專利名稱：乙二半胱氨酸(ec)－藥物綴合物的制作方法
背景技術(shù)：
政府對本發(fā)明不享有權(quán)利。
1.發(fā)明領(lǐng)域本發(fā)明總地涉及標(biāo)記、放射顯像和化學(xué)合成領(lǐng)域。更具體地說，本發(fā)明涉及放射性標(biāo)記靶配體的策略。本發(fā)明進(jìn)一步涉及在腫瘤顯像和組織特異性疾病顯像中使用那些放射性標(biāo)記配體的方法。
2.相關(guān)技術(shù)的描述開發(fā)更多的腫瘤特異性放射性藥物廣泛確定了閃爍腫瘤顯像的改進(jìn)。由于其腫瘤特異性更強(qiáng)，放射性標(biāo)記配體以及放射性標(biāo)記抗體已在閃爍顯像檢測腫瘤方面開辟了新紀(jì)元，并且接受了廣泛的臨床前開發(fā)和評估(Mathias等，1996，1997a，1997b)。放射性核素顯像方式(正電子發(fā)射體層攝影，PET；單光子發(fā)射計算體層攝影，SPECT)是標(biāo)識放射性核素標(biāo)記的放射性示蹤劑的位置和濃度的診斷性橫斷面顯像技術(shù)。盡管CT和MRI提供了關(guān)于腫瘤位置和范圍的重要的解剖學(xué)信息，這些顯像方式不能充分地區(qū)分侵襲性病變與水腫、輻射壞死、分級或神經(jīng)膠質(zhì)增生。PET和SPECT可通過測定代謝活性而用于定位和表征腫瘤。
臨床上期望開發(fā)新的腫瘤缺氧劑，以檢測原發(fā)病變和轉(zhuǎn)移病變以及預(yù)測放射有效性和復(fù)發(fā)時間。目前的顯像方式均不能準(zhǔn)確地測量缺氧，因為腫瘤缺氧的診斷需要病理學(xué)檢查。在至少各被治療腫瘤中缺氧的基線都不知道的情況下，經(jīng)常難于預(yù)測治療缺氧腫瘤的結(jié)果。雖然Eppendorf極譜氧微電極可以測量腫瘤中的氧壓力，這種技術(shù)是侵入性的并且需要技術(shù)熟練的操作者。此外，這種技術(shù)只能用于可及的腫瘤(例如頭部和頸部，宮頸)，并且需要多次讀數(shù)。因此，準(zhǔn)確而簡便的測量腫瘤缺氧的方法會對選擇患者有用。但是，腫瘤與正常組織攝取之比會因所用的放射性藥物而不同。所以，當(dāng)將新的放射性藥物引入臨床實踐時，要將腫瘤與正常組織攝取之比與金標(biāo)準(zhǔn)Eppendorf電極測量缺氧相關(guān)聯(lián)。FMISO已用于診斷頭部和頸部腫瘤、心肌梗塞、炎癥和腦缺血(Martin等，1992；Yeh等，1994；Yeh等，1996；Liu等，1994)。腫瘤與正常組織攝取之比用作基線以評估腫瘤缺氧(Yet等，1996)。盡管已清楚證實了使用[18F]FMISO確定的腫瘤缺氧，將新的顯像劑引入臨床實踐取決于某些其它因素，如是否易于獲得和同位素成本。盡管已清楚證實了使用[18F]FDG進(jìn)行的腫瘤代謝顯像，將新的顯像劑引入臨床實踐取決于某些其它因素，如是否易于獲得和同位素成本。[18F]氟脫氧葡萄糖(FDG)已用于診斷腫瘤、心肌梗塞和神經(jīng)系統(tǒng)疾病。此外，PET放射合成必須迅速，因為正電子同位素的半衰期很短。18F化學(xué)性質(zhì)也很復(fù)雜，它在不同的分子中并不是可重復(fù)的。所以，理想的是發(fā)展一種可與各種藥物綴合的螯合劑。優(yōu)選的同位素會是99mTc，由于其成本低($0.21/mCi，相對于18F的$50/mCi)并且能量低(140Kev，相對于18F的571Kev)。從99Mo發(fā)生器可容易地獲得99mTc。由于其良好的物理特性以及極其低廉的價格，優(yōu)選用99mTc標(biāo)記放射性藥物。
使用氮和硫螯合物已用99mTc標(biāo)記了幾種化合物(Blondeau等，1967；Davison等，1980)。已知雙-氨基乙硫醇四齒配位體，亦稱作二氨基二硫醇化合物，在氧代锝基團(tuán)與兩個硫醇硫原子和兩個胺氮原子有效結(jié)合的基礎(chǔ)之上形成非常穩(wěn)定的Tc(V)O絡(luò)合物。99mTc-L，L-乙二半胱氨酸(ethylenedicysteine)(99mTc-EC)是一種新近成功的N2S2螯合物的例子。EC可以用99mTc容易和高效地標(biāo)記，獲得高的放射化學(xué)純度和穩(wěn)定性，并且通過主動小管運(yùn)輸通過腎臟排泄(Surma等，1994；Van Neron等，1990，1993；Verbruggen等，1990，1992)。EC的其它應(yīng)用是與鎵-68(一種正電子發(fā)射體，t1/2＝68分鐘)螯合用于PET，以及與釓、鐵或錳螯合用于磁共振成象(MRI)。開發(fā)了99mTc-EC-新霉素和99mTc-EC-脫氧葡萄糖并評估了其在腫瘤表征方面的潛在用途。
發(fā)明概述本發(fā)明克服了現(xiàn)有技術(shù)的這些和其它缺陷，提供了一種新的導(dǎo)向組織用于顯像的放射性標(biāo)記策略。本發(fā)明提供了放射性標(biāo)記的組織特異性配體，以及制備放射性標(biāo)記配體和使用其顯示組織特異性疾病影像的方法。
本發(fā)明提供了用于組織特異性疾病顯像的組合物。本發(fā)明的顯像組合物一般包括與乙二半胱氨酸螯合的放射性核素標(biāo)記以及與乙二半胱氨酸在其一條或兩條酸臂之上綴合的組織特異性配體。乙二半胱氨酸與放射性核素標(biāo)記形成N2S2螯合物。當(dāng)然，螯合的化合物在放射性核素與螯合化合物之間會包含離子鍵。術(shù)語“EC-組織特異性配體綴合物”、“EC-衍生物”和“EC-藥物綴合物”在本文中可互換使用，指未標(biāo)記的乙二半胱氨酸-組織特異性配體化合物。本文所用的術(shù)語“綴合物”指共價鍵合的化合物。
乙二半胱氨酸是一種雙-氨基乙硫醇(BAT)四齒配位體，亦稱為二氨基二硫醇(DADT)化合物。已知這種化合物在氧代锝基團(tuán)與兩個硫醇硫原子和兩個胺氮原子有效結(jié)合的基礎(chǔ)之上形成非常穩(wěn)定的Tc(V)O絡(luò)合物。已知99mTc標(biāo)記的二乙酯(99mTc-L，L-ECD)是一種腦藥劑。99mTc-L，L-乙二半胱氨酸(99mTc-L，L-EC)是其最具極性的代謝產(chǎn)物，并發(fā)現(xiàn)它在尿中迅速有效地排泄。因此99mTc-L，L-EC已被用作腎功能藥劑(Verbruggen等，1992)。
組織特異性配體是這樣一種化合物，當(dāng)引入哺乳動物或患者體內(nèi)時，將特異性地與特定類型的組織結(jié)合。預(yù)計本發(fā)明的組合物可以包括實際上任何已知的組織特異性化合物。優(yōu)選與本發(fā)明一起應(yīng)用的組織特異性配體是抗癌劑、DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑、抗代謝物、腫瘤標(biāo)記、葉酸受體引導(dǎo)配體、腫瘤凋亡細(xì)胞引導(dǎo)配體、腫瘤缺氧引導(dǎo)配體、DNA嵌入劑、受體標(biāo)記、肽、核苷酸、器官特異性配體、抗微生物劑如抗生素或抗真菌劑、谷氨酸五肽或模擬葡萄糖的藥劑。模擬葡萄糖的藥劑也可稱為糖類”。
優(yōu)選的抗癌劑包括氨甲蝶呤、阿霉素、他莫昔芬、紫杉醇、托泊替堪、LHRH、絲裂霉素C、依托泊甙、tomudex、鬼臼毒素、米托蒽醌、喜樹堿、秋水仙堿、內(nèi)抑素(endostatin)、氟達(dá)拉濱和吉西他濱。優(yōu)選的腫瘤標(biāo)記包括PSA、ER、PR、AFP、CA-125、CA-199、CEA、干擾素、BRCA1、環(huán)磷酰胺(cytoxan)、p53、VEGF、整聯(lián)蛋白、內(nèi)抑素、HER-2/neu、反義標(biāo)記或單克隆抗體。預(yù)計任何其它已知的腫瘤標(biāo)記或任何單克隆抗體會有效地與本發(fā)明一起應(yīng)用。優(yōu)選的葉酸受體引導(dǎo)配體包括葉酸、氨甲蝶呤和tomudex。優(yōu)選的腫瘤凋亡細(xì)胞或腫瘤缺氧引導(dǎo)配體包括膜聯(lián)蛋白V、秋水仙堿、硝基咪唑、絲裂霉素或甲硝唑。優(yōu)選的抗微生物劑包括氨芐西林、阿莫西林、青霉素、頭孢菌素、克林霉素、慶大霉素、卡那霉素、新霉素、那他霉素、萘夫西林、利福平、四環(huán)素、萬古霉素、博來霉素和多西環(huán)素用于革蘭氏陽性和陰性細(xì)菌；以及兩性霉素B、金剛烷胺、制霉菌素、酮康唑、多粘菌素、阿昔洛韋和更昔洛韋用于真菌。優(yōu)選的模擬葡萄糖的藥劑，或糖類，包括新霉素、卡那霉素、慶大霉素、巴龍霉素、阿米卡星、妥布霉素、奈替米星、核糖霉素、西索米星、小諾米星(micromicin)、利維霉素、地貝卡星、異帕米星、阿司米星、氨基糖甙類、葡萄糖或葡糖胺。
在某些技術(shù)方案中，在乙二半胱氨酸與組織特異性配體之間必需包括接頭。通常接頭用于增加藥物在水溶液中的溶解度，并將藥物親和性的改變降至最低。盡管預(yù)計實際上任何會增加組合物水溶性的接頭均可與本發(fā)明一起應(yīng)用，接頭通常是聚-氨基酸，一種水溶性肽，或單一氨基酸。例如，當(dāng)組織特異性配體或藥物上的官能基團(tuán)是脂族-OH或酚-OH，如對于雌二醇、托泊替堪、紫杉醇或雷洛昔芬、依托泊甙，接頭可以是聚谷氨酸(MV約750至約15,000)、聚-天冬氨酸(MV約2,000至約15,000)、乙酸溴乙酯、谷氨酸或天冬氨酸。當(dāng)藥物官能基團(tuán)是脂族-NH2或芳族-NH2或肽時,如在阿霉素、絲裂霉素C、內(nèi)抑素、膜聯(lián)蛋白V、LHRH、奧曲肽和VIP中，接頭可以是聚谷氨酸(MV約750至約15,000)、聚-天冬氨酸(MV約2,000至約15,000)、谷氨酸或天冬氨酸。當(dāng)藥物官能基團(tuán)是羧酸或肽時，如在氨甲蝶呤或葉酸中，接頭可以是乙二胺或賴氨酸。
盡管優(yōu)選用于顯像的放射性核素是99mTc，預(yù)計其它放射性核素可以螯合至本發(fā)明的EC-組織特異性配體綴合物、或EC-藥物綴合物，特別用作治療。例如，其它有用的放射性核素是188Re、186Re、153Sm、166Ho、90Y、89Sr、67Ga、68Ga、111In、153Gd和59Fe。這些組合物可用于將治療性放射性核素送遞至體內(nèi)特定病變處，如乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌(使用例如186/188Re-EC-葉酸)和頭頸部癌癥(使用例如186/188Re-EC-硝基咪唑)。
本發(fā)明的具體技術(shù)方案包括99mTc-EC-膜聯(lián)蛋白V、99mTc-EC-秋水仙堿、99mTc-EC-硝基咪唑、99mTc-EC-谷氨酸五肽、99mTc-EC-甲硝唑、99mTc-EC-葉酸、99mTc-EC-氨甲蝶呤、99mTc-EC-tomudex、99mTc-EC-新霉素、99mTc-EC-卡那霉素、99mTc-EC-氨基糖甙類、(葡糖胺、EC-脫氧葡萄糖)、99mTc-EC-慶大霉素和99mTc-EC-妥布霉素。
本發(fā)明進(jìn)一步提供了合成放射性標(biāo)記的乙二半胱氨酸藥物綴合物或衍生物用于顯像或治療應(yīng)用的方法。所述方法包括獲得組織特異性配體，將配體與乙二半胱氨酸(EC)混合以得到EC-組織特異性配體衍生物，和將EC-組織特異性配體衍生物與放射性核素和還原劑混合以得到放射性核素標(biāo)記的EC-組織特異性配體衍生物。放射性核素通過N2S2螯合物與EC螯合。組織特異性配體直接或通過上述接頭綴合至EC的一條或兩條酸臂。還原劑優(yōu)選連二亞硫酸離子、錫離子或亞鐵離子。
本發(fā)明進(jìn)一步提供了標(biāo)記組織特異性配體用于顯像、治療應(yīng)用或用于診斷或判斷預(yù)后應(yīng)用的方法。所述標(biāo)記方法包括以下步驟獲得組織特異性配體，將組織特異性配體與乙二半胱氨酸(EC)混合以得到EC-配體藥物綴合物，和將藥物綴合物與99mTc在還原劑存在下反應(yīng)從而在乙二半胱氨酸與99mTc之間形成N2S2螯合物。
為了實現(xiàn)該技術(shù)方案的目的，組織特異性配體可以是任何上述的或本文討論的配體。還原劑可以是任何已知的還原劑，但優(yōu)選連二亞硫酸離子、錫離子或亞鐵離子。
在另一個技術(shù)方案中，本發(fā)明提供了哺乳動物體內(nèi)部位的顯像方法。所述顯像方法包括以下步驟施用有效診斷量的包含99mTc標(biāo)記的乙二半胱氨酸-組織特異性配體綴合物的組合物并檢測來自定位于該部位局部的99mTc的放射性信號。檢測步驟通常在將組合物引入哺乳動物體內(nèi)后約10分鐘至約4小時進(jìn)行。最優(yōu)選檢測步驟在將組合物注射入哺乳動物體內(nèi)后約1小時進(jìn)行。
在某些優(yōu)選的技術(shù)方案中，所述部位是感染、腫瘤、心臟、肺、腦、肝、脾、胰腺、小腸或任何其它器官。腫瘤或感染可位于哺乳動物體內(nèi)任何部位，但通常在乳腺、卵巢、前列腺、子宮內(nèi)膜、肺、腦或肝。所述部位也可以是葉酸-陽性的癌癥或雌激素-陽性的癌癥。
本發(fā)明還提供了用于制備放射性藥物制劑的試劑盒。所述試劑盒通常包括密封的小瓶或袋，或任何其它類型的合適容器，其中含有預(yù)定量的乙二半胱氨酸-組織特異性配體綴合物組合物和足量的還原劑以用99mTc標(biāo)記綴合物。在某些情況下，乙二半胱氨酸-組織特異性配體綴合物組合物在乙二半胱氨酸與組織特異性配體之間還包括接頭。組織特異性配體可以是特異性結(jié)合任何特定組織類型的任何配體，如本文所討論的配體。當(dāng)組合物中包括接頭時，其可以是如本文描述的任何接頭。
試劑盒的組分可以取任何適宜的形式，如液體、冷凍或干燥的形式。在優(yōu)選的技術(shù)方案中，所述試劑盒組分以凍干形式提供。所述試劑盒還可包括抗氧化劑和/或清除劑?？寡趸瘎┛梢允侨魏我阎目寡趸瘎┑珒?yōu)選維生素C。還可以有清除劑存在以結(jié)合剩余的放射性核素。最常見的商業(yè)化試劑盒含有葡庚糖酸鹽作為清除劑。但是，葡庚糖酸鹽不完全與通常的試劑盒成分發(fā)生反應(yīng)，剩余大約10-15％。該剩余的葡庚糖酸鹽會進(jìn)入腫瘤并使顯像結(jié)果偏斜。因此，本發(fā)明人優(yōu)選使用EDTA作為清除劑，因為其更廉價且反應(yīng)更完全。
本發(fā)明的另一方面是確定候選化合物治療特定腫瘤的潛在有效性的預(yù)測方法。目前，大多數(shù)腫瘤在化療中以“通常選用藥物”治療，而沒有任何指示該藥物是否對該特定腫瘤實際上有效，直到數(shù)月并花費(fèi)了大量金錢之后。本發(fā)明的顯像組合物可用于將特定藥物以標(biāo)記的EC-藥物綴合物的形式送遞至腫瘤部位，并且隨后在數(shù)小時內(nèi)使該部位顯像以確定是否為特定藥物。
在這方面，本發(fā)明的預(yù)測方法包括以下步驟確定哺乳動物體內(nèi)腫瘤的部位；獲得顯像組合物，其包括螯合至EC的放射性核素，而EC綴合至腫瘤特異性癌癥化療候選藥物；將組合物施用于哺乳動物身體并使該部位顯像以確定候選藥物對抗腫瘤的有效性。通常，顯像步驟在將組合物注射至哺乳動物體內(nèi)之后大約10分鐘至大約4小時內(nèi)進(jìn)行。優(yōu)選顯像步驟在將組合物注射至哺乳動物體內(nèi)之后大約1小時內(nèi)進(jìn)行。
在預(yù)測組合物中待綴合至EC的癌癥化療候選藥物可選自已知的癌癥化療藥物。這種藥物如表2所示。有許多已知對某些類型癌癥具有特異性的抗癌劑。但是，并不是每一種針對特定類型癌癥的抗癌劑在每個患者身上都有效。因此，本發(fā)明第一次提供了在花費(fèi)許多時間和金錢進(jìn)行治療之前確定候選藥物可能的有效性的方法。
本發(fā)明的另一個技術(shù)方案是用于制備閃爍顯像劑的試劑。本發(fā)明的試劑包括組織特異性配體，其在體內(nèi)對靶向部位的親和性足以產(chǎn)生可由閃爍法檢測到的影像，并且共價連接至99mTc結(jié)合部分。99mTc結(jié)合部分直接連到組織特異性配體上或通過上述接頭連到配體上。99mTc結(jié)合部分優(yōu)選是處于+4氧化態(tài)的99mTc與乙二半胱氨酸(EC)之間的N2S2螯合物。組織特異性配體直接或通過上述接頭共價連接至EC的一條或兩條酸臂。組織特異性配體可以是任何上述的配體。
附圖簡要說明下列附圖構(gòu)成本說明書的一部分并被包括在內(nèi)以進(jìn)一步證實本發(fā)明的某些方面。通過參考這些附圖中的一幅或多幅并結(jié)合本文呈現(xiàn)的具體實施方案的詳細(xì)描述將更好地理解本發(fā)明。


圖1.99mTc-EC-葉酸的合成方案。
圖2.99mTc-EC-MTX(氨甲蝶呤)的合成方案。
圖3.99mTc-EC-TDX(tomudex)的合成方案。
圖4.99mTc-EC和99mTc-EC-葉酸的生物分布研究。
圖5.對99mTc-EC-葉酸腫瘤/肌肉和腫瘤/血液計數(shù)比的阻斷研究。
圖6A和6B.注射99mTc-EC-葉酸組與注射99mTc-EC組相比腫瘤的閃爍顯像。
圖7.EC-MN(甲硝唑)的合成方案。
圖8A和圖8B.對于EC-NIM，圖8A顯示了合成方案，而圖8B顯示了對其結(jié)構(gòu)的1H-NMR證實結(jié)果。
圖9.對99mTc-EC-MN、[18F]FMISO和[131I]IMISO的生物分布研究(腫瘤/血液比)。
圖10.對99mTc-EC、[18F]FMISO和[131I]IMISO的生物分布研究(腫瘤/肌肉比)。
圖11A和11B.注射99mTc-EC-MN(圖11A)組與注射99mTc-EC(圖11B)組中腫瘤的閃爍顯像。
圖12.在注射99mTc-EC-MN之后1小時進(jìn)行的放射自顯影。
圖13.說明了99mTc-EC-NIM在狗血清樣本中的穩(wěn)定性。
圖14A和圖14B.說明了在大鼠中乳腺腫瘤對99mTc-EC-NIM vs.99mTc-EC的攝取(圖14A)以及與對照相比在用紫杉醇治療的大鼠中的攝取(圖14B)。
圖15A、圖15B、圖15C和圖15D.說明了在大鼠中卵巢腫瘤對99mTc-EC-NIM vs.99mTc-EC的攝取(圖15A)。在用紫杉醇治療的大鼠(圖15B)中的腫瘤攝取低于在未用紫杉醇治療的大鼠(圖15A)中的腫瘤攝取。還說明了在患有肉瘤的大鼠中99mTc-EC-NIM的腫瘤攝取。圖15C顯示了在用紫杉醇治療的攜帶肉瘤的大鼠中的腫瘤攝取，而圖15D顯示了在未用紫杉醇治療的大鼠中的腫瘤攝取。在用紫杉醇治療后99mTc-EC-NIM的攝取減少。
圖16.EC-GAP(五谷氨酸)的合成方案。
圖17.在注射99mTc-EC-GAP組中乳腺腫瘤的閃爍顯像。
圖18.在注射99mTc-EC-ANNEX V組中不同時間間隔乳腺腫瘤的閃爍顯像。
圖19A和圖19B.在攜帶卵巢腫瘤組中比較在紫杉醇治療之前(圖19A)和之后(圖19B)攝取99mTc-EC-ANNEX V的差異。
圖20A和圖20B.在攜帶肉瘤組中比較在紫杉醇治療之前(圖20A)和之后(圖20B)攝取99mTc-EC-ANNEX V的差異。
圖21.EC-COL(秋水仙堿)的合成方案。
圖22.說明在EC-COL合成中沒有觀察到降解產(chǎn)物。
圖23.對于99mTc-EC-COL，腫瘤/肌肉和腫瘤/血液之比對時間的函數(shù)。
圖24.對于99mTc-EC，腫瘤/肌肉和腫瘤/血液之比對時間的函數(shù)。
圖25.在攜帶乳腺腫瘤的大鼠中用99mTc-EC-COL進(jìn)行的體內(nèi)顯像研究。
圖26.在攜帶乳腺腫瘤的大鼠中用99mTc-EC進(jìn)行的體內(nèi)顯像研究。
圖27.在注射99mTc-EC-COL vs.99mTc-EC之后計算機(jī)勾畫出的感興趣區(qū)域。
圖28.對患有中風(fēng)的59歲男性患者用99mTc-EC-MN進(jìn)行的SPECT。注射后1小時取的影像。
圖29.與圖28相同的患者的MRI T1加權(quán)像。
圖30.73歲男性患者中風(fēng)后1天注射99mTc-EC-MN后1小時的SPECT。
圖31.與圖30相同的73歲患者中風(fēng)后12天注射99mTc-EC-MN后1小時的SPECT。
圖32.與圖30相同的73歲男性中風(fēng)患者中風(fēng)后1天的CT。
圖33.與圖32相同的73歲男性中風(fēng)患者中風(fēng)后12天的CT。注意，使用CT顯像在第1天與第12天之間沒有顯著差異。
圖34.患有中風(fēng)的72歲男性患者注射99mTc-EC-MN后1小時的SPECT。
圖35.與圖34相同的72歲中風(fēng)患者的CT。注意CT影像如何夸大了病變大小。
圖36.99mTc-EC-新霉素的合成方案。
圖37A.攜帶乳腺腫瘤的大鼠施用99mTc-EC和99mTc-EC-新霉素(100μCi/大鼠，iv.)后的閃爍顯像顯示注射后0.5-4小時腫瘤可清楚顯現(xiàn)。
圖37B.乳腺癌患者用99mTc-EC-新霉素(30mCi，iv.)的閃爍乳房攝影。注射后2小時取的影像。
圖38A.EC的1H-NMR。
圖38B.新霉素的1H-NMR。
圖38C.EC-新霉素的1H-NMR。
圖39A和圖39B.EC-新霉素的質(zhì)譜分析(M+1112.55)。
圖40A.EC的UV波長掃描。
圖40B.新霉素的UV波長掃描。
圖40C.EC-新霉素的UV波長掃描。
圖41.99mTc-EC-新霉素的放射-TLC分析。
圖42.99mTc-EC-新霉素的HPLC分析(放射性探測器)。
圖43.99mTc-EC-新霉素的HPLC分析(UV 254nm)。
圖44.18F-FDG的HPLC分析(放射性探測器)。
圖45.18F-FDG的HPLC分析(UV 254nm)。
圖46.在肺癌細(xì)胞系中一系列99mTc-EC-藥物綴合物的體外細(xì)胞攝取測定。99mTc-EC-新霉素在所測試的藥劑中顯示出最高的攝取。
圖47.葡萄糖對細(xì)胞(A549)攝取99mTc-EC-新霉素和18F-FDG的影響。
圖48A和圖48B.葡萄糖對細(xì)胞(H1299)攝取99mTc-EC-新霉素和18F-FDG的影響顯示為藥物攝取百分比(圖48A)和伴隨葡萄糖負(fù)荷的變化百分比(圖48B)。
圖49.99mTc-EC-葡糖胺的合成方案。
圖50.葡萄糖的己糖激酶測定。
圖51.葡糖胺的己糖激酶測定。
圖52.EC-葡糖胺的己糖激酶測定。
圖53.EC-GAP-葡糖胺的己糖激酶測定。
圖54.99mTc-EC-GAP-葡糖胺的合成方案。
圖55A、圖55B、圖55C.在肺癌細(xì)胞系(A549)中99mTc-EC(圖55A)、99mTc-EC-脫氧葡萄糖-GAP(圖55B)和18F-FDG(圖55C)的體外細(xì)胞攝取測定。99mTc-EC-DG與18F-FDG相比顯示出相似的攝取。
圖56.在攜帶乳腺腫瘤的大鼠中99mTc-EC-GAP的腫瘤/組織的計數(shù)密度比。
圖57.在乳腺癌細(xì)胞系(13762)中注射后2小時伴隨葡萄糖負(fù)荷的18PDG的體外細(xì)胞攝取。
圖58.在攜帶乳腺腫瘤的小鼠中99mTc-EC-新霉素的體內(nèi)組織攝取。
圖59.99mTc-EC-脫氧葡萄糖的合成方案。
圖60.EC-脫氧葡萄糖的質(zhì)譜分析。
圖61.EC-脫氧葡萄糖(EC-DG)的1H-NMR。
圖62.葡糖胺的1H-NMR。
圖63.99mTc-EC-DG的放射-TLC分析。
圖64.99mTc-EC-脫氧葡萄糖和99mTc-EC的HPLC分析(放射性探測器)。
圖65.99mTc-EC-脫氧葡萄糖和99mTc-EC的HPLC分析(放射性探測器，混合的)。
圖66.葡萄糖的己糖激酶測定。
圖67.FDG的己糖激酶測定。
圖68.EC-DG的己糖激酶測定。
圖69.在肺癌細(xì)胞系(A549)中99mTc-EC-脫氧葡萄糖、99mTc-EC和18F-FDG的體外細(xì)胞攝取測定。99mTc-EC-DG與18F-FDG相比顯示出相似的攝取。
圖70.d-和1-葡萄糖對乳腺細(xì)胞(13762細(xì)胞系)攝取99mTc-EC-DG的影響。
圖71.d-和1-葡萄糖對乳腺細(xì)胞(13762細(xì)胞系)攝取18F-FDG的影響。
圖72.d-和1-葡萄糖對肺細(xì)胞(A549細(xì)胞系)攝取18F-FDG的影響。
圖73.d-和1-葡萄糖對肺細(xì)胞(A549細(xì)胞系)攝取99mTc-EC-DG的影響。
圖74.由葡糖胺和EC-DG(1.2mmol/kg，i.v.)誘導(dǎo)的體內(nèi)血糖水平的效應(yīng)。
圖75.由FDG(1.2和1.9mmol/kg，i.v.)和胰島素誘導(dǎo)的體內(nèi)血糖水平的效應(yīng)。
圖76.在攜帶乳腺腫瘤的大鼠中99mTc-EC-脫氧葡萄糖的腫瘤/組織計數(shù)密度比。
圖77.99mTc-EC-脫氧葡萄糖在攜帶乳腺腫瘤的大鼠中的體內(nèi)生物分布。
圖78.在攜帶肺腫瘤的小鼠中99mTc-EC-脫氧葡萄糖的體內(nèi)組織攝取。
圖79.在攜帶肺腫瘤的小鼠中99mTc-EC-新霉素的體內(nèi)組織攝取。
圖80.在攜帶肺腫瘤的小鼠中18F-FDG的體內(nèi)組織攝取。
圖81.攜帶乳腺腫瘤的大鼠施用99mTc-EC和99mTc-EC-脫氧葡萄糖(100μCi/大鼠，iv.)后的平面顯像顯示注射后0.5-4小時腫瘤可清楚顯現(xiàn)。
圖82A.惡性星形細(xì)胞瘤患者的MRI。
圖82B.惡性星形細(xì)胞瘤患者用99mTc-EC-DG進(jìn)行的SPECT。
圖83A.出血性星形細(xì)胞瘤患者的MRI。
圖83B.惡性星形細(xì)胞瘤患者用99mTc-EC-DG進(jìn)行的SPECT。
圖84A.良性腦膜瘤患者的MRI。
圖84B.良性腦膜瘤患者用99mTc-EC-DG進(jìn)行的SPECT顯示沒有局部增強(qiáng)的攝取。
圖85A.肺TB患者的CT。
圖85B.TB患者用99mTc-EC-DG進(jìn)行的SPECT顯示沒有局部增強(qiáng)的攝取。
圖86A.肺癌患者的CT。
圖86B.肺癌患者的99mTc-EC-DG全身顯像。
圖86C.肺癌患者用99mTc-EC-DG進(jìn)行的SPECT，腫瘤顯示局部增強(qiáng)攝取。
示例技術(shù)方案的描述在核醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，通過檢測少量體內(nèi)施用的放射性標(biāo)記的示蹤化合物(稱作放射性示蹤劑和放射性藥物)對某些病理狀況進(jìn)行定位，或估計它們的范圍。檢測這些放射性藥物的方法通常稱為顯像或放射顯像方法。
在放射顯像中，放射性標(biāo)記是發(fā)射γ-射線的放射性核素，并且用γ-射線探測照相機(jī)將放射性示蹤劑定位(這一過程經(jīng)常稱為γ閃爍照相)。由于選擇放射性示蹤劑在病變部位局限(稱為正對比)，或選擇放射性示蹤劑特異性地不在這樣的病變部位局限(稱為負(fù)對比)，因此顯像的部位可以檢測到。
已知多種放射性核素可用于放射顯像，包括67Ga、99mTc、111In、123I、125I、169Yb或186Re。由于更好的顯像特性和更低的價格，曾嘗試在可能時用相應(yīng)的99mTc標(biāo)記的化合物替換123I、131I、67Ga和111In標(biāo)記的化合物。由于良好的物理特性以及極低的價格($0.21/mCi)，已優(yōu)選用99mTc標(biāo)記放射性藥物。盡管有報道DTPA-藥物綴合物可用99mTc有效地標(biāo)記(Mathias等，1997)，DTPA部分與99mTc螯合不如與111In螯合穩(wěn)定(Goldsmith，1997)。
為了在人體中實現(xiàn)最佳放射顯像，必須考慮多個因素。為了使檢測的效率達(dá)到最大，優(yōu)選發(fā)射γ能量在100-200ke V范圍內(nèi)的放射性核素。為了使患者吸收的照射劑量最低，放射性核素的物理半衰期應(yīng)該短至顯像過程所允許的程度。為了使檢查能在任何一天和在一天中的任何時間進(jìn)行，在臨床地點總能得到放射性核素來源是有利的。99mTc是優(yōu)選的放射性核素，因為它發(fā)射的γ射線為140ke V，物理半衰期為6小時，并且容易在現(xiàn)場用鉬-99/锝-99m發(fā)生器得到。
已知雙-氨基乙硫醇四齒配位體，也稱作二氨基二硫醇化合物，在氧代锝基團(tuán)與兩個硫醇硫原子和兩個胺氮原子有效結(jié)合的基礎(chǔ)之上形成非常穩(wěn)定的Tc(V)O絡(luò)合物(Davison等，1980；1981；Verbruggen等，1992)。99mTc-L，L-乙二半胱氨酸(99mTc-EC)是最新的成功的N2S2螯合物的例子(Verbruggen等，1992；Van Nerom等，1993；Surma等，1994)。EC是一種新的腎顯像劑，其可以容易并有效地用99mTc標(biāo)記，具有高的放射化學(xué)純度和穩(wěn)定性，并通過主動小管運(yùn)輸從腎排泄(Verbruggen等，1992；Van Nerom等，1993；Surma等，1994；Verbruggen等，1990；Van Nerom等，1990；Jamar等，1993)。EC的其它應(yīng)用可以是與鎵-68(一種正電子發(fā)射體，t1/2-68分鐘)螯合用于PET，以及與釓、鐵或錳螯合用于磁共振成象(MRI)。
本發(fā)明采用99mTc-EC作為標(biāo)記劑以將配體引導(dǎo)到特定的組織類型用于顯像。將組織引導(dǎo)配體與EC綴合的優(yōu)點在于組織引導(dǎo)配體的特異性結(jié)合性質(zhì)將放射性信號濃聚到感興趣的區(qū)域。盡管預(yù)計使用99mTc-EC作為標(biāo)記策略可以對實際上任何類型的化合物都有效，在此提供某些建議使用的優(yōu)選配體用于舉例說明目的。預(yù)計本發(fā)明的99mTc-EC-藥物綴合物不僅可用于腫瘤顯像，還可以用于其它組織特異性病癥的顯像，如感染、缺氧組織(中風(fēng))、心肌梗塞、凋亡細(xì)胞、阿爾茲海默氏病和子宮內(nèi)膜異位。
在現(xiàn)有技術(shù)中已報道了放射性標(biāo)記的蛋白和肽(Ege等，美國專利4,832,940，Abrams等，1990；Bakker等，1990；Goldsmith等，1995，1997；Olexa等，1982；Ranby等，1988；Hadley等，1988；Lee等，1989；Sobel等，1989；Stuttle，1990；Maraganore等，1991；Rodwell等，1991；Tubis等，1968；Sandrehagen，1983)。但是，在本發(fā)明之前，除了作為二乙酯(Kabasakal，2000)以外，99mTc-EC未與任何配體聯(lián)合使用過。EC的二乙酯被用作腦血流藥劑(Kikukawa等，2000)。
盡管對于放射顯像是最優(yōu)的，99mTc的化學(xué)性質(zhì)不如其它元素研究得那么透徹，并且因此用99mTc進(jìn)行放射性標(biāo)記的方法不是很多。通常得到的99mTc為99mTc高锝酸鹽(TcO4-；锝處于+7氧化態(tài))，通常來自鉬-99/锝-99m發(fā)生器。然而，高锝酸鹽與其它化合物結(jié)合得不好。因此，為了對化合物進(jìn)行放射性標(biāo)記，99mTc高锝酸鹽必須轉(zhuǎn)變?yōu)榱硪环N形式。由于锝在水溶液中不形成穩(wěn)定的離子，它必須以配位化合物的形式處于這種溶液中，所述配位化合物具有的動力學(xué)和熱力學(xué)穩(wěn)定性足以防止99mTc的分解和由此轉(zhuǎn)變?yōu)椴蝗苄远趸交蜃兓馗唢剿猁}。
為了實現(xiàn)放射性標(biāo)記的目的，對于99mTc絡(luò)合物而言特別有利的是形成螯合物，其中所有圍繞锝離子周圍的供體基團(tuán)由單一螯合配體提供-在這種情況下是乙二半胱氨酸。這使得螯合的99mTc直接或通過乙二半胱氨酸與配體之間的單一接頭共價結(jié)合至組織特異性配體。
锝具有多種氧化態(tài)+1，+2，+4，+5，+6和+7。當(dāng)它處于+1氧化態(tài)時，稱為TcMIBI。TcMIBI的產(chǎn)生必須伴有加熱反應(yīng)(Seabold等，1999)。為了本發(fā)明的目的，Tc處于+4氧化態(tài)很重要。該氧化態(tài)對與EC形成N2S2螯合物是理想的。因此，在形成放射性锝與本發(fā)明的藥物綴合物的絡(luò)合物的過程之中，锝絡(luò)合物，優(yōu)選99mTc高锝酸鹽，與本發(fā)明的藥物綴合物在還原劑存在下反應(yīng)。
用于本發(fā)明的優(yōu)選的還原劑是氯化錫(SnCl2)形式的錫離子，以將Tc還原到其+4氧化態(tài)。但是，預(yù)計其它還原劑，如連二硫酸離子或亞鐵離子也可以用于本發(fā)明。還預(yù)計所述還原劑可以是固相還原劑。還原劑的量可以很重要，因為必需避免形成膠體。優(yōu)選地，例如，每約100至約300mCi的Tc高锝酸鹽使用約10至約100μg SnCl2。最優(yōu)選的量是每約200mCi的Tc高锝酸鹽和約2ml鹽水使用約0.1mg SnCl2。這通常產(chǎn)生足夠5個患者使用的Tc-EC-組織特異性配體綴合物。
通常也很重要在組合物中包含抗氧化劑，以防止乙二半胱氨酸的氧化。優(yōu)選用于本發(fā)明的抗氧化劑是維生素C(抗壞血酸)。但是，預(yù)計也可以使用其它抗氧化劑，如生育酚、吡哆素、硫胺素或蕓香苷。
一般來說，用于本發(fā)明的配體會具有能與EC在一條或兩條酸臂上綴合的氨基或羥基基團(tuán)。如果不能得到氨基或羥基基團(tuán)(例如酸官能團(tuán))，理想的配體使用本發(fā)明的方法仍可以綴合至EC并用99mTc標(biāo)記，這是通過添加一個接頭實現(xiàn)的，如乙二胺、氨丙醇、二亞乙基三胺、天冬氨酸、聚天冬氨酸、谷氨酸、聚谷氨酸或賴氨酸。預(yù)計用于本發(fā)明的配體包括但不限于血管發(fā)生/抗血管發(fā)生配體、DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑、糖酵解標(biāo)志、抗代謝配體、凋亡/缺氧配體、DNA嵌入劑、受體標(biāo)記、肽、核苷酸、抗微生物劑如抗生素或抗真菌劑、器官特異性配體和糖類或模擬葡萄糖的藥劑。
EC本身是水溶性的。本發(fā)明的EC-藥物綴合物也必需是水溶性的。用于本發(fā)明的許多配體是水溶性的，或者當(dāng)與EC綴合時形成水溶性化合物。然而，如果組織特異性配體不是水溶性的，則可以使用會增加配體溶解性的接頭。接頭可以連至脂族醇或芳族醇、胺或肽或連至羧酸或肽。接頭可以是聚氨基酸(肽)或氨基酸如谷氨酸、天冬氨酸或賴氨酸。表1列出了對于特定藥物官能團(tuán)理想的接頭。
表1
實例A.雌二醇、托泊替堪、紫杉醇、雷洛昔芬、依托泊甙B.阿霉素、絲裂霉素C、內(nèi)抑素、膜聯(lián)蛋白V、LHRH、奧曲肽、VIPC.氨甲蝶呤、葉酸還預(yù)計本發(fā)明的EC-組織特異性配體藥物綴合物可以螯合至其它放射性核素并用于放射性核素治療。通常認(rèn)為實際上任何α、β-輻射體、γ-輻射體，或β、γ-輻射體均可用于本發(fā)明。優(yōu)選的β、γ-輻射體包括166Ho、188Re、186Re、153Sm和89Sr。優(yōu)選的β-輻射體包括90Y和225Ac。優(yōu)選的γ-輻射體包括67Ga、68Ga、64Cu、62Cu和111In。優(yōu)選的α-輻射體包括211At和212Bi。還預(yù)計順磁物質(zhì)，如Gd、Mn和Fe可與EC螯合用于本發(fā)明中。
絡(luò)合物和用于制備這種絡(luò)合物的資料以試劑盒形式方便地提供，包括密封的小瓶，其中含有預(yù)定量的待標(biāo)記的本發(fā)明的EC-組織特異性配體綴合物，和足量的還原劑以用99mTc標(biāo)記綴合物。根據(jù)本發(fā)明的99mTc標(biāo)記的閃爍顯像劑可以通過將適量的99mTc或99mTc絡(luò)合物加入含有EC-組織特異性配體綴合物和還原劑的小瓶并在以下實施例1中所描述的條件下反應(yīng)而制備。所述試劑盒還可以含有常規(guī)藥物添加物質(zhì)，如可藥用鹽以調(diào)節(jié)滲透壓、緩沖劑、防腐劑、抗氧化劑等等。所述試劑盒的組分可以是液體、冷凍或干燥的形式。在優(yōu)選的技術(shù)方案中，試劑盒組分以凍干形式提供。
本發(fā)明提供的放射性標(biāo)記的試劑或綴合物具有適量的放射性。在形成99mTc放射性絡(luò)合物的過程中，通常優(yōu)選形成放射性絡(luò)合物溶液中的放射性濃度為每毫升大約0.01微居里(mCi)至大約300mCi。
本發(fā)明提供的99mTc標(biāo)記的閃爍顯像劑可用于顯現(xiàn)哺乳動物體內(nèi)的部位。根據(jù)本發(fā)明，99mTc標(biāo)記的閃爍顯像劑以單一單位注射劑量給予。在進(jìn)行放射性標(biāo)記之后，可以使用本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的任何常用載體，如無菌鹽水溶液或血漿，來制備可注射溶液以根據(jù)本發(fā)明對各種器官、腫瘤等進(jìn)行診斷性顯像。一般來說，給予的單位劑量具有約0.01mCi至約300mCi，優(yōu)選10mCi至約200mCi的放射性。以單位劑量注射的溶液從大約0.01mL至大約10mL。靜脈內(nèi)給藥后，可以進(jìn)行器官或腫瘤的體內(nèi)顯像，如果期望，在將放射性標(biāo)記的試劑引入患者體內(nèi)后數(shù)小時或甚至更長時間內(nèi)發(fā)生。在大多數(shù)情況下，施用劑量中會有足量在1小時的約0.1之內(nèi)積聚在待顯像的區(qū)域以允許拍攝閃爍照片。根據(jù)本發(fā)明可以采用任何常規(guī)的用于診斷或預(yù)測目的的閃爍顯像方法。
本發(fā)明的99mTc-EC標(biāo)記策略還可以用于預(yù)測目的。預(yù)計EC可以綴合至已知的癌癥化療選用藥物，如表2中所列的那些。然后這些EC-藥物綴合物可以用99mTc放射性標(biāo)記，并施用于腫瘤患者。標(biāo)記的EC-藥物綴合物將特異性地與腫瘤結(jié)合?？梢赃M(jìn)行顯像以確定該癌癥化療藥物對抗該特定患者的特定腫瘤的有效性。以這種方式，醫(yī)生可以迅速地確定遵循哪種治療模式，哪種化療藥物將會最有效。這對于包括選擇藥物并施用-輪化療的現(xiàn)有方法來說是顯著的改進(jìn)，現(xiàn)有方法在能確定藥物有效性之前將花費(fèi)患者數(shù)月時間和大量金錢。
本發(fā)明提供的99mTc標(biāo)記的EC-組織特異性配體綴合物和絡(luò)合物可以在任何常規(guī)的靜脈內(nèi)注射用介質(zhì)中進(jìn)行靜脈內(nèi)給藥，如鹽水介質(zhì)，或血漿介質(zhì)。這種介質(zhì)還可以含有常規(guī)的藥物添加物質(zhì)，如可藥用鹽以調(diào)節(jié)滲透壓、緩沖劑、防腐劑、抗氧化劑等等。優(yōu)選的介質(zhì)是生理鹽水和血漿。
下面更具體地討論具體的優(yōu)選的尋靶策略。
腫瘤葉酸受體尋靶放射性標(biāo)記的配體，如噴曲肽和血管活性腸肽，與細(xì)胞受體結(jié)合，其中某些受體在腫瘤細(xì)胞上過量表達(dá)(Britton和Granowska，1996；Krenning等，1995；Reubi等，1992；Goldsmith等，1995；Virgolini等，1994)。由于這些配體不具有免疫原性并從血漿中迅速被清除出去，與抗體顯像相比受體顯像似乎更具前景。
葉酸以及抗葉酸劑如氨甲蝶呤除了經(jīng)典的還原-葉酸載體系統(tǒng)之外通過高親和性葉酸受體(糖基磷脂酰肌醇-連接的膜葉酸-結(jié)合蛋白)進(jìn)入細(xì)胞(Westerhof等，1991；Orr等，1995；Hsueh和Dolnick，1993)。葉酸受體(FRs)在許多腫瘤細(xì)胞類型上過量表達(dá)(如肺、乳腺、卵巢、宮頸、結(jié)直腸、鼻咽、腎的腺癌，惡性黑素瘤和室管膜瘤)，但基本上僅在幾種正常分化組織上表達(dá)(如脈絡(luò)膜、胎盤、甲狀腺和腎)(Orr等，1995；Weitman等，1992a；Campbell等，1991；Weitman等，1992b；Holm等，1994；Ross等，1994；Franklin等，1994；Weitman等，1994)。FRs已被用于將葉酸-綴合的蛋白毒素、藥物/反義寡核苷酸和脂質(zhì)體遞送至過量表達(dá)葉酸受體的腫瘤細(xì)胞中(Ginobbi等，1997；Leamon和Low，1991；Leamon和Low，1992；Leamon等，1993；Lee和Low，1994)。此外，含有與抗T細(xì)胞受體抗體連接的抗FR抗體的雙特異性抗體已被用于引導(dǎo)T細(xì)胞至FR-陽性的腫瘤細(xì)胞，并且目前正處于對卵巢腺癌的臨床試驗中(Canevari等，1993；Bolhuis等，1992；Patrick等，1997；Coney等，1994；Kranz等，1995)。類似地，可以利用該特性開發(fā)放射性標(biāo)記的葉酸-綴合物，如67Ga-去鐵胺-葉酸和111In-DTPA-葉酸，用于葉酸受體陽性腫瘤的顯像(Mathias等，1996；Wang等，1997；Wang等，1996；Mathias等，1997b)。對這些藥劑進(jìn)行的有限的體外和體內(nèi)研究的結(jié)果提示葉酸受體會是腫瘤顯像的潛在靶。在本發(fā)明中，發(fā)明人開發(fā)了一系列新的葉酸受體配體。這些配體是99mTc-EC-葉酸、99mTc-EC-氨甲蝶呤(99mTc-EC-MTX)、99mTc-EC-tomudex(99mTc-EC-TDX)。
腫瘤缺氧尋靶腫瘤細(xì)胞在氧存在下比缺氧情況下對常規(guī)放射更為敏感；甚至在腫瘤中小百分比的缺氧細(xì)胞也會限制對放射的反應(yīng)(Hall，1998；Bush等，1978；Gray等，1953)。缺氧抗輻射性在許多動物腫瘤中已得到了證實，但僅在少數(shù)人類腫瘤類型中得到證實(Dische，1991；Gatenby等，1988；Nordsmark等，1996)。在人類腫瘤中缺氧的發(fā)生，在大多數(shù)情況下，是從組織學(xué)發(fā)現(xiàn)和動物腫瘤研究中得出的。在體內(nèi)證實缺氧需要用氧電極對組織進(jìn)行測量，這些技術(shù)的侵入性限制了其臨床應(yīng)用。
米索硝唑(MISO)是一種缺氧細(xì)胞敏化物，用不同的放射性同位素(如18F、123I、99mTc)標(biāo)記MISO可用于通過PET或平面閃爍顯像區(qū)分缺氧但具有代謝活性的腫瘤與供氧良好有活性的腫瘤。[18F]氟米索硝唑(FMISO)已用于PET來評估腫瘤缺氧。近來的研究已顯示PET，具有通過[18F]FMISO監(jiān)測細(xì)胞氧含量的能力，非常有潛力用于預(yù)測腫瘤對放射的反應(yīng)(Koh等，1992；Valk等，1992；Martin等，1989；Rasey等，1989；Rasey等，1990；Yang等，1995)。PET具有更高的分辨率而無需校準(zhǔn)，但是在臨床中使用PET同位素的成本讓人卻步。盡管用碘標(biāo)記MISO是一種選擇，但觀察到在甲狀腺組織中的高攝取。所以，期望開發(fā)用于平面閃爍顯像的化合物，使得在大多數(shù)主要醫(yī)學(xué)機(jī)構(gòu)中所用同位素不那么昂貴并且易于獲得。在本發(fā)明中，發(fā)明人呈現(xiàn)了99mTc-EC-2-硝基咪唑和99mTc-EC-甲硝唑的合成，并證實其作為腫瘤缺氧標(biāo)志的潛在用途。
癌癥的肽顯像肽和氨基酸已成功地用于多種類型腫瘤的顯像中(Wester等，1999；Coenen和Stocklin，1988；Raderer等，1996；Lambert等，1990；Bakkef等，1990；Stella和Mathew，1990；Butterfield等，1998；Piper等，1983；Mochizuki等，Dickinson和Hiltner，1981)?；诠劝彼岬碾囊驯挥米靼┌Y治療的藥物載體(Stella和Mathew，1990；Butterfield等，1998；Piper等，1983；Mochizuki等，1985；Dickinson和Hiltner，1981)。已知葉酸的谷氨酸部分在體內(nèi)降解并形成聚谷氨酸。然后聚谷氨酸再綴合至葉酸以形成葉酰聚谷氨酸，其參與葡萄糖代謝。標(biāo)記谷氨酸肽可用于區(qū)分腫瘤的惡性。在本發(fā)明中，發(fā)明人報道了EC-谷氨酸五肽的合成，并評價了其在腫瘤顯像中的潛在用途。
腫瘤凋亡細(xì)胞顯像凋亡發(fā)生在用化療和放射治療癌癥的過程中(Lennon等，1991；Abrams等，1990；Blakenberg等，1998；Blakenberg等，1999；Tait和Smith，1991)。已知膜聯(lián)蛋白V結(jié)合磷脂酰絲氨酸，后者由腫瘤凋亡細(xì)胞過量表達(dá)(Blakenberg等，1999；Tait和Smith，1991)。通過膜聯(lián)蛋白V評估凋亡可用于評價治療的效力，如疾病進(jìn)展或消退。在本發(fā)明中，發(fā)明人合成了99mTc-EC-膜聯(lián)蛋白V(EC-ANNEX)并評價了其在腫瘤顯像中的潛在用途。
腫瘤血管發(fā)生顯像血管發(fā)生對腫瘤生長和發(fā)生轉(zhuǎn)移負(fù)有部分責(zé)任?？褂薪z分裂化合物是抗血管發(fā)生的，并且已知其作為抗癌藥物的潛在用途。這些化合物在細(xì)胞周期的有絲分裂期間抑制細(xì)胞分裂。在細(xì)胞功能如細(xì)胞分裂、細(xì)胞運(yùn)動、分泌、纖毛和鞭毛運(yùn)動、胞內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)和維持細(xì)胞形狀的生物化學(xué)過程期間，微管參與其中。已知抗有絲分裂化合物與微管蛋白高親和力結(jié)合，破壞微管組裝并引起增殖細(xì)胞有絲分裂停滯。因此，認(rèn)為抗有絲分裂化合物可作為微管抑制劑或作為紡錘體毒藥(Lu，1995)。
許多類抗有絲分裂化合物通過與微管蛋白結(jié)合控制微管組裝-解裝配(Lu，1995；Goh等，1998；Wang等，1998；Rowinsky等，1990；Imbert，1998)。諸如類秋水仙堿的化合物與微管蛋白在秋水仙堿結(jié)合位點上相互作用并抑制微管組裝(Lu，1995；Goh等，1998；Wang等，1998)。在類秋水仙堿中，秋水仙堿是用于治療預(yù)防急性痛風(fēng)的有效抗炎藥物。秋水仙堿還用于慢性粒細(xì)胞白血病。雖然類秋水仙堿有效對抗某些類型的腫瘤生長，由于不能分開治療效果和毒性作用，其臨床治療潛力受到限制(Lu，1995)。但是，秋水仙堿可用作生化工具評價細(xì)胞功能。在本發(fā)明中，發(fā)明人開發(fā)了99mTc-EC-秋水仙堿(EC-COL)用于評價微管功能的生化過程。
腫瘤凋亡細(xì)胞顯像凋亡發(fā)生在用化療和放射治療癌癥的過程中。已知膜聯(lián)蛋白V結(jié)合磷脂酰絲氨酸，后者由腫瘤凋亡細(xì)胞過量表達(dá)。通過膜聯(lián)蛋白V評估凋亡可用于評價治療的效力，如疾病進(jìn)展或消退。因此開發(fā)了99mTc-EC-膜聯(lián)蛋白V(EC-ANNEX)。
腫瘤缺氧顯像在放射治療之前通過顯像方式評價腫瘤缺氧會提供選擇患者用放射敏化劑或生物還原藥物(如替拉扎明、絲裂霉素C)治療的合理方法。這種對患者的選擇可更準(zhǔn)確地治療缺氧腫瘤患者。此外，腫瘤抑制基因(P53)與多重耐藥相關(guān)。為了將顯像結(jié)果與P53過量表達(dá)相聯(lián)系，在化療之前和之后的組織病理學(xué)檢查可用于隨訪腫瘤治療反應(yīng)。開發(fā)了99mTc-EC-2-硝基咪唑和99mTc-EC-甲硝唑。
腫瘤血管發(fā)生顯像血管發(fā)生對腫瘤生長和發(fā)生轉(zhuǎn)移負(fù)有部分責(zé)任?？褂薪z分裂化合物是抗血管發(fā)生的，并且已知其作為抗癌藥物的潛在用途。這些化合物在細(xì)胞周期的有絲分裂期間抑制細(xì)胞分裂。在細(xì)胞功能如細(xì)胞分裂、細(xì)胞運(yùn)動、分泌、纖毛和鞭毛運(yùn)動、胞內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)和維持細(xì)胞形狀的生物化學(xué)過程期間，微管參與其中。已知抗有絲分裂化合物與微管蛋白高親和力結(jié)合，破壞微管組裝并引起增殖細(xì)胞有絲分裂停滯。因此，認(rèn)為抗有絲分裂化合物可作為微管抑制劑或作為紡錘體毒藥。已知秋水仙堿，一種有效的抗血管發(fā)生劑，抑制微管聚合并使細(xì)胞停滯在分裂中期。秋水仙堿(COL)可用作生化工具評價細(xì)胞功能。由此開發(fā)了99mTc-EC-COL。
中風(fēng)引起的缺氧的顯像盡管腫瘤細(xì)胞或多或少是缺氧的，需要氧探針來測量其壓力。為了模擬缺氧條件，發(fā)明人對11名中風(fēng)患者用99mTc-EC-甲硝唑(99mTc-EC-MN)進(jìn)行了顯像。甲硝唑是腫瘤缺氧標(biāo)志。在中風(fēng)區(qū)域的組織由于缺乏氧氣而變?yōu)槿毖酢Ｔ谧⑸?9mTc-EC-MN后1和3小時進(jìn)行SPECT顯像。所有這些顯像研究都明確定位了病變。CT未很好或準(zhǔn)確地顯示病變。在某些病例中MRI和CT夸大了病變大小。以下是選自3名患者的病例。
病例1. 59歲男性患者左基底節(jié)中風(fēng)。SPECT99mTc-EC-MN在注射后1小時確定了病變(圖28)，其對應(yīng)于MRI T1加權(quán)像(圖29)。
病例2. 73歲男性患者左大腦中動脈(MCA)供血區(qū)域中風(fēng)。在第1天和第12天(圖30和31)注射后1小時獲得了SPECT99mTc-EC-MN。在第12天病變顯示顯著增強(qiáng)的攝取。CT顯示在病變處廣泛的腦出血。在第1天和第12天(圖32和33)之間沒有觀察到顯著的差異。上述發(fā)現(xiàn)表明患者癥狀由于組織生存力(從無氧至低氧)而改善。SPECT99mTc-EC-MN提供了比CT顯像更好的功能信息。
病例3. 72歲男性患者右MCA和PCA區(qū)域中風(fēng)。SPECT99mTc-EC-MN在注射后1小時確定了病變(圖34)。CT夸大了病變大小(圖35)。
腫瘤糖酵解尋靶放射性標(biāo)記的配體，如多糖(新霉素、卡那霉素、妥布霉素)和單糖(葡糖胺)與細(xì)胞葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白結(jié)合，然后磷酸化，其在腫瘤細(xì)胞上過量表達(dá)(Roger等，1968；Fanciulli等，1994；Popovici等，1971；Jones等，1973；Hermann等，2000)。多糖(新霉素、卡那霉素、妥布霉素)和單糖(葡糖胺)誘導(dǎo)的葡萄糖水平可以被胰島素抑制(Harada等，1995；Moller等，1991；Offield等，1996；Shankar等，1998；Yoshino等，1999；Villevalois-Cam等，2000)。由于這些配體不具有免疫原性并且從血漿中迅速清除，代謝顯像似乎比抗體顯像更有前途。
下列實施例是為了展示本發(fā)明的優(yōu)選技術(shù)方案。本領(lǐng)域的技術(shù)人員應(yīng)該理解在以下實施例中公開的技術(shù)代表發(fā)明人發(fā)現(xiàn)在實施本發(fā)明中運(yùn)行良好的技術(shù)，并因此可被認(rèn)為構(gòu)成其實施的優(yōu)選模式。但是，本領(lǐng)域的技術(shù)人員應(yīng)該理解，根據(jù)本發(fā)明公開的內(nèi)容，可以在公開的特定技術(shù)方案中作許多改變，并仍獲得相似或類似的結(jié)果，而不偏離本發(fā)明的精神和范圍。
實施例1腫瘤葉酸受體尋靶EC的合成根據(jù)前述方法以兩步合成制備EC(Ratner和Clarke，1937；Blondeau等，1967；各引入本文作為參考)。合成前體L-噻唑烷-4-甲酸(mp195°，報道值196-197°)。然后制備EC(mp237°，報道值251-253°)。通過1H-NMR和快原子轟擊質(zhì)譜(FAB-MS)證實其結(jié)構(gòu)。
氨甲蝶呤的氨基乙基酰胺類似物(MTX-NH2)的合成將MIX(227ma，0.5mmol)溶解于1ml HCl溶液(2N)。pH值＜3。在室溫下向該攪拌溶液中加入2ml水和4ml N-乙氧羰基-2-乙氧基-1，2-二氫喹啉(EEDQ，6.609％甲醇溶液，1mmol),緩慢加入乙二胺(EDA，0.6ml，10mmol)。將反應(yīng)混合物攪拌過夜并真空蒸發(fā)溶劑。將未加工的固體物質(zhì)用乙醚(10ml)、乙腈(10ml)和95％乙醇(50ml)洗滌以除去未反應(yīng)的EEDQ和EDA。然后將產(chǎn)物通過凍干而干燥，并不經(jīng)進(jìn)一步純化而使用。產(chǎn)物重210mg(84.7％)，為黃色粉末，產(chǎn)物的mp195-198℃(分解，MIX)；1H-NMR(D2O)δ2.98-3.04(d，8H，-(CH2)2CONH(CH0)2NH2)，4.16-4.71(m，6H，-CH2-蝶啶基，芳族-NCH3，NH-CH-COOH谷氨酸)，6.63-6.64(d，2H，芳族-CO)，7.51-7.53(d，2H，芳族-N)，8.36(s，1H，蝶啶基)。對于C22H28N10，O4，F(xiàn)AB MSm/z(M)+計算值496.515，實測值496.835。
葉酸的氨基乙基酰胺類似物(葉酸-NH2)的合成將葉酸二水合物(1g，2.0mmol)加入10ml水中。用HCl(2N)將pH值調(diào)節(jié)至2。向該攪拌溶液中，緩慢加入N-乙氧羰基-2-乙氧基-1，2-二氫喹啉(EEDQ，1g在10ml甲醇中，4.0mmol)和乙二胺(EDA，1.3ml，18mmol)。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌過夜。真空蒸發(fā)溶劑。將產(chǎn)物在甲醇(50ml)中沉淀并用丙酮(100ml)洗滌以除去未反應(yīng)的EEDQ和EDIT。然后將產(chǎn)物凍干并不經(jīng)進(jìn)一步純化而使用。茚三酮(2％甲醇溶液)噴霧表明氨基基團(tuán)陽性。產(chǎn)物重0.6g(產(chǎn)率60％)，為黃色粉末，產(chǎn)物的mp250℃(分解)。1H-NMR(D2O)δ1.97-2.27(m，2H，葉酸的-CH2谷氨酸)，3.05-3.40(d，6H，-CH2CONH(CH2)2NH2)，4.27-4.84(m，3H，-CH2-蝶啶基，NH-CH-COOH谷氨酸)，6.68-6.70(d，2H，芳族-CO)，7.60-7.62(d，2H，芳族-N)，8.44(s，1H，蝶啶基)。對于C21H25N9，O5，F(xiàn)AB MS m/z(M)+計算值483，實測值483.21。
乙二半胱氨酸-葉酸(EC-葉酸)的合成為了溶解EC，向EC(114ma，0.425mmol)在水(1.5ml)中的攪拌溶液加入NaOH(2N，0.1ml)。向該無色溶液中加入硫代-NHS(sulfo-NHS)(92.3mg，0.425mmol)和EDC(81.5mg，0.425mmol)。然后加入葉酸-NH2(205mg，0.425mmol)。將混合物在室溫下攪拌24小時。將混合物用分子截斷值500的Spectra/POR分子多孔膜(Spectrum Medical Industries Inc.，Houston，TX)透析48小時。透析后，將產(chǎn)物凍干。產(chǎn)物重116mg(產(chǎn)率35％)，mp 195℃(分解)；1H-NMR(D2O)δ1.98-2.28(m，2H，葉酸的-CH2谷氨酸)，2.60-2.95(m，4H和葉酸的-CH2-SH)，3.24-3.34(m，10H，-CH2-CO，葉酸的乙二胺和EC的乙二胺)，4.27-4.77(m，5H，-CH-蝶啶基，葉酸的NH-CH-COOH谷氨酸和EC的NH-CH-COOH)，6.60-6.62(d，2H，芳族-CO)，7.58-7.59(d，2H，芳族-N)，8.59(s，1H，蝶啶基)。對于C29H37N11S2O8Na2(8H2O)，F(xiàn)AB MS m/z(M)+分析計算值777.3(無水)。C，37.79；H，5.75；N，16.72；S，6.95。實測值m/z(M)+777.7(20)，489.4(100)。C，37.40；H，5.42；N，15.43；S，7.58。
用99mTc放射性標(biāo)記EC-葉酸和EC通過將所需量的99mTc-高锝酸鹽加入含有EC-葉酸的凍干殘余物(3mg)、SnCl2(100μg)、Na2HPO4(13.5mg)、抗壞血酸(0.5mg)和NaEDTA(0.5mg)的自制試劑盒完成99mTc-EC-葉酸的放射合成。制劑的終pH為7.4。99mTc-EC也通過使用含有以下成分的自制試劑盒獲得EC的凍干殘余物(3mg)、SnCl2(100μg)、Na2IPO4(13.5mg)、抗壞血酸(0.5mg)和NaEDTA(0.5mg)，pH為10。然后將制劑的終pH調(diào)至7.4。通過TLC(ITLC SG，Gelman Sciences，Ann Arbor，MI)測定放射化學(xué)純度，分別用丙酮(體系A(chǔ))和乙酸銨(1M水溶液)甲醇(4∶1)(體系B)洗脫。從放射-TLC(Bioscan，Washington，DC)分析，兩種放射性藥物的放射化學(xué)純度均＞95％。放射-TLC數(shù)據(jù)概括于表2。99mTc-EC-葉酸的合成如圖1所示。
表2癌癥化療選用藥物下表列出了在美國和加拿大用于治療癌癥的藥物及其主要不良作用。選用藥物列表基于Medical Letter顧問的意見。某些針對適應(yīng)癥列出的藥物還未得到美國食品和藥物管理局(US Food and DrugAdministration)的批準(zhǔn)。抗癌藥物及其不良作用隨后給出。為了本發(fā)明的目的，這些列表旨在舉例說明而不是窮舉。
選用藥物癌癥選用藥物 某些備選腎上腺皮質(zhì)**米托坦 阿霉素，鏈佐星，依順鉑 托泊甙膀胱* 局部BCG灌注 灌注絲裂霉素、阿霉全身氨甲蝶呤+長春堿+阿霉素 素或噻替哌+claplatin(MVAC) 紫杉醇，在組合中用claplatin+氨甲蝶呤+長春堿(CMV) 卡鉑置換claplatin腦多形性成膠質(zhì)細(xì)胞瘤* 丙卡巴肼+洛莫司汀+長春新堿 卡氮芥，claplatin間變性少突神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)丙卡巴肼+洛莫司汀+長春新堿 卡氮芥，claplatin胞瘤*成神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞瘤**丙卡巴肼，claplatin髓母細(xì)胞瘤依托泊甙卡氮芥或洛莫司汀長春新堿+卡氮芥±氮芥±氨甲蝶呤氮芥+長春新堿+丙卡巴肼+強(qiáng)的松(MOPP)長春新堿+claplatin±環(huán)磷酰胺原發(fā)性中樞神經(jīng)系統(tǒng)淋 氨甲蝶呤(高劑量靜脈內(nèi)和/或鞘內(nèi))±阿巴瘤 糖胞苷(靜脈內(nèi)和/或鞘內(nèi))環(huán)磷酰胺+阿霉素+長春新堿+強(qiáng)的松(CHOP)乳腺 輔助1環(huán)磷酰胺+氨甲蝶呤+氟尿嘧啶(CMF)；環(huán)磷酰胺+阿霉素±氟尿嘧啶(AC或CAF)；他莫昔芬轉(zhuǎn)移環(huán)磷酰胺+氨甲蝶呤+氟尿嘧啶(CMF)紫杉醇；噻替哌+阿霉或環(huán)磷酰胺+阿霉素±氟尿嘧啶(AC或CAF) 素+長春堿；絲裂霉素用于受體陰性和/或激素不應(yīng)；他莫昔芬用+長春堿；絲裂霉素+于受體陽性和/或激素敏感2氨甲蝶呤+米托蒽醌；氟尿嘧啶通過持續(xù)灌注；骨髓移植3官頸claplatin 苯丁酸氮芥，長春新異環(huán)磷酰胺with means 堿，氟尿嘧啶，阿霉博來霉素+異環(huán)磷酰胺 with 素，氨甲蝶呤，六甲means+claplatin 基蜜胺絨毛膜癌氨甲蝶呤±甲酰四氫葉酸氨甲蝶呤+放線菌素放線菌素D D+環(huán)磷酰胺(MAC)依托泊甙+氨甲蝶呤+放線菌素D+環(huán)磷酰胺+長春新堿結(jié)直腸*輔助結(jié)腸4氟尿嘧啶+左旋四咪唑；氟尿 肝轉(zhuǎn)移肝動脈內(nèi)嘧啶+甲酰四氫葉酸 氟尿苷轉(zhuǎn)移氟尿嘧啶+甲酰四氫葉酸 絲裂霉素胚胎性橫紋肌肉瘤5長春新堿+放線菌素±環(huán)磷酰胺 同樣+阿霉素長春新堿+異環(huán)磷酰胺with means+依托泊甙子宮內(nèi)膜** 甲地孕酮或另一種孕激素 氟尿嘧啶，他莫昔芬，阿霉素+claplatin±環(huán)磷酰胺 六甲基蜜胺食道* claplatin+氟尿嘧啶 阿霉素，氨甲蝶呤，絲裂霉素尤因肉瘤5環(huán)磷酰胺(或異環(huán)磷酰胺with means)+ CAV+依托泊甙阿霉素+長春新堿(CAV)±放線菌素D胃** 氟尿嘧啶±甲酰四氫葉酸 claplatin，阿霉素，依托泊甙，氨甲蝶呤+甲酰四氫葉酸，絲裂霉素頭和頸部鱗狀細(xì)胞*6claplatih+氟尿嘧啶 博來霉素，卡鉑，紫氨甲蝶呤 杉醇胰島細(xì)胞** 鏈佐星+阿霉素 鏈佐星+氟尿嘧啶；氯脲菌素 ；奧曲肽卡波西肉瘤*(愛滋病相依托泊甙或干擾素α或長春堿 長春新堿，阿霉素，關(guān)) 阿霉素+博來霉素+長春新堿或長春堿 博來霉素(ABV)白血病急性淋巴細(xì)胞白血病 誘導(dǎo)長春新堿+強(qiáng)的松+天冬酰胺酶±放線 誘導(dǎo)同樣±高劑量氨(ALL)7菌素D 甲蝶呤±阿糖胞苷；培CNS預(yù)防鞘內(nèi)氨甲蝶呤±全身高劑量氨甲 門冬酶代替天冬酰胺蝶呤及甲酰四氫葉酸±鞘內(nèi)阿糖胞苷±鞘內(nèi) 酶氫化可的松 替尼泊甙或依托泊甙維持氨甲蝶呤+巰基嘌呤高劑量阿糖胞苷骨髓移植38維持同樣+周期性長春新堿+強(qiáng)的松急性髓細(xì)胞性白血病 誘導(dǎo)阿糖胞苷+柔紅霉素或伊達(dá)比星 阿糖胞苷+米托蒽醌(AML)9誘導(dǎo)后高劑量阿糖胞苷±其它藥物如依托 高劑量阿糖胞苷泊甙骨髓移植3慢性淋巴細(xì)胞白血病 苯丁酸氮芥±強(qiáng)的松 克拉屈濱，環(huán)磷酰胺，(CLL)氟達(dá)拉濱噴司他丁，長春新堿，阿霉素慢性髓細(xì)胞性白血病(CML)10慢性期 骨髓移植3白消安干擾素α羥基脲加速期11骨髓移植3羥基脲，白消安原始細(xì)胞危象11淋巴性長春新堿+強(qiáng)的松+L-天冬酰胺酶+ 維A酸 鞘內(nèi)氨甲蝶呤(±用氨甲蝶呤+8巰基嘌呤 安吖啶， 阿扎胞苷維持) 長春新堿±普卡霉素毛細(xì)胞白血病 噴司他丁或克拉屈濱 干擾素α，苯丁酸氮芥，氟達(dá)拉濱肝** 阿霉素 肝動脈內(nèi)氟尿苷或氟尿嘧啶claplatin肺，小細(xì)胞(貓細(xì)胞) claplatin+依托泊甙(PE) 異環(huán)磷酰胺with環(huán)磷酰胺+阿霉素+長春新堿(CAV) means+卡鉑+依托泊PE與CAV交替 甙(ICE)環(huán)磷酰胺+依托泊甙+claplatin(CEP)每日口服依托泊甙阿霉素+環(huán)磷酰胺+依托泊甙(ACE) 依托泊甙+異環(huán)磷酰胺 with means+claplatin(VIP)肺 紫杉醇(非小細(xì)胞)**claplatin+依托泊甙 claplatin+氟尿嘧啶claplatin+長春堿±絲裂霉素 +甲酰四氫葉酸claplatin+長春新堿 卡鉑+紫杉醇淋巴瘤霍奇金氏12阿霉素+博來霉素+長春堿+達(dá)卡巴嗪 氮芥+長春新堿+丙卡
(ABVD) 巴肼+強(qiáng)的松(MOPP)ABVD與MOPP交替 苯丁酸氮芥+長春堿+氮芥+長春新堿+丙卡巴肼(±強(qiáng)的松)+阿 丙卡巴肼+強(qiáng)的松±卡霉素+博來霉素+長春堿(MOP[P]-ABV)氮芥依托泊甙+長春堿+阿霉素骨髓移植3非霍奇金氏伯基特淋巴瘤 環(huán)磷酰胺+長春新堿+氨甲蝶呤 異環(huán)磷酰胺with環(huán)磷酰胺+高劑量阿糖胞苷±氨甲蝶呤與甲 means酰四氫葉酸 環(huán)磷酰胺+阿霉素+長鞘內(nèi)氨甲蝶呤或阿糖胞苷 春新堿+強(qiáng)的松(CHOP)彌漫性大細(xì)胞淋巴瘤環(huán)磷酰胺+阿霉素+長春新堿+強(qiáng)的松 地塞米松有時替換強(qiáng)(CHOP) 的松其它組合方案，可包括氨甲蝶呤，依托泊甙，阿糖胞苷，博來霉素，丙卡巴肼，異環(huán)磷酰胺和米托蒽醌骨髓移植3濾泡性淋巴瘤環(huán)磷酰胺或苯丁酸氮芥 同樣±長春新堿和強(qiáng)的松，±依托泊甙干擾素α，克拉屈濱，氟達(dá)拉濱骨髓移植3環(huán)磷酰胺+阿霉素+長春新堿+強(qiáng)的松(CHOP)黑素瘤**干擾素α，卡氮芥，洛莫司汀，達(dá)卡巴嗪 順鉑達(dá)卡巴嗪+claplatin+卡氮芥+他莫昔芬阿地白介素蔁樣肉芽腫病* PUVA(補(bǔ)骨脂內(nèi)酯+紫外線A) 異維A酸，局部卡氮氮芥(局部) 芥，噴他司丁，氟達(dá)干擾素α 拉濱，克拉屈濱，光光子束放射治療 分離復(fù)置法(體外光氨甲蝶呤 化學(xué)療法)，如非霍奇金淋巴瘤的化療粘液瘤(mysloma)*美法侖(或環(huán)磷酰胺)+強(qiáng)的松 干擾素α美法侖±卡氮芥+環(huán)磷酰胺+強(qiáng)的松+長春新 骨髓移植3堿 高劑量地塞米松地塞米松+阿霉素+長春新堿(VAD)長春新堿+卡氮芥+阿霉素+強(qiáng)的松(VBAP)神經(jīng)母細(xì)胞瘤* 阿霉素+環(huán)磷酰胺+claplatin+替尼泊甙或 卡鉑，依托泊甙依托泊甙 骨髓移植3阿霉素+環(huán)磷酰胺claplatin+環(huán)磷酰胺成骨肉瘤5阿霉素+claplatin±依托泊甙±異環(huán)磷酰胺 異環(huán)磷酰胺withmeans，依托泊甙，卡鉑，高劑量氨甲蝶呤及甲酰四氫葉酸環(huán)磷酰胺+依托泊甙卵巢 claplatin(或卡鉑)+紫杉醇 異環(huán)磷酰胺withclaplatin(或卡鉑)+環(huán)磷酰胺(CP)±阿means，紫杉醇，他莫霉素(CAP) 昔芬，美法侖，六甲基蜜胺胰腺**氟尿嘧啶±甲酰四氫葉酸吉西他濱前列腺亮丙瑞林(或戈舍瑞林)±氟他氨 雌莫司汀±長春堿，氨魯米特+氫化可的松，雌莫司汀+依托泊甙，己烯雌酚，尼魯米特腎** 阿地白介素長春堿，氟尿苷干擾素α視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤5* 阿霉素+環(huán)磷酰胺±claplatin±依托泊甙±卡鉑，依托泊甙，異長春新堿 環(huán)磷酰胺with means肉瘤，軟組織，成人* 阿霉素±達(dá)卡巴嗪±環(huán)磷酰胺±異環(huán)磷酰胺 絲裂霉素+阿霉素with means +claplatin長春新堿，依托泊甙睪丸 claplatin+依托泊甙±博來霉素(PEB) 長春堿(或依托泊甙)
+異環(huán)磷酰胺withmeans+claplatin(VIP)骨髓移植3腎母細(xì)胞瘤5放線菌素D+長春新堿±阿霉素±環(huán)磷酰胺 異環(huán)磷酰胺withmeans，依托泊甙，卡鉑*化療只有中度活性。
**化療只有較低活性。
1通常推薦他莫昔芬伴或不伴化療用于絕經(jīng)后雌激素受體-陽性，中度陽性患者，化療伴或不伴他莫昔芬用于絕經(jīng)前中度陽性患者。推薦輔助治療伴化療和/或他莫昔芬用于具有大腫瘤或其它不良預(yù)后指征的模式-陰性患者。
2甲地孕酮和其它激素劑可能在某些用他莫昔芬治療失敗的患者中有效。
3高劑量化療之后(Medical Letter，34；79，1982)。
4對于直腸癌，用氟尿嘧啶加上照射進(jìn)行術(shù)后輔助治療，之前和之后單獨(dú)用氟尿嘧啶治療。
5僅當(dāng)與手術(shù)切除、放療或兩者結(jié)合時，藥物才具有較大活性。
6維生素A類似物lactratinoln(Acgutana)能控制瘤前病變(粘膜白斑)和減低第二原發(fā)腫瘤的速率(SE Banner等，J Natl CancerInst，88140，1994)。
7高?；颊?如，高計數(shù)，細(xì)胞遺傳異常，成人)可能需要額外的藥物用于誘導(dǎo)、維持和“強(qiáng)化”(在達(dá)到緩解后使用額外藥物)。額外的藥物包括環(huán)磷酰胺、米托蒽醌和硫鳥嘌呤。在英國進(jìn)行的一項大型對照試驗的結(jié)果提示強(qiáng)化可提高所有患ALL兒童的存活率(JMChasselle等，Lancet，34B143，Jan 21，1995)。
8最初預(yù)后差的患者或在緩解后復(fù)發(fā)的患者。
9某些急性前髓細(xì)胞白血病患者對維A酸曾具有完全反應(yīng)。這種治療可引起一種主要特征為發(fā)熱和呼吸窘迫的毒性綜合征(RP Warre11，Jr等，N Engl J Med.328177，1993)。
10同種異體HLA-相同同胞骨髓移植可治愈40％-70％處在慢性期的CML患者，18-28％加速期CML患者，和＜15％處于原始細(xì)胞危象的患者。骨髓移植后無病生存受到年齡＞50歲、疾病持續(xù)時間從診斷起＞3年和使用一個抗原-錯配或匹配-不相關(guān)供體骨髓的不利影響。干擾素也可治療獲得完全細(xì)胞遺傳反應(yīng)(約10％)的慢性期CML患者；它是＞80歲新診斷出慢性期CML的患者和所有不是同種異體骨髓移植候選者的患者的所選治療。單獨(dú)化療是姑息性的。
11如果用這些組合種的任何一種達(dá)到第2慢性期，應(yīng)該考慮同種異體骨髓移植。在第2慢性期進(jìn)行骨髓移植可治愈30％-35％的CML患者。
12有限階段的霍奇金病(階段1和2)通過放療是可以治愈的。播散性疾病(階段3b和4)需要化療。某些中間階段和選擇的臨床情形可受益于這兩種治療。
只在美國可以得到，用于研究。
抗癌藥物和激素藥物 急性毒性 延遲毒性 阿地白介素(白介素-2； 發(fā)熱；液體潴留；高血壓；神經(jīng)精神障礙；甲狀腺功能Proleukin-Cetus 呼吸窘迫；皮疹；貧血；血減退；腎病綜合征；可能造Oncology) 小板減少；惡心和嘔吐；腹成急性腦白質(zhì)病；臂叢??；瀉；毛細(xì)血管滲漏綜合征；腸穿孔腎毒性；心肌毒性；肝毒性；結(jié)節(jié)性紅斑；中性白細(xì)胞趨化缺陷六甲蜜胺(六甲基-蜜胺；惡心和嘔吐 骨髓抑制；CNS抑制；周圍Hexalen-U Bioscience) 神經(jīng)??；幻視；STEXIS；震顫；脫發(fā)；皮疹氨魯米特(Cytadren-Ciba) 嗜睡；惡心；頭暈；皮疹 甲狀腺功能減退(罕見)；骨髓抑制；發(fā)熱；低血壓；男性化 安吖啶(m-AMSA； 惡心和嘔吐；腹瀉；輸液時骨髓抑制；肝損傷；驚厥；amaidine； AMSP產(chǎn)生疼痛和靜脈炎；過敏 口炎；室顫；脫發(fā)；充血性P-D-Parke-Davis， 心衰；腎功能障礙Amsidyl-Warner-Lambert)天冬酰胺酶(Elspar-merck；惡心和嘔吐；發(fā)熱；寒戰(zhàn)； CNS抑制或興奮性過度；急Kidrolase in Canada) 頭痛；過敏；腹痛；高血糖 性出血性胰腺炎；凝血缺導(dǎo)致昏迷 陷；血栓；腎損傷；肝損傷宮頸 claplatin 苯丁酸氮芥，長春新異環(huán)磷酰胺with means 堿，氟尿嘧啶，阿霉博來霉素+異環(huán)磷酰胺with 素，氨甲蝶呤，六甲means+claplatin基蜜胺絨毛膜癌 氨甲蝶呤±甲酰四氫葉酸 氨甲蝶呤+放線菌素放線菌素D D+環(huán)磷酰胺(MAC)依托泊甙+氨甲蝶呤+放線菌素D+環(huán)磷酰胺+長春新堿結(jié)直腸* 輔助結(jié)腸4氟尿嘧啶+左旋四咪唑；氟尿 肝轉(zhuǎn)移肝動脈內(nèi)嘧啶+甲酰四氫葉酸 氟尿苷轉(zhuǎn)移氟尿嘧啶+甲酰四氫葉酸絲裂霉素胚胎性橫紋肌肉瘤5長春新堿+放線菌素±環(huán)磷酰胺同樣+阿霉素長春新堿+異環(huán)磷酰胺with means+依托泊甙子宮內(nèi)膜** 甲地孕酮或另一種孕激素 氟尿嘧啶，他莫昔芬，阿霉素+claplatin±環(huán)磷酰胺 六甲基蜜胺食道*claplatin+氟尿嘧啶 阿霉素，氨甲蝶呤，絲裂霉素尤因肉瘤5環(huán)磷酰胺(或異環(huán)磷酰胺with mcans)+CAV+依托泊甙阿霉素+長春新堿(CAV)±放線菌素D胃** 氟尿嘧啶±甲酰四氫葉酸 claplatin，阿霉素，依托泊甙，氨甲蝶呤+甲酰四氫葉酸，絲裂霉素頭和頸部鱗狀細(xì)胞*6claplatin+氟尿嘧啶 博來霉素，卡鉑，紫氨甲蝶呤杉醇胰島細(xì)胞**鏈佐星+阿霉素 鏈佐星+氟尿嘧啶；氯脲菌素 ；奧曲肽卡波西肉瘤*(愛滋病相 依托泊甙或干擾素α或長春堿 長春新堿，阿霉素，關(guān))阿霉素+博來霉素+長春新堿或長春堿 博來霉素(ABV)白血病急性淋巴細(xì)胞白血病 誘導(dǎo)長春新堿+強(qiáng)的松+天冬酰胺酶±放線 誘導(dǎo)同樣±高劑量氨(ALL)7菌素D 甲蝶呤±阿糖胞苷；培CNS預(yù)防鞘內(nèi)氨甲蝶呤±全身高劑量氨甲 門冬酶代替天冬酰胺蝶呤及甲酰四氫葉酸±鞘內(nèi)阿糖胞苷±鞘內(nèi) 酶氫化可的松 替尼泊甙或依托泊甙維持氨甲蝶呤+巰基嘌呤高劑量阿糖胞苷骨髓移植38維持同樣+周期性長春新堿+強(qiáng)的松急性髓細(xì)胞性白血病誘導(dǎo)阿糖胞苷+柔紅霉素或伊達(dá)比星 阿糖胞苷+米托蒽醌(AML)8誘導(dǎo)后高劑量阿糖胞苷±其它藥物如依托 高劑量阿糖胞苷泊甙骨髓移植3慢性淋巴細(xì)胞白血病苯丁酸氮芥±強(qiáng)的松 克拉屈濱，環(huán)磷酰胺，(CLL) 氟達(dá)拉濱噴司他丁，長春新堿，阿霉素 只在美國可以得到，用于研究 劑量限制效應(yīng)以粗體表示。實際上所有的非激素抗癌藥都已報道了皮膚反應(yīng)(有時嚴(yán)重)，色素沉著過度和眼毒性。關(guān)于與其它藥物的不良相互作用，參見the Medical Letter Hahdbook of Adverse DrugInteraction，1995。
1僅在美國可以得到，用于研究。
2甲地孕酮和其它激素劑可能在某些用他莫昔芬治療失敗的患者中有效。
3高劑量化療之后(Medical Letter，34；79，1982)。
4對于直腸癌，用氟尿嘧啶加上照射進(jìn)行術(shù)后輔助治療，之前和之后單獨(dú)用氟尿嘧啶治療。
5僅當(dāng)與手術(shù)切除、放療或兩者結(jié)合時，藥物才具有較大活性。
6維生素A類似物異維A酸(Accutane)能控制瘤前病變(粘膜白斑)和減低大鼠第二原發(fā)腫瘤的速率(SE Banner等，J Natl CancerInst，88140，1994)。
7高?；颊?如，高計數(shù)，細(xì)胞遺傳異常，成人)可能需要額外的藥物用于誘導(dǎo)、維持和“強(qiáng)化”(在達(dá)到緩解后使用額外藥物)。額外的藥物包括環(huán)磷酰胺、米托蒽醌和硫鳥嘌呤。在英國進(jìn)行的一項大型對照試驗的結(jié)果提示強(qiáng)化可提高所有患ALL兒童的存活率(JMChasselle等，Lancet，34B143，Jan 21，1995)。
8最初預(yù)后差的患者或在緩解后復(fù)發(fā)的患者。
9某些急性前髓細(xì)胞白血病患者對維A酸曾具有完全反應(yīng)。這種治療可引起一種主要特征為發(fā)熱和呼吸窘迫的毒性綜合征(RP Warrell，Jr等，N Engl J Med.328177，1993)。
10同種異體HLA-相同同胞骨髓移植可治愈40％-70％處在慢性期的CML患者，15-25％加速期CML患者，和＜15％處于原始細(xì)胞危象的患者。骨髓移植后無病生存受到年齡＞50歲、疾病持續(xù)時間從診斷起＞3年和使用一個抗原-錯配或匹配-不相關(guān)供體骨髓的不利影響。干擾素也可治療獲得完全細(xì)胞遺傳反應(yīng)(約10％)的慢性期CML患者；它是＞50歲新診斷出慢性期CML的患者和所有不是同種異體骨髓移植候選者的患者的所選治療。單獨(dú)化療是姑息性的。
用99mTc放射性標(biāo)記EC-MTX和EC-TDX使用如EC-葉酸合成所述相同的方法，制備EC-MTX和EC-TDX。標(biāo)記操作與制備99mTc-EC-葉酸所述相同，除了使用EC-MTX和EC-TDX。99mTc-EC-MTX和99mTc-EC-TDX的合成如圖2和圖3所示。
99mTc-EC-葉酸、99mTc-EC-MTX和99mTc-EC-TDX的穩(wěn)定性測定在血清樣本中測試99mTc-EC-葉酸、99mTc-EC-MTX和99mTc-EC-TDX的穩(wěn)定性。簡而言之，將740KBq的1mg99mTc-EC-葉酸、99mTc-EC-MTX和99mTc-EC-TDX置于狗血清(200μl)中在37℃溫育4小時。將血清樣本用50％的甲醇水溶液稀釋并如上所述在0.5、2和4小時重復(fù)放射-TLC。
組織分布研究對雌性Fischer344大鼠(150±25g)(Harlan Sprague-Dawley，Indianapolis，IN)用0.1ml來自13762腫瘤細(xì)胞系懸液的乳腺腫瘤細(xì)胞用25-口徑針頭進(jìn)行皮下接種(106細(xì)胞/大鼠，對Fischer大鼠特異性的腫瘤細(xì)胞系)至后腿。植入后14至17天當(dāng)腫瘤達(dá)到大約1cm直徑時進(jìn)行研究。在每次操作前用氯胺酮(10-15mg/大鼠，腹膜內(nèi))麻醉動物。
在組織分布研究中，對每只動物靜脈內(nèi)注射370-550 KBq的99mTc-EC-葉酸或99mTc-EC(n＝3/時間點)。各配體的注射質(zhì)量為10μg/大鼠。在施用放射性藥物后20分鐘、1、2和4小時，處死麻醉動物并切除腫瘤和選擇的組織，稱重并通過γ計數(shù)器(Packard Instruments，Downers Grove，IL)進(jìn)行放射性計數(shù)。示蹤劑在各樣本中的生物分布計算為注射的劑量/克組織濕重的百分比(％ID/g)。來自原始注射物的稀釋樣本的計數(shù)用作參照。從相應(yīng)的％ID/g值計算腫瘤/非靶組織計數(shù)密度比。用學(xué)生-t檢驗評價兩組之間差異的顯著性。
在一項單獨(dú)的研究中，進(jìn)行阻斷研究以確定受體-介導(dǎo)的過程。在阻斷研究中，對于99mTc-EC-葉酸，向攜帶腫瘤的大鼠共同施用(i.v.)50和150μmol/kg葉酸(n＝3/組)。注射后1小時殺死動物并收集數(shù)據(jù)。
閃爍顯像和放射自顯影研究在i.v.注射18.5MBq99mTc-標(biāo)記的放射性示蹤劑后0.5、2和4小時，用配備有低能平行孔準(zhǔn)直儀的γ照相機(jī)(Siemens MedicalSystems，Inc.，Hoffman Estates，IL)獲得閃爍顯像。
通過定量圖象分析儀(Cyclone Storage Phophor System，Packard，Meridian，CI.)獲得全身放射自顯影。i.v.注射37MBq99mTc-EC-葉酸后，在1小時處死動物并將尸體固定在羧甲基纖維素(4％)中。將冷凍的尸體置于恒冷切片機(jī)(LKB 2250低溫切片機(jī))上并切成100μm冠狀切片。將各切片融化并置于載玻片上。然后將玻片置于與多功能磷光屏存儲器屏幕(MP，7001480)接觸，并暴露15小時(99mTc標(biāo)記的)。用紅色激光激發(fā)磷光屏存儲器并記錄所產(chǎn)生的與先前吸收的能量成比例的藍(lán)光。
結(jié)果99mTc-EC-葉酸的化學(xué)性質(zhì)和穩(wěn)定性開發(fā)了一種簡單快速并且高產(chǎn)率的葉酸的氨基乙基酰胺和EC類似物、MTX和TDX。這些類似物的結(jié)構(gòu)通過NMR和質(zhì)譜分析證實。實現(xiàn)了高(＞95％)放射化學(xué)純度的EC-葉酸與99mTc的放射合成。發(fā)現(xiàn)99mTc-EC-葉酸在狗血清樣本中20分鐘、1、2和4小時保持穩(wěn)定。
99mTc-EC-葉酸的生物分布生物分布研究顯示對99mTc-EC-葉酸在20分鐘-4小時腫瘤/血液計數(shù)密度比逐漸增加，而對于99mTc-EC在相同時間段內(nèi)這些值減少(圖4)。在表3和4中分別給出了99mTc-EC-葉酸和99mTc-EC的％ID/g攝取值、腫瘤/血液和腫瘤/肌肉比。
表399mTc-EC-葉酸在攜帶乳腺腫瘤的大鼠中的生物分布注射的99mTc-EC-葉酸劑量/器官或組織％20分鐘 1小時 2小時4小時血液 0.370±0.0490.165±0.0280.086±0.0050.058±0.002肺 0.294±0.0170.164±0.0240.092±0.0020.063±0.003肝 0.274±0.0270.185±0.0370.148±0.0420.105±0.002胃 0.130±0.0020.557±0.3890.118±0.0930.073±0.065腎 4.328±0.8964.052±0.4885.102±0.2764.673±0.399甲狀腺 0.311±0.0300.149±0.0330.095±0.0110.066±0.011肌肉 0.058±0.0040.0257±0.005 0.016±0.0070.008±0.0005小腸 0.131±0.0130.101±0.0710.031±0.0060.108±0.072尿 12.637±2.271 10.473±3.083 8.543±2.7632.447±0.376腫瘤 0.298±0.0330.147±0.0260.106±0.0290.071±0.006腫瘤/血液0.812±0.0980.894±0.0691.229±0.3251.227±0.129腫瘤/肌肉5.157±0.6905.739±0.3476.876±2.2778.515±0.307顯示的值代表來自3只動物的數(shù)據(jù)的平均值±標(biāo)準(zhǔn)差。
閃爍顯像和放射自顯影研究在不同時間點獲得的閃爍顯像顯示在注射99mTc-EC-葉酸的組中可見腫瘤。相反，在注射99mTc-EC的組中沒有明顯的腫瘤攝取(圖6)。兩種放射性示蹤劑在所有圖象中均顯示明顯的腎攝取。注射99mTc-EC-葉酸后1小時進(jìn)行的放射自顯影清楚地證實了腫瘤活性。
實施例2腫瘤缺氧尋靶2-(2-甲基-5-硝基-1H咪唑基)乙胺(甲硝唑的氨基類似物，MN-NH2)的合成根據(jù)前述的方法(Hay等，1994)合成甲硝唑的氨基類似物。簡而言之，將甲硝唑轉(zhuǎn)化為甲磺?；愃莆?mp 149-150℃，報道值153-154℃，TLC乙酸乙酯，Rf＝0.45)，產(chǎn)率75％。然后甲磺?；紫踹蚺c疊氮化鈉反應(yīng)以得到疊氮類似物(TLC乙酸乙酯，Rf＝0.52)，產(chǎn)率80％。將該疊氮類似物用三苯膦還原并得到(60％)所希望的氨基類似物((mp 190-192℃，報道值194-195℃，TLC乙酸乙酯，Rf＝0.15)。茚三酮(2％在甲醇中)噴霧表明MN-NH2氨基基團(tuán)陽性。通過1H-NMR和質(zhì)譜(FAB-MS)m/z 171(M+H，100)證實了其結(jié)構(gòu)。
乙二半胱氨酸-甲硝唑(EC-MN)的合成將氫氧化鈉(2N，0.2ml)加入EC(134ma，0.50mmol)在水(5ml)中的攪拌溶液。向該無色溶液中加入硫代-NHS(217mg，1.0mmol)和EDC(192ma，1.0mmol)。然后加入MN-NH二鹽酸鹽(340mg，2.0mmol)。將混合物在室溫下攪拌24小時。將混合物用截斷值500的Spectra/POR分子多孔膜(Spectrum Medical Industries Inc.，Houston，TX)透析48小時。透析后，將產(chǎn)物用凍干器(Labconco，Kansas City，MO)凍干。產(chǎn)物重315mg(產(chǎn)率55％)；1H-NMR(D2O)δ2.93(s，6H，硝基咪唑-CH3)，2.60-2.95(m，4H和EC的-CH2-SH)，3.30-3.66(m，8H，EC的乙二胺和硝基咪唑-CH2-CH2-NH2)，3.70-3.99(t，2H，EC的NH-CH-CO)，5.05(t，4H，甲硝唑-CH2-CH2-NH2)(s，2H，硝基咪唑C＝CH)。FAB MS m/z 572(M+，20)。EC-MN的合成方案如圖7所示。
3-(2-硝基-1H-咪唑基)丙胺(硝基咪唑的氨基類似物，NIM-NH2)的合成向含有2-硝基咪唑(1g，8.34mmol)和Cs2CO3(2.9g，8.90mmol)在二甲基甲酰胺(DMF，50ml)中的攪拌混合物中，加入1，3-二甲苯磺酰基丙烷(3.84g，9.99mmol)。將該反應(yīng)體系在80℃加熱3小時。在真空下蒸發(fā)溶劑并將殘余物懸于乙酸乙酯中。過濾固體，將溶劑濃縮，裝在硅膠柱上并用己烷∶乙酸乙酯(1∶1)洗脫。分離產(chǎn)物3-甲苯磺酰基-(2-硝基咪唑)(1.67g，57.5％)，mp108-111℃。1H-NMR(CDCl3)δ2.23(m，2H)，2.48(S，3H)，4.06(t，2H，J＝5.7Hz)，4.52(t，2H，J＝6.8Hz)，7.09(S，1H)，7.24(S，1H)，7.40(d，2H，J＝8.2Hz)，7.77(d，2H，J＝8.2Hz)。
然后將甲苯磺?；?-硝基咪唑(1.33g，4.08mmol)與疊氮化鈉(0.29g，4.49mmol)在DMF(10ml)中在100℃下反應(yīng)3小時。冷卻后，加入水(20ml)并將產(chǎn)物從乙酸乙酯(3×20ml)提取。溶劑經(jīng)MgSO4干燥并蒸發(fā)至干以得到疊氮類似物(0.6g，75％，TLC∶己烷∶乙酸乙酯；1∶1，Rf＝0.42)。1H-NMR(CDCl3)δ2.14(m，2H)，3.41(t，2H，J＝6.2Hz)，4.54(t，2H，J＝6.9Hz)，7.17(S，2H)。
將疊氮類似物(0.57g，2.90mmol)用三苯膦(1.14g，4.35mmol)在四氫呋喃(THF)中在室溫下還原4小時。加入濃HCl(12ml)并再加熱5小時。產(chǎn)物從乙酸乙酯和水混合物中提取。乙酸乙酯經(jīng)MgSO4干燥并蒸發(fā)至干以得到胺氫氯化物類似物(360ma，60％)。茚三酮(2％在甲醇中)噴霧表明NIM-NH氨基基團(tuán)陽性。1H-NMR(D2O)δ2.29(m，2H)，3.13(t，2H，J＝7.8Hz)，3.60(br，2H)，4.35(t，2H，J＝7.4Hz)，7.50(d，1H，J＝2.1Hz)，7.63(d，1H，J＝2.1Hz)。
乙二半胱氨酸-硝基咪唑(EC-NIM)的合成將氫氧化鈉(2N，0.6ml)加入EC(134ma，0.50mmol)在水(2ml)中的攪拌溶液。向該無色溶液中，加入硫代-NHS(260.6mg，1.2mmol)，EDC(230ma，1.2mmol)和氫氧化鈉(2N，1ml)。然后加入NIM-NH2鹽酸鹽(206.6mg，1.0mmol)。將該混合物在室溫下攪拌24小時。將該混合物用截斷值500的Spectra/POR分子多孔膜(Spectrum MedicalIndustries Inc.，Houston，TX)透析48小時。透析后，將產(chǎn)物用凍干器(Labconco，Kansas City，MO)凍干。產(chǎn)物重594.8mg(產(chǎn)率98％)。EC-NIM的合成方案見圖8A。其結(jié)構(gòu)通過1H-NMR(D2O)(圖8B)證實。
用99mTc對EC-MN和EC-NIM進(jìn)行放射性標(biāo)記通過將所需量的99mTc高锝酸鹽加入包含EC-MN或EC-NIM的凍干殘余物(3mg)、SnCl2(100μg)、Na2HPO4(13.5mg)、抗壞血酸(0.5mg)和NaEDTA(0.5mg)的自制試劑盒完成99mTc-EC-MN和99mTc-EC-NIM的放射合成。制劑的終pH為7.4。通過TLC(ITLACSG，Gelman Sciences，Ann Arbor，MI)測定放射化學(xué)純度，分別用丙酮(體系A(chǔ))和乙酸銨(1M水溶液)∶甲醇(4∶1)(體系B)洗脫。從放射-TLC(Bioscan，Washington，DC)分析，兩種放射性示蹤劑的放射化學(xué)純度均＞96％。FMISO和[131I]IMISO的合成通過回旋加速器用質(zhì)子輻射在小體積銀靶中的富集18O-水而產(chǎn)生[18F]。將甲苯磺?；鵐ISO(Hay等，1994)(20mg)溶于乙腈(1.5ml)中，加入穴狀化合物(kryptofix)-氟復(fù)合物。加熱、水解和柱純化后，在60分鐘用加速器束流(EOB)分離純產(chǎn)物，產(chǎn)率為25-40％(衰變校正)。在C-18 ODS-20T柱，4.6×25mm(WatersCorp.，Milford，Mass)上進(jìn)行HPLC，用水/乙腈，(80/20)，流速為1ml/min。未添加載體的產(chǎn)物對應(yīng)于在相似條件下未標(biāo)記FMISO的保留時間(6.12分鐘)。放射化學(xué)純度大于99％。在UV探測器下(310nm)，沒有其它雜質(zhì)?；趯σ阎|(zhì)量和放射性的樣本的UV和放射性檢測，所測定的[18F]FMISO的特定活性為1Ci/μmol。
用相同的前體制備[131I]IMISO(Cherif等，1994)，簡而言之，將5mg甲苯磺酰化MISO溶于乙腈(1ml)中，并加入Na131I(1mCi在0.1ml 1N NaOH中)(Dupont New England Nuclear，Boston.MA)。加熱并純化后，得到產(chǎn)物(60-70％產(chǎn)率)。放射-TLC表明用氯仿∶甲醇(7∶3)作為洗脫劑，終產(chǎn)物的Rf值為0.01。
99mTc-EC-MN和99mTc-EC-NIM的穩(wěn)定性測定在血清樣本中測試標(biāo)記的99mTc-EC-MN和99mTc-EC-NIM的穩(wěn)定性。簡而言之，將740KBq的1mg99mTc-EC-MN和99mTc-EC-NIM在狗血清(200μl)中37℃溫育4小時。用50％的甲醇水溶液稀釋血清樣本并如上所述在0.5、2和4小時重復(fù)放射-TLC。
99mTc-EC-MN的組織分布研究將雌性Fischer344大鼠(150±25g)(Harlan Sprague-Dawley，Indianapolis，IN)用0.1ml來自13762腫瘤細(xì)胞系懸液的乳腺腫瘤細(xì)胞用25-口徑針頭進(jìn)行皮下接種(106細(xì)胞/大鼠，對Fischer大鼠特異性的腫瘤細(xì)胞系)至后腿。植入后14至17天當(dāng)腫瘤達(dá)到大約1cm直徑時進(jìn)行研究。在每次操作前用氯胺酮(10-15mg/大鼠，腹膜內(nèi))麻醉動物。
在組織分布研究中，對每只動物靜脈內(nèi)注射370-550KBq的99mTc-EC-MN或99mTc-EC(n＝3/時間點)。99mTc-EC-MN的注射質(zhì)量為10μg/大鼠。在施用放射性示蹤劑后0.5、2和4小時，處死大鼠并切除所選擇的組織，稱重并進(jìn)行放射性計數(shù)。示蹤劑在各樣本中的生物分布計算為注射的劑量/克組織溫重的百分比(％ID/g)。從相應(yīng)的％ID/g值計算腫瘤/非靶組織計數(shù)密度比。將數(shù)據(jù)與使用相同動物模型的[18F]FMISO和[131I]IMISO相比較.用學(xué)生-t檢驗評價組間差異的顯著性。
閃爍顯像和放射自顯影研究在i.v.注射18.5MBq各示蹤劑后0.5、2和4小時，用配備有低能平行孔準(zhǔn)直儀的γ照相機(jī)(Siemens Medical Systems，Inc.，HoffmanEstates，IL)獲得閃爍顯像。
通過定量圖象分析儀(Cyclone Storage Phophor System，Packard，Meridian，CI.)獲得全身放射自顯影。i.v.注射37MBq99mTc-EC-MN后，在1小時處死動物并將尸體固定在羧甲基纖維素(4％)中，如先前所述(Yang等，1995)。將冷凍的尸體放到恒冷切片機(jī)(LKB 2250低溫切片機(jī))上并切成100μm冠狀切片。將各切片融化并置于載玻片上。然后將玻片置于與多功能磷光屏存儲器屏幕(MP，7001480)相接觸，并暴露15小時。
為了確定99mTc-EC-NIM是否能監(jiān)測腫瘤對化療的反應(yīng)，用單一劑量的紫杉醇治療一組腫瘤體積為1.5cm的大鼠和攜帶卵巢腫瘤的小鼠(40mg/kg/大鼠，80mg/kg/小鼠，i.v.)。在紫杉醇治療后第4天取影像。確定治療或未治療的情況下注射的劑量/克腫瘤重量的百分比。
極譜氧微電極pO2測量為了證實腫瘤缺氧，用Eppendorf計算機(jī)化組織學(xué)系統(tǒng)進(jìn)行腫瘤內(nèi)pO2測量。對每個腫瘤以0.4mm間隔沿2-3條線形軌跡的每一條進(jìn)行20-25次pO2測量(共40-75次測量)。在3只攜帶腫瘤的大鼠身上進(jìn)行腫瘤pO2測量。用在線計算機(jī)系統(tǒng)，每條軌跡的點測量表示為相對于測量點沿軌跡的位置的絕對值，以及在pO2柱狀圖中在0-100mmHg(組寬為2.5mm)之間的相對頻率。
結(jié)果99mTc-EC-MN和99mTc-EC-NIM的放射合成和穩(wěn)定性完成EC-MN和EC-NIM與99mTc的放射合成，具有高放射化學(xué)純度(＞95％)。放射化學(xué)產(chǎn)率為100％。發(fā)現(xiàn)99mTc-EC-MN和99mTc-EC-NIM(圖13)在狗血清樣本中在0.5、2和4小時是穩(wěn)定的。沒有觀察到降解產(chǎn)物。用相同前體容易地實現(xiàn)MISO的放射氟化和放射碘化。在這兩種標(biāo)記的MISO類似物中，放射化學(xué)純度均大于99％。
體內(nèi)組織分布研究99mTc-EC-MN和99mTc-EC在攜帶腫瘤的大鼠中的組織分布在表4和5中顯示。由于對離子99mTc的高親和性，沒有顯著和一致的甲狀腺攝取，提示99mTc-EC-MN的體內(nèi)穩(wěn)定性(表5)。
表499mTc-EC在攜帶乳腺腫瘤的大鼠中的生物分布注射的99mTc-EC 劑量/器官或組織％20分鐘 1小時 2小時 4小時血液 0.435±0.0290.273±0.0390.211±0.0010.149±0.008肺 0.272±0.0190.187±0.0290.144±0.0020.120±0.012肝 0.508±0.0620.367±0.0060.286±0.0730.234±0.016胃 0.136±0.0600.127±0.1060.037±0.0270.043±0.014腎 7.914±0.8968.991±0.2689.116±0.0537.834±1.018甲狀腺 0.219±0.0360.229±0.1180.106±0.0030.083±0.005肌肉 0.060±0.0060.043±0.0020.028±0.0090.019±0.001小腸 0.173±0.0290.787±0.1060.401±0.0930.103±0.009尿 9.124±0.80811.045±6.158 13.192±4.505 8.693±2.981腫瘤 0.342±0.1630.149±0.0200.115±0.0020.096±0.005腫瘤/血液0.776±0.3220.544±0.0040.546±0.0100.649±0.005腫瘤/肌肉5.841±3.2533.414±0.3254.425±1.3975.093±0.223顯示的數(shù)值代表來自3只動物的數(shù)據(jù)的平均值±標(biāo)準(zhǔn)差。在阻斷研究中，同時施用葉酸，腫瘤/肌肉和腫瘤/血液計數(shù)密度比顯著降低(p＜0.01)(圖5)。
表599mTc-EC-甲硝唑綴合物在攜帶乳腺腫瘤的大鼠1中的生物分布30分鐘 2小時 4小時血液 1.46±0.73 1.19±0.340.76±0.14肺0.79±0.39 0.73±0.020.52±0.07肝0.83±0.36 0.91±0.110.87±0.09脾0.37±0.17 0.41±0.040.37±0.07腎4.30±1.07 5.84±0.436.39±0.48肌肉 0.08±0.03 0.09±0.010.07±0.01小腸 0.27±0.12 0.39±0.240.22±0.05甲狀腺0.051±0.160.51±0.090.41±0.02腫瘤 0.034±0.130.49±0.020.50±0.091.每只大鼠接受99m Tc-EC-甲硝唑(10μCi，iv)。各值是注射劑量/克重量的百分比(n＝3)/時間間隔。各數(shù)據(jù)代表3次測量的平均值及標(biāo)準(zhǔn)差。
生物分布研究顯示，對于99mTc-EC-MN、[18F]FMISO和[131I]IMISO，腫瘤/血液和腫瘤/肌肉計數(shù)密度比在0.54小時逐漸增加，而對于99mTc-EC，在相同的時間段內(nèi)這些值不改變(圖9和圖10)。[18F]FMISO比起[131I]IMISO和99mTc-EC-MN在注射后30分鐘、2和4小時顯示最高的腫瘤/血液攝取比。對于99mTc-EC-MN和[131I]IMISO在注射后2和4小時的腫瘤/血液和腫瘤/肌肉比并無顯著差異(p＜0.05)。
閃爍顯像和放射自顯影研究在不同時間點獲得的閃爍顯像顯示在99mTc-EC-MN和99mTc-EC-NIM組中腫瘤可見。相反，在注射99mTc-EC組中沒有明顯的腫瘤攝取(圖11)。注射99mTc-EC-MN后1小時進(jìn)行的放射自顯影清楚地證實了腫瘤活性(圖12)。與99mTc-EC-MN相比，由于更高的腫瘤/背景比，99mTc-EC-NIM似乎提供更好的閃爍顯像。在攜帶乳腺腫瘤的大鼠中，腫瘤攝取在99mTc-EC-NIM組中明顯高于99mTc-EC(圖14A)。從99mTc-EC-NIM的注射劑量/克腫瘤重量的百分比得到的數(shù)據(jù)表明，當(dāng)與對照組相比時，在用紫杉醇治療的大鼠中攝取減少25％(圖14B)。
在攜帶卵巢腫瘤的小鼠中，在用紫杉醇治療的小鼠中腫瘤攝取減少(圖15A和圖15B)。在攜帶肉瘤的大鼠中觀察到類似的結(jié)果(圖15C和圖15D)。由此，99mTc-EC-NIM可用于評估腫瘤對紫杉醇治療的反應(yīng)。
極譜氧微電極pO2測量對腫瘤進(jìn)行的腫瘤內(nèi)pO2測量表明，與正常肌肉的35±10mmHg相比，腫瘤氧壓力范圍為4.6±1.4mmHg。該數(shù)據(jù)表明腫瘤是缺氧的。
實施例3癌癥的肽顯像乙二半胱氨酸-五谷氨酸(EC-GAP)的合成將氫氧化鈉(1N，1ml)加入EC(200mg，0.75mmol)在水(10ml)中的攪拌溶液。向該無色溶液中加入硫代-NHS(162mg，0.75mmol)和EDC(143mg，0.75mmol)。然后加入五谷氨酸鈉鹽(M.W.750-1500，Sigma Chemical Company)(500mg，0.67mmol)。將混合物在室溫下攪拌24小時。將混合物用截斷值500的Spectra/POR分子多孔膜(Spectrum Medical Industries Inc.，Houston，TX)透析48小時。透析后，將產(chǎn)物用凍干器(Labconco，Kansas City，MO)凍干。鹽形式的產(chǎn)物重0.95g。EC-GAP的合成方案如圖16所示。
99mTc-EC-GAP的穩(wěn)定性測定使用先前描述的相同方法用99mTc放射性標(biāo)記EC-GAP。放射化學(xué)純度為100％。在血清樣本中測試標(biāo)記的99mTc-EC-GAP的穩(wěn)定性。簡而言之，將740KBq的1mg99mTc-EC-GAP在狗血清(200μl)中37℃溫育4小時。將血清樣本用50％的甲醇水溶液稀釋并如上所述在0.5、2和4小時重復(fù)放射-TLC。
閃爍顯像研究在i.v.注射18.5 MBq各示蹤劑后0.5、2和4小時，用配備有低能平行孔準(zhǔn)直儀的γ照相機(jī)獲得閃爍顯像。結(jié)果99mTc-EC-GAP的穩(wěn)定性測定發(fā)現(xiàn)99mTc-EC-GAP在狗血清樣本中在0.5、2和4小時是穩(wěn)定的。沒有觀察到降解產(chǎn)物。
閃爍顯像研究在不同時間點獲得的閃爍顯像顯示在99mTc-EC-GAP組中腫瘤可見。最佳攝取在給藥后30分鐘至1小時(圖17)。
實施例4腫瘤凋亡細(xì)胞顯像乙二半胱氨酸-膜聯(lián)蛋白V(EC-ANNEX)的合成將碳酸氫鈉(1N，1ml)加入EC(5mg，0.019mmol)的攪拌溶液。向該無色溶液中加入硫代-NHS(4mg，0.019mmol)和EDC(4mg，0.019mmol)。然后加入膜聯(lián)蛋白V(M.W.33kD，人，Sigma ChemicalCompany)(0.3mg)。將混合物在室溫下攪拌24小時。將混合物用截斷值10,000的Spectra/POR分子多孔膜(Spectrum MedicalIndustries Inc.，Houston，TX)透析48小時。透析后，將產(chǎn)物用凍干器(Labconco，Kansas City，MO)凍干。鹽形式的產(chǎn)物重12mg。
99mTc-EC-ANNEX的穩(wěn)定性測定使用先前在EC-GAP中描述的相同方法用99mTc放射性標(biāo)記EC-ANNEX。放射化學(xué)純度為100％。在血清樣本中測試標(biāo)記的99mTc-EC-ANNEX的穩(wěn)定性。簡而言之，將740KBq的lmg99mTc-EC-ANNEX在狗血清(200μl)中37℃溫育4小時。將血清樣本用50％的甲醇水溶液稀釋并如上所述在0.5、2和4小時重復(fù)放射-TLC。
閃爍顯像研究在i.v.注射18.5MBq放射性示蹤劑后0.5、2和4小時，用配備有低能平行孔準(zhǔn)直儀的γ照相機(jī)獲得閃爍顯像。所用的動物模型為乳腺、卵巢和肉瘤。已知攜帶乳腺和卵巢腫瘤的大鼠均過量表達(dá)高凋亡細(xì)胞。顯像研究在腫瘤細(xì)胞接種后第14天進(jìn)行。為了確定腫瘤治療反應(yīng)，對預(yù)顯像的小鼠施用紫杉醇(80mg/Kg，iv，第14天)并在第18天取影像。
結(jié)果99mTc-EC-ANNEX的穩(wěn)定性測定發(fā)現(xiàn)99mTc-EC-ANNEX在狗血清樣本中在0.5、2和4小時是穩(wěn)定的。沒有觀察到降解產(chǎn)物。
閃爍顯像研究在不同時間點獲得的閃爍顯像顯示在99mTc-EC-ANNEX組中腫瘤可見(圖18-20)。影像表明高度凋亡細(xì)胞具有更多99mTc-EC-ANNEX攝取。在高凋亡(攜帶卵巢腫瘤)組中(圖19A和圖19B)和低凋亡(攜帶肉瘤)組中(圖20A和圖20B)，[紫杉醇]治療前和后之間腫瘤攝取無顯著差異。
實施例5腫瘤血管發(fā)生顯像秋水仙堿的氨基類似物(COL-NH2)的合成根據(jù)先前描述的方法(Orr等，1995)合成秋水仙堿的脫甲基的氨基和羥基類似物。簡而言之，將秋水仙堿(4g)溶于100ml含25％硫酸的水中。將該反應(yīng)混合物在100℃加熱5小時。將該混合物用碳酸鈉中和。過濾產(chǎn)物并經(jīng)凍干器干燥，得到2.4g(70％)所期望的氨基類似物(mp153-155℃，報道值155-157℃)。茚三酮(2％在甲醇中)噴霧表明COL-NH2氨基基團(tuán)陽性。通過1H-NMR和質(zhì)譜(FAB-MS)證實其結(jié)構(gòu)。1H-NMR(CDCl3)δ8.09(S，1H)，7.51(d，1H，J＝12Hz)，7.30(d，1H，J＝12Hz)，6.56(S，1H)，3.91(S，6H)，3.85(m，1H)，3.67(S，3H)，2.25-2.52(m，4H).m/z 308.2(M+，20)，307.2(100)。
乙二半胱氨酸-秋水仙堿(EC-COL)的合成將氫氧化鈉(2N，0.2ml)加入EC(134mg，0.50mmol)在水(5ml)中的攪拌溶液。向該無色溶液中加入硫代-NHS(217mg，1.0mmol)和EDC(192mg，1.0mmol)。然后加入COL-NH2(340mg，2.0mmol)。將混合物在室溫下攪拌24小時。將混合物用截斷值500的Spectra/POR分子多孔膜(Spectrum Medical Industries Inc.，Houston，TX)透析48小時。透析后，將產(chǎn)物用凍干器(Labconco，Kansas City，MO)凍干。產(chǎn)物重315mg(產(chǎn)率55％)。1H-NMR(D2O)δ7.39(S，1H)，7.20(d，1H，J＝12Hz)，7.03(d，1H，J＝12Hz)，6.78(S，1H)，4.25-4.40(m，1H)，3.87(S，3H，-OCH3)，3.84(S，3H，-OCH3)，3.53(S，3H，-OCH3)，3.42-3.52(m，2H)，3.05-3.26(m，4H)，2.63-2.82(m，4H)，2.19-2.25(m，4H).FAB MS m/z 580(鈉鹽，20)。EC-COL的合成方案如圖21所示。
用99mTc放射性標(biāo)記EC-COL和EC通過將所需量的99mTc-高锝酸鹽加入含有EC-COL的凍干殘余物(5mg)、SnCl2(100μg)、Na2HPO4(13.5mg)、抗壞血酸(0.5mg)和NaEDTA(0.5mg)的自制試劑盒完成99mTc-EC-COL的放射合成。制劑的終pH為7.4。99mTc-EC也通過使用含有以下成分的自制試劑盒獲得EC的凍干殘余物(5mg)、SnCl2(100μg)、Na2HPO4(13.5mg)、抗壞血酸(0.5mg)和NaEDTA(0.5mg)，pH為10。然后將制劑的終pH調(diào)至7.4。通過TLC(ITLC SG，Gelman Sciences，Ann Arbor，MI)測定放射化學(xué)純度，用乙酸銨(1M水溶液)∶甲醇(4∶1)洗脫。用放射-薄層層析(TLC，Bioscan，Washington，DC)分析兩種放射性示蹤劑的放射化學(xué)純度。
99mTc-EC-COL的穩(wěn)定性測定在血清樣本中測試標(biāo)記的99mTc-EC-COL的穩(wěn)定性。簡而言之，將740KBq的5mg99mTc-EC-COL在兔血清(500μl)中37℃溫育4小時。用50％的甲醇水溶液稀釋血清樣本并如上所述在0.5、2和4小時重復(fù)放射-TLC。
組織分布研究將雌性Fischer344大鼠(150±25g)(Harlan Sprague-Dawley，Indianapolis，IN)用0.1ml來自13762腫瘤細(xì)胞系懸液的乳腺腫瘤細(xì)胞用25-口徑針頭進(jìn)行皮下接種(106細(xì)胞/大鼠，對Fischer大鼠特異性的腫瘤細(xì)胞系)至后腿。植入后14至17天當(dāng)腫瘤達(dá)到大約1cm直徑時進(jìn)行研究。在每次操作前用氯胺酮(10-15mg/大鼠，腹膜內(nèi))麻醉動物。
在組織分布研究中，對每只動物靜脈內(nèi)注射370-550KBq的99mTc-EC-COL或99mTc-EC(n＝3/時間點)。99mTc-EC-COL的注射質(zhì)量為10μg/大鼠。在施用放射性示蹤劑后0.5、2和4小時，處死大鼠并切除所選擇的組織，稱重并進(jìn)行放射性計數(shù)。示蹤劑在各樣本中的生物分布計算為注射的劑量/克組織濕重的百分比(％ID/g)。從相應(yīng)的％ID/g值計算腫瘤/非靶組織計數(shù)密度比。用學(xué)生-t檢驗評價組間差異的顯著性。
閃爍顯像研究在i.v.注射300μCi的99mTc-EC-COL和99mTc-EC后0.5、2和4小時，用配備有低能平行孔準(zhǔn)直儀的γ照相機(jī)(Siemens Medical Systems，Inc.，Hoffman Estates，IL)獲得閃爍顯像。用計算機(jī)勾畫出的感興趣區(qū)域(ROI)定量(計數(shù)/象素)腫瘤攝取相對正常肌肉攝取。
結(jié)果99mTc-EC-COL的放射合成和穩(wěn)定性完成用99mTc對EC-COL進(jìn)行的放射合成，放射化學(xué)純度高(＞95％)(圖21)。發(fā)現(xiàn)99mTc-EC-COL在兔血清樣本中在0.5、2和4小時是穩(wěn)定的。沒有觀察到降解產(chǎn)物(圖22)。
體內(nèi)生物分布99mTc-EC-COL和99mTc-EC在攜帶乳腺腫瘤的大鼠體內(nèi)的生物分布如表4和6所示。99mTc-EC-COL在0.5、2和4小時的腫瘤攝取值(％ID/g)為0.436±0.089，0.395±0.154和0.221±0.006(表6)，而對于99mTc-EC這些值分別為0.342±0.163，0.115±0.002和0.097±0.005(表4)。在99mTc-EC-COL組中觀察到作為對時間函數(shù)的腫瘤/血液比(0.52±0.12至0.72±0.07)和腫瘤/肌肉比(3.47±0.40至7.97±0.93)增加(圖23)。相反，對于99mTc-EC，在相同的時間段內(nèi)當(dāng)與99mTc-EC-COL組相比時，腫瘤/血液和腫瘤/肌肉比值顯示時間依賴性降低(圖24)。
表699mTc-EC-秋水仙堿在攜帶乳腺腫瘤的大鼠中的生物分布30分鐘 2小時 4小時血液 0.837±0.0720.606±0.2660.307±0.022肺0.636±0.0560.407±0.1510.194±0.009肝1.159±0.0951.051±0.2130.808±0.084脾0.524±0.0860.559±0.1430.358±0.032腎9.705±0.60814.065±4.007 11.097±0.108肌肉 0.129±0.0400.071±0.0320.028±0.004胃0.484±0.3860.342±0.1500.171±0.123子宮 0.502±0.3260.343±0.3700.133±0.014甲狀腺3.907±0.9972.297±0.7111.709±0.776腫瘤 0.436±0.0890.395±0.1540.221±0.006*每只大鼠接受99mTc-EC-秋水仙堿(10μCi，iv)。各值是注射劑量/克組織重量的百分比(n＝3)/時間間隔。各數(shù)據(jù)代表3次測量的平均值及標(biāo)準(zhǔn)差。
表7由放射-TLC(ITLC-SG)研究測定的Rf值體系A(chǔ)* 體系B 99mTc-EC-葉酸0 1(＞95％)99mTc-EC 0 1(＞95％)游離99mTc1 1還原的99mTc 0 0*丙酮 乙酸銨(1M水溶液)∶甲醇(4∶1)99mTc-EC-COL在攜帶乳腺腫瘤的大鼠中的γ閃爍顯像在3只攜帶乳腺腫瘤的大鼠中給藥后1小時進(jìn)行的體內(nèi)顯像研究表明，在99mTc-EC-COL組中腫瘤可良好顯現(xiàn)(圖25)，而在99mTc-EC組中觀察到較低的腫瘤攝取(圖26)。計算機(jī)勾畫的感興趣區(qū)域(ROI)顯示在99mTc-EC-COL組中腫瘤/背景比顯著高于99mTc-EC組(圖27)。
腫瘤糖酵解尋靶實施例6開發(fā)99mTc-EC-新霉素EC的合成根據(jù)前述方法以兩步合成制備EC(Ratner和Clarke，1937；Blondeau等，1967)。合成前體L-噻唑烷-4-甲酸(mp195°，報道值196-197°)。然后制備EC(mp237°，報道值251-253°)。通過1H-NMR和快原子轟擊質(zhì)譜(FAB-MS)證實其結(jié)構(gòu)。
乙二半胱氨酸-新霉素(EC-新霉素)的合成將氫氧化鈉(2N，0.2ml)加入EC(134mg，0.50mmol)在水(5ml中的攪拌溶液。向該無色溶液中加入硫代-NHS(217mg，1.0mmol)和EDC(192mg，1.0mmol)。然后加入新霉素三硫酸鹽(909mg，1.0mmol)。將混合物在室溫下攪拌24小時。將混合物用截斷值500的Spectra/POR分子多孔膜(Spectrum Medical Industries Inc.，Houston，TX)透析48小時。透析后，將產(chǎn)物用凍干器(Labconco，Kansas City，MO)凍干。產(chǎn)物重720mg(產(chǎn)率83％)。EC-新霉素的合成方案如圖36所示。通過1H-NMR(圖38A-B)、質(zhì)譜(圖39A-B)和元素分析(Galbraith Laboratories，Inc.，Knoxville，TN)證實其結(jié)構(gòu)。元素分析C39H75N10S4O19.15H2O(C，H，N，S)，計算值C33.77，H7.58，N10.11，S9.23；實測值C32.44，H5.90，N10.47，S10.58。與EC和新霉素相比，EC-新霉素的UV波長遷移至270.5nm(圖40A-C)。
用99mTc放射性標(biāo)記EC-MN和EC-新霉素通過將所需量的99mTc-高锝酸鹽加入包含EC或EC-新霉素的凍干殘余物(10mg)、SnCl2(100μg)、Na2HPO4(13.5mg)和抗壞血酸(0.5mg)的自制試劑盒完成99mTc-EC和99mTc-EC-新霉素的放射合成。然后加入在0.1ml水中的NaEDTA(0.5mg)。制劑的終pH為7.4。通過TLC(ITLCSG，Gelman Sciences，Ann Arbor，MI)測定放射化學(xué)純度，用乙酸銨(1M水溶液)∶甲醇(4∶1)洗脫。從放射-TLC(Bioscan，Washington，DC)分析(圖41)和HPLC分析(圖42-45)，兩種放射性示蹤劑的放射化學(xué)純度均＞95％。
99mTc-EC和99mTc-EC-新霉素的穩(wěn)定性測定在狗血清樣本中測試標(biāo)記的99mTc-EC和99mTc-EC-新霉素的穩(wěn)定性。簡而言之，將740KBq的1mg99mTc-EC和99mTc-EC-新霉素在狗血清(200μl)中37℃溫育4小時。用50％的甲醇水溶液稀釋血清樣本并如上所述在0.5、2和4小時重復(fù)放射-TLC。
99mTc-EC-新霉素的組織分布研究將雌性Fischer344大鼠(150±25g)(Harlan Sprague-Dawley，Indianapolis，IN)用0.1ml來自13762腫瘤細(xì)胞系懸液的乳腺腫瘤細(xì)胞用25-口徑針頭進(jìn)行皮下接種(106細(xì)胞/大鼠，對Fischer大鼠特異性的腫瘤細(xì)胞系)至后腿。植入后14至17天當(dāng)腫瘤達(dá)到大約1cm直徑時進(jìn)行研究。在每次操作前用氯胺酮(10-15mg/大鼠，腹膜內(nèi))麻醉動物。
在組織分布研究中，對每只動物靜脈內(nèi)注射10-20μCi的99mTc-EC或99mTc-EC-新霉素(n＝3/時間點)。99mTc-EC-新霉素的注射質(zhì)量為200μg/大鼠。在施用放射性示蹤劑后0.5、2和4小時，處死大鼠并切除所選擇的組織，稱重并進(jìn)行放射性計數(shù)。示蹤劑在各樣本中的生物分布計算為注射的劑量/克組織濕重的百分比(％ID/g)。從相應(yīng)的％ID/g值計算腫瘤/非靶組織計數(shù)密度比。當(dāng)與99mTc-EC(表4)和游離锝(表9)相比時，在99mTc-EC-新霉素組中腫瘤/組織比作為對時間的函數(shù)而增加(表8)。
閃爍顯像研究在i.v.注射100μCi各示蹤劑后0.5、2和4小時，用配備有低能平行孔準(zhǔn)直儀的γ照相機(jī)(Siemens Medical Systems，Inc.，HoffmanEstates，IL)獲得閃爍顯像。與99mTc-EC相比，觀察到在腫瘤中的高攝取(圖37A)。在一名乳腺癌患者中進(jìn)行了初步臨床顯像研究。在施用99mTc-EC-新霉素后2小時腫瘤顯現(xiàn)良好(圖37B)。
表899mTc-EC-新霉素在攜帶乳腺腫瘤的大鼠中的生物分布30分鐘 1小時 2小時 4小時血液 0.463±0.0070.262±0.0400.139±0.0160.085±0.004肺 0.344±0.0110.202±0.0300.114±0.0140.080±0.003肝 0.337±0.0120.269±0.0130.221±0.0200.195±0.012胃 0.279±0.0390.147±0.0010.061±0.0080.054±0.008脾 0.159±0.0080.114±0.0130.095±0.0070.089±0.003腎 8.391±0.3958.804±0.8178.356±0.4088.638±0.251甲狀腺 0.349±0.0080.202±0.0280.114±0.0070.086±0.001肌肉 0.093±0.0010.049±0.0100.021±0.0060.010±0.001小腸 0.159±0.0040.093±0.0140.061±0.0040.266±0.200尿 25.402±8.621 21.786±2.690 0.224±0.0002.609±2.377腫瘤 0.419±0.0230.279±0.0420.166±0.0230.131±0.002腦 0.022±0.0010.014±0.0030.010±0.0010.007±0.001心臟 0.147±0.0090.081±0.0120.040±0.0040.029±0.002腫瘤/血液0.906±0.0391.070±0.0281.196±0.0611.536±0.029腫瘤/肌肉4.512±0.2205.855±0.4588.364±1.46912.706±0.783腫瘤/腦 19.495±1.823 20.001±0.890 17.515±2.035 20.255±1.693顯示的值代表來自3只動物的數(shù)據(jù)的平均值±標(biāo)準(zhǔn)差。
表999mTc高锝酸鹽在攜帶乳腺腫瘤的大鼠中的生物分布30分鐘 2小時 4小時血液 1.218±0.3280.666±0.0660.715±0.052肺 0.646±0.2910.632±0.0260.387±0.024肝 0.541±0.2320.304±0.0260.501±0.081脾 0.331±0.1080.187±0.0140.225±0.017腎 0.638±0.1970.489±0.0000.932±0.029甲狀腺 24.821±5.181 11.907±15.412 17.232±5.002肌肉 0.130±0.0790.076±0.0020.063±0.003小腸 0.153±0.0680.186±0.0070.344±0.027腫瘤 0.591±0.2680.328±0.0160.423±0.091腦 0.038±0.0140.022±0.0020.031±0.009心臟 0.275±0.0890.145±0.0150.166±0.012腫瘤/血液0.472±0.0930.497±0.0730.597±0.144腫瘤/肌肉4.788±0.8334.302±0.0936.689±1.458腫瘤/肝 1.084±0.0231.084±0.1150.865±0.270顯示的值代表來自3只動物的數(shù)據(jù)的平均值±標(biāo)準(zhǔn)差。
99mTc-EC-藥物綴合物的體外細(xì)胞攝取為了評價99mTc-EC-藥物綴合物的細(xì)胞攝取，向含有80,000個細(xì)胞(A549肺癌細(xì)胞系)的各孔中加入2μCi的99mTc-EC-新霉素和18F-FDG。溫育0.5-4小時后，將細(xì)胞用磷酸鹽緩沖鹽水洗3次，然后用胰蛋白酶洗以除下細(xì)胞。然后通過γ計數(shù)器計數(shù)細(xì)胞。在人肺癌細(xì)胞系中99mTc-EC-新霉素在所測試的藥劑中顯示出最高的攝取(圖46)。
葡萄糖對細(xì)胞攝取99mTc-EC-新霉素和18F-FDG的影響已知新霉素影響葡萄糖吸收(Rogers等，1968；Fanciulli等，1994)。先前的實驗已顯示在人肺癌細(xì)胞系(A549)中，99mTc-EC-新霉素具有比18F-FDG更高的攝取。為了確定99mTc-EC-新霉素的攝取是否通過葡萄糖相關(guān)機(jī)制介導(dǎo)，將葡萄糖(0.1mg-2.0mg)以及2μCi的99mTc-EC-新霉素和18F-FDG加入含50,000(乳腺)細(xì)胞或80,000(肺)細(xì)胞的各個孔中。溫育后，將細(xì)胞用磷酸鹽緩沖鹽水洗3次，然后用胰蛋白酶洗以除下細(xì)胞。然后用γ計數(shù)器計數(shù)細(xì)胞。
通過加入濃度為0.1-2.0mg/孔的葡萄糖，觀察到在兩個肺癌細(xì)胞系和一個乳腺細(xì)胞系中99mTc-EC-新霉素攝取減少。在18F-FDG組中觀察到類似的結(jié)果。99mTc-EC(對照)沒有顯示出攝取。所述發(fā)現(xiàn)提示細(xì)胞攝取99mTc-EC-新霉素可能通過葡萄糖相關(guān)機(jī)制介導(dǎo)(圖47，48A和48B)。
實施例7用99mTc-EC-脫氧葡萄糖進(jìn)行腫瘤代謝顯像EC-脫氧葡萄糖(EC-DG)的合成將氫氧化鈉(1N，1ml)加入EC(110mg，0.41mmol)在水(5ml)中的攪拌溶液。向該無色溶液中加入硫代-NHS(241.6mg，1.12mmol)和EDC(218.8mg，1.15mmol)。然后加入D-葡糖胺鹽酸鹽(356.8mg，1.65mmol)。將混合物在室溫下攪拌24小時。將混合物用截斷值500的Spectra/POR分子多孔膜(Spectrum Medical Industries Inc.，Houston，TX)透析48小時。透析后，將產(chǎn)物用凍干器(Labconco，Kansas City，MO)凍干。鹽形式的產(chǎn)物重568.8mg。合成方案如圖59所示。通過質(zhì)譜(圖60)和質(zhì)子NMR(圖61和62)證實其結(jié)構(gòu)。99mTc-EC-DG的放射化學(xué)純度為100％，由放射-TLC(圖63)和HPLC(圖64和65)分析所測定。
己糖激酶測定為了確定EC-DG是否模擬葡萄糖磷酸化，進(jìn)行己糖激酶測定。用現(xiàn)成的試劑盒(Sigma Chemical Company)，在UV波長340nm測定EC-DG、葡糖胺和葡萄糖(標(biāo)準(zhǔn))。葡萄糖、EC-DG和葡糖胺顯示出陽性的己糖激酶測定(圖66-68)。
體外細(xì)胞攝取測定通過使用人肺癌細(xì)胞系(A549)進(jìn)行體外細(xì)胞攝取測定。將2μCi的99mTc-EC-DG和18F-FDG加入各含80,000細(xì)胞的孔中。溫育0.5-4小時后，將細(xì)胞用磷酸緩沖鹽水洗3次，然后用胰蛋白酶洗以除下細(xì)胞。然后用γ計數(shù)器計數(shù)細(xì)胞。99mTc-EC-DG的攝取可與FDG相比(圖69)。
d-和l-葡萄糖對細(xì)胞攝取99mTc-EC-脫氧葡萄糖和18F-FDG的影響為了評價99mTc-EC-脫氧葡萄糖的攝取是否通過d-葡萄糖機(jī)制介導(dǎo)，將d-和1-葡萄糖(1mg和2.0mg)以及2μCi的99mTc-EC-脫氧葡萄糖和18F-FDG加入含乳腺或肺癌細(xì)胞(50,000/0.5ml/孔)的各孔中。溫育2小時后，將細(xì)胞用磷酸鹽緩沖鹽水洗3次，然后用胰蛋白酶洗以除下細(xì)胞。用γ計數(shù)器計數(shù)細(xì)胞。
通過加入濃度為1-2.0mg/孔的葡萄糖，觀察到在乳腺和肺癌細(xì)胞中d-葡萄糖引起99mTc-EC-脫氧葡萄糖和18F-FDG攝取減少。但是，l-葡萄糖對兩種藥劑均沒有影響(圖70-73)。所述發(fā)現(xiàn)提示細(xì)胞攝取99mTc-EC-脫氧葡萄糖通過d-葡萄糖機(jī)制介導(dǎo)。
EC-脫氧葡萄糖負(fù)荷對正常大鼠中血糖水平的影響先前的實驗已顯示細(xì)胞攝取99mTc-EC-脫氧葡萄糖與FDG類似。例如，己糖激酶測定(葡萄糖磷酸化)為陽性。99mTc-EC-脫氧葡萄糖的攝取通過d-葡萄糖機(jī)制介導(dǎo)。該研究是為了確定血糖水平是否會受FDG或EC-脫氧葡萄糖誘導(dǎo)并且被胰島素抑制。
在實驗之前使正常健康Fischer344大鼠(重145-155g)禁食過夜。制備的葡糖胺鹽酸鹽、FDG和EC-脫氧葡萄糖的濃度為60％和164％(mg/ml)。用葡萄糖計(Glucometer DEX，Bayer Corporation，Elkhart，IN)測定血糖水平(mg/dl)。研究之前，獲得血糖水平的基線。對每只大鼠(n＝3/組)施用1.2mmol/kg的葡糖胺、FDG和EC-脫氧葡萄糖。在單獨(dú)一項實驗中，對一組大鼠施用EC-脫氧葡萄糖和FDG。30分鐘后施用胰島素(5單位)。每30分鐘從尾靜脈收集血樣直至施用后6小時。
一次性靜脈內(nèi)施用葡糖胺、FDG和EC-脫氧葡萄糖誘導(dǎo)血糖水平。該升高的血糖水平可以被共同施用EC-脫氧葡萄糖或FDG和胰島素所抑制(圖74和75)。
99mTc-EC-DG的組織分布研究關(guān)于攜帶乳腺腫瘤的動物模型，對雌性Fischer344大鼠(150±25g)(Harlan Sprague-Dawley，Indianapolis，IN)將0.1ml來自13762腫瘤細(xì)胞系懸液的乳腺腫瘤細(xì)胞用25-口徑針頭進(jìn)行皮下接種(106細(xì)胞/大鼠，對Fischer大鼠特異性的腫瘤細(xì)胞系)至后腿。植入后14至17天當(dāng)腫瘤達(dá)到大約1cm直徑時進(jìn)行研究。在每次操作前用氯胺酮(10-15mg/大鼠，腹膜內(nèi))麻醉大鼠。
關(guān)于攜帶肺腫瘤的動物模型，對每只無胸腺裸鼠(20-25g)將0.1ml來自A549腫瘤細(xì)胞系懸液的人肺腫瘤細(xì)胞用25-口徑針頭進(jìn)行皮下接種(106細(xì)胞/小鼠)至后腿。在植入后17-21天當(dāng)腫瘤達(dá)到大約0.6cm直徑時進(jìn)行研究。
在組織分布研究中，對每只動物靜脈內(nèi)注射10-20μCi(每大鼠)或1-2μCi(每小鼠)的99mTc-EC或99mTc-EC-DG(n＝3/時間點)。99mTc-EC-DG的注射質(zhì)量為1mg/大鼠。在施用放射性示蹤劑后0.5、2和4小時，處死嚙齒動物并切除所選擇的組織，稱重并進(jìn)行放射性計數(shù)。示蹤劑在各樣本中的生物分布計算為注射的劑量/克組織濕重的百分比(％ID/g)。從相應(yīng)的％ID/g值計算腫瘤/非靶組織計數(shù)密度比。當(dāng)與99mTc-EC(表4)和游離锝(表9)相比時，在99mTc-EC-DG組中腫瘤/組織比作為對時間的函數(shù)而增加(圖76-80)。
閃爍顯像研究在i.v.注射100μCi的放射性示蹤劑后0.5、2和4小時，用配備有低能平行孔準(zhǔn)直儀的γ照相機(jī)獲得閃爍顯像。所用的動物模型是攜帶乳腺腫瘤的大鼠。當(dāng)與99mTc-EC(對照組)相比時腫瘤顯現(xiàn)良好(圖81)。在5名患者中進(jìn)行了初步臨床研究(3例腦腫瘤和2例肺病)。在給藥后1-2小時獲得影像。99mTc-EC-DG能區(qū)分良性和惡性腫瘤。例如，惡性星形細(xì)胞瘤顯示出高攝取(圖82A、82B、83A和83B)。良性腦膜瘤與惡性腦膜瘤相比顯示出攝取差(圖84A和B)。在TB患者中觀察到攝取差(圖85A和圖85B)，但在肺腫瘤中觀察到高攝取(圖86A，圖86B和圖86C)。
本文所公開并要求保護(hù)的所有組合物和/或方法根據(jù)本發(fā)明內(nèi)容可以制備和實行而無須過度的實驗。盡管本發(fā)明的組合物和方法已就優(yōu)選的實施方案進(jìn)行了描述，對本領(lǐng)域技術(shù)人員來說很明顯可以對組合物和/或方法以及所述方法的步驟或步驟順序進(jìn)行變動，而不偏離本發(fā)明的概念、精神和范圍。更具體地說，很明顯在化學(xué)和生理學(xué)上相關(guān)的某些物質(zhì)可以替換本文描述的物質(zhì)，而實現(xiàn)相同或相似的結(jié)果。對本領(lǐng)域的技術(shù)人員顯而易見的所有這些相似的替換和修改被認(rèn)為都在如所附的權(quán)利要求所定義的本發(fā)明的精神、范圍和概念之內(nèi)。
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權(quán)利要求
1.用于顯像的組合物，其包含a)放射性核素標(biāo)記；b)乙二半胱氨酸；和c)與所述乙二半胱氨酸綴合的組織特異性配體；其中所述乙二半胱氨酸與所述放射性核素標(biāo)記形成N2S2螯合物。
2.權(quán)利要求1的組合物，其中所述組織特異性配體可以在乙二半胱氨酸的一條或兩條酸臂上綴合至所述乙二半胱氨酸。
3.權(quán)利要求1的組合物，其中所述放射性核素是99mTc、188Re、186Re、183Sm、166Ho、90Y、89Sr、67Ga、68Ga、111In、183Gd、59Fe、225Ac、212Bi、211At、64Cu或62Cu。
4.權(quán)利要求3的組合物，其中所述放射性核素是99mTc。
5.權(quán)利要求1的組合物，其中所述組織特異性配體是抗癌劑、DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑、抗代謝劑、腫瘤標(biāo)記、葉酸受體引導(dǎo)配體、腫瘤凋亡細(xì)胞引導(dǎo)配體、腫瘤缺氧引導(dǎo)配體、DNA嵌入劑、受體標(biāo)記、肽、核苷酸、器官特異性配體、抗生素、抗真菌劑、抗體、谷氨酸五肽或模擬葡萄糖的藥劑。
6.權(quán)利要求5的組合物，其中所述組織特異性配體是抗癌劑。
7.權(quán)利要求6的組合物，其中所述抗癌劑可以選自氨甲蝶呤、阿霉素、他莫昔芬、紫杉醇、托泊替堪、LHRH、絲裂霉素C、依托泊甙、tomudex、鬼臼毒素、米托蒽醌、喜樹堿、秋水仙堿、內(nèi)抑素、氟達(dá)拉濱、吉西他濱和tomudex。
8.權(quán)利要求5的組合物，其中所述組織特異性配體是腫瘤標(biāo)記。
9.權(quán)利要求8的組合物，其中所述腫瘤標(biāo)記是PSA、ER、PR、CA-125、CA-199、CEA、AFP、干擾素、BRCA1、HER-2/neu、環(huán)磷酰胺、p53、內(nèi)抑素或單克隆抗體(例如反義)。
10.權(quán)利要求5的組合物，其中所述組織特異性配體是葉酸受體引導(dǎo)配體。
11.權(quán)利要求10的組合物，其中所述葉酸受體引導(dǎo)配體是葉酸、氨甲蝶呤或tomudex。
12.權(quán)利要求11的組合物，進(jìn)一步定義為99mTc-EC-葉酸。
13.權(quán)利要求11的組合物，進(jìn)一步定義為99mTc-EC-氨甲蝶呤。
14.權(quán)利要求11的組合物，進(jìn)一步定義為99mTc-EC-tomudex。
15.權(quán)利要求5的組合物，其中所述組織特異性配體是腫瘤凋亡細(xì)胞引導(dǎo)配體或腫瘤缺氧引導(dǎo)配體。
16.權(quán)利要求15的組合物，其中所述組織特異性配體是膜聯(lián)蛋白V、秋水仙堿、硝基咪唑、絲裂霉素或甲硝唑。
17.權(quán)利要求16的組合物，進(jìn)一步定義為99mTc-EC-膜聯(lián)蛋白V。
18.權(quán)利要求16的組合物，進(jìn)一步定義為99mTc-EC-秋水仙堿。
19.權(quán)利要求16的組合物，進(jìn)一步定義為99mTc-EC-硝基咪唑。
20.權(quán)利要求16的組合物，進(jìn)一步定義為99mTc-EC-甲硝唑。
21.權(quán)利要求5的組合物，其中所述組織特異性配體是谷氨酸五肽(分子量750-15,000)。
22.權(quán)利要求21的組合物，進(jìn)一步定義為99mTc-EC-谷氨酸五肽。
23.權(quán)利要求5的組合物，其中所述組織特異性配體是模擬葡萄糖的藥劑。
24.權(quán)利要求23的組合物，其中所述模擬葡萄糖的藥劑是新霉素、卡那霉素、慶大霉素、巴龍霉素、阿米卡星、妥布霉素、奈替米星、核糖霉素、西索米星、小諾米星、利維霉素、地貝卡星、異帕米星、阿司米星或氨基糖甙。
25.權(quán)利要求24的組合物，進(jìn)一步定義為99mTc-EC-新霉素。
26.權(quán)利要求24的組合物，進(jìn)一步定義為99mTc-EC-卡那霉素。
27.權(quán)利要求24的組合物，進(jìn)一步定義為99mTc-EC-氨基糖甙類。
28.權(quán)利要求24的組合物，進(jìn)一步定義為99mTc-EC-慶大霉素。
29.權(quán)利要求24的組合物，進(jìn)一步定義為99mTc-EC-妥布霉素。
30.權(quán)利要求2的組合物，還包含將EC綴合至所述組織特異性配體的接頭。
31.權(quán)利要求30的組合物。其中所述接頭是水溶性肽、谷氨酸、天冬氨酸、乙酸溴乙酯、乙二胺或賴氨酸。
32.權(quán)利要求31的組合物，其中所述組織特異性配體是雌二醇、托泊替堪、紫杉醇、雷洛昔芬、依托泊甙、阿霉素、絲裂霉素C、內(nèi)抑素、膜聯(lián)蛋白V、LHRH、奧曲肽、VIP、氨甲蝶呤或葉酸。
33.合成用于顯像的放射性標(biāo)記的乙二半胱氨酸衍生物的方法，其包括以下步驟a)獲得組織特異性配體；b)將所述配體與乙二半胱氨酸(EC)混合，以得到EC-組織特異性配體衍生物；和c)將所述EC-組織特異性配體衍生物與放射性核素和還原劑混合，以得到放射性核素標(biāo)記的EC-組織特異性配體衍生物，其中EC與放射性核素形成N2S2螯合物。
34.權(quán)利要求33的方法，其中所述還原劑是連二亞硫酸離子、錫離子或亞鐵離子。
35.標(biāo)記用于顯像的組織特異性配體的方法，其包括以下步驟a)獲得組織特異性配體；b)將所述組織特異性配體與乙二半胱氨酸(EC)混合，以得到EC-配體藥物綴合物；和c)使所述藥物綴合物與99mTc在還原劑存在下反應(yīng)，以在乙二半胱氨酸(有或沒有接頭)與99mTc之間形成N2S2螯合物。
36.權(quán)利要求35的方法，其中所述組織特異性配體是抗癌劑、DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑、抗代謝劑、腫瘤標(biāo)記、葉酸受體引導(dǎo)配體、腫瘤凋亡細(xì)胞引導(dǎo)配體、腫瘤缺氧引導(dǎo)配體、DNA嵌入劑、受體標(biāo)記、肽、器官特異性配體、抗生素、抗真菌劑、谷氨酸五肽或模擬葡萄糖的藥劑。
37.權(quán)利要求36的方法，其中所述還原劑是連二亞硫酸離子、錫離子或亞鐵離子。
38.哺乳動物體內(nèi)部位的顯像方法，其包括以下步驟施用有效診斷量的組合物，所述組合物包含99mTc標(biāo)記的乙二半胱氨酸-組織特異性配體綴合物，和檢測來自局限定位在所述部位的99mTc的放射性信號。
39.權(quán)利要求38的方法，其中所述部位是腫瘤。
40.權(quán)利要求38的方法，其中所述部位是感染。
41.權(quán)利要求38的方法，其中所述部位是乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、子宮內(nèi)膜、心臟、肺、腦、肝、葉酸(+)癌癥、ER(+)癌癥、脾、胰腺或小腸。
42.用于制備放射性藥物制劑的試劑盒，所述試劑盒包含密封容器，其中包括預(yù)定量的乙二半胱氨酸-組織特異性配體綴合物組合物以及足量的還原劑以用99mTc標(biāo)記該綴合物。
43.權(quán)利要求42的試劑盒，其中所述乙二半胱氨酸-組織特異性配體綴合物組合物還包含在乙二半胱氨酸與組織特異性配體之間的接頭。
44.權(quán)利要求42的試劑盒，其中所述組織特異性配體是抗癌劑、DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑、抗代謝劑、腫瘤標(biāo)記、葉酸受體引導(dǎo)配體、腫瘤凋亡細(xì)胞引導(dǎo)配體、腫瘤缺氧引導(dǎo)配體、DNA嵌入劑、受體標(biāo)記、肽、器官配體、抗生素、抗真菌劑、谷氨酸五肽或模擬葡萄糖的藥劑。
45.權(quán)利要求43的試劑盒，其中所述組織特異性配體是雌二醇、托泊替堪、紫杉醇、雷洛昔芬、依托泊甙、阿霉素、絲裂霉素C、內(nèi)抑素、膜聯(lián)蛋白V、LHRH、奧曲肽、VIP、氨甲蝶呤或葉酸。
46.權(quán)利要求45的試劑盒，其中所述接頭是水溶性肽、谷氨酸、聚谷氨酸、天冬氨酸、聚天冬氨酸、乙酸溴乙酯、乙二胺或賴氨酸。
47.用于制備閃爍顯像劑的試劑，包含共價連接至99mTc結(jié)合部分的組織特異性配體。
48.權(quán)利要求47的試劑，其中所述99mTc結(jié)合部分是乙二半胱氨酸。
49.權(quán)利要求48的試劑，其中所述組織特異性配體是抗癌劑、DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑、抗代謝劑、腫瘤標(biāo)記、葉酸受體引導(dǎo)配體、腫瘤凋亡細(xì)胞引導(dǎo)配體、腫瘤缺氧引導(dǎo)配體、DNA嵌入劑、受體標(biāo)記、肽、器官特異性配體、抗生素、抗真菌劑、谷氨酸五肽或模擬葡萄糖的藥劑。
50.權(quán)利要求48的試劑，還包含在所述組織特異性配體與所述99mTc結(jié)合部分之間的接頭。
51.確定候選藥物對腫瘤有效性的方法，所述方法包括a)獲得候選藥物；b)將所述候選藥物與乙二半胱氨酸綴合以產(chǎn)生EC-候選藥物綴合物；c)將所述候選藥物綴合物與99mTc螯合以產(chǎn)生99mTc-EC-候選藥物綴合物；d)將所述99mTc-EC-候選藥物綴合物引入腫瘤患者體內(nèi)；并e)對所述患者進(jìn)行顯像以確定候選藥物針對腫瘤的有效性。
全文摘要
本發(fā)明總的來說提供了采用與乙二半胱氨酸(EC)螯合的
文檔編號A61K51/08GK1438899SQ01811605
公開日2003年8月27日 申請日期2001年6月1日 優(yōu)先權(quán)日2000年6月2日
發(fā)明者D·J·楊, 劉君威, 于東防, E·E·金 申請人:德克薩斯州立大學(xué)董事會