專利名稱：皮膚炎治療劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及7-氨基-3-芐基-1-苯基吡啶并〔2,3-d〕嘧啶-2,4-二酮衍生物作為皮膚炎治療劑，特別是作為特應(yīng)性皮膚炎治療劑的醫(yī)藥用途。
皮膚炎是由于各種外因或內(nèi)因引起的皮膚的炎癥反應(yīng)，是皮膚病中最常見的疾病，通常與濕疹意義相同。典型的急性期臨床表現(xiàn)，首先是產(chǎn)生浮腫性紅斑，然后在紅斑上出現(xiàn)丘疹、漿液性丘疹，形成小水泡、膿泡、糜爛、成痂、鱗屑，逐漸向治愈發(fā)展。慢性期則表現(xiàn)為皮膚肥厚、苔蘚化、色素沉著、同時(shí)伴隨搔癢。組織學(xué)觀察急性期的特征是表皮細(xì)胞間浮腫(海綿狀態(tài))。皮膚的范圍包括接觸性皮膚炎、特應(yīng)性皮膚炎、脂溢性皮膚炎、錢幣狀濕疹、Vidal苔蘚、郁滯性皮膚炎、異汗性濕疹、皮脂缺乏性濕疹、自體致敏性濕疹等。
特應(yīng)性皮膚炎是由與特應(yīng)性、即免疫球蛋白E(IgE)相關(guān)的過敏反應(yīng)引起的疾病，但目前對(duì)其發(fā)病的原因還不十分明了。特應(yīng)性皮膚炎的血中IgE值很高，經(jīng)常伴隨嗜酸性粒細(xì)胞增多。特應(yīng)性自體屬于I型，但由于從病理學(xué)的角度來看特應(yīng)性皮膚炎與濕疹、接觸性皮膚炎等的反應(yīng)類似，所以認(rèn)為與Ⅳ性過敏(遲發(fā)型)有關(guān)。特應(yīng)性皮膚炎的發(fā)病或慢性化時(shí)伴隨嗜酸性粒細(xì)胞或淋巴細(xì)胞的浸潤(rùn)的遲發(fā)型反應(yīng)起著重要的作用(Iwamoto等人的論文J.Leukoc.Biol.,52,pp.572-578(1992),Frigas等人的論文J.Allergy.Clin.Immunol.,77,pp.527-537(1986)等)。特應(yīng)性皮膚炎的癥狀是，從發(fā)生后2～6個(gè)月開始出現(xiàn)顏面的濕潤(rùn)性濕疹，然后擴(kuò)大到四肢、軀干。搔癢強(qiáng)烈也是特征。癥狀隨年齡變化，分為乳兒期(至2歲)、幼兒期(2～12歲)、成人期。乳兒期主要限于面部，但軀干的皮膚也隨之發(fā)生干燥，產(chǎn)生毛孔性丘疹(特應(yīng)性皮膚炎)。幼、小兒期發(fā)生病變，發(fā)生干燥，在肘窩、膝窩處發(fā)生肥厚的局部表面(苔癬化)。到12歲左右治愈的情況較多，但也有一直發(fā)展到成人的嚴(yán)重情況，即使有減輕的趨勢(shì)，有時(shí)還會(huì)再發(fā)，有些直至完全治愈需要很長(zhǎng)時(shí)間，也有沒能治愈的例子。用甾族化合物類外用劑(軟膏)涂布治療最有效果，尚未確立能替代該方法的治療方法。
但是，頻繁用于以特應(yīng)性皮膚炎為代表的皮膚炎的治療的甾族化合物制劑雖然臨床效果較好，但有多種副作用。有關(guān)甾族化合物制劑的副作用有多種報(bào)告，在軟膏劑等外用劑中，發(fā)生皮膚菲薄化、萎縮、潮紅等直接對(duì)皮膚的有害作用，是產(chǎn)生社會(huì)問題的重大副作用。鑒于這種作為常用的皮膚炎治療劑，特應(yīng)性皮膚炎治療劑的甾族化合物制劑具有重大的副作用，所以患者和醫(yī)療現(xiàn)場(chǎng)迫切期望一種副作用更少、安全性更高、可以安全使用的藥劑。
本發(fā)明的皮膚炎治療劑使用的化合物，作為具有支氣管擴(kuò)張作用的新型化合物，已經(jīng)申請(qǐng)了專利(特開2000-119272號(hào))。另外與此構(gòu)造相似的具有吡啶并〔2,3-d〕嘧啶骨架的化合物具有抗過敏作用(特開昭63-45279號(hào)公報(bào))、具有7-氨基吡啶并〔2,3-d〕嘧啶骨架的化合物具有支氣管擴(kuò)張作用(特開平8-3046號(hào)、特開平8-3164號(hào)公報(bào)、特開平8-3165號(hào)公報(bào))。
本發(fā)明解決了上述的以往技術(shù)中存在的問題，提供了患者和醫(yī)療機(jī)構(gòu)所需要的、副作用少且安全性高的皮膚炎治療劑、特別是特應(yīng)性皮膚炎治療劑。
本發(fā)明者通過對(duì)7-氨基吡啶并〔2,3-d〕嘧啶衍生物進(jìn)行銳意的研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)7-氨基-3-芐基-1-苯基吡啶并〔2,3-d〕嘧啶-2,4-二酮衍生物作為皮膚炎治療劑、特別是特應(yīng)性皮膚炎治療劑有用，對(duì)皮膚的副作用少，由此完成了本發(fā)明。
本發(fā)明涉及含有下面通式(Ⅰ)表示的化合物或其藥學(xué)允許的鹽或水和物作為有效成份的皮膚炎治療劑，特別是特應(yīng)性皮膚炎治療劑。 式中，R表示氫或鹵素。
上面通式(Ⅰ)的取代基中，R表示氫或鹵素，優(yōu)選氟、氯、溴、碘等鹵素原子。
下面是本發(fā)明優(yōu)選的形式。
(1)含有上述通式(Ⅰ)表示的化合物或其藥學(xué)允許的鹽或水和物作為有效成份的皮膚炎治療劑。
(2)上述(1)記載的皮膚炎治療劑是特應(yīng)性皮膚炎治療劑。
(3)上述(1)或(2)中任一項(xiàng)記載的皮膚炎治療劑是外用制劑。
(4)上述(1)至(3)中任一項(xiàng)記載的皮膚炎治療劑中，含有上述通式(Ⅰ)表示的化合物或其藥學(xué)允許的鹽或水和物作為有效成份，通式(Ⅰ)中R表示氫。
(5)上述(1)至(3)中任一項(xiàng)記載的皮膚炎治療劑中，含有上述通式(Ⅰ)表示的化合物或其藥學(xué)允許的鹽或水和物作為有效成份，通式(Ⅰ)中R在鄰位取代。
(6)上述(5)記載的皮膚炎治療劑中含有上述通式(Ⅰ)表示的化合物或其藥學(xué)允許的鹽或水和物作為有效成份，通式(Ⅰ)中R表示氯。
本發(fā)明的皮膚炎治療劑所使用的上述通式(Ⅰ)表示的化合物中，特別優(yōu)選的化合物如下所示。
7-氨基-3-芐基-1,2,3,4-四氫-1-苯基吡啶并〔2,3-d〕嘧啶-2,4-二酮〔化合物1〕7-氨基-3-(2-氯芐基)-1,2,3,4-四氫-1-苯基吡啶并〔2,3-d〕嘧啶-二酮〔化合物2〕上述化合物中，最優(yōu)選的化合物是7-氨基-3-芐基-1,2,3,4-四氫-1-苯基吡啶并〔2,3-d〕嘧啶-二酮〔化合物1〕。
本發(fā)明皮膚炎治療劑所使用的上述通式(Ⅰ)表示的化合物，可以按照特開昭63-45279號(hào)公報(bào)、特開平8-3046號(hào)公報(bào)、特開平8-3164號(hào)公報(bào)、特開平8-3165號(hào)公報(bào)或特開2000-119272號(hào)公報(bào)的申請(qǐng)說明書中記載的方法，或參照該方法制備，制造方法將在后面的實(shí)施例中詳細(xì)說明。
上述通式(Ⅰ)表示的化合物，當(dāng)存在藥學(xué)上允許的鹽時(shí)，則包括這些鹽類，例如與鹽酸、硫酸、硝酸、氫溴酸、磷酸、高氯酸、硫氰酸、硼酸、甲酸、乙酸、鹵代乙酸、丙酸、乙醇酸、枸櫞酸、酒石酸、琥珀酸、葡糖酸、乳酸、丙二酸、富馬酸、氨茴酸、苯甲酸、桂皮酸、對(duì)甲苯磺酸、萘磺酸、對(duì)氨基苯磺酸等酸的加成鹽。這些鹽可以按照公知的方法與游離的各化合物反應(yīng)制備，也可以相互轉(zhuǎn)換得到。另外，如果存在順反異構(gòu)體、光學(xué)異構(gòu)體、配位異構(gòu)體等立體異構(gòu)體或水和物，或在金屬配位化合物的狀態(tài)下存在時(shí)，本發(fā)明也包括這些立體異構(gòu)體、水和物和配位化合物。
將上述通式(Ⅰ)表示的化合物與適當(dāng)?shù)尼t(yī)藥用載體或稀釋劑組合，可以制得藥物產(chǎn)品，得到本發(fā)明的皮膚炎治療劑。制劑化方法可以按照通常使用的方法進(jìn)行。作為皮膚炎治療劑，最適宜制備成外用制劑如液體制劑、混懸劑、乳劑、硬膏劑、軟膏劑、濕敷劑、搽劑、洗劑等。根據(jù)處方，可以使用上述通式(Ⅰ)表示的化合物的藥學(xué)允許的鹽或水和物的形式，也可以與其他醫(yī)藥活性成份配合使用。外用制劑的調(diào)配方法，在日本藥局方解說書第十三次修訂本(廣川書店發(fā)行，1996年)的制劑總則中進(jìn)行了詳細(xì)的描述。
軟膏劑根據(jù)所使用的基質(zhì)種類不同可以大致分為油脂性軟膏、乳劑性軟膏、水溶性軟膏、混懸性軟膏。這些軟膏劑可以通過將脂肪、脂肪油、羊毛脂、凡士林、石蠟。蠟、樹脂、塑料、醇類、高級(jí)醇類、甘油、水、乳化劑、混懸化劑或其他適當(dāng)?shù)奶砑觿┳鳛樵?，或作為基質(zhì)，再加入本發(fā)明的化合物混合均勻后制備得到。
在制備濕敷物時(shí)，可以將上述通式(Ⅰ)表示的化合物的粉末與精油成分混合成泥狀即可。對(duì)于不同的疾病種類和狀態(tài)，也可以選擇適合治療的上述以外的其他劑型制劑化。
本發(fā)明化合物所希望的給藥量可以根據(jù)給藥對(duì)象、劑型、給藥方法、給藥時(shí)間等不同適當(dāng)設(shè)定。例如通常對(duì)成人來說為了得到所希望的治療效果，可以將含有0.1％-15％的本發(fā)明化合物的軟膏在適當(dāng)患部1日1次或數(shù)次涂布。
下面通過實(shí)施例更具體的說明本發(fā)明，但本發(fā)明并不局限于此。
實(shí)施例始發(fā)原料可以從Aldrich chemical有限公司、Furuca chemical有限公司、Lancasta Synthesis有限公司、Maybridge chemical有限公司或東京化成(株)等購入，原料化合物也可以按照J(rèn).Org.Chem.,16,p.1879(1951),J.Am.Chem.Soc.,75,p.114(1953)等文獻(xiàn)記載的公知的方法制得。
實(shí)施例1軟膏劑的調(diào)制(1)6-氨基-1-苯基尿嘧啶的制備在甲醇(400ml)中混合叔丁醇鉀(67.3g,0.6mol)的溶液中，加入苯基脲(68.1g,0.5mol)和氰基乙酸乙酯，(53ml,0.5mol)。將混合液回流5.5小時(shí)，減壓下蒸發(fā)溶劑至生成殘?jiān)?，將殘?jiān)苡跓崴?2L)中。使溶液成酸性，在溶液中加入冰醋酸，直至得到作為體積較大的略帶黃色的沉淀物的嘧啶衍生物。過濾收集沉淀物，用水洗滌數(shù)次，在50℃下干燥，得到6-氨基-1-苯基尿嘧啶67.4g，收率66％。Mp＞280℃1H-NMR(DMSO-d6)δ:4.67(s,1H),6.08(s,2H),7.31(d,2H,J=7Hz),7.47-7.54(m,3H),10.43(s,1H)IR(KBr):3478,3334,2981,1712,1634,1476,1387,1299,704cm-1MS(EI)m/z:203[M+],160,132,77(2)7-氨基-1,2,3,4-四氫-1-苯基吡啶并[2,3-d]嘧啶-2,4-二酮的制備在叔丁醇(300ml)中混合叔丁醇鉀(18.7g,225mmol)的溶液中，加入6-氨基-1-苯基尿嘧啶(30.5g,150mmol)和3-甲氧基氰化丙烯(25ml,225mmol)。-邊攪拌混合液一邊在110℃下加熱12小時(shí)。蒸發(fā)丁醇，在殘?jiān)屑尤胨?200ml)，用醋酸調(diào)成酸性。過濾收集沉淀物，用熱乙醇洗滌，得到7-氨基-1,2,3,4-四氫-1-苯基吡啶并[2,3-d]嘧啶-2,4-二酮20g，收率53％。Mp＞300℃1H-NMR(DMSO-d6)δ:6.27(d,1H,J=9Hz),6.89(s,2H),7.20-7.87(m,5H),7.88(d,1H,J=9Hz),11.26(s,1H)IR(KBr):3038,1709,1605,1417,789cm-1MS(EI)m/z:254[M+],211,77(3)7-氨基-3-芐基-1,2,3,4-四氫-1-苯基吡啶并[2,3-d]嘧啶-2,4-二酮[化后物1]的制備在六甲基二硅烷基胺(100ml)中加入7-氨基-1,2,3,4-四氫-1-苯基吡啶并[2,3-d]嘧啶-2,4-二酮(3g,12mmol)和硫酸銨(500mg)形成懸浮液，將該懸浮液在室溫、大氣壓下回流24小時(shí)。蒸發(fā)溶劑，將殘?jiān)苡?00ml的L(-)-5,6,7,8-四氫葉酸(THF)中,在該溶液中，一邊回流一邊滴加在THF(14ml,14mmol)中加入了芐基溴(2ml,18mol)和1M的Bu4NF的溶液。攪拌混合液2小時(shí)，減壓下濃縮。殘?jiān)霉枘z柱色譜法精制(苯∶丙酮=5∶1)，用甲醇重結(jié)晶，得到7-氨基-3-芐基-1,2,3,4-四氫-1-苯基吡啶并[2,3-d]嘧啶-2,4-二酮(化合物1)1g，收率27％。Mp 261-262℃1H-NMR(DMSO-d6)δ:5.08(s,2H),6.32(d,1H,J=8Hz),6.98(s,2H),7.22-7.49(m,10H),7.94(d,1H,J=8Hz)IR(KBr):3498,3392,1695,1655,1618,787,700cm-1Anal.Calcd for C20H16N4O2:C,69.76；H,4.68；N,16.27、Found:C,69.81；H,4.77；N,16.13MS(EI)m/z:344[M+],211,91應(yīng)用上述(1)～(3)的方法，得到7-氨基-3-(2-氯芐基)-1,2,3,4-四氫-1-苯基吡啶并[2,3-d]嘧啶-2,4-二酮(化合物2)。
(4)將上述得到的化合物1或2在乳缽上充分懸浮于白凡士林中，制劑成最終含量為0.3％、1％、3％和10％的軟膏劑。作為對(duì)照，準(zhǔn)備只含有基質(zhì)的軟膏。作為陽性對(duì)照，準(zhǔn)備含0.12％戊酸倍氟美松(甾族化合物劑)的軟膏。
實(shí)施例2特應(yīng)性皮膚炎模型動(dòng)物的制備購入7周齡的BALB/c雌性(SPF)小鼠供試驗(yàn)使用。按照田中等人的方法(過敏、46,pp42-48(1997))，將卵白蛋白(最終濃度2μg/ml)與氫氧化鋁凝膠(最終濃度10mg/ml)在生理食鹽水中混懸，取0.5ml于試驗(yàn)開始之日在小鼠腹腔內(nèi)致敏，第14日在相同條件下追加致敏。然后在第28日取20μg/ml的卵白蛋白(生理食鹽水)25μl在小鼠右耳廓皮內(nèi)給藥，誘發(fā)浮腫反應(yīng)。
浮腫反應(yīng)在抗原誘發(fā)第4小時(shí)達(dá)到峰值，經(jīng)24至48小時(shí)后，與僅誘發(fā)(未致敏)的對(duì)照相比發(fā)現(xiàn)顯著的浮腫反應(yīng)。在此模型中誘發(fā)1-4小時(shí)后發(fā)生的反應(yīng)是由肥大細(xì)胞釋放的各種介質(zhì)引起的即發(fā)型浮腫反應(yīng)，與嗜酸性粒細(xì)胞或淋巴細(xì)胞等炎癥細(xì)胞無關(guān)。另外誘發(fā)24至48小時(shí)出現(xiàn)的浮腫是由嗜酸性粒細(xì)胞、嗜中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞的浸潤(rùn)產(chǎn)生的所謂的遲發(fā)型浮腫反應(yīng)。另外抗原誘發(fā)部位的耳廓在誘發(fā)第24小時(shí)出現(xiàn)發(fā)紅反應(yīng)的峰值。發(fā)紅和浮腫同樣是炎癥的重要癥狀之一。該發(fā)紅反應(yīng)的出現(xiàn)機(jī)制還不明確，但從出現(xiàn)的時(shí)程來看屬于遲發(fā)型的發(fā)紅反應(yīng)。所以被誘發(fā)出現(xiàn)即發(fā)型和遲發(fā)型兩種炎癥的這種模型動(dòng)物，作為特應(yīng)性皮膚炎模型動(dòng)物是適當(dāng)?shù)摹Ｔ谙旅嬖囼?yàn)中使用該病態(tài)模型的動(dòng)物供本發(fā)明的皮膚炎治療劑試驗(yàn)使用。
下面實(shí)施例3至6探討了本發(fā)明皮膚炎治療劑的作用和安全性，結(jié)果如表所示。另外對(duì)下面實(shí)施例的統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，結(jié)果以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差來表示，各組間的檢定使用統(tǒng)計(jì)庫(Yukms)，基質(zhì)對(duì)照組和誘發(fā)組、未處置對(duì)照組間通過Student的兩側(cè)unpaired t-test，另外對(duì)照組與試驗(yàn)藥給藥組之間通過Dunnett的兩側(cè)多重比較檢定或Mann-Whitney-test進(jìn)行解析。
實(shí)施例3抗原誘發(fā)小鼠的耳廓浮腫反應(yīng)的抑制作用在按實(shí)施例2誘發(fā)浮腫的小鼠的抗原誘發(fā)部位(右耳廓)上，在誘發(fā)2小時(shí)前和4小時(shí)后分別涂布基質(zhì)(對(duì)照)、被檢藥物(本發(fā)明皮膚炎治療劑、陽性對(duì)照)。誘發(fā)后用DIAL THICKNESS GAUGE(尾崎制作所)經(jīng)時(shí)測(cè)定誘發(fā)耳廓的厚度。反應(yīng)強(qiáng)度為誘發(fā)前測(cè)定的右耳廓的厚度(前值)與誘發(fā)后耳廓的厚度之差，用耳廓厚度增加值來表示。被檢藥物的耳廓浮腫抑制率可以由下式計(jì)算得出。
抑制率(％)=100×(基質(zhì)對(duì)照組耳廓厚度增加值-試驗(yàn)組的耳廓厚度增加值)/(基質(zhì)對(duì)照組耳廓厚度增加值-誘發(fā)組耳廓厚度增加值)結(jié)果如表1和表2所示。本發(fā)明的皮膚炎治療劑與用量成正比地對(duì)抗原誘發(fā)小鼠的耳廓浮腫反應(yīng)具有明顯地抑制作用。
表1
平均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差相結(jié)于基質(zhì)對(duì)照的明顯偏差*p＜0.05,**p＜0.01,(Dunnett多重比較檢定)#p＜0.05,###p＜0.001(Stident’s t-test)表2
平均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差相結(jié)于基質(zhì)對(duì)照的明顯偏差*p＜0.05,**p＜0.01,(Dunnett多重比較檢定)
實(shí)施例4小鼠抗原誘發(fā)發(fā)紅反應(yīng)的抑制作用在按實(shí)施例2誘發(fā)浮腫的小鼠的抗原誘發(fā)部位(右耳廓)上，在誘發(fā)2小時(shí)前和4小時(shí)后分別涂布基質(zhì)(對(duì)照)、被檢藥物(本發(fā)明皮膚炎治療劑、陽性對(duì)照)。用肉眼觀察右耳廓，發(fā)紅的程度按下面標(biāo)準(zhǔn)評(píng)分。
0不發(fā)紅1可確認(rèn)發(fā)紅，顏色為透明紅色或淡紅色，程度小2介于3和1之間3顏色為透明的紅色，面積大結(jié)果如表3所示，本發(fā)明的皮膚炎治療劑對(duì)小鼠抗原誘發(fā)發(fā)紅反應(yīng)有明顯地抑制作用。
表3
平均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差相結(jié)于基質(zhì)對(duì)照的明顯偏差*p＜0.05,***p＜0.001, (Mann-Whitney test)實(shí)施例5對(duì)嗜酸性粒細(xì)胞向小鼠抗原誘發(fā)耳廓浸潤(rùn)的抑制作用嗜酸性粒細(xì)胞對(duì)小鼠耳廓的浸潤(rùn)程度以皮膚組織勻漿產(chǎn)物中嗜酸性過氧化物酶的活性為指標(biāo)進(jìn)行測(cè)定。在按實(shí)施例2誘發(fā)浮腫的小鼠的抗原誘發(fā)部位(右耳廓)上，在誘發(fā)2小時(shí)前和4小時(shí)后分別涂布基質(zhì)(對(duì)照)、被檢藥物(本發(fā)明皮膚炎治療劑、陽性對(duì)照)。誘發(fā)24小時(shí)后切下右耳廓，將組內(nèi)耳廓組織放在1個(gè)池中，按Holliday等人的方法(Toxicology,106,pp.237-242(1996))制作耳廓組織的勻漿物。該勻漿物在20000rpm下離心分離20分鐘(Kubota、KR20000T)，上清液的過氧化物酶活性在o-phenyleneiamine dihydrochlorid(Sigma公司)基質(zhì)上測(cè)定。在492nm處經(jīng)時(shí)測(cè)定吸光度，反應(yīng)曲線在線性關(guān)系的范圍內(nèi)，將對(duì)照組作為100％比較嗜酸性粒細(xì)胞的浸潤(rùn)程度。
本發(fā)明的皮膚炎治療劑，與用量成正比地對(duì)小鼠抗原誘發(fā)耳廓的嗜酸性粒細(xì)胞的浸潤(rùn)具有抑制作用。另外化合物1的3％軟膏的嗜酸性粒細(xì)胞浸潤(rùn)抑制作用與作為陽性對(duì)照的甾族化合物制劑的抑制作用程度相同。
實(shí)施例6反復(fù)涂布對(duì)正常小鼠耳廓厚度的影響將本發(fā)明皮膚炎治療劑或陽性對(duì)照(甾族化合物制劑)在正常小鼠的右耳廓上1日涂布2次，共計(jì)9次，在最終涂布結(jié)束2小時(shí)后測(cè)定耳廓的厚度。
結(jié)果如表4所示。如上述試驗(yàn)結(jié)果所示，本發(fā)明皮膚炎治療劑的3％軟膏具有優(yōu)良的耳廓浮腫抑制作用、發(fā)紅抑制作用、嗜酸性粒細(xì)胞浸潤(rùn)抑制作用，另外反復(fù)涂布高濃度的10％軟膏，對(duì)皮膚沒有造成任何影響，與陽性對(duì)照(甾族化合物制劑)反復(fù)涂布時(shí)耳廓厚度相比顯著減少。
表4
平均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差相結(jié)于基質(zhì)對(duì)照的明顯偏差**p＜0.001,(Dunnett多重比較檢定)實(shí)施例7對(duì)豚鼠腹腔嗜酸性粒細(xì)胞游離的抑制作用使用Boyden Chamber法探討本發(fā)明化合物對(duì)LTB4引起的豚鼠腹腔嗜酸性粒細(xì)胞游離的作用。即使用Hartley系雄性豚鼠，在被檢藥劑(本發(fā)明皮膚炎治療劑)的存在或不存在下，相對(duì)于10-7M的LTB4，在37℃下使按常法調(diào)制的豚鼠腹腔嗜酸性粒細(xì)胞游離2小時(shí)。固定游離細(xì)胞，進(jìn)行吉姆薩染色后，用400倍的顯微鏡測(cè)量10個(gè)視野的游離細(xì)胞數(shù)。將該實(shí)驗(yàn)進(jìn)行數(shù)次，按下式求出各實(shí)驗(yàn)中的抑制率，再以該抑制率為基礎(chǔ)，利用最小二乘法求出回歸曲線的公式，算出50％抑制濃度(IC50)。
抑制率(％)=100×(對(duì)照組的嗜酸性粒細(xì)胞的游離數(shù)-被檢藥劑的嗜酸性粒細(xì)胞的游離數(shù))/(對(duì)照組的嗜酸性粒細(xì)胞的游離數(shù)-自發(fā)嗜酸性粒細(xì)胞游離數(shù))被檢藥劑使用化合物1，進(jìn)行5次實(shí)驗(yàn)。其結(jié)果，化合物1的IC50為1.9±0.4μmol/L，顯示出非常強(qiáng)的嗜酸性粒細(xì)胞游離的抑制作用。
實(shí)施例8磷酸二酯酶阻礙作用按常法研究本發(fā)明化合物對(duì)磷酸二酯酶(PDE)同工酶的阻礙作用。研究本發(fā)明化合物對(duì)來自人血小板的Ⅱ型磷酸二酯酶(PDEⅡ)、來自人血小板的Ⅲ型磷酸二酯酶(PDEⅢ)、來自人U937細(xì)胞的Ⅳ型磷酸二酯酶(PDEⅣ)、來自人血小板的Ⅴ型磷酸二酯酶(PDEⅤ)的阻礙作用。
化合物1為100μm時(shí)，對(duì)PDEⅡ、Ⅲ、Ⅳ和Ⅴ分別表現(xiàn)出6％、22％、82％、15％的抑制，對(duì)PDEⅣ表現(xiàn)出選擇性阻礙作用?；衔?對(duì)PDEⅠ的阻礙作用與用量成正比。
如上述動(dòng)物實(shí)驗(yàn)所示，7-氨基-3-芐基-1-苯基吡啶并[2,3-d]嘧啶-2,4-二酮衍生物可以顯著且與用量成正比地抑制作為特應(yīng)性皮膚炎模型的抗原誘發(fā)小鼠耳廓浮腫反應(yīng)，而且可以顯著抑制與其相伴發(fā)生的小鼠抗原誘發(fā)發(fā)紅反應(yīng)。此外還具有抑制嗜酸性粒細(xì)胞向小鼠抗原誘發(fā)耳廓浸潤(rùn)的作用、抑制嗜酸性粒細(xì)胞向豚鼠腹腔游離的作用、選擇性阻礙PDEⅣ的作用。因此，本發(fā)明的7-氨基-3-芐基-1-苯基吡啶并[2,3-d]嘧啶-2,4-二酮衍生物作為特應(yīng)性皮膚炎、濕疹、接觸皮膚炎等皮膚炎治療劑有用。
另外，在使用甾族化合物劑時(shí)發(fā)生的皮膚菲薄化等對(duì)皮膚直接的有害作用(副作用)在使用本發(fā)明的皮膚炎治療劑時(shí)完全沒有發(fā)生，安全性極高。
如上所述，本發(fā)明的皮膚炎治療劑作為特應(yīng)性皮膚炎、皮膚炎治療劑有用，副作用少，安全性高，可以解決現(xiàn)有技術(shù)的問題，作為患者和醫(yī)療現(xiàn)場(chǎng)迫切需要的藥物有用性極高。
權(quán)利要求
1．含有下列通式(Ⅰ)表示的化合物或其藥學(xué)允許的鹽或水和物作為有效成份的皮膚炎治療劑，
2．權(quán)利要求1記載的皮膚炎治療劑，是特應(yīng)性皮膚炎治療劑。
3．權(quán)利要求1或2記載的皮膚炎治療劑，是外用制劑。
全文摘要
本發(fā)明提供含有通式(Ⅰ)表示的化合物或其藥學(xué)上允許的鹽或水和物為有效成分的皮膚炎治療劑,特別是特應(yīng)性皮膚炎治療劑。式中,R表示氫或鹵素。
文檔編號(hào)A61P17/00GK1321465SQ01116389
公開日2001年11月14日 申請(qǐng)日期2001年4月13日 優(yōu)先權(quán)日2000年4月13日
發(fā)明者吉井春夫, 藤田明弘 申請(qǐng)人:日本臟器制藥株式會(huì)社