專利名稱：嘧啶－2,4,6－三酮金屬蛋白酶抑制劑的制作方法
背景技術(shù)：
本發(fā)明涉及嘧啶-2，4，6-三酮金屬蛋白酶抑制劑，并且涉及治療炎癥、癌和其它障礙的藥物組合物和方法。
本發(fā)明的化合物是鋅金屬內(nèi)肽酶、尤其是屬于基質(zhì)金屬蛋白酶(也稱為MMP或matrixin)和metzincins的reprolysin(也稱為adamylsin)亞族的那些的抑制劑[Rawlings等，酶學(xué)中的方法(Methods in Enzymology)，248，183～228(1995)以及Stocker等，蛋白質(zhì)科學(xué)(Protein Science)，4，823～840(1995)]。
酶的MMP亞族現(xiàn)在包括十七種(MMP-1、MMP-2、MMP-3、MMP-7、MMP-8、MMP-9、MMP-10、MMP-11、MMP-12、MMP-13、MMP-14、MMP-15、MMP-16、MMP-17、MMP-18、MMP-19、MMP-20)。人們最熟悉這些MMP在調(diào)節(jié)胞外基質(zhì)蛋白的更新中的作用，所以它們在正常生理過程(例如生殖、發(fā)育和分化)中起重要作用。此外，這些MMP是在很多病理情況中(其中，發(fā)生異常結(jié)締組織更新)表達(dá)的。例如，已闡述了MMP-13[一種在降解II型膠原(軟骨中的主要膠原)方面具有潛在活性的酶]在骨關(guān)節(jié)炎軟骨中的超量表達(dá)[Mitchell等，臨床研究雜志(J.Clin.Invest.)，97，761(1996)]。其它MMPs(MMP-2、MMP-3、MMP-8、MMP-9、MMP-12)也在骨關(guān)節(jié)炎軟骨中被超量表達(dá)，所以，這些MMP的一些或全部的抑制有望減慢或阻止典型關(guān)節(jié)疾病(例如，骨關(guān)節(jié)炎和類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎)中軟骨的加速損耗。
哺乳動物reprolysins被稱為ADAMs(一種Disintegrin和金屬蛋白酶)[Wolfberg等，細(xì)胞生物學(xué)雜志(J.Cell Biol.)，131，275～278(1995)]，它們包含除金屬蛋白酶樣的域之外的一個disintegrin域。迄今已鑒定了二十三種ADAM。
ADAM-17[也稱為腫瘤壞死因子-α轉(zhuǎn)化酶(TACE)]是人們最熟悉的ADAM。ADAM-17(TACE)引起細(xì)胞結(jié)合腫瘤壞死因子-α(TNF-α，也稱為惡液質(zhì)素)的分裂。人們認(rèn)識到，在很多傳染病和自身免疫病中涉及TNF-α[W.Friers，歐洲生物化學(xué)學(xué)會聯(lián)合會快報(bào)(FEBS Letters)，285，199(1991)]。此外，已證實(shí)TNF-α是見于膿毒癥和敗血癥性休克中的炎癥響應(yīng)的主要介體[Spooner等，臨床免疫學(xué)與免疫病理學(xué)(Clinical Immunology and Immunopathology)，62 S11(1992)]。有兩種TNF-α形式相對分子量為26,000(26kD)的II型膜蛋白質(zhì)和通過特異性蛋白酶解從細(xì)胞結(jié)合蛋白產(chǎn)生的可溶性17kD形式。TNF-α的可溶性17kD形式是通過細(xì)胞釋放的，它與TNF-α的有害效果相關(guān)。這種形式的TNF-α也能在遠(yuǎn)離合成位點(diǎn)的位點(diǎn)起作用。所以，TACE的抑制防止可溶性TNF-α的形成，所以防止該可溶性因子的有害效果。
本發(fā)明的選定化合物是聚集蛋白聚糖酶(一種在軟骨聚集蛋白聚糖的降解中重要的酶)的有效抑制劑。還認(rèn)為聚集蛋白聚糖酶是一種ADAM[Tortorella等，科學(xué)(Science)，284，1664(1999)]。聚集蛋白聚糖從軟骨中的損失是關(guān)節(jié)疾病(例如，骨關(guān)節(jié)炎和類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎)的惡化中的重要因素，所以，聚集蛋白聚糖酶的抑制有望減慢或阻止這些疾病中的軟骨損失。
已證實(shí)在病理情況中表達(dá)的其它ADAMs包括ADAM TS-1[Kuno等，生物化學(xué)雜志(J.Biol.Chem.)，272，556～562(1997)]，以及ADAM的10、12和15[Wu等，生物化學(xué)與生物物理學(xué)研究通訊(Biochem.Biophys.Res.Comm.)，235，437～442(1997)]。人們將懂得，對于和ADAM相關(guān)的表達(dá)、生理底物和疾病的了解增大了這類酶的抑制作用的全部意義。
人們認(rèn)識到，在不同病理情況中表達(dá)了MMP的和ADAM的不同組合。這樣，具有對各種ADAM和/或MMP的特異選擇性的抑制劑可能對各種疾病來說是優(yōu)選的。例如，類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎是一種炎性關(guān)節(jié)病，其特征在于，過高的TNF水平和關(guān)節(jié)基質(zhì)組分的損失。在該情況下，一種抑制TACE和聚集蛋白聚糖酶以及MMP(例如MMP-13)的化合物可能是優(yōu)選的治療物。反之，在較輕炎性關(guān)節(jié)病(例如骨關(guān)節(jié)炎)中，抑制基質(zhì)降解MMP(例如MMP-13但不是TACE)的化合物可能是優(yōu)選的。
本發(fā)明人還發(fā)現(xiàn)了，可以鑒別具有不同金屬蛋白酶和reprolysin活性(優(yōu)選是MMP-13抑制活性)的式I的抑制劑。本發(fā)明人已能鑒別的一組式I的優(yōu)選抑制劑包括選擇性抑制MMP-13(優(yōu)選比對MMP-1選擇性更高)的那些。
基質(zhì)金屬蛋白酶和reprolysin抑制劑都是文獻(xiàn)中熟知的。具體地說，1998年12月30日公開的PCT公開WO 98/58925涉及某些嘧啶2，4，6-三酮MMP抑制劑。1994年7月13日公開的歐洲專利公開606,046涉及某些雜環(huán)MMP抑制劑。1999年1月19日公開的美國專利5,861,510涉及適用作MMP抑制劑的環(huán)狀芳基磺酰氨基異羥肟酸。1998年8月13日公開的PCT公開WO 98/34918涉及適用作MMP抑制劑的雜環(huán)異羥肟酸(包括一些二烷基取代的化合物)。分別于1996年3月7日和1998年2月26日公開的PCT公開WO 96/27583和WO 98/07697涉及芳基磺酰異羥肟酸。1998年1月29日公開的PCT公開WO 98/03516涉及具有MMP活性的次膦酸鹽。1998年8月6日公開的PCT公開WO98/33768涉及N-未取代的芳基磺酰氨基異羥肟酸。都是在1998年3月5日公開的PCT公開WO 98/08825和WO 98/08815涉及某些雜環(huán)MMP抑制劑。都是在1998年8月12日申請的美國專利申請60/096232和60/096256還涉及雜環(huán)異羥肟酸MMP和TACE抑制劑。上述參考出版物和申請的每一份都以其全文并入本文作參考。
發(fā)明概述本發(fā)明涉及下式的化合物 其中，R1是氫，(C1～C4)全氟烷基，(C1～C8)烷基或(C3～C8)環(huán)烷基，其中，所述(C1～C8)烷基或(C3～C8)環(huán)烷基可任選包含1～3個獨(dú)立選自氧，＞NR5和硫的雜原子；其中，所述(C1～C8)烷基或(C3～C8)環(huán)烷基還可任選被1～2個獨(dú)立選自下列的取代基取代(C1～C4)烷基，(C6～C10)芳基，(C2～C10)雜芳基，OH，NH2，(C1～C4)烷基氨基，二[(C1～C4)烷基]氨基，(C3～C8)環(huán)烷基氨基，(C3～C8)環(huán)烷基(C1～C4)烷基氨基，(C1～C4)烷氧基，-CONH2，-CONHR4，-CON(R4)2和(C3～C8)環(huán)烷基，其中，所述(C3～C8)環(huán)烷基可任選包含1或2個獨(dú)立選自＞NR5，氧和硫的雜原子；R2和R3獨(dú)立選自氫或(C1～C4)烷基，其中，所述(C1～C4)烷基可任選包含1個選自氧，＞NR5或硫的雜原子，并且所述(C1～C4)烷基可任選被下列取代基取代(C6～C10)芳基，(C2～C10)雜芳基，OH，NH2，(C1～C4)烷基氨基，二[(C1～C4)烷基]氨基，(C3～C8)環(huán)烷基氨基，(C3～C8)環(huán)烷基(C1～C4)烷基氨基，(C1～C4)烷氧基，-CON(R4)2或(C3～C8)環(huán)烷基；其中，所述(C3～C8)環(huán)烷基可包含1或2個獨(dú)立選自＞NR5，氧和硫的雜原子；X選自下組氧，硫，＞SO2，＞S＝O，＞NR4，-CH2O-，-OCH2-，-CH2S-，-CH2(S＝O)-，-CH2SO2-，-SCH2-，-SOCH2-，-SO2CH2-，-N(R4)CH2-，-CH2N(R4)-，-N(R4)SO2-和-SO2N(R4)-；在任何地方出現(xiàn)的R4獨(dú)立選自氫和(C1～C4)烷基；在任何地方出現(xiàn)的R5獨(dú)立選自氫，(C1～C4)烷基，(C6～C10)芳基，(C2～C10)雜芳基，OH，-CONH2，-CONHR4，-CON(R4)2和(C3～C8)環(huán)烷基；Y選自一個鍵，氧，硫，＞SO2，＞S＝O，＞NH，-CH2-，-CH2O-，-OCH2-，-CH2S-，-CH2(S＝O)-，-CH2SO2-，-SCH2-，-SOCH2-，-SO2CH2-，-NHCH2-，-CH2NH-，-CH2CH2-，-CH＝CH-，-NHSO2-和-SO2NH-；Ar1是(C6～C10)芳基或(C2～C10)雜芳基；以及Z是(C6～C10)芳基，(C3～C8)環(huán)烷基，(C3～C8)環(huán)烷基(C1～C4)烷基或(C2～C10)雜芳基；其中，所述(C3～C8)環(huán)烷基或(C3～C8)環(huán)烷基(C1～C4)烷基的1或2個環(huán)碳原子可任選被獨(dú)立選自氧，硫和NR5的雜原子取代；其中，Ar1和Z在能形成另外的鍵的任意環(huán)碳原子上可任選被1～3個獨(dú)立選自下列的取代基取代F，Cl，Br，CN，OH，(C1～C4)烷基，(C1～C4)全氟烷基，(C1～C4)全氟烷氧基，(C1～C4)烷氧基，以及(C3～C8)環(huán)烷氧基；或其藥物上可接受的鹽。
本發(fā)明還涉及式I化合物的藥物上可接受的酸加合鹽。用于制備本發(fā)明的上述堿化合物的藥物上可接受的酸加合鹽的酸是形成無毒的酸加合鹽的那些，所述鹽即，含藥物上可接受的陰離子的鹽，例如，鹽酸鹽、氫溴酸鹽、氫碘酸鹽、硝酸鹽、硫酸鹽、硫酸氫鹽、磷酸鹽、酸式磷酸鹽、乙酸鹽、乳酸鹽、檸檬酸鹽、酸式檸檬酸鹽、酒石酸鹽、酒石酸氫鹽、琥珀酸鹽、馬來酸鹽、富馬酸鹽、葡糖酸鹽、糖二酸鹽、苯甲酸鹽、甲磺酸鹽、乙磺酸鹽、苯磺酸鹽、對-甲苯磺酸鹽和雙羥萘酸鹽[即，1，1′-亞甲基-雙-(2-羥基-3-萘甲酸鹽)]。
本發(fā)明還涉及式I的堿加合鹽?？捎米髦苽涑仕嵝缘哪切┦絀化合物藥物上可接受的堿鹽的試劑的化學(xué)堿是與這些化合物形成無毒堿鹽的那些。這樣的無毒堿鹽包括但不限于得自藥物上可接受的陽離子的那些，例如，堿金屬陽離子(例如，鉀和鈉)以及堿土金屬陽離子(例如，鈣和鎂)，銨或者水溶性胺加合鹽，例如N-甲基葡糖胺(麥格魯明)，以及低級鏈烷醇銨和藥物上可接受的有機(jī)胺的其它堿鹽。
用于本文的基Y中的術(shù)語“一個鍵”表示，基Ar1和Z通過一個碳-碳鍵直接連接而形成懸掛的芳環(huán)(例如聯(lián)苯)。
除非另外說明，用于本文的術(shù)語“烷基”包括具有直形、支化的或環(huán)狀部分或其組合的飽和一價(jià)烴基。烷基(不論它們在何處出現(xiàn))可任選被合適的取代基取代。
除非另外說明，用于本文的術(shù)語“烯基”包括含有至少一個烯鍵并且具有直形、支化的或環(huán)狀部分或其組合的烴基。
除非另外說明，用于本文的術(shù)語“炔基”包括含有至少一個碳-碳叁鍵并且具有直形、支化的或環(huán)狀部分或其組合的烴基。
用于本文的術(shù)語“烷氧基”包括O-烷基，其中，“烷基”同上述定義。
除非另外說明，用于本文的術(shù)語“鹵”包括氟、氯、溴或碘，優(yōu)選是氟或氯。
除非另外說明，用于本文的術(shù)語“芳基”包括通過除去一個或多個氫原子而得自芳烴的有機(jī)基，例如，苯基或萘基，任選被1～3個下列合適的取代基取代氟、氯、氰基、硝基、三氟甲基、(C1～C6)烷氧基、(C6～C10)芳氧基、(C3～C8)環(huán)烷氧基、三氟甲氧基、二氟甲氧基或(C1～C6)烷基。
除非另外說明，用于本文的術(shù)語“雜芳基”包括通過除去一個或多個氫原子而得自芳雜環(huán)化合物的有機(jī)基，例如，吡啶基、呋喃基、吡咯基、噻吩基、異噻唑基、咪唑基、苯并咪唑基、四唑基、吡嗪基、嘧啶基、喹啉基、異喹啉基、苯并呋喃基、異苯并呋喃基、苯并噻吩基、吡唑基、吲哚基、異吲哚基、嘌呤基、咔唑基、異噁唑基、噻唑基、噁唑基、苯并噻唑基或苯并噁唑基，任選被1～3個如下定義的合適的取代基取代，例如，氟、氯、三氟甲基、(C1～C6)烷氧基、(C6～C10)芳氧基、(C3～C8)環(huán)烷氧基、三氟甲氧基、二氟甲氧基或(C1～C6)烷基。
“合適的取代基”旨在表示化學(xué)上或藥物上可接受的官能團(tuán)，即，不抵消本發(fā)明化合物的抑制活性的那些。這類合適的取代基通?？捎杀绢I(lǐng)域技術(shù)人員按常規(guī)選定。合適的取代基的闡述性實(shí)例包括但不限于鹵基，全氟烷基，全氟烷氧基，烷基，羥基，橋氧基，巰基，烷硫基，烷氧基，芳基或雜芳基，芳氧基或雜芳氧基，芳烷基或雜芳烷基，芳烷氧基或雜芳烷氧基，羧基，氨基，烷基氨基和二烷基氨基，甲氨?；?，烷基羰基，烷氧羰基，烷基氨基羰基二烷基氨基羰基，芳基羰基，芳氧基羰基，烷基磺酰基，芳基磺酰基等。
一些式I的化合物含有手性中心，所以存在不同的對映體形式。本發(fā)明涉及式I化合物的所有旋光異構(gòu)體、對映體、非對映體和立體異構(gòu)體及其混合物。本發(fā)明的化合物還以不同的互變異構(gòu)形式存在。本發(fā)明涉及式I的所有互變異構(gòu)體。
本發(fā)明優(yōu)選的化合物是其中R2和R3各自是氫的那些。
本發(fā)明其它優(yōu)選的化合物包括那些其中，X是氧、-OCH2-、-CH2O-，更優(yōu)選其中，X是氧；更優(yōu)選其中，Y是一個鍵、氧、硫、-CH2-、＞SO2、-OCH2-或-CH2O-，更優(yōu)選其中，Y是氧、-OCH2-或-CH2O-，最優(yōu)選其中，Y是氧。
本發(fā)明的其它實(shí)施方案包括那些式I的化合物，其中，X是硫、＞SO2、-SCH2-、-CH2S-、-CH2SO2-或-SO2CH2-，更優(yōu)選其中，Y是一個鍵、氧、硫、-CH2-、＞SO2、-OCH2-或-CH2O-，更優(yōu)選其中，Y是氧、-OCH2-或-CH2O-，最優(yōu)選其中，Y是氧。
本發(fā)明的其它實(shí)施方案包括那些式I的化合物，其中，X是＞NR4、-CH2NR4-或-NR4CH2-，更優(yōu)選其中，Y是一個鍵、氧、硫、-CH2-、＞SO2、-OCH2-或-CH2O-，更優(yōu)選其中，Y是氧、-OCH2-或-CH2O-，最優(yōu)選其中，Y是氧。
本發(fā)明的其它實(shí)施方案包括那些式I的化合物，其中，X是-N(R4)SO2-或-SO2N(R4)-，更優(yōu)選其中，Y是一個鍵、氧、硫、-CH2-、＞SO2、-OCH2-或-CH2O-，更優(yōu)選其中，Y是氧、-OCH2-，最優(yōu)選其中，Y是氧。
其它優(yōu)選的化合物是那些其中，Ar1是任選取代的苯基。
本發(fā)明的其它實(shí)施方案包括那些式I的化合物，其中，Z是(C6～C10)芳基，優(yōu)選是苯基，任選被一個或多個獨(dú)立選自下列的取代基(優(yōu)選是零、一個或兩個取代基)取代F、Cl、Br、-CN、OH、(C1～C4)烷基、(C1～C4)全氟烷基、(C1～C4)全氟烷氧基、(C1～C4)烷氧基和(C3～C8)環(huán)烷氧基。
本發(fā)明的其它實(shí)施方案包括那些式I的化合物，其中，Z是(C3～C8)環(huán)烷基[即，(C3～C8)環(huán)烷基或(C3～C8)環(huán)烷氧基-(C1～C4)烷基]，其中，所述(C3～C8)環(huán)烷基的-個或兩個環(huán)碳原子可任選被獨(dú)立選自氧、硫或NR5的雜原子取代，其中，R5選自氫、(C1～C4)烷基、(C6～C10)芳基、(C2～C10)雜芳基、OH、-CONH2、-CONHR4、-CON(R4)2和(C3～C8)環(huán)烷基。這類優(yōu)選的基包括環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基、四氫呋喃基、四氫吡喃基、N-甲基-3-氮雜環(huán)丁烷基、哌嗪基、哌啶基、1，3-噁唑烷-4-酮-5-基、1，3-噁唑烷-2，4-二酮-5-基、4，5-二氫-1，2-噁唑烷-3-酮-4-基、1，3-噻唑烷-4-酮-5-基、1，3-噻唑烷-2，4-二酮-5-基、1，3-咪唑烷-4-酮-5-基、1，3-咪唑烷-2，4-二酮-5-基、1，2-吡唑烷-3-酮-4-基、四氫-1，3-噁嗪-4-二酮-5-基、四氫-1，3-噁嗪-2，4-二酮-5-基、嗎啉基、嗎啉-3-酮-2-基、嗎啉-3，5-二酮-2-基、2，3-二氫-1，4-噁嗪-3-酮-2-基、四氫-1，3-噻嗪-4-酮-5-基、四氫-1，3-噻嗪-2，4-二酮-5-基、硫代嗎啉基、硫代嗎啉-3-酮-2-基、硫代嗎啉-3，5-二酮-2-基、2，3-二氫-1，4-噻嗪-3-酮-2-基、六氫-1，2-二嗪-3-酮-4-基、4，5-二氫-2H-噠嗪-3-酮-4-基、六氫-1，3-二嗪-2，4-二酮-5-基、哌嗪-2-酮-3-基、哌嗪-2，6-二酮-3-基、四氫-1，3，4-噻二嗪-5-酮-6-基、5，6-二氫-1，3，4-噻二嗪-5-酮-6-基、1，3，4-噁二嗪-5-酮-6-基、5，6-二氫-1，2，4-噁二嗪-5-酮-6-基、四氫-1，2，4-噁二嗪-5-酮-6-基、1，2，4-三嗪-5-酮-6-基、四氫-1，2，4-噁二嗪-5-酮-6-基、5，6-二氫-1，2，4-噁二嗪-5-酮-6-基、1，2，4-噁二嗪-3，5-二酮-6-基和1，2，4-三嗪-6-酮-5-基，優(yōu)選是環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基、四氫呋喃基、四氫吡喃基、N-甲基-3-氮雜環(huán)丁烷基、哌嗪基、哌啶基、N-甲基哌啶基和嗎啉基，更優(yōu)選是環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基、四氫呋喃基和四氫吡喃基，最優(yōu)選是環(huán)丙基、四氫呋喃基和四氫吡喃基。
本發(fā)明的其它實(shí)施方案包括那些式I的化合物，其中，Z是(C3～C8)環(huán)烷基(C1～C4)烷基；其中，所述(C3～C8)環(huán)烷基(C1～C4)烷基的一個或兩個環(huán)碳原子可任選被獨(dú)立選自氧、硫或＞NR5的雜原子取代，其中，R5選自氫、(C1～C4)烷基、(C6～C10)芳基、(C2～C10)雜芳基、OH、-CONH2、-CONHR4、-CON(R4)2和(C3～C8)環(huán)烷基。優(yōu)選的環(huán)烷基環(huán)和雜環(huán)烷基環(huán)如上所述。所述(C3～C8)環(huán)烷基(C1～C4)烷基優(yōu)選的烷基是亞甲基和亞乙基。
本發(fā)明的其它實(shí)施方案包括那些式I的化合物，其中，Z是(C2～C10)雜芳基；優(yōu)選是吡啶基、呋喃基、吡咯基、噻吩基、異噻唑基、咪唑基、苯并咪唑基、四唑基、吡嗪基、嘧啶基、喹啉基、異喹啉基、苯并呋喃基、異苯并呋喃基、苯并噻吩基、吡唑基、吲哚基、異吲哚基、嘌呤基、咔唑基、異噁唑基、噻唑基、噁唑基、苯并噻唑基或苯并噁唑基，更優(yōu)選是吡啶基、嘧啶基或吡嗪基，最優(yōu)選是吡啶基；其中，所述(C2～C10)雜芳基的每一個可任選被1～3個如下合適的取代基取代例如，氟、氯、三氟甲基、(C1～C6)烷氧基、(C6～C10)芳氧基、三氟甲氧基、二氟甲氧基或(C1～C6)烷基。
本發(fā)明其它優(yōu)選的化合物包括那些，其中，Ar1是苯基或(C2～C10)雜芳基；優(yōu)選是吡啶基、呋喃基、吡咯基、噻吩基、異噻唑基、咪唑基、苯并咪唑基、四唑基、吡嗪基、嘧啶基、喹啉基、異喹啉基、苯并呋喃基、異苯并呋喃基、苯并噻吩基、吡唑基、吲哚基、異吲哚基、嘌呤基、咔唑基、異噁唑基、噻唑基、噁唑基、苯并噻唑基或苯并噁唑基，更優(yōu)選是苯基、吡啶基、吡嗪基、嘧啶基，最優(yōu)選是吡啶基或苯基，任選被1～3個如下合適的取代基取代例如，氟、氯、三氟甲基、(C1～C6)烷氧基、(C6～C10)芳氧基、三氟甲氧基、二氟甲氧基或(C1～C6)烷基。
本發(fā)明其它優(yōu)選的化合物包括那些，其中，Ar1和Z在能形成另外的鍵的任意環(huán)碳原子上被1～3個獨(dú)立選自下列的取代基取代F、Cl、Br、-CN、OH、(C1～C4)烷基、(C1～C4)全氟烷基、(C1～C4)全氟烷氧基、(C1～C4)烷氧基和(C3～C8)環(huán)烷氧基。
本發(fā)明最優(yōu)選的化合物包括式I的化合物，其中，X是氧，Y是一個鍵，氧，硫，-CH2-，＞SO2，-OCH2-或-CH2O-；R1是氫或(C1～C4)烷基；其中，所述(C1～C4)烷基可任選包含1～2個獨(dú)立選自氧和＞NR5的雜原子，其中，所述(C1～C4)烷基鏈還可任選被1～3個獨(dú)立選自下列的取代基(優(yōu)選是零、一個或兩個取代基)取代(C1～C4)烷基，OH，NH2，(C1～C4)烷基氨基，二[(C1～C4)烷基]氨基，(C1～C4)烷氧基，-CONH2，-CONHR4和CON(R4)2；并且，R2和R3獨(dú)立選自氫和(C1～C4)烷基。
本發(fā)明的其它實(shí)施方案包括式I的化合物，其中，R1是任選包含1～3個雜原子(優(yōu)選是兩個被至少一個碳原子隔離的雜原子，優(yōu)選其中，所述雜原子是-NH-或O，最優(yōu)選是O)的(C1～C8)烷基，其中，所述(C1～C8)烷基被下列基取代OH、NH2、(C1～C4)烷基氨基、二[(C1～C4)烷基]氨基、(C1～C4)烷氧基或-CON(R4)2，優(yōu)選是二[(C1～C4)烷基]氨基。
本發(fā)明的其它實(shí)施方案包括式I的化合物，其中，R2或R3的至少一個是(C1～C4)烷基，任選被1個雜原子取代(優(yōu)選的是，所述雜原子是-NH-或-O-，最優(yōu)選是-O-)，其中，所述(C1～C4)烷基被一個或兩個獨(dú)立選自(C6～C10)芳基或(C2～C10)雜芳基的基取代。
本發(fā)明其它優(yōu)選的化合物包括那些，其中R1是甲基；R2和R3各自是氫；X是氧；Y是氧；而且Z是(C6～C10)芳基；R1是正丁基；R2和R3各自是氫；X是氧；Y是氧；而且Z是(C6～C10)芳基；R1是甲基；R2和R3各自是氫；X是氧；Y是氧；而且Z是(C6～C10)芳基；以及R1是正丁基；R2和R3各自是氫；X是氧；Y是氧；而且Z是(C6～C10)芳基。
式I的特別優(yōu)選的化合物選自下組物質(zhì)5-甲基-5-(4-苯氧基-苯氧基)-嘧啶-2，4，6-三酮；5-甲基-5-(4-(4′-氟苯氧基)-苯氧基)-嘧啶-2，4，6-三酮；5正丁基-5-(4-苯氧基-苯氧基)-嘧啶-2，4，6-三酮；5-正丁基-5-(4-(4′-氟苯氧基)-苯氧基)-嘧啶-2，4，6-三酮；5-甲基-5-(4-苯基-苯氧基)-嘧啶-2，4，6-三酮；5-甲基-5-(3-苯基-苯氧基)-嘧啶-2，4，6-三酮；和5-甲基-5-(4-芐氧基-苯氧基)-嘧啶-2，4，6-三酮；或其藥物上可接受的鹽。
本發(fā)明的其它化合物包括
5-甲基-5-(4-(4′-氯苯氧基)-苯氧基)-嘧啶-2，4，6-三酮；5-甲基-5-(4-(4′-氰基苯氧基)-苯氧基)-嘧啶-2，4，6-三酮；5-甲基-5-(4-(4′-三氟甲基苯氧基)-苯氧基)-嘧啶-2，4，6-三酮；5-甲基-5-(4-(4′-甲氧基苯氧基)-苯氧基)-嘧啶-2，4，6-三酮；5-甲基-5-(4-(3′-氯苯氧基)-苯氧基)-嘧啶-2，4，6-三酮；5-甲基-5-(4-(3′-氟苯氧基)-苯氧基)-嘧啶-2，4，6-三酮；5-甲基-5-(4-(3′-三氟苯氧基)-苯氧基)-嘧啶-2，4，6-三酮；5-甲基-5-(4-(4′-氯苯基甲氧基)-苯氧基)-嘧啶-2，4，6-三酮；5-甲基-5-(4-(4′-氟苯基甲氧基)-苯氧基)-嘧啶-2，4，6-三酮；5-甲基-5-(4-(4′-氟-2′-氯苯基甲氧基)-苯氧基)-嘧啶-2，4，6-三酮；5-甲基-5-(4-(4′-氯-2′-氟苯基甲氧基)-苯氧基)-嘧啶-2，4，6-三酮；5-甲基-5-(4-(4′-氟-2′-甲基苯基甲氧基)-苯氧基)-嘧啶-2，4，6-三酮；5-甲基-5-(4-(4′-氟-2′-三氟甲基苯基甲氧基)-苯氧基)-嘧啶-2，4，6-三酮；5-甲基-5-(4-(4′-氟-2′-環(huán)丙基苯基甲氧基)-苯氧基)-嘧啶-2，4，6-三酮；5-甲基-5-(4-(吡啶-2-基)-苯氧基)-嘧啶-2，4，6-三酮；5-甲基-5-(4-(4′-氟-吡啶-2-基)-苯氧基)-嘧啶-2，4，6-三酮；5-甲基-5-(4-(4′-氯-吡啶-2-基)-苯氧基)-嘧啶-2，4，6-三酮；5-甲基-5-(4-(吡啶-4-基)-苯氧基)-嘧啶-2，4，6-三酮；5-甲基-5-(4-(吡啶-3-基)-苯氧基)-嘧啶-2，4，6-三酮；5-甲基-5-(4-(嘧啶-2-基)-苯氧基)-嘧啶-2，4，6-三酮；5-甲基-5-(4-(嘧啶-4-基)-苯氧基)-嘧啶-2，4，6-三酮；5-甲基-5-(4-(吡嗪-3-基)-苯氧基)-嘧啶-2，4，6-三酮；5-甲基-5-(4-(吡嗪-4-基)-苯氧基)-嘧啶-2，4，6-三酮；1，5-二甲基-5-(4-(4′-氟苯基甲氧基)-苯氧基)-嘧啶-2，4，6-三酮；1-乙基，5-甲基-5-(4-(4′-氟苯基甲氧基)-苯氧基)-嘧啶-2，4，6-三酮；1-(2-甲氧基乙基)-5-甲基-5-(4-(4′-氟苯基甲氧基)-苯氧基)-嘧啶-2，4，6-三酮；1-(2-二甲氨基-乙基)-5-甲基-5-(4-(4′-氟苯基甲氧基)-苯氧基)-嘧啶-2，4，6-三酮；1-環(huán)丙基甲基-5-甲基-5-(4-(4′-氟苯基甲氧基)-苯氧基)-嘧啶-2，4，6-三酮；5-二甲氨基甲基-5-(4-(4′-氟苯基甲氧基)-苯氧基)-嘧啶-2，4，6-三酮；5-(2-二甲氨基-乙基)-5-(4-(4′-氟苯基甲氧基)-苯氧基)-嘧啶-2，4，6-三酮；5-(2-甲氧基乙基)-5-(4-(4′-氟苯基甲氧基)-苯氧基)-嘧啶-2，4，6-三酮；5-環(huán)丙基甲基-5-(4-(4′-氟苯基甲氧基)-苯氧基)-嘧啶-2，4，6-三酮；5-乙基-5-(4-(4′-氟苯基甲氧基)-苯氧基)-嘧啶-2，4，6-三酮；5-三氟甲基-5-(4-(4′-氟苯基甲氧基)-苯氧基)-嘧啶-2，4，6-三酮；5-異丙基-5-(4-(4′-氟苯基甲氧基)-苯氧基)-嘧啶-2，4，6-三酮；5-異丁酰-5-(4-(4′-氟苯基甲氧基)-苯氧基)-嘧啶-2，4，6-三酮；5-甲基-5-(4-(4′-氟苯基甲氧基)-苯基硫基)-嘧啶-2，4，6-三酮；5-甲基-5-(4-(4′-氟苯基甲氧基)-苯磺酰)-嘧啶-2，4，6-三酮；5-甲基-5-(4-(4′-氟苯基甲氧基)-苯基亞硫酰(sulfoxy))-嘧啶-2，4，6-三酮；5-甲基-5-(N-4-(4′-氟苯基甲氧基)-苯基氨基)-嘧啶-2，4，6-三酮；5-甲基-5-(N-甲基-N-4-(4′-氟苯基甲氧基)-苯基氨基)-嘧啶-2，4，6-三酮；5-(4-(4′-氟苯氧基)-苯氧基)-嘧啶-2，4，6-三酮；5-(4-(4′-氯苯氧基)-苯氧基)-嘧啶-2，4，6-三酮；5-甲基-5-(4-(4′-氟苯基)-苯氧基)-嘧啶-2，4，6-三酮；5-甲基-5-(4-(4′-氯苯基)-苯氧基)-嘧啶-2，4，6-三酮；5-甲基-5-(3-(4′-氟苯基)-苯氧基)-嘧啶-2，4，6-三酮；5-甲基-5-(3-(4′-氯苯基)-苯氧基)-嘧啶-2，4，6-三酮；5-甲基-5-(5-(4′-氟苯氧基)-2-吡啶氧基)-嘧啶-2，4，6-三酮；5-甲基-5-(2-(4′-氟苯氧基)-5-吡啶氧基)-嘧啶-2，4，6-三酮；5-甲基-5-(3-(4′-氟苯氧基)-6-吡嗪氧基)-嘧啶-2，4，6-三酮；5-甲基-5-(2-(4′-氟苯氧基)-5-嘧啶氧基)-嘧啶-2，4，6-三酮；5-甲基-5-(4-(環(huán)丙基甲氧基)-苯氧基)-嘧啶-2，4，6-三酮；5-甲基-5-(4-(環(huán)丁基甲氧基)-苯氧基)-嘧啶-2，4，6-三酮；5-甲基-5-(4-(環(huán)戊基甲氧基)-苯氧基)-嘧啶-2，4，6-三酮；5-甲基-5-(4-(3′-四氫呋喃基甲氧基)-苯氧基)-嘧啶-2，4，6-三酮；5-甲基-5-(4-(4′-四氫吡喃基甲氧基)-苯氧基)-嘧啶-2，4，6-三酮；和5-甲基-5-(4-(N-甲基-3-氮雜環(huán)丁烷基甲氧基)-苯氧基)-嘧啶-2，4，6-三酮；或其藥物上可接受的鹽。
本發(fā)明還涉及一種用于治療哺乳動物(包括人)中選自下組病況的藥物組合物關(guān)節(jié)炎(包括骨關(guān)節(jié)炎和類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎)，炎性腸病，局限性回腸炎，肺氣腫，急性呼吸窘迫綜合征，哮喘，慢性阻塞性肺部疾病，早老性癡呆，器官移植物毒性，惡病質(zhì)，變態(tài)反應(yīng)，變應(yīng)性接觸性過敏反應(yīng)，癌(例如，腫瘤侵襲，腫瘤生長，腫瘤轉(zhuǎn)移，實(shí)體瘤癌，包括結(jié)腸癌、乳腺癌、肺癌和前列腺癌，以及造血惡性腫瘤，包括白血病和淋巴瘤)，組織潰瘍，再狹窄，牙周病，大皰性表皮松解，骨質(zhì)疏松癥，人造關(guān)節(jié)植入物的松弛，動脈粥樣硬化(包括動脈粥樣硬化斑破裂)，主動脈瘤(包括腹主動脈瘤和腦主動脈瘤)，充血性心力衰竭，心肌梗死，中風(fēng)，腦缺血，頭創(chuàng)傷，脊髓損傷，神經(jīng)變性障礙(急性的和慢性的)，自身免疫障礙，亨廷頓舞蹈病，帕金森病，偏頭痛，抑郁癥，外周神經(jīng)病，疼痛，大腦淀粉樣血管病，親精神性增強(qiáng)或識別增強(qiáng)，肌萎縮性脊髓側(cè)索硬化，多發(fā)性硬化，眼血管生成，角膜損傷，黃斑變性，異常的創(chuàng)傷愈合，燒傷，糖尿病，角膜結(jié)疤，鞏膜炎，艾滋病，膿毒癥，敗血癥性休克，以及以金屬蛋白酶活性為特征的其它疾病和以哺乳動物reprolysin活性為特征的其它疾病，所述組合物包含在這類治療中有效的一定量式I的化合物或其藥物上可接受的鹽和藥物上可接受的載體。
本發(fā)明還涉及一種藥物組合物，用于抑制哺乳動物(包括人)中的(a)基質(zhì)降解中涉及的基質(zhì)金屬蛋白酶或其它金屬蛋白酶，或者(b)哺乳動物reprolysin(例如，聚集蛋白聚糖酶或者ADAM的TS-1、10、12、15和17，最優(yōu)選是聚集蛋白聚糖酶或ADAM-17)，所述組合物包含有效量式I的化合物或其藥物上可接受的鹽。
本發(fā)明還涉及一種治療哺乳動物(包括人)中選自下組病況的方法關(guān)節(jié)炎(包括骨關(guān)節(jié)炎和類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎)，炎性腸病，局限性回腸炎，肺氣腫，急性呼吸窘迫綜合征，哮喘，慢性阻塞性肺部疾病，早老性癡呆，器官移植物毒性，惡病質(zhì)，變態(tài)反應(yīng)，變應(yīng)性接觸性過敏反應(yīng)，癌(例如，腫瘤侵襲，腫瘤生長，腫瘤轉(zhuǎn)移，實(shí)體瘤癌，包括結(jié)腸癌、乳腺癌、肺癌和前列腺癌，以及造血惡性腫瘤，包括白血病和淋巴瘤)，組織潰瘍，再狹窄，牙周病，大皰性表皮松解，骨質(zhì)疏松癥，人造關(guān)節(jié)植入物的松弛，動脈粥樣硬化(包括動脈粥樣硬化斑破裂)，主動脈瘤(包括腹主動脈瘤和腦主動脈瘤)，充血性心力衰竭，心肌梗死，中風(fēng)，腦缺血，頭創(chuàng)傷，脊髓損傷，神經(jīng)變性障礙(急性的和慢性的)，自身免疫障礙，亨廷頓舞蹈病，帕金森病，偏頭痛，抑郁癥，外周神經(jīng)病，疼痛，大腦淀粉樣血管病，親精神性增強(qiáng)或識別增強(qiáng)，肌萎縮性脊髓側(cè)索硬化，多發(fā)性硬化，眼血管生成，角膜損傷，黃斑變性，異常的創(chuàng)傷愈合，燒傷，糖尿病，角膜結(jié)疤，鞏膜炎，艾滋病，膿毒癥，敗血癥性休克，以及以基質(zhì)金屬蛋白酶活性為特征的其它疾病和以哺乳動物reprolysin活性為特征的其它疾病，所述方法包括，對所述哺乳動物施用治療這類病況中有效的一定量式I的化合物或其藥物上可接受的鹽。
本文所用的動詞術(shù)語“治療”表示逆轉(zhuǎn)、減輕、抑制進(jìn)程或者預(yù)防這個術(shù)語所應(yīng)用的障礙或病況或者一個或多個這種障礙或病況的癥狀。本文所用的名詞術(shù)語“治療”表示治療作用，而動詞“治療”如上面定義。
本發(fā)明還涉及一種抑制哺乳動物(包括人)中的(a)基質(zhì)降解中涉及的基質(zhì)金屬蛋白酶或其它金屬蛋白酶，或者(b)哺乳動物reprolysin(例如，聚集蛋白聚糖酶或者ADAM的TS-1、10、12、15和17，優(yōu)選是聚集蛋白聚糖酶或ADAM-17)的方法，該方法包括，對所述哺乳動物施用有效量式I的化合物或其藥物上可接受的鹽。
本發(fā)明還包括同位素標(biāo)記的化合物，它們與式I中敘述的那些相同，但其實(shí)是，一個或多個原子被原子質(zhì)量或質(zhì)量數(shù)與自然界中常見的原子質(zhì)量或質(zhì)量數(shù)不同的原子替代了?？杀粨饺氡景l(fā)明化合物中的同位素實(shí)例包括，氫、碳、氮、氧、磷、氟和氯的同位素，例如，分別是2H、3H、13C、14C、15N、18O、17O、31P、32P、35S、18F和36Cl。本發(fā)明的化合物，它的前體藥物，以及所述化合物或所述前體藥物的藥物上可接受的鹽(它們包含上述同位素和/或其它原子的其它同位素)都屬于本發(fā)明的范圍。本發(fā)明的某些同位素標(biāo)記的化合物(例如，其中摻入了放射性同位素(例如3H和14C)的那些)適用于藥物和/或基質(zhì)組織分布分析。氚化的(即，3H)和碳-14(即，14C)同位素因其容易制備和可檢測性而是特別優(yōu)選的。此外，用更重的同位素(例如，氘，即2H)取代可以給出某些由更大代謝穩(wěn)定性引起的治療益處，例如，體內(nèi)半衰期的增長或所需劑量的減少，所以，可能在一些情況中是優(yōu)選的。本發(fā)明式I的同位素標(biāo)記化合物及其前體藥物的制備一般可這樣進(jìn)行，即，通過下述示意圖和/或?qū)嵤├椭苽渲泄_的操作方法，用容易獲得的同位素標(biāo)記的試劑代替非同位素標(biāo)記的試劑。
本發(fā)明還涉及包含式I化合物的前體藥物的藥物組合物。本發(fā)明還涉及治療或預(yù)防可通過抑制基質(zhì)金屬蛋白酶或者抑制哺乳動物reprolysin而治療或預(yù)防的障礙的方法，該方法包括，施用式I化合物的前體藥物。具有游離氨基、酰氨基、羥基、氨磺?；螋然氖絀化合物可被轉(zhuǎn)化為前體藥物。前體藥物包括這樣的化合物其中，一個氨基酸殘基，或者一條通過肽鍵而共價(jià)連接的兩個或多個(例如，兩個、三個或四個)氨基酸殘基的多肽鏈連接到式I化合物的游離酰氨基、氨基、羥基或羧基上。所述氨基酸殘基包括20種通常由三個字母符號表示的天然氨基酸，還包括4-羥基脯氨酸、羥基賴氨酸、鎖鏈賴氨素(demosine)、異鎖鏈賴氨素(isodemosine)、3-甲基組氨酸、正纈氨酸、β-丙氨酸、γ-氨基丁酸、瓜氨酸、高半胱氨酸、高絲氨酸、鳥氨酸和甲硫氨酸砜。前體藥物還包括這樣的化合物其中，碳酸酯、氨基甲酸酯、酰胺和烷基酯，它們通過羰基碳前體藥物側(cè)鏈被共價(jià)連接到式I的上述取代基上。
本領(lǐng)域普通技術(shù)人員應(yīng)懂得，本發(fā)明的化合物適用于治療性質(zhì)不同的一系列疾病。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員還應(yīng)懂得，當(dāng)應(yīng)用本發(fā)明的化合物來治療具體疾病時，可將本發(fā)明的化合物與各種用于那種疾病的現(xiàn)有治療劑并用。
就治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎來說，可將本發(fā)明的化合物與下列作用劑并用，例如，TNF-α抑制劑，例如，抗TNF單克隆抗體(例如，Remicade)和TNF受體免疫球蛋白分子(例如，Enbrel)，低劑量甲氨蝶呤、lefunimide、羥氯喹、d-青霉胺、金諾芬或者腸胃外的或經(jīng)口的金。
還可將本發(fā)明的化合物與治療骨關(guān)節(jié)炎的現(xiàn)有治療劑并用。并用的適當(dāng)作用劑包括標(biāo)準(zhǔn)非類固醇抗炎劑(下文表示為NSAID′s)(例如，吡羅昔康、雙氯芬酸)，丙酸類藥物(例如，萘普生、氟比洛芬、非諾洛芬、酮洛芬和布洛芬)，芬那酸類藥物(例如，甲芬那酸、吲哚美辛、舒林酸、阿扎丙宗)，吡唑啉酮類藥物(例如，保泰松)，水楊酸鹽類藥物(例如阿司匹林)，COX-2抑制劑(例如，celecoxib、valdecoxib、paracoxib和rofecoxib)，鎮(zhèn)痛藥LTD-4、LTB-4和5-LO抑制劑，p38激酶抑制劑和關(guān)節(jié)內(nèi)治療劑，例如，皮質(zhì)類固醇和透明質(zhì)酸(例如，透明蛋白原(hyalgan)和synvisc)。
本發(fā)明的化合物可與下列藥物并用抗癌劑(例如，endostatin和angiostatin)，或者毒害細(xì)胞的藥物(例如，多柔比星、柔紅霉素、順鉑、依托泊苷、紫杉酚、taxotere)和生物堿(例如長春新堿)，以及抗代謝物(例如甲氨蝶呤)。
本發(fā)明的化合物還可與下列物質(zhì)并用心血管作用劑(例如鈣通道封阻劑)，脂質(zhì)減少劑(例如抑制素)，fibrates，β-封阻劑，Ace抑制劑，血管緊張肽-2受體拮抗劑和血小板聚集抑制劑。
本發(fā)明的化合物還可與下列物質(zhì)并用CNS劑，例如，抗抑郁劑(例如舍曲林)，抗帕金森藥物(例如，司立吉林，L-多巴，Requip，Mirapex，MAOB抑制劑(例如，司來吉蘭和雷沙吉蘭)，comP抑制劑(例如Tasmar)，A-2抑制劑，多巴胺重?cái)z取抑制劑，NMDA拮抗劑，煙堿興奮劑，NK-1抑制劑，多巴胺興奮劑和神經(jīng)元氧化氮合酶的抑制劑)，以及抗早老性癡呆藥物，例如，donepezil，他克林，COX-2抑制劑，丙戊茶堿或美曲膦酯(metryfonate)。
本發(fā)明的化合物還可與下列藥物并用骨質(zhì)疏松劑(例如，roloxifene、屈洛昔芬(droloxifen)、lasofoxifene或fosomax)以及免疫抑制劑(例如，F(xiàn)K-506和雷怕霉素)。
本發(fā)明的詳細(xì)描述如下反應(yīng)示意圖闡述了本發(fā)明化合物的制備。除非另外說明，反應(yīng)示意圖和下文的討論中的X、Y、Ar1、Z、R1、R2和R3都同上文的定義。
示意

圖1
示意圖2
示意圖3
示意圖4
示意圖1涉及按兩步合成法從式V的化合物制備式I的化合物。參照示意圖1，從式IV的化合物(其中，L1和L2都是離去基，例如，甲氧基、乙氧基、芐氧基或氯，優(yōu)選是乙氧基)制備式I的化合物，即，通過在強(qiáng)堿存在下、在極性溶劑中與式III的脲衍生物反應(yīng) 合適的堿包括甲醇鈉、乙醇鈉和甲醇鎂，優(yōu)選是乙醇鈉。合適的溶劑包括醇類(例如乙醇)或四氫呋喃，優(yōu)選是無水乙醇。上述反應(yīng)在約20℃～約90℃(優(yōu)選約50℃～約65℃)的溫度下進(jìn)行約15分鐘～約16小時的時間。
式IV的化合物是從式V的化合物(其中，L3是離去基，例如，鹵、對-甲苯磺酰氧基(OTs)或甲磺酰氧基(OMs)，優(yōu)選是鹵，最優(yōu)選是氯或溴)制備的，即，通過與式HX-Ar1-Y-Z的化合物在堿存在下、在極性溶劑中反應(yīng)。合適的溶劑包括二甲基甲酰胺(DMF)，醇類(例如乙醇)或四氫呋喃，優(yōu)選是乙醇。上述反應(yīng)在約20℃～約90℃(優(yōu)選約50℃～約65℃)的溫度下進(jìn)行約15分鐘～約16小時的時間。
式V的化合物可通過本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的方法制備，例如，PCT專利申請WO 98/59825中描述的方法或“藥物合成的有機(jī)化學(xué)(TheOrganic Chemistry of Drug Synthesis)”，D.Lednicer和L.A.Mitscher，Vol.1，pp.167～277(和其中的參考文獻(xiàn))中綜述的方法。上述參考的出版物和申請的每篇都以其全文并入本文作參考。
式III的化合物是可商購的或者可通過本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的方法制備。
式HX-Ar1-Y-Z的化合物是可商購的或者可通過本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的方法制備。
示意圖2涉及按三步合成法從式VI或式VII的化合物制備式I的化合物。參照示意圖2，通過在溶劑存在下與合適的堿和式R1L4的適當(dāng)烷基化劑反應(yīng)而從式IX的化合物制備式I的化合物。合適的堿包括氫化鈉、碳酸鉀、碳酸鈉、三乙胺、吡啶或三乙醇胺；最優(yōu)選是氫化鈉。合適的烷基化劑包括那些其中，L4是鹵、對-甲苯磺酰氧基(OTs)或甲磺酰氧基(OMs)，優(yōu)選是鹵，最優(yōu)選是氯或溴；或者烷基化劑包括這樣的化合物，例如，Eshenmoser氏鹽；環(huán)氧化物或適當(dāng)取代的親電性氮丙啶。合適的溶劑取決于使用的堿，但可選自N，N-二甲基甲酰胺、四氫呋喃、乙腈和水。上述反應(yīng)在約0℃～約30℃(優(yōu)選約20℃～約25℃)的溫度下進(jìn)行約15分鐘～約16小時的時間。
式IX的化合物可從式VIII的化合物制備，即，在強(qiáng)堿存在下、在極性溶劑中與下式的脲反應(yīng) 合適的堿包括甲醇鈉，乙醇鈉和甲醇鎂；優(yōu)選是乙醇鈉。合適的溶劑包括醇類(例如乙醇)或四氫呋喃，優(yōu)選是無水乙醇。上述反應(yīng)在約20℃～約90℃(優(yōu)選約50℃～約65℃)的溫度下進(jìn)行約15分鐘～約16小時的時間。
式VIII的化合物可從式VI的化合物(其中，L3是離去基，例如，鹵、對-甲苯磺酰氧基(OTs)或甲磺酰氧基(OMs)，優(yōu)選是鹵，最優(yōu)選是氯)制備，即，通過與式HX-Ar1-Y-Z的化合物在堿存在下、在極性溶劑中反應(yīng)。合適的堿包括甲醇鈉，乙醇鈉，碳酸鉀和氫化鈉；優(yōu)選是乙醇鈉。合適的溶劑包括二甲基甲酰胺(DMF)，醇類(例如乙醇)或四氫呋喃，優(yōu)選是乙醇。上述反應(yīng)在約20℃～約90℃(優(yōu)選約50℃～約70℃)的溫度下進(jìn)行約15分鐘～約16小時(優(yōu)選約3小時)的時間。J.B.Niederl和R.T.Roth，美國化學(xué)學(xué)會會志(I.Amer.Chem.Soc.)，62，1154(1940)的方法進(jìn)一步闡述了這類反應(yīng)。
式VIII的化合物還可從式VII的化合物制備，即，在合適的催化劑(優(yōu)選是乙酸銠(II))存在下，按M.Campbell等，澳大利亞化學(xué)雜志(Aust.J.Chem.)，45，2061(1992)描述的方法制備。
式VI和VII的化合物都是可商購的，或者容易按本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的方法從易獲得的原料獲得。例如，式VII的化合物可按D.W.Peace等，合成(Synthesis)，658(1971)的方法制備。
式III的化合物都是可商購的，或者可按本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的方法制備。
示意圖3涉及式I的化合物(特別是其中X是氧或-OCH2-的那些)的制備。參照示意圖3，式I的化合物可這樣獲得用式HOAr1-Y-Z的合適的酚、按O.Mitsonubu(合成，1(1981))通過式XI化合物的烷基化，或者用合適的烷基化劑通過式L3CH2Ar1-Y-Z(其中，L3是離去基，例如，鹵、對-甲苯磺酰氧基(OTs)或甲磺酰氧基(OMs)，優(yōu)選是鹵，最優(yōu)選是氯或溴)的烷基化制備，即，在合適的堿(例如，氫化鈉、碳酸鉀、三乙胺、吡啶或三乙醇胺)存在下在合適的溶劑(例如，N，N-二甲基甲酰胺、四氫呋喃、乙腈)中反應(yīng)。上述反應(yīng)在約0℃～約50℃(優(yōu)選約20℃)的溫度下進(jìn)行約15分鐘～約16小時的時間。
式XI的化合物可從式X的化合物按J.A.Vida等，醫(yī)用化學(xué)雜志(J.Med.Chem.)，17，732(1974)的方法制備。
式X的化合物可從式XII的化合物制備，即，在合適的烷基化劑R1L4和溶劑存在下，通過與合適的堿反應(yīng)制備，例如，Biehl等，J.Het.Chem.，23，9(1986)中描述的方法。合適的堿包括氫化鈉、碳酸鉀、三乙胺、吡啶、三乙醇胺；最優(yōu)選是三乙醇胺。合適的烷基化劑包括那些其中，L4是鹵、對-甲苯磺酰氧基(OTs)或甲磺酰氧基(OMs)，優(yōu)選是鹵，最優(yōu)選是氯或溴；或者這樣的烷基化劑例如，Eshenmoser氏鹽；環(huán)氧化物或適當(dāng)取代的親電子氮丙啶。合適的溶劑取決于使用的堿，但可選自N，N-二甲基甲酰胺、四氫呋喃、乙腈和水。上述反應(yīng)在約0℃～約30℃(優(yōu)選約20℃～約25℃)的溫度下進(jìn)行約15分鐘～約16小時的時間。
式XII的化合物是可商購的或者可容易由本領(lǐng)域技術(shù)人員按“藥物合成的有機(jī)化學(xué)”D.Lednicer和L.A.Mitscher，Vol.1，167～277(和其中引用的參考文獻(xiàn))綜述的方法制備。
示意圖4涉及式I化合物的制備，其中，X是硫或-SCH2-，或者它們的氧化衍生物＞SO2、＞SO、-SO2CH2-、-SOCH2-。參照示意圖4，這種式I的化合物可通過式XIV的化合物(其中，R2和R3都是氫)的嘧啶-2，4，6-三酮環(huán)與合適的烷基化劑L3R2或L3R3(其中，L3是離去基，例如，鹵、對-甲苯磺酰氧基(OTs)或甲磺酰氧基(OMs)，優(yōu)選是鹵，最優(yōu)選是氯或溴)在合適的堿(例如，氫化鈉、碳酸鉀、三乙胺、吡啶或三乙醇胺)存在下，在合適的溶劑(例如，N，N-二甲基甲酰胺、四氫呋喃、乙腈)中的烷基化獲得。上述反應(yīng)在約20℃～約70℃(優(yōu)選約20℃)的溫度下進(jìn)行約15分鐘～約16小時的時間。
式XIV的化合物可通過式X化合物與式(SAr1-Y-Z)2或(SCH2Ar1-Y-Z)2的合適的二硫化物在合適的堿(例如，氫化鈉、碳酸鉀、三乙胺、吡啶或三乙醇胺)存在下，在合適的溶劑(例如，N，N-二甲基甲酰胺、四氫呋喃、乙腈)中的烷基化獲得。上述反應(yīng)在約20℃～約70℃(優(yōu)選約20℃)的溫度下進(jìn)行約15分鐘～約16小時的時間。
二硫化物(SAr1-Y-Z)2或(SCH2Ar1-Y-Z)2可通過本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的氧化法從相應(yīng)的硫醇HSAr1-Y-Z或HSCH2Ar1-Y-Z制備。
式X的化合物都是可商購的，或者可按本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的方法制備。
呈堿性的式I化合物能與各種無機(jī)酸或有機(jī)酸形成多種不同的鹽。雖然這樣的鹽必須是對動物施用的藥物上可接受的，但通常在實(shí)際操作中需要開始從反應(yīng)混合物作為藥物上不可接受的鹽分離式I的化合物，然后，通過用堿性試劑處理簡單地將后者轉(zhuǎn)化成游離堿化合物，接著，將該游離堿轉(zhuǎn)化為藥物上可接受的酸加合鹽。本發(fā)明的堿化合物的酸加合鹽容易通過用大致等量的選定的無機(jī)酸或有機(jī)酸在水性溶劑介質(zhì)或合適的有機(jī)溶劑(例如甲醇或乙醇)中處理所述堿化合物而制備。在小心蒸發(fā)溶劑后，就獲得所需的固體鹽。
用于制備本發(fā)明的堿化合物藥物上可接受的酸加合鹽的酸是那些形成無毒的酸加合鹽(即，含藥物上可接受的陰離子的鹽)的酸，所述鹽即，鹽酸鹽、氫溴酸鹽、氫碘酸鹽、硝酸鹽、硫酸鹽或硫酸氫鹽、磷酸鹽或酸式磷酸鹽、乙酸鹽、乳酸鹽、檸檬酸鹽或酸式檸檬酸鹽、酒石酸鹽或酒石酸氫鹽、琥珀酸鹽、馬來酸鹽、富馬酸鹽、葡糖酸鹽、糖二酸鹽、苯甲酸鹽、甲磺酸鹽和雙羥萘酸鹽[即，1，1′-亞甲基-雙-(2-羥基-3-萘甲酸鹽)]。
呈酸性的那些式I化合物能與各種藥物上可接受的陽離子形成堿鹽。這樣的鹽的實(shí)例包括，堿金屬或堿土金屬鹽，特別是鈉鹽和鉀鹽。這些鹽都是通過常規(guī)方法制備的。用作制備本發(fā)明藥物上可接受的堿鹽的試劑的化學(xué)堿是與本文描述的式I酸性化合物形成無毒的堿鹽的那些。這些無毒的堿鹽包括來自藥物上可接受的陽離子(例如，鈉、鉀、鈣和鎂等)的那些。這些鹽可容易這樣制備，即，用含所需藥物上可接受的陽離子的水溶液處理相應(yīng)的酸性化合物，然后，蒸發(fā)形成的溶液至干(優(yōu)選在減壓下蒸發(fā))。
也可這樣制備它們，即，將所述酸性化合物的低級醇溶液與所需的堿金屬醇鹽一起混合，然后，按與上述相同的方法蒸發(fā)形成的溶液至干。在任一情況下，優(yōu)選應(yīng)用化學(xué)計(jì)算量的試劑以便保證反應(yīng)的完全和最大產(chǎn)品產(chǎn)率。
生物學(xué)測定通過下列體外分析測試證實(shí)了式I化合物或它們的藥物上可接受的鹽(下文也稱為本發(fā)明的化合物)抑制金屬蛋白酶或哺乳動物reprolysin的能力，從而闡述了它們治療以金屬蛋白酶或哺乳動物reprolysin活性為特征的疾病(例如，腫瘤壞死因子的產(chǎn)生)的效果。
MMP分析本文應(yīng)用的膠原酶-3(基質(zhì)金屬蛋白酶-13)選擇性抑制劑表示這樣的作用劑，即，它們表現(xiàn)出抑制膠原酶-3酶活性至少是抑制膠原酶-1酶活性的選擇性的100倍以及由下述MMP-13/MMP-1熒光分析得到的IC50所確定的潛能小于100nM。膠原酶-3選擇性抑制劑可通過下述MMP-13/MMP-1熒光分析篩選本發(fā)明的抑制劑并且選定MMP-13/MMP-1抑制IC50比率為100或更大和潛能小于100nM的那些試劑來鑒定。
本文應(yīng)用的非選擇性膠原酶抑制劑表示這樣的作用劑，即，它們表現(xiàn)出對膠原酶-3酶活性比對膠原酶-1酶活性的抑制選擇性小于100倍或者由下述MMP-13/MMP-1熒光分析得到的IC50所確定的潛能大于100nM。
膠原酶抑制劑抑制膠原酶活性的能力是本領(lǐng)域熟知的?？蓱?yīng)用下述分析來鑒定基質(zhì)蛋白酶抑制劑。
人膠原酶(MMP-1)的抑制用胰蛋白酶活化人重組膠原酶。對每批膠原酶-1優(yōu)化胰蛋白酶的量，但典型的反應(yīng)應(yīng)用下列比率每100μg膠原酶5μg胰蛋白酶。將胰蛋白酶和膠原酶在室溫下保溫10分鐘，然后添加過量五倍(50mg/10mg胰蛋白酶)的大豆胰蛋白酶抑制劑。
用二甲亞砜配制抑制劑的貯存液(10mM)，然后應(yīng)用下列方案稀釋10mM→120μM→12μM→1.2μM→0.12μM然后，一式三份各取25微升每個濃度的溶液加到96孔顯微熒光板的適當(dāng)孔中。添加酶和底物后，抑制劑的最終濃度將是1∶4稀釋。在D7～D12孔內(nèi)預(yù)備陽性對照(酶，無抑制劑)，而在D1～D6孔內(nèi)預(yù)備陰性對照(無酶，無抑制劑)。
將膠原酶-1稀釋到240ng/ml。然后將25μl加到顯微熒光板的適當(dāng)孔中。分析中的膠原酶最終濃度是60ng/ml。
在二甲亞砜中作為5mM貯存液配制底物[DNP-Pro-Cha-Gly-Cys(Me)-His-Ala-Lys(NMA)-NH2]，然后，用分析緩沖液稀釋到20μM。通過在顯微熒光板的每孔中添加50μl底物而給出10μM最終濃度來開始分析。
在0時刻、接著以20分鐘間隔讀取熒光讀數(shù)(360mM激發(fā)，460nm發(fā)射)。在室溫下進(jìn)行分析，典型分析時間是3小時。
然后，對空白樣和含膠原酶的樣品以熒光對時間描點(diǎn)(將三次測定的數(shù)據(jù)取平均值)。選定提供良好信號(至少是空白的5倍)并處于曲線線性部分的時間點(diǎn)(通常約120分鐘)來測定IC50值。應(yīng)用零時刻作為每個濃度下每種化合物的空白，從120分鐘數(shù)據(jù)減去這些值。將數(shù)據(jù)作為抑制劑濃度比％對比物(抑制劑熒光除以單獨(dú)的膠原酶熒光×100)描點(diǎn)。從給出對比物的50％的信號的抑制劑濃度測定IC50值。
如果報(bào)告的IC50值小于0.03μM，就分析濃度在0.3μM、0.03μM和0.003μM處的抑制劑。
明膠酶(MMP-2)的抑制用1mM對-氨基苯基-乙酸汞(來自用0.2N NaOH新鮮配制的100mM貯存液)在4℃下活化人重組72kD明膠酶(MMP-2，明膠酶A)達(dá)16～18小時，輕輕地振動。
應(yīng)用下列方案，用分析緩沖液(50mM TRIS，pH7.5，200mM NaCl，5mM CaCl2，20μM ZnCl2和0.02％BRIJ-35(vol./vol.))依序稀釋抑制劑的10mM二甲亞砜貯存液10mM→120μM→12μM→1.2μM→0.12μM根據(jù)下列需要按該相同的方案進(jìn)行進(jìn)一步稀釋。每次分析中對每種化合物最少分析四個抑制劑濃度。然后，一式三份各取25μL每個濃度的溶液加到黑色96孔U形底的顯微熒光板的孔中。由于最終分析體積是100μL，所以，抑制劑的最終濃度是進(jìn)一步1∶4稀釋(即，30μM→3μM→0.3μM→0.03μM等)的結(jié)果。還一式三份配制了空白樣(無酶，無抑制劑)和陽性的酶對照樣(含酶，無抑制劑)。
用分析緩沖液將活化酶稀釋到100ng/mL，以每孔25μM加到微量培養(yǎng)板的適當(dāng)孔中。分析中的最終酶濃度是25ng/mL(0.34nM)。
用分析緩沖液將底物(Mca-Pro-Leu-Gly-Leu-Dpa-Ala-Arg-NH2)的5mM二甲亞砜貯存液稀釋到20μM。通過添加50μL稀釋的底物給出10μM底物的最終分析濃度而開始分析。在室溫下，用PerSeptiveBiosystems CytoFluor多孔平板讀數(shù)計(jì)(以90單位的增益)在零時刻立即讀取熒光讀數(shù)(320激發(fā)；390發(fā)射)，隨后在每15分鐘間隔讀取讀數(shù)。
將酶和空白樣的熒光平均值對時間描點(diǎn)。選定處于該曲線線性部分的較早時間點(diǎn)來進(jìn)行IC50值測定。就每次稀釋的每種化合物來說，從后面的時間點(diǎn)減去零時刻點(diǎn)的數(shù)值，然后，以酶對比物的百分?jǐn)?shù)表達(dá)數(shù)據(jù)(抑制劑熒光除以陽性的酶對比物熒光×100)。以抑制劑濃度比酶對比物的百分?jǐn)?shù)將數(shù)據(jù)描點(diǎn)。IC50值被定義為給出陽性的酶對比物的50％的信號的抑制劑濃度。
溶基質(zhì)素活性(MMP-3)的抑制用2mM對-氨基苯基-乙酸汞(來自用0.2N NaOH新鮮配制的100mM貯存液)在37℃下活化人重組溶基質(zhì)素(MMP-3，溶基質(zhì)素-1)達(dá)20～22小時。
應(yīng)用下列方案，用分析緩沖液(50mM TRIS，pH7.5，150mM NaCl，10mM CaCl2和0.05％BRIJ-35(vol./vol.))依序稀釋抑制劑的10mM二甲亞砜貯存液10mM→120μM→12μM→1.2μM→0.12μM根據(jù)下列需要按該相同的方案進(jìn)行進(jìn)一步稀釋。每次分析中對每種化合物最少分析四個抑制劑濃度。然后，一式三份各取25μL每個濃度的溶液加到黑色96孔U形底的顯微熒光板的孔中。由于最終分析體積是100μL，所以，抑制劑的最終濃度是進(jìn)一步1∶4稀釋(即，30μM→3μM→0.3μM→0.03μM等)的結(jié)果。還一式三份配制了空白樣(無酶，無抑制劑)和陽性的酶對比樣(含酶，無抑制劑)。
用分析緩沖液將活化酶稀釋到200ng/mL，以每孔25μL加到微量培養(yǎng)板的適當(dāng)孔中。分析中的最終酶濃度是50ng/mL(0.875nM)。
用分析緩沖液將底物(Mca-Arg-Pro-Lys-Pro-Val-Glu-Nva-Trp-Arg-Lys(Dnp)-NH2)的10mM二甲亞砜貯存液稀釋到6μM。通過添加50μL稀釋的底物給出3μM底物的最終分析濃度而開始分析。在室溫下，用PerSeptiveBiosystems CytoFluor多孔平板讀數(shù)計(jì)(以90單位的增益)在零時刻立即讀取熒光讀數(shù)(320激發(fā)；390發(fā)射)，接著，在每15分鐘間隔讀取讀數(shù)。
將酶和空白樣的熒光平均值對時間描點(diǎn)。選定處于該曲線線性部分的較早時間點(diǎn)來進(jìn)行IC50值測定。就每次稀釋的每種化合物來說，從后面的時間點(diǎn)減去零時刻點(diǎn)的數(shù)值，然后，以酶對比物的百分?jǐn)?shù)表達(dá)數(shù)據(jù)(抑制劑熒光除以陽性的酶對比物熒光×100)。以抑制劑濃度比酶對比物的百分?jǐn)?shù)將數(shù)據(jù)描點(diǎn)。IC50值被定義為給出陽性的酶對比物的50％的信號的抑制劑濃度。
人92kD明膠酶(MMP-9)的抑制應(yīng)用Mca-Pro-Leu-Gly-Leu-Dpa-Ala-Arg-NH2底物(10μM)在同上述關(guān)于人膠原酶(MMP-1)的抑制的相似條件下分析92kD明膠酶(MMP-9)活性的抑制。
用1mM對-氨基苯基-乙酸汞(來自用0.2N NaOH新鮮配制的100mM貯存液)在37℃下活化人重組92kD明膠酶(MMP-9，明膠酶B)。
應(yīng)用下列方案，用分析緩沖液(50mM TRIS，pH7.5，200mM NaCl，5mM CaCl2，20μM ZnCl2，0.02％BRIJ-35(vol./vol.))依序稀釋抑制劑的10mM二甲亞砜貯存液10mM→120μM→12μM→1.2μM→0.12μM根據(jù)下列需要按該相同的方案進(jìn)行進(jìn)一步稀釋。每次分析中對每種化合物最少分析四個抑制劑濃度。然后，一式三份各取25μL每個濃度的溶液加到黑色96孔U形底的顯微熒光板的孔中。由于最終分析體積是100μL，所以，抑制劑的最終濃度是進(jìn)一步1∶4稀釋(即，30μM→3μM→0.3μM→0.03μM等)的結(jié)果。還一式三份配制了空白樣(無酶，無抑制劑)和陽性的酶對比樣(含酶，無抑制劑)。
用分析緩沖液將活化酶稀釋到100ng/mL，以每孔25μL加到微量培養(yǎng)板的適當(dāng)孔中。分析中的最終酶濃度是25ng/mL(0.27nM)。
用分析緩沖液將底物(Mca-Pro-Leu-Gly-Leu-Dpa-Ala-Arg-NH2)的5mM二甲亞砜貯存液稀釋到20μM。通過添加50μL稀釋的底物給出10μM底物的最終分析濃度而開始分析。在室溫下，用PerSeptiveBiosystems CytoFluor多孔平板讀數(shù)計(jì)(以90單位的增益)在0時刻立即讀取熒光讀數(shù)(320激發(fā)；390發(fā)射)，隨后在每15分鐘間隔讀取讀數(shù)。
將酶和空白樣的熒光平均值對時間描點(diǎn)。選定處于該曲線線性部分的較早時間點(diǎn)來進(jìn)行IC50值測定。就每次稀釋的每種化合物來說，從后面的時間點(diǎn)減去零時刻點(diǎn)的數(shù)值，然后，以酶對比物的百分?jǐn)?shù)表達(dá)數(shù)據(jù)(抑制劑熒光除以陽性的酶對比物熒光×100)。以抑制劑濃度比酶對比物的百分?jǐn)?shù)將數(shù)據(jù)描點(diǎn)。IC50值被定義為給出陽性的酶對比物的50％的信號的抑制劑濃度。
MMP-13的抑制用2mM APMA(對-氨基苯基-乙酸汞)在37℃下活化人重組MMP-13達(dá)1.5小時，用分析緩沖液(50mM Tris，pH7.5，200mM氯化鈉，5mM氯化鈣，20μM氯化鋅，0.02％brij)稀釋到400mg/ml。將25μL稀釋的酶加到96孔顯微熒光板的每個孔中。然后，在分析中以1∶4比率稀釋所述酶，即，通過添加抑制劑和底物而給出100mg/ml分析中的最終濃度。
用二甲亞砜配制10 mM抑制劑的貯存液，然后，按關(guān)于人膠原酶(MMP-1)的抑制的抑制劑稀釋方案用分析緩沖液稀釋一式三份各取25μL每個濃度的溶液加到顯微熒光板中。分析中的最終濃度是30μM、3μM、0.3μM和0.03μM。
按關(guān)于人膠原酶(MMP-1)的抑制那樣配制了底物(Dnp-Pro-Cha-Gly-Cys(Me)-His-Ala-Lys(NMA)-NH2)，取50μl加到每個孔中而給出10μM的最終分析濃度。在0時刻和每5分鐘讀取熒光讀數(shù)(360nM激發(fā)；450發(fā)射)達(dá)1小時。
陽性對比樣由酶和底物組成而無抑制劑，而空白樣則只含底物。
按關(guān)于人膠原酶(MMP-1)的抑制那樣測定了IC50值。如果報(bào)告的IC50值小于0.03μM，就在0.3μM、0.03μM、0.003μM和0.0003μM的最終濃度下分析抑制劑。
膠原膜MMP-13分析用14C乙酸酐放射性標(biāo)記大鼠I型膠原[T.E.Cawston和A.J.Barrett，分析生物化學(xué)(Anal.Biochem.)，99，340～345(1979)]，用來制備含放射性標(biāo)記的膠原膜的96孔板(Barbara Johnson-Wint，分析生物化學(xué)，104，175～181(1980))。當(dāng)將含膠原酶的溶液加到孔中后，所述酶分解未卷曲的不溶性膠原，于是使膠原溶解。通過釋放入上清液的放射性比率測得(用標(biāo)準(zhǔn)閃爍計(jì)數(shù)器測定)膠原酶活性與溶解的膠原量成正比。所以，膠原酶抑制劑是這樣的化合物，即，相對于不含抑制劑的對比物來說減少釋放的放射性計(jì)數(shù)的化合物。下文詳細(xì)描述了該分析的一個具體實(shí)施方案。
至于應(yīng)用膠原作底物來測定化合物對MMP-13相對于MMP-1的選擇性，應(yīng)用了下列操作步驟。按上文概述的操作步驟活化重組人proMMP-13或proMMP-1。用緩沖液(50mM Tris，pH7.5，150mM NaCl，10mM CaCl2，1μM ZnCl2，0.05％Brij-35，0.02％疊氮化鈉)將活化的MMP-13或MMP-1稀釋到0.6μg/ml。
用二甲亞砜配制了試驗(yàn)化合物的貯存液(10mM)。用上述Tris緩沖液配制試驗(yàn)化合物的稀釋液成0.2、2.0、20、200、2000和20000nM。
將100μl合適的藥物稀釋液和100μl稀釋的酶吸移入含14C-膠原標(biāo)記的膠原膜的96孔板的孔中。最終酶濃度是0.3μg/ml，而最終藥物濃度是0.1、1.0、10、100、1000nM。一式三份分析每種藥物濃度和對比物。還對于不存在酶的條件和對于不存在任何化合物的酶進(jìn)行了一式三份的對比分析。
在37℃下將板保溫一段時間以至大約30～50％可獲得的膠原溶解-通過在各個時間點(diǎn)計(jì)數(shù)另外的對比孔而測定的。在大多數(shù)情況下需要保溫約9小時。當(dāng)充分進(jìn)行分析時，從每孔移取上清液，用閃爍計(jì)數(shù)器計(jì)數(shù)。從每個樣品扣除背景計(jì)數(shù)(通過不含酶的孔中的計(jì)數(shù)測定的)，關(guān)于只含酶而不含抑制劑的孔計(jì)算％釋放。將每個點(diǎn)的三次測定值平均化，將數(shù)據(jù)以釋放百分?jǐn)?shù)對藥物濃度作圖。從達(dá)到放射性標(biāo)記的膠原釋放的50％抑制時的點(diǎn)測定IC50值。
為了測定軟骨條件培養(yǎng)液中活性膠原酶的特性，應(yīng)用膠原作為底物進(jìn)行了分析，軟骨條件培養(yǎng)液包含膠原酶活性和不同選擇性的抑制劑。在發(fā)生膠原降解的過程中收集軟骨條件培養(yǎng)液，所以，它代表引起膠原分解的膠原酶。如上文概述的那樣進(jìn)行分析，但不用重組MMP-13或重組MMP-1，以軟骨條件培養(yǎng)液為酶源。
IL-1誘導(dǎo)的來自牛鼻軟骨的軟骨膠原降解這種分析應(yīng)用牛鼻軟骨外植體，它們常被用來測試各種化合物抑制IL-1誘導(dǎo)的蛋白聚糖降解或IL-1誘導(dǎo)的膠原降解的效率。牛鼻軟骨是一種與關(guān)節(jié)軟骨(即，被基質(zhì)包圍的軟骨細(xì)胞，所述基質(zhì)主要是II型膠原和聚集蛋白聚糖)很相似的組織。應(yīng)用這種組織是因?yàn)樗?1)與關(guān)節(jié)軟骨很相似，(2)容易獲得，(3)較均勻，以及(4)在IL-1刺激后以可預(yù)計(jì)的動力學(xué)降解。
應(yīng)用這種分析的兩種變化形式來分析化合物。兩種變化形式給出相似的結(jié)果。下文描述了這兩種變化形式變化形式1將三份牛鼻軟骨填充物(約2mm直徑×1.5mm長)置于24孔組織培養(yǎng)板的每孔中。然后，往每孔中添加1ml無血清培養(yǎng)基。用DMSO將化合物配制成10mM貯存液，再用無血清培養(yǎng)基適當(dāng)稀釋至最終濃度，例如，50、500和5000nM。對每個濃度分析三次。
將人重組IL-1α(5ng/mL)(IL-1)加到三份對比孔和每個含藥物的孔中。還預(yù)備既不添加藥物又不添加IL-1的三份對比孔。在6、12、18和24天或者每3～4天(如果需要的話)，取出培養(yǎng)基并添加含IL-1和適當(dāng)藥物濃度的新鮮培養(yǎng)基。將各時間點(diǎn)取出的培養(yǎng)基儲存在-20℃供后續(xù)分析。當(dāng)只含IL-1的孔中軟骨幾乎完全重吸收時(約21天)，就終止試驗(yàn)。取出培養(yǎng)基并儲存。匯集每個時間點(diǎn)來自每孔的等分樣(100μl)，用木瓜蛋白酶消化，然后分析羥脯氨酸含量。從每個數(shù)據(jù)點(diǎn)扣除背景羥脯氨酸(不含IL-1和不含藥物的孔平均值)，計(jì)算每種一式三份的平均值。然后，以只含IL-1的平均值的百分?jǐn)?shù)表達(dá)數(shù)據(jù)并作圖。從該圖中確定IC50值。
變化形式2直至12天，試驗(yàn)方案與上文變化形式1中概述的相同。在第12天，取出每孔中的條件培養(yǎng)基并冷凍。然后往每孔中添加1ml含0.5μg/ml胰蛋白酶的磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)，在37℃下繼續(xù)保溫48小時。在胰蛋白酶中保溫48小時后，除去PBS溶液。匯集PBS/胰蛋白酶溶液的等分樣(50μl)和以前的兩個時間點(diǎn)(第6天和12天)，水解，測定羥脯氨酸含量。從每個數(shù)據(jù)點(diǎn)扣除背景羥脯氨酸(不含IL-1和不含藥物的孔平均值)，計(jì)算每種一式三份的平均值。然后，以只含IL-1的平均值的百分?jǐn)?shù)表達(dá)數(shù)據(jù)并作圖。從該圖中確定IC50值。在此變化形式中，大為縮短了試驗(yàn)的時程。IL-1刺激12天后，添加胰蛋白酶達(dá)48小時可能釋放了已被膠原酶活性破壞但尚未從軟骨基質(zhì)釋放的任何II型膠原。不存在IL-1刺激時，胰蛋白酶處理在軟骨外植體中只產(chǎn)生低背景膠原降解水平。
TNF產(chǎn)生的抑制通過下述體外分析顯示了所述化合物或其藥物上可接受的鹽抑制TNF產(chǎn)生的能力，于是，闡述了它們治療涉及TNF產(chǎn)生的疾病的效果人單核細(xì)胞分析應(yīng)用一步Ficoll-hypaque分離技術(shù)從抗凝人血分離了人單核細(xì)胞。(2)用含二價(jià)陽離子的Hanks平衡鹽溶液(HBSS)將單核細(xì)胞洗滌三次，在含1％BSA的HBSS中重懸浮至2×106/ml的密度。應(yīng)用AbbottCell Dyn 3500分析儀測定的分類計(jì)數(shù)表明，這些制劑中的單核細(xì)胞占全部細(xì)胞的17～24％。
取180μl細(xì)胞懸浮液等分加到平底的96孔板(Costar)中。化合物和LPS(100ng/ml最終濃度)的添加給出200μl的最終體積。全部條件都重復(fù)三次。在37℃下增濕的CO2培養(yǎng)箱中保溫四小時后，取出板，離心(在約250×g下離心10分鐘)，移取上清液，應(yīng)用R&D酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒分析TNFa。
聚集蛋白聚糖酶分析通過依次用胰蛋白酶和膠原酶消化、接著用膠原酶消化一夜而從關(guān)節(jié)軟骨分離豬初級軟骨細(xì)胞，以每孔2×105個細(xì)胞置于48孔板中，有用5μCi/ml35S(1000Ci/mmol)硫(于I型膠原中)涂布的板。在37℃下5％CO2氣氛中使細(xì)胞將標(biāo)記物結(jié)合入它們的蛋白聚糖基質(zhì)中(約1周)。
在開始分析之前的晚上，用DMEM/1％PSF/G洗滌軟骨細(xì)胞單層兩次，然后，在新鮮的DMEM/1％FBS中保溫一夜。
次日早上，用DMEM/1％PSF/G洗滌軟骨細(xì)胞一次。在配制稀釋液時，將最后的洗滌液保持在培養(yǎng)箱內(nèi)的板上。
可按下表中所述制備培養(yǎng)基和稀釋液。
對板進(jìn)行標(biāo)記，只用板的內(nèi)部24個孔。在一塊板上，指定數(shù)行作為IL-1(不含藥物)和對比(不含IL-1，不含藥物)。定期對這些對比行計(jì)數(shù)以監(jiān)控35S-蛋白聚糖釋放。將對比物和IL-1培養(yǎng)基加到孔中(450μl)，接著添加化合物(50μl)而開始分析。將板在37℃下5％CO2氣氛中保溫。
通過培養(yǎng)基樣品的液體閃爍計(jì)數(shù)(LSC)估側(cè)到40～50％釋放時(當(dāng)來自IL-1培養(yǎng)基的CPM是對比培養(yǎng)基的4～5倍時)就終止分析(9～12小時)。從所有的孔中移取培養(yǎng)基置于閃爍管內(nèi)。添加閃爍體(scintillate)，獲得放射性數(shù)(LSC)。為了溶解細(xì)胞層，往每個孔中添加500μl木瓜蛋白酶消化緩沖液(0.2M Tris，pH7.0，5mM EDTA，5mM DTT，以及1mg/ml木瓜蛋白酶)。在60℃下將含消化液的板保溫一夜。次日從板中取出細(xì)胞層并放入閃爍管內(nèi)。然后，添加閃爍體，對樣品計(jì)數(shù)(LSC)。
測定從每孔內(nèi)總的存在物中釋放數(shù)的百分?jǐn)?shù)。對三次測定取平均值(扣除每孔的對比背景)?；衔镆种频陌俜?jǐn)?shù)基于作為0％抑制的IL-1樣品(總數(shù)的100％)。
測試的本發(fā)明化合物在上述分析的至少一次中都具有小于100μM(優(yōu)選小于100nM)的IC50值。某些優(yōu)選的化合物組具有對不同的MMP或不同ADAM的差示選擇性。一組優(yōu)選的化合物具有對MMP-13勝過對MMP-1的選擇活性。另一組優(yōu)選的化合物更優(yōu)選除了具有對MMP-13勝過對MMP-1的選擇活性之外還具有聚集蛋白聚糖酶活性。
至于對包括人的哺乳動物施用以抑制基質(zhì)金屬蛋白酶或哺乳動物reprolysin，可應(yīng)用各種常規(guī)途徑，包括經(jīng)口，腸胃外(例如，靜脈內(nèi)、肌內(nèi)或皮下)，經(jīng)頰，經(jīng)肛門和局部施藥。通常，將以每天約0.1～25mg/kg受治療者體重(優(yōu)選約0.3～5mg/kg)的劑量施用本發(fā)明的化合物(下文稱為活性化合物)。優(yōu)選的是，將經(jīng)口或腸胃外施用活性化合物。然而，將有必要根據(jù)受治療者的情況對劑量作一定的改變。負(fù)責(zé)施藥的人在任何情況下將決定各個受治療者的適當(dāng)劑量。
可按多種不同的劑型施用本發(fā)明的化合物，通常，本發(fā)明治療有效的化合物在這類劑型中存在的濃度水平在約5.0wt％～70wt％范圍內(nèi)。
就口服來說，可應(yīng)用含各種賦形劑(例如，微晶纖維素、檸檬酸鈉、碳酸鈣、磷酸二鈣和甘氨酸)和各種崩解劑[例如，淀粉(優(yōu)選是玉米淀粉、土豆淀粉或木薯淀粉)，藻酸和某些復(fù)雜的硅酸鹽]與制粒粘合劑(例如，聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖、明膠(gelation)和阿拉伯膠)的片劑。另外，潤滑劑(例如，硬脂酸鎂、十二烷基硫酸鈉和滑石)通常很適合壓片用途。相似類型的固體組合物還可用作明膠膠囊中的填充物；這方面優(yōu)選的物質(zhì)還包括乳糖和高分子量聚乙二醇。當(dāng)需要口服水性懸浮液和/或酏劑時，可將活性組分與下列物質(zhì)并用各種增甜劑或增香劑，著色劑或染料，以及(如果需要的話)乳化劑和/或懸浮劑，還有這樣的稀釋劑，例如水、乙醇、丙二醇、甘油及其各種可能組合。就動物來說，在動物飼料或飲用水中有利地含5～5000ppm(優(yōu)選25～500ppm)濃度的活性組分。
就腸胃外施藥(肌內(nèi)、腹膜內(nèi)、皮下和靜脈內(nèi)用藥)來說，通常應(yīng)用活性組分的無菌可注射液?？蓱?yīng)用溶于芝麻油或花生油或丙二醇水溶液中的本發(fā)明的治療化合物溶液。應(yīng)當(dāng)適當(dāng)?shù)卣{(diào)節(jié)和緩沖所述水溶液在大于8的pH(如果需要的話)，并且首先將液體稀釋劑變成等滲的。這些水溶液適合靜脈內(nèi)注射用。油性溶液適合關(guān)節(jié)內(nèi)、肌內(nèi)和皮下注射用。所有這些溶液在無菌條件下的制備容易通過本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的標(biāo)準(zhǔn)制藥技術(shù)來完成。就動物來說，可按約0.1～50mg/kg/天(有利地0.2～10mg/kg/天)的劑量水平肌內(nèi)或皮下以單劑量或至多3次均分劑量施藥。
本發(fā)明的活性化合物還可被配成直腸施藥組合物，例如，栓劑或保留灌腸劑，例如，含常規(guī)栓劑基料(例如，可可脂或其它甘油酯)。
至于鼻內(nèi)施藥或通過吸入施藥，合適地從泵噴霧器(由患者擠壓或泵送)送遞呈溶液或懸浮液形式的本發(fā)明的活性化合物，或者作為氣溶膠借助于合適的噴射劑(例如，二氯二氟甲烷、三氯一氟甲烷、二氯四氟乙烷、二氧化碳或其它合適的氣體)從加壓容器或噴霧器給藥。就加壓氣溶膠來說，可通過提供一個閥送遞計(jì)量的量來確定單元劑量。加壓容器或噴霧器可盛有活性化合物的溶液或懸浮液。用于吸入器或吹入器中的膠囊和藥筒(例如，從明膠制備的)可制成盛有本發(fā)明的化合物和合適的粉末基料(例如，乳糖或淀粉)的粉末混合物。
如下實(shí)施例闡述了本發(fā)明化合物的制備。熔點(diǎn)都沒有校正。NMR數(shù)據(jù)都是以每百萬份中的份數(shù)(δ)報(bào)導(dǎo)的，表示來自樣品溶劑(氘代氯仿，否則另外說明)的氘鎖定的信號。使用商品試劑而沒有進(jìn)一步純化。THF表示四氫呋喃，DMF表示N，N-二甲基甲酰胺。色譜法表示應(yīng)用32～63mm硅膠和在氮?dú)鈮毫?急驟色譜法)條件下進(jìn)行操作的柱色譜。室溫或常溫表示20～25℃。全部非水反應(yīng)都是在氮?dú)夥?為方便起見)中進(jìn)行的并且進(jìn)行到最大產(chǎn)率。減壓下或真空下的濃度表示應(yīng)用了旋轉(zhuǎn)式蒸發(fā)器。
實(shí)施例15-甲基，5-(4′-苯氧基-苯氧基)-嘧啶-2，4，6-三酮 往無水乙醇(25ml)中緩慢而小心地添加鈉(190mg，8.26mM)并攪拌直至溶液均勻。添加脲(620mg，10.32mM)，將混合物攪拌30分鐘。滴加二乙基-2-甲基-2-(4′-苯氧基-苯氧基)丙二酸酯(1.48gm，4.13mM)于無水乙醇(25ml)中的溶液，將形成的混合物回流加熱(6小時)。使反應(yīng)冷卻到室溫，蒸發(fā)至干，在乙酸乙酯(100ml)和水(100ml)之間分配。分離水層，用1N HCl水溶液酸化至pH1，用乙酸乙酯(3×100ml)萃取。在硫酸鎂(MgSO4)上干燥合并的有機(jī)萃取液，過濾，蒸發(fā)至干。將生成的白色粉末從熱的二氯甲烷中結(jié)晶而給出靶化合物白色晶態(tài)物質(zhì)(310mg；見下表1的分析數(shù)據(jù))。
實(shí)施例2～9通過與上述相似的方法制備了實(shí)施例2～9，不同的是，用適當(dāng)取代的丙二酸酯代替二乙基-2-甲基-2-(4′-苯氧基-苯氧基)丙二酸酯。在下表中，Me是甲基，Bu是正丁基，Ex.No.是實(shí)施例號，而m/z則是低分辨分子離子重量。
表1 制備1二乙基-2正丁基，2-(4′-苯氧基-苯氧基)丙二酸酯 往無水乙醇(25ml)中緩慢而小心地添加鈉(112mg)并攪拌直至觀察到均勻的溶液。緩慢地添加4-苯氧基苯酚(910mg)(AldrichChemical Company)，攪拌形成的混合物(30min，室溫)；滴加二乙基-α-溴-α-正丁基-丙二酸酯(1.44gm)(見制備3)于無水乙醇(25ml)中的溶液，將形成的混合物加熱至回流(1小時)。使反應(yīng)混合物冷卻到室溫，蒸發(fā)至干，在乙酸乙酯(100ml)和水(100ml)之間分配。分離有機(jī)層，用水(3×100ml)洗滌，干燥(MgSO4)，過濾，蒸發(fā)而給出清亮的油狀所需化合物(1.82gm)。
1H NMR(CDCl3)δ＝0.85-0.88(t，3H)；1.21-1.25(t，6H)；1.31-1.39(m，4H)；2.2-2.27(m，2H)；4.23-4.28(q，4H)；6.80-6.95(m，6H)；7.03-7.08(t，1H)；7.25-7.31(q，2H)；m/z＝401(M+).
制備2二乙基-2-甲基，2-(4′-苯氧基-苯氧基)丙二酸酯 往無水乙醇(25ml)中緩慢而小心地添加鈉(112mg)并攪拌直至觀察到均勻的溶液。緩慢地添加4-苯氧基苯酚(910mg)(AldrichChemical Company)，攪拌形成的混合物(30min，室溫)；滴加二乙基-α-溴-α-甲基丙二酸酯(1.23gm)(Aldrich Chemical Company)于無水乙醇(25ml)中的溶液，將形成的混合物加熱至回流(1小時)。使反應(yīng)混合物冷卻到室溫，蒸發(fā)至干，在乙酸乙酯(100ml)和水(100ml)之間分配。分離有機(jī)層，用水(3×100ml)洗滌，干燥(硫酸鎂)，過濾，蒸發(fā)而給出清亮的油狀所需化合物(1.48gm)。1H nmr(CDCl3)δ＝1.25-1.28(t，6H)；1.71(s，3H)；424-4.30(q，4H)；6.88-6.97(m，6H)；7.04-7.08(t，1H)；725-7.32(q，2H)；m/z＝359(M+).
應(yīng)用與上述(制備1和2)相似的方法，從合適的α-溴、α-烷基丙二酸酯和合適的酚開始制備了包括在表2中那些在內(nèi)的丙二酸酯。在下表中，Me是甲基，而Et是乙基。
表2
制備3二乙基-α-溴-α-正丁基丙二酸酯 將二乙基正丁基丙二酸酯(32.2gm)溶于二氯甲烷(200ml)中，滴加溶于二氯甲烷(25ml)中的溴(24.0gm)溶液進(jìn)行處理。攪拌形成的混合物(1小時，室溫)，隨后，變成持久的橙色。真空下除去溶劑，高真空蒸餾殘留物而給出清亮的油狀所需化合物(沸點(diǎn)溫度105～110℃；36.0gm)。
1H NMR(CDCl3)δ＝0.89-0.92(t，3H)；1.25-1.29(t，6H)；1.35-1.37(m，4H)；2.2-2.26(m，2H)；4.23-4.29(q，4H)；m/z＝295和297(M+).
權(quán)利要求
1.一種下式的化合物 其中，R1是氫，(C1～C4)全氟烷基，(C1～C8)烷基或(C3～C8)環(huán)烷基，其中，所述(C1～C8)烷基或(C3～C8)環(huán)烷基可任選包含1～3個獨(dú)立選自氧，＞NR5和硫的雜原子；其中，所述(C1～C8)烷基或(C3～C8)環(huán)烷基還可任選被1～2個獨(dú)立選自下列的取代基取代(C1～C4)烷基，(C6～C10)芳基，(C2～C10)雜芳基，OH，NH2，(C1～C4)烷基氨基，二[(C1～C4)烷基]氨基，(C3～C8)環(huán)烷基氨基，(C3～C8)環(huán)烷基(C1～C4)烷基氨基，(C1～C4)烷氧基，-CONH2，-CONHR4，-CON(R4)2和(C3～C8)環(huán)烷基，其中，所述(C3～C8)環(huán)烷基可任選包含1或2個獨(dú)立選自＞NR5，氧和硫的雜原子；R2和R3獨(dú)立選自氫或(C1～C4)烷基；其中，所述(C1～C4)烷基可任選包含1個選自氧，＞NR5或硫的雜原子；其中，所述(C1～C4)烷基還可任選被下列取代基取代(C6～C10)芳基，(C2～C10)雜芳基，OH，NH2，(C1～C4)烷基氨基，二[(C1～C4)烷基]氨基，(C3～C8)環(huán)烷基氨基，(C5～C8)環(huán)烷基(C1～C4)烷基氨基，(C1～C4)烷氧基，-CON(R4)2或(C3～C8)環(huán)烷基；其中，所述(C3～C8)環(huán)烷基可包含1或2個獨(dú)立選自＞NR5，氧或硫的雜原子；X選自下組基氧，硫，＞SO2，＞S＝O，＞NR4，-CH2O-，-OCH2-，-CH2S-，-CH2(S＝O)-，-CH2SO2-，-SCH2-，-SOCH2-，-SO2CH2-，-N(R4)CH2-，-CH2N(R4)-，-N(R4)SO2-和-SO2N(R4)-；在任何地方出現(xiàn)的R4獨(dú)立選自氫和(C1～C4)烷基；在任何地方出現(xiàn)的R5獨(dú)立選自氫，(C1～C4)烷基，(C6～C10)芳基，(C2～C10)雜芳基，OH，-CONH2，-CONHR4，-CON(R4)2和(C3～C8)環(huán)烷基；Y選自一個鍵，氧，硫，＞SO2，＞S＝O，＞NH，-CH2-，-CH2O-，-OCH2-，-CH2S-，-CH2(S＝O)-，-CH2SO2-，-SCH2-，-SOCH2-，-SO2CH2-，-NHCH2-，-CH2NH-，-CH2CH2-，-CH＝CH-，-NHSO2-和-SO2NH-；Ar1是(C6～C10)芳基或(C2～C10)雜芳基；以及Z是(C6～C10)芳基，(C3～C8)環(huán)烷基，(C3～C8)環(huán)烷基(C1～C4)烷基或(C2～C10)雜芳基；其中，所述(C3～C8)環(huán)烷基或(C3～C8)環(huán)烷基(C1～C4)烷基的1或2個環(huán)碳原子可任選被獨(dú)立選自氧，硫和NR5的雜原子取代；Ar1和Z在能形成另外的鍵的任意環(huán)碳原子上可任選被1～3個獨(dú)立選自下列的取代基取代F，Cl，Br，CN，OH，(C1～C4)烷基，(C1～C4)全氟烷基，(C1～C4)全氟烷氧基，(C1～C4)烷氧基，以及(C3～C8)環(huán)烷氧基；或其藥物上可接受的鹽。
2.權(quán)利要求1的化合物，其中，R2和R3各自是氫。
3.權(quán)利要求2的化合物，其中，X是氧，-OCH2-或-CH2O-。
4.權(quán)利要求2的化合物，其中，X是硫，＞SO2，-SCH2-，-CH2S-，-CH2SO2-，或-SO2CH2-。
5.權(quán)利要求2的化合物，其中，X是＞NR4，-CH2N(R4)-或-N(R4)CH2-。
6.權(quán)利要求2的化合物，其中，X是-N(R4)SO2-或-SO2N(R4)-。
7.權(quán)利要求2的化合物，其中，Y是一個鍵，氧，硫，-CH2-，＞SO2，-OCH2-或-CH2O-。
8.權(quán)利要求3的化合物，其中，Y是一個鍵，氧，硫，-CH2-，＞SO2，-OCH2-或-CH2O-。
9.權(quán)利要求4的化合物，其中，Y是一個鍵，氧，硫，-CH2-，＞SO2，-OCH2-或-CH2O-。
10.權(quán)利要求5的化合物，其中，Y是一個鍵，氧，硫，-CH2，＞SO2，-OCH2-或-CH2O-。
11.權(quán)利要求6的化合物，其中，Y是一個鍵，氧，硫，-CH2，＞SO2，-OCH2-或-CH2O-。
12.權(quán)利要求2的化合物，其中，Y是氧，-OCH2-或-CH2O-。
13.權(quán)利要求3的化合物，其中，Y是氧，-OCH2-或-CH2O-。
14.權(quán)利要求2的化合物，其中，X和Y各自是氧。
15.權(quán)利要求2的化合物，其中，Ar1是苯基。
16.權(quán)利要求12的化合物，其中，Ar1是苯基。
17.權(quán)利要求13的化合物，其中，Ar1是苯基。
18.權(quán)利要求14的化合物，其中，Ar1是苯基。
19.權(quán)利要求2的化合物，其中，Z是(C6～C10)芳基或(C2～C10)雜芳基。
20.權(quán)利要求3的化合物，其中，Z是(C6～C10)芳基或(C2～C10)雜芳基。
21.權(quán)利要求12的化合物，其中，Z是(C6～C10)芳基或(C2～C10)雜芳基。
22.權(quán)利要求13的化合物，其中，Z是(C6～C10)芳基或(C2～C10)雜芳基。
23.權(quán)利要求17的化合物，其中，Z是(C6～C10)芳基或(C2～C10)雜芳基。
24.權(quán)利要求2的化合物，其中，Z是(C6～C10)芳基。
25.權(quán)利要求2的化合物，其中，Z是(C3～C8)環(huán)烷基或(C3～C8)環(huán)烷基(C1～C4)烷基；其中，所述(C3～C8)環(huán)烷基或(C3～C8)環(huán)烷基(C1～C4)烷基的1或2個環(huán)碳原子可任選被獨(dú)立選自氧，硫或NR5的雜原子取代，其中，R5選自氫，(C1～C4)烷基，(C6～C10)芳基，(C2～C10)雜芳基，OH，-CONH2，-CONHR4，-CON(R4)2和(C3～C8)環(huán)烷基。
26.權(quán)利要求2的化合物，其中，Z是(C2～C10)雜芳基。
27.權(quán)利要求2的化合物，其中，Ar1和Z在能形成另外的鍵的任意環(huán)碳原子上被1～3個獨(dú)立選自下列的取代基取代F，Cl，Br，CN，OH，(C1～C4)烷基，(C1～C4)全氟烷基，(C1～C4)全氟烷氧基，(C1～C4)烷氧基和(C3～C8)環(huán)烷氧基。
28.權(quán)利要求1的化合物，其中，X是氧，Y是一個鍵，氧，硫，-CH2-，＞SO2，-OCH2-或-CH2O-；R1是氫或(C1～C4)烷基，其中，所述(C1～C4)烷基可任選包含1～2個獨(dú)立選自氧和＞NR5的雜原子，而且其中所述(C1～C4)烷基可任選被1～3個獨(dú)立選自下列的取代基取代(C1～C4)烷基，OH，NH2，(C1～C4)烷基氨基，二[(C1～C4)烷基]氨基，(C1～C4)烷氧基，-CONH2，-CONHR4和-CONR4，并且，R2和R3獨(dú)立選自氫和(C1～C4)烷基。
29.權(quán)利要求1的化合物，其中，R2和R3各自是氫；X是氧；Y是氧；而且Z是(C2～C10)雜芳基。
30.權(quán)利要求1的化合物，其中，R1是甲基；R2和R3各自是氫；X是氧；Y是氧；而且Z是(C6～C10)芳基。
31.權(quán)利要求1的化合物，其中，R1是正丁基；R2和R3各自是氫；X是氧；Y是氧；而且Z是(C6～C10)芳基。
32.權(quán)利要求1的化合物，其中，R1是甲基；R2和R3各自是氫；X是氧；Y是一個鍵；而且Z是(C6～C10)芳基。
33.權(quán)利要求1的化合物，其中，R1是正丁基；R2和R3各自是氫；X是氧；Y是一個鍵；而且Z是(C6～C10)芳基。
34.權(quán)利要求1的化合物，其中，所述化合物選自下組物質(zhì)5-甲基-5-(4-苯氧基-苯氧基)-嘧啶-2，4，6-三酮；5-甲基-5-(4-(4′-氟苯氧基)-苯氧基)-嘧啶-2，4，6-三酮；5-正丁基-5-(4-苯氧基-苯氧基)-嘧啶-2，4，6-三酮；5-正丁基-5-(4-(4′-氟苯氧基)-苯氧基)-嘧啶-2，4，6-三酮；5-甲基-5-(4-苯基-苯氧基)-嘧啶-2，4，6-三酮；5-甲基-5-(3-苯基-苯氧基)-嘧啶-2，4，6-三酮；和5-甲基-5-(4-芐氧基-苯氧基)-嘧啶-2，4，6-三酮；或其藥物上可接受的鹽。
35.一種用于治療包括人的哺乳動物中選自下組疾病的藥物組合物關(guān)節(jié)炎，炎性腸病，局限性回腸炎，肺氣腫，急性呼吸窘迫綜合征，哮喘，慢性阻塞性肺部疾病，早老性癡呆，器官移植物毒性，惡病質(zhì)，變態(tài)反應(yīng)，變應(yīng)性接觸性過敏反應(yīng)，癌，組織潰瘍，再狹窄，牙周病，大皰性表皮松解，骨質(zhì)疏松癥，人造關(guān)節(jié)植入物的松弛，動脈粥樣硬化，主動脈瘤，充血性心力衰竭，心肌梗死，中風(fēng)，腦缺血，頭創(chuàng)傷，脊髓損傷，神經(jīng)變性障礙，自身免疫障礙，亨廷頓舞蹈病，帕金森病，偏頭痛，抑郁癥，外周神經(jīng)病，疼痛，大腦淀粉樣血管病，親精神性增強(qiáng)或識別增強(qiáng)，肌萎縮性脊髓側(cè)索硬化，多發(fā)性硬化，眼血管生成，角膜損傷，黃斑變性，異常的創(chuàng)傷愈合，燒傷，糖尿病，角膜結(jié)疤，鞏膜炎，艾滋病，膿毒癥和敗血癥性休克，所述組合物包含一定量在這類治療中有效的權(quán)利要求1的化合物和藥物上可接受的載體。
36.一種用于治療包括人的哺乳動物中選自下組疾病的方法關(guān)節(jié)炎，炎性腸病，局限性回腸炎，肺氣腫，急性呼吸窘迫綜合征，哮喘，慢性阻塞性肺部疾病，早老性癡呆，器官移植物毒性，惡病質(zhì)，變態(tài)反應(yīng)，變應(yīng)性接觸性過敏反應(yīng)，癌，組織潰瘍，再狹窄，牙周病，大皰性表皮松解，骨質(zhì)疏松癥，人造關(guān)節(jié)植入物的松弛，動脈粥樣硬化，主動脈瘤，充血性心力衰竭，心肌梗死，中風(fēng)，腦缺血，頭創(chuàng)傷，脊髓損傷，神經(jīng)變性障礙，自身免疫障礙，亨廷頓舞蹈病，帕金森病，偏頭痛，抑郁癥，外周神經(jīng)病，疼痛，大腦淀粉樣血管病，親精神性增強(qiáng)或識別增強(qiáng)，肌萎縮性脊髓側(cè)索硬化，多發(fā)性硬化，眼血管生成，角膜損傷，黃斑變性，異常的創(chuàng)傷愈合，燒傷，糖尿病，角膜結(jié)疤，鞏膜炎，艾滋病，膿毒癥和敗血癥性休克，所述方法包括，對所述哺乳動物施用一定量在治療這類病況中有效的權(quán)利要求1的化合物。
37.一種治療包括人的哺乳動物中可通過抑制基質(zhì)金屬蛋白酶而治療的病況的藥物組合物，它包含一定量在這類治療中有效的權(quán)利要求1的化合物和藥物上可接受的載體。
38.一種治療包括人的哺乳動物中可通過抑制哺乳動物reprolysin而治療的病況的藥物組合物，它包含一定量在這類治療中有效的權(quán)利要求1的化合物和藥物上可接受的載體。
39.一種抑制包括人的哺乳動物中基質(zhì)金屬蛋白酶的方法，它包括，對所述哺乳動物施用有效量權(quán)利要求1的化合物。
40.一種抑制包括人的哺乳動物中哺乳動物reprolysin的方法，它包括，對所述哺乳動物施用有效量權(quán)利要求1的化合物。
全文摘要
本發(fā)明涉及式(I)的嘧啶－2,4,6－三酮金屬蛋白酶抑制劑,其中,X、Y、Ar
文檔編號A61P25/28GK1368963SQ00811392
公開日2002年9月11日 申請日期2000年8月3日 優(yōu)先權(quán)日1999年8月12日
發(fā)明者J·布拉格 申請人:輝瑞產(chǎn)品公司