例57的芐基酯(918mg，1.52mmol)和10％鈀碳(90mg)在水(10ml)和乙醇(50ml)中的混合物，在50psi和室溫下氫化4.5小時。Tlc分析表明存在起始物，故再加入催化劑(70mg)，并將此混合物再氫化18小時。Tlc分析，再次表明存在起始物，故再加入催化劑(70mg)，并繼續(xù)再氫化6小時。此反應混合物通過Arbocel_過濾，將此濾液減壓下蒸發(fā)并將此殘余物與二氯甲烷共沸。粗品在硅膠上通過柱色譜純化，用二氯甲烷∶乙酸∶乙醇的洗脫梯度(99∶1∶0至79.1∶0.9∶20)洗脫得到標題化合物，為白色泡沫，271mg，35％；1HNMR(DMSOd6，300MHz)δ0.75(m，3H)，0.96-1.42(m，11H)，1.61-1.99(m，4H)，2.75-3.02(m，2H)，4.45(m，1H)，7.20(m，6H)，7.62(m，1H)，8.24(m，1H)，8.83(s，1H)，9.01(s，1H)，11.98(bs，1H)，12.70(bs，1H)；IR(KBr片)1185，1195(m)，1455，1515，1640，1704，2870，2930，2960(s)。
實施例272-({1-[({2-[(苯基磺?；?氨基]乙基}氨基)羰基]環(huán)戊基}-甲基)戊酸 將制備例61的胺(235mg，0.72mol)、苯磺酰氯(127mg，0.72mmol)和三乙基胺(150μl，1.08mmol)在二氯甲烷(6ml)中的混合物，室溫下攪拌2天。將此混合物減壓下濃縮并將此殘余物在硅膠上通過柱色譜進行純化，用乙酸乙酯∶戊烷(30∶70)作為洗脫劑洗脫得到清澈油狀物。然后將此溶解于三氟乙酸(3ml)和二氯甲烷(3ml)中，并將此溶液室溫下攪拌6小時。將此混合物減壓下濃縮并將此殘余物與甲苯共沸兩次。粗品在硅膠上通過柱色譜純化，用乙酸乙酯∶戊烷(30∶70)洗脫得到標題化合物，為清澈油狀物，204mg，69％；1H NMR(CDCl3，400MHz)δ0.84(t，3H)，1.22-1.43(m，4H)，1.43-2.18(m，10H)，2.36(m，1H)，3.11(m，2H)，3.20-3.31(m，1H)，3.42-3.53(m，1H)，6.13-6.24(m，1H)，7.42-7.59(m，3H)，7.84(m，2H)；LRMSm/z411.8(MH+)；分析實測值C，57.26；H，7.40；N，6.61。C20H30N2O5S理論值C，57.18；H，7.22；N，6.62％。
實施例282-({1-[({2-[(芐基磺?；?氨基]乙基}氨基)羰基]環(huán)戊基}-甲基)戊酸 由制備例61的胺，按照實施例27描述的方法，得到此標題化合物，為清澈油狀物，收率97％，1H NMR(CDCl3，300MHz)δ0.87(t，3H)，1.19-1.72(m，11H)，1.80-1.96(m，1H)，2.00-2.16(m，2H)，2.27-2.38(m，1H)，2.92-3.21(m，3H)，3.23-3.39(m，1H)，4.25(s，2H)，5.80-6.06(m，1H)，6.38(m，1H)，7.29-7.43(m，5H)；LRMSm/z 425.8(MH+)。
實施例29(2R)-2-[(1-{[(5-乙基-1，3，4-噻二唑-2-基)氨基]羰基}環(huán)戊基)甲基]戊酸 和實施例30(2S)-2-[(1-{[(5-乙基-1，3，4-噻二唑-2-基)氨基]羰基}環(huán)戊基)甲基]戊酸 將實施例4的酸(824mg)通過HPLC用AD柱并用己烷∶異丙醇∶三氟乙酸(85∶15∶0.2)作為洗脫劑進一步純化，得到實施例29的標題化合物，為白色泡沫，400mg，99.5％ee，1H NMR(CDCl3，400MHz)δ0.90(t，3H)，1.36(m，6H)，1.50-1.80(m，9H)，2.19(m，1H)，2.30(m，1H)，2.44(m，1H)，2.60(m，1H)，2.98(q，2H)，12.10-12.30(bs，1H)，LRMSm/z 338(MH-)，[α]D＝-9.0°(c＝0.1，甲醇)，和實施例30的標題化合物，為白色泡沫，386mg，99％ee，1HNMR(CDCl3，400MHz)δ0.90(t，3H)，1.38(m，6H)，1.50-1.79(m，9H)，2.19(m，1H)，2.30(m，1H)，2.44(m，1H)，2.60(m，1H)，2.98(q，2H)，12.10-12.27(bs，1H)；LRMSm/z 338(MH-)；和[α]D＝+3.8°(c＝0.1，甲醇)。
或者，實施例29可以制備如下相制備例51a的產(chǎn)物(574g，1.45mol)的二氯甲烷(2.87L)溶液中，在10℃冷卻下在50分鐘內(nèi)加入三氟乙酸(1.15L)。加畢，在氮氣氛下攪拌24小時，讓此反應升溫至室溫。然后加入去離子水(2.6L)。再將此反應混合物用去離子水(3×2.6L)洗滌。將此二氯甲烷層濃縮至體積約1L，得到粗品標題化合物(439g，1.29mol，96％收率)，為在二氯甲烷中的溶液。用下列方法得到標題化合物的純化樣品。向已過濾除去任何顆粒污染物的該粗品的二氯甲烷溶液(2.34L)中，加入乙酸異丙基酯(1.38L)。將所得混合物在常壓下蒸餾，同時用乙酸異丙基酯替換，直到該溶液溫度達到87℃。停止加熱并將此溶液攪拌14小時冷卻至室溫，得到絮狀棕色溶液。然后，加快攪拌速度，并開始結(jié)晶。然后，在室溫下讓此懸浮液沉淀12小時。再將所得懸浮液冷卻至0℃，保持3.5小時，再通過過濾收集固體。再用乙酸異丙基酯(2×185ml，然后2×90ml)洗滌濾餅，并將此固體在40-45℃下真空下干燥18小時，得到標題化合物(602g，0.18mol，70％收率)，為霜狀、有色的、結(jié)晶固體；m.p.130-136℃；LRMS(負APCI)m/z[M-H]-338；1H-NMR(CDCl3，300MHz)δ0.92(t，3H)，1.27-1.52(m，7H)，1.52-1.89(m，8H)，2.11-2.27(m，1H)，2.27-2.37(m，1H)，2.42-2.55(m，1H)，2.65(dd，2H)，3.00(q，2H)，12.25(bs，1H)。
實施例29可以如下進行純化得自實施例29的標題產(chǎn)物溶解于甲醇。向此溶液中加入存在于甲醇中的甲醇鈉(1當量)(1ml/g的實施例29)并將此混合物室溫下攪拌20分鐘。真空下除去溶劑并將此殘余物與乙酸乙酯共沸得到棕色殘余物。加入乙酸乙酯并將此溶液過濾，得到棕色固體，將其用叔丁基甲基醚洗滌，得到實施例29的鈉鹽粗品。將此粗品(35g)在水(200ml)和乙酸乙酯(350ml)之間分配。加入濃鹽酸(約7ml)直到水層的pH為pH 2。此水相用乙酸乙酯洗滌(2×100ml)。將合并層用硫酸鎂干燥。真空下除去溶劑得到淡棕色固體(31g)。加入乙酸乙酯(64ml，2ml/g)和二異丙基醚(155ml，5ml/g)并將此混合物加熱至68℃直到獲得清澈溶液(約30min)。冷卻至室溫時，發(fā)生游離酸結(jié)晶。室溫下攪拌30分鐘后過濾收集產(chǎn)物并用二異丙基醚洗滌。將此產(chǎn)物在真空烘箱中在50℃下干燥過夜。(20.2g，由鈉鹽的回收率為61％)；m.p.135℃(用Perkin Elmer DSC7在20℃/分鐘的加熱速度下檢測)。
在PXRD花樣中的主要的峰(2至40度2θ)如下。PXRD在不參考內(nèi)標(如硅粉)的條件下進行。因此，峰位置受可能的儀器零偏移和樣品高度誤差支配。
實施例29的鹽鈉鹽a)低熔點形式得自實施例29的標題產(chǎn)物溶解于甲醇中(80mg在2.5ml中，33ml/g)。加入氫氧化鈉(0.024ml，為10N溶液)。甲醇蒸發(fā)時發(fā)生鈉鹽的結(jié)晶，其不再進行純化，直接使用。將該鹽高真空下干燥5小時得到85mg，定量收率；m.p.214℃(用TA儀DSC2910以10℃/分鐘的加熱速度測定)。在PXRD花樣中的主要的峰(2至40度2θ)如下。PXRD在不參考內(nèi)標(如硅粉)的條件下進行。因此，峰位置受可能的儀器零偏移和樣品高度誤差支配。
b)高熔點形式得自實施例29的標題產(chǎn)物溶解于甲醇(450mg在15ml中，33ml/g)。加入氫氧化鈉(1.33ml，1N溶液)。用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器真空下除去甲醇得到膠狀物。將此膠狀物與異丙醇(8ml)共沸一次，除去殘留的甲醇和水，之后在加入一部分異丙醇(15ml)。將此混合物加熱直到獲得均勻的混合物。冷卻時發(fā)生鈉鹽的結(jié)晶。將此混合物室溫下放置10分鐘。將該鹽濾出，用異丙醇洗滌并在真空烘箱中在60℃下干燥30分鐘；回收氘200mg的鈉鹽；m.p.252℃(用TA儀DSC2910以10℃/分鐘的加熱速度測定)。
在PXRD花樣中的主要的峰(2至40度2θ)如下。PXRD在不參考內(nèi)標(如硅粉)的條件下進行。因此，峰位置受可能的儀器零偏移和樣品高度誤差支配。
實施例29的此標題化合物代謝形成(2R)-1-(2-{(5-乙基-1，3，4-噻二唑-2-基)氨基]羰基}戊基)環(huán)戊烷甲酸。
此化合物制備如下將制備例102的產(chǎn)物(430mg，1mmol)在乙醇(5ml)和甲醇(1ml)中回收并在30psi氫氣壓下在室溫下氫化2小時。再將此混合物通過Arbocel_塞過濾并蒸發(fā)為黃色油狀物。將此油狀物通過柱色譜純化，先用19∶1，再用9∶1的DCM∶MeOH作為洗脫劑洗脫，得到該產(chǎn)物，為清澈油狀物(120mg，35％)；1H NMR(400MHz，CDCl3)0.88(t，3H)，1.20-1.88(m，13H)，1.90-2.03(m，1H)，2.24-2.38(m，1H)，2.43-2.72(m，2H)，2.95(q，2H)；LRMS m/z 340.2(M+H)。
實施例31(R)-2-{[1-({[2-(羥基甲基)-2，3-二氫-1H-茚-2-基]氨基}羰基)-環(huán)戊基]甲基}戊酸 和實施例32(S)-2-{[1-({[2-(羥基甲基)-2，3-二氫-1H-茚-2-基]氨基}羰基)環(huán)戊基]甲基}戊酸 將2-{[1-({[2-(羥基甲基)-2，3-二氫-1H-茚-2-基]氨基}羰基)-環(huán)戊基]甲基}戊酸(WO 9110644，實施例8)通過HPLC進一步純化，用AD柱并用己烷∶異丙醇∶三氟乙酸(90∶10∶0.1)作為洗脫劑，得到實施例31的標題化合物，99％ ee，[α]D＝+10.4°(c＝0.067，乙醇)和實施例32的標題化合物，99％ ee，[α]D＝-10.9°(c＝0.046，乙醇)。
實施例33(2R)-2-[(1-{[(1-芐基-6-氧代-1，6-二氫-3-吡啶基)氨基]羰基}-環(huán)戊基)甲基]戊酸
將1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(191mg，1.0mmol)、1-羥基苯并三唑水合物(135mg，01.0mmol)、N-甲基嗎啉(165μl，1.5mmol)及制備例28的胺(150mg，0.69mmol)加入到制備例2的酸(284mg，1.0mmol)的N，N-二甲基甲酰胺(8ml)溶液中，并將此反應在90℃下攪拌18小時。此冷卻的溶液用乙酸乙酯(90ml)稀釋，用水(4×50ml)和鹽水(50ml)洗滌，然后干燥(硫酸鎂)并減壓下蒸發(fā)。粗品在硅膠上進行色譜純化，用乙酸乙酯∶戊烷(30∶70)洗脫，得到黃色油狀物，191mg。將此中間體溶解于二氯甲烷(3ml)和三氟乙酸(3ml)中，并將此溶液室溫下攪拌5小時。將此混合物減壓下濃縮并將此殘余物在硅膠上通過柱色譜進行純化，用二氯甲烷∶甲醇(95∶5)作為洗脫劑洗脫，得到標題化合物，為泡沫狀物質(zhì)，77mg，1H NMR(CDCl3，300MHz)δ0.86(t，3H)，1.20-1.76(m，12H)，1.93-2.02(m，1H)，2.20-2.46(m，3H)，4.95(d，1H)，5.04(d，1H)，6.61(d，1H)，7.21(m，1H)，7.50(s，1H)，8.23(s，1H)；LRMSm/z 411.6(MH)+；[α]D＝-3.8°(c＝0.052，乙醇)。
實施例34(2R)-2-[(1-{[(4-丁基-2-吡啶基)氨基]羰基}環(huán)戊基)甲基]戊酸 由制備例2的酸和制備例30的胺，按照類似于實施例33描述的方法，得到此標題化合物，收率43％，1H NMR(CDCl3，400MHz)δ0.80-1.00(m，6H)，1.22-1.84(m，18H)，2.03-2.56(m，3H)，2.77(m，1H)，7.14(d，1H)，8.08(d，1H)，8.23(s，1H)，11.71(brs，1H)；LRMSm/z 361.7(MH)+，[α]D＝-1.4°(c＝0.14，乙醇)。
實施例352-[(1-{[(1-芐基-6-氧代-1，6-二氫-3-吡啶基)氨基]羰基}環(huán)戊基)甲基]-4-甲氧基丁酸 將制備例62的芐基酯(850mg，1.64mol)，與5％鈀碳(250mg)在含水的40％乙醇(21ml)中的混合物，在30psi和室溫下氫化30分鐘。將此反應混合物通過Hyflo_過濾，并將此濾液減壓下蒸發(fā)。將殘余的泡沫狀物質(zhì)在硅膠上通過柱色譜純化，用二氯甲烷∶甲醇(97∶3)作為洗脫劑洗脫，得到標題化合物，為白色泡沫，550mg，79％；1H NMR(DMSO-d6，300MHz)δ1.24-2.17(m，12H)，2.18-2.31(m，1H)，3.07(s，3H)，3.21(t，2H)，5.08(s，2H)，6.63(d，1H)，7.23-7.41(m，5H)，7.72(d，1H)，8.24(s，1H)；分析實測值C，67.46；H，7.18；N，6.24。C24H30N2O5理論值C，67.58；H，7.09；N，6.57％。
實施例363-{1-[(環(huán)戊基氨基)羰基]環(huán)戊基}-2-[(2-甲氧基乙氧基)甲基]-丙酸 將制備例64的叔丁基酯(320mg，0.80mmol)在三氟乙酸(2ml)和二氯甲烷(2ml)中的溶液，室溫下攪拌8小時。將此混合物減壓下濃縮并將此殘余物與甲苯共沸兩次。粗品在硅膠上通過柱色譜純化，用二氯甲烷∶甲醇(95∶5)洗脫，得到標題化合物，為清澈油狀物，171mg，62％；1H NMR(CDCl3，400MHz)δ1.29-1.40(m，2H)，1.42-1.69(m，10H)，1.75(dd，1H)，1.87-2.03(m，5H)，2.64(m，1H)，3.34(s，3H)，3.43-3.52(m，3H)，3.57(m，2H)，3.61(m，1H)，4.08-4.20(m，1H)，5.89(d，1H)；LRMSm/z340(MH-)。
實施例373-(2-甲氧基乙氧基)-2-{[1-({[3-(2-氧代-1-吡咯烷基)丙基]氨基}羰基)-環(huán)戊基]甲基}丙酸 由制備例65的叔丁基酯，按照實施例36描述的方法，得到此標題化合物，為清澈油狀物，收率57％，1H NMR(CDCl3，300MHz)δ1.56-1.78(m，8H)，1.94-2.17(m，6H)，2.44(m，2H)，2.68-2.76(m，1H)，3.10-3.21(m，1H)，3.22-3.31(m，1H)，3.37(s，3H)，3.40(m，2H)，3.44-3.56(m，5H)，3.60(m，2H)，3.68(m，1H)，6.91-7.01(m，1H)；LRMSm/z 398.7(M+)。
實施例38順-3-(2-甲氧基乙氧基)-2-[(1-{[(4-{[(苯基磺?；?氨基]羰基}環(huán)己基)-氨基]羰基}環(huán)戊基)甲基]丙酸 將制備例66的叔丁基酯(446mg，0.75mmol)在二氯甲烷(5ml)和三氟乙酸(5ml)中的溶液，室溫下攪拌18小時。將此反應混合物減壓下濃縮，并將此殘余物與二氯甲烷共沸，再與甲苯共沸，并最后與乙醚共沸，得到標題化合物，為白色泡沫，385mg，95％；1H NMR(CDCl3，400MHz)δ1.48-2.17(m，18H)，2.40(s，1H)，2.66(s，1H)，3.37(s，3H)，3.50-3.70(m，6H)，3.94(s，1H)，6.10(d，1H)，6.59(s，1H)，7.55(t，2H)，7.61(m，1H)，8.02(d，2H)，9.11(s，1H)；分析實測值C，54.88；H，6.90；N，5.04。C26H38N2O8S；1.7H2O理論值C，57.97；H，7.11；N，5.20％。
實施例392-{[1-({[3-(甲基氨基)-3-氧代丙基]氨基}羰基)環(huán)戊基]甲基}-4-苯基丁酸 將制備例68的芐基酯(160mg，0.34mmol)和10％鈀碳(100mg)在乙醇(30ml)中的混合物，在室溫和60psi下氫化18小時。將此混合物通過Arbocel_過濾并將此濾液減壓濃縮，并與二氯甲烷共沸。粗品在硅膠上通過柱色譜純化，用二氯甲烷∶甲醇∶乙酸的洗脫梯度(95∶5∶0至95∶5∶0.5)洗脫，得到標題化合物，為白色泡沫，100mg，79％；1H NMR(CDCl3，400MHz)δ1.40-1.70(m，8H)，1.95(m，3H)，2.10(m，1H)，2.35(d，3H)，2.59(m，2H)，2.75(t，3H)，3.42(m，2H)，6.25(bs，1H)，6.70(bs，1H)，7.13-7.25(m，5H)；且LRMSm/z 375.0(MH+)。
實施例402-{[1-({[3-(2-氧代-1-吡咯烷基)丙基]氨基}羰基環(huán)戊基]-甲基}-4-苯基丁酸 將制備例67的芐基酯(780mg，1.55mmol)和10％鈀碳(100mg)在乙醇∶水(90∶10體積；30ml)中的混合物，室溫下60psi氫氣壓下氫化1.5小時。濾出催化劑，并將此濾液減壓下蒸發(fā)得到標題化合物，為白色泡沫，473mg，74％；1H NMR(CDCl3，300MHz)δ1.26-1.77(m，10H)，1.78-2.46(m，11H)，2.49-2.70(m，2H)，2.95-3.36(m，4H)，6.92-7.38(m，5H)；分析實測值C，64.05；H，7.73；N，6.22。C24H34N2O4；0.75H2O理論值C，65.88；H，7.83；N，6.40％。
實施例414-苯基-2-({1-[(3-吡啶基氨基)羰基]環(huán)戊基}甲基)丁酸
將制備例71的芐基酯(700mg，1.53mmol)和5％鈀碳(70mg)在乙醇∶水(90∶10體積，50ml)中的混合物，在室溫下在30psi氫氣壓下氫化5小時。將此催化劑通過Arbocel_過濾，用乙醇充分洗滌，并將此濾液減壓下蒸發(fā)。粗品在硅膠上通過柱色譜純化，用二氯甲烷∶甲醇(95∶5)作為洗脫劑洗脫，得到標題化合物，為白色泡沫，510mg，91％；m.p.80-85℃(變?yōu)槟z狀物)；1H NMR(CDCl3，300MHz)1.40-2.78(m，15H)，6.93-7.39(m，5H)，7.93(m，1H)，8.59(d，1H)，9.17(d，1H)，9.41(s，1H)；分析實測值C，70.83；H，7.10；N，7.64。C22H26N2O3；0.3H2O理論值C，70.94；H，7.22；N，7.52％。
實施例422-{[1-({[1-(羥基甲基)環(huán)戊基]氨基}羰基)環(huán)戊基]甲基}-4-苯基丁酸 將制備例69的芐基酯(118mg，0.25mmol)和10％鈀碳(100mg)在乙醇(20ml)的混合物，在室溫和60psi下氫化18小時。將此混合物通過Arbocel_過濾，將此濾液減壓濃縮，并與二氯甲烷共沸得到標題化合物，為無色膠狀物，95mg，98％；1H NMR(CDCl3，300MHz)δ1.41-1.80(m，17H)，1.90(m，1H)，1.92-2.20(m，3H)，2.40(m，1H)，2.60(m，2H)，3.60(d，1H)，3.71(d，1H)，5.80(bs，1H)，7.15-7.30(m，5H)；LRMSm/z 388.1(MH+)。
實施例432-[(1-{[(5-甲基-1，3，4-噻二唑-2-基)氨基]羰基}環(huán)戊基)甲基]-4-苯基丁酸 將制備例70的芐基酯(187mg，0.39mmol)和10％鈀碳(80mg)在乙醇(20ml)中的混合物，在60psi下氫化18小時。Tlc分析表明存在起始物，故再加入10％鈀碳(100mg)，并將此反應再繼續(xù)5小時。Tlc分析再次表明存在起始物，故再加入催化劑(100mg)，并繼續(xù)氫化18小時。將此混合物通過Arbocel_過濾，并將此濾液減壓濃縮，并與二氯甲烷共沸。粗品在硅膠上進行色譜純化，用Biotage_柱，并用二氯甲烷∶甲醇(95∶5)作為洗脫劑，得到標題化合物，為清澈油狀物，80mg，53％；1H NMR(CDCl3，300MHz)81.51-1.89(m，9H)，2.03(m，1H)，2.20(m，1H)，2.40(m，2H)，2.60(m，5H)，7.15-7.30(m，5H)；LRMSm/z387.8(MH+)，實施例44(R)-2-{[1-({[2-(羥基甲基)-2，3-二氫-1H-茚-2-基]氨基}羰基)-環(huán)戊基]甲基}-4-苯基丁酸 和實施例45(S)-2-{[1-({[2-(羥基甲基)-2，3-二氫-1H-茚-2-基]氨基}羰基)環(huán)戊基]甲基}-4-苯基丁酸 將2-{[1-({[2-(羥基甲基)-2，3-二氫-1H-茚-2-基]氨基}羰基)環(huán)戊基]甲基}-4-苯基丁酸(WO 9110644，實施例9)通過標準HPLC方法純化，用AD柱，并用己烷∶異丙醇∶三氟乙酸(70∶30∶0.2)作為洗脫劑，得到實施例44的標題化合物，99.5％ee；[α]D＝+9.1°(c＝1.76，乙醇)；和實施例45的標題化合物，99.5％ee；[α]D＝-10.5°(c＝2.2，乙醇)。
實施例46反式-3-[1-({[2-(4-氯苯基)環(huán)丙基]氨基}羰基)環(huán)戊基]-2-(甲氧基甲基)丙酸 將制備例72的產(chǎn)物(160mg，0.39mmol)在50ml DCM中回收并冷卻至0℃。然后將氯化氫氣體通過此溶液15分鐘，然后室溫下攪拌16小時。將此反應混合物真空濃縮并在通過柱色譜純化，用5∶95 MeOH∶DCM作為洗脫劑，得到標題產(chǎn)物(18mg，12％)；Rf5∶95(DCM∶MeOH)0.2；1HNMR(400MHz，CDCl3)1.04-1.18(m，2H)，1.20-1.36(m，2H)，1.36-1.79(m，7H)，1.83-2.08(m，4H)，2.57-2.66(m，1H)，2.73-2.83(m，1H)，3.27(s，3H，OMe)，3.32-3.41(m，1H)，3.48(app.dd，1H，CHOMe)，6.21(s，NH)，7.03(d，2H，Ar)，7.18(d，2H，Ar)；LRMSm/z，M-H 378；HRMS實測值MH+380.1622。理論值MH+380.1623。
實施例47反式-3-[1-({[2-(4-甲氧基苯基)環(huán)丙基]氨基}羰基)環(huán)戊基]-2-(甲氧基乙基)丙酸 將制備例81的產(chǎn)物(113mg，0.25mmol)在氯化氫的4M二惡烷(10ml)溶液中回收并攪拌3小時。將此混合物真空濃縮并通過柱色譜純化，用5∶95(MeOH∶DCM)作為洗脫劑，得到酸，為無色膜(45mg，44％)；Rf95∶5(DCM∶MeOH)0.2；LRMSm/z，M-H，388；1HNMR(400MHz，CDCl3)1.01-1.22(m，2H)，1.40-2.22(m，15H)，2.42-2.57(m，1H)，2.73-2.82(m，1H)，3.23(s，3H，OMe)，3.27-3.44(m，2H)，3.72(s，3H，OMe)，6.12(s，1H，NH)，6.78(d，2H，Ar)，7.06(d，2H，Ar)。
式Id的化合物，即其中R1是甲氧基乙基的式I化合物，或者由a)指定的叔丁基酯按照類似于實施例47描述的方法制備，或由b)指定的芐基酯按照類似于實施例42描述的方法制備。
實施例56(R)-2-{[1-({[2-(羥基甲基)-2，3-二氫-1H-茚-2-基]氨基}羰基)-環(huán)戊基]甲基}-4-甲氧基丁酸 和實施例57(S)-2-{[1-({[2-(羥基甲基)-2，3-二氫-1H-茚-2-基]氨基}羰基)環(huán)戊基]甲基}-4-甲氧基丁酸 將實施例53的產(chǎn)物通過HPLC純化，用Chiralcel OD柱(250*20mm)，在室溫下，用含0.3％TFA和0.2％DEA的70％己烷和含含0.3％TFA和0.2％DEA的30％IPA的混合物，硫酸10ml/min。實施例55是R對映異構(gòu)體，其在6分鐘后先洗脫(αD11.00 c1 mg/ml，EtOH)。實施例56是S對映異構(gòu)體，其在7分鐘后第二個被洗脫(αD-8.62 c1.07mg/ml，EtOH)。
實施例583-甲氧基-2-{[1-({[(反式)-2-苯基環(huán)丙基]氨基}羰基)環(huán)戊基]-甲基}丙酸 此標題化合物按照實施例47的方法由制備例82的標題產(chǎn)物制備；1HNMR(CDCl3，400MHz)δ1.2(m，2H)，1.5(m，3H)，1.6(bs，3H)，1.8(d，1H)，2.0(m，4H)，2.6(bs，1H)，2.9(bs，1H)，3.3(s，3H)，3.4(t，1H)，3.5(t，1H)，6.4(s，1H)，7.1(m，3H)，7.3(t，2H)；LRMS 344(M-H)。
下列制備例描述用于上述實施例中的某些中間體的制備。
制備例11-[2-(叔丁氧基羰基)-4-苯基]-環(huán)戊烷甲酸 將1-[2-(叔丁氧基羰基)-4-戊烯基]-環(huán)戊烷甲酸(EP 274234，實施例44)(23g，81.5mmol)和10％鈀碳(2g)在干燥的乙醇(200ml)中的混合物，在30psi和室溫下氫化18小時。此反應混合物通過Arbocel_過濾，并將此濾液減壓下蒸發(fā)得到黃色油狀物。粗品在硅膠上通過柱色譜進行純化，用乙酸乙酯∶戊烷(40∶60)作為洗脫劑，得到標題產(chǎn)物，為清澈油狀物，21g，91％；1H NMR(CDCl3，0.86(t，3H)，1.22-1.58(m，15H)，1.64(m，4H)，1.78(dd，1H)，2.00-2.18(m，3H)，2.24(m，1H)；LRMSm/z 283(M-H)-。
制備例2
1-[(2R)-2-(叔丁氧基羰基)-4-戊基]-環(huán)戊烷甲酸 將(R)-1-[2-(叔丁氧基羰基)-4-戊烯基]-環(huán)戊烷甲酸(WO9113054，實施例10)(10g，35.4mmol)和10％鈀碳(600mg)在干燥的乙醇(25ml)中的混合物，在1atm和室溫下氫化18小時。此反應混合物通過Arbocel_過濾，并將此濾液減壓下蒸發(fā)得到標題化合物，為黃色油狀物，9.6g，95％；1H NMR(CDCl3，0.86(t，3H)，1.22-1.58(m，15H)，1.64(m，4H)，1.78(dd，1H)，2.00-2.18(m，3H)，2.24(m，1H)；[α]D＝-3.3°(c＝0.09，乙醇)。
或者制備例2的標題產(chǎn)物可以制備如下將以下步驟f)的產(chǎn)物(1.12kg，4.0mol)的乙醇(6.5L)溶液分成兩個等分，將它們都置于如下的反應條件下。向以下步驟f)的產(chǎn)物(561g，2.0mol)的乙醇(3.25L)溶液中，加入氫化催化劑(50.5g的5％鈀碳-50％濕度)并將此反應容器用氫氣加壓(30psi)。將此反應室溫下攪拌18小時，之后合并這兩批反應并過濾除去催化劑。將此濾餅用乙醇(2×450ml)洗滌并將合并的濾液再在真空下濃縮。再將所得懸浮液過濾并加入正庚烷(1L)。真空下通過蒸餾除去溶劑并加入正庚烷(1L)。真空下通過蒸餾除去溶劑得到標題化合物(1.1kg，3.86mol，97％收率)，為黃色油狀物其不經(jīng)純化直接用于下步反應；LRMS(陰性APCI)m/z[M-H]-283；1H-NMR(CDCl3，300MHz)δ0.79-0.98(t，3H)，1.24-1.39(m，3H)，1.42-1.50(s，9H)，1.50-1.61，(m，3H)，1.61-1.74(m，4H)，1.74-1.84(m，1H)，2.02-2.23(m，3H)，2.23-2.35(m，1H)。
制備起始物a)叔丁基-3-溴丙酸酯 向3-溴丙酸(6.0kg，39.2mol)的二氯甲烷(60L)溶液中，在0℃下，加入叔丁醇(0.6L)和濃硫酸(0.33L)。將所得溶液冷卻至-15℃丙通入異丁烯(11kg，196mol)。再將此反應在-5℃下攪拌3小時，之后在4小時內(nèi)升溫至20℃并再在此溫度下攪拌15小時。將此反應通過小心地加入到飽和碳酸氫鈉水溶液(0.6M，72L，43.2mol)中停止反應。然后分層并將此有機層用飽和碳酸氫鈉水溶液(2×48L)洗滌，接著用去離子水(48L)洗滌。重復此洗滌循環(huán)并檢測水層的pH并顯示pH高于7。將碳酸鉀(90g，1.5％w/w)加入到此有機層中，之后通過常壓下蒸餾濃縮此溶液至體積為9L加入四氫呋喃(40L)并通過常壓下蒸餾除去殘余的二氯甲烷得到標題化合物(5.27kg，25.2mol，64％收率)在四氫呋喃中的溶液(12L)，其不經(jīng)純化直接用于下步反應；1H-NMR(CDCl3，300MHz)δ1.45(s，9H)，2.80(t，2H)，3.53(t，2H)；LRMS(EI)m/z[MH+]209(79Br)。
b)1-(3-叔丁氧基-3-氧代丙基)環(huán)戊烷甲酸 向商購的二異丙基胺化鋰(20.2kg的2M四氫呋喃/正庚烷/乙基苯溶液，51.0mol)溶液中，在-15℃下，在1小時內(nèi)、在氮氣氛下、攪拌下、小心地加入環(huán)戊烷甲酸(2.7kg，23.7mol)的無水四氫呋喃(8.1L)溶液。將所得溶液在0℃下攪拌3小時，期間形成沉淀。然后將此懸浮液在-15℃下在1.25小時內(nèi)加入到上述步驟a)的產(chǎn)物(5.24kg，25.1mol)的四氫呋喃(52L)溶液中。加畢，將此反應在0℃下攪拌1小時并再在4小時內(nèi)升溫至20℃，并在此溫度下攪拌13.5小時。此反應混合物再冷卻至-15℃，并在攪拌下小心地向其中加入正庚烷(27L)和5M鹽酸(23.7L，118.5mol)。然后分層并將此水相用正庚烷(13.5L)萃取。將合并的有機相用5％碳酸氫鈉水溶液(3×30L)萃取，然后用10％碳酸鉀水溶液(3×30L)萃取。將含水萃取物保持分離并分析產(chǎn)物含量。將這三份碳酸鉀水溶液萃取物合并并加入正庚烷(27L)，之后用5M鹽酸(10.5L)攪拌下將此混合物的pH調(diào)節(jié)至pH7-8。然后分層并再加入正庚烷(40.5L)。用5M鹽酸(19.5L)將此混合物的pH再調(diào)節(jié)至pH 3。然后分層并將此有機相用去離子水(2×27L)洗滌。將此有機相再通過真空蒸餾共沸干燥，并將溶劑體積降低至約4L。再將此溶液攪拌下冷卻至0℃，讓其發(fā)生結(jié)晶。在0℃下繼續(xù)攪拌5小時，之后過濾收集產(chǎn)物。將所得固體在50℃下真空下干燥22.5小時得到標題化合物(1.17kg，4.8mol，20％收率)，為白色結(jié)晶固體；m.p.89-92℃；LRMS(陰性APCI)m/z[M-H]-241；1H-NMR(CDCl3，300MHz)δ1.47(s，9H)，1.50-1.60(m，2H)，1.60-1.82(m，4H)，1.69-2.0(m，2H)，2.08-2.23(m，2H)，2.23-2.34(m，2H)。
c)1-[2-(叔丁氧基羰基)-4-戊烯基]環(huán)戊烷甲酸 向商購的二異丙基胺化鋰(7.63kg的2M四氫呋喃/正庚烷/乙基苯溶液，19.3mol)的無水四氫呋喃(18.3L)中，在-10℃下、在4小時內(nèi)、攪拌下加入上述步驟b)的產(chǎn)物(2.0kg，8.25mol)的無水四氫呋喃(10L)溶液，同時維持此反應溫度在-10℃。在2小時內(nèi)向所得溶液中加入烯丙基溴(1.2kg，9.9mol)的四氫呋喃(10L)溶液，之后在4小時內(nèi)將此反應升溫至20℃。在此溫度下攪拌9.5小時后，將此反應通過加入(40L)停止反應并分成兩相。將此有機相再依次用水(20L)和0.3M氫氧化鉀水溶液(12L)洗滌。向合并的水相中再加入正庚烷(20L)，及5M鹽酸(7.5L)直到該水層的pH為pH 2。然后分層并將此水相再喲嘎正庚烷(20L)萃取。將合并的有機相再用飽和鹽水(2×8.0L)洗滌并在真空下濃縮得到粗品(2.22kg，7.86mol，95％收率)，為在庚烷中的溶液(總?cè)芤褐亓?2.5kg)，其直接用于下步反應；LRMS(EI)[M+-C4H8]226，[M+-HOtBu]208，[208-CO]180；1H-NMR(CDCl3，300MHz)，δ1.45(s，9H)，1.48-1.60(m，2H)，1.60-1.76(m，4H)，1.80(dd，1H)，2.03-2.27(m，4H)，2.27-2.45(m，2H)，5.06(dd，2H)，5.75(ddt，1H)。
d)環(huán)己銨1-[2-(叔丁氧基羰基)-4-戊基]環(huán)戊烷甲酸 在0.5小時內(nèi)，向上述步驟c)的產(chǎn)物(3.83kg，13.6mol)的正庚烷(23L)溶液中，加入存在于正庚烷(7.0L)中的環(huán)己基胺(1.35kg，13.8mol)。將加樣器用正庚烷(0.7L，0.2ml/g)洗滌并將洗滌液加入到將此反應混合物中。將所得漿液在20℃下制粒2小時，再過濾收集此固體。將濾餅用正庚烷(2×1.9L)洗滌，并在50℃下真空干燥23小時。將所得白色固體(4.42kg，11.6mol，85％收率)溶解于乙酸乙酯(24L，5.4ml/g)并加熱至70℃形成清澈溶液。將所得溶液再冷卻至50℃，并加入真正的化合物晶種(lg)。再將此懸浮液在4小時內(nèi)冷卻至50℃至20℃。將此懸浮液在20℃制粒0.5小時，并過濾收集此固體。將濾餅用乙酸乙酯(2×1.8L)洗滌，并將此固體在45℃下真空下干燥14.5小時，得到標題化合物(3.76kg，9.85mol，回收率85％)，為白色結(jié)晶固體；m.p.129.5-131.0℃；分析實測值C，69.28；H，10.31；N，3.60。C22H39NO4理論值C，69.25；H，10.30；N，3.67％；1H-NMR(CDCl3，300MHz)δ1.05-1.35(m，6H)，1.35-1.53(m，10H)，1.53-1.69(m，5H)，1.69-1.89(m，3H)，1.89-2.02(m，3H)，2.02-2.18(m，2H)，2.18-2.31(m，2H)，2.31-2.44(m，1H)，2.71-2.94(m，1H)，5.03(dd，2H)，5.73(ddt，1H)，6.4(bs，3H)。
e)(1S，2S)-1-羥基-N-甲基-1-苯基-2-丙銨1-[(2R)-2-(叔丁氧基羰基)-4-戊基]環(huán)戊烷甲酸 向水(22.6L)和正庚烷(22.6L)的混合物中，攪拌下加入上述步驟d)的產(chǎn)物(3.76kg，9.85mol)。加入5M鹽酸(2.2L，11.0mol)直到此水相的pH為pH3。分離水層并將此水相用正庚烷(2×22.6L)進-步萃取。合并的有機萃取物再用飽和鹽水(3.8L，10ml/g)洗滌并再真空下濃縮至體積為20.3L(總?cè)芤后w積)。攪拌下向此溶液中加入(1S，2S)-(+)-假麻黃鹼(1.63kg，9.86mol，1.0eq)并將此懸浮液加熱至80℃，當完成時發(fā)生溶解現(xiàn)象。將所得溶液在此溫度下保持20分鐘，之后冷卻至45℃。然后加入晶種樣品(0.2g)，并在2小時內(nèi)將懸浮液冷卻至20℃。將所得漿液制粒4小時，并再過濾收集此固體。將濾餅再用正庚烷(3×0.5L)洗滌，并在40-45℃下真空干燥23小時得到白色固體(2.15kg，4.8mol，49％收率)。將此物質(zhì)(2.15kg，4.8mol)在正庚烷(10.8L)的懸浮液加熱至80℃得到清澈溶液。在此溫度下保持10分鐘后，將此溶液冷卻至60℃，并加入晶種樣品(1g)。將所得懸浮液在2小時內(nèi)再冷卻至20℃并在此溫度下再制粒1.5小時。然后過濾收集此固體，用正庚烷(2×0.59L)洗滌并在50℃下真空干燥17.5小時，得到標題化合物(1.80kg，4.0mol，84％回收率)，為白色結(jié)晶固體；m.p.109-110℃；分析實測值C，69.48；H，9.25；N，3.17。C26H41NO5理論值C，69.77；H，9.23；N，3.17％；1H-NMR(300MHz，CDCl3)δ1.05(d，3H)，1.34-1.55(m，2H)，1.44(s，9H)，1.55-1.73(m，4H)，1.82-2.03(m，2H)，2.03-2.21(m，2H)，2.21-2.35(m，2H)，2.35-2.41(m，1H)，2.60(s，3H)，3.03(五重峰，1H)，4.52(d，1H)，5.03(dd，2H)，5.76(ddt，1H)，7.21-7.45(m，5H)。
f)1-[(2R)-2-(叔丁氧基羰基)-4-戊基]環(huán)戊烷甲酸 向去離子水(10.8L)和正庚烷(10.8L)的混合物中，加入上述步驟e)的產(chǎn)物(1.80kg，4.0mol)和5M鹽酸(1.3L，6.5mol)，直到水層的pH為pH3。然后分層并將水層用正庚烷(2×10.8L)萃取。將合并的有機層用鹽水(1.8L)洗滌，并再在常壓下通過蒸餾濃縮至體積為6.4L。然后加入乙醇(18.0L)并將此溶液在常壓下通過蒸餾再次濃縮得到標題化合物(1.14kg，4.0mol，100％回收率)，為乙醇溶液(6.4L總?cè)芤后w積)，其直接用于下步反應(如上)；LRMS(EI)[M+-C4H8]226，[M+-HOtBu]208，[208-CO]180；1H-NMR(300MHz，CDCl3)δ1.45(s，9H)，1.48-1.60(m，2H)，1.60-1.76(m，4H)，1.80(dd，1H)，2.03-2.27(m，4H)，2.27-2.45(m，2H)，5.06(dd，2H)，5.75(ddt，1H)。
制備例3芐基2-{[1-(氯羰基)環(huán)戊基]甲基}戊酸酯 將草酰氯(1.15ml，13.2mmol)加入到1-{2-[(芐基氧基)羰基]戊基}環(huán)戊烷甲酸(EP 274234，實施例16)(2.0g，6.3mmol)的干燥的二氯甲烷(20ml)冰冷的溶液中，并將此溶液室溫下攪拌2小時。此反應混合物減壓下濃縮并將此殘余物與二氯甲烷共沸(3x)，得到標題化合物，為金色油狀物，2.1g；1H NMR(CDCl3，300MHz)δ0.88(t，3H)，1.28(m，2H)，1.43(m，2H)，1.63(m，6H)，2.00(m，1H)，2.08-2.35(m，3H)，2.44(m，1H)，5.15(s，2H)，7.28(m，5H)。
制備例41-(2-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}乙基)-2-哌啶酮 在氮氣氛下，將氫化鈉(807mg，60％礦物油分散液，20.18mmol)分批加入到d-戊內(nèi)酰胺(2.0g，20.2mmol)的四氫呋喃(100ml)溶液中。分批加入(2-溴乙氧基)(叔丁基)二甲基硅烷(得自Aldrich ChemicalCo.)(4.33ml，20.2mmol)，并將此反應在70℃下加熱18小時。向冷卻的反應中加入水(50ml)，將此反應混合物真空濃縮，除去四氫呋喃，并用乙酸乙酯萃取(200ml)。將此有機溶液干燥(硫酸鎂)，并減壓下蒸發(fā)得到黃色油狀物。粗品在硅膠上通過柱色譜純化，用二氯甲烷∶甲醇的洗脫梯度(98∶2至97∶3)洗脫，得到標題化合物，3.25g；1H NMR(CDCl3，400MHz)δ0.00(s，6H)，0.83(s，9H)，1.75(m，4H)，2.35(m，2H)，3.39(m，4H)，3.75(t，2H)；LRMSm/z 257.9(M+)。
制備例51-(2-羥基乙基)-2-哌啶酮 將四正丁基氟化銨(14ml，1M四氫呋喃溶液，14mmol)加入到制備例4的內(nèi)酰胺(3.3g，12.8mmol)的四氫呋喃(50ml)溶液中，并將此反應室溫下攪拌2小時。將此混合物減壓下濃縮，殘余物與二氯甲烷共沸，并在硅膠上通過柱色譜進行純化，用二氯甲烷∶甲醇的洗脫梯度(97∶3至95∶5)洗脫，得到標題化合物，為油狀物；1H NMR(CDCl3，400MHz)δ1.80(m，4H)，2.40(t，2H)，3.38(t，2H)，3.42(t，1H)，3.56(t，2H)，3.80(t，2H)。
制備例62-[2-(2-氧代-1-哌啶基)乙基]-1H-異吲哚-1，3(2H)-二酮
將鄰苯二甲酰亞胺(952mg，6.47mmol)加入到制備例5的產(chǎn)物(842mg，5.88mmol)的四氫呋喃(30ml)溶液中，并將此混合物超聲波處理，直到獲得溶液。加入以聚合物為載體的三苯基膦(2.5g，7.5mmol)和偶氮二甲酸二乙酯(1.15ml，7.31mmol)，并將此反應室溫下攪拌18小時。將此混合物通過Arbocel_過濾，將此濾液減壓濃縮并將此殘余物與二氯甲烷共沸。粗品在硅膠上通過柱色譜純化，用乙酸乙酯∶戊烷的洗脫梯度(70∶30至100∶0)洗脫，得到標題化合物，為白色泡沫，1.6g(含有-些雜質(zhì))；1HNMR(CDCl3，400MHz)δ1.60-1.80(m，4H)，2.17(m，2H)，3.30(m，2H)，3.60(m，2H)，3.83(m，2H)，7.62(m，2H)，7.79(m，2H)；LRMSm/z 273.2(MH+)。
制備例7(1S，3R)-3-氨基環(huán)戊烷甲酸 將氧化鉑(1g)加入到(1R，4S)-4-氨基-環(huán)戊-2-稀羧酸(Taylor等，J.Chem.Soc.，Chem.Commun.(1990)，(16)，1120-1)(5.3g，41.7mmol)的水(70ml)溶液中，并將此混合物在45psi和室溫下氫化18小時。將此混合物通過Arbocel_過濾，將此濾液減壓下蒸發(fā)，并將此殘余物與甲苯共沸，得到標題化合物，為米色固體；1H NMR(D2O，400MHz)δ1.70-1.92(m，3H)，2.00(m，2H)，2.18(m，1H)，2.77(m，1H)，3.68(m，1H)；LRMSm/z 129.8(MH+)。
制備例8(1S，3R)-3-[(叔丁氧基羰基)氨基]環(huán)戊烷甲酸 將二碳酸二叔丁基酯(10g，45.8mmol)加入到制備例7的產(chǎn)物(5.4g，41.8mmol)的二惡烷(42.5ml)和氫氧化鈉溶液(42.5ml，1N，42.5mmol)的冰冷的溶液中，并將此反應室溫下攪拌18小時。此反應混合物減壓下濃縮，除去二惡烷，然后用2N氫氯酸酸化至pH2。此水溶液用乙酸乙酯萃取(5×100ml)，合并的有機萃取物干燥(硫酸鎂)并減壓下蒸發(fā)得到白色固體。將其用己烷研磨，得到標題產(chǎn)物，8.0g，83％；1H NMR(CDCl3，400MHz)δ1.41(s，9H)，1.58-2.06(m，5H)，2.21(m，1H)，2.84(m，1H)，4.01(m，1H)，4.84(m，1H)；LRMSm/z 228(M-H)-。
制備例93-[(叔丁氧基羰基)氨基]環(huán)己烷甲酸 由3-氨基環(huán)己烷羧酸，按照制備例8描述的方法，得到此標題化合物，為白色固體，收率81％；1H NMR(CDCl3，400MHz)δ1.04(m，1H)，1.19-1.50(m，13H)，1.83(m，1H)，1.97(m，2H)，2.24(m，1H)，2.40(m，1H)，3.44(bs，1H)，4.42(bs，1H)。
制備例10叔丁基(1R，3S)-3-(氨基羰基)環(huán)戊基氨基甲酸酯 將苯并三唑-1-基氧基三(吡咯烷基)六氟磷酸磷(3.4g，6.54mmol)、1-羥基苯并三唑水合物(883mg，6.54mmol)、氯化銨(467mg，8.72mmol)和N-乙基二異丙基胺(3.04ml，17.5mmol)依次加入到制備例8的酸(1.0g，4.37mmol)的N，N-二甲基甲酰胺(16ml)溶液中，并將此反應室溫下攪拌2小時。將此混合物用乙酸乙酯稀釋(100ml)，用水(3x)和鹽水洗滌，然后干燥(硫酸鎂)并減壓下蒸發(fā)。將此殘余的膠狀物在硅膠上進行色譜純化，其中使用Biotage_柱和二氯甲烷∶甲醇的洗脫梯度(98∶2至95∶5)。將此產(chǎn)物用乙醚研磨，得到標題化合物，為白色固體，438mg，44％；1H NMR(DMSOd6，400MHz)δ1.34(s，9H)，1.40(m，2H)，1.64(m，3H)，1.90，(m，1H)，2.55(m，1H)，3.70(m，1H)，6.70(bs，1H)，6.80(d，1H)，7.22(bs，1H)。
制備例11叔丁基3-[(二甲基氨基)羰基]環(huán)己基氨基甲酸酯 將1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(1.19g，6.19mmol)，1-羥基苯并三唑水合物(840mg，6.19mmol)，N-甲基嗎啉(1.1ml，10.1mmol)和最后是33％二甲基胺乙醇溶液(1.5ml)加入到制備例9的酸(1.37g，5.6mmol)的N，N-二甲基甲酰胺(30ml)溶液中，并將此反應室溫下攪拌18小時。將此混合物減壓下濃縮，殘余物用乙酸乙酯稀釋并用水洗滌(2x)。將此混合物干燥(硫酸鎂)并減壓下蒸發(fā)。粗品在硅膠上通過柱色譜純化，用甲醇∶二氯甲烷的洗脫梯度(5∶95至10∶90)洗脫，得到標題化合物，998mg，66％；1HNMR(CDCl3，300MHz)δ1.12(m，1H)，1.40(m，11H)，1.70(m，2H)，1.85(m，1H)，2.00(m，2H)，2.62(m，1H)，2.96(s，3H)，3.05(s，3H)，3.50(m，1H)，4.50(m，1H)。
制備例12叔丁基2-(2-乙酰基肼基)-2-氧代乙基氨基甲酸酯 將2-乙氧基-1-乙氧基羰基-1，2-二氫喹啉(7.06g，28.5mmol)加入到N-叔丁氧基羰基甘油(5.0g，28.6mmol)的二氯甲烷(75ml)溶液中，并將此溶液攪拌15分鐘。加入乙酰肼(2.6g，35.1mmol)，并將此反應室溫下攪拌18小時。將所得沉淀過濾，并真空干燥，得到白色結(jié)晶固體，2.42g。將此濾液減壓下濃縮，用乙醚稀釋，并將所得沉淀過濾并真空干燥，又得到一些產(chǎn)品，為白色固體，4.4g，總收率67％；1H NMR(CDCl3，400MHz)δ1.41(s，9H)，2.02(s，3H)，3.87(d，2H)，5.22(bs，1H)，8.27(bs，1H)，8.84(bs，1H)；LRMSm/z249.2(MNH4+)；分析實測值C，46.41；H，7.36；N，17.98，C9H17N3O4理論值C，46.66；H，7.41；N，18.13％。
制備例13芐基3-(甲基氨基)-3-氧代丙基氨基甲酸酯
將N-[(芐基氧基)羰基]-β-丙氨酸(10g，44.8mmol)、甲基胺鹽酸鹽(3.33g，49.28mol)、1-羥基苯并三唑水合物(6.05g，44.8mmol)、1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(10.3g，53.76mmol)和N-甲基嗎啉(11.33ml，103mmol)在二氯甲烷(200mol)中的混合物室溫下攪拌18小時。將所得沉淀濾出得到所需產(chǎn)物，為無色泡沫，并將此濾液減壓下蒸發(fā)。將此殘余物在硅膠上通過柱色譜純化，用乙酸乙酯∶己烷的洗脫梯度(90∶10至100∶0)洗脫，又得到一些產(chǎn)物，7.96g，總收率75％；1H NMR(CDCl3，300MHz)δ2.42(t，2H)，2.80(s，3H)，3.50(m，2H)，5.21(s，2H)，5.49(bs，1H)，5.63(bs，1H)，7.36(m，5H)；分析實測值C，60.68；H，7.00；N，11.95。C12H16N2O3理論值C，61.00；H，6.83；N，11.86％。
制備例14叔丁基(5-甲基-1，3，4-噻二唑-2-基)甲基氨基甲酸酯 將Lawesson ′s試劑(960mg，2.38mmol)加入到制備例12的肼(500mg，2.16mmol)的四氫呋喃(40mol)溶液中，并將此反應加熱回流3小時，然后室溫下攪拌18小時。將此混合物減壓下蒸發(fā)并將此殘余物在硅膠上通過柱色譜進行純化，用乙酸乙酯∶戊烷的洗脫梯度(70∶30至80∶20)洗脫，得到油狀物。加入乙酸乙酯(100ml)和碳(2g)并將此混合物攪拌10分鐘，然后過濾。將此濾液減壓下濃縮，并將此殘余物與二氯甲烷共沸，得到標題化合物，為結(jié)晶固體，441mg，89％；1HNMR(CDCl3，400MHz)δ1.45(s，9H)，2.77(s，3H)，4.66(d，2H)，5.22(bs，1H)；LRMSm/z 230.1(MH+)。
制備例15
N-甲氧基-N-甲基-2-(2-氧代-1-吡咯烷基)乙酰胺 將2-氯-N-甲氧基-N-甲基乙酰胺(得自Aldrich ChemicalCo.)(3.2g，23.3mmol)加入到2-吡咯烷酮(2.0g，23.5mmol)和氫化鈉(940mg，60％礦物油分散液，23.5mmol)的四氫呋喃(60ml)懸浮液，并將此反應室溫下攪拌48小時。將此混合物用水(150ml)停止反應，并用乙酸乙酯(200ml)和二氯甲烷(200ml)萃取。合并的有機萃取物干燥(硫酸鎂)并減壓下蒸發(fā)。將此殘余物用己烷研磨，然后用乙醚研磨，得到標題化合物，白色結(jié)晶，1.8g，41％；1H NMR(CDCl3，400MHz)δ2.02(m，2H)，2.40(t，2H)，3.17(s，3H)，3.48(t，2H)，3.72(s，3H)，4.19(s，2H)；LRMSm/z 186.9(MH+)。
制備例161-(2-氧代丙基)-2-吡咯烷酮 甲基氯化鎂(2.7ml，3M四氫呋喃，8.1mmol)加入到制備例15的酰胺(1.5g，8.1mmol)的四氫呋喃(50ml)的冷(-20℃)溶液中，并將此反應升溫至室溫，然后攪拌1小時。將此混合物通過加入氯化銨水溶液停止反應，然后用乙酸乙酯萃取(3×50ml)。將合并的有機溶液干燥(硫酸鎂)，并減壓下蒸發(fā)得到標題化合物，為油狀物，645mg，56％；1H NMR(CDCl3，400MHz)δ2.07(m，2H)，2.17(s，3H)，2.42(t，2H)，3.42(t，2H)，4.10(s，2H)。
制備例171-[2-(羥基亞氨基)丙基]-2-吡咯烷酮 將羥胺鹽酸鹽(316mg，4.55mmol)和吡啶(370μl，4.58mmol)依次加入到制備例16的酰胺(643mg，4.55mmol)的乙醇(30ml)溶液中，并將此反應室溫下攪拌18小時。將此混合物減壓下蒸發(fā)并將此殘余物在硅膠上通過柱色譜進行純化，用二氯甲烷∶甲醇的洗脫梯度(97∶3至90∶10)洗脫。將此產(chǎn)物用乙醚研磨得到標題化合物，為白色固體，375mg，53％；1H NMR(DMSOd6，400MHz)δ1.60(s，3H)，1.87(m，2H)，2.20(t，2H)，3.19(t，2H)，3.78(s，2H)，10.77(s，1H)；LRMSm/z157.4(MH+)。
制備例18叔丁基1-芐基-2-氧代-2-[(3-吡啶基磺?；?氨基]乙基氨基甲酸酯 將1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(939mg，4.9mmol)、1-羥基苯并三唑水合物(562mg，4.15mmol)和N-甲基嗎啉(952mg，9.42mmol)加入到N-叔丁氧基羰基-1-苯基丙氨酸(1.0g，3.77mmol)的二氯甲烷(20ml)的冰冷的溶液中，并將此混合物攪拌15分鐘。加入3-吡啶磺酰胺(Mon.für Chemie；72；77；1938)(596mg，3.77mmol)，并將此反應室溫下攪拌24小時。將此混合物減壓下蒸發(fā)并將此殘余物在乙酸乙酯(50ml)和水(50ml)之間分配，并分層。水層用乙酸乙酯萃取，然后二氯甲烷萃取，將合并的有機萃取物干燥(硫酸鎂)并減壓下蒸發(fā)。粗品在硅膠上通過柱色譜純化兩次，用乙酸乙酯∶乙醇的洗脫梯度(100∶0至90∶10)洗脫，得到所需的產(chǎn)物，為白色泡沫，1.01g，66；1H NMR(DMSOd6，300MHz)δ1.30(s，9H)，2.77(m，1H)，2.97(m，1H)，3.84(m，1H)，5.95(bs，1H)，6.96(m，2H)，7.08(m，3H)，7.42(m，1H)，8.05(d，1H)，8.60(d，1H)，8.84(m，1H)；[α]D＝-10°(0.1％甲醇溶液)。
制備例19(5-溴-3-吡啶基)(苯基)甲醇 將正丁基鋰(17ml，2.5M在己烷中，42.5mmol)滴加至冷卻的(-78℃)3，5-二溴吡啶(10g，42.2mmol)的乙醚(200ml)溶液中，以便維持內(nèi)部溫度＜-70℃。將此混合物再攪拌15分鐘，并滴加苯甲醛(4.5g，42.5mmol)的乙醚(20ml)溶液，再維持溫度＜-70℃。將此混合物攪拌15分鐘，然后在1小時內(nèi)升溫至室溫。將此反應通過加入0.9M氯化銨溶液(200ml)停止反應，分層，并將此水相用乙醚萃取。膠漿合并的有機萃取物干燥(硫酸鎂)并減壓下蒸發(fā)。殘余的黃色油狀物在硅膠上通過柱色譜純化，用二氯甲烷∶乙醚的洗脫梯度(95∶5至80∶20)洗脫，得到標題化合物，為黃色油狀物，7.6g，68％；1H NMR(D2O，300MHz)δ5.80(s，1H)，7.37(m，5H)，7.90(s，1H)，8.40(s，1H)，8.44(s，1H)。
制備例20(1S，3R)-3-氨基環(huán)戊烷甲酰胺鹽酸鹽 將氯化氫氣體通過制備例10的酰胺(438mg，1.92mmol)的二氯甲烷(50ml)的冰冷的溶液中，通入時間10分鐘，并將所得懸浮液室溫下攪拌2小時。將此混合物置于氮氣氛下，然后減壓下蒸發(fā)。將此殘余物用乙醚研磨，得到標題化合物，為固體；1H NMR(D2O，400MHz)δ1.63-1.82(m，3H)，1.92-2.07(m，2H)，2.19(m，1H)，2.82(m，1H)，3.62(m，1H)。
制備例213-氨基-N，N-二甲基環(huán)己烷甲酰胺 將制備例11的酰胺(997mg，3.69mmol)的三氟乙酸(8ml)和二氯甲烷(8ml)溶液室溫下攪拌4小時。將此混合物減壓下濃縮并將此殘余物在二氯甲烷(25ml)和碳酸氫鈉溶液(25ml)之間分配。用氫氧化鈉溶液將pH調(diào)節(jié)至9，分層，并將此水相減壓下蒸發(fā)。所得固體用熱乙酸乙酯研磨，將懸浮液過濾并將此濾液減壓濃縮。粗品在硅膠上通過柱色譜純化，用二氯甲烷∶甲醇∶0.88氨(84∶14∶2)得到標題化合物asa colourless oil，346mg，55％；1H NMR(CDCl3，300MHz)δ1.08(m，1H)，1.25-1.54(m，6H)，1.72(m，1H)，1.86(m，2H)，2.53-2.75(m，2H)，2.96(s，3H)，3，03(s，3H)。
制備例22(5-甲基-1，3，4-噻二唑-2-基)甲基胺鹽酸鹽 將氯化氫氣體通過制備例14的噻唑(425mg，1.85mmol)的二氯甲烷(50ml)的冰冷的溶液中15分鐘，并將此反應室溫下攪拌1小時。將此混合物置于氮氣氛下，然后減壓下蒸發(fā)，得到標題化合物，為白色固體；1H NMR(DMSOd6，400MHz)δ2.75(s，3H)，4.48(m，2H)，8.80(bs，3H)。
制備例233-氨基-N-甲基丙酰胺鹽酸鹽 將制備例13的氨基甲酸芐基酯(7.92g，33.5mmol)和5％鈀碳(800mg)在乙醇(300ml)中的混合物，在50psi和室溫下氫化4小時。此反應混合物通過Arbocel_過濾，用乙醇洗滌，并將1N氫氯酸(36.9ml，36.9mmol)加入到合并的濾液中。將此溶液減壓下蒸發(fā)并將此殘余物與二氯甲烷共沸，得到標題化合物，4.66g，1H NMR(DMSOd6，300MHz)δ2.46(t，2H)，2.60(s，3H)，2.95(m，2H)，7.98-8.16(m，2H)。
制備例241-(2-氨基丙基)-2-吡咯烷酮
將制備例17的肟(375mg，2.40mmol)和氧化鉑(300mg)在乙醇(20ml)中的混合物，在60psi和室溫下氫化18小時。Tlc分析表明存在起始物，故再加入氧化鉑(100mg)，并將此反應再繼續(xù)4小時。將此混合物通過Arbocel_過濾，并將此濾液減壓下蒸發(fā)。粗品在硅膠上通過柱色譜純化，用二氯甲烷∶甲醇的洗脫梯度0.88氨(95∶5∶0.5至90∶10∶1)洗脫，得到標題化合物，為清澈油狀物，170mg，50％；1HNMR(CDCl3，400MHz)δ1.02(d，3H)，1.36(bs，2H)，2.00(m，2H)，2.38(t，2H)，3.00-3.16(m，2H)，3.21(m，1H)，3.35-3.45(m，2H)；LRMSm/z 143(MH+)。
制備例25N-(2-氨基-3-苯基丙?；?-吡啶磺酰胺二鹽酸鹽 將用乙醚飽和的氫氯酸(40ml)加入到制備例18的磺酰胺(959mg，2.37mmol)的乙酸乙酯(30ml)和乙醚(10ml)的冰冷的溶液中，并將此溶液室溫下攪拌18小時。此反應混合物減壓下濃縮，并將此殘余物與二氯甲烷共沸(3x)得到標題化合物，為白色固體，959mg；1HNMR(DMSOd6，300MHz)δ3.23-3.50(m，1H)，3.70-3.98(m，1H)，4.13(m，1H)，7.05(m，2H)，7.20(m，3H)，7.78(m，1H)，8.36(d，1H)，8.44(bs，2H)，8.95(d，1H)，9.02(s，1H)；[α]D＝+138°(0.5％甲醇溶液)。
制備例26(5-氨基-3-吡啶基)(苯基)甲醇 將制備例19的溴化物(2.0g，7.60mmol)和硫酸銅(II)五水合物(350mg，1.40mmol)在0.88氨(18ml)中的混合物，在密閉的容器中在135℃下加熱24小時。將氫氧化鈉溶液(1N，10ml)加入到此冷卻的溶液中，并將此混合物再用乙醚萃取(6x)。將合并的有機萃取物干燥(硫酸鎂)，并減壓濃縮。將所得沉淀過濾，用乙醚洗滌并干燥得到標題化合物，為固體，1.25g，83％；m.p.92-94℃；1H NMR(DMSOd6，300MHz)δ5.22(s，2H)，5.59(d，1H)，5.86(d，1H)，6.83(s，1H)，7.20(m，1H)，7.34(m，4H)，7.78(m，2H)。
制備例275-芐基-3-吡啶基胺 將制備例26的醇(700mg，3.5mmol)和5％鈀碳(70mg)在氫氯酸(5ml，1N)和乙醇(20ml)中的混合物，在30psi和室溫下氫化6小時。將此混合物通過Arbocel_過濾，并將此濾液減壓濃縮。將此殘余物用碳酸氫鈉水溶液堿化，用二氯甲烷萃取(3x)，并將合并的有機萃取物干燥(硫酸鎂)，并減壓下蒸發(fā)。粗品在硅膠上通過柱色譜純化，用二氯甲烷∶甲醇∶0.88氨(92∶8∶0.4)作為洗脫劑，得到標題化合物，為固體，500mg，78％；mp107-109℃；1HNMR(CDCl3，300MHz)δ3.61(bs，2H)，3.94(s，2H)，6.78(s，1H)，7.24(m，5H)，7.98(s，2H)。
制備例285-氨基-1-芐基-2(1H)-吡啶酮 將1-芐基-5-硝基-1H-吡啶-2-酮(Justus Liebigs Ann.Chem.484；1930；52)(1.0g，4.35mmol)和錫顆粒(3.5g，29.5mmol)在濃鹽酸(14ml)中的混合物在90℃下加熱1.5小時。將此冷卻的溶液用水稀釋，用碳酸氫鈉溶液中和，并用乙酸乙酯萃取(共250ml)。將合并的有機萃取物過濾，干燥(硫酸鎂)，并減壓下蒸發(fā)得到標題化合物，為暗綠色固體，(隨著時間的延長而變藍)，440mg，51％；1H NMR(CDCl3，250MHz)δ4.12-4.47(bs，2H)，5.00(s，2H)，6.31(d，1H)，6.86(s，1H)，7.07(m，1H)，7.14-7.42(m，5H)。
制備例29順-(4-氨基環(huán)己基)甲醇 將氫化鋰鋁(14ml，1M四氫呋喃溶液，14mmol)滴加至順-4-氨基環(huán)己烷甲酸(1.33g，9.29mmol)的四氫呋喃(50ml)的冰冷的溶液中，一旦加畢，就將此反應加熱回流6小時。將所得懸浮液冷卻至5℃，并依次加入水(0.6ml)、氫氧化鈉水溶液(1.1ml，2M)、水(0.6ml)。將所得懸浮液過濾，并將此濾液減壓下蒸發(fā)得到油狀物，其不經(jīng)進一步純化而使用；1H NMR(CDCl3，300MHz)δ1.40-1.80(m，12H)，3.00(m，1H)，3.55(d，2H)；LRMSm/z 130.2(MH+)。
制備例302-氨基-4-丁基吡啶 將4-丁基吡啶(5.0g，37.0mmol)和95％胺化鈉(1.7g，40.7mmol)在二甲苯(10ml)中的混合物在150℃下加熱18小時。將此冷卻的混合物用乙醚(100ml)稀釋，并用2N氫氯酸萃取(兩次)。將含水萃取物用氫氧化鈉溶液堿化，并再用乙醚萃取。將合并的有機萃取物干燥(硫酸鎂)并減壓下蒸發(fā)。將殘余的油狀物在硅膠上通過柱色譜純化，用二氯甲烷∶甲醇∶0.88氨(97∶3∶0.15)作為洗脫劑，得到標題化合物，為結(jié)晶固體，2.1g，38％；1H NMR(CDCl3，300MHz)δ0.96(t，3H)，1.38(m，2H)，1.60(m，2H)，2.52(t，2H)，4.38(bs，2H)，6.38(s，1H)，6.55(d，1H)，7.98(d，1H)；分析實測值C，72.01；H，9.47；N，18.53。C9H14N2理論值C，71.96；H，9.39；N，18.65％。
制備例315-(環(huán)丙基甲基)-1，3，4-噻二唑-2-胺 將草酰氯(3.13ml，35.9mmol)和N，N-二甲基甲酰胺(1滴)加入到環(huán)丙基乙酸(3g，29.9mmol)的二氯甲烷(30ml)溶液中，并將此反應室溫下攪拌18小時。將此混合物減壓下濃縮并與二氯甲烷共沸得到棕色油狀物。將此中間體酰氯(887mg，7.48mmol)和氨基硫脲(455mg，4.99mmol)的混合物在70℃下加熱18小時，然后冷卻。加入水，將此混合物用50％氫氧化鈉水溶液堿化至pH 9，并將所得沉淀過濾并干燥，得到標題產(chǎn)物，410mg，53％；1H NMR(CD3OD，400MHz)δ0.28(m，2H)，0.60(m，2H)，1.02(m，1H)，2.77(d，2H)；LRMSm/z155.2(MH+)。
制備例32(1R，2R，4S)-4-[({1-[2-(叔丁氧基羰基)戊基]環(huán)戊基}羰基)氨基]-2-丁基環(huán)己烷甲酰胺 將制備例49的產(chǎn)物(65mg，0.14mmol)在DCM(2ml)中回收并一批加入1，1′-羰基二咪唑(23mg，0.15mmol)。加入0.88氨水溶液(0.5ml)并將此混合物攪拌16小時。減壓下除去揮發(fā)物，并將所得懸浮液用飽和碳酸氫鈉水溶液(5ml)處理。將此有機物用乙酸乙酯萃取(2x)，干燥(硫酸鎂)并蒸發(fā)得到油狀物，其通過柱色譜純化，用19∶1(DCM∶MeOH)作為洗脫劑，得到標題產(chǎn)物(43mg)；1H NMR(CDCl3，400MHz)δ0.81(t，6H)，1.02-1.28(m，37H)，2.22(m，1H)，4.13(m，1H)，5.42-5.97(m，3H)。
制備例33叔丁基2-{[1-({[1-(羥基甲基)環(huán)戊基]氨基}羰基)環(huán)戊基]甲基}戊酸酯 將1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(41mg，0.21mol)、1-羥基苯并三唑水合物(27mg，0.2mmol)、N-甲基嗎啉(35μl，0.31mmol)和最后1-氨基-1-環(huán)戊烷甲醇(ex Aldrich ChemicalCo.)(25mg，0.22mmol)加入到制備例1的酸(150mg，0.53mmol)的N，N-二甲基甲酰胺(3ml)溶液中，并將此反應在90℃下攪拌18小時。此冷卻的溶液用乙酸乙酯(90ml)稀釋，用水(3×25ml)和鹽水(25ml)洗滌，然后干燥(硫酸鎂)并減壓下蒸發(fā)。粗品在硅膠上進行色譜純化，用乙酸乙酯∶戊烷(30∶70)作為洗脫劑，得到標題化合物，38mg，57％；1H NMR(CDCl3，400MHz)δ0.88(t，3H)，1.29(m，3H)，1.41-1.78(m，26H)，1.78-1.98(m，4H)，2.04(m，1H)，2.26(m，1H)，3.59(dd，1H)，3.70(dd，1H)，4.80(t，1H)，5.81(s，1H)；LRMSm/z380(MH-)。
制備例34至43式IVc的化合物，即其中Prot是叔丁基而R1是丙基的通式IV的化合物，又制備例1的標題化合物和所給出的胺，按照類似于制備例33描述的方法來制備。
1＝反應在室溫下進行2＝甲醇∶二氯甲烷用作柱洗脫劑制備例44叔丁基2-{[1-({[2-(1H-吲哚-3-基)乙基]氨基}羰基)環(huán)戊基]-甲基}戊酸酯 由制備例1的酸和色胺，按照類似于制備例33的方法，不同的是該反應在二氯甲烷中在室溫下進行，得到此標題化合物，為淡黃色油狀物，收率80％；1H NMR(CDCl3，400MHz)δ0.86(t，3H)，1.26(m，3H)，1.42(m，11H)，1.50-1.69(m，6H)，1.83(m，1H)，1.90-2.05(m，2H)，2.22(m，1H)，2.99(t，3H)，3.60(m，2H)，5.78(m，1H)，7.06(s，1H)，7.14(m，1H)，7.20(m，1H)，7.38(d，1H)，7.63(d，1H)，8.02(bs，1H)；LRMSm/z427.5(MH+)。
制備例45叔丁基2-[(1-{[(3S)-1-芐基吡咯烷基]氨基}環(huán)戊基)甲基]戊酸酯 用制備例1的酸和(3S)-1-芐基-3-氨基吡咯烷(ex.AldrichChemical Co.)，按照類似于制備例44描述的方法，定量地得到此標題化合物；1H NMR(CDCl3，300MHz)δ0.84(t，3H)，1.10-1.76(m，21H)，1.90-2.05(m，3H)，2.20-2.38(m，3H)，2.58(m，2H)，2.84(m，1H)，3.62(s，2H)，4.45(m，1H)，6.02(m，1H)，7.33(m，5H)。
制備例46叔丁基2-{[1-({[順-2-苯基環(huán)丙基]氨基}羰基)環(huán)戊基]甲基}戊酸酯 將1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(81mg，0.42mol)、N-甲基嗎啉(0.15ml，1.06mmol)和1-S-氨基-2-R-苯基環(huán)丙烷鹽酸鹽(J.Med.Chem.，1986，29，2044)(60mg，0.35mmol)加入到制備例1的酸(100mg，0.35mmol)的二氯甲烷(10ml)溶液中，并將此反應室溫下攪拌18小時。此反應混合物減壓下蒸發(fā)并將此殘余物在硅膠上通過柱色譜進行純化，用二氯甲烷∶甲醇的洗脫梯度(98∶2至95∶5)洗脫，得到標題化合物，為黃色油狀物，85mg，55％；1H NMR(CDCl3，300MHz)δ0.88(t，3H)，1.16(m，1H)，1.20-1.58(m，16H)，1.63(m，5H)，1.90-2.14(m，4H)，2.23(m，1H)，2.90(m，1H)，6.00(m，1H)，7.19(m，3H)，7.24(m，2H)；LRMSm/z400(MH+)。
制備例47叔丁基2-{[1-({[2-(2-氧代-1-哌啶基)乙基]氨基}羰基)-環(huán)戊基]甲基}戊酸酯 將肼一水合物(34μl，0.70mmol)加入到制備例6的化合物(171mg，0.63mmol)的乙醇(10ml)溶液中，并將此反應加熱回流5小時。此冷卻的混合物過濾，將此濾液減壓濃縮，殘余物懸浮于二氯甲烷，并將此懸浮液再過濾。將所得濾液減壓下濃縮，并將此殘余物在硅膠上通過柱色譜進行純化，用二氯甲烷∶甲醇∶0.88氨(90∶10∶1)作為洗脫劑洗脫得到胺，16mg。將制備例1的酸(32mg，0.11mmol)、1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(25mg，0.13mmol)、1-羥基苯并三唑水合物(17mg，0.13mmol)和N-甲基嗎啉(25μl，0.23mmol)加入到此胺的N，N-二甲基甲酰胺(2ml)溶液中，并將此反應室溫下攪拌18小時。將此混合物在乙酸乙酯和水之間分配，并分層。此有機相用水洗滌(2x)，干燥(硫酸鎂)，并減壓下蒸發(fā)。此殘余的油狀物在硅膠上通過柱色譜純化，用二氯甲烷∶甲醇的洗脫梯度(98.5∶1.5至95∶5)洗脫，得到標題化合物，為油狀物，43mg，17％；1H NMR(CDCl3，400MHz)δ0.82(t，3H)，1.22(m，3H)，1.38-1.65(m，17H)，1.58(m，4H)，1.95(m，3H)，2.17(m，1H)，2.37(m，2H)，3.30(m，2H)，3.38(m，2H)，3.50(m，2H)，6.76(m，1H)；LRMSm/z 409.2(MH+)制備例48乙基(1R，2R，4S)-4-[({1-[2-(叔丁氧基羰基)戊基]環(huán)戊基}羰基)-氨基]-2-丁基環(huán)己烷甲酸酯
將制備例1的酸(109mg，0.38mmol)、(1R，2R，4S)-4-氨基-2-丁基-環(huán)己烷羧酸乙基酯鹽酸鹽(WO，9009374)(101mg，0.38mmol)、1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(95mg，0.50mol)、1-羥基苯并三唑水合物(60mg，0.40mmol)和三乙基胺(0.12ml，0.87mmol)在二氯甲烷(3ml)中的混合物，室溫下攪拌16小時。將此混合物減壓下蒸發(fā)，殘余物碳酸氫鈉溶液處理并用乙酸乙酯萃取。合并的有機萃取物干燥(硫酸鎂)并減壓下蒸發(fā)得到膠狀物。粗品在硅膠上通過柱色譜純化，用乙酸乙酯∶戊烷(50∶50)作為洗脫劑，并與二氯甲烷共沸得到標題化合物，190mg；1H NMR(CDCl3，300MHz)δ0.88(m，6H)，1.20-1.40(m，13H)，1.40-2.10(m，25H)，2.16-2.30(m，2H)，4.18(m，3H)，5.83(d，1H)。
制備例49(1R，2R，4S)-4-[({1-[2-(叔丁氧基羰基)戊基]環(huán)戊基}羰基)氨基]-2-丁基環(huán)己烷甲酸 將制備例48的乙酯(190mg，0.39mmol)和1N氫氧化鈉溶液(0.85ml，0.85mmol)在甲醇(1.5ml)中的混合物，室溫下攪拌22小時。此反應混合物用氫氯酸(2N)酸化至pH 1，然后在乙酸乙酯和水之間分配。分離水層，并將此有機相干燥(硫酸鎂)并減壓下蒸發(fā)，得到標題化合物，130mg，72％；1H NMR(CDCl3，300MHz)δ0.86(m，6H)，1.20-2.12(m，36H)，2.24(m，2H)，4.18(m，1H)，5.82(d，1H)；LRMSm/z 464(M-H)-。
制備例50叔丁基(2R)-2-{[1-({[5-(環(huán)丙基甲基)-1，3，4-噻二唑-2-基]氨基}羰基)環(huán)戊基]甲基}戊酸酯 由制備例2的酸和制備例31的胺，按照制備例33描述的方法，制備此標題化合物，收率65％；1H NMR(CDCl3，400MHz)δ0.35(m，2H)，0.63(m，2H)，0.80(m，3H)，1.10(m，1H)，1.20-1.94(m，20H)，2.19(m，4H)，2.93(t，2H)，3.50(s，1H)；LRMSm/z422.4(MH+)；[α]D＝-14.15°(c＝0.082，甲醇)。
制備例51叔丁基(2R)-2-{[1-({[5-(乙氧基甲基)-1，3，4-噻二唑-2-基]氨基}羰基)環(huán)戊基]甲基}戊酸酯
由制備例2的酸和制備例97的標題化合物，按照制備例33描述的方法，制備此標題化合物，收率51％；1H NMR(CDCl3，400MHz)δ1.10-1.78(m，25H)，1.82(m，1H)，2.19(m，5H)，3.48(s，1H)，4.82(s，2H)，10.16(brs，1H)；LRMSm/z 426.4(MH+)；[α]D＝-12.50°(c＝0.08，甲醇)。
制備例51a叔丁基(2R)-2-[(1-{[(5-乙基-1，3，4-噻二唑-2-基)氨基]羰基}環(huán)戊基)甲基}戊酸酯 向二氯甲烷(2.39L)和吡啶(2.39L)的混合物中，在氮氣氛下，在1小時內(nèi)，在-14℃下攪拌下加入亞硫酰氯(135ml，1.85mol，1.1eq)。將所得橙色溶液攪拌5分鐘后，在45分鐘內(nèi)，加入制備例2產(chǎn)物的(477g，1.67mol)的二氯甲烷(477ml)溶液，引起該反應混合物變渾濁。將此反應混合物攪拌3小時后，在20分鐘內(nèi)加入三乙基胺(424g，4.19mol)，接著加入4-二甲基氨基吡啶(20.5g，168mmol)。向?qū)⑺没旌衔镌僭?0分鐘內(nèi)分3批加入2-氨基-5-乙基-1，3，4-噻唑(ex.Lancaster)(282g，2.18mol)。再將此反應升溫至室溫并攪拌43小時。再將正庚烷(2.4L)和去離子水(1L)加入到將此反應混合物。攪拌下，在0.5小時內(nèi)再加入濃鹽酸(3.56L)，同時在冰水浴中冷卻。然后分層并在攪拌下向此有機層加入去離子水(2L)和濃鹽酸(250ml)。再次分離水層，并在攪拌下向此有機層加入去離子水(2L)和濃鹽酸(250ml)。攪拌下向此有機層中再加入飽和碳酸鉀水溶液(1L)。收集此有機相并再用飽和鹽水(2×1L)洗滌。將所得溶液再真空濃縮得到標題化合物(546g，1.38mol，85％收率)，為粘稠的、暗棕色油狀物，其不經(jīng)純化直接用于下步反應；LRMS(陰性APCI)m/z[M-H]-394；1H-NMR(CDCl3，300MHz)δ0.76(t，3H)，1.08-1.23(m，3H)，1.23-1.27(m，2H)，1.32(s，9H)，1.34-1.42(m，2H)，1.42-1.53(m，4H)，1.53-1.68(m，2H)，1.87(dd，1H)，1.95-2.06(m，1H)，2.06-2.24(m，3H)，2.98(q，2H)，12.15(bs，1H)。
制備例52芐基2-({1-[(3-吡啶基氨基)羰基]環(huán)戊基}甲基)戊酸酯 將三乙基胺(0.11ml，0.78mmol)加入到制備例3的酰氯(200mg，0.60mmol)和2-氨基吡啶(61mg，0.65mmol)在二氯甲烷(3ml)中的混合物中，并將此反應室溫下攪拌16小時。將此混合物減壓下蒸發(fā)，殘余物在碳酸氫鈉溶液(5ml)和乙酸乙酯(20ml)之間分配，并分層。將此有機相干燥(硫酸鎂)，并減壓下蒸發(fā)得到膠狀物。粗品在硅膠上通過柱色譜純化，用乙酸乙酯作為洗脫劑，得到標題化合物，130mg；1HNMR(CDCl3，400MHz)δ0.82(t，3H)，1.21(m，3H)，1.40(m，1H)，1.43-1.72(m，6H)，1.81(d，1H)，1.98(m，1H)，2.18(m，1H)，2.24(m，1H)，2.46(m，1H)，4.98(m，2H)，7.20-7.38(m，6H)，7.42(s，1H)，8.06(d，1H)，8.35(d，1H)，8.56(s，1H)。
制備例53至56式IVd的化合物，即化合物其中Prot是芐基而R1是丙基的式IV的通式化合物，由制備例3的酰氯和所給出的胺，按照類似于制備例52描述的方法來制備。 1＝二氯甲烷用作柱洗脫劑2＝N-甲基嗎啉用作堿制備例57芐基2-({1-[({1-芐基-2-氧代-2-[(3-吡啶基磺酰基)氨基]乙基}氨基)羰基]環(huán)戊基}甲基)戊酸酯 將制備例25的胺鹽酸鹽(828mg，2.19mmol)和N-甲基嗎啉(2.21g，21.9mmol)加入到制備例3的酰氯(737mg，2.19mmol)的二氯甲烷(50ml)的冰冷的溶液中，并將此反應室溫下攪拌24小時。此反應混合物減壓下蒸發(fā)，殘余物在乙酸乙酯(50ml)和水(50ml)之間分配，并分層。將此有機相用鹽水洗滌(25ml)，干燥(硫酸鎂)并減壓下蒸發(fā)。粗品在硅膠上通過柱色譜純化，用乙酸乙酯∶甲醇的洗脫梯度(100∶0至95∶5)洗脫，得到標題化合物，為膏狀泡沫，975mg，73％；1H NMR(CDCl3，300MHz)δ0.72(m，3H)，0.94-2.20(m，17H)，2.84(m，1H)，3.00(m，1H)，4.18(m，1H)，5.00(m，2H)，6.95(m，2H)，7.02(m，3H)，7.38(m，6H)，8.06(m，1H)，8.60(m，1H)，8.87(s，1H)。
制備例58順-芐基2-({1-[({4-[(二甲基氨基)羰基]環(huán)己基}氨基)羰基]-環(huán)戊基}甲基)戊酸酯
將順-4-{[(1-{2-[(芐基氧基)羰基]戊基}環(huán)戊基)羰基]氨基}環(huán)己烷羧酸(EP 274234，實施例310)(200mg，0.45mmol)、1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(112mg，0.58mmol)、1-羥基苯并三唑水合物(70mg，0.46mmol)和二甲基胺(0.56ml，2M在四氫呋喃中，1.12mmol)在二氯甲烷(5ml)中的混合物，室溫下攪拌16小時。將此混合物減壓下濃縮并將此殘余物在碳酸氫鈉溶液和乙酸乙酯之間分配，并分層。將此有機相干燥(硫酸鎂)并減壓下蒸發(fā)得到膠狀物。粗品在硅膠上通過柱色譜純化，用乙酸乙酯作為洗脫劑，得到標題化合物，150mg；1H NMR(CDCl3，300MHz)δ0.82(t，3H)，1.22(m，3H)，1.32-1.88(m，H)，2.00(m，4H)，2.40(m，1H)，2.60(m，1H)，2.97(s，3H)，3.04(s，3H)，4.04(m，1H)，5.12(s，2H)，5.80(bd，1H)，7.37(m，5H)。
制備例59順一芐基2-({1-[({4-[(甲基氨基)羰基]環(huán)己基}氨基)羰基]環(huán)戊基}甲基)戊酸酯 由順-4-{[1-{2-[(芐基氧基)羰基]戊基}環(huán)戊基)羰基]氨基}環(huán)己烷羧酸(EP 274234，實施例310)和甲基胺(2M在四氫呋喃中)，按照制備例58描述的方法，制備此標題化合物，收率49％；1H NMR(CDCl3，300MHz)δ0.82(t，3H)，1.17-2.12(m，22H)，2.21(m，1H)，2.41(m，1H)，2.80(d，3H)，4.00(m，1H)，5.12(s，2H)，5.61(m，1H)，5.79(d，1H)，7.38(m，5H)。
制備例60
叔丁基2-[(1-{[(2-{[(芐基氧基)羰基]氨基}乙基)氨基]羰基}-環(huán)戊基)甲基}戊酸酯 按照類似于制備例33描述的方法，由制備例1的酸和N-芐基氧基羰基-1，2-二氨基乙烷(ex.Aldrich Chemical Co.)，得到此標題化合物，為黃色油狀物，收率55％；1H NMR(CDCl3，400MHz)δ0.84(t，3H)，1.20-1.38(m，3H)，1.40-1.74(m，17H)，1.90(m，2H)，2.04(m，1H)，2.20(m，1H)，3.32(m，3H)，3.44(m，1H)，5.10(s，2H)，5.61(m，1H)，6.20(m，1H)，7.36(m，5H)。
制備例61叔丁基2-[(1-{[(2-氨基乙基)氨基]羰基}環(huán)戊基)甲基]戊酸酯 將制備例60的氨基甲酸酯(1.43g，3.10mmol)和10％鈀碳(200mg)在乙醇(8ml)中的混合物，在室溫和一個大氣壓下氫化18小時。此反應混合物通過Arbocel_過濾，并將此濾液減壓下蒸發(fā)得到標題化合物，920mg，92％；1H NMR(CDCl3，400MHz)δ0.84(t，3H)，1.20-1.38(m，3H)，1.40-1.54(m，12H)，1.61(m，5H)，1.92-2.12(m，3H)，2.20(m，1H)，2.98(m，2H)，3.38(m，1H)，3.42(m，1H)，3.97(m，2H)，6.65(m，1H)；LRMSm/z 326.8(M+)。
制備例62芐基2-[(1-{[(1-芐基-6-氧代-1，6-二氫-3-吡啶基)氨基]羰基}環(huán)戊基)-甲基]-4-甲氧基丁酸酯 將草酰氯(0.26ml，3.0mmol)加入到1-{2-[(芐基氧基)羰基]-4-甲氧基丁基}環(huán)戊烷甲酸(EP 274234，實施例15)(1.0g，3.0mmol)和N，N-二甲基甲酰胺(2滴)的二氯甲烷(20ml)的冰冷的溶液，并將此反應室溫下攪拌2小時。將溶液減壓下濃縮并將此殘余物與二氯甲烷共沸(3×10ml)。將此產(chǎn)物溶解于二氯甲烷(20ml)中，然后在冰浴中冷卻。加入制備例28的胺(600mg，3mmol)和N-甲基嗎啉(0.6ml，5.45mmol)并將此反應室溫下攪拌18小時。此反應混合物減壓下濃縮，并在水和乙醚之間分配。將有機層用氫氯酸(2N)、碳酸氫鈉溶液洗滌，然后用水洗滌，干燥(硫酸鎂)并減壓下蒸發(fā)。殘余的綠色固體在硅膠上通過中壓柱色譜純化，用乙酸乙酯∶己烷(90∶10)作為洗脫劑，得到標題化合物，880mg，57％；1H NMR(CDCl3，300MHz)δ1.37-2.28(m，12H)，2.46-2.64(m，1H)，3.20(s，3H)，3.31(m，2H)，4.97(dd，2H)，5.08(dd，2H)，6.57(d，1H)，7.12(m，1H)，7.18-7.48(m，10H)，8.08(d，1H)。
制備例634-{[(1-{3-叔丁氧基-2-[(2-甲氧基乙氧基)甲基]-3-氧代丙基}環(huán)戊基)-羰基]氨基}環(huán)己烷羧酸 將芐基4-{[(1-{3-叔丁氧基-2-[(2-甲氧基乙氧基)甲基]-3-氧代丙基}環(huán)戊基)羰基]氨基}環(huán)己烷甲酸酯(EP 274234，實施例96)及10％鈀碳(250mg)在水(10ml)和乙醇(50ml)中的混合物，在50psi和室溫下氫化18小時。此反應混合物通過Solkafloc_過濾，將此濾液減壓濃縮并將此殘余物與甲苯(3x)共沸，然后與二氯甲烷(3x)共沸，得到標題化合物，2.0g，96％；1H NMR(CDCl3，300MHz)δ1.48(s，9H)，1.53-1.84(m，14H)，1.94-2.10(m，5H)，2.60(m，2H)，3.40(s，3H)，3.41-3.63(m，5H)，3.96(m，1H)，5.90(bd，1H)。
制備例64叔丁基3-{1-[(環(huán)戊基氨基)羰基]環(huán)戊基}-2-[(2-甲氧基乙氧基)甲基]丙酸酯 將1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(197mg，1.07mol)、1-羥基苯并三唑水合物(139mg，1.07mmol)、N-甲基嗎啉(0.18ml，1.64mmol)和環(huán)戊基胺(10μl，1.07mmol)加入到1-{3-叔丁氧基-2-[(2-甲氧基乙氧基)甲基]-3-氧代丙基}-環(huán)戊烷甲酸(EP274234，實施例42)(400mg，1.07mmol)的二氯甲烷(5ml)溶液中，并將此反應室溫下攪拌22小時。將此反應通過加入水停止反應，用二氯甲烷萃取(3x)，并將合并的有機萃取物干燥(硫酸鎂)并減壓下蒸發(fā)。粗品在硅膠上通過柱色譜純化，用乙酸乙酯∶戊烷(30∶70)作為洗脫劑，得到標題化合物，為清澈油狀物，320mg，78％；1H NMR(CDCl3，400MHz)δ1.22-2.02(m，27H)，2.58(m，1H)，3.36(s，3H)，3.40(m，1H)，3.46(m，2H)，3.57(m，3H)，4.10-4.20(m，1H)，5.80(bs，1H)。
制備例65叔丁基3-(2-甲氧基乙氧基)-2-{[1-({[3-(2-氧代-1-吡咯烷基)丙基]氨基}羰基)環(huán)戊基]甲基}丙酸酯 由1-{3-叔丁氧基-2-[(2-甲氧基乙氧基)甲基]-3-氧代丙基}-環(huán)戊烷甲酸(EP 274234，實施例42)和1-(3-氨基丙基)-2-吡咯烷酮吡咯烷酮(Ex.Aldrich Chemical Co.)，按照類似于制備例64描述的方法，不同的是用二氯甲烷∶甲醇(95∶5)作為柱洗脫劑，得到此標題化合物，為清澈油狀物，收率97％；1H NMR(CDCl3，400MHz)δ1.41(s，9H)，1.50(m，2H)，1.60-1.70(m，7H)，1.78(m，1H)，1.90(m，1H)，2.20(m，4H)，2.40(m，2H)，2.58(m，1H)，3.14(m，1H)，3.20(m，H)，3.38(m，6H)，3.42-3.60(m，6H)，7.00(m，1H)。
制備例66順-叔丁基3-(2-甲氧基乙氧基)-2-[(1-{[(4-{[(苯基磺?；?氨基]羰基}-環(huán)己基)氨基]羰基}環(huán)戊基)甲基]丙酸酯 將N，N′-二環(huán)己基碳二亞胺(199mg，0.97mmol)、4-二甲基氨基吡啶(118mg，0.97mmol)和苯磺酰胺(152mg，0.97mmol)加入到制備例63的酸(400mg，0.878mmol)的二氯甲烷(12ml)和N，N-二甲基甲酰胺(0.5ml)的冰冷的溶液中，并將此反應室溫下攪拌20小時。將此混合物減壓下濃縮并將此殘余物懸浮于冷乙酸乙酯中。濾出所得不溶性物質(zhì)，將此濾液用氫氯酸(1N)和水洗滌，然后干燥(硫酸鎂)并減壓下蒸發(fā)。粗品在硅膠上通過柱色譜純化，用二氯甲烷∶甲醇的洗脫梯度(95∶5至90∶10)洗脫，得到標題化合物，為白色泡沫，480mg，92％；1HNMR(CDCl3，400MHz)δ1.44(s，9H)，1.63(m，13H)，1.80(m，2H)，1.88(m，1H)，1.98(m，2H)，2.36(m，1H)，2.57(m，1H)，3.38(s，3H)，3.40(m，1H)，3.51(t，2H)，3.58(m，3H)，3.95(m，1H)，5.92(d，1H)，7.56(m，2H)，7.62(m，1H)，8.05(d，2H)，8.75(bs，1H)；LRMSm/z 618(MNa+)。
制備例67芐基2-{[1-({[3-(2-氧代-1-吡咯烷基)丙基]氨基}羰基環(huán)戊基]-甲基}-4-苯基丁酸酯 室溫下，將1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(1.06g，5.53mmol)、1-羥基苯并三唑水合物(0.60g，4.44mmol)和4-甲基嗎啉(0.56g，5.54mmol)依次加入到1-{2-[(芐基氧基)羰基]-4-苯基丁基}環(huán)戊烷甲酸(EP 274234實施例17)(1.5g，3.94mmol)的干燥的二氯甲烷(15ml)的冷卻的溶液中，接著加入N-(3-氨基丙基)-2-吡咯烷酮(Ex.Aldrich Chemical Co.)(0.56g，3.94mmol)，并將此反應室溫下攪拌18小時。將此混合物用水、2N氫氯酸、飽和碳酸氫鈉水溶液洗滌，然后干燥(硫酸鎂)并減壓下蒸發(fā)。殘余的黃色油狀物在硅膠上通過柱色譜純化，用乙酸乙酯∶戊烷(50∶50)作為洗脫劑洗脫，得到標題化合物，為清澈膠狀物，800mg，40％；1H NMR(CDCl3，300MHz)δ1.37-2.20(m，16H)，2.34-2.58(m，5H)，2.92-3.46(m，6H)，5.07(d，1H)，5.18(d，1H)，6.98-7.47(m，10H)。
制備例68芐基2-{[1-({[3(甲基氨基)-3-氧代丙基]氨基}羰基)環(huán)戊基]甲基}-4-苯基丁酸酯
室溫下將1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(122mg，0.64mmol)、1-羥基苯并三唑水合物(86mg，0.64mmol)和4-甲基嗎啉(173μl，1.59mmol)依次加入到1-{2-[(芐基氧基)羰基]-4-苯基丁基}環(huán)戊烷-甲酸(EP 274234，實施例17)(202mg，0.53mmol)的N，N-二甲基甲酰胺(5ml)的冷卻的溶液中，接著加入制備例23的胺鹽酸鹽(146mg，1.06mmol)，并將此反應在90℃下攪拌18小時。此冷卻的溶液減壓下濃縮并將此殘余物在水(20ml)和乙酸乙酯(100ml)之間分配。分離水層，有機相用水(3×30ml)，鹽水(25ml)洗滌，干燥(硫酸鎂)，并減壓下蒸發(fā)得到清澈油狀物。粗品在硅膠上通過柱色譜純化，用二氯甲烷∶甲醇(98∶2)作為洗脫劑，得到標題化合物，為無色油狀物，162mg，67％；1H NMR(CDCl3，400MHz)δ1.38-1.53(m，2H)，1.53-1.96(m，8H)，2.02(m，2H)，2.27(t，2H)，2.46(m，3H)，2.76(d，3H)，3.44(m，2H)，5.13(s，2H)，5.79(bs，1H)，6.38(m，1H)，7.06(d，2H)，7.18(m，1H)，7.22(m，2H)，7.38(m，5H)；LRMSm/z 465.5(MH+)。
制備例69芐基2-{[1-({[1-(羥基甲基)環(huán)戊基]氨基}羰基)環(huán)戊基]甲基}-4-苯基丁酸酯 由1-{2-[(芐基氧基)羰基]-4-苯基丁基}環(huán)戊烷-甲酸(EP 274234，實施例17)和1-氨基-1-環(huán)戊烷甲醇，按照類似于制備例68描述的方法，不同的是此反應混合物室溫下攪拌18小時，并將粗品在硅膠上通過柱色譜進行純化，用乙酸乙酯∶戊烷作為洗脫劑，得到標題化合物，為結(jié)晶固體(48％)；1H NMR(CDCl3，400MHz)δ1.38(m，2H)，1.50-1.95(m，16H)，2.01(m，2H)，2.45(m，3H)，3.49(dd，1H)，3.60(dd，1H)，4.58(m，1H)，5.10(s，2H)，5.67(s，1H)，7.01(d，2H)，7.14(m，1H)，7.20(m，2H)，7.36(m，5H)；LRMSm/z478.3(MH+)。
制備例70芐基2-[(1-{[(5-甲基-1，3，4-噻二唑-2-基)氨基]羰基}環(huán)戊基)甲基]-4-苯基丁酸酯 由1-{2-[(芐基氧基)羰基]-4-苯基丁基}環(huán)戊烷-甲酸(EP 274234，實施例17)和2-氨基-5-甲基-1，3，4-噻唑(ex Lancaster)，按照類似于制備例68描述的方法，得到此標題化合物，為清澈油狀物，收率74％；1H NMR(CDCl3，400MHz)δ1.58-1.76(m，7H)，1.83-1.98(m，3H)，2.03(m，1H)，2.20(m，1H)，2.35(m，1H)，2.44(m，3H)，2.65(s，3H)，5.02(dd，2H)，7.00(d，2H)，7.15(m，1H)，7.19(m，2H)，7.35(m，5H)；LRMSm/z 478.7(MH+)。
制備例71芐基4-苯基-2-({1-[(3-吡啶基氨基)羰基]環(huán)戊基}甲基)丁酸酯 將草酰氯(2.29ml，26.3mmol)加入到1-{2-[(芐基氧基)羰基]-4-苯基丁基}環(huán)戊烷-甲酸(EP 274234，實施例17)(5.0g，13.14mmol)和N，N-二甲基甲酰胺(2滴)的二氯甲烷(25ml)溶液中，并將此溶液攪拌2.5小時。將此混合物減壓下蒸發(fā)，殘余物與二氯甲烷共沸，得到黃色油狀物。將其再溶解于二氯甲烷(50ml)中，并將此酰氯的溶液(10ml，2.45mmol)加入到三乙胺(248mg，2.45mmo1)和3-氨基吡啶(253mg，2.70mmol)的干燥的二氯甲烷(10ml)的冰冷的溶液中，并將此反應室溫下攪拌18小時。將溶液用水洗滌(3x)，干燥(硫酸鎂)并減壓下蒸發(fā)。粗品在硅膠上通過柱色譜純化，用乙酸乙酯∶己烷(40∶60)作為洗脫劑，并用乙醚∶己烷(90∶10至100∶0)作為梯度洗脫劑重復洗脫。將此產(chǎn)物用乙酸乙酯己烷結(jié)晶，得到標題化合物，740mg，66％；1H NMR(CDCl3，300MHz)δ1.38-2.07(m，10H)，2.10-2.37(m，2H)，2.42-2.63(m，3H)，5.02(s，2H)，6.94-7.44(m，10H)，7.50(s，1H)，8.03(d，1H)，8.36(d，1H)，8.52(s，1H)。
制備例72反式-叔丁基-3-[1-({[2-(4-氯苯基)環(huán)丙基]氨基}羰基)-環(huán)戊基]-2-(甲氧基甲基)丙酸酯 將制備例94的產(chǎn)物(286mg，1mmol)、制備例76的產(chǎn)物(203mg，1mmol)、1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺(211mg，1.1mmol)、三乙基胺(1ml)和HOBt(148mg，1.1mmol)在DCM(5ml)中在室溫下攪拌16小時。將此反應混合物用水洗滌(20ml)，用硫酸鎂干燥并通過柱色譜純化，用1∶8、然后用1∶5 EtOAc∶戊烷作為洗脫劑，得到標題產(chǎn)物，為無色膜(122mg，40％)；Rf1∶5(EtOAc∶戊烷)0.2；1HNMR(400MHz，CDCl3)δ1.05-1.2(m，2H)，1.4(s，9H)，1.55-1.75(m，4H)，1.9-2.0(m，4H)，2.4-2.5(m，1H)，2.75-2.85(m，1H)，3.3(s，3H)，3.4-3.5(m，1H)，6.3(m，1H)，7.05(d，2H)，7.2(d，2H)；HRMSm/z M+H，實測值436.2242。C24H35NO4Cl，理論值436.2249。
制備例73乙基-2-(4-氯苯基)環(huán)丙烷甲酸酯 在30分鐘內(nèi)，將4-氯苯乙烯(10.1ml，96mmol)和醋酸銠二聚體(1g，4.5mmol)在甲苯(50ml)中加熱至85℃，之后加入重氮基乙酸乙酯(11.3ml，94mmol)，且再在80℃下加熱1小時，之后真空濃縮。將此殘余物再通過柱色譜純化，用1∶2DCM∶戊烷作為洗脫劑洗脫，得到標題產(chǎn)物，為無色油狀物(7.8g，37％)；Rf1∶2(DCM∶戊烷)0.35；1HNMR(400MHz，CDCl3)δ1.15-1.3(m，4H)，1.5-1.7(m，1H)，1.8-1.9(m，1H)，2.4-3.55(m，1H)，4.2(q，2H)，6.95(d，2H)，7.20-7.28(m，2H)；及LRMSm/z，M+NH4+242。
制備例74反式-2-(4-氯苯基)環(huán)丙烷羧酸 在室溫氮氣氛下，將制備例73的產(chǎn)物(7.8g，37mmol)溶解于EtOH(75ml)，并在15分鐘內(nèi)分批加入甲醇鈉(8.1g，150mmol)。加畢，再將此混合物回流18小時。將此反應混合物真空濃縮，并將所得殘余物用DCM和水(150ml，2∶1混合物)稀釋。除去有機層，并將水層再用DCM(2×50ml)萃取。將合并的有機萃取物用硫酸鎂干燥并蒸發(fā)得到反式酯(4.96g，62％)。用濃鹽酸酸化水層至pH 1，產(chǎn)生白色沉淀，將其過濾并真空干燥得到水解產(chǎn)物(相應的酸)，為白色粉末(1.95g，27％)。將該酯溶解于MeOH(50ml)、水(50ml)和LiOH(1.34g，32mmol)得到清澈溶液，將其在約70℃加熱過夜。將此反應混合物冷卻，真空濃縮，并用濃鹽酸酸化至pH 1。將所得白色沉淀用EtOAc(3×50ml)萃取，并將合并的有機萃取物用硫酸鎂干燥并蒸發(fā)至干，得到酸(4g，96％)。將該酸與上述步驟中得到的水解產(chǎn)物合并，共得到5.95g；1HNMR(400MHz，CDCl3)δ1.3-1.4(m，1H)，1.6-1.7(m，1H)，1.8-1.9(m，1H)，2.5-2.6(m，1H)，7.00(d，2H)，7.26(d，2H)；LRMSm/z，M-H 195。
制備例75反式-叔丁基-2-(4-氯苯基)環(huán)丙基氨基甲酸酯 將制備例74的產(chǎn)物(1.5g，7.65mol)、DPPA(1.8ml，8.4mmol)和三乙基胺(1.25ml，12mmol)在叔丁醇(20ml)中在氮氣氛下在約90℃下加熱48小時。冷卻后，將此混合物用乙酸乙酯(20ml)和飽和碳酸鈉溶液(20ml)稀釋，然后除去此有機層。水層用乙酸乙酯(20ml)萃取，并將合并的有機層用硫酸鎂干燥，過濾并蒸發(fā)。將所得殘余物通過柱色譜純化，用1∶10、然后用1∶2 EtOAc∶戊烷作為洗脫劑洗脫，得到標題產(chǎn)物，為白色固體(1.7g，83％)；Rf1∶2(EtOAc∶戊烷)0.9；1H NMR(400MHz，CDCl3)δ1.2-1.3(m，1H)，1.4(s，10H)，1.9-2.0(m，1H)，2.6(br.s，1H)，4.8(br.s，1H)，7.0(d，2H)，7.2(d，2H)；HRMSm/z M+Na，實測值290.0923。C14H18NO2ClNa理論值290.0918。
制備例762-(4-氯苯基)環(huán)丙基胺 將制備例75的產(chǎn)物在乙酸乙酯中回收，冷卻至0℃至，并將氯化氫氣體通過該溶液30分鐘。再將此溶液真空濃縮得到標題產(chǎn)物(1.29g，6.3mmol)；Rf1∶3(EtOAc∶戊烷)O；1H NMR(400MHz，CD3OD)δ1.3-1.4(m，1H)，1.4-1.5(m，1H)，2.3-2.4(m，1H)，2.8-2.9(m，1H)，7.15(d，2H)，7.3(d，2H)。
制備例77
乙基-2-(4-甲氧基苯基)-環(huán)丙烷甲酸酯 將4-甲氧基苯乙烯(25.5ml，192mmol)，醋酸銠二聚體(2g，4.5mmol)和甲苯(100ml)在室溫氮氣氛下攪拌20分鐘，然后加熱至85℃。在50分鐘內(nèi)，以每2至3秒一滴的速度滴加重氮基乙酸乙酯(19.8ml，188mmol)，以維持內(nèi)部反應溫度約95℃。加畢，將此混合物在85℃下加熱1小時，然后冷卻至室溫。將此混合物通過Arbocel_過濾并蒸發(fā)為油狀物，將其通過柱色譜純化用DCM∶戊烷(1∶2)作為洗脫劑洗脫，得到標題產(chǎn)物(13g，31％)，其是反式∶順式異構(gòu)體的3∶1的混合物；Rf0.22(DCM∶戊烷)1∶2；1H NMR(400MHz，CDCl3)δ1.20-1.38(m，5H)，1.83(ddd，1H)，2.50(ddd，1H)，3.80(s，3H)，4.16(q，2H)，6.82(d，2H)，7.03(d，2H)。
制備例78反式-2-(4-甲氧基苯基)-環(huán)丙烷甲酸 將甲醇鈉(14.8g，273.8mmol)加入到制備例77的產(chǎn)物(13g，59mmol)的EtOH(135ml)溶液中，同時在室溫氮氣氛下攪拌。加畢，將該混合物溫和回流1小時，此時TLC分析表明沒有順式異構(gòu)體殘留。將此反應冷卻至室溫并一批加入水(100ml)。然后將整個反應混合物室溫下攪拌63小時，再蒸發(fā)掉甲醇，之后用濃鹽酸酸化至pH 1。將該懸浮液用乙酸乙酯萃取(2×100ml)，并將此萃取物干燥(硫酸鎂)并蒸發(fā)得到黃色固體，其通過柱色譜純化，用1∶1 EtOAc∶戊烷洗脫得到標題產(chǎn)物(8.9g，78％)；Rf1∶1(EtOAc∶戊烷)0.4；1H NMR(400MHz，CDCl3)δ1.30-1.41(m，1H)，1.58-1.69(m，1H)，1.79-1.90(m，1H)，2.53-2.62(m，1H)，6.83(d，2H)，7.04(d，2H)。
制備例79反式-叔丁基-2-(4-甲氧基苯基)-環(huán)丙基氨基甲酸酯 將DPPA(11ml，50.9mmol)加入到制備例78的產(chǎn)物(8.9g，46.3mmol)、三乙基胺(10.1mls，72.7mmol)和叔丁醇(75ml)的攪拌的混合物中。將此混合物在90℃下加熱43小時。冷卻后，蒸發(fā)除去叔丁醇，并將所得油狀殘余物用飽和K2CO3(120ml)處理，然后用乙酸乙酯萃取(2×100ml)。合并的有機萃取物再減壓下蒸發(fā)得到棕色固體，其通過柱色譜純化，用DCM∶MeOH(98∶2)作為洗脫劑洗脫，得到標題產(chǎn)物(5.8g，48％)；1H NMR(400MHz，CDCl3)δ1.07-1.14(m，2H)，1.44(s，9H)，1.93-2.06(m，1H)，2.62-2.71(m，1H)，3.80(s，3H)，4.72-4.88(m，1H)，6.80(d，2H)，7.08(d，2H)。
制備例80反式-2-(4-甲氧基苯基)-環(huán)丙基胺 室溫氮氣氛下，將TFA(20ml)加入到制備例79的產(chǎn)物(5.8g，22.0mmol)和DCM(15ml)的攪拌的混合物中。將此反應攪拌16小時，之后減壓下除去溶劑，并將所得油狀物用飽和碳酸鉀水溶液處理至pH為10(約需要150ml)。將此不透明的溶液用乙酸乙酯萃取(2×150ml)，并將萃取物再用硫酸鎂干燥并蒸發(fā)得到米色固體。此固體通過柱色譜純化，用99∶1、95∶5 DCM∶MeOH作為洗脫劑洗脫，得到標題產(chǎn)物，為白色固體(3.2g，89％)；RfDCM∶MeOH(19∶1)0.18；1HNMR(400MHz，CDCl3)δ0.87-1.04(m，2H)，1.79-1.90(m，1H)，2.43-2.54(m，1H)，3.80(s，3H)，6.80(d，2H)，6.98(d，2H)。
制備例81叔丁基-4-甲氧基-2-{[1-({[2-(4-甲氧基苯基)環(huán)丙基]氨基}羰基)-環(huán)戊基]甲基}丁酸酯 將制備例99的產(chǎn)物(210mg，0.66mol)、三乙胺(1ml)、HOBt(140mg，0.73mmol)和制備例80的產(chǎn)物(107mg，0.66mmol)在DCM中在室溫氮氣氛下依次混合。在將WSCDI(98mg，0.73mmol)加入到此混合物中，并將全部反應混合物過夜攪拌約16小時。將此反應用水稀釋，分離有機層，再用鹽水洗滌，用硫酸鎂干燥，過濾并蒸發(fā)為黃色油狀物。將其通過柱色譜純化，用1∶3EtOAc∶戊烷作為洗脫劑洗脫，得到標題產(chǎn)物(113mg，38％)；Rf1∶10(EtOAc∶戊烷)0.2；1NMR(400MHz，CDCl3)δ1.0-1.10(m，2H)，1.40(s，9H)，1.35-1.45(m，2H)，1.50-1.80(m，7H)，1.85-2.10(m，4H)，2.25-2.35(m，1H)，2.70-2.80(m，1H)，3.2(s，3H)，3.25-3.35(m，2H)，3.7(s，3H)，6.05(br.s，1H)，6.70(d，2H)，7.05(d，2H)；LRMSm/z446(M+H)。
制備例81a叔丁基-4-甲氧基-2-{[1-({[2-苯基環(huán)丙基]氨基}羰基)-環(huán)戊基]甲基}丁酸酯 用類似于制備例81的方法，用1-S-氨基-2-R-苯基環(huán)丙烷(J.Med.Chem.，1986，29，2044)代替制備例80的產(chǎn)物，制備此標題化合物；1NMR(400MHz，CDCl3)δ1.1(m，1H)，1.2(m，1H)，1.4(s，9H)，1.6(m，8H)，1.7，(m，1H)，1.9(m，2H)，2.1(m，2H)，2.4(q，1H)，2.8(q，1H)，3.2(s，3H)，3.3(q，2H)，6.1(bs，1H)，7.1(d，3H)，7.2(d，2H).；LRMSm/z416(M+H)；HRMS m/z實測值416.2794。C25H32NO4理論值416.2796。
制備例82叔丁基-3-甲氧基-2-[(1-{[(2-苯基環(huán)丙基)氨基]羰基}環(huán)戊基)甲基]丙酸酯 在室溫氮氣氛下將制備例94的產(chǎn)物(200mg，0.66mol)、三乙基胺(1ml)、HOBt(98mg，0.73mmol)和1-S-氨基-2-R-苯基環(huán)丙烷(J.Med.Chem.，1986，29，2044)(123mg，0.73mmol)在DCM(6ml)中依次混合。再將WSCDI(98mg，0.73mmol)加入到該混合物中并將整個反應混合物過夜攪拌約16小時。將此反應用水稀釋，分離有機層，再用鹽水洗滌，用硫酸鎂干燥，過濾并蒸發(fā)為黃色油狀物。將其通過柱色譜純化，用1∶3EtOAc∶戊烷作為洗脫劑洗脫，得到標題產(chǎn)物(164mg，62％)；Rf1∶10(EtOAc∶戊烷)0.2；1H NMR(400MHz，CDCl3)δ1.0-1.1(m，2H)，1.4(s，9H)，1.5-1.8(m，6H)，1.8-2.05(m，4H)，2.3-2.4(m，1H)，2.7-2.8(m，1H)，3.2(s，3H)，3.25-3.35(m，1H)，3.7(s，3H)，6.05(s，1H)，6.7(d，2H)，7.05(d，2H)；LRMSm/z M+H，446。
制備例833-苯基環(huán)戊烷酮 在氮氣氛下將苯基溴化鎂(0.27mole)在干燥的乙醚(200ml)中回收，并冷卻至0℃。一批加入碘化亞銅(I)(25.5g，0.13mole)，并將此懸浮液在0℃下攪拌20分鐘。然后在10-15分鐘內(nèi)滴加環(huán)戊烯-2-酮，并將所得溶液在0℃下攪拌10分鐘，然后在1小時內(nèi)升溫至室溫。將此反應混合物加入到飽和氯化銨溶液和濃氨水的100ml的混合物中，其pH開始檢測為9。將整個反應混合物室溫下攪拌30分鐘，然后過濾，并再將此濾液分層。將水層用乙醚萃取(2×70ml)，并將萃取物與原有機層合并。將大體積的乙醚層再用鹽水洗滌，用硫酸鎂干燥，過濾并蒸發(fā)為淡黃色油狀物。將此油狀物再進行色譜，用1∶3乙醚/戊烷洗脫，得到標題產(chǎn)物(2.9g，14％)；RfEtOAc∶戊烷(1∶2)0.65；1H NMR(300MHz，CDCl3)δ1.91-2.10(m，1H)，2.18-2.59(m，4H)，2.67(dd，1H)，3.38-3.52(m，1H)，7.19-7.47(m，5H)。
制備例847-苯基-1，3-二氮雜螺[4.4]壬烷-2，4-二酮 將制備例83的產(chǎn)物(5.8g)、氫化鉀(2.75g)和碳酸銨(9.1g)在80ml的50％EtOH水溶液中加熱7小時，然后在室溫下放置48小時。將此混合物過濾，并將此固體用水(3×50ml)徹底洗滌。將此濾液濃縮，用濃鹽酸將pH調(diào)節(jié)至2，并將所得懸浮液過濾掉并用水洗滌(3×50ml)。將塊狀固體用EtOH和水(300ml∶100ml)重結(jié)晶，得到標題產(chǎn)物，為非對映異構(gòu)體的1∶1混合物(6.32g)；Rf0.6，在EtOAc中；1H NMR(300MHz，CDCl3)δ1.60-2.58(m，6H)，3.08-3.37(m，1H)，6.83-7.44(m，5H)，8.33(d，1H)，10.60(s，1H)；分析實測值C，68.09；H，6.21；N，12.25％。C13H14N2O2理論值C，67.81；H，6.13；N，12.17％。
制備例851-氨基-3-苯基-環(huán)戊烷甲酸 將制備例84的標題產(chǎn)物(6.2g)、氫氧化鋇八水合物(17.2g)和水(100ml)在圓底燒瓶中在160℃下一起加熱7小時，并再在室溫下放置過夜。將此反應混合物用濃硫酸酸化至pH1。將所得懸浮液過濾，并將此固體用水洗滌(100ml)。將此濾液再用濃氨水溶液堿化至約pH 6，將該懸浮液在冰浴中冷卻，并再過濾。將此固體用水洗滌，并真空干燥得到標題產(chǎn)物(2.9g)；m.p.265℃(分解)；Rf0.5，在甲基異丁基酮∶乙酸∶水(2∶1∶1)中；1H NMR(300MHz，CDCl3)δ2.06-3.14(m，6H)，3.42-3.73(m，1H)，7.12-7.44(m，5H)；分析實測值C，69.54；H，7.26；N，6.73％。C12H15NO2理論值C，70.22；H，7.37；N，6.82％。
制備例86乙基-1-氨基-3-苯基-環(huán)戊烷甲酸酯 在0℃下，將制備例85的標題產(chǎn)物(500mg，2.4mmol)在用氯化氫飽和的乙醇(70ml)中回收，然后室溫下攪拌16小時。向此溶液中通入氮氣10分鐘，并蒸發(fā)溶劑得到米色固體。將其用飽和碳酸氫鈉水溶液(10ml)處理并用乙酸乙酯萃取(2×10ml)。將合并的有機萃取物干燥并蒸發(fā)，得到標題產(chǎn)物(360mg，63％)；RfDCM∶MeOH(97∶3)0.23；1HNMR(400MHz，CDCl3)δ1.31(t，3H)，1.50-2.37(m，4H)，2.38-2.44(m，1H)，2.63(dd，1H)，3.22-3.36和3.43-3.57(m，1H)，4.20(q，2H)，7.20-7.35(m，5H)。
制備例87(1-氨基-3-苯基環(huán)戊基)甲醇 將硼氫化鈉(190mg)分批加入到制備例86的產(chǎn)物(390mg，1.67mmol)在8ml 50％乙醇水溶液中的攪拌溶液中，再在50℃下加熱3小時。此反應混合物再蒸發(fā)得到油狀物在水中的懸浮液。將此油狀物用乙酸乙酯萃取(20ml)，并減壓下蒸發(fā)得到標題產(chǎn)物(295mg)；Rf(1∶2乙醚∶戊烷)0.65；1H NMR(400MHz，CDCl3)δ1.30-2.36(m，6H)，3.02-3.17(m，1H)，3.33-3.50(m，2H)，7.14-7.37(m，5H)。
制備例88叔丁基-2-{[1-({[1-(羥基甲基)-3-苯基環(huán)戊基]氨基}羰基)-環(huán)戊基]甲基}-4-甲氧基丁酸酯 通過與制備例33所述相類似的方法，由制備例99的產(chǎn)物和制備例87的標題產(chǎn)物，制備此標題產(chǎn)物；RfEtOAc∶戊烷(1∶4)0.25；1HNMR(400MHz，CDCl3)δ0.80-0.88(m，3H)，1.16-2.60(m，21H)，1.42(s，9H)，3.04-3.32(m，1H)，3.57-3.84(m，2H)，4.56-4.77(m，1H)，5.94(br.t，1H)，7.16-7.28(m，5H)。
制備例89叔丁基-4-甲氧基-2-[(1-{[(2-戊基環(huán)丙基)氨基]羰基}環(huán)戊基)甲基]丁酸酯 將制備例99的標題產(chǎn)物(105mg，0.33mmol)、三乙胺(0.5ml)、HOBt(49mg，0.36mmol)和1-氨基-2-戊基-環(huán)丙烷(100mg，0.33mmol)在室溫氮氣氛下在DCM中依次混合。再將WSCDI(70mg，0.36mmol)加入到此混合物中，并將此混合物過夜攪拌16小時。將此反應用水稀釋，分離有機層，再用鹽水洗滌，用硫酸鎂干燥，過濾并蒸發(fā)為黃色油狀物。將其通過柱色譜純化，用1∶3EtOAc∶戊烷作為洗脫劑洗脫，得到標題產(chǎn)物(96mg，71％)；Rf1∶6(EtOAc∶戊烷)0.2；1H NMR(400MHz，CDCl3)δ0.4-0.6(m，2H)，0.7-0.9(m，4H)，1.05-1.15(m，1H)，1.2-1.3(m，4H)，1.3-1.5(m，14H)，1.5-2.0(m，10H)，2.2-2.4(m，2H)，3.2-3.35(m，5H)，5.7-5.9(br.s，1H)；LRMSm/z，M+H，410。
制備例904-丁基吡啶 在-30℃下在氮氣氛下將正丁基鋰(43ml的在己烷中的2.5M溶液)加入到二異丙基胺(10.9g)在干燥的THF(100ml)中的攪拌的溶液中，形成二異丙基胺化鋰。在此溫度下攪拌1小時后，將此溶液冷卻至-78℃，并加入4-甲基吡啶(10g)在于燥的THF(20ml)中的溶液，接著在-78℃下繼續(xù)攪拌1小時。在45分鐘內(nèi)，以在20ml干燥THF中的溶液形式滴加碘代丙烷(20g)，接著繼續(xù)攪拌整個混合物1小時。加熱飽和氯化銨水溶液(20ml)加入，并再將此反應用乙醚萃取(2×100ml)。合并的乙醚萃取物用水洗滌(75ml)，用硫酸鎂干燥并蒸發(fā)得到清澈油狀物。將此油狀物通過在真空水泵(約30mmHg)下蒸餾進行純化，并收集標題產(chǎn)物餾分，將其在84-90℃下蒸餾；1H NMR(400MHz，CDCl3)δ0.93(t，3H，Me)，1.30-1.42(m，2H)，1.57-1.66(m，2H)，2.60(t，2H)，7.06(d，2H)，8.46(d，2H)。
制備例90a2-氨基-4-丁基吡啶 按照Journal of the Chemical Society，1946，p936描述的方法，由制備例90的產(chǎn)物，制備此標題產(chǎn)物。
制備例91芐基-2-[(1-{[(4-丁基-2-吡啶基)-氨基]羰基}環(huán)戊基)甲基]-4-甲氧基丁酸酯 通過類似于制備62例描述的方法，由1-{2-[(芐基氧基)羰基]-4-甲氧基丁基}-環(huán)戊烷甲酸(EP274234，實施例15)和制備例90a的產(chǎn)物，制備此標題產(chǎn)物；1H NMR(CDCl3，400MHz)δ0.89(t，3H，Me)，1.36(q，2H，CH2)，1,47-2.26(m，14H)，2.55-2.68(m，3H)，3.17(s，3H，OMe)，3.24(t，2H，CH2OMe)，4.91(d，1H，CHPh)，5.00(d，1H，CHPh)，6.83(d，1H，Ar)，7.27-7.35(m，5H)，7.94(brs，1H，NH)，8.07(s，1H，Ar)，8.13(d，1H，Ar)。
制備例92芐基-2-[(1-{[(4-苯基-2-吡啶基)-氨基]羰基}環(huán)戊基)甲基]-4-甲氧基丁酸酯
通過類似于制備例62描述的方法，由1-{2-[(芐基氧基)羰基]-4-甲氧基丁基}-環(huán)戊烷甲酸(EP 274234，實施例15)和2-氨基-4-苯基吡啶(見Journal of Medicinal Chemistry，1978，p874)，制備此標題產(chǎn)物；1H NMR(CDCl3，400MHz)δ1.43-2.34(m，10H)，2.60-2.68(m，1H)，3.17(s，3H，OMe)，3.26(t，2H，CH2)，4.93(d，1H，CHPh)，5.02(d，1H，CHPh)，7.18-7.32(m，5H，Ph)，7.38-7.46(m，3H)，7.61-7.69(m，2H)，8.02(brs，1H，NH)，8.29(d，1H，Ar)，8.57(s，1H，Ar)。
制備例93叔丁基-2-{[1-({[2-(羥基甲基)-2，3-二氫-1H-茚-2-基]氨基}羰基)-環(huán)戊基]甲基}-4-甲氧基丁酸酯 通過類似于制備例33描述的方法，由制備例99的產(chǎn)物和2-氨基-2-羥基甲基-2，3-二氫茚(WO9110644；實施例8a)，制備此標題產(chǎn)物；1H NMR(CDCl3，400MHz)δ1.40(s，9H)，1.44-2.00(m，12H)，2.37-2.43(m，1H)，2.99(d，1H)，3.08(d，1H)，3.20-3.38(m，7H)，3.65(dd，1H)，3.84(dd，1H)，4.40(t，1H)，6.00(s，1H)，7.10-7.18(m，4H)。
制備例943-(1-羧基環(huán)戊基)-2-(甲氧基甲基)丙酸叔丁基酯
將制備例2，步驟b)的標題產(chǎn)物(10g，41.3mmol)在-78℃下在THF回收，并滴加二異丙基胺化鋰(43ml，86.7mmol，2M THF溶液)。將此混合物在-78℃攪拌40分鐘，之后滴加氯甲基甲基醚(4.7ml，62mmol)。再將此溶液緩慢升溫至室溫過夜，并加入2N HCl(100ml)停止反應。用乙酸乙酯(2×100ml)萃取有機物，干燥(硫酸鎂)和通過柱色譜純化，用2％、然后用3％、再用5％MeOH的DCM溶液洗脫，得到標題產(chǎn)物，為黃色油狀物(6.2g，53％)；1H NMR(CDCl3，400MHz)δ1.40(9H，s)，1.40-1.50(4H，m)，1.20-1.80(1H，m)，1.80-1.90(1H，m)，2.00(1H，dd)，2.00-2.05(3H，m)，2.20(1H，dd)，2.50-2.60(1H，m)，3.30(1H，s)，3.30-3.40(1H，m)，3.40(1H，t)；LRMSm/z，MNH4+304。
制備例95叔丁基-2-[(1-{[(5-芐基-1，3，4-噻二唑-2-基)氨基]羰基}環(huán)戊基)甲基]-4-甲氧基丁酸酯 制備例98的產(chǎn)物與制備例99的標題產(chǎn)物，用類似于制備例33描述的方法反應得到酰胺，為白色泡沫；1H NMR(CDCl3，400MHz)δ0.80(t，3H)，1.20-1.35(m，2H)，1.37(s，9H)，1.40-2.20(m，13H)，4.30(s，2H)，7.30(m，5H)；LRMS m/z459(M+H)。
制備例96叔丁基-2-[(1-{[(2，3-二氫-1-苯并呋喃-2-基甲基)氨基]羰基}環(huán)戊基)甲基]-4-甲氧基丁酸酯 由2-氨基甲基-2，3-二氫苯并呋喃(J.Med.Chem.，1968，11(4)，844頁)和制備例99的標題產(chǎn)物，用類似于制備例33描述的方法反應，制備此標題化合物；1H NMR(CDCl3，400MHz)δ1.4(s，10H)，1.45-2.00(m，12H)，2.05(m，1H)，2.30(m，1H)，2.90(m，1H)，3.05(m，5H)，3.30(m，2H)，3.55-3.65(m，1H)，4.80(m，1H)，6.15(m，1H)，6.70(d，1H)，6.80(t，1H)，7.00(d，1H)，7.05(m，1H)；LRMS m/z432(M+H)。
制備例975-(乙氧基甲基)-1，3，4-噻二唑-2-胺 按照類似于制備例31的方法，由乙氧基乙酸制備。
制備例985-芐基-1，3，4-噻二唑-2-胺 按照類似于制備例31描述的方法，由苯基乙酸制備此標題化合物；1H NMR(CDCl3，400MHz)δ4.10(m，2H)，7.30(m，5H)；分析實測值C，56.73；H，4.72；N，21.67％。C9H9N3S理論值C，56.62；H，4.74；N，21.97％。
制備例991-[2-(叔丁氧基羰基)-4-甲氧基丁基]環(huán)戊烷甲酸 在-78℃、氮氣氛下，將制備例2，步驟b)的標題產(chǎn)物在干燥的四氫呋喃(100ml)中的溶液，加入到二異丙基胺化鋰(130ml)在己烷(52ml)和四氫呋喃(200ml)中的攪拌的溶液中。1小時后，加熱2-溴乙基甲基醚的四氫呋喃(100ml)溶液，維持溫度在-78℃。讓此反應混合物升溫至室溫過夜。用水(100ml)停止此混合物的反應，并用2M氫氯酸酸化至pH1，并用乙酸乙酯萃取(2×150ml)。將合并的有機萃取物用硫酸鎂干燥，并真空濃縮得到粗品酸，將其在硅膠上進行色譜，用漸增比例的甲醇∶二氯甲烷(純二氯甲烷至1∶50)洗脫，得到油狀物(7.7g，25.6mmol，52％)。Rf0.3甲醇，二氯甲烷1∶20。1H NMR(CDCl3400MHz)δ1.4(s，9H)，1.4-1.7(m，7H)，1.75-1.95(m，2H)，2.0-2.15(m，3H)，2.3-2.4(m，1H)，3.3(s，3H)，3.3-3.4(m，2H).LRMSm/z 299(M-H+)。
制備例100芐基-1-[2-(叔丁氧基羰基)戊基]環(huán)戊烷甲酸酯 將制備例2的產(chǎn)物(513mg，1.80mmol)溶解于甲醇(5ml的75％甲醇水溶液)，并在室溫下一批加入碳酸銫(300mg，0.95mmol)。5分鐘后，減壓下除去溶劑，并將此殘余物與甲苯(2×5ml)共沸，然后在氮氣氛下再溶解于7ml的干燥DMF中。在3ml干燥DMF中回收芐基溴，并攪拌下緩慢加入，之后將此反應混合物室溫下攪拌3小時。將此混合物倒入乙酸乙酯(40ml)中，并用水(40ml)、1N HCl(20ml)和水(2×20ml)洗滌。將此有機層干燥(硫酸鎂)并蒸發(fā)為粘稠油狀物，其通過柱色譜純化，用1∶2 DCM∶戊烷，然后用1∶2 EtOAc∶戊烷作為洗脫劑洗脫，得到標題產(chǎn)物(430mg，64％)；1H NMR(400MHz，CDCl3)0.83(t，3H)，1.17-1.32(m，3H)，1.42(s，9H)，1.36-1.68(m，7H)，1.80(dd，1H)，1.97-2.12(m，4H)，5.10(app.q，2H)，7.36(m，5H)。
制備例1012-({1-[(芐基氧基)羰基]環(huán)戊基}甲基)戊酸 在氮氣氛下將制備例100的產(chǎn)物(430mg，1.15mmol)在TFA(2ml)中回收并攪拌16小時。將此混合物蒸發(fā)至干，并將此殘余物通過柱色譜純化，用95∶5 DCM∶MeOH洗脫得到標題產(chǎn)物(353，97％)；1H NMR(400MHz，CDCl3)0.82(t，3H)，1.20-1.74(m，10H)，1.80(dd，1H)，2.04-2.13(m，3H)，2.24-2.41(m，1H)，5.10(app q.，2H)，7.36(m，5H)。
制備例102芐基-1-(2-{[(5-乙基-1，3，4-噻二唑-2-基)氨基]羰基}戊基)-環(huán)戊烷甲酸酯 將制備例101的產(chǎn)物(353mg，1.11mmol)、2-氨基-5-乙基-1，3，4-噻唑(ex Lancaster)(150mg，1.15mmol)、WSCDI(255mg，1.20mmol)、HOBt(173mg，1.20mmol)和4-甲基嗎啉(0.24ml，1.20mmol)全部在5ml乙腈中混合，并在室溫氮氣氛下攪拌16小時。此后，將此混合物升溫至50℃，保持3小時，然后在80℃下保持3小時。將此混合物冷卻至室溫，蒸發(fā)，溶解于EtOAc(10ml)，并用碳酸氫鈉(10ml)洗滌。將有機層干燥(硫酸鎂)并蒸發(fā)得到膠狀物，其通過柱色譜純化得到標題產(chǎn)物(430mg，90％)；1H NMR(400MHz，CDCl3)0.79(t，3H)，1.15-1.24(m，3H)，1.37(t，3H)，1.42-1.63(m，7H)，1.83(dd，1H)，2.00-2.20(m，3H)，2.42-2.51(m，1H)，2.97(q，2H)，5.01(app.q，2H)，7.30(m，5H)。
NEP檢測得自犬、大鼠、兔和人腎皮質(zhì)的可溶性中性內(nèi)肽酶(NEP)的制備和檢測。
可溶性NEP得自腎皮質(zhì)并通過檢測NEP底物Abz-D-Arg-Arg-Leu-EDDnp裂解產(chǎn)生其熒光產(chǎn)物Abz-D-Arg-Arg的速度來進行試驗。
試驗方法1材料所有用水經(jīng)雙去離子化。
1.1組織人腎 IIAM(Pennsylvania.U.S.A.)大鼠腎 商購(In house tissue supply)
兔腎商購犬腎商購1.2勻化介質(zhì)100mM甘露醇和20mM Tris@ pH 7.12.42g Tris(Fisher T/P630/60)，在1升水中稀釋并用6M鹽酸在室溫下將pH調(diào)節(jié)至7.1。向其中加入18.22g甘露醇(Sigma M-9546)。
1.3Tris緩沖液(NEP緩沖液)50ml的50mM Tris pH7.4(SigmaT2663)，在950ml的水中稀釋。
1.4底物(Abz-D-Arg-Arg-Leu-EDDnp)購自SNPE，并以粉末的形式在-20℃下保存。在Tris緩沖液中溫和地再懸浮來制備2mM貯存液，其不應進行搖動或超聲波處理。將600μl等份的此2mM貯存液在-20℃下保存不超過1個月。(Medeiros，M.A.S.，F(xiàn)ranca，M.S.F.等，(1997)，Brazilian Journal ofMedical and Biological Research，30，1157-1162)。
1.5總產(chǎn)物在培養(yǎng)板上包括相應于100％底物至產(chǎn)物轉(zhuǎn)化形式，以便可以測定底物的轉(zhuǎn)化率％。總產(chǎn)物一般通過將1ml的2mM底物與20μl的酶在37℃下保存24小時來產(chǎn)生。
1.6貯存溶液在NEP緩沖液中制備磷酰二肽(Sigma R7385)的300μM貯存液，并以50μl的等份保存于-20℃下。
1.7二甲基亞砜(DMSO)。
1.8氯化鎂-MgCl2·6H2O(Fisher M0600/53)。
1.9Black96孔平底檢測板(Costar 3915)。
1.10封口膜(Topseal A)(Packard 6005185)。
1.11離心管2特定儀器
2.1Sorvall RC-5B離心機(SS34 GSA轉(zhuǎn)子，預冷卻至4℃)。
2.2Braun小引物混合器。
2.3Beckman CS-6R離心機。
2.4Fluostar galaxy。
2.5Wesbart 1589搖動孵育器。
3方法3.1組織制備3.2犬、大鼠、兔和人NEP得自腎皮質(zhì)，用改良的Booth，A.G.& Kenny，A.J.(1974)Biochem.J.142，575-581的方法。
3.3在室溫下將冷凍的腎臟解凍，并從髓質(zhì)上切下皮質(zhì)。
3.4將皮質(zhì)切細并在約10個體積的勻化緩沖液(1.2)中用Braun小引物混合器(2.2)勻化。
3.5將氯化鎂(1.8)(20.3mg/gm組織)加入到該勻漿物中并在冰水浴中攪拌15分鐘。
3.6在Beckman離心機(2.3)中，將此勻漿物以1,500g(3,820rpm)離心12分鐘，之后將上清夜轉(zhuǎn)運至新的離心管中并棄掉沉淀。
3.7在Sovall離心機(2.1)中，將上清夜以15,000g(12,100rpm)離心12分鐘，并棄掉上清夜。
3.8移出殘余顆粒頂部的淡粉色層，并再懸浮于含有氯化鎂(9mgMgCl2在5ml緩沖液中，每克組織)的勻化緩沖液中。
3.9在Beckman離心機(2.3)中將此懸浮液以2,200g(4,630rpm)離心12分鐘，之后棄掉沉淀。
3.10用Sorvall離心機(2.1)將此上清夜以15,000g(12,100rpm)離心12分鐘，并棄掉上清夜。
3.11將最終顆粒再懸浮于含有氯化鎂(0.9mg MgCl2在0.5ml緩沖液中，每克組織)勻化緩沖液。用Braun小引物混合器(2.2)獲得均勻的懸浮液。然后，將其冷凍為100μl的等份，以備檢測NEP活性。
4 NEP活性的檢測通過其裂解NEP特定肽底物的能力，檢測原來等分的NEP的活性。
4.1制備4％DMSO/NEP緩沖液(4ml DMSO∶96ml NEP緩沖液)。
4.2底物、總產(chǎn)物、酶和磷酰二肽貯存液置于冰上解凍。
4.3將50μl的4％DMSO/NEP緩沖液加入到每個孔中。
4.4將2mM底物貯存約進行1∶40至稀釋，制得50μM溶液。將100μl的50μM底物加入到每個孔中(最終濃度25μM)。
4.5加入50μl的一系列酶的稀釋液引發(fā)反應(一般使用1∶100、1∶200、1∶400、1∶800、1∶1600和1∶3200)。將50μl的NEP緩沖液加入到空白孔中。
4.6將2mM總產(chǎn)物進行1∶80稀釋制備25μM溶液。將200μl的25μM產(chǎn)物加入到新板的頭4個孔中。
4.7將培養(yǎng)板在37℃下在搖動孵育器中培養(yǎng)60分鐘。
4.8將300μM磷酰二肽貯存液進行1∶100稀釋為300nM。通過加入100μl 300nM磷酰二肽并在37℃下在搖動孵育器中培養(yǎng)20分鐘停止反應，之后在Fluostar(ex320/em420)讀取數(shù)值。
5 NEP抑制試驗5.1底物、總產(chǎn)物、酶和磷酰二肽貯存液置于冰上解凍。
5.2在100％DMSO中制備化合物的貯存液并在NEP緩沖液中進行1∶25稀釋，得到4％DMSO溶液。所有的進一步稀釋在4％DMSO溶液中進行(4ml DMSO∶96ml NEP緩沖液)。
5.3將50μl的化合物加入到96孔板中，一式兩份，并將50μl的4％DMSO/NEP緩沖液加入到對照和空白孔中(見培養(yǎng)板布局圖附錄)?；蛘咭娮詣酉♂尪鹊母戒?。
5.4將2mM底物貯存液在NEP緩沖液中進行1∶40稀釋，制備50μM溶液(275μl的2mM底物加10.73ml緩沖液對1個板來說是足夠的)。
5.5將酶貯存液在NEP緩沖液中稀釋(由活性抑制來確定)。
5.6將2mM總產(chǎn)物進行1∶80稀釋制備25μM溶液。將200μl的25μM產(chǎn)物加入到另一個板的頭4個孔中。
5.7將300μM磷酰二肽貯存液1∶1000稀釋為300nM貯存液(11μl磷酰二肽加10.99ml NEP緩沖液)。
5.8向96孔板的每個孔中加入如下物質(zhì)表加入到96孔板中的試劑
5.9加入NEP酶引起反應，之后在37℃下在搖動孵育器中培養(yǎng)1小時。
5.10通過加入100μl 300nM磷酰二肽并在37℃下在搖動孵育器中培養(yǎng)20分鐘停止反應，之后在Fluostar(ex320/em420)讀取數(shù)值。
6計算在化合物存在和不存在下檢測NEP酶的活性并以百分率表示。
以％活性(％對照)對化合物濃度繪制S形量效曲線，并在Excel中用LabStats曲線計算IC50值。
ACE檢測得自豬和人腎皮質(zhì)的可溶性血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(ACE)的制備和檢測。
可溶性ACE得自腎皮質(zhì)并通過檢測ACE底物Abz-Gly-p-硝基-Phe-Pro-OH裂解產(chǎn)生其熒光產(chǎn)物Abz-Gly的速度來進行試驗。
1材料所有用水經(jīng)雙去離子化。
1.1人腎IIAM(Pennsylvania.U.S.A.)或UK人組織庫(UK HTB)1.2豬腎ACE Simga(A2580)1.3勻化緩沖液-1100mM甘露醇和20mM Tris@pH 7.12.42g Tris(Fisher T/P630/60)，在1升水中稀釋并用6M鹽酸在室溫下將pH調(diào)節(jié)至7.1。向其中加入18.22g甘露醇(Sigma M-9546)。
1.4勻化緩沖液-2100mM甘露醇、20mM Tris@ pH 7.1和10mM MgCl2·6H2O(FisherM0600/53)。向500ml勻化緩沖液1(1.4)加入1.017g的氯化鎂。
1.5Tris緩沖液(ACE緩沖液)50mM Tris和300mM NaCl@pH 7.450ml的50mM Tris pH7.4(Sigma T2663)和17.52g氯化鈉(FisherS/3160/60)，在水中稀釋至1000ml。
1.6底物(Abz-D-Gly-p-硝基-Phe-Pro-OH)(Bachem M-1100)ACE底物以粉末的形式在-20℃下保存。在ACE緩沖液中溫和地再懸浮來制備2mM貯存液，其不應進行搖動或超聲波處理。將400μl等份的此2mM貯存液在-20℃下保存不超過1個月。
1.7總產(chǎn)物在培養(yǎng)板上包括相應于100％底物至產(chǎn)物轉(zhuǎn)化形式，以便可以測定底物的轉(zhuǎn)化率％(見計算部分)?？偖a(chǎn)物一般通過將1ml的2mM底物與20μl的酶在37℃下保存24小時來產(chǎn)生。
1.8貯存溶液在ACE緩沖液中以1∶250稀釋0.5M EDTA(PromegaCAS[6081/92/6])來制備2mM溶液。
1.9二甲基亞砜(DMSO)。
1.10氯化鎂-MgCl2·6H2O(Fisher M0600/53)。
1.11 Black96孔平底檢測板(Costar3915或Packard)。
1.12封口膜(Topseal A)(Packard 6005185)。
1.13離心管2特定儀器2.1 Sorvall RC-5B離心機(SS34 GSA轉(zhuǎn)子，預冷卻至4℃)。
2.2 Braun小引物混合器。
2.3 Beckman CS-6R離心機。
2.4 BMG Fluostar Galaxy。
2.5 Wesbart1589搖動孵育器。
3 方法3.1組織制備
3.2人ACE得自腎皮質(zhì)，用改良的Booth，A.G.& Kenny，A.J.(1974)Biochem.J.142，575-581的方法。
3.3在室溫下將冷凍的腎臟解凍，并從髓質(zhì)上切下皮質(zhì)。
3.4將皮質(zhì)切細并在約10個體積的勻化緩沖液-1(1.4)中用Braun小引物混合器(2.2)勻化。
3.5將氯化鎂(1.11)(20.3mg/gm組織)加入到該勻漿物中并在冰水浴中攪拌15分鐘。
3.6在Beckman離心機(2.3)中，將此勻漿物以1,500g(3,820rpm)離心12分鐘，之后將上清夜轉(zhuǎn)運至新的離心管中并棄掉沉淀。
3.7在Sovall離心機(2.1)中，將上清夜以15,000g(12,100rpm)離心12分鐘，并棄掉上清夜。
3.8移出殘余顆粒頂部的淡粉色層，并再懸浮于緩沖液-2中(1.5)(5ml每克組織)。
3.9在Beckman離心機中將此懸浮液以2,200g(4,630rpm)離心12分鐘，之后棄掉沉淀。
3.10用Sorvall離心機將此上清夜以15,000g(12,100rpm)離心12分鐘，并棄掉上清夜。
3.11將最終顆粒再懸浮于勻化緩沖液-2中(0.5ml緩沖液每克組織)。用Braun小引物混合器獲得均勻的懸浮液。然后，將其冷凍為100μl的等份，以備檢測NEP活性。
4 ACE活性的檢測通過其裂解ACE特定肽底物的能力，檢測原來等分的ACE的活性。
豬ACE(1.2)解凍并再懸浮于ACE緩沖液(1.6)中，濃度0.004U/μl，以50μl等分冷凍。
4.1制備4％DMSO/ACE緩沖液(4ml DMSO∶96ml ACE緩沖液)。
4.2底物(1.7)、總產(chǎn)物(1.8)、酶(1.1，1.2，1.3)置于冰上解凍。
4.3將50μl的4％DMSO/ACE緩沖液加入到每個孔中。
4.4將2mM底物貯存約進行1∶100至稀釋，制得20μM溶液。將100μl的20μM底物加入到每個孔中(最終濃度10μM)。
4.5加入50μl的一系列酶的稀釋液引發(fā)反應(一般使用1∶100、1∶200、1∶400、1∶800、1∶1600和1∶3200)。將50μl的ACE緩沖液加入到空白孔中。
4.6將2mM總產(chǎn)物進行1∶200稀釋制備10μM溶液。將200μl的10μM產(chǎn)物加入到新板的頭4個孔中。
4.7將培養(yǎng)板在37℃下在搖動孵育器中培養(yǎng)60分鐘。
4.8通過加入100μl存在于ACE緩沖液中的2mM EDTA并在37℃下在搖動孵育器中培養(yǎng)20分鐘停止反應，之后在BMG FluostarGalaxy(ex320/em420)讀取數(shù)值。
5 ACE抑制試驗5.1底物、總產(chǎn)物、酶貯存液置于冰上解凍。
5.2在100％DMSO中制備化合物的貯存液并在ACE緩沖液中進行1∶25稀釋，得到4％DMSO溶液。所有的進一步稀釋在4％DMSO/ACE緩沖液中進行(4ml DMSO∶96ml ACE緩沖液)。
5.3將50μl的化合物加入到96孔板中，一式兩份，并將50μl的4％DMSO/ACE緩沖液加入到對照和空白孔中(見培養(yǎng)板布局圖附錄)。
5.4步驟5.2和5.3還可以通過手動進行，或在Packard多探針自動裝置中進行(詳見附錄-2)。
5.5將2mM底物貯存液在ACE緩沖液中進行1∶100稀釋，制備20μM溶液(在該試驗中最終濃度為10μM)(110μl的2mM底物加10.89ml緩沖液對1個板來說是足夠的)。
5.6將酶貯存液在ACE緩沖液中稀釋，如活性抑制來確定(4.0)。
5.7將2mM總產(chǎn)物進行1∶200稀釋制備10μM溶液。將200μl的10μM產(chǎn)物加入到另一個板的頭4個孔中。
5.8將0.5mM EDTA貯存液進行1∶250稀釋，得到2mM的貯存液(44μlEDTA加10.96ml ACE緩沖液)。
5.9向96孔板的每個孔中加入如下試劑表加入到96孔板中的試劑
5.10在該試驗中詳同一96孔板中加入50μl的最高濃度的各化合物，作為總產(chǎn)物(5.7)。加入150μl的ACE緩沖液以檢測任何化合物的熒光。
5.11加入ACE酶引起反應，之后在37℃下在搖動孵育器中培養(yǎng)1小時。
5.12通過加入100μl 2mM EDTA并在37℃下在搖動孵育器中培養(yǎng)20分鐘停止反應，之后在BMG Fluostar Galaxy(ex320/em420)讀取數(shù)值。
6計算在化合物存在和不存在下檢測ACE酶的活性并以百分率表示(FU＝熒光單位)。
(ii) (iii) 或 (iv)％抑制＝100-％對照(v)對于熒光化合物，從化合物的平均FU值中扣除含化合物(5.10)的空白的平均FU，來計算％活性。
以％活性(％對照)對化合物濃度繪制S形量效曲線，并在Excel中用LabStats曲線計算IC50值。
本文中特定實施例對NEP的IC50值小于5000nM。
此外，很多被測實施例較ACE來對NEP的選擇性至少為300倍。
覺醒反應的動物模型我們開發(fā)了模擬女性性覺醒期間觀察到的生理覺醒反應并直接反映在人自愿者獲得的臨床數(shù)據(jù)的動物模型。該模型用激光多普勒技術(shù)記錄骨盆神經(jīng)刺激和血管活性神經(jīng)遞質(zhì)引起的陰道和陰蒂血流的微小變化。在性覺醒期間，由于骨盆神經(jīng)神經(jīng)支配的增加導致生殖器血流的增加。生殖器血流的增加導致生殖器潤滑性和生殖器敏感性的增加，這些都與性覺醒有關(guān)。FSAD的主要原因是生殖器血流的降低，且這本身表現(xiàn)為陰道、陰唇和陰蒂充血的降低。通過恢復正常的性覺醒反應達到了治療女性FSAD患者的目的。這可以通過提高生殖器血流來完成。
在動物模型中觀察到的、由骨盆神經(jīng)刺激引起的陰道和陰蒂血流的增加，代表了在雌性性覺醒期間觀察到的內(nèi)源性血管作用。因此，首先，此模型可以用來鑒定陰道和陰蒂血流的調(diào)節(jié)機制，其次，用此模型驗證對提高生殖器血流的新的研究。
用此動物模型，按照如下方案，使用得自實施例29的標題產(chǎn)物，以表明在兔子中由于骨盆神經(jīng)刺激引起的生殖器血流的增加。
研究兩種給藥途經(jīng)a)靜脈內(nèi)給藥，及b)局部給藥。兩種研究用麻醉的兔子模型按照如下方法進行。
方法麻醉方案將雌性新西蘭兔(約2.5kg)用米托咪啶(Domitor_)0.5ml/kg肌內(nèi)和氯胺酮(Vetalar_)0.25ml/kg肌內(nèi)聯(lián)合預處理，同時通過面罩維持氧氣攝入。將這些兔子進行氣管切開術(shù)，用PortexTM無膠頭的器官內(nèi)插管3ID，連接換氣機并維持換氣速度為每分鐘30-40次呼吸，潮氣流量約18-20ml，且最大導氣管壓力為10cm H2O。然后，麻醉改用異氟烷，并以每分鐘21次活性的速度進行用氧氣換氣。用23G或24G導管在右耳緣靜脈進行插管，并以0.5ml/min輸入乳酸化的Ringer溶液。在介入手術(shù)期間給兔子維持3％的異氟烷，維持麻醉期間降低導2％。
骨盆神經(jīng)的刺激在腹部中線進行切口，通過此切口進入腹腔。該切口恰在恥骨上，長度約5厘米。直接將脂肪和肌肉切除以露出下腹神經(jīng)，其走向腹腔。其基本上保持接近下腹壁的側(cè)彎，以避免損傷股靜脈和動脈，這些靜脈和動脈在恥骨上部。坐骨神經(jīng)和骨盆神經(jīng)較深，在進一步在兔的背側(cè)解剖后才能定位。術(shù)語骨盆神經(jīng)應用范圍很寬松；針對該對象的解剖書沒有對這些神經(jīng)詳盡地定義。但是，對這些神經(jīng)的刺激引起陰道和陰蒂血流的增加和骨盆區(qū)域的運動感覺。將骨盆神經(jīng)從周圍的組織中分離，并將Harvard雙極刺激電極置于該神經(jīng)周圍。將該神經(jīng)梢抬高，產(chǎn)生一定程度的張力，然后將電極裝置就位。將約1ml的液體石蠟置于神經(jīng)和電極周圍。石蠟作為神經(jīng)的保護性潤滑劑并防止電極對血液的污染。將電極連接至Grass S88刺激器。用下列參數(shù)刺激骨盆神經(jīng)-5V，脈沖寬幅0.5ms，刺激時間10秒且頻率范圍為2至16Hz。當每隔15-20分鐘刺激神經(jīng)時，獲得可重復的反應。
在每個試驗前確定頻率反應曲線，以便確定用作亞最大反應的最佳頻率，一般為4Hz。通過股靜脈，用Harvard 22輸液泵進行被測化合物的輸液，施行連續(xù)15分鐘的刺激循環(huán)。
激光多普勒探針的定位在恥骨的尾部末端做腹部中線切口，以暴露恥骨區(qū)域。除去任何結(jié)締組織，并暴露陰蒂的被膜，保證該壁沒有小的血管。通過除去任何結(jié)締組織，也暴露外陰道壁。將一個激光多普勒流動探針插入陰道3厘米，以便該探針體的一半仍可見。固定第二個探針，使其恰位于外陰蒂壁的上部。再調(diào)整這些探針的位置直到獲得信號。第二個探針恰置于外陰道壁血管的表面上。兩個探針都用夾具固定。
陰道和陰蒂血流記錄為直接由流量計用Po-ne-mah數(shù)據(jù)獲取軟件(Ponemah Physiology Platform，Gould Instrument Systems Inc)獲得的數(shù)字，或者記錄為間接得自Gould表記錄器痕量。在該試驗開始時設(shè)定校準值(0-125ml/min/100g組織)。
抑制劑的給藥a)靜脈內(nèi)給藥血管插管術(shù)對兔子的左腹股溝區(qū)域進行備皮處理，并沿著大腿做長約5厘米的垂直切口。暴露、分離股靜脈和動脈，然后用PVC插管(17G)進行插管，以進行藥物和化合物的輸液。對股動脈重復進行插管，將此插管插入10厘米以保證該插管到達腹主動脈。此動脈插管連接Gould系統(tǒng)以記錄血壓。還通過該動脈插管采集進行血液氣相分析的樣本。檢測收縮壓和舒張壓，并用公式(舒張壓×2+收縮壓)/3來計算平均動脈壓。心率用脈搏血氧檢測計和Po-ne-mah數(shù)據(jù)獲取軟件系統(tǒng)(PonemahPhysiology Platform，Gould Instrument Systems Inc)測量。
在鹽水或5％葡萄糖溶液(注射用200μl 50％葡萄糖在1.8ml水中)配制實施例29的標題化合物。用Harvard 22泵以500μl/min的速度通過三通向股靜脈中輸入此抑制劑和載體對照。輸液后，用含肝素的鹽水(Hepsaline)沖洗此插管，以便在此插管中沒有殘留NEP抑制劑。
b)抑制劑的局部給藥在50％丙二醇/50％水中以90％的飽和度混合實施例29的產(chǎn)物，制備局部制劑。用羧甲基纖維素(CMC)使該混合物變得粘稠，其最終濃度約2.5mg/ml。0.2ml的給藥量提供了最大劑量0.5mg。
通過并在家用設(shè)計的涂藥器中，將此制劑局部施用于內(nèi)陰道壁。簡言之，切下10厘米長的管(ID 3mm，OD4mm)片并連接1ml的注射器。每個注射器都充滿了對照膠(不含活性組分)和上述制劑。將此管片插入到陰道內(nèi)2厘米處并將0.2ml的膠小心地注入，避免干擾激光多普勒探針。膠的加入不引起陰道的擴張，且在不接受刺激和接受刺激階段陰道內(nèi)沒有這些膠的過量泄漏。
結(jié)果和討論性覺醒的動物模型我們開發(fā)了性覺醒生理學的有效的可再現(xiàn)模型。用此麻醉的兔模型，我們能夠用激光多普勒技術(shù)檢測生殖器血流的微小變化。對骨盆神經(jīng)的刺激常用來刺激性覺醒的神經(jīng)元作用。FSAD與生殖器血流降低有關(guān)并可以由其引起。
我們的結(jié)果表明，臨床相關(guān)劑量的實施例29的標題化合物顯著提高了骨盆神經(jīng)刺激引起的生殖器血流的增加。在靜脈內(nèi)給藥和局部給藥中都觀察到了這種增加。


圖1顯示了實施例29的標題化合物的靜脈給藥對陰道和陰蒂血流的作用。靜脈內(nèi)給藥提高了性覺醒的麻醉兔模型中骨盆神經(jīng)刺激(PNS)造成的生殖器血流的增加。以15分鐘的間隔重復PNS引起生殖器血流可重復地增加(細線條框)。與匹配的對照刺激期間和載體對照(細線條框)所觀察到的增加相比，實施例29的標題產(chǎn)物的靜脈內(nèi)給藥(灰色條框)提高了由亞最大刺激頻率(如4Hz)引起的陰蒂和陰道血流的峰值升高。
在1.0mg/kg靜脈內(nèi)快速濃注輸液后觀察到了如下同時發(fā)生的增加陰蒂血流增加了131％，而陰道血流增加了92％(n＝3)。數(shù)據(jù)以平均±SEM表示；所有變化用激光多普勒技術(shù)監(jiān)控。
圖2顯示了局部使用實施例29的標題產(chǎn)物期間對陰道血流的作用。對于非刺激的/基礎(chǔ)陰道血流來說沒有觀察到任何變化，在開始插入管片或者施用0.2ml的載體膠時也沒觀察到任何變化。
以15分鐘的間隔用亞最大刺激頻率進行重復骨盆神經(jīng)刺激，引起了陰道血流(實心圓)的可重復的增加。與平均對照血流的增加相比，陰道內(nèi)施用一組濃度的實施例29的標題產(chǎn)物(0.2mg/ml)，提高了陰道血流(空心圓)的峰值增加。與對照血流(實心正方形)相比，實施例29的標題產(chǎn)物對基礎(chǔ)(非刺激)陰道血流(空心正方形)沒有作用。所有的變化用激光多普勒技術(shù)監(jiān)控，而數(shù)據(jù)表示為平均值±s.e.平均值(n＝4)，***P＜0.001，學生t檢驗。
此研究表明實施例29的標題產(chǎn)物，當給陰道局部施用時，顯著提高了骨盆神經(jīng)刺激引起的陰道血流的增加。其增加的程度與該化合物靜脈內(nèi)輸液后觀察到的增加相當。有趣的是，增加發(fā)生在實施例29的標題產(chǎn)物的游離血漿濃度，這對于引起陰道血流的增加來說是意想不到的。
總之，該研究表明陰道內(nèi)、局部使用本發(fā)明的化合物，提高了骨盆神經(jīng)刺激引起的陰道血流的增加。
權(quán)利要求
1.式(I)的化合物、其藥用鹽、溶劑化物、多晶型物或前藥，在制備治療女性性功能障礙的藥物中的用途； 其中R1是C1-6烷基，其可以被一種或多種取代基取代，取代基可以相同或不同，選自鹵素、羥基、C1-6烷氧基、C2-6羥基烷氧基、C1-6烷氧基(C1-6烷氧基)、C3-7環(huán)烷基、C3-7環(huán)烯基、芳基、芳氧基、(C1-4烷氧基)芳氧基、雜環(huán)基、雜環(huán)基氧基、-NR2R3、-NR4COR5、-NR4SO2R5、-CONR2R3、-S(O)pR6、-COR7和-CO2(C1-4烷基)；或R1是C3-7環(huán)烷基、芳基或雜環(huán)基，它們各自可以被上述一種或多種取代基取代，取代基可以相同或不同，其中還包括C1-6烷基；或R1是C1-6烷氧基、-NR2R3或-NR4SO2R5；其中R2和R3各自獨立地是H、C1-4烷基、C3-7環(huán)烷基(任選地被羥基或C1-4烷氧基取代)、芳基、(C1-4烷基)芳基、C1-6烷氧基芳基或雜環(huán)基；或R2和R3與它們連接的氮原子-起形成吡咯烷基、1-哌啶基、4-嗎啉基、哌嗪基或N-(C1-4烷基)哌嗪基；R4是H或C1-4烷基；R5是C1-4烷基、CF3、芳基、(C1-4烷基)芳基、(C1-4烷氧基)芳基、雜環(huán)基、C1-4烷氧基或-NR2R3，其中R2和R3定義如上；R6是C1-4烷基、芳基、雜環(huán)基或NR2R3，其中R2和R3定義如上；且R7是C1-4烷基、C3-7環(huán)烷基、芳基或雜環(huán)基；p是0、1、2或3；n是0、1或2；-(CH2)n-連接任選地被如下基團取代；C1-4烷基、被一個和多個氟原子或苯基取代的C1-4烷基、C1-4烷氧基、羥基、羥基(C1-3烷基)、C3-7環(huán)烷基、芳基或雜環(huán)基)；Y是如下基團 其中A是-(CH2)q-，其中q是1、2、3或4以完成3至7元碳環(huán)，其可以是飽和或不飽和的；R8是H、C1-6烷基、-CH2OH、苯基、苯基(C1-4烷基)或CONR11R12；R9和R10各自獨立地是H、-CH2OH、-C(O)NR11R12、C1-6烷基、苯基(任選地被C1-4烷基、鹵素或C1-4烷氧基取代)、或苯基(C1-4烷基)(其中苯基任選地被C1-4烷基、鹵素或C1-4烷氧基取代)，或R9和R10一起形成二氧雜環(huán)戊烷；R11和R12，其可以相同或不同，是H、C1-4烷基、R13或S(O)rR13，其中r是0、1或2，而R13是任選地被C1-4烷基取代的苯基或者是其中苯基任選地被C1-4烷基取代的苯基C1-4烷基；或者Y是基團-C(O)NR11R12，其中R11和R12定義如上，但R11和R12不都是H；或者Y是基團， 其中R14是H、CH2OH、或C(O)NR11R12，其中R11和R12定義如上；當存在時，R15可以與任何另一個R15相同或不同，是OH、C1-4烷基、C1-4烷氧基、鹵素或CF3；t是0、1、2、3或4；而R16和R17獨立地是H或C1-4烷基；或者Y是基團 其中B、D、E或F中的一個或兩個是氮原子，其它是碳原子；而R14至R17和t定義如上；或者Y是任選地被取代的5-7員雜環(huán)，其可以是飽和的、不飽和的或芳族的并含有氮原子、氧原子或硫原子，且任選地在該環(huán)中含有一個、兩個或三個其它氮原子，且其可以任選地是苯并稠合的并任選地被如下基團取代C1-6烷氧基；羥基；氧代基團；氨基；一或二-(C1-4烷基)氨基；C1-4烷?；被换駽1-6烷基，其可以被一個或多個取代基取代，取代基可以相同或不同，選自；C1-6烷氧基、C1-6鹵代烷氧基、C1-6烷硫基、鹵素、C3-7環(huán)烷基、雜環(huán)基或苯基；或者C3-7環(huán)烷基、芳基或雜環(huán)基，其各自可以被一個或多個取代基取代，取代基可以相同或不同，選自；C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6鹵代烷氧基、C1-6烷硫基、鹵素、C3-7環(huán)烷基、雜環(huán)基或苯基；其中當該雜環(huán)上存在氧代基團取代時，該環(huán)只含有一個或兩個氮原子且此氧代取代在該環(huán)中氮原子的鄰位；或者Y是-NR18S(O)uR19，其中R18是H或C1-4烷基；R19是芳基、芳基C1-4烷基或雜環(huán)基；而u是0、1、2或3。
2.式(I)的化合物、其藥用鹽、溶劑化物、多晶型物或前藥，其中R1、n和Y如權(quán)利要求1所定義，其條件是Y不是基團-C(O)NR11R12，且當R1是丙基或苯基乙基時，R14不是-CH2OH。
3.式(I)的化合物、其藥用鹽、溶劑化物、多晶型物或前藥，其中R1、n和Y如權(quán)利要求1所定義，其條件是Y不是基團-C(O)NR11R12而R14不是H或-CH2OH。
4.權(quán)利要求2或3所述的化合物、其藥用鹽、溶劑化物、多晶型物或前藥，其中R1是C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷氧基(C1-3)烷基、C1-6烷氧基C1-6烷氧基C1-3烷基或被芳基取代的C1-6烷基。
5.權(quán)利要求4所述的化合物、其藥用鹽、溶劑化物、多晶型物或前藥，其中R1是C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷氧基(C1-3)烷基或C1-6烷氧基C1-6烷氧基C1-3烷基。
6.權(quán)利要求5所述的化合物、其藥用鹽、溶劑化物、多晶型物或前藥，其中R1是C1-4烷基或C1-6烷氧基(C1-3)烷基。
7.權(quán)利要求2至6任一項所述的化合物、其藥用鹽、溶劑化物、多晶型物或前藥，其中當Y是基團 且該碳環(huán)完全飽和時，則優(yōu)選R9或R10之一是-CH2OH；-C(O)NR11R12；C1-6烷基；任選地被C1-4烷基取代的苯基；或苯基(C1-4烷基)，其中所述苯基任選地被C1-4烷基取代。
8.權(quán)利要求7所述的化合物、其藥用鹽、溶劑化物、多晶型物或前藥，其中所述碳環(huán)是5、6或7員，其中R9或R10之一是-C(O)NR11R12，另一個是C1-6烷基；任選地被C1-4烷基取代的苯基；或苯基(C1-4烷基)，其中所述苯基任選地被C1-4烷基取代。
9.權(quán)利要求7或8所述的化合物、其藥用鹽、溶劑化物、多晶型物或前藥，其中R9和R10與該環(huán)中相鄰的碳原子連接。
10.權(quán)利要求7至9任一項所述的化合物、其藥用鹽、溶劑化物、多晶型物或前藥，其中R8是CH2OH。
11.權(quán)利要求2至6任一項所述的化合物、其藥用鹽、溶劑化物、多晶型物或前藥，其中當Y是基團-NR18S(O)uR19時，優(yōu)選R18是H。
12.權(quán)利要求2至6或11任一項所述的化合物、其藥用鹽、溶劑化物、多晶型物或前藥，其中R19是芐基或苯基。
13.權(quán)利要求2至6或11或12任一項所述的化合物、其藥用鹽、溶劑化物、多晶型物或前藥，其中u是2。
14.權(quán)利要求2至6任一項所述的化合物、其藥用鹽、溶劑化物、多晶型物或前藥，其中Y是任選地被取代的5-7員雜環(huán)。
15.權(quán)利要求14所述的化合物、其藥用鹽、溶劑化物、多晶型物或前藥，其中所述5-7員雜環(huán)是任選地被取代的芳環(huán)。
16.權(quán)利要求15所述的化合物、其藥用鹽、溶劑化物、多晶型物或前藥，其中所述芳環(huán)是吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、噠嗪基、吡唑基、三唑基、四唑基、惡二唑基、噻唑基、噻二唑基、惡唑基、異惡唑基、吲哚基、異吲哚啉基、喹啉基、異喹啉基、吡啶酮基、喹喔啉基或喹唑啉基，其中各自如權(quán)利要求1所述可以被取代。
17.權(quán)利要求16所述的化合物、其藥用鹽、溶劑化物、多晶型物或前藥，其中所述芳環(huán)是惡二唑、吡啶酮或噻唑，其中各自可以如權(quán)利要求1所述被取代。
18.權(quán)利要求17所述的化合物、其藥用鹽、溶劑化物、多晶型物或前藥，其中所述芳環(huán)是1，2，5-惡二唑、1，3，4-惡二唑、2-吡啶酮或1，3，4-噻唑，其中各自如權(quán)利要求1所述可以被取代。
19.權(quán)利要求14至18任一項所述的化合物、其藥用鹽、溶劑化物、多晶型物或前藥，其中所述5-7員雜環(huán)被一個或多個C1-6烷基、苯基或苯基C1-4烷基取代。
20.權(quán)利要求19所述的化合物、其藥用鹽、溶劑化物、多晶型物或前藥，其中所述5-7員雜環(huán)被C1-4烷基或芐基取代。
21.權(quán)利要求17至20任一項所述的化合物、其藥用鹽、溶劑化物、多晶型物或前藥，其中當Y是吡啶酮時，所述吡啶酮是N-取代的吡啶酮。
22.權(quán)利要求14所述的化合物、其藥用鹽、溶劑化物、多晶型物或前藥，其中Y是連接在氮原子的內(nèi)酰胺。
23.權(quán)利要求2至6任一項所述的化合物、其藥用鹽、溶劑化物、多晶型物或前藥，其中Y是 其中R14是CH2OH或C(O)NR11R12。
24.權(quán)利要求2至6或23任一項所述的化合物、其藥用鹽、溶劑化物、多晶型物或前藥，其中R16和R17是氫原子。
25.權(quán)利要求2至6、23或24任一項所述的化合物、其藥用鹽、溶劑化物、多晶型物或前藥，其中t是0。
26.式Ie的化合物、其藥用鹽、溶劑化物、多晶型物或前藥， 其中R1、Y和n如權(quán)利要求2至25任一項所定義。
27.選自如下的化合物、其藥用鹽、溶劑化物、多晶型物或前藥；2-[(1-{[(1-芐基-6-氧代-1，6-二氫-3-吡啶基)氨基]羰基}環(huán)戊基)甲基]-4-甲氧基丁酸(實施例35)；2-{[1-({[3-(2-氧代-1-吡咯烷基)丙基]氨基}羰基環(huán)戊基]-甲基]-4苯基丁酸(實施例40)；(+)-2-{[1-({[2-(羥基甲基)-2，3-二氫-1H-茚-2-基]氨基}羰基)環(huán)戊基]甲基}-4-苯基丁酸(實施例44)；2-[(1-{[(5-甲基-1，3，4-噻二唑-2-基)氨基]羰基}環(huán)戊基)甲基]-4-苯基丁酸(實施例43)；順-3-(2-甲氧基乙氧基)-2-[(1-{[(4-{[(苯基磺?；?氨基]羰基}環(huán)己基)氨基]羰基}環(huán)戊基)甲基]丙酸(實施例38)；(+)-2-{[1-({[2-(羥基甲基)-2，3-二氫-1H-茚-2-基]氨基}羰基)環(huán)戊基]-甲基}戊酸(實施例31)；(2R)-2-[(1-{{[(5-乙基-1，3，4-噻二唑-2-基)氨基]羰基}環(huán)戊基)甲基]戊酸或(-)-2-[(1-{[(5-乙基-1，3，4-噻二唑-2-基)氨基]羰基}環(huán)戊基)-甲基]戊酸(實施例29)；(2S)-2-[(1-{[(5-乙基-1，3，4-噻二唑-2-基)氨基]羰基}環(huán)戊基)甲基]戊酸或(+)-2-[(1-{[(5-乙基-1，3，4-噻二唑-2-基)氨基]羰基}環(huán)戊基)-甲基]戊酸(實施例30)；2-({1-[(3-芐基苯氨基)羰基]環(huán)戊基}甲基)戊酸(實施例21)；2-[(1-{[1-芐基-6-氧代-1，6-二氫-3-吡啶基)氨基]羰基}環(huán)戊基)甲基]戊酸(實施例22)；2-{[1-({[(1R，3S，4R)-4-(氨基羰基)-3-丁基環(huán)己基]氨基}羰基)-環(huán)戊基]甲基}戊酸(實施例9)；反式-3-[1-({[2-(4-氯苯基)環(huán)丙基]氨基}羰基)環(huán)戊基}-2-(甲氧基甲基)丙酸(實施例46)；反式-3-[1-({[2-(4-甲氧基苯基)環(huán)丙基]氨基}羰基)環(huán)戊基]-2-(甲氧基乙基)丙酸(實施例47)；反式-3-[1-({[2-戊基環(huán)丙基]氨基}羰基)環(huán)戊基]-2-(甲氧基乙基)丙酸(實施例48)；3-[1-({[5-芐基-[1，3，4]-噻二唑-2-基]氨基}羰基)環(huán)戊基]-2-(甲氧基乙基)丙酸(實施例49)；3-[1-({[4-丁基吡啶-2-基]氨基}羰基)環(huán)戊基]-2-(甲氧基乙基)丙酸(實施例50)；3-[1-({[4-苯基吡啶-2-基]氨基}羰基)環(huán)戊基]2-(甲氧基乙基)丙酸(實施例51)；3-[1-({[1-羥基甲基-3-苯基環(huán)戊基]氨基}羰基)環(huán)戊基]-2-(甲氧基乙基)丙酸(實施例52)；2-{[1-({[2-(羥基甲基)-2，3-二氫-1H-茚-2-基]氨基}羰基)環(huán)戊基]甲基}-4-甲氧基丁酸(實施例53)；反式-3-[1-({[2-苯基環(huán)丙基]氨基}羰基)環(huán)戊基]-2-(甲氧基乙基)丙酸(實施例54)；(R)-2-{[1-({[2-(羥基甲基)-2，3-二氫-1H-茚-2-基]氨基}羰基)環(huán)戊基]甲基}-4-甲氧基丁酸(實施例55)；和(S)-2-{[1-({[2-(羥基甲基)-2，3-二氫-1H-茚-2-基]氨基}羰基)環(huán)戊基]甲基}-4-甲氧基丁酸(實施例56)。
28.權(quán)利要求1所述的用途，其中所治療的女性性功能障礙至少包括女性性覺醒障礙(FSAD)。
29.權(quán)利要求1或28所述的用途，其中所述藥物通過系統(tǒng)給藥。
30.權(quán)利要求29所述的用途，其中所述藥物通過口服給藥。
31.權(quán)利要求2至27任一項所述的化合物在制備治療或預防通過抑制中性內(nèi)肽酶會帶來有利的治療反應的病癥的藥物中的用途。
32.權(quán)利要求2至27任一項所述的化合物用于藥物中。
33.藥物制劑，其中含有權(quán)利要求2至27任一項所述的化合物以及藥用賦形劑。
34.治療或預防女性性功能障礙的方法，其中包括給患者使用治療有效量的權(quán)利要求1至27任一項所述的化合物。
35.治療女性性功能障礙的藥物制劑，其中含有權(quán)利要求2至27任一項所述的化合物以及藥用賦形劑。
36.制備式I化合物或其鹽的方法， 其中R1、n和Y如權(quán)利要求2至27任一項所定義，該方法包括如下步驟a)式II的化合物 其中Prot是適宜的保護基，與式Y(jié)(CH2)nNH2(III)的化合物反應，得到式IV的化合物， 然后，b)在適當?shù)拿摫Ｗo條件下，式IV的化合物反應后得到式I的化合物；然后c)任選地形成鹽。
37.式IV的化合物 其中R1、n和Y如權(quán)利要求2至27任一項所定義，且其中Prot是保護基。
全文摘要
本發(fā)明提供了式I的化合物，其中R
文檔編號A61K31/495GK1438991SQ01811677
公開日2003年8月27日 申請日期2001年7月2日 優(yōu)先權(quán)日2000年7月6日
發(fā)明者C·G·巴拜爾, A·S·庫克, G·N·茂, D·C·普里德, A·斯托比 申請人:輝瑞大藥廠