專(zhuān)利名稱(chēng)：煙堿性受體激動(dòng)劑的正調(diào)節(jié)劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及新型化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽、其制備方法、包含其的藥用組合物以及它們?cè)谥委熤械膽?yīng)用。所述新型化合物被認(rèn)為是煙堿性受體激動(dòng)劑的正調(diào)節(jié)劑，所述正調(diào)節(jié)劑具有增強(qiáng)所述煙堿性受體激動(dòng)劑效力的能力。
nAChR的一個(gè)別構(gòu)轉(zhuǎn)換狀態(tài)模型涉及至少一個(gè)靜止態(tài)、一個(gè)活化態(tài)和一個(gè)“脫敏”關(guān)閉通道態(tài)(Williams等，參見(jiàn)上文；Karlin和Akabas，參見(jiàn)上文)。因此，不同的nAChR配體可以有差異地穩(wěn)定它們優(yōu)先結(jié)合的構(gòu)象態(tài)。例如，激動(dòng)劑ACh和(-)-煙堿穩(wěn)定活化態(tài)和脫敏態(tài)。
已將煙堿性受體活性的改變與多種疾病相關(guān)聯(lián)。這些疾病中的某些疾病，例如重癥肌無(wú)力和ADNFLE(常染色體顯性夜發(fā)性前葉性癲癇)(Kuryatov等(1997)J.Neurosci.17(23)9035-47)與或者由于受體數(shù)目減少或者由于脫敏增加引起的煙堿傳遞活性降低有關(guān)，脫敏是一種受體變得對(duì)所述激動(dòng)劑不敏感的過(guò)程。也已經(jīng)假定煙堿性受體的減少介導(dǎo)在例如早老性癡呆和精神分裂癥的疾病中見(jiàn)到的認(rèn)知缺陷(Williams等，參見(jiàn)上文)。得自煙草的煙堿的效應(yīng)也由煙堿性受體介導(dǎo)。煙堿性受體活性的提高可能減弱對(duì)吸煙的需求。
在McDonald等(1995)“煙堿性乙酰膽堿受體分子生物學(xué)、化學(xué)和藥理學(xué)”(載于Annual Reports in Medicinal Chemistry，第30卷，41-50頁(yè)，第5章，Academic Press Inc.，San Diego，CA)和Williams等(參見(jiàn)上文)中，已經(jīng)討論了結(jié)合煙堿性乙酰膽堿受體的化合物在治療涉及膽堿能功能降低的各種各樣的障礙中的應(yīng)用，所述障礙包括例如早老性癡呆、認(rèn)知或注意力障礙、注意力不集中的過(guò)度反應(yīng)癥、焦慮、抑郁、停止吸煙、神經(jīng)保護(hù)、精神分裂癥、痛覺(jué)缺失、圖雷特綜合征和帕金森病。
然而，用作用位點(diǎn)與ACh相同的煙堿性受體激動(dòng)劑來(lái)治療成問(wèn)題，因?yàn)锳Ch不僅活化受體，而且通過(guò)包括脫敏(有關(guān)綜述，參見(jiàn)Ochoa等(1989)Cellular and Molecular Neurobiology 9，141-178)和非競(jìng)爭(zhēng)性阻斷(開(kāi)放-通道阻斷)；Forman和Miller(1988)Biophysical Journal54(1)149-58)在內(nèi)的過(guò)程阻斷受體活性。此外，延長(zhǎng)的活化看來(lái)誘導(dǎo)長(zhǎng)期持續(xù)的失活。因此，可以預(yù)期ACh激動(dòng)劑降低活性，也增強(qiáng)活性。一般在煙堿性受體上的脫敏，特別值得注意的是在α7-煙堿性受體上的脫敏，限制了激動(dòng)劑應(yīng)用期間的電流持續(xù)時(shí)間。
按照本發(fā)明，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了式I化合物或其對(duì)映體及其藥學(xué)上可接受的鹽增強(qiáng)煙堿性受體上的激動(dòng)劑的效力，所述式I化合物為 其中R1和R3獨(dú)立地是氫或C1-C4烷基；R2是氫、C1-C4烷基或CH2CN；R4是氫、C1-C4烷基、C2-C4鏈烯基、C2-C4炔基、CH2C(W)＝CH2、(CH2)nAr、CH2CH＝CHAr、CH2COPh、CH2CONHAr、C(U)NH(CH2)mAr或(CH2)dY(CH2)eAr；U是氧或硫；W是鹵素；X和Y獨(dú)立地是O、S或NR5；R5是氫、C1-C4烷基、C2-C4鏈烯基；或R3和R5一起形成一個(gè)環(huán)；n和m獨(dú)立地為0-4；d為1-3；e為0-1；Ar是苯基、萘基或者含有0-4個(gè)氮、0-1個(gè)硫和0-1個(gè)氧的5元或6元雜環(huán)；Ar可任選地用選自以下的一個(gè)或更多個(gè)取代基取代氫、鹵素、C1-C4烷基、C2-C4鏈烯基、C2-C4炔基、CN、NO2、CF3、OR6、NR7R8、COOR9；R6、R7和R8獨(dú)立地為氫、C1-C4烷基、芳基、雜芳基、C(O)R10、C(O)NHR11、SO2R12；或R7和R8一起可以是(CH2)jQ(CH2)k，其中
Q是O、S、NR13或一個(gè)鍵；j是2-4；k是0-2；R9、R10、R11、R12和R13獨(dú)立地為氫、C1-C4烷基、芳基或雜芳基。
本發(fā)明的優(yōu)選化合物包括以下化合物5-肉桂基氧基吲哚；5-芐氧基吲哚-3-乙腈；5-(2-苯氧基乙氧基)吲哚；5-(2-萘基甲氧基)吲哚；5-苯基氨基甲酰基甲基吲哚；1-糠基-3-(5-吲哚基)-2-硫脲；或其對(duì)映體及其藥學(xué)上可接受的鹽。
除非另有說(shuō)明，否則本文所指的C1-C4烷基可以是直鏈或支鏈的，例如甲基、乙基、正丙基、正丁基、異丙基、異丁基、叔丁基、仲丁基，C3-C4烷基也可以是環(huán)狀的，例如環(huán)丙基、環(huán)丁基。
除非另有說(shuō)明，否則本文所指的C2-C4鏈烯基可以含有一個(gè)或兩個(gè)雙鍵，例如乙烯基、異丙烯基、正丁烯基、異丁烯基、烯丙基、1，3-丁二烯基。
除非另有說(shuō)明，否則本文所指的C2-C4炔基含有一個(gè)三鍵，例如乙炔基、丙炔基、1-丁炔基或2-丁炔基。
本文所指的鹵素可以是氟、氯、溴或碘。
本發(fā)明的化合物的優(yōu)點(diǎn)是，它們可能毒性較低，效力更強(qiáng)，作用時(shí)間更長(zhǎng)，具有更寬的活性范圍，更有效，產(chǎn)生的副作用更小，吸收更容易，或具有其它有用的藥理學(xué)特性。制備方法在所述反應(yīng)方案和以下正文中，R1、R2、R3、R4和X如式I所限定，除非另有說(shuō)明?？梢园凑辗桨?中概述的方法制備式I化合物。 方案1式I化合物可以由式II化合物(它除R4為氫外與式I相同)制備，即通過(guò)所述式II化合物與式III化合物(其中L為一合適的離去基團(tuán)，是鹵素、三氟甲磺酸根(TfO)、甲磺酸根(MsO)或?qū)妆交撬岣?pTsO)，而R4如式I中所限定)在合適的堿和溶劑存在下反應(yīng)來(lái)制備。合適的堿包括碳酸鈉(Na2CO3)、碳酸銫(Cs2CO3)、碳酸鉀(K2CO3)、三乙胺(TEA)或N，N-二異丙基乙胺(DIPEA)。用于該反應(yīng)的合適溶劑包括N，N-二甲基甲酰胺(DMF)、N-甲基吡咯烷酮(NMP)、乙腈(ACN)、二甲基亞砜(DMSO)或四氫呋喃(THF)。該反應(yīng)優(yōu)選在0-100℃的溫度下、最優(yōu)選在環(huán)境溫度下進(jìn)行。
式I化合物也可以由式II化合物(它除R4為氫外與式I相同)制備，即通過(guò)所述式II化合物與式III化合物(其中R4是(CH2)nAr，其中n為0而Ar如式I所限定，L為一合適的離去基團(tuán)，是NH2)在合適的酸和溶劑存在下反應(yīng)來(lái)制備。合適的酸包括鹽酸(HCl)、乙酸(HOAc)、三氟乙酸(TFA)、甲磺酸(MsOH)或?qū)妆交撬?pTsOH)。用于該反應(yīng)的合適溶劑包括DMF、NMP、DMSO或THF。該反應(yīng)優(yōu)選在0-200℃的溫度下、最優(yōu)選在100℃下進(jìn)行。該反應(yīng)任選地在無(wú)溶劑下以熔體進(jìn)行。
式I化合物可以由式II化合物(它除R4為氫外與式I相同)制備，即通過(guò)所述式II化合物與式IV化合物(如方案2中概述，其中U、n和Ar如式I中所限定)在合適的溶劑存在下反應(yīng)來(lái)制備。用于該反應(yīng)的合適溶劑包括N，N-二甲基甲酰胺(DMF)、N-甲基吡咯烷酮(NMP)、乙腈(ACN)、二甲基亞砜(DMSO)、四氫呋喃(THF)、氯仿、乙酸乙酯(EtOAc)、乙醇(EtOH)或甲醇(MeOH)。該反應(yīng)優(yōu)選在0-100℃的溫度下、最優(yōu)選在環(huán)境溫度下進(jìn)行。 方案2式II化合物或者為市售的，或者可以通過(guò)本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的方法制備(參見(jiàn)例如“Heterocyclic Chemistry”，第3版中的“IndolesReactions and Synthesis”，J.A.Joule，K.Mills和G F.Smith，(Pub.)Stanley Thornes Ltd.(1998)和其中的參考文獻(xiàn))。
其中X是NR5(其中R3和R5一起形成環(huán))的式II化合物，可以用本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的方法制備(參見(jiàn)例如J.E.Macor，J.T.Froman，R.J Post，K.Ryan，Tetrahedron Lett.，38，1673-1676，1997)。
式III化合物是市售的，或者可以用本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的方法制備。
式IV化合物是市售的，或者可以用本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的方法制備。
必要時(shí)，羥基、氨基或其它反應(yīng)基可以用保護(hù)基保護(hù)，所述保護(hù)基如以下標(biāo)準(zhǔn)教科書(shū)中所述“Protecting Groups in Organic Synthesis”，第3版，T.W.Greene和P.G.M.Wuts，1999，J Wiley & Sons，Inc。
除非另有說(shuō)明，否則上述反應(yīng)通常在約1個(gè)至約3個(gè)大氣壓下進(jìn)行，最好在環(huán)境壓力(約一個(gè)大氣壓)下進(jìn)行。
除非另有說(shuō)明，否則上述反應(yīng)在惰性環(huán)境中進(jìn)行，最好在氮?dú)猸h(huán)境下進(jìn)行。
可以采用標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)，將本發(fā)明的化合物和中間體從其反應(yīng)混合物中分離出來(lái)。
可以提及的式I化合物的酸加成鹽包括無(wú)機(jī)酸的鹽，例如鹽酸鹽和氫溴酸鹽；與有機(jī)酸形成的鹽，例如甲酸鹽、乙酸鹽、馬來(lái)酸鹽、苯甲酸鹽、酒石酸鹽和富馬酸鹽。通過(guò)使式I化合物的游離堿或鹽、對(duì)映體或受保護(hù)的衍生物與一個(gè)或更多個(gè)當(dāng)量的所述合適的酸反應(yīng)，可以生成式I化合物的酸加成鹽。該反應(yīng)可以在所述鹽不溶于其中的溶劑或介質(zhì)中進(jìn)行，或者在所述鹽可溶于其中的溶劑中進(jìn)行，所述溶劑例如為水、二噁烷、乙醇、四氫呋喃或乙醚，或溶劑的混合物，所述溶劑可以在真空下除去或通過(guò)冷凍干燥除去。該反應(yīng)可以是復(fù)分解過(guò)程，或它可以在離子交換樹(shù)脂上進(jìn)行。
式I化合物以互變異構(gòu)體形式或?qū)τ丑w形式存在，所有這些都包括在本發(fā)明范圍內(nèi)?？梢酝ㄟ^(guò)用常規(guī)技術(shù)，例如分級(jí)結(jié)晶或手性HPLC分離所述化合物的外消旋混合物，分離出各種光學(xué)異構(gòu)體?；蛘?，可以通過(guò)使合適的旋光原料在不引起外消旋的反應(yīng)條件下反應(yīng)，制備各對(duì)映體。藥用組合物本發(fā)明的另一方面涉及一種藥用組合物，它用于治療或預(yù)防哺乳動(dòng)物(最好是人類(lèi))由于煙堿性乙酰膽堿受體神經(jīng)傳遞功能障礙所致的以下所列病癥或疾病，所述藥用組合物包含有效治療或預(yù)防這類(lèi)疾病或病癥量的一種式I化合物、其對(duì)映體或其藥學(xué)上可接受的鹽以及一種惰性藥學(xué)上可接受的載體。
關(guān)于上述應(yīng)用，所給予的劑量當(dāng)然將根據(jù)所用的化合物、給藥方式和所需的治療而變化。然而，一般而言，當(dāng)本發(fā)明的化合物以每日約0.1mg至約20mg/kg動(dòng)物體重的劑量給予，最好是以分劑量每日1-4次給予或以緩釋形式給予時(shí)，獲得令人滿(mǎn)意的結(jié)果。對(duì)于人類(lèi)，總?cè)談┝糠秶鸀?mg-1,400mg，更優(yōu)選10mg-100mg，適用于口服給藥的單位劑型包含2mg-1,400mg的與固體或液體藥用載體或稀釋劑混合的所述化合物。
式I化合物或其對(duì)映體及其藥學(xué)上可接受的鹽，可以照原樣使用，或以用于腸給藥或胃腸外給藥的合適的藥物制劑形式使用。按照本發(fā)明的又一個(gè)方面，提供一種藥用組合物，所述藥用組合物優(yōu)選包含低于80％、更優(yōu)選低于50％(重量)的與惰性、藥學(xué)上可接受的稀釋劑或載體混合的本發(fā)明化合物。
稀釋劑和載體的實(shí)例是- 對(duì)于片劑和糖錠劑乳糖、淀粉、滑石粉、硬脂酸；對(duì)于膠囊酒石酸或乳糖；- 對(duì)于注射液水、醇、甘油、植物油；對(duì)于栓劑天然或硬化油或蠟。
也提供一種制備這類(lèi)藥用組合物的方法，所述方法包括混合所述組分。
人們會(huì)理解，包含煙堿性受體激動(dòng)劑的正調(diào)節(jié)劑和藥學(xué)上可接受的載體的藥用組合物，所述正調(diào)節(jié)劑具有增強(qiáng)所述受體激動(dòng)劑效力的能力。對(duì)于本發(fā)明的目的而言，術(shù)語(yǔ)“正調(diào)節(jié)劑”或“煙堿性受體激動(dòng)劑的正調(diào)節(jié)劑”應(yīng)該理解為具有增強(qiáng)煙堿性受體激動(dòng)劑的最大效力的能力的化合物。
人們會(huì)理解，本發(fā)明包括或者包含一種作為唯一活性物質(zhì)、并因此調(diào)節(jié)內(nèi)源煙堿性受體激動(dòng)劑例如乙酰膽堿或膽堿活性的正調(diào)節(jié)劑的組合物，或者包含與煙堿性受體激動(dòng)劑聯(lián)合的正調(diào)節(jié)劑的組合物。因此，所述含有煙堿性受體激動(dòng)劑的正調(diào)節(jié)劑的藥用組合物可以另外包含一種煙堿性受體激動(dòng)劑。
在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選形式中，所述煙堿性受體激動(dòng)劑是α7-煙堿性受體激動(dòng)劑。α7-煙堿性受體激動(dòng)劑的實(shí)例是(-)-螺[1-氮雜雙環(huán)[2.2.2]辛烷-3，5*-噁唑烷]-2*-酮。例如從WO 96/06098、WO 97/30998和WO99/03859中可了解幾種α7-煙堿性受體激動(dòng)劑。
本發(fā)明的另一方面提供一種治療與煙堿傳遞減弱相關(guān)的病癥的方法，所述方法包括給予需要這種治療的患者醫(yī)療上有效量的煙堿性受體激動(dòng)劑的正調(diào)節(jié)劑，所述正調(diào)節(jié)劑具有增強(qiáng)所述煙堿性受體激動(dòng)劑效力的能力。
人們會(huì)理解，本發(fā)明的治療方法包括或者一種作為唯一活性物質(zhì)、并因此調(diào)節(jié)內(nèi)源煙堿性受體激動(dòng)劑例如乙酰膽堿或膽堿的活性的正調(diào)節(jié)劑，或者與煙堿性受體激動(dòng)劑一起給予的一種正調(diào)節(jié)劑。
在本發(fā)明的另一優(yōu)選形式中，所述治療方法包括一種煙堿性受體激動(dòng)劑，它為α7-煙堿性受體激動(dòng)劑。α7-煙堿性受體激動(dòng)劑的實(shí)例是(-)-螺[1-氮雜雙環(huán)[2.2.2]辛烷-3，5*-噁唑烷]-2*-酮。例如從WO96/06098、WO 97/30998和WO 99/03859中可了解幾種α7-煙堿性受體激動(dòng)劑。實(shí)用性本發(fā)明的再一方面是按照本發(fā)明的化合物在治療或預(yù)防與煙堿性受體傳遞減弱相關(guān)的病癥或與煙堿密度降低相關(guān)的病癥的藥物生產(chǎn)中的應(yīng)用，所述疾病或病癥可以是下述疾病或病癥中的一種，所述方法包括給予患者治療有效量的按照本發(fā)明的化合物。
人們會(huì)理解，所述應(yīng)用包括或者包含一種作為唯一活性物質(zhì)、并因此調(diào)節(jié)內(nèi)源煙堿性受體激動(dòng)劑活性的正調(diào)節(jié)劑的組合物，或者包含與煙堿性受體激動(dòng)劑聯(lián)合的正調(diào)節(jié)劑的組合物。因此，所述應(yīng)用的含有煙堿性受體激動(dòng)劑的正調(diào)節(jié)劑的藥用組合物可以另外包含一種煙堿性受體激動(dòng)劑。
在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選形式中，所述煙堿性受體激動(dòng)劑的應(yīng)用以α7-煙堿性受體激動(dòng)劑為代表。α7-煙堿性受體激動(dòng)劑的實(shí)例是(-)-螺[1-氮雜雙環(huán)[2.2.2]辛烷-3，5*-噁唑烷]-2*-酮。例如從WO 96/06098、WO97/30998和WO 99/03859中可了解幾種α7-煙堿性受體激動(dòng)劑。
疾病或病癥的實(shí)例包括精神分裂癥、躁狂和躁狂性抑郁、焦慮、早老性癡呆、學(xué)習(xí)缺陷、認(rèn)知缺陷、注意力缺乏、記憶力喪失、雷維小體性癡呆、注意力不集中的過(guò)度反應(yīng)癥、帕金森病、亨廷頓舞蹈病、圖雷特綜合征、時(shí)差綜合癥和煙堿癮(包括由于接觸含煙堿制品所致的癮)。
人們會(huì)理解，所述正調(diào)節(jié)劑可以或者為了作用于內(nèi)源煙堿性受體激動(dòng)劑例如乙酰膽堿或膽堿而給予，或者與一種外源煙堿性受體激動(dòng)劑聯(lián)合給予。
本發(fā)明的再一方面涉及用于治療或預(yù)防哺乳動(dòng)物(最好是人類(lèi))由于煙堿性乙酰膽堿受體神經(jīng)傳遞功能障礙所致的以上所列病癥或疾病的化合物，或者包含一種作為唯一活性物質(zhì)、并因此調(diào)節(jié)內(nèi)源煙堿性受體激動(dòng)劑活性的正調(diào)節(jié)劑，或者包含與煙堿性受體激動(dòng)劑聯(lián)合的正調(diào)節(jié)劑的組合物。因此，所述應(yīng)用的含有煙堿性受體激動(dòng)劑正調(diào)節(jié)劑的藥用組合物可以另外包含有效治療或預(yù)防這類(lèi)疾病或病癥的一種煙堿性受體激動(dòng)劑和一種惰性、藥學(xué)上可接受的載體。實(shí)驗(yàn)方法本發(fā)明化合物的活性可以在以下所述試驗(yàn)中進(jìn)行測(cè)量(a)非洲爪蟾屬(Xenopus)卵母細(xì)胞電流記錄非洲爪蟾屬卵母細(xì)胞提供了一種評(píng)價(jià)被認(rèn)為是配體門(mén)控離子通道亞基的蛋白質(zhì)的功能的有效方法。注射從編碼所述合適受體亞基的cDNA克隆轉(zhuǎn)錄的RNA，或注射其中所述編碼序列置于啟動(dòng)子下游的cDNA，導(dǎo)致在卵母細(xì)胞表面出現(xiàn)功能性配體門(mén)控離子通道(參見(jiàn)例如Boulter等(1987)Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.84，7763-7767)。
因此，評(píng)價(jià)煙堿效力增強(qiáng)的一種方便的技術(shù)是來(lái)自由cRNA表達(dá)α7-煙堿性受體的非洲爪蟾屬卵母細(xì)胞的雙電極電壓鉗記錄(two-electrode voltage-clamp recording)。
用0.15％三卡因麻醉爪蟾(Xenopus laevis)蛙(Xenopus I，Kalamazoo，MI)。將卵母細(xì)胞取出，置于OR2溶液(82mM NaCl，2.5mM KCl，5mMHEPES，1.5mM NaH2PO4，1mM MgCl2，0.1mM EDTA；pH 7.4)中。將卵母細(xì)胞在以1Hz振動(dòng)的平臺(tái)上在含有0.2％膠原酶1A(Sigma)的25ml OR2中孵育2次，每次60分鐘，將其去卵泡；然后貯存于LeibovitzL-15培養(yǎng)基(50μg/ml慶大霉素(gentomycin)、10單位/ml青霉素和10μg/ml鏈霉素)中。第二天，向每個(gè)卵母細(xì)胞中注射約50ng cRNA。用Message Machine(購(gòu)自Abion)，由cDNA合成cRNA。
外部記錄溶液由90mM NaCl、1mM KCl、1mM MgCl2、1mMBaCl2、5mM HEPES；pH7.4組成。用卵母細(xì)胞鉗放大器(OC 725C；Warner Instrument，Hamden，CT)進(jìn)行雙電極電壓鉗記錄。當(dāng)填充3MKCl時(shí)，用1-2MΩ尖端阻抗的兩個(gè)電極刺穿卵母細(xì)胞。當(dāng)膜電位變得穩(wěn)定在相對(duì)于-20mV為負(fù)值的電位(當(dāng)在浴溶液中Ba++置換Ca++時(shí)，靜息膜電位負(fù)值更大)時(shí)，開(kāi)始記錄。將膜電位鉗在-80mV。ACh購(gòu)自Sigma。卵母細(xì)胞用含或不含ACh的記錄溶液連續(xù)灌注(5ml/min)。
測(cè)量從基線(xiàn)至峰值的電流振幅。通過(guò)用GraphPad Prism(GraphPadSoftware，Inc.，San Diego，CA)將數(shù)據(jù)與邏輯斯諦等式擬合，估計(jì)EC50值、最大效應(yīng)和希耳斜率。
正調(diào)節(jié)劑誘發(fā)的激動(dòng)劑效力的增強(qiáng)可以以?xún)煞N方式計(jì)算(1)以電流振幅加強(qiáng)的百分比計(jì)算，其定義為100(Im-Ic)/Ic，其中Im是在調(diào)節(jié)劑存在下的電流振幅，而Ic是無(wú)調(diào)節(jié)劑時(shí)的電流。
(2)以激動(dòng)劑記錄圖的“曲線(xiàn)下面積”的增強(qiáng)百分比計(jì)算，它是在一定時(shí)間內(nèi)凈電流的積分。曲線(xiàn)下的面積通常代表通過(guò)所述通道的總離子通量。(b)Ca2+通量成像通過(guò)細(xì)胞系中瞬時(shí)表達(dá)的nAChRα7受體的Ca2+通量的成像，是分析調(diào)節(jié)劑活性的另一種方法。
讓表達(dá)α7受體的細(xì)胞(例如HEK-293細(xì)胞或經(jīng)細(xì)胞培養(yǎng)的神經(jīng)元)在96孔板中生長(zhǎng)至匯合，加入一種熒光鈣指示劑-fluo-3。為了篩選α7調(diào)節(jié)活性，將96孔板置于熒光成像平板讀出儀(FLIPR)中，將受試化合物和α7激動(dòng)劑同時(shí)加入所有孔中。根據(jù)通過(guò)每孔熒光強(qiáng)度的增加而定量的流入細(xì)胞中的鈣，測(cè)量受體活化，同時(shí)由FLIPR記錄。根據(jù)與單獨(dú)的激動(dòng)劑相比的熒光增加，測(cè)定調(diào)節(jié)效應(yīng)。同樣，為了測(cè)試nAChRα7激動(dòng)劑活性，將受試化合物和α7調(diào)節(jié)劑同時(shí)加入所有孔中。根據(jù)通過(guò)每孔熒光強(qiáng)度的增加而定量的流入細(xì)胞中的鈣，測(cè)量受體活化，同時(shí)由FLIPR記錄。根據(jù)與單獨(dú)的調(diào)節(jié)劑相比的熒光增加，測(cè)定激動(dòng)劑的效應(yīng)。
按照以下方法制備經(jīng)細(xì)胞培養(yǎng)的神經(jīng)元將18日齡的Sprague-Dawley大鼠胎兒(E-18)從妊娠雌鼠體內(nèi)無(wú)菌取出，將其處死，取出腦的前皮質(zhì)，剝離腦膜，并將經(jīng)清除后的皮質(zhì)置于冷HBSS中。如果需要海馬，則從皮質(zhì)中解剖出海馬，然后置于冷HBSS中。將組織機(jī)械分散，在HBSS(200g，于4℃30分鐘)中洗滌1次，重懸于補(bǔ)充谷氨酰胺、抗生素、氯化鉀、胰島素、運(yùn)鐵蛋白、硒和5％熱滅活胎牛血清(FBS，無(wú)內(nèi)毒素)的改進(jìn)的Sato培養(yǎng)基中，然后接種到24孔板(包被有聚L-賴(lài)氨酸)的各孔中。各孔可以帶有也用PLL包被的蓋玻片。將平板在CO2培養(yǎng)箱中于37℃孵育。24小時(shí)后，除去培養(yǎng)基，加入新鮮培養(yǎng)基，并讓細(xì)胞再生長(zhǎng)至少11天，必要時(shí)進(jìn)行流加培養(yǎng)。
本發(fā)明的化合物是在低濃度乙酰膽堿(30μM)下測(cè)量基線(xiàn)至峰值時(shí)引起基線(xiàn)電流(如上所述)100％增加(2倍增加)的化合物，表明預(yù)料它們具有有用的治療活性。本發(fā)明的化合物也是當(dāng)如上所述用于Ca2+通量成像測(cè)定時(shí)引起Ca2+通量增加的化合物。與單獨(dú)的激動(dòng)劑所引起的Ca2+通量(以熒光強(qiáng)度單位測(cè)量)相比，本發(fā)明化合物引起的Ca2+通量的任何增加表明，預(yù)料它們具有有用的治療活性。
本發(fā)明化合物的應(yīng)用的優(yōu)點(diǎn)是，它們的毒性可能較低，效力更強(qiáng)，作用時(shí)間更長(zhǎng)，活性范圍更寬，更有效，產(chǎn)生的副作用更小，吸收更容易，或具有其它有用的藥理學(xué)特性。通用實(shí)驗(yàn)方法市售的試劑可不用進(jìn)一步純化而使用。質(zhì)譜或者用HewlettPackard 5988A質(zhì)譜儀記錄，或者用MicroMass Quattro-1質(zhì)譜儀記錄，并且以母體分子離子的m/z報(bào)告。室溫是指20-25℃。
實(shí)施例以下實(shí)施例是優(yōu)選的非限制性實(shí)施例，具體體現(xiàn)本發(fā)明的優(yōu)選方面。實(shí)施例15-肉桂基氧基吲哚向5-羥基吲哚(0.25g)的乙腈(10ml)溶液中加入碳酸銫(1.22g)和肉桂基氯(0.37g)。將懸浮液在氮?dú)?、環(huán)境溫度下攪拌過(guò)夜。經(jīng)過(guò)濾除去銫鹽，并用丙酮洗滌。濃縮合并的濾液和洗滌液后留下殘余物，用乙酸乙酯和己烷的混合物經(jīng)硅膠色譜分離，從乙醚及己烷中結(jié)晶后，得到0.23g標(biāo)題化合物。MS CI(MH+)＝250實(shí)施例25-芐氧基吲哚-3-乙腈采用類(lèi)似于實(shí)施例1中所述的方法，由芐基溴和5-羥基吲哚-3-乙腈制備標(biāo)題化合物。MS ES(MH+)＝263。實(shí)施例35-(2-苯氧基乙氧基)吲哚采用類(lèi)似于實(shí)施例1中所述的方法，由2-苯氧基乙基溴和5-羥基吲哚制備標(biāo)題化合物。MS ES(MH+)＝254。實(shí)施例45-(2-萘基甲氧基)吲哚采用類(lèi)似于實(shí)施例1中所述的方法，由2-萘基甲基氯和5-羥基吲哚制備標(biāo)題化合物。MS ES(MH+)＝274。實(shí)施例55-苯基氨基甲?；谆胚岵捎妙?lèi)似于實(shí)施例1中所述的方法，由氯代N-乙酰苯胺和5-羥基吲哚制備標(biāo)題化合物。MS CI(MH+)＝267。實(shí)施例61-糠基-3-(5-吲哚基)-2-硫脲向5-氨基吲哚(0.26g)的乙醇(10ml)溶液中加入異硫氰酸糠基酯(0.28g)。將溶液于室溫下攪拌過(guò)夜，蒸發(fā)至殘余物，將殘余物溶于溫乙醇中，并用水沉淀，得到0.32g標(biāo)題化合物。MS ES(MH+)＝272。
權(quán)利要求
1.一種式I化合物或其對(duì)映體及其藥學(xué)上可接受的鹽 其中R1和R3獨(dú)立地是氫或C1-C4烷基；R2是氫、C1-C4烷基或CH2CN；R4是氫、C1-C4烷基、C2-C4鏈烯基、C2-C4炔基、CH2C(W)＝CH2、(CH2)nAr、CH2CH＝CHAr、CH2COPh、CH2CONHAr、C(U)NH(CH2)mAr或(CH2)dY(CH2)eAr；U是氧或硫；W是鹵素；X和Y獨(dú)立地是O、S或NR5；R5是氫、C1-C4烷基、C2-C4鏈烯基；或R3和R5一起形成一個(gè)環(huán)；n和m獨(dú)立地為0-4；d為1-3；e為0-1；Ar是苯基、萘基或者含有0-4個(gè)氮、0-1個(gè)硫和0-1個(gè)氧的5元或6元雜環(huán)；Ar可任選地用選自以下的一個(gè)或更多個(gè)取代基取代氫、鹵素、C1-C4烷基、C2-C4鏈烯基、C2-C4炔基、CN、NO2、CF3、OR6、NR7R8、COOR9；R6、R7和R8獨(dú)立地為氫、C1-C4烷基、芳基、雜芳基、C(O)R10、C(O)NHR11、SO2R12；或R7和R8一起可以是(CH2)jQ(CH2)k，其中Q是O、S、NR13或一個(gè)鍵；j是2-4；k是0-2；R9、R10、R11、R12和R13獨(dú)立地為氫、C1-C4烷基、芳基或雜芳基。
2.權(quán)利要求1的化合物，所述化合物是5-肉桂基氧基吲哚；5-芐氧基吲哚-3-乙腈；5-(2-苯氧基乙氧基)吲哚；5-(2-萘基甲氧基)吲哚；5-苯基氨基甲?；谆胚?；1-糠基-3-(5-吲哚基)-2-硫脲；或其對(duì)映體及其藥學(xué)上可接受的鹽。
3.一種用于治療的權(quán)利要求1或權(quán)利要求2的化合物。
4.一種藥用組合物，所述藥用組合物包含與惰性、藥學(xué)上可接受的稀釋劑或載體混合的權(quán)利要求1或權(quán)利要求2中限定的化合物。
5.權(quán)利要求4的藥用組合物，所述藥用組合物還包含一種煙堿性受體激動(dòng)劑。
6.用于治療或預(yù)防人類(lèi)疾病或病癥的權(quán)利要求4或權(quán)利要求5的藥用組合物，所述疾病或病癥是其中所述化合物有能力增強(qiáng)煙堿性受體激動(dòng)劑效力的疾病或病癥。
7.用于治療或預(yù)防精神病或智力減低疾病的權(quán)利要求4或權(quán)利要求5的藥用組合物。
8.用于治療或預(yù)防人類(lèi)疾病或病癥的權(quán)利要求4或權(quán)利要求5的藥用組合物，所述疾病或病癥是其中所述α7煙堿性受體的活化是有益的疾病或病癥。
9.用于治療或預(yù)防下列疾病或病癥的權(quán)利要求7的藥用組合物，所述疾病或病癥是早老性癡呆、學(xué)習(xí)缺陷、認(rèn)知缺陷、注意力缺乏、記憶力喪失、注意力不集中的過(guò)度反應(yīng)癥、雷維小體性癡呆、焦慮、精神分裂癥、或躁狂或躁狂性抑郁、帕金森病、亨廷頓舞蹈病、圖雷特綜合征、有膽堿能突觸損失的神經(jīng)變性性疾病、時(shí)差綜合癥、停止吸煙、煙堿癮包括由于接觸含煙堿制品所致的煙堿癮、疼痛或潰瘍性結(jié)腸炎。
10.用于治療或預(yù)防下列疾病或病癥的權(quán)利要求7的藥用組合物，所述疾病或病癥是早老性癡呆、學(xué)習(xí)缺陷、認(rèn)知缺陷、注意力缺乏、雷維小體性癡呆、記憶力喪失或注意力不集中的過(guò)度反應(yīng)癥。
11.用于治療或預(yù)防下列疾病或病癥的權(quán)利要求7的藥用組合物，所述疾病或病癥是焦慮、精神分裂癥、或躁狂或躁狂性抑郁。
12.用于治療或預(yù)防下列疾病或病癥的權(quán)利要求7的藥用組合物，所述疾病或病癥是帕金森病、亨廷頓舞蹈病、圖雷特綜合征或有膽堿能突觸損失的神經(jīng)變性性疾病。
13.用于治療或預(yù)防下列疾病或病癥的權(quán)利要求7的藥用組合物，所述疾病或病癥是時(shí)差綜合癥、煙堿癮包括由于接觸含煙堿制品所致的煙堿癮、疼痛或潰瘍性結(jié)腸炎。
14.用于治療或預(yù)防早老性癡呆的權(quán)利要求7的藥用組合物。
15.權(quán)利要求1或權(quán)利要求2的化合物在生產(chǎn)用于精神病或智力減低疾病的治療或預(yù)防的藥物中的用途。
16.權(quán)利要求1或權(quán)利要求2的化合物在生產(chǎn)用于其中所述α7煙堿性受體的活化為有益的人類(lèi)疾病或病癥的治療或預(yù)防的藥物中的用途。
17.權(quán)利要求1或權(quán)利要求2的化合物在生產(chǎn)用于以下疾病或病癥的治療或預(yù)防的藥物中的用途早老性癡呆、學(xué)習(xí)缺陷、認(rèn)知缺陷、注意力缺乏、記憶力喪失、注意力不集中的過(guò)度反應(yīng)癥、雷維小體性癡呆、焦慮、精神分裂癥、躁狂或躁狂性抑郁、帕金森病、亨廷頓舞蹈病、圖雷特綜合征、有膽堿能突觸損失的神經(jīng)變性性疾病、時(shí)差綜合癥、停止吸煙、煙堿癮包括由于接觸含煙堿制品所致的煙堿癮、疼痛或潰瘍性結(jié)腸炎。
18.權(quán)利要求17的用途，其中所述病癥或疾病是早老性癡呆、學(xué)習(xí)缺陷、認(rèn)知缺陷、注意力缺乏、記憶力喪失、雷維小體性癡呆或注意力不集中的過(guò)度反應(yīng)癥。
19.權(quán)利要求17的用途，其中所述疾病是焦慮、精神分裂癥、躁狂或躁狂性抑郁。
20.權(quán)利要求17的用途，其中所述疾病是帕金森病、亨廷頓舞蹈病、圖雷特綜合征或有膽堿能突觸損失的神經(jīng)變性性疾病。
21.權(quán)利要求17的用途，其中所述病癥或疾病是早老性癡呆。
22.權(quán)利要求17的用途，其中所述病癥或疾病是時(shí)差綜合癥、煙堿癮包括由于接觸含煙堿制品所致的煙堿癮、疼痛和潰瘍性結(jié)腸炎。
23.一種治療與煙堿傳遞減弱相關(guān)的病癥的方法，所述方法包括給予需要這種治療的患者醫(yī)療上有效量的權(quán)利要求1或權(quán)利要求2的化合物，所述化合物具有增強(qiáng)煙堿性受體激動(dòng)劑效力的能力。
24.權(quán)利要求23的方法，其中所述化合物與煙堿性受體激動(dòng)劑一起給予。
25.權(quán)利要求23或權(quán)利要求24的方法，其中所述激動(dòng)劑是α7-煙堿性受體激動(dòng)劑。
26.一種治療或預(yù)防精神病或智力減低疾病的方法，所述方法包括給予治療有效量的權(quán)利要求1或權(quán)利要求2的化合物。
27.一種治療或預(yù)防其中所述α7煙堿性受體的活化為有益的疾病或病癥的方法，所述方法包括給予治療有效量的權(quán)利要求1或權(quán)利要求2的化合物。
28.權(quán)利要求23-27中任一項(xiàng)的方法，其中所述疾病是早老性癡呆、學(xué)習(xí)缺陷、認(rèn)知缺陷、注意力缺乏、記憶力喪失、注意力不集中的過(guò)度反應(yīng)癥、雷維小體性癡呆、焦慮、精神分裂癥、躁狂或躁狂性抑郁、帕金森病、亨廷頓舞蹈病、圖雷特綜合征、有膽堿能突觸損失的神經(jīng)變性性疾病、時(shí)差綜合癥、停止吸煙、煙堿癮包括由于接觸含煙堿制品所致的煙堿癮、疼痛或潰瘍性結(jié)腸炎。
29.權(quán)利要求28的方法，其中所述疾病是早老性癡呆、學(xué)習(xí)缺陷、認(rèn)知缺陷、注意力缺乏、記憶力喪失、雷維小體性癡呆或注意力不集中的過(guò)度反應(yīng)癥。
30.權(quán)利要求28的方法，其中所述疾病是帕金森病、亨廷頓舞蹈病、圖雷特綜合征或有膽堿能突觸損失的神經(jīng)變性性疾病。
31.權(quán)利要求28的方法，其中所述疾病是焦慮、精神分裂癥、躁狂或躁狂性抑郁。
32.權(quán)利要求28的方法，其中所述疾病是時(shí)差綜合癥、煙堿癮、疼痛和潰瘍性結(jié)腸炎。
33.權(quán)利要求28的方法，其中所述疾病是早老性癡呆。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種式(I)化合物或其對(duì)映體及其藥學(xué)上可接受的鹽,其中:R
文檔編號(hào)A61P25/16GK1387512SQ0081544
公開(kāi)日2002年12月25日 申請(qǐng)日期2000年11月1日 優(yōu)先權(quán)日1999年11月3日
發(fā)明者D·古利, T·蘭托恩, J·馬科爾, J·羅薩蒙德 申請(qǐng)人:阿斯特拉曾尼卡有限公司