專利名稱：用于前列腺癌化學(xué)預(yù)防的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及前列腺癌的化學(xué)預(yù)防，更具體地說(shuō)，涉及遏制或抑制潛在前列腺癌的方法，所述方法包括給予哺乳動(dòng)物化學(xué)預(yù)防藥及其類似物和代謝物。該化學(xué)預(yù)防藥預(yù)防前列腺癌，防止前列腺癌復(fù)發(fā)，遏制或抑制前列腺癌發(fā)生；并且治療前列腺癌。
托瑞米芬是授予Toivola等的美國(guó)專利4,696,949和5,491,173中描述的三苯烯烴化合物的一個(gè)實(shí)例，該文獻(xiàn)引入本文作參考。非胃腸和局部給予哺乳動(dòng)物個(gè)體含有托瑞米芬的配方在授予Jalonen等的美國(guó)專利5,571,534和授予DeGregorio等的美國(guó)專利5,605,700中有描述，這些文獻(xiàn)引入本文作參考。
授予Labrie的美國(guó)專利5,595,985也描述了用5α-還原酶抑制劑與結(jié)合和阻斷雄激素受體通路的化合物的組合來(lái)治療良性前列腺增生的方法，該文獻(xiàn)引入本文作參考。阻斷雄激素受體的化合物的一個(gè)實(shí)例是氟他胺。
授予Neri等的美國(guó)專利4,329,364和4,474,813描述了用于延遲和/或預(yù)防前列腺癌發(fā)作的包含氟他胺的藥物制劑，該文獻(xiàn)引入本文作參考。制劑可以是膠囊、片劑、栓劑或酏劑形式。盡管已有這些開發(fā)，但仍需要能有效預(yù)防前列腺癌的藥物和方法。
由于前列腺癌的高發(fā)病率和死亡率，開發(fā)化學(xué)預(yù)防這種破壞性疾病的方法勢(shì)在必行。對(duì)促成前列腺癌發(fā)生，包括前列腺癌的開始、擴(kuò)大和進(jìn)展的那些因素的理解將提供分子機(jī)理線索，干涉預(yù)防或中斷癌癥發(fā)生過(guò)程的適當(dāng)?shù)狞c(diǎn)。在基礎(chǔ)科學(xué)和臨床水平上都迫切需要新的方法來(lái)降低前列腺癌的發(fā)病率和中斷或引起潛在前列腺癌的消退。由于在人們面臨其它競(jìng)爭(zhēng)性致死因素的相同年齡，前列腺癌發(fā)生頻率顯著提高，簡(jiǎn)單地減慢前列腺腺癌的進(jìn)展可能既是更合適的又是低成本并有效的的健康策略。本發(fā)明旨在滿足這一需要。
此外，由于前列腺上皮內(nèi)瘤形成直接引起前列腺癌，并且它的存在特別地增加患前列腺癌的危險(xiǎn)，診斷有前列腺上皮內(nèi)瘤形成的人的生活質(zhì)量顯著變化。診斷前列腺上皮內(nèi)瘤形成的唯一途徑是前列腺活組織檢查。然而，一旦診斷有前列腺上皮內(nèi)瘤形成，標(biāo)準(zhǔn)醫(yī)療保健使患者必須進(jìn)行更頻繁的活組織檢查和體檢。另外，由于前列腺癌診斷臨近，患者與醫(yī)生都很憂慮。目前，尚沒有治療患者前列腺上皮內(nèi)瘤形成的方法。
本發(fā)明涉及遏制或抑制個(gè)體的潛在前列腺癌的方法，所述方法包括給予哺乳動(dòng)物個(gè)體藥物制劑，所述藥物制劑含有抗雌激素，或其類似物、衍生物、異構(gòu)體，及其代謝物，以及它們的藥學(xué)可接受的鹽、酯或N-氧化物，和它們的混合物。
本發(fā)明涉及減少個(gè)體的前列腺癌發(fā)生危險(xiǎn)的方法，該方法包括給予哺乳動(dòng)物個(gè)體藥物制劑，所述藥物制劑含有抗雌激素，或其類似物、衍生物、異構(gòu)體，及其代謝物，以及它們的藥學(xué)可接受的鹽、酯或N-氧化物，和它們的混合物。
本發(fā)明涉及增加患前列腺癌的個(gè)體的存活率的方法，所述方法包括給予哺乳動(dòng)物個(gè)體藥物制劑，所述藥物制劑含有抗雌激素，或其類似物、衍生物、異構(gòu)體，及其代謝物，以及它們的藥學(xué)可接受的鹽、酯或N-氧化物，和它們的混合物。
本發(fā)明涉及治療患前列腺癌的個(gè)體的方法，所述方法包括給予哺乳動(dòng)物個(gè)體藥物制劑，所述藥物制劑含有抗雌激素，或其類似物、衍生物、異構(gòu)體，及其代謝物，以及它們的藥學(xué)可接受的鹽、酯或N-氧化物，和它們的混合物。
本發(fā)明涉及減少個(gè)體的前列腺腺癌損傷的癌前期先質(zhì)(precancerous precursor)的量的方法，所述方法包括給予哺乳動(dòng)物個(gè)體藥物制劑，所述藥物制劑含有抗雌激素，或其類似物、衍生物、異構(gòu)體，及其代謝物，以及它們的藥學(xué)可接受的鹽、酯或N-氧化物，和它們的混合物。
在一個(gè)實(shí)施方案中，抗雌激素是選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑(SERM)、三苯乙烯或三苯烷烴。在一個(gè)實(shí)施方案中，前列腺腺癌的癌前期先質(zhì)是前列腺上皮內(nèi)瘤形成(PIN)。在一個(gè)實(shí)施方案中，前列腺腺癌的癌前期先質(zhì)是高級(jí)前列腺上皮內(nèi)瘤形成(PIN)。
本發(fā)明提供預(yù)防前列腺癌發(fā)生，遏制或抑制潛在前列腺癌的安全和有效的方法，該方法特別適用于治療發(fā)生前列腺癌的高危個(gè)體，例如那些患有良性前列腺增生、前列腺上皮內(nèi)瘤形成(PIN)，或具有異常高水平的循環(huán)前列腺特異性抗體(PSA)，或者具有前列腺癌家族史的個(gè)體。
圖2A-2C說(shuō)明在本研究中，正常小鼠中腹側(cè)前列腺細(xì)胞和TRAMP小鼠中前列腺癌的H&E切片。
圖3托瑞米芬在TRAMP小鼠中對(duì)腹側(cè)前列腺發(fā)育的作用。
圖4托瑞米芬在TRAMP小鼠中對(duì)腫瘤發(fā)生的作用。
圖5托瑞米芬在TRAMP小鼠中對(duì)腫瘤發(fā)展的作用。
圖6A-6B安慰劑與托瑞米芬對(duì)腫瘤生長(zhǎng)的作用的比較。
在一個(gè)實(shí)施方案中，化學(xué)預(yù)防藥是抗雌激素、其類似物、衍生物、異構(gòu)體，及其代謝物。在另一個(gè)實(shí)施方案中，化學(xué)預(yù)防藥是三苯烷烴，或其類似物、衍生物、異構(gòu)體，及其代謝物。在另一個(gè)實(shí)施方案中，化學(xué)預(yù)防藥是二氫萘、其類似物、衍生物、異構(gòu)體，及其代謝物。在另一個(gè)實(shí)施方案中，化學(xué)預(yù)防藥是苯并噻吩或其類似物、衍生物、異構(gòu)體，及其代謝物。在另一個(gè)實(shí)施方案中，化學(xué)預(yù)防藥是選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑(SERM)及其類似物、衍生物、異構(gòu)體，及其代謝物。在另一個(gè)實(shí)施方案中，抗雌激素是形成抗雌激素的非DNA加合物及其類似物、衍生物、異構(gòu)體，及其代謝物。在一個(gè)實(shí)施方案中，化學(xué)預(yù)防藥是他莫昔芬。在另一實(shí)施方案中，化學(xué)預(yù)防藥是Faslodex。在另一實(shí)施方案中，化學(xué)預(yù)防藥是雷洛昔芬。
在一個(gè)實(shí)施方案中，就化學(xué)預(yù)防藥用于預(yù)防前列腺發(fā)生，遏制或抑制潛在前列腺癌而言，化學(xué)預(yù)防藥不包括分子式(1)的化合物及其類似物和代謝物 其中R1和R2可以相同或不同，是H或OH，R2是OCH2CH2NR4R5，其中R4和R5可以相同或不同，是H或1到約4個(gè)碳原子的烷基。
如本文所證明的，他莫昔芬、Faslodex和雷洛昔芬是抗雌激素的實(shí)例，它們是前列腺化學(xué)預(yù)防藥和前列腺上皮內(nèi)瘤形成藥。
中間終點(diǎn)生物標(biāo)志物(intermediate endpoint marker)是組織中可測(cè)定的生物學(xué)變化，它在全部瘤形成(frank neoplasia)的開始與發(fā)展之間出現(xiàn)。如果最終的終點(diǎn)，癌發(fā)病率也被推定的化學(xué)預(yù)防藥降低，則生物標(biāo)志物得到驗(yàn)證。癌癥中的中間生物標(biāo)志物可歸類為以下幾組組織的、增殖、分化和生化標(biāo)志物。在任何化學(xué)預(yù)防策略中，組織學(xué)可識(shí)別的和被接受的癌前期損傷的存在構(gòu)成重要的起點(diǎn)。對(duì)于前列腺而言，組織學(xué)標(biāo)志物是前列腺腺癌的癌前期先質(zhì)，它的一個(gè)實(shí)例是前列腺上皮內(nèi)瘤形成(PIN)。PIN表現(xiàn)為在細(xì)胞發(fā)育異常的惡化前病灶的前列腺小管和無(wú)基質(zhì)侵入的原位腫瘤內(nèi)的異常增生。PIN和組織學(xué)前列腺癌在形態(tài)度量和表型上相似。因此，高級(jí)PIN的發(fā)生代表進(jìn)展過(guò)程中的重要一步，由此正常前列腺發(fā)生PIN、組織學(xué)前列腺癌、入侵性臨床前列腺癌和轉(zhuǎn)移。
已證明前列腺上皮內(nèi)瘤形成是癌前期損傷，或前列腺腺癌的先質(zhì)。前列腺上皮內(nèi)瘤形成是細(xì)胞發(fā)育異常的惡化前病灶的前列腺小管和無(wú)基質(zhì)侵入的原位腫瘤內(nèi)的異常增生。前列腺上皮內(nèi)瘤形成是前列腺癌發(fā)生最準(zhǔn)確和可靠的標(biāo)志物，它可以在前列腺化學(xué)預(yù)防試驗(yàn)中用作可接受的終點(diǎn)。前列腺上皮內(nèi)瘤形成作為標(biāo)志物對(duì)腺癌具有高的預(yù)測(cè)價(jià)值，它的識(shí)別給同時(shí)或隨后的入侵性癌的重復(fù)活組織檢查提供理由。多數(shù)研究表明，患有前列腺上皮內(nèi)瘤形成的多數(shù)患者將在10年內(nèi)發(fā)展成癌癥。有意思的是，前列腺上皮內(nèi)瘤形成并不對(duì)血清PSA有貢獻(xiàn)，這并不奇怪，因?yàn)椴煌谇傲邢侔?，前列腺上皮?nèi)瘤形成還沒有侵入前列腺的脈管系統(tǒng)將PSA滲漏到血流中。因此，前列腺上皮內(nèi)瘤形成可能甚至先于與前列腺癌相關(guān)的血清PSA上升。
在一個(gè)實(shí)施方案中，作為前列腺化學(xué)預(yù)防藥起作用的抗雌激素包括包括屈洛昔芬、艾多昔芬、(2)-4-OH-他莫昔芬在內(nèi)的三苯乙烯類；arzoxifene；苯并二氫吡喃類如左美洛昔芬和苯并二氫吡喃；苯并噻吩類如雷洛昔芬，和LY353381；萘類如CP336,156。在另一個(gè)實(shí)施方案中，化學(xué)預(yù)防藥包括植物雌激素如包括黃豆苷元、染色木黃酮、yenoestrogen在內(nèi)的異類黃酮素(isoflavanoid)類；擬雌內(nèi)酯；玉米赤霉烯酮；黃豆苷元；芹菜苷配基；waempferol；根皮素；鷹嘴豆素甲；柚皮苷；芒柄花素；依普黃酮；槲皮素；和白楊素。在另一個(gè)實(shí)施方案中，化學(xué)預(yù)防藥包括黃酮類化合物(黃酮類、異黃酮類、黃烷酮類和查耳酮類)；coumestan類；霉菌雌激素；二羥基苯甲酸內(nèi)酯類；萘福昔定(nafoxidene)和雌馬酚(equol)，和包括腸二醇和腸內(nèi)酯在內(nèi)的木脂體。在另一個(gè)實(shí)施方案中，化學(xué)預(yù)防藥包括下列化合物ICI 164,384、ICI 182,780；TAT-59、EM-652(SCG 57068)、EM-800(SCH57050)、EM-139、EM-651、EM-776和人雌激素受體的肽拮抗劑。
本發(fā)明提供通過(guò)給予本文以上提供的化學(xué)預(yù)防藥和載體或稀釋劑和/或它們的藥學(xué)可接受的載體、稀釋劑、鹽、酯或N-氧化物，和它們的混合物，而預(yù)防前列腺癌發(fā)生；遏制或抑制前列腺癌；降低前列腺癌發(fā)展的危險(xiǎn)；增加個(gè)體的存活率；治療前列腺癌；使前列腺上皮內(nèi)瘤形成消退和降低高級(jí)前列腺上皮內(nèi)瘤形成損傷的量的組合物和藥物組合物的用途。
本發(fā)明提供預(yù)防癌發(fā)生，遏制或抑制潛在癌的安全和有效的方法，它尤其適用于治療前列腺癌發(fā)展的高危個(gè)體，例如患有良性前列腺增生、前列腺上皮內(nèi)瘤形成(PIN)的個(gè)體，或具有異常高的循環(huán)前列腺特異性抗體(PSA)水平的個(gè)體，或具有前列腺癌家族史的個(gè)體。在另一個(gè)實(shí)施方案中，個(gè)體是人。
本發(fā)明包括化合物的純(Z)-和(E)-異構(gòu)體和它們的混合物以及純(RR，SS)-和(RS，SR)-對(duì)映異構(gòu)體對(duì)和它們的混合物。
本發(fā)明包括氨基取代的化合物和有機(jī)和無(wú)機(jī)酸例如檸檬酸和鹽酸的藥學(xué)可接受的鹽。本發(fā)明還包括分子式(1)的化合物的氨基取代的N-氧化物。藥學(xué)可接受的鹽也可以通過(guò)用無(wú)機(jī)堿，例如氫氧化鈉處理而從酚類化合物制備。而且，酚類化合物的酯可以用脂族和芳族羧酸，例如醋酸和苯甲酸酯來(lái)制備。
如本文所用，藥物組合物意指治療有效量的藥物和合適的稀釋劑、防腐劑、增溶劑、乳化劑、佐劑和/或載體。如本文所用，“治療有效量”意指對(duì)給定癥狀和給藥方案而言提供治療作用的量。這種組合物是液體或凍干或其它干的配方，它包括各種緩沖成分(例如Tris-HCl、醋酸鹽、磷酸鹽)的稀釋液，pH和離子強(qiáng)度，添加劑如白蛋白或明膠來(lái)防止吸附于表面，洗滌劑(例如吐溫20、吐溫80、PluronicF68、膽汁酸鹽)，增溶劑(例如甘油、聚乙二醇)，抗氧化劑(例如抗壞血酸、偏亞硫酸氫鈉)，防腐劑(例如乙基汞硫代水楊酸鈉、苯甲醇、對(duì)羥基苯甲酸酯)，填充物質(zhì)或張力改性劑(例如乳糖、甘露糖醇)，聚合物共價(jià)連接如連接到蛋白上的聚乙二醇，與金屬離子絡(luò)合，或者將物質(zhì)摻入聚合物如聚乳酸、聚羥基乙酸、水凝膠等的顆粒制劑中或上，或摻入脂質(zhì)體、微乳、膠束、單層或多層泡，紅細(xì)胞影，或原生質(zhì)球上。這樣的組合物將影響物理狀態(tài)、溶解性、穩(wěn)定性、體內(nèi)釋放速率和體內(nèi)清除速率?？蒯尰蚓忈尳M合物包括在親脂性貯存單元(例如脂肪酸、蠟、油)中的配方。本發(fā)明還包括涂有聚合物(例如泊咯沙姆、poloxamines)的顆粒組合物。本發(fā)明的組合物的其它實(shí)施方案摻入顆粒形成保護(hù)涂層，蛋白酶抑制劑或用于各種給藥途徑包括非胃腸、肺、鼻和口的滲透增強(qiáng)劑。在一個(gè)實(shí)施方案中，該藥物組合物非胃腸、癌旁側(cè)(paracancerally)、經(jīng)粘膜、經(jīng)皮、肌肉內(nèi)、靜脈內(nèi)、皮內(nèi)、皮下、腹膜內(nèi)、心室內(nèi)、顱內(nèi)和腫瘤內(nèi)給藥。劑量可以在5-80mg/天的范圍內(nèi)。在另一個(gè)實(shí)施方案中，劑量在35-66mg/天的范圍內(nèi)。在另一個(gè)實(shí)施方案中，劑量在40-60mg/天的范圍內(nèi)。在另一個(gè)實(shí)施方案中，劑量在45-60mg/天的范圍內(nèi)。在另一個(gè)實(shí)施方案中，劑量在15-25mg/天的范圍內(nèi)。在另一個(gè)實(shí)施方案中，劑量在55-65mg/天的范圍內(nèi)。在另一個(gè)實(shí)施方案中，劑量在45-60mg/天的范圍內(nèi)。劑量可以是60mg/天。劑量可以是20mg/天。劑量可以是45mg/天。用于口服給予的片劑含有88.5mg化學(xué)預(yù)防藥，這相當(dāng)于60mg化學(xué)預(yù)防藥。
此外，如本文所用，藥學(xué)可接受的載體是本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的，包括但不限于，0.01-0.1M，優(yōu)選為0.05M的磷酸鹽緩沖液或0.8％鹽水。另外，這種藥學(xué)可接受的載體可以是水溶液或非水溶液、懸浮液和乳液。非水溶劑的實(shí)例是丙二醇、聚乙二醇、植物油如橄欖油，以及可注射的有機(jī)酯如油酸乙酯。水溶液載體包括水、醇/水溶液、乳液或懸浮液，包括鹽水和緩沖介質(zhì)。非胃腸賦形劑包括氯化鈉溶液、林格氏葡萄糖(Ringer′s dextrose)、葡萄糖和氯化鈉、乳酸林格氏或固定油。靜脈內(nèi)賦形劑包括液體和營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充物、電解質(zhì)補(bǔ)充物如基于林格氏葡萄糖的那些等。也可以存在防腐劑和其它添加劑，如抗微生物劑、抗氧化劑、整理劑(collating agent)、惰性氣體等。
術(shù)語(yǔ)“佐劑”指增強(qiáng)對(duì)抗原的免疫應(yīng)答的化合物或混合物。佐劑可以作為緩慢釋放抗原的組織貯存，也可以作為非特異性地增強(qiáng)免疫應(yīng)答的淋巴系統(tǒng)激活劑(Hood等，Immunology，第二版，1984，Benjamin/CummingsMenlo Park，Califomia，p.384)。通常，單獨(dú)用抗原而不存在佐劑的初次激發(fā)將不能引發(fā)體液或細(xì)胞免疫應(yīng)答。佐劑包括，但不限于，弗羅因德完全佐劑、弗羅因德不全佐劑、皂苷、礦物膠如氫氧化鋁、表面活性物質(zhì)如溶血卵磷脂、多聚醇(pluronicpolyol)、聚陰離子、肽、油或烴乳液、匙孔血藍(lán)蛋白、二硝基苯酚，和對(duì)人潛在有用的佐劑如BCG(卡-介桿菌(bacille Calmette-Guerin))和經(jīng)高溫和甲醛處理后的痤瘡丙酸桿菌制劑(Corynebacteriumparvum)。優(yōu)選地，佐劑是藥學(xué)可接受的。
控釋或緩釋組合物包括在親脂性貯存單元(例如脂肪酸、蠟、油)中的配方。本發(fā)明還包括涂有聚合物(如泊咯沙姆或poloxamine)的顆粒組合物和連接于針對(duì)組織特異性受體、配體或抗原的抗體的化合物，或連接于組織特異性受體的配體的化合物。本發(fā)明的組合物的其它實(shí)施方案摻入顆粒形成保護(hù)涂層，蛋白酶抑制劑或用于各種給藥途徑包括非胃腸、肺、鼻和口的滲透增強(qiáng)劑。已知通過(guò)水溶性聚合物如聚乙二醇、聚乙二醇和聚丙二醇的共聚物、羧甲基纖維素、葡萄糖、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮或聚脯氨酸的共價(jià)連接修飾的化合物經(jīng)靜脈內(nèi)注射后在血液中的半衰期顯著高于相應(yīng)的未經(jīng)修飾的化合物(Abuchowski等，1981；Newmark等，1982；以及Katre等，1987)。這樣的修飾也可以增加化合物在水溶液中的溶解性，消除聚集，增強(qiáng)化合物的物理和化學(xué)穩(wěn)定性，并大大降低化合物的免疫原性和反應(yīng)性。結(jié)果，通過(guò)以比未修飾化合物低的劑量或比其低的給藥頻率給予這種聚合物-化合物加合物，可以實(shí)現(xiàn)期望的體內(nèi)生物活性。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，藥物組合物可以通過(guò)控釋系統(tǒng)給予。例如，可以通過(guò)靜脈輸注、可植入的滲透泵、經(jīng)皮藥貼、脂質(zhì)體或其它給藥方式給予藥物。在一個(gè)實(shí)施方案中，可以使用泵(參見Langer(上述)；Sefton，CRC Crit.Ref.Biomed.Eng.14201(1987)；Buchwald等，Surgery 88507(1980)；Saudek等，N.Engl.J.Med.321574(1989))。在另一個(gè)實(shí)施方案中，可以使用高分子材料。在另一個(gè)實(shí)施方案中，可以將控釋系統(tǒng)置于治療靶附近，即腦的附近，因此只需全身劑量的一部份(參見，例如Goodson，在Medical Applications ofControlled Release中(上述)，vol.2，pp.115-138(1984))。優(yōu)選地，將控釋裝置引入個(gè)體中不適當(dāng)?shù)拿庖呒せ钗稽c(diǎn)或腫瘤附近。其它控釋系統(tǒng)在Langer的綜述中得到討論(Science 2491527-1533(1990))。
用于預(yù)防前列腺癌發(fā)生的本發(fā)明的方法包括給予哺乳動(dòng)物個(gè)體藥物制劑，所述藥物制劑含有化學(xué)預(yù)防藥或其代謝物或鹽。該藥物制劑可以只包含化學(xué)預(yù)防藥，或者可以進(jìn)一步包含藥學(xué)可接受的載體，它可以是固體或液體形式，如片劑、散劑、膠囊劑、丸劑、溶液劑、混懸劑、酏劑、乳劑、凝膠劑、乳膏，或者栓劑，包括直腸栓劑和尿道栓劑。藥學(xué)可接受的載體包括樹膠、淀粉、糖、纖維素物質(zhì)，以及它們的混合物。含有化學(xué)預(yù)防藥的藥物制劑可以通過(guò)例如丸劑的皮下植入給予個(gè)體；在另一個(gè)實(shí)施方案中，丸劑提供化學(xué)預(yù)防藥一段時(shí)間內(nèi)的控釋。制劑可以通過(guò)液體制劑的靜脈內(nèi)、動(dòng)脈內(nèi)或肌肉內(nèi)注射而給予，通過(guò)液體或固體制劑的口服而給予，或者通過(guò)局部施用而給予。也可以通過(guò)直腸栓劑或尿道栓劑的使用實(shí)現(xiàn)給藥。藥物制劑也可以是非胃腸配方；在一個(gè)實(shí)施方案中，配方包括脂質(zhì)體，所述脂質(zhì)體包含化學(xué)預(yù)防藥如托瑞米芬和環(huán)糊精化合物的復(fù)合物，如前面引用的授予Jalonen等的美國(guó)專利5,571,534中所述。
本發(fā)明的藥物制劑可以通過(guò)已知的溶解、混合、造?；驂浩椒▉?lái)制備。為了口服給藥，將化學(xué)預(yù)防藥或它們的生理學(xué)可接受的衍生物如鹽、酯、N-氧化物等與常規(guī)用于此目的添加劑如賦形劑、穩(wěn)定劑或惰性稀釋劑混合，并通過(guò)常規(guī)方法轉(zhuǎn)化成適于給藥的形式，如片劑、包衣片劑、硬或軟明膠膠囊、水溶液、醇溶液或油溶液。合適的惰性賦形劑的實(shí)例是常規(guī)的片劑基質(zhì)，如乳糖、蔗糖或玉米淀粉，與粘合劑如阿拉伯膠、玉米淀粉、明膠結(jié)合，或者與崩解劑如玉米淀粉、馬鈴薯淀粉、海藻酸結(jié)合，或者與潤(rùn)滑劑如硬脂酸或硬脂酸鎂結(jié)合。合適的油賦形劑或溶劑的實(shí)例為植物油或動(dòng)物油，如向日葵油或魚肝油。制劑可以以干或濕顆粒作用。為了非胃腸給藥(皮下、靜脈內(nèi)、動(dòng)脈內(nèi)或肌肉內(nèi)注射)，將化學(xué)預(yù)防藥或它們的生理學(xué)可接受的衍生物如鹽、酯、N-氧化物等轉(zhuǎn)化成溶液、懸浮液或乳液，如果需要，與常規(guī)用于此目的的物質(zhì)，例如穩(wěn)定劑或其它輔劑一起轉(zhuǎn)化。實(shí)例為加入或不加入表面活性劑和其它藥學(xué)可接受的佐劑的無(wú)菌液體如水和油。示例性的油是石油、動(dòng)物源、植物源或合成的油，例如花生油、豆油或礦物油。通常，水、鹽水、葡萄糖水溶液和相關(guān)的糖溶液，以及二醇如丙二醇或聚乙二醇是優(yōu)選的液體載體，尤其對(duì)于注射溶液而言。
含有活性成份的藥物組合物的制備在本領(lǐng)域已知。通常，將這種組合物制成給至鼻咽的多肽氣霧劑，或者制成可注射的溶液或懸浮液，然而，也可以制備適于在注射前溶解或懸浮在液體中的固體形式?？梢詫⒅苿┤榛??；钚灾委煶煞萃ǔＥc藥學(xué)可接受的并且與活性成份相容的賦形劑混合。合適的賦形劑為，例如水、鹽水、葡萄糖、甘油、乙醇等和它們的組合。另外，如果需要，組合物可以含有少量輔助物質(zhì)如潤(rùn)濕劑或乳化劑、pH緩沖劑，它們?cè)鰪?qiáng)活性組份的有效性。
可以將活性成份配方成中性的藥學(xué)可接受的鹽形式的組合物。藥學(xué)可接受的鹽包括酸加成鹽(由多肽的氨基或抗體分子形成)，它由無(wú)機(jī)酸如鹽酸或磷酸，或有機(jī)酸如醋酸、草酸、酒石酸、苦杏仁酸等形成。從游離羧基形成的鹽也可以由無(wú)機(jī)堿如氫氧化鈉、氫氧化鉀、氫氧化銨、氫氧化鈣或氫氧化鐵，以及有機(jī)堿如異丙胺、三甲胺、2-乙氨基乙醇、組氨酸、普魯卡因等衍生而來(lái)。
為了局部給予身體表面，使用例如乳膏、凝膠、滴劑等，以有或沒有藥學(xué)可接受的藥物載體的在生理學(xué)可接受的稀釋劑中的溶液、懸浮液或乳液制備并施用化學(xué)預(yù)防藥或它們的生理學(xué)可接受的衍生物如鹽、酯、N-氧化物等。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，可以將活性化合物在賦形劑，尤其是脂質(zhì)體中給藥(參見Langer，Science，2491527-1533(1990)；Treat等，在Liposomes in the Therapy of Infectious Disease and Cancer中，Lopez-Berestein和Fidler(eds)，Liss，New York，pp.353-365(1989)；Lopez-Berestein，同前，pp.317-327；參見同前)。
本發(fā)明的藥物組合物尤其適用于治療發(fā)生前列腺高危的個(gè)體。高危個(gè)體包括，例如患有良性前列腺增生、前列腺上皮內(nèi)瘤形成(PIN)，或異常高水平的循環(huán)前列腺特異性抗體(PSA)的個(gè)體，或者有前列腺癌家族史的個(gè)體。
此外，前列腺化學(xué)預(yù)防藥可以和其它細(xì)胞因子或生長(zhǎng)因子一起給予，包括但不限于IFNγ或α、IFN-β；白細(xì)胞介素(IL)1、IL-2、IL-4、IL-6、IL-7、IL-12、腫瘤壞死因子(TNF)α、TNF-β、粒細(xì)胞集落刺激因子(G-CSF)、粒細(xì)胞/巨噬細(xì)胞CSF(GM-CSF)；輔助分子，包括整聯(lián)蛋白超家族的成員和Ig超家族的成員，例如，但不限于LFA-1、LFA-3、CD22和B7-1、B7-2和ICAM-1 T細(xì)胞共同刺激分子。
化學(xué)預(yù)防藥可以在DNA損傷劑治療之前或之后進(jìn)行，期間間隔幾分鐘到幾周。方案和方法為本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知。DNA損傷劑或因素為本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知，它們指當(dāng)用于細(xì)胞時(shí)誘導(dǎo)DNA損傷的任何化學(xué)物質(zhì)或治療方法。這樣的藥物和因素包括誘導(dǎo)DNA損傷的輻射和波，如γ-放射、X-射線、紫外輻射、微波、電子發(fā)射等。許多化學(xué)物質(zhì)，也被描述為“化學(xué)治療藥”，它們誘導(dǎo)DNA損傷，它們?nèi)慷荚噲D與本文公開的治療方法一起使用?？紤]有用的化學(xué)治療藥包括例如阿霉素、5-氟尿嘧啶(5FU)、依托泊苷(VP-16)、喜樹堿、放線菌素-D、絲裂霉素C、順鉑(SDDP)和過(guò)氧化氫。本發(fā)明還包括使用一種或多種DNA損傷劑的組合，基于放射或?qū)嶋H化合物，如X-射線和順鉑的使用，或者順鉑和依托泊苷的使用。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，可以用DNA損傷放射如X-射線、紫外光、γ-射線或者甚至微波來(lái)輻射局部的腫瘤位點(diǎn)。或者，也可以通過(guò)給予患者治療有效的藥物組合物使腫瘤細(xì)胞與DNA損傷劑接觸，所述藥物組合物包含DNA損傷化合物如阿霉素、5-氟尿嘧啶、依托泊苷、喜樹堿、放線菌素-D、絲裂霉素C，或者更優(yōu)選地包含順鉑。損傷DNA的藥物還包括干擾DNA復(fù)制、有絲分裂和染色體分離的化合物。這種化學(xué)治療化合物包括阿霉素，也稱為多柔比星，以及依托泊苷、維拉帕米、鬼臼毒素等。
其它引起DNA損傷并得到廣泛運(yùn)用的因素包括通常稱為γ-射線、X-射線的，和/或放射性同位素直接給予腫瘤細(xì)胞。DNA損傷因素的其它形式還包括如微波和紫外放射。最有可能所有這些因素大范圍損傷DNA、DNA前體、DNA復(fù)制和修復(fù)，以及染色體的組裝和固位(maintenance)。
本領(lǐng)域普通技術(shù)人員容易理解，本發(fā)明的方法和藥物組合物尤其適于給予哺乳動(dòng)物，特別是人。
以下實(shí)施例用于更充分地說(shuō)明本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案。然而它們不以任何方式限制本發(fā)明的寬范圍。
TRAMP轉(zhuǎn)基因小鼠模型是極好的體內(nèi)模型，用于確定前列腺癌開始和擴(kuò)大的機(jī)理，并試驗(yàn)有潛力的托瑞米芬的有效性。這些小鼠在短時(shí)間(＜17周)內(nèi)進(jìn)行性地發(fā)生前列腺上皮增生、PIN，然后發(fā)生前列腺癌。
以約0.5-50mg/kg個(gè)體體重/天，優(yōu)選約6-30mg/kg個(gè)體體重/天的水平，用托瑞米芬對(duì)雜種TRAMP小鼠進(jìn)行化學(xué)預(yù)防治療，治療在出生后30天開始。將托瑞米芬方便地制成21天和90天的丸劑(由Innovative Research of America，Sarasota，F(xiàn)L制備)并以皮下植入物給予。對(duì)照動(dòng)物接受安慰劑植入物。在每個(gè)藥物治療組中，將動(dòng)物分別在5、7、10、15、20、25、30、40和50周處死，直至發(fā)生可觸知的腫瘤。采集血液，合并每一治療時(shí)間點(diǎn)的樣品來(lái)評(píng)價(jià)血清睪酮和雌二醇的變化。收集前列腺組織用于形態(tài)度量、組織學(xué)和分子研究。
采用以下試驗(yàn)過(guò)程1)連續(xù)進(jìn)行前列腺全樣載片分析以檢測(cè)有和無(wú)治療的前列腺小管形態(tài)隨時(shí)間的變化；樣品如圖2所示。組織切片通過(guò)H&E和Masson-trichome標(biāo)準(zhǔn)染色得到組織學(xué)評(píng)估。PIN的出現(xiàn)得到評(píng)估并分級(jí)(I-輕微到III-嚴(yán)重)。
2)測(cè)定(RIA)每個(gè)年齡間隔的血清雌二醇和總睪酮水平來(lái)評(píng)估作為托瑞米芬作用結(jié)果的這些激素的變化。實(shí)施例2免疫組織化學(xué)數(shù)據(jù)分析各組織切片的顯微影像通過(guò)用Nikon Microphot-FX顯微鏡上的Kodak DCS 460相機(jī)，用計(jì)算機(jī)輔助的(Mac9500-I32計(jì)算機(jī)和顯示器)影像定量(NIH-Image 1.6 PPC)得到評(píng)價(jià)，并通過(guò)使用區(qū)分染色組織切片的顏色差別的顏色輔助的定量系統(tǒng)影像分析(IPLab Spectrum3.1，Scanalytics，Inc.，VA)得到定量。設(shè)置閾值來(lái)鑒定前列腺的各種組織成份。對(duì)彩色監(jiān)視器的各個(gè)全屏，計(jì)算相應(yīng)于各個(gè)這些組織成份的面積象素密度。將每個(gè)前列腺切片的總共5個(gè)屏平均。免疫組織化學(xué)影像可以被數(shù)字化并定量，從而使通過(guò)確定樣品的相關(guān)系數(shù)和概率(2-tailed)的統(tǒng)計(jì)學(xué)評(píng)價(jià)成為可能。實(shí)施例3化學(xué)預(yù)防活性的研究在TRAMP轉(zhuǎn)基因動(dòng)物(PBTag X FVBwt)(由Baylor College ofMedcine，TX的Norman Greenberg博士提供)中進(jìn)行研究，測(cè)試托瑞米芬的功效。這些小鼠10周時(shí)就表現(xiàn)出癌癥初期跡象。掃描TRAMP轉(zhuǎn)基因雄性幼鼠的Large T ag轉(zhuǎn)基因，在本研究中用陽(yáng)性雄鼠。將用于測(cè)試其可能的化學(xué)預(yù)防作用的抗雌激素托瑞米芬摻入在定制的丸劑中(Innovative Research of American，Sarasota，F(xiàn)L)，小鼠的化學(xué)預(yù)防治療在出生后30天(小鼠平均體重14g)開始。每組有10-12只動(dòng)物的4個(gè)組各自接受90天釋放的含托瑞米芬的丸劑的皮下植入。為了與生長(zhǎng)相關(guān)的體重變化，調(diào)整可擴(kuò)散的藥物劑量，設(shè)計(jì)使其以低劑量(6mg/kg)或高劑量(30mg/kg)釋放托瑞米芬。對(duì)照動(dòng)物(n＝10)接受安慰劑植入物。治療功效通過(guò)不存在可觸知的腫瘤形成來(lái)測(cè)定。收集鼠前列腺腫瘤，并通過(guò)分子和組織學(xué)技術(shù)進(jìn)行評(píng)價(jià)。
使用前列腺的TRAMP轉(zhuǎn)基因模型，其中每只遺傳了前列腺癌基因的動(dòng)物都會(huì)發(fā)生前列腺癌，證明托瑞米芬既延長(zhǎng)潛伏期，又降低前列腺癌的發(fā)病率。
如

圖1所示，低和高劑量托瑞米芬的作用同樣有效。TRAMP小鼠腹側(cè)前列腺中的腫瘤形成在安慰劑組(n＝10)在17周觀察到，在高劑量托瑞米芬治療組(n＝12)在19周觀察到，在低劑量托瑞米芬治療組(n＝12)在28周觀察到。因此，用托瑞米芬治療顯著增加TRAMP小鼠腹側(cè)前列腺中癌癥發(fā)生的潛伏期，增加高達(dá)11周。
由于在研究期間，托瑞米芬治療的動(dòng)物并沒有達(dá)到50％腫瘤發(fā)生點(diǎn)，因此比較各組間25％的動(dòng)物有腫瘤的時(shí)間。到23周時(shí)，安慰劑組的10只動(dòng)物中有25％腫瘤可觸知，而到30-31周時(shí)，高劑量和低劑量托瑞米芬組有25％腫瘤可觸知，與對(duì)照組相比，延遲了7-8周。低劑量和高劑量托瑞米芬組與安慰劑組間在對(duì)數(shù)等級(jí)統(tǒng)計(jì)分析和Wilcoxon統(tǒng)計(jì)分析中顯著，如下表1所示。
表1-統(tǒng)計(jì)分析對(duì)數(shù)等級(jí)WilcoxonP P低劑量托瑞米芬組對(duì)安慰劑組 0.0003*0.0004*高劑量托瑞米芬組對(duì)安慰劑組 0.0017*0.0071**顯著性P＜0.05
在第33周，所有對(duì)照動(dòng)物都發(fā)生腫瘤，而低劑量托瑞米芬治療的動(dòng)物的72％和高劑量托瑞米芬治療的動(dòng)物的60％仍沒有腫瘤。因此低和高劑量的托瑞米芬治療導(dǎo)致TRAMP小鼠腹側(cè)前列腺中的腫瘤的發(fā)病率顯著下降。這些數(shù)據(jù)證明，前列腺癌的發(fā)病率顯著下降，潛伏期顯著延長(zhǎng)。
如已討論過(guò)的，給予托瑞米芬對(duì)TRAMP小鼠腹側(cè)前列腺中的腫瘤產(chǎn)生明顯的化學(xué)預(yù)防作用。這一結(jié)果對(duì)在人上得到類似的有益效果而言是令人鼓舞的，人的前列腺包含相應(yīng)于嚙齒類動(dòng)物腹側(cè)前列腺的部分。實(shí)施例4前列腺組織的組織學(xué)檢查對(duì)在觸診時(shí)取自安慰劑組和高劑量托瑞米芬治療組的腫瘤進(jìn)行組織學(xué)評(píng)價(jià)。圖2A是17周大的正常成鼠的腹側(cè)前列腺的H&E切片。圖2B是安慰劑治療的16周大的TRAMP小鼠的腹側(cè)前列腺切片，其顯示，與圖2A中顯示的正常前列腺結(jié)構(gòu)不同，TRAMP小鼠腹側(cè)前列腺特征為具有高有絲分裂指數(shù)的未分化的退行發(fā)育細(xì)胞層。相反，如圖2C所示，托瑞米芬治療的30周大的TRAMP小鼠的前列腺保留許多正常腺結(jié)構(gòu)和具有更好分化結(jié)構(gòu)的ha腫瘤，有絲分裂指數(shù)遠(yuǎn)低于安慰劑治療的動(dòng)物。這些結(jié)果表明，托瑞米芬即使在低劑量下也能抑制TRAMP模型中的前列腺癌發(fā)生。
蛋白質(zhì)印跡分析在10周齡時(shí)收集前列腺組織(背外側(cè)和腹側(cè)葉)，在液氮中快速冷凍并在-80℃貯存。用含有蛋白酶抑制劑(Pefabloc、抑肽酶、貝他定、亮肽素和胃酶抑素)和磷酸酶抑制劑Na3VO4(10mM)的混合物的RIPA緩沖液(150mM NaCl、1％NP40、0.5％脫氧膽酸、0.1％SDS和50mM Tris，pH7.5)制備組織溶解產(chǎn)物。勻漿在4℃、14000xg下離心10分鐘，將溶解產(chǎn)物貯存在-80℃。
用Bradford蛋白質(zhì)分析(Bio-Rad)測(cè)定蛋白質(zhì)濃度。將組織溶解產(chǎn)物負(fù)載到7.5％聚丙烯酰胺凝膠上，蛋白(40μg/泳道)由SDS-PAGE分離，用電泳在轉(zhuǎn)移緩沖液(192mM甘氨酸、25mM Tris-HCl和20％甲醇)中轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素膜(0.2μm，Bio-Rad，Hercules，CA)上。TRAMP前列腺腫瘤組織用作陽(yáng)性對(duì)照。Chemiluminescent CruzMarker(Santa Cruz Biotechnology，Santa Cruz，CA)用作分子量標(biāo)準(zhǔn)。印跡在4℃下在BLOTTO(在1X TBS中的6％脫脂奶粉)中過(guò)夜阻斷，并在室溫下和大T-抗原一級(jí)抗體(Pab 101小鼠單克隆，1∶200，SantaCruz Biotechnology)一起保溫2小時(shí)。印跡用TTBS(0.05％吐溫20、50mM Tris-HCl、200mM NaCl)洗滌(3次)，并和辣根過(guò)氧化物酶(HRP)-綴合的二級(jí)抗體(1∶5000)一起在25℃下保溫1小時(shí)。免疫活性蛋白在放射自顯影膠片上用增強(qiáng)化學(xué)發(fā)光(ECL)系統(tǒng)(APB，Piscataway，NJ)顯示。肌動(dòng)蛋白表達(dá)用于使Tag結(jié)果歸一化。為了這一目的，將以上膜浸在剝離緩沖液(100mM 2-巰基乙醇、2％SDS、62.5mM Tris-HCl pH6.7)中，并在50℃不定期攪動(dòng)下保溫30分鐘。阻斷后，膜用肌動(dòng)蛋白一級(jí)抗體(1∶2500，Chemicon，Temecula，CA)進(jìn)行再探測(cè)，接著由(HRP)-綴合的二級(jí)抗體(1∶10000)進(jìn)行再探測(cè)。ECL檢測(cè)后，波段強(qiáng)度用Adobe Photoshop 5.0 Acquisition andImageQuant Analysis(Molecular Dynamics)系統(tǒng)進(jìn)行定量。實(shí)施例5TRAMP小鼠模型中托瑞米芬對(duì)前列腺癌的化學(xué)預(yù)防功效的用途本試驗(yàn)確證托瑞米芬的化學(xué)預(yù)防功效。本研究集中于與對(duì)照動(dòng)物中前列腺癌發(fā)生有關(guān)的組織學(xué)和分子變化，以及托瑞米芬對(duì)用緩釋藥丸喂養(yǎng)、篩選和治療的TRAMP動(dòng)物的機(jī)理。在預(yù)定時(shí)間，處死每組5只動(dòng)物，取它們的前列腺用于分析。通過(guò)組織學(xué)、全樣載片解剖和大T抗原免疫組織化學(xué)評(píng)價(jià)前列腺的腫瘤存在。至今，安慰劑和托瑞米芬治療已完成了7、10、15和20周時(shí)間點(diǎn)，結(jié)果如下所述。
結(jié)果各組7、10、15和20周的前列腺全樣載片已完成。全樣載片分析表明，安慰劑治療的小鼠至15-20周時(shí)發(fā)生前列腺腫瘤，這與以前的初步研究類似。而且，托瑞米芬治療的動(dòng)物前列腺癌的發(fā)生延遲至20周(圖3)。到20周時(shí)，托瑞米芬治療組中的腫瘤發(fā)生顯著延遲至35周(圖4)。這些數(shù)據(jù)確證，即使在致瘤性更靈敏的評(píng)估下，托瑞米芬仍表現(xiàn)化學(xué)預(yù)防活性。對(duì)于組織學(xué)評(píng)價(jià)，將組織樣品固定、處理并用石蠟包埋。切下切片(5pM厚)，并通過(guò)常規(guī)H&E方法染色。托瑞米芬抑制導(dǎo)管發(fā)育和組織分化(將17周TRAMP小鼠前列腺腫瘤與野生型相比(圖4))；b)在15周時(shí)，將托瑞米芬治療的前列腺組織與安慰劑組相比(圖5)。在質(zhì)量上，安慰劑和托瑞米芬治療的組織的免疫組織化學(xué)顯示腹側(cè)前列腺中T-抗原的存在。因此托瑞米芬化學(xué)預(yù)防活性似乎不是通過(guò)TRAMP模型中probasin啟動(dòng)子的抑制而表現(xiàn)的。
結(jié)論托瑞米芬預(yù)防TRAMP模型中前列腺癌發(fā)生的能力通過(guò)用更靈敏的技術(shù)評(píng)估腫瘤形成而得到確證。托瑞米芬的化學(xué)預(yù)防作用的機(jī)理似乎不是大T-抗原蛋白的轉(zhuǎn)基因損失。實(shí)施例6托瑞米芬誘導(dǎo)裸鼠模型中建立的人前列腺癌的消退目前，前列腺癌仍是美國(guó)男性中最常診斷出的癌癥。然而，有關(guān)這一疾病的病源學(xué)和進(jìn)展的疾病形式的治療仍是問(wèn)題。盡管通常發(fā)生激素頑固性疾病，但激素療法仍是治療復(fù)發(fā)和進(jìn)展的前列腺癌的標(biāo)準(zhǔn)方法。因此需要用于預(yù)防和治療前列腺癌的新方法以適應(yīng)越來(lái)越多的診斷有這種疾病的人。下面的試驗(yàn)和結(jié)果證明，托瑞米芬抑制無(wú)胸腺裸鼠中激素敏感的LNCaP腫瘤生長(zhǎng)。
材料和方法將在Matrigel中的一百萬(wàn)個(gè)LNCaP細(xì)胞皮下注射入無(wú)胸腺裸鼠的各脅腹。共注射40只小鼠。約3-4周后，發(fā)生可見的腫瘤。記錄腫瘤的二維大小后，根據(jù)相當(dāng)?shù)哪[瘤負(fù)荷，將小鼠分成安慰劑組和治療組。將一個(gè)藥丸(安慰劑對(duì)托瑞米芬35mg)皮下植入每只小鼠的肩胛骨間。記錄每周測(cè)定的腫瘤大小。計(jì)算腫瘤體積(腫瘤體積＝0.5(L+W)×L×W×0.5236，其中L＝腫瘤長(zhǎng)度，W＝腫瘤寬度)。藥丸植入時(shí)的腫瘤體積作為參照點(diǎn)，用于將來(lái)比較腫瘤大小變化。各腫瘤體積的每周變化記錄為丸劑植入時(shí)的初始測(cè)定值的百分偏差。
結(jié)果在78個(gè)腫瘤注射位點(diǎn)中，55(70％)個(gè)生成具有適用于評(píng)價(jià)的合適體積的腫瘤。共50個(gè)腫瘤(24只安慰劑和26只托瑞米芬治療的動(dòng)物)用于評(píng)價(jià)。托瑞米芬和安慰劑組的丸劑植入時(shí)的平均腫瘤體積相似(分別為1.90mm3和1.72mm3)。托瑞米芬組的平均腫瘤體積下降到1.68mm3(-0.22mm3)，而安慰劑組的平均腫瘤體積增加到2.33mm3(+0.61mm3)。安慰劑組的平均血清PSA水平(3.80mg/ml)高于托瑞米芬組的(2.80ng/ml)，但是這并沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性(p＝0.755)。安慰劑組的總睪酮血清水平為2.18ng/ml(n＝17)，托瑞米芬組為2.96ng/ml(n＝19)。
兩只小鼠由于來(lái)自其它小鼠的致命傷而在丸劑植入后很快死亡。一只用托瑞米芬治療的小鼠由于過(guò)量腫瘤出血和血腫發(fā)生而被排除在研究之外。所有小鼠單側(cè)或雙側(cè)生長(zhǎng)出可見的腫瘤。24個(gè)腫瘤用安慰劑治療，28個(gè)腫瘤用托瑞米芬治療。結(jié)果列于表2、圖6A和6B。表2安慰劑組周N＝ ％相對(duì)于治療0天的體積變化3 11 9.444 8 115.275 8 271.716 8 600.88
托瑞米芬組周 N＝％相對(duì)于治療0天的體積變化3 11 -34.584 7-61.015 7-74.516 5-61.72后續(xù)的間隔將在當(dāng)前報(bào)道的種群上繼續(xù)，其他動(dòng)物的數(shù)據(jù)目前正在采集。
結(jié)論托瑞米芬抑制并誘導(dǎo)建立的LNCaP腫瘤的消退。雖然托瑞米芬發(fā)揮該作用的機(jī)理尚未知，但產(chǎn)生這些作用的能力使托瑞米芬可以用于治療前列腺癌并預(yù)防有確定的前列腺癌微小轉(zhuǎn)移的高?；颊咧星傲邢侔┑膹?fù)發(fā)。實(shí)施例7托瑞米芬在IIa期前列腺癌化學(xué)預(yù)防人臨床試驗(yàn)中引起HGPIN的消退托瑞米芬對(duì)前列腺癌的化學(xué)預(yù)防作用已經(jīng)在本文中在良好建立的自發(fā)人前列腺癌的動(dòng)物模型中得到重復(fù)確證。這代表證明對(duì)前列腺癌有化學(xué)預(yù)防活性的第一個(gè)化合物。而且，建立了高級(jí)PIN(HGPIN)，并將其作為人前列腺癌先質(zhì)損傷，也稱為潛在前列腺癌而隨時(shí)間測(cè)試。
因此，HGPIN用作人前列腺癌的中間終點(diǎn)，或替代終點(diǎn)。實(shí)際上，NCl現(xiàn)在推薦應(yīng)該將PIN用作人前列腺癌的中間終點(diǎn)或替代終點(diǎn)。
對(duì)17個(gè)人進(jìn)行IIa期、開放標(biāo)記非隨機(jī)單中心研究。在這一方案中，活組織檢查證明PIN的患者每天用60mg托瑞米芬治療，共4個(gè)月。4個(gè)月后，患者再次進(jìn)行活組織檢查(8個(gè)活組織檢查)，重新評(píng)估PIN狀態(tài)。21個(gè)患者參加研究，16個(gè)患者完成。這16個(gè)患者的前列腺活組織檢查病理學(xué)觀察表明12個(gè)患者的PIN消退為良性或萎縮的前列腺組織；因此，16個(gè)患者中有12個(gè)(75％)具有完全反應(yīng)。在其余4個(gè)患者中，3個(gè)患者患有前列腺癌，但是PIN的量減少，1個(gè)患者患有穩(wěn)定的疾病，但是PIN上皮顯示萎縮和退化變化。
病理學(xué)評(píng)價(jià)顯示前列腺上皮中有萎縮變化的PIN完全消退。患者在服用托瑞米芬過(guò)程中沒有出現(xiàn)急性或慢性毒性。血清PSA、血清游離睪酮、血清總睪酮和血清雌二醇保持在正常范圍內(nèi)。生活質(zhì)量，包括力量和性欲，沒有改變。因此，這些結(jié)果證明托瑞米芬的前列腺化學(xué)預(yù)防作用。
結(jié)果證明，托瑞米芬減少PIN，從而直接導(dǎo)致前列腺癌發(fā)病率下降，潛伏期延長(zhǎng)，并預(yù)防前列腺癌發(fā)生。最后，發(fā)現(xiàn)托瑞米芬顯著降低人基質(zhì)成纖維細(xì)胞中TGF？的合成。實(shí)施例8化學(xué)預(yù)防藥抗雌激素枸櫞酸他莫昔芬和雷洛昔芬(SERM)和Faslodex(純抗雌激素ICI 182,780)在預(yù)防前列腺癌發(fā)生中的作用試驗(yàn)設(shè)計(jì)小鼠的化學(xué)預(yù)防治療在出生后30天開始。3組每組50只雜種TRAMP雄性小鼠各自用抗雌激素枸櫞酸他莫昔芬或雷洛昔芬(SERM)或Faslodex(純抗雌激素ICI 182,780)治療。藥物以常規(guī)緩釋丸劑(Innovative Research of American，Sarasota，F(xiàn)L)獲得，并以皮下植入物給予(見初始數(shù)據(jù))。對(duì)照動(dòng)物接受沒有藥理學(xué)活性的安慰劑植入物。在10、15、20、25和30周齡的時(shí)間間隔處死動(dòng)物(n＝10)，治療導(dǎo)致不形成腫瘤或腫瘤如果存在其大小下降的功效通過(guò)與安慰劑對(duì)照動(dòng)物比較得到評(píng)估。采集血液來(lái)評(píng)價(jià)各治療的血清雄激素和雌激素變化。保存前列腺組織，用于a)形態(tài)度量研究；b)組織學(xué)研究，將組織固定在10％緩沖福爾馬林中，處理并用石蠟包埋；c)分子學(xué)研究，將組織冷凍在液氮中并貯存在-70℃。還記錄尸體解剖和存活數(shù)據(jù)。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，各種抗雌激素在延遲或預(yù)防TRAMP模型中的前列腺癌方面的相對(duì)化學(xué)預(yù)防功效。形態(tài)學(xué)研究顯示由于各治療引起的前列腺大小和管道模式方面的總體變化(如果有的話)。石蠟組織切片用標(biāo)準(zhǔn)H&E技術(shù)染色以觀察組織學(xué)變化如PIN，從而監(jiān)測(cè)作為前列腺腺癌先質(zhì)的癌前期損傷的外觀。測(cè)定各年齡間隔的血清雌二醇和總睪酮水平，從而評(píng)估這些激素的任何變化，以及它們是否與PIN的變化相關(guān)。定量在各時(shí)間間隔取的前列腺樣品中的TGF、TGFl、TGF3和bFGF肽生長(zhǎng)因子。相應(yīng)的肽生長(zhǎng)因子受體，EGFR、TGF RI和RII也得到評(píng)估。表3選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑(SERM)對(duì)TRAMP模型中前列腺癌的預(yù)防作用

在20周處死動(dòng)物，通過(guò)全樣載片分析和組織學(xué)研究評(píng)價(jià)前列腺。*Faslodex是純抗雌激素，它的相對(duì)藥力是其它SERM的2倍，因此10mg/kg/d的Faslodex＝20mg/kg/d的SERM。
權(quán)利要求
1.用于預(yù)防個(gè)體的前列腺癌發(fā)生的方法，所述方法包括給予哺乳動(dòng)物個(gè)體藥物制劑，所述藥物制劑包含抗雌激素，或其類似物、衍生物、異構(gòu)體，及其代謝物，以及它們的藥學(xué)可接受的鹽、酯或N-氧化物，和它們的混合物。
2.遏制或抑制個(gè)體的潛在前列腺癌的方法，所述方法包括給予哺乳動(dòng)物個(gè)體藥物制劑，所述藥物制劑包含抗雌激素，或其類似物、衍生物、異構(gòu)體，及其代謝物，以及它們的藥學(xué)可接受的鹽、酯或N-氧化物，和它們的混合物。
3.降低個(gè)體的前列腺癌發(fā)生危險(xiǎn)的方法，所述方法包括給予哺乳動(dòng)物個(gè)體藥物制劑，所述藥物制劑包含抗雌激素，或其類似物、衍生物、異構(gòu)體，及其代謝物，以及它們的藥學(xué)可接受的鹽、酯或N-氧化物，和它們的混合物。
4.增加患有前列腺癌的個(gè)體的存活率的方法，所述方法包括給予哺乳動(dòng)物個(gè)體藥物制劑，所述藥物制劑包含抗雌激素，或其類似物、衍生物、異構(gòu)體，及其代謝物，以及它們的藥學(xué)可接受的鹽、酯或N-氧化物，和它們的混合物。
5.治療患有前列腺癌的個(gè)體的方法，所述方法包括給予哺乳動(dòng)物個(gè)體藥物制劑，所述藥物制劑包含抗雌激素，或其類似物、衍生物、異構(gòu)體，及其代謝物，以及它們的藥學(xué)可接受的鹽、酯或N-氧化物，和它們的混合物。
6.降低個(gè)體的前列腺腺癌損傷的癌前期先質(zhì)的量的方法，所述方法包括給予哺乳動(dòng)物個(gè)體藥物制劑，所述藥物制劑包含抗雌激素，或其類似物、衍生物、異構(gòu)體，及其代謝物，以及它們的藥學(xué)可接受的鹽、酯或N-氧化物，和它們的混合物。
7.權(quán)利要求1-8的方法，其中個(gè)體具有前列腺腺癌的癌前期先質(zhì)，并且未患前列腺癌。
8.權(quán)利要求7的方法，其中前列腺腺癌的癌前期先質(zhì)是前列腺上皮內(nèi)瘤形成(PIN)。
9.權(quán)利要求1-8的方法，其中抗雌激素是選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑(SERM)、三苯乙烯或三苯烷烴。
10.根據(jù)權(quán)利要求1-6的方法，其中所述藥物制劑進(jìn)一步包含藥學(xué)可接受的載體。
11.根據(jù)權(quán)利要求10的方法，其中所述載體選自樹膠、淀粉、糖、纖維素物質(zhì)和它們的混合物。
12.根據(jù)權(quán)利要求10的方法，其中所述給予包括在所述個(gè)體中皮下植入含有所述藥物制劑的藥丸。
13.根據(jù)權(quán)利要求12的方法，其中所述藥丸提供所述藥物制劑在一段時(shí)間內(nèi)的控釋。
14.根據(jù)權(quán)利要求10的方法，其中所述給予為在所述個(gè)體中靜脈內(nèi)、動(dòng)脈內(nèi)或肌肉內(nèi)注射液體形式的所述藥物制劑。
15.根據(jù)權(quán)利要求10的方法，其中所述給予為口服給予所述個(gè)體含有所述藥物制劑的液體或固體制劑。
16.根據(jù)權(quán)利要求10的方法，其中所述給予為給所述個(gè)體的皮膚表面局部施用所述藥物制劑。
17.根據(jù)權(quán)利要求10的方法，其中所述藥物制劑選自丸劑、片劑、膠囊劑、溶液劑、混懸劑、乳劑、酏劑、凝膠劑、乳膏和栓劑。
18.根據(jù)權(quán)利要求17的方法，其中所述栓劑是直腸栓劑或尿道栓劑。
19.根據(jù)權(quán)利要求10的方法，其中所述藥物制劑是非胃腸配方。
20.根據(jù)權(quán)利要求19的方法，其中所述非胃腸配方包括脂質(zhì)體，所述脂質(zhì)體包含所述化學(xué)預(yù)防藥和環(huán)糊精化合物的復(fù)合物。
21.根據(jù)權(quán)利要求10的方法，其中所述給予的劑量為約0.5mg/kg個(gè)體體重/天至約80mg/kg個(gè)體體重/天的所述化學(xué)預(yù)防藥。
22.根據(jù)權(quán)利要求10的方法，其中所述給予的劑量為約10mg/kg個(gè)體體重/天至約60mg/kg個(gè)體體重/天的化學(xué)預(yù)防藥。
23.根據(jù)權(quán)利要求10的方法，其中所述給予的劑量為約20mg/kg個(gè)體體重/天至約60mg/kg個(gè)體體重/天的化學(xué)預(yù)防藥。
24.根據(jù)權(quán)利要求10的方法，其中所述給予的劑量為約60mg/kg個(gè)體體重/天的化學(xué)預(yù)防藥。
25.根據(jù)權(quán)利要求10的方法，其中所述給予的劑量為約20mg/kg個(gè)體體重/天的化學(xué)預(yù)防藥。
全文摘要
本發(fā)明涉及前列腺癌的化學(xué)預(yù)防，更具體地說(shuō)，涉及遏制或抑制潛在前列腺癌的方法，所述方法包括給予哺乳動(dòng)物個(gè)體化學(xué)預(yù)防藥及其類似物和代謝物。該化學(xué)預(yù)防藥預(yù)防前列腺癌，防止前列腺癌復(fù)發(fā)，遏制或抑制前列腺癌發(fā)生；并且治療前列腺癌。
文檔編號(hào)A61K47/26GK1420765SQ00818228
公開日2003年5月28日 申請(qǐng)日期2000年11月8日 優(yōu)先權(quán)日1999年11月8日
發(fā)明者米切爾·S·施泰納, 沙蘭·拉高 申請(qǐng)人:田納西研究公司大學(xué)