專利名稱：牙周病治療藥的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及藥物，具體涉及牙周組織局部注射用的含有雙膦酸衍生物或其鹽作為有效成分的治療牙周病的藥物組合物。
背景技術(shù)：
牙周病是慢性牙齦炎發(fā)展的炎癥波及到牙齦以外牙周組織的疾病，它伴隨有牙周組織的進(jìn)行性破壞。臨床上觀察到有牙齦慢性炎癥、牙周袋出血、牙槽骨吸收等，已經(jīng)知道，隨著破壞的進(jìn)行，牙齒產(chǎn)生松動(dòng)和移動(dòng)，最終導(dǎo)致牙齒自然脫落或需要拔牙。治療牙周病的方法有除去作為病因物質(zhì)的牙斑和牙石，以牙齦再附著為目的通過(guò)牙根面平整術(shù)和牙周外科手術(shù)來(lái)除去變性壞死的組織等(醫(yī)齒藥出版社株式會(huì)社出版《齒周治療學(xué)》第2版，215-226頁(yè)(1992))。在牙周病的藥物治療中，以除去與牙周炎有關(guān)的細(xì)菌為目的，主要使用四環(huán)素系抗生素。然而，直接作用于牙槽骨吸收(牙槽骨吸收是牙周病的重要臨床表現(xiàn))的藥物目前還沒(méi)有，因此有這樣作用的藥物預(yù)計(jì)可用作新的牙周病治療藥。
雙膦酸鹽(下稱BP)是機(jī)體內(nèi)穩(wěn)定的焦磷酸的結(jié)構(gòu)類似物，它有異位鈣化抑制作用和骨吸收抑制作用等生物學(xué)作用。BP已經(jīng)在臨床上用作惡性腫瘤伴隨的高鈣血癥、骨Paget病、骨質(zhì)疏松癥等的治療藥，由于其藥理作用，預(yù)計(jì)它對(duì)牙周病引起的牙槽骨吸收有作用。BP在大鼠中抑制牙周組織破壞的作用已被報(bào)道(J.Dent.Res.11，1430-1433(1988))。另外，最近已報(bào)道，阿侖膦酸鈉(第2代BP)在猴和狗牙周病模型中經(jīng)口給藥后抑制了牙槽骨的破壞(J.Periodontol.63，825-830(1992)；J Periodontol.66(3)，211-217(1995))。另外，已經(jīng)報(bào)道英卡膦酸二鈉(incardronate disodium，化學(xué)名稱為環(huán)庚基氨基亞甲基二膦酸二鈉單水合物；下文簡(jiǎn)稱為英卡膦酸鈉)是具有強(qiáng)效骨吸收抑制作用的第3代BP(日本專利公開(kāi)公報(bào)平7-629號(hào)公報(bào))，在倉(cāng)鼠牙周病模型中有牙槽骨損失抑制作用(齒科基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)會(huì)雜志，36(5)，510-519(1994))，而且，通過(guò)各種皮下或口服給藥后發(fā)現(xiàn)，在犬牙周病模型中有抑制牙槽骨損失和改善附著水平的作用(J.Periodont.Res.33，196-204(1998))。
在這些經(jīng)口給藥、皮下注射以及靜脈注射等全身給藥的情況下，認(rèn)為通過(guò)BP移行對(duì)牙槽骨患部顯示有藥效的濃度會(huì)出現(xiàn)骨吸收抑制作用，但同時(shí)BP也同樣移行至其它組織(尤其是全身骨組織)，同樣出現(xiàn)骨吸收抑制作用，這可能有不好的作用。
另一方面，已經(jīng)嘗試局部給予BP；例如，據(jù)報(bào)道(J.Dent.Res.73(8)1478-1484(1994)；Orthod.Waves 57(5)307-317(1998))，在大鼠臼齒實(shí)驗(yàn)性移動(dòng)模型中，將利塞膦酸鈉(risedronate)局部給予毗鄰第一臼齒的骨膜附近區(qū)域、同時(shí)將帕米膦酸二鈉局部給予腭側(cè)粘膜下是有效的。
然而，至今沒(méi)有人報(bào)道臨床上可利用的BP局部給藥用牙槽骨吸收抑制劑。實(shí)際上，大鼠和人的牙周組織的形狀、大小和刺激性等不同，因此很難從大鼠中的上述信息來(lái)預(yù)測(cè)人牙周組織周圍的合適的局部給藥濃度、給藥量、給藥方法等。
雖然WO93/11774號(hào)公報(bào)中記載了牙周病治療藥阿侖膦酸，但是其主要的給藥方法是通過(guò)口服或靜脈注射來(lái)全身給藥。關(guān)于其局部給藥，雖記載了能直接涂覆在牙齒和牙齦的炎癥部位上，但是卻一點(diǎn)也沒(méi)有給藥量、給藥部位等具體的揭示，而只不過(guò)暗示有可能性而已。而且，直接涂到牙齒和牙齦炎癥部位上的方法，不僅BP向牙槽骨的轉(zhuǎn)移性很低，而且還暗示有和唾液一起經(jīng)口全身給藥的可能性，因此不能預(yù)期給藥有牙槽骨選擇性。
另外，還有報(bào)道稱，具有氨基的BP具有局部刺激性(Lancet，348，NO.9023，345-346(1996)；Br.Med.J.，295，No.6609，1301-1305(1987))，即，還不明白能否通過(guò)向人牙周組織周圍局部給予BP來(lái)治療牙周病。
迫切希望創(chuàng)制出有用的局部給藥用藥物，該藥物具有牙槽骨選擇性骨吸收抑制作用、給藥方法簡(jiǎn)便、臨床上人用的實(shí)用性高、且是以BP作為有效成分的牙周病治療藥。
發(fā)明揭示本發(fā)明者在具有與人類似的牙周組織的犬牙周病模型中，使用經(jīng)口給藥確認(rèn)有牙周病治療作用的英卡膦酸鈉，在研究局部給藥用牙周病治療藥的時(shí)候，意外發(fā)現(xiàn)，當(dāng)用牙科領(lǐng)域中以往用于注射麻醉藥的牙槽粘膜刺入法來(lái)局部注射BP時(shí)，BP能選擇性地轉(zhuǎn)移至牙槽骨，表現(xiàn)出良好的牙槽骨吸收抑制作用和牙周病治療作用，從而完成了本發(fā)明。另外，該給藥方法是操作簡(jiǎn)便、給患者的負(fù)擔(dān)少、臨床實(shí)用性高的局部給藥方法。
因此，本發(fā)明涉及一種用來(lái)治療牙周病的藥物組合物，它含有雙膦酸衍生物或其鹽以及藥學(xué)上可接受的載體，其特征在于它用牙槽粘膜刺入法來(lái)進(jìn)行局部注射。本發(fā)明的用牙槽粘膜刺入法來(lái)局部注射的藥物組合物的注射體積宜為每個(gè)注射部位100-300微升。另外，藥物組合物中的雙膦酸衍生物或其鹽宜為英卡膦酸或其鹽，更佳的是藥物組合物中英卡膦酸或其鹽的濃度為3.33-100微克/毫升。英卡膦酸或其鹽的給藥量宜為每個(gè)給藥部位0.5-15微克。
另外，根據(jù)本發(fā)明者的研究，犬牙周組織易受BP局部刺激性的影響，由于在達(dá)到和全身給藥時(shí)牙槽骨濃度相同的牙槽骨濃度的局部給藥濃度下有局部刺激性，不能得到良好的治療效果，因此預(yù)計(jì)將含有BP的牙周病治療藥局部給予人的牙周組織(與犬的牙周組織相似)會(huì)由于該局部刺激性而很困難。
然而，在本發(fā)明者進(jìn)行進(jìn)一步研究時(shí)，出人意料地發(fā)現(xiàn)，當(dāng)以遠(yuǎn)小于按全身給藥時(shí)的牙槽骨濃度所預(yù)計(jì)的給藥量的劑量將英卡膦酸鈉局部注射入牙周組織時(shí)，有良好的牙槽骨吸收抑制作用。
因此，本發(fā)明的另一實(shí)施方案是一種作為人牙周組織局部注射用的治療牙周病的藥物組合物，它含有雙膦酸衍生物或其鹽和藥學(xué)上可接受的載體，前者的含量小得足以使在人牙周組織給藥部位的局部刺激性能被接受，而又足以通過(guò)局部注射來(lái)顯現(xiàn)牙槽骨吸收抑制作用。具體地說(shuō)，該組合物含有3.33-100微克/毫升的英卡膦酸或其鹽以及藥學(xué)上可接受的載體。
另外，本發(fā)明還涉及含有本發(fā)明藥物組合物的牙科用注射用藥筒。
本發(fā)明另外較佳的實(shí)施方案是一種治療患者牙周病的方法，其特征在于通過(guò)牙槽粘膜刺入法來(lái)給予有效量的雙膦酸衍生物或其鹽；一種治療患者牙周病的方法，其特征在于，將含有3.33-100微克/毫升濃度的英卡膦酸或其鹽的注射液以每個(gè)部位100-300微升局部注射入患者牙周組織中；雙膦酸衍生物或其鹽用來(lái)制造通過(guò)牙槽粘膜刺入法局部注射用的牙槽骨吸收抑制劑的應(yīng)用。
下面將詳細(xì)描述本發(fā)明。
本發(fā)明術(shù)語(yǔ)“雙膦酸衍生物或其鹽”指具有以下特征的化合物或其鹽它是在機(jī)體內(nèi)穩(wěn)定的焦磷酸的結(jié)構(gòu)類似物，具有2個(gè)膦酸殘基，具有骨吸收抑制作用。已知作為骨吸收抑制劑的雙膦酸衍生物例如有氯膦酸、替魯膦酸(tiludronate)、奈立膦酸(neridronate)、帕米膦酸二鈉、英卡膦酸、阿侖膦酸、奧帕膦酸(olpadronate)、EB-1053、利塞膦酸(risedronate)、伊班膦酸(ibandronate)、唑來(lái)膦酸(zoledronate)、YM529(1-羥基-2-咪唑并[1，2-a]吡啶-3-基)乙烷-1，1-雙膦酸)及其鹽。較佳的是英卡膦酸、阿侖膦酸、奧帕膦酸、EB-1053、利塞膦酸、伊班膦酸、唑來(lái)膦酸和YM529，特別佳的是英卡膦酸。
本發(fā)明中的“英卡膦酸或其鹽”是選自英卡膦酸及其藥學(xué)上可接受的鹽的化合物，包括英卡膦酸鈉(英卡膦酸二鈉)。其中也包括它們的水合物、溶劑化物和多晶形物質(zhì)。較佳的是英卡膦酸二鈉。
本發(fā)明者用英卡膦酸鈉研究了使BP選擇性地向牙槽骨移行的實(shí)用的給藥方法。牙周病治療藥通常所采用的給藥方法例如有，附著貼合于牙齦，BP向牙槽骨的轉(zhuǎn)移很少，可能有牙齦刺激性。另外，向牙周袋內(nèi)給藥則更是由于與牙槽骨有一定距離而轉(zhuǎn)移性較低，而且藥物可能從牙周袋中漏到口腔內(nèi)，缺乏實(shí)用性。
本發(fā)明者發(fā)現(xiàn)，向牙槽骨周圍的牙周組織(即牙齦、牙槽粘膜、舌下粘膜、腭部等)局部注射作為使藥物移行至牙槽骨的方法是最好的。然而，由于牙槽骨周圍能實(shí)際局部注射藥物的牙周組織很少，能給予的容量有限，而且患者可能會(huì)有疼痛，因此該給藥方法需要進(jìn)一步改善。
因此，本發(fā)明者發(fā)現(xiàn)，利用牙槽粘膜刺入法(牙科領(lǐng)域中只有浸潤(rùn)麻醉法采用該方法)，能夠容易在牙槽骨附近以每個(gè)部位100-300微升局部注射含有BP的牙周病治療藥。而且，如下文所述，能使有效量的BP選擇性地轉(zhuǎn)移至牙槽骨，從而得到良好的牙槽骨吸收抑制效果或牙周病治療效果，而且其操作簡(jiǎn)便，對(duì)患者的負(fù)擔(dān)少。即，這是世界上首次發(fā)現(xiàn)牙槽粘膜刺入法是臨床上實(shí)用性高的、向人牙周組織局部給予含BP的牙周病治療藥的方法。
本發(fā)明中的“牙槽粘膜刺入法”指，將針頭非垂直地而是在平躺位置刺入毗鄰牙齦的柔順的口腔粘膜部分(

圖1所示為牙槽粘膜或舌下粘膜)，較佳的在與牙齦的接界附近，將藥物溶液注射入牙槽骨的骨膜和牙槽粘膜之間。具體地說(shuō)，在向牙齒頰側(cè)注射的場(chǎng)合，使針平躺刺入圖1所示的牙槽粘膜、較佳的是粘膜齦接界附近，在舌側(cè)時(shí)，使針平躺刺入舌下粘膜、較佳的是靠近顎骨部分，分別注入藥液。有關(guān)針刺入的角度，在可能的范圍內(nèi)接近水平的角度是有利的，這不太會(huì)給患者帶來(lái)疼痛，而且藥液容易注射。較佳的是以相對(duì)于粘膜部分10°以下的平躺方式刺入。但是，由于上顎的腭側(cè)沒(méi)有牙槽粘膜或與其類似的柔順粘膜，因此在離開(kāi)牙齒顎部約1厘米的部位刺入針，將藥劑注入。該方法也作為本發(fā)明的牙槽粘膜刺入法的一個(gè)實(shí)施方案包括在本發(fā)明內(nèi)。
該牙槽粘膜刺入法(也稱為水平法或粘膜下注射法)是牙科領(lǐng)域中所用的浸潤(rùn)麻醉法中的一種，是以往公知的注射方法。由于麻醉藥不是注入牙齦而是在柔順的牙槽粘膜下(如牙齦和頰之間的移行部)，因此該方法很簡(jiǎn)便，耗時(shí)少，只是在最初刺入時(shí)產(chǎn)生疼痛，因而知道該方法是對(duì)施藥醫(yī)師以及患者負(fù)擔(dān)均少的方法(醫(yī)齒藥出版株式會(huì)社出版《牙周病治療學(xué)》第2版，325-326頁(yè)(1992年))。作為該浸潤(rùn)麻醉法之一實(shí)施的稱為牙槽粘膜刺入法、水平法或粘膜下注射法的注射方法是本發(fā)明的“牙槽粘膜刺入法”的較佳方案。
由于醫(yī)齒藥出版株式會(huì)社出版的《牙周病治療學(xué)》第2版，325-326頁(yè)(1992年)中揭示了牙槽粘膜刺入法的較好操作方法，因此下文對(duì)其記載作了摘錄，但是本發(fā)明的牙槽粘膜刺入法不局限于這些記載。
“在進(jìn)行時(shí)，首先用手指或鏡壓住嘴唇或頰，使口腔前庭露出，使針?lè)谴怪倍撬降卮倘虢Y(jié)締組織寬松的柔順的粘膜(牙槽粘膜)僅數(shù)毫米。逐漸開(kāi)始釋放液體，在粘膜下形成水泡，然后使針平躺，繼續(xù)向遠(yuǎn)端釋放，形成堤狀隆起。(省略)在舌側(cè)，刺入舌下粘膜靠近腭骨的部分，形成相似的隆起。另外，在上顎的腭側(cè)，由于沒(méi)有柔順的粘膜，因此在距離牙顎部約1厘米的部位間隔1厘米進(jìn)行通常的浸潤(rùn)麻醉?！北景l(fā)明者先前在犬牙周病模型中確認(rèn)了英卡膦酸鈉的經(jīng)口給藥有依賴于劑量的牙槽骨吸收抑制作用，其合適的劑量為1.0毫克/千克(J.Periodont.Res.33，196-204(1998))。隨后，確認(rèn)此情況下牙槽骨內(nèi)的藥物濃度約為4微克/克。
另外，在大鼠齒移動(dòng)模型中，還發(fā)現(xiàn)10或100微克/50微升/千克(藥物濃度為200或2000微克/毫升)的英卡膦酸鈉給予牙齦內(nèi)(實(shí)際上在牙齦周圍)，10微克/50微升/千克組(牙槽骨內(nèi)平均濃度為0.6微克/克)沒(méi)有見(jiàn)到效果，而100微克/50微升/千克組(牙槽骨內(nèi)平均濃度為14微克/克)有良好的牙齒復(fù)發(fā)抑制作用，且在肉眼沒(méi)有觀察到有局部刺激性。
然而，與上述知識(shí)相反，在采用有與人相似牙周組織的犬模型試驗(yàn)中，如下文試驗(yàn)例所示，以提供和經(jīng)口給藥相同程度的牙槽骨內(nèi)濃度50微克或150微克/150微升/部位(部位每個(gè)給藥部位；藥物濃度為333或1000微克/毫升)的牙周組織局部注射未發(fā)現(xiàn)有牙槽骨吸收抑制作用。而且，后者觀察到有顯著的局部刺激性，認(rèn)為這是源于英卡膦酸鈉的局部刺激性。實(shí)際上，由于牙周組織很少，可注入的藥劑量有限，因此預(yù)計(jì)用不產(chǎn)生局部刺激性的低濃度注射劑很難達(dá)到上述牙槽骨內(nèi)藥物濃度。
本發(fā)明者進(jìn)行了深入的研究，結(jié)果意外發(fā)現(xiàn)，用牙槽粘膜刺入法來(lái)局部注射給藥量比上述經(jīng)口給藥時(shí)達(dá)到的牙槽骨內(nèi)濃度的量少得多的英卡膦酸鈉時(shí)，發(fā)現(xiàn)有良好的牙槽骨吸收抑制作用。即，發(fā)現(xiàn)存在這樣的BP濃度(就英卡膦酸鈉而言為0.5-15微克/150微升，即，藥物濃度為3.33-100微克/毫升)，其具有臨床上可接受的低局部刺激性，而且顯現(xiàn)出充分的牙槽骨吸收抑制作用。英卡膦酸鈉以外的其它BP的最適BP濃度可用犬、猴等有與人相似的牙周組織的動(dòng)物模型通過(guò)BP局部注射(較佳的是用牙槽粘膜刺入法進(jìn)行局部注射試驗(yàn))確認(rèn)局部刺激性和牙槽骨吸收抑制作用來(lái)找到。再有，給藥次數(shù)和給藥間隔與局部刺激性的表現(xiàn)有關(guān)，因此應(yīng)該適當(dāng)考慮。
就本發(fā)明的較佳實(shí)施方案中的一個(gè)—英卡膦酸鈉而言，3.33-100微克/毫升、更佳為10-80微克/毫升、還要佳為25-75微克/毫升的藥物濃度是具有臨床上可接受的低局部刺激性且用局部注射會(huì)表現(xiàn)出充分的牙槽骨吸收抑制作用的最適濃度。該濃度的英卡膦酸鈉在每個(gè)給藥部位可局部注射100-300微升，較佳的150-200微升。給藥可在每個(gè)患齒的頰側(cè)和舌側(cè)的任一側(cè)(較佳的是兩側(cè))進(jìn)行?？梢淮谓o藥，或在1天或數(shù)周間隔內(nèi)給予2-10次。較佳的是，在3-14日間隔內(nèi)給予2-10次。更佳的給藥方案應(yīng)根據(jù)藥物濃度來(lái)適當(dāng)選擇，在低濃度的情況下宜縮短給藥間隔，增加次數(shù)，而在高濃度情況下宜延長(zhǎng)給藥間隔，減少給藥次數(shù)。例如，在對(duì)每個(gè)患齒2側(cè)給予1.5微克/150微升至200微升/部位的情況下，宜在1周間隔內(nèi)給藥3-9次；在對(duì)每個(gè)患齒2側(cè)給予5微克/150微升至200微升/部位的情況下，宜在1周間隔內(nèi)給藥3-6次；另外，在對(duì)每個(gè)患齒2側(cè)給予15微克/150微升至200微升/部位的情況下，宜在2周間隔內(nèi)給藥2-3次。
上述牙槽粘膜刺入法適合作為局部注射方法，但是在用牙間乳頭刺入法等其它牙周組織注射方法的情況下，如果每個(gè)給藥部位可注射100-300微升，則可在這些濃度下表現(xiàn)出效果。因此，這些注射方法也包括在本發(fā)明的局部注射方法中。
本發(fā)明的局部注射用牙槽骨吸收抑制劑包括有無(wú)菌的水性或非水性的溶液、懸浮劑和乳劑。作為水性溶液例如可含有注射用蒸餾水以及生理鹽水。作為非水性溶液劑，例如有丙二醇、聚乙二醇、橄欖油等植物油、乙醇等醇類、多氧乙基醚等。該組合物還可含有防腐劑、潤(rùn)濕劑、乳化劑、分散劑、穩(wěn)定劑、助溶劑、等滲劑(例如木糖醇、甘露糖醇、山梨糖醇或乙二醇)等輔料。它們可通過(guò)經(jīng)截留細(xì)菌的濾膜過(guò)濾、與殺菌劑混合或用輻照來(lái)進(jìn)行消毒，或在無(wú)菌條件下制造。另外它們也可這樣使用，先制成無(wú)菌的固體組合物，然后在使用前溶解在無(wú)菌水或注射用無(wú)菌溶劑中。本發(fā)明的牙槽骨吸收抑制劑，尤其是作為牙科用注射用藥筒制劑，是臨床上使用所希望的。
附圖簡(jiǎn)述圖1是牙齦周圍組織的示意圖。
圖2是實(shí)施例1中牙槽嵴高度的評(píng)價(jià)方法。該圖中的符號(hào)具有以下含義。
線aP4和P3的齒冠頂部的連接線；線b和線c通過(guò)P4齒冠部近中心側(cè)及P3齒冠部遠(yuǎn)中心側(cè)并與線a垂直的線；b和c線a和線b及c的交點(diǎn)(基準(zhǔn)點(diǎn))；b′和c′牙槽嵴和線b及線c的交點(diǎn)。
圖3顯示了實(shí)施例1中英卡膦酸鈉對(duì)牙槽骨損失的作用。該圖顯示了結(jié)扎后不同時(shí)間的牙槽骨損失的長(zhǎng)度平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤差。例子中的括號(hào)表示每組中的例數(shù)。*和**表示對(duì)于對(duì)照組有顯著差異(*p＜0.05，**p＜0.01，用Dunnett多重比較檢驗(yàn))。
實(shí)施發(fā)明的最佳方式下文用實(shí)施例顯示本發(fā)明的牙周病治療用藥物組合物的效果以及配方例。另外，本發(fā)明范圍不局限于以下實(shí)施例。
實(shí)施例1犬牙周病模型試驗(yàn)(方法)采用30只雌性小獵犬(1-2年齡，分組時(shí)體重7.9-13.7千克)，在結(jié)扎的前日給予含水的Gains Pachen(AGF)軟飼料。用鹽酸賽拉嗪(Bayer)和戊巴比妥麻醉，用手術(shù)刀將下顎左右第2前臼齒(下稱P2)和第3前臼齒(下稱P3)間、P3和第4前臼齒(下稱P4)間、P4和第1臼齒(下稱M1)間的牙齦切開(kāi)，用骨膜剝離器在P3和P4制作出牙周袋。在P3和P4的牙頸部用絲線(手術(shù)用縫線；Nescosuture(3-0)，Morita)作雙重結(jié)扎，制作出牙周病模型。此時(shí)，用牙鉆在P4的齒冠頰側(cè)和舌側(cè)的牙齦緣部制作固定點(diǎn)。由于牙周局部狀況(牙石附著狀況和牙周狀況)幾乎均一，因此不進(jìn)行刮牙和刷牙，根據(jù)全身狀況(體重和年齡)將各動(dòng)物分成以下5組1)對(duì)照組生理鹽水；2)每部位0.5微克英卡膦酸鈉組；3)每部位1.5微克英卡膦酸鈉組；4)每部位5.0微克英卡膦酸鈉組；和5)每部位15微克英卡膦酸鈉組。
在各組進(jìn)行手術(shù)后即開(kāi)始給藥。將英卡膦酸鈉(注射液，山之內(nèi)制藥(株)制)用生理鹽水溶解并稀釋，配制成給藥液體積為150微升/部位。給藥在剛結(jié)扎后、結(jié)扎后1和給藥后2周進(jìn)行，共計(jì)3次。給藥用與玻璃制微量注射器相連的27G注射針通過(guò)牙槽粘膜刺入法來(lái)實(shí)施。將注射針?biāo)讲迦肷陨钥拷Y(jié)扎后牙齒的牙槽粘膜與牙齦之間接界部位(粘膜齦接界)的牙槽粘膜部位中，將150微升藥劑注入牙槽骨骨膜上和牙槽粘膜間。給藥在頰側(cè)和舌側(cè)同時(shí)實(shí)施(每顎有4個(gè)部位共計(jì)600微升)。最后一次給藥后13周，放血處死動(dòng)物，取含有左右P3和P4的下顎以及肋骨，以測(cè)定骨內(nèi)濃度。
(用標(biāo)準(zhǔn)化X射線照相評(píng)價(jià)牙槽骨損失的抑制效果)采用標(biāo)準(zhǔn)的X射線照相法(J.Periodontol.33，164-171(1962))，X射線對(duì)照射對(duì)象的照射方向以及膠片位置始終保持恒定，這樣可在重復(fù)照相時(shí)獲得同一個(gè)體同一部位在相同條件下的X射線相片。此時(shí)，為了評(píng)價(jià)左右P3和P4的牙槽骨損失，在左右下顎骨的切齒和M1之間用丙烯酸樹(shù)脂形成帽狀物(cap)，將該帽狀物與膠片盒組合，制成固定裝置。
動(dòng)物用鹽酸賽拉嗪和鹽酸氯胺酮(Ketalar，Sankyo)麻醉，將牙科用膠片(UltraSpeed DF58，Kodak)裝在固定裝置的膠片盒上，用牙科用X射線拍攝裝置(Super Max70，HD-1型，Morita制作所)拍照。
用圖2所示的評(píng)價(jià)方法測(cè)定牙槽嵴的高度。即，在實(shí)體顯微鏡(物鏡×1，目鏡×10)下測(cè)定X射線膠片，X射線膠片用OHP板覆蓋，用陶瓷刀在OHP板上記下線a、線b和線c，得到線b和線c上的各2點(diǎn)b，b′和c，c′。將b-b′和c-c′間距離分別定義為從基準(zhǔn)點(diǎn)(b和c點(diǎn))到牙槽嵴的距離。將各個(gè)體結(jié)扎時(shí)b-b′和c-c′間距之和與各周時(shí)間點(diǎn)的b-b′和c-c′間距之和相減后，取差值的平均值表示成牙槽骨損失的長(zhǎng)度。
(臨床評(píng)價(jià)的測(cè)定)(1)袋的深度(探測(cè)深度；PD)牙周袋深度的測(cè)定方法根據(jù)J.Clin.Periodontol.4，173-190(1977)中的4點(diǎn)測(cè)定法來(lái)進(jìn)行。
(2)牙齦退縮至于牙齦退縮的長(zhǎng)度，測(cè)定各個(gè)體各周時(shí)間點(diǎn)P4頰側(cè)和舌側(cè)兩處從結(jié)扎時(shí)制作的牙冠上固定點(diǎn)到牙齦邊緣的距離，取其平均值。
(3)附著水平(Attachment Level；AL)附著水平是確定牙齦溝底部(袋底部)在何位置的指標(biāo)，其表示成從袋底部到齒冠上固定點(diǎn)的距離。即，袋深度和牙齦退縮的長(zhǎng)度加起來(lái)稱為附著水平。
(4)牙齦炎指數(shù)(GI)根據(jù)J.Periodontol.38，602-610(1967)，評(píng)價(jià)牙齦炎癥部位和癥狀程度。
(牙槽骨內(nèi)濃度和肋骨內(nèi)濃度的測(cè)定)用夾鉗將左第4臼齒齒根拔起，將有顎骨和牙槽骨的整體上下一分為二，上面的1/2作為牙槽骨。另外，肋骨內(nèi)濃度采用解剖后-40℃下冷凍保存的肋骨骨端部。用鈣沉淀法從它們中抽提出英卡膦酸鈉，用HPLC法測(cè)定骨內(nèi)濃度。
(結(jié)果)計(jì)算各數(shù)據(jù)分別作為左右齒的各個(gè)數(shù)值。所有統(tǒng)計(jì)分析均使用SAS(EXSAS-STAT)。
牙槽骨損失抑制作用的結(jié)果如圖3所示。在結(jié)扎后對(duì)照組中發(fā)現(xiàn)牙槽骨大體上隨時(shí)間而損失，而這在給予英卡膦酸鈉的組中均受抑制，該抑制作用在5微克/部位的劑量下最強(qiáng)。
另外，給予英卡膦酸鈉的組中牙周病的臨床評(píng)價(jià)的惡化被抑制。臨床評(píng)價(jià)如下。
(1)袋深度在對(duì)照組中發(fā)現(xiàn)袋深度暫時(shí)性增加，在結(jié)扎后2周達(dá)到峰值。英卡膦酸鈉在1.5微克/部位以上的用量下在結(jié)扎后2周和4周時(shí)顯著抑制了袋深度的增加。
(2)牙齦退縮發(fā)現(xiàn)對(duì)照組中結(jié)扎引起的牙齦退縮隨時(shí)間而增加。英卡膦酸鈉在5微克/部位以上的用量下顯著抑制了結(jié)扎后4周以后的牙齦退縮的進(jìn)展，在1.5微克/部位的用量下在結(jié)扎后15周時(shí)有顯著抑制。
(3)附著水平在對(duì)照組中發(fā)現(xiàn)結(jié)扎引起的附著水平差不多隨時(shí)間而減少。5微克/部位以上的英卡膦酸鈉用量在結(jié)扎后2周以后、1.5微克/部位的英卡膦酸鈉用量在結(jié)扎后4周和15周時(shí)顯著抑制了附著水平。
(4)牙齦炎指數(shù)在對(duì)照組中發(fā)現(xiàn)牙齦炎指數(shù)暫時(shí)性惡化，在結(jié)扎后2周達(dá)到峰值。在1.5微克/部位以上的用量下，英卡膦酸鈉在結(jié)扎后2周時(shí)顯著抑制了牙齦炎指數(shù)的惡化。
(牙槽骨內(nèi)濃度和肋骨內(nèi)濃度)結(jié)果顯示在表1中。在5-15微克/部位的給藥組中，肋骨內(nèi)的英卡膦酸鈉濃度幾乎是牙槽骨內(nèi)濃度的1/10，因此確認(rèn)本發(fā)明的注射劑能達(dá)到BP向牙槽骨選擇性移行。
表1

ND表示在檢測(cè)限(0.025微克/克)以下。
比較例1犬牙周病模型中的高劑量局部給藥試驗(yàn)(方法)用26頭小獵犬(3-6歲，分組時(shí)體重為6.1-12.9千克)，分為a)對(duì)照組生理鹽水、b)英卡膦酸鈉50微克/部位組和c)英卡膦酸鈉150微克/部位組，在犬牙周病模型中進(jìn)行局部給藥試驗(yàn)。與實(shí)施例1一樣進(jìn)行試驗(yàn)，只是在剛結(jié)扎后、結(jié)扎后2周和4周時(shí)給藥，共計(jì)3次，最后一次給藥后8周時(shí)取下顎和肋骨進(jìn)行骨內(nèi)濃度測(cè)定。
(結(jié)果)對(duì)照組和英卡膦酸鈉給藥組中的牙槽骨損失抑制作用和臨床評(píng)價(jià)沒(méi)有顯著差別。牙槽骨內(nèi)的英卡膦酸鈉濃度為5.67和4.28微克/克骨。這與26周口服給予1.0毫克/千克英卡膦酸鈉終了時(shí)(J.Periodont.Res.33，196-204(1998))的牙槽骨內(nèi)藥物濃度約4微克/克相似。
另外，在觀察給藥部位的粘膜固有層中的局部刺激性時(shí)，發(fā)現(xiàn)a)對(duì)照組中部分有輕度單核細(xì)胞浸潤(rùn)；b)英卡膦酸鈉50微克/部位組中部分有輕度單核細(xì)胞浸潤(rùn)，其出現(xiàn)頻率和程度比對(duì)照組高。另一方面，c)在英卡膦酸鈉150微克/部位組中，在最終給藥后1周時(shí)全部發(fā)現(xiàn)有出血、纖維蛋白析出、炎性細(xì)胞浸潤(rùn)、唾液腺和肌肉組織損傷，并發(fā)現(xiàn)伴有部分牙齦粘膜潰瘍等顯著的組織損傷。
能提供與以往經(jīng)口給藥相同程度的牙槽骨內(nèi)藥物濃度的局部注射沒(méi)有發(fā)現(xiàn)牙槽骨損失抑制作用和牙周病臨床評(píng)價(jià)惡化抑制作用。另外，由于在給藥部位觀察到有炎癥，因此認(rèn)為有可能是該局部炎癥誘導(dǎo)骨吸收發(fā)生，暗示該局部炎癥可能抵消了英卡膦酸鈉的牙槽骨吸收抑制作用。
實(shí)施例2配方例配方例1將3.3、10.0、33.3或100微克英卡膦酸鈉溶解在生理鹽水中成1毫升，將其填充到1毫升牙科用注射用藥筒中，獲得含有本發(fā)明藥物組合物的牙科用注射用藥筒。
配方例2將3.3、10.0、33.3或100微克英卡膦酸鈉以及作為等滲劑的42.6毫克木糖醇、51毫克甘露糖醇、51毫克山梨糖醇或21毫克鹽酸甘氨酸中任一種溶解在注射用蒸餾水中調(diào)至1毫升。將其填充到1毫升牙科用注射用藥筒中，獲得含有本發(fā)明藥物組合物的牙科用注射用藥筒。
配方例3將英卡膦酸鈉7.5微克、25微克或75微克以及作為等滲劑的42.6毫克木糖醇、51毫克甘露糖醇、51毫克山梨糖醇或21毫克鹽酸甘氨酸中任一種溶解在注射用蒸餾水中調(diào)至1毫升。將其填充到1毫升牙科用注射用藥筒中，獲得含有本發(fā)明藥物組合物的牙科用注射用藥筒。
產(chǎn)業(yè)上的利用可能性本發(fā)明的含有雙膦酸衍生物或其鹽以及藥學(xué)上可接受的載體的牙周病治療用藥物組合物可用作牙周病治療藥，通過(guò)用牙槽粘膜刺入法的局部注射代替以往的全身給藥，該治療藥使BP牙槽骨選擇性移行，且全身性副作用少。
因此，它能很好地抑制牙周病伴隨的牙槽骨吸收，抑制牙槽骨吸收伴隨產(chǎn)生的牙槽嵴退縮和牙槽骨密度下降，而且還防止牙齦炎、出血、牙周袋深度、附著水平減少等牙周病臨床評(píng)價(jià)的惡化。
另外，含有3.33-100微克/毫升濃度英卡膦酸或其鹽以及藥學(xué)上可接受的載體的人牙周組織局部注射用的牙周病治療用藥物組合物局部刺激性低，有良好的牙槽骨吸收抑制作用，是首次可能向牙槽粘膜接界等牙周組織局部注射的含有BP的牙周病治療用藥物組合物。
權(quán)利要求
1.一種治療人牙周病的藥物組合物，它包含雙膦酸衍生物或其鹽以及藥學(xué)上可接受的載體，其特征在于該藥物組合物用牙槽粘膜刺入法來(lái)局部注射。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其中每個(gè)注射部位的注射量為100-300微升。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的藥物組合物，其中雙膦酸衍生物或其鹽是英卡膦酸或其鹽。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的藥物組合物，其中雙膦酸衍生物或其鹽是濃度為3.33-100微克/毫升的英卡膦酸或其鹽。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的藥物組合物，其中英卡膦酸或其鹽在每個(gè)給藥部位的給藥量為0.5微克-15微克。
6.一種人牙周組織局部注射用的治療牙周病的藥物組合物，它包含濃度為3.33-100微克/毫升的英卡膦酸或其鹽以及藥學(xué)上可接受的載體。
7.根據(jù)權(quán)利要求3-6任一項(xiàng)所述的藥物組合物，其中英卡膦酸或其鹽是英卡膦酸二鈉。
8.一種牙科用注射用藥筒，它含有權(quán)利要求1-6任一項(xiàng)所述的藥物組合物。
9.一種治療患者牙周病的方法，其特征在于，用牙槽粘膜刺入法給予有效量的雙膦酸衍生物或其鹽。
10.一種治療患者牙周病的方法，其特征在于，以每個(gè)注射部位100-300微升向患者牙周組織局部注射含有濃度為3.33-100微克/毫升的英卡膦酸或其鹽的注射液。
11.雙膦酸衍生物或其鹽在制造通過(guò)牙槽粘膜刺入法局部注射用的牙周病治療藥中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明涉及含有雙膦酸衍生物或其鹽作為有效成分通過(guò)牙槽粘膜刺入法來(lái)局部注射用的牙槽骨吸收抑制劑，以及人牙周組織局部注射用牙槽骨吸收抑制劑，它含有的雙膦酸衍生物或其鹽的濃度小得對(duì)人給藥部位牙周組織的局部刺激性可接受地低且局部注射有充分的牙槽骨吸收抑制作用。
文檔編號(hào)A61K6/00GK1420778SQ00818248
公開(kāi)日2003年5月28日 申請(qǐng)日期2000年11月22日 優(yōu)先權(quán)日1999年11月25日
發(fā)明者尾內(nèi)直人, 本家弘之, 巖井隆也, 吉野泰司, 加納浩之 申請(qǐng)人:山之內(nèi)制藥株式會(huì)社