專利名稱：治療炎癥應(yīng)答的組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及用于預(yù)防組織損傷(即由于炎癥活性造成的組織損傷)的方法與組合物。
背景技術(shù)：
本發(fā)明受美國政府基金(NIH Grant ROL HL37942)資助。美國政府對(duì)該發(fā)明享有一定權(quán)利。
炎癥應(yīng)答用于消滅機(jī)體的有害因子。能夠引發(fā)炎癥應(yīng)答的病原性損害范圍廣泛，包括感染、變應(yīng)原、自身免疫刺激、對(duì)移植組織、有害化學(xué)物和毒素的免疫應(yīng)答、局部缺血/再灌注、缺氧、機(jī)械創(chuàng)傷與熱損傷。炎癥通常是一種非常局限性的作用，用于逼出、稀釋減弱和隔離損害因子與損傷組織。當(dāng)機(jī)體應(yīng)答在消滅目標(biāo)因子過程中造成宿主組織不適當(dāng)損傷或?qū)ν鈧詣?chuàng)傷產(chǎn)生應(yīng)答時(shí)，它就變?yōu)榧膊〉膭?dòng)因。
作為實(shí)例，炎癥是多種血管性疾病或損傷的發(fā)病機(jī)制的組成部分。其實(shí)例包括局部缺血/再灌注損傷(N.G.Frangogiannis等，Myocardial IschemiaMechanisms，Reperfusion，Protection，M.Karmazyn編輯，Birkhuser Verlag(1996)，236-284；H.S.Sharma等，Med.of Inflamm.，6，175(1987))，動(dòng)脈粥樣硬化(R.Ross，Nature，362，801(1993))，炎癥性主動(dòng)脈瘤(N.Girardi等，Ann.Thor.Surg.，64，251(1997)；D.I.Walker等，Brit.J.Surg.，59，609(1972)；R.L.Pennell等，J.Vasc.Surg.，2，859(1985))，以及氣囊血管成形術(shù)后的再狹窄(見上述R.Ross)。與炎癥有關(guān)的細(xì)胞包括白細(xì)胞(即免疫系統(tǒng)細(xì)胞-嗜中性白細(xì)胞，嗜酸性粒細(xì)胞，淋巴細(xì)胞，單核細(xì)胞，嗜堿粒細(xì)胞，巨噬細(xì)胞，樹狀細(xì)胞，和肥大細(xì)胞)，血管內(nèi)皮，血管平滑肌細(xì)胞，成纖維細(xì)胞和肌細(xì)胞。
白細(xì)胞釋放炎性細(xì)胞因子如腫瘤壞死因子-α(TNFα)是免疫系統(tǒng)殺滅包括感染物在內(nèi)的病原侵入物的途徑。TNFα刺激粘著因子在白細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞上的表達(dá)與活化，引發(fā)嗜中性白細(xì)胞對(duì)次級(jí)刺激炎癥應(yīng)答的增強(qiáng)，并增強(qiáng)粘著嗜中性白細(xì)胞的氧化活性。參見上面引用的Sharma等的文獻(xiàn)。另外，巨噬細(xì)胞/樹狀細(xì)胞還用作加工抗原呈遞給淋巴細(xì)胞的佐細(xì)胞。淋巴細(xì)胞本身受刺激后起著前炎性細(xì)胞毒細(xì)胞的作用。
通常，細(xì)胞因子刺激嗜中性白細(xì)胞以增強(qiáng)氧化性(例如超氧化和次級(jí)產(chǎn)物)和非氧化性(例如髓過氧化物酶及其它酶)炎癥活性。細(xì)胞因子的不適當(dāng)與過度釋放可能會(huì)通過組織損傷的氧化與非氧化產(chǎn)物的釋放產(chǎn)生相反的超強(qiáng)病源作用(K.G.Tracey等，J.Exp.Med.，167，1211(1988)和D.N.Mannel等，Rev.Infect.Dis.，9(增刊5)，S602-S606(1987))。例如，TNFα能誘導(dǎo)嗜中性白細(xì)胞粘附于血管壁上，然后通過血管移動(dòng)到損傷部位，釋放它們的氧化和非氧化炎性產(chǎn)物。
盡管單核細(xì)胞緩慢聚集在炎癥病灶部位，但如果條件適宜單核細(xì)胞會(huì)發(fā)育成長(zhǎng)駐佐細(xì)胞和巨噬細(xì)胞。通過用炎癥觸發(fā)因子刺激，單核細(xì)胞/巨噬細(xì)胞也能產(chǎn)生和分泌多種細(xì)胞因子(包括TNFα)、補(bǔ)體、脂質(zhì)、活性氧物質(zhì)、蛋白酶和改造組織和調(diào)控外圍組織功能的生長(zhǎng)因子。
例如，已經(jīng)證明炎癥細(xì)胞因子是下列疾病的致病因子關(guān)節(jié)炎(C.A.Dinarello，Semin.Immunol.，4，133(1992))；局部缺血(A.Seekamp等，Agents-Actions-Supp.，41，137(1993))；膿毒性休克(D.N.Mnnel等，Rev.Infect.Dis.，9(增刊5)，S602-S606(1987))；哮喘(N.M.Cembrzynska等，Am.Rev.Respir，Dis.，147，291(1993))；器官移植排斥(D.K.Imagawa等，Transplantation，51，57(1991)；多發(fā)性硬化(H.P.Hartung，Ann.Neurol.，33，591(1993))；AIDS(T.Matsuyama等，AIDS，5，1405(1991))；以及在堿灼傷眼睛的情況下(F.Miyamoto等，Opthalmic Res.，30，168(1997))。另外，白細(xì)胞中超氧化物的形成能促進(jìn)人免疫缺陷病毒(HIV)的復(fù)制(S.Legrand-Poels等，AIDSRes.Hum.Retroviruses，6，1389(1990))。
眾所周知，腺苷和一些能非選擇性激活腺苷受體亞型的腺苷類似物可以減少嗜中性白細(xì)胞產(chǎn)生炎性氧化產(chǎn)物(B.N.Cronstein等，Ann.N.Y.Acad.Sci.，451.291(1985)；P.A.Roberts等，Biochem.J.，227，669(1985)；D.J.Schrier等，J.Immunol.，137，3284(1986)；B.N.Cronstein等，Clinical Immunol.and Immunopath.，42，76(1987)；M.A.Iannone等，Topics and Perspective inAdenosine Research，E.Gerlach等編輯.，Springer-Verlag，Berlin，p.286(1987)；S.T.McGarrity等，J.Leukocyte Biol.，44，411421(1988)；J.De La Harpe等，J.Immunol.，143，596(1989)；S.T.McGarrity等，J.Immunol.，142，1986(1989)；和C.P.Nielson等，Br.J.Pharmacol，97，882(1989))。例如，已經(jīng)證明腺苷能抑制趨化物如細(xì)菌肽的合成模擬物，f-met-leu-phe(fMLP)，以及補(bǔ)體成分C5a刺激引起的嗜中性白細(xì)胞釋放超氧化物(B.N.Cronstein等，J.Immunol.，135，1366(1985))。腺苷可以降低首先由TNF-α致敏、然后由第二種刺激物如f-met-leu-phe刺激引起的PMN(嗜中性白細(xì)胞)顯著增多的氧化性爆發(fā)(G.W.Sullivan等，Clin.Res.，41，172A(1993))。另外還報(bào)道了腺苷能降低HIV在T-細(xì)胞系中的復(fù)制速率(S.Sipka等，Acta.Biochim.Biopvs.Hung.，23，75(1988))。但并沒有證據(jù)說明腺苷在體內(nèi)具有抗炎活性(G.S.Firestein等，Clin.Res.，41，170A(1993)；和B.N.Cronstein等，Clin.Res.，41，244A(1993))。
已經(jīng)有人提出，對(duì)超氧化物的釋放可能具有相反作用的嗜中性白細(xì)胞上存在多于一種腺苷受體亞型(B.N.Cronstein等，J.Clin.Invest.，85，1150(1990))。嗜中性白細(xì)胞上存在A2A受體這種情況最初由Van Calker等證實(shí)(D.Van Calker等，Eur.J.Pharmacology，206，285(1991))。
根據(jù)放射性配體結(jié)合試驗(yàn)和生理學(xué)應(yīng)答，人們已逐步研制了許多作為A2A腺苷受體(AR)的激動(dòng)劑其效力越來越高和/或選擇性越來越強(qiáng)的化合物。最初研制的化合物對(duì)A2A受體的選擇性很低、甚至無選擇性，例如腺苷本身或腺苷的5′-甲酰胺類化合物，如5′-N-乙基甲酰氨基腺苷(NECA)(B.N.Cronstein等，J.Immunol.，135，1366(1985))。后來發(fā)現(xiàn)加入2-烷基氨基取代基能增強(qiáng)效價(jià)與選擇性，例如CVl808和CGS21680(M.F.Jarvis等，I.Pharmacol.Exp.Ther.，251，888(1989))。2-烷氧基-取代的腺苷衍生物如WRC-0090作為激動(dòng)劑在冠狀動(dòng)脈A2A受體上具有更高的效力與選擇性(M.Ueeda等，J.Med.Chem.，34，1334(1991))。另外在冠狀動(dòng)脈A2A受體上還對(duì)作為激動(dòng)劑的2-烷基肼基腺苷衍生物如SHA 211(也稱作WRC-0474)進(jìn)行了評(píng)價(jià)(K.Niiya等，J.Med.Chem.，35，4557(1992))。
一篇文獻(xiàn)報(bào)道了聯(lián)合使用相對(duì)非特異性的腺苷類似物，R-苯基異丙基腺苷(R-PIA)和2-氯腺苷(Cl-Ado)與磷酸二酯酶(PDE)抑制劑導(dǎo)致嗜中性白細(xì)胞氧化活性降低的情況(M.A.Iannone等，Topics andPerspectives in Adenosine Research，E.Garlach等編輯，Springer-verlag，Berlin，pp.286-298(1987))。但實(shí)際上較之A2A腺苷受體，R-PIA和Cl-Ado是A1腺苷受體的更強(qiáng)活化劑，因此由于心肌與其它組織上A1受體活化會(huì)引起諸如“心傳導(dǎo)阻滯”之類作用而產(chǎn)生副作用。
R.A.Olsson等(USP 5,278,150)公開了具有下式結(jié)構(gòu)的選擇性腺苷A2受體激動(dòng)劑 其中Rib為核糖基，R1可以為H以及R2可以為環(huán)烷基。據(jù)說這些化合物可用于治療高血壓、動(dòng)脈粥樣硬化并用作血管舒張藥。
Olsson等(USP 5,140,015)公開了一些具有下式結(jié)構(gòu)的A2受體激動(dòng)劑 其中C(X)BR2可以為CH2OH，并且R1可以為烷基-或烷氧基烷基。據(jù)稱這些化合物可用作血管舒張藥或抗高血壓藥。
Linden等人的發(fā)明(USP 5,877,180)基于下述發(fā)現(xiàn)，即通過施用作為A2A腺苷受體選擇性激動(dòng)劑的化合物(優(yōu)選與IV型磷酸二酯酶抑制劑聯(lián)合給藥)可以有效地治療某些炎癥性疾病，如關(guān)節(jié)炎和氣喘。在Linden等人的發(fā)明中，其實(shí)施方案給出了一種施用有效量的下式A2A腺苷受體治療炎癥性疾病的方法 其中R和X見該專利中描述。
在優(yōu)選實(shí)施方案中，Linden等人的發(fā)明包括聯(lián)合施用IV型磷酸二酯酶(PDE)抑制劑與A2A腺苷受體激動(dòng)劑。IV型磷酸二酯酶(PDE)抑制劑包括外消旋與光活性的下式4-(多烷氧基苯基)-2-吡咯烷酮化合物 其中R′，R18，R19和X如USP 4,193,926中公開與說明。洛利普利(Rolipram)是包括在上式范圍之內(nèi)的適宜IV型PDE抑制劑的實(shí)例。
G.Cristalli(USP 5,593,975)公開了2-芳基乙炔基、2-環(huán)烷基乙炔基或2-羥基烷基乙炔基衍生物，其中的核苷殘基被羧基氨基、或取代的羧基氨基(R3HNC(O)-)取代。Miyasaka等(USP 4,956,345)已經(jīng)公開了2-炔基嘌呤衍生物，其中的2-炔基基團(tuán)被(C3-C16)烷基取代。所公開的′975化合物被認(rèn)為是血管舒張藥，可抑制血小板聚集，因而能用作抗局部缺血藥、抗動(dòng)脈粥樣硬化劑和抗高血壓劑。
然而，仍然需要可用于治療應(yīng)用并且具有減弱的副作用的選擇性A2腺苷受體激動(dòng)劑。
發(fā)明概述本發(fā)明包括用于治療哺乳動(dòng)物組織中炎癥活性的化合物及其使用方法。炎癥組織活性可以是由于病理性因子引起，或者可以是由于物理性、化學(xué)性或熱創(chuàng)傷，或醫(yī)療過程如器官、組織或細(xì)胞移植，血管成形術(shù)(PCTA)，局部缺血/再灌注后的炎癥，或移植過程中的創(chuàng)傷造成。本發(fā)明化合物包括一類新型2-炔基腺苷衍生物，其乙炔位取代有取代環(huán)烷基基團(tuán)。優(yōu)選核苷殘基在5′-位(“X”)上被N-烷基-(或環(huán)烷基)羧基氨基(“氨基羰基”)部分取代。因此，本發(fā)明提供了通過施用有效量的一種或多種本發(fā)明化合物抑制哺乳動(dòng)物如人類的炎癥應(yīng)答、保護(hù)易發(fā)生這種炎癥應(yīng)答的組織的方法。
本發(fā)明化合物具有下面通式(I) 其中(a)每一R各自為氫，C1-6烷基，C3-C7環(huán)烷基，苯基或苯基(C1-C3)-烷基；(b)X為-CH2OH，-CO2R2，-OC(O)R2或C(O)NR3R4；(c)R2，R3和R4中的每一個(gè)各自為H，C1-6烷基；被1-3個(gè)C1-6烷氧基、C3-C7環(huán)烷基、C1-6烷硫基、鹵素、羥基、氨基、單(C1-6烷基)氨基、二(C1-6烷基)氨基、或C6-C10-芳基取代的C1-6烷基，其中的芳基可以被1-3個(gè)鹵素、C1-6烷基、羥基、氨基、單(C1-6烷基)氨基、或二(C1-6烷基)氨基取代；C6-C10芳基；或被1-3個(gè)鹵素、羥基、氨基、單(C1-6烷基)氨基、二(C1-6烷基)氨基、或C1-6烷基取代的C6-10芳基；
(d)R1為(X-(Z)-)n[(C3-C10)環(huán)烷基]-(Z′)-，其中Z和Z′各自為任選被1-3個(gè)S或非過氧O間斷的(C1-C6)烷基，或者不存在，并且n為1-3；或其可藥用鹽。
本發(fā)明提供了用于醫(yī)學(xué)治療，優(yōu)選用于治療或保護(hù)組織免于炎癥如炎癥應(yīng)答的式I化合物，以及式I化合物在制備用于治療由于與炎癥有關(guān)的病理性狀態(tài)或癥狀所造成的哺乳動(dòng)物(如人)炎癥應(yīng)答的藥物中的應(yīng)用。
盡管已經(jīng)報(bào)道了某些A2A腺苷受體激動(dòng)劑為血管舒張藥，并因此可用于直接治療高血壓、血栓、動(dòng)脈粥樣硬化等，但現(xiàn)有技術(shù)并沒有暗示式(I)化合物的組織保護(hù)活性。
本發(fā)明還包括聯(lián)合使用這些化合物與IV型磷酸二酯酶抑制劑協(xié)同降低免疫細(xì)胞炎癥應(yīng)答的用途。
本發(fā)明也提供了藥物組合物，它包括有效量的式I化合物或其可藥用鹽以及可藥用的稀釋劑或載體，以及任選的IV型磷酸二酯酶(PDE)抑制劑。優(yōu)選組合物為單位劑量形式。
另外，本發(fā)明還提供了預(yù)防或治療哺乳動(dòng)物(如人類)的病理性狀態(tài)或癥狀的治療方法，其中所述病理性狀態(tài)或癥狀涉及A2A腺苷受體活性并且需要激動(dòng)所述活性，該方法包括對(duì)需要這種治療的哺乳動(dòng)物施用有效量的式I化合物或其可藥用鹽。據(jù)信激活A(yù)2A腺苷受體可以通過產(chǎn)生嗜中性白細(xì)胞、肥大細(xì)胞、單核細(xì)胞/巨噬細(xì)胞、T-細(xì)胞和/或嗜曙紅細(xì)胞而能抑制炎癥。抑制這些炎癥細(xì)胞能夠在組織損傷后對(duì)組織產(chǎn)生保護(hù)作用。
使用式I化合物(任選與IV型PDE抑制劑聯(lián)合使用)可治療(包括預(yù)防性治療)的炎癥應(yīng)答是指由于下列情況所造成的炎癥(a)自身免疫刺激(自身免疫疾病)，如紅斑狼瘡，多發(fā)性硬化，子宮內(nèi)膜異位造成的不育癥，I型糖尿病包括導(dǎo)致糖尿病的胰島破壞和糖尿病的炎癥后果，包括腿潰瘍，Crohn病，潰瘍性結(jié)腸炎，炎性腸病，骨質(zhì)疏松癥和類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎；(b)變應(yīng)性疾病如氣喘，枯草熱，鼻炎，春季結(jié)膜炎，及其它嗜曙紅細(xì)胞介導(dǎo)的病癥；(c)皮膚病如牛皮癬，接觸性皮炎，濕疹，感染性皮膚潰瘍，開放性創(chuàng)傷，蜂窩織炎；
(d)感染病如膿毒病，膿毒性休克，腦炎，感染性關(guān)節(jié)炎，內(nèi)毒素性休克，革蘭氏陰性菌性休克，Jarisch-Herxheimer反應(yīng)，帶狀皰疹，中毒性休克，腦型瘧，細(xì)菌性腦膜炎，急性呼吸窘迫綜合癥(ARDS)，萊姆病，HIV感染，(TNFα-增強(qiáng)的HIV復(fù)制，TNFα抑制逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑活性)；(e)消耗病，繼發(fā)于癌癥與HIV的惡病質(zhì)；(f)器官、組織或細(xì)胞移植(如骨髓、角膜、腎、肺、肝、心臟、皮膚、胰島)，包括移植排斥，和移植物抗宿主?。?g)藥物治療的副作用，包括兩性霉素B治療的副作用，免疫抑制治療如白介素-2治療的副作用，OKT3治療的副作用，GM-CSF治療的副作用，環(huán)孢菌素治療的副作用，以及氨基糖甙治療的副作用，由于免疫抑制所致的口炎和粘膜炎；(h)包括炎癥應(yīng)答誘導(dǎo)或惡化的循環(huán)疾病在內(nèi)的心血管病癥，如局部缺血，動(dòng)脈粥樣硬化，外周血管病，血管成形術(shù)后的再狹窄，炎癥性主動(dòng)脈瘤，脈管炎，中風(fēng)，脊髓損傷，充血性心力衰竭，出血性休克，局部缺血/再灌注損傷，蛛網(wǎng)膜下出血后血管痙攣，腦血管意外后血管痙攣，胸膜炎，心包炎，以及糖尿病性心血管并發(fā)癥；(i)透析，包括由于腹膜透析造成的心包炎；(j)痛風(fēng)；和(k)由于燒傷、酸、堿等造成的化學(xué)性或熱創(chuàng)傷。
其中特別有價(jià)值與功效的是使用本發(fā)明化合物治療由于器官、組織或細(xì)胞移植(即將同種或異種組織移植到哺乳動(dòng)物接受者體內(nèi))引起的炎癥應(yīng)答，自身免疫疾病和由于循環(huán)疾病及其治療(包括血管成形術(shù)、移植片固定模放置(stent placement)、分路放置(shuntplacement)或移植)造成的炎癥病癥。意想不到的是，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)在炎癥應(yīng)答發(fā)作之后，例如在受治療者受到能引起炎癥應(yīng)答的病變或創(chuàng)傷折磨之后施用一種或多種式(I)化合物是有效的。
本發(fā)明還包括在體內(nèi)或體外使用與指定A2A腺苷受體有效結(jié)合量的式I化合物測(cè)定其在或與包含所述受體的部位應(yīng)答或結(jié)合的方法。包括配體結(jié)合受體部位的組織或細(xì)胞均可用于測(cè)定試驗(yàn)化合物對(duì)特定受體亞型的選擇性、血液或其它生理液體內(nèi)生物活性化合物的含量，或者可通過使治療與受體部位活化有關(guān)疾病或病癥的治療劑與所述配體-受體配合物接觸而用作鑒定該有效治療劑用的工具，并且能測(cè)定配體的置換程度和/或治療劑的結(jié)合程度，或?qū)λ鲋委焺┑募?xì)胞應(yīng)答(例如cAMP累積)發(fā)明詳述除另有說明外，本發(fā)明使用下列定義。鹵素是指氟、氯、溴、或碘，烷基、烷氧基、芳烷基、烷基芳基等表示直鏈和支鏈烷基基團(tuán)；但對(duì)于單獨(dú)基團(tuán)如“丙基”則僅包括直鏈基團(tuán)，支鏈異構(gòu)體如“異丙基”則會(huì)具體指出。芳基包括苯基或具有大約9-10個(gè)環(huán)原子的鄰位稠合二環(huán)碳環(huán)基，其中至少一個(gè)環(huán)為芳香性。雜芳基包括經(jīng)由含有五或六個(gè)環(huán)原子的單芳環(huán)的環(huán)碳連接的基團(tuán)，其中所述的五或六個(gè)環(huán)原子由碳和1-4個(gè)各自選自非過氧形式氧、硫和N(X)[其中X不存在或?yàn)镠，O，(C1-C4)烷基，苯基或芐基]的雜原子組成，以及由含有大約8-10個(gè)環(huán)原子的鄰位稠合雙雜環(huán)衍生得到的基團(tuán)，特別是苯并衍生物或通過向其上稠合1，2-亞丙基，三亞甲基或四亞甲基二價(jià)基得到的衍生物。
本領(lǐng)域技術(shù)人員不難理解，式(I)化合物具有多于一個(gè)的手性中心，因而可以分離成光活性與外消旋形式。優(yōu)選式(I)的核苷部分衍生自D-核糖，即3′，4′-羥基相對(duì)于糖環(huán)為α型，而2′和5′基團(tuán)則為β型(3R，4S，2R，5S)。當(dāng)環(huán)己基上的兩個(gè)基團(tuán)位于4-位時(shí)，優(yōu)選反式結(jié)構(gòu)。某些化合物可能會(huì)呈現(xiàn)多晶現(xiàn)象。因此應(yīng)當(dāng)理解，本發(fā)明包括本發(fā)明化合物的任何外消旋體、旋光體、多晶體或立體異構(gòu)體，或它們的混合物，它們都具有本發(fā)明所述的有用性質(zhì)。本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知如何制備旋光體(例如，利用重結(jié)晶技術(shù)或酶技術(shù)拆分外消旋體，由旋光性原料合成，手性合成，或應(yīng)用手性固定相色譜分離)以及如何利用本文所述試驗(yàn)或使用本領(lǐng)域公知的其它類似試驗(yàn)測(cè)定腺苷激動(dòng)劑活性。
對(duì)于各基團(tuán)、取代基和范圍而言，下面所給出的具體及優(yōu)選含義僅為舉例說明性的；它們不排除其它定義含義或基團(tuán)與取代基定義范圍內(nèi)的其它含義。
特別是，(C1-C6)烷基可以為甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、仲丁基、戊基、3-戊基或己基。本文所用術(shù)語“環(huán)烷基”包括任選包含1-2個(gè)N、O或S的二環(huán)烷基(降冰片基，2，2，2-二環(huán)辛基等)和三環(huán)烷基(金剛烷基等)。環(huán)烷基還包括(環(huán)烷基)烷基。因此(C3-C6)環(huán)烷基可以是環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、或環(huán)己基；(C3-C6)環(huán)烷基(C1-C6)烷基可以是環(huán)丙基甲基，環(huán)丁基甲基，環(huán)戊基甲基，環(huán)己基甲基；2-環(huán)丙基乙基，2-環(huán)丁基乙基，2-環(huán)戊基乙基，或2-環(huán)己基乙基。
(C1-C6)烷氧基可以是甲氧基、乙氧基、丙氧基、異丙氧基、丁氧基、異丁氧基、仲丁氧基，戊氧基，3-戊氧基，或己氧基；(C2-C6)鏈烯基可以是乙烯基，烯丙基，1-丙烯基，2-丙烯基，1-丁烯基，2-丁烯基，3-丁烯基，1-戊烯基，2-戊烯基，3-戊烯基，4-戊烯基，1-己烯基，2-己烯基，3-己烯基，4-己烯基，或5-己烯基；(C2-C6)炔基可以是乙炔基，1-丙炔基，2-丙炔基，1-丁炔基，2-丁炔基，3-丁炔基，1-戊炔基，2-戊炔基，3-戊炔基，4-戊炔基，1-己炔基，2-己炔基，3-己炔基，4-己炔基，或5-己炔基；(C1-C6)鏈烷?；梢詾橐阴；?，丙酰基或丁?；?；鹵代(C1-C6)烷基可以為碘甲基，溴甲基，氯甲基，氟甲基，三氟甲基，2-氯乙基，2-氟乙基，2，2，2-三氟乙基，或五氟乙基；羥基(C1-C6)烷基可以為羥甲基，1-羥基乙基，2-羥基乙基，1-羥基丙基，2-羥基丙基，3-羥基丙基，1-羥基丁基，4-羥基丁基，1-羥基戊基，5-羥基戊基，1-羥基己基，或6-羥基己基；(C1-C6)烷氧基羰基(CO2R2)可以是甲氧基羰基，乙氧基羰基，丙氧基羰基，異丙氧基羰基，丁氧基羰基，戊氧基羰基，或己氧基羰基；(C1-C6)烷硫基可以是甲硫基，乙硫基，丙硫基，異丙硫基，丁硫基，異丁硫基，戊硫基，或己硫基；(C2-C6)烷酰氧基可以是乙酰氧基，丙酰氧基，丁酰氧基，異丁酰氧基，戊酰氧基，或己酰氧基；芳基可以是苯基，茚基，或萘基；以及雜芳基可以是呋喃基，咪唑基，三唑基，三嗪基，噁唑基，異噁唑基，噻唑基，異噻唑基，吡唑基，吡咯基，吡嗪基，四唑基，吡啶基(或其N-氧化物)，噻吩基，嘧啶基(或其N-氧化物)，吲哚基，異喹啉基(或其N-氧化物)或喹啉基(或其N-氧化物)。
R的具體含義為氨基，一甲基氨基或環(huán)丙基氨基。
R1的具體含義為羧基-或(C1-C4)烷氧基羰基-環(huán)己基(C1-C4)烷基。
R2的具體含義為H或(C1-C4)烷基，亦即甲基或乙基。
R3的具體含義為H，甲基或苯基。
R4的具體含義為H，甲基或苯基。
Z的具體含義為-CH2-或-CH2-CH2-。
X的具體含義為CO2R2，(C2-C5)鏈烷酰基甲基或酰氨基。
n的具體含義為1。
優(yōu)選的式(I)化合物為這些，其中每一R均為H，X為乙基氨基羰基以及R1為4-羧基環(huán)己基甲基(DWH-146a)，R1為4-甲氧基羰基環(huán)己基甲基(DWH-146e)或者R1為4-乙酰氧基甲基環(huán)己基甲基(JMR-193)。它們描述如下(DWH-146(酸)和甲基酯(e))和JMR-193. 4[3-(6-氨基-9(5-[(乙基氨基)羰基]-3，4-二羥基四氫-Z-呋喃基-9H-2-嘌呤基)-2-丙炔基]-1-環(huán)己烷羧酸甲酯(DWH-146e)的合成通過利用PdII催化劑交聯(lián)碘-腺苷衍生物(N-乙基-1′-脫氧-1′-(氨基-2-碘-9H-嘌呤-9-基)-β-呋喃核糖酸酰胺(β-D-ribofuranuoramide))與4-(2-丙炔基)-1-環(huán)己烷羧酸甲酯實(shí)現(xiàn)。碘-腺苷衍生物的合成采用鳥苷完成。首先用能縮醛化糖羥基的乙酐處理鳥苷，然后利用四甲基氯化銨和磷酰氯對(duì)6位進(jìn)行氯化。2位的碘化反應(yīng)通過改進(jìn)的Sandmeyer反應(yīng)完成，接著用氨置換6-Cl和糖乙酸酯。將2′和3′羥基保護(hù)成丙酮化合物，而5′羥基則用高錳酸鉀碘化成酸。脫保護(hù)2′和3′丙酮化合物。用乙醇對(duì)5′酸進(jìn)行Fisher酯化，并用乙胺將所得乙基酯轉(zhuǎn)化為乙基酰胺，從而獲得N-乙基-1′-脫氧-1′-(氨基-2-碘-9H-嘌呤-9-基)-β-D-呋喃核糖酸酰胺。
乙炔化物(4-(2-丙炔基)-1-環(huán)己烷羧酸甲酯)以反式-1，4-環(huán)己烷二甲醇為原料合成。首先單甲苯磺酰化反式-二醇，接著用乙炔陰離子置換甲苯磺酸酯。將所得羥基乙炔物的羥基用Jone試劑氧化成酸，繼而用(三甲基甲硅烷基)重氮甲烷甲基化，得到4-(2-丙炔基)-1-環(huán)己烷羧酸甲酯。
交聯(lián)反應(yīng)在下述早先報(bào)道過的條件下進(jìn)行。向包含N，N-二甲基甲酰胺(0.5mL)、乙腈(1mL)、三乙胺(0.25mL)和N-乙基-1′-脫氧-1′-(氨基-2-碘-9H-嘌呤-9-基)-β-D-呋喃核糖酸酰胺(25mg，0.06mmol)的溶液中加入二氯化二(三苯膦)合鈀(1mg，2mol％)和碘化銅(I)(0.06mg，5mol％)。然后向所得混合物中加入4-(2-丙炔基)-1-環(huán)己烷羧酸甲酯(54mg，0.3mmol)，在氮?dú)夥障聰嚢璺磻?yīng)16小時(shí)。真空除去溶劑并快速層析所得殘留物，以20％甲醇/氯仿洗脫(Rf＝0.45)，得到19mg(灰白色固體，mp 125℃(分解))4[3-(6-氨基-9(5-[(乙基氨基)羰基]-3，4-二羥基四氫-Z-呋喃基)-9H-2-嘌呤基)-2-丙炔基]-1-環(huán)己烷羧酸酯(DWH-146e)。
在炎癥模型體系中，作為抑制劑，DWH-146e和JMR 193的效力顯著高于參比化合物，CGS21680(2-[對(duì)-(羧基乙基)-苯基-乙基氨基]5′-N-乙基甲酰氨基腺苷)。例如，與CGS21680相比，DWH-146e對(duì)A2A受體的效力要高約80倍，并且對(duì)A2A比對(duì)A3受體的選擇性要高40倍。
可藥用鹽的實(shí)例為與能形成生理上可接受陰離子的酸形成的有機(jī)酸加成鹽，例如甲苯磺酸鹽、甲磺酸鹽、馬來酸鹽、乙酸鹽、檸檬酸鹽、丙二酸鹽、酒石酸鹽、琥珀酸鹽、苯甲酸鹽、抗壞血酸鹽、α-酮戊二酸鹽和α-甘油磷酸鹽。也可以形成適宜的無機(jī)鹽，包括鹽酸鹽、硫酸鹽、硝酸鹽、碳酸氫鹽和碳酸鹽。
可藥用鹽可采用本領(lǐng)域公知的標(biāo)準(zhǔn)方法獲得，例如使具有足夠強(qiáng)堿性的化合物如胺與能提供生理上可接受的陰離子的合適酸反應(yīng)。還可以制得羧酸的堿金屬(例如鈉，鉀或鋰)或堿土金屬(例如鈣)鹽。
式I化合物可以配制成藥物組合物，并能以適合所選給藥途徑(即口服或非腸道、靜脈內(nèi)、肌內(nèi)、局部或皮下途徑)的各種不同形式施于哺乳動(dòng)物宿主，例如人類患者。
因此，本發(fā)明化合物可以與可藥用賦形劑如惰性稀釋劑或可同化食用的載體一起內(nèi)吸收性給用，例如口服。它們可以包封在硬或軟殼明膠膠囊內(nèi)，可以壓制成片劑，或者可以直接摻入到患者食物中。對(duì)于口服治療給藥，活性化合物可以與一種或多種賦形劑混合，以可攝取片劑、口腔片、錠劑、膠囊劑、酏劑、懸浮劑、糖漿劑、圓片劑等劑型使用。這類組合物及制劑應(yīng)當(dāng)含有至少0.1％活性化合物。組合物及制劑中的上述百分含量當(dāng)然是可變的，并且對(duì)于給定單位劑型宜為約2-約60％重量?；钚曰衔镌谶@些治療用組合物中的含量應(yīng)能達(dá)到有效劑量水平。
片劑、錠劑、丸劑、膠囊劑等制劑中還可以含有下列成分粘合劑如黃耆膠，阿拉伯膠，玉米淀粉或明膠；賦形劑如磷酸二鈣；崩解劑如玉米淀粉，馬鈴薯淀粉，藻酸等；潤滑劑如硬脂酸鎂；以及甜味劑如蔗糖，果糖，乳糖或天冬甜素或調(diào)味劑如薄荷，冬青油，或者可以加入櫻桃調(diào)味劑。當(dāng)單位劑型為膠囊時(shí)，除上述種類物質(zhì)外，它還可以含有液體載體，如植物油或聚乙二醇。多種其它物質(zhì)可以以包衣物形式存在，或者用來改進(jìn)固體單位劑型的物理形式。例如，片劑、丸劑或膠囊劑可以用明膠、蠟、蟲膠或耱等包衣。糖漿劑或酏劑可以包含活性化合物、甜味劑蔗糖或果糖、防腐劑對(duì)羥基苯甲酸甲酯或丙酯，染料和調(diào)味劑如櫻桃或甜橙調(diào)味品。當(dāng)然，制備不同單位劑型所用的任何物質(zhì)都應(yīng)當(dāng)是可藥用的，并且在使用劑量下基本上無毒。另外，活性化合物還可以摻入到緩釋制劑與裝置中。
活性化合物也可以通過輸注或注射方式靜脈內(nèi)或腹膜內(nèi)給藥?；钚曰衔锘蚱潲}的溶液可以在水中任選地與無毒表面活性劑混合而制備。分散液亦可以在甘油、液態(tài)聚乙二醇、甘油三乙酸酯、及其混合物以及在油中制備。在正常的貯存與使用條件下，這些制劑含有防腐劑以防止微生物生長(zhǎng)。
適于注射或輸注給藥的藥物劑型可以包括無菌水溶液或分散液或包含活性成分的無菌粉末，這種粉末適于臨時(shí)配制成注射或輸注溶液，并且上述劑型均任選地包封在脂質(zhì)體內(nèi)。就所有這類劑型而言，最終劑型在生產(chǎn)與貯存條件下必須是無菌、液態(tài)和穩(wěn)定的。液體載體或賦形劑可以是溶劑或包括例如水、乙醇、多元醇(例如甘油、丙二醇、液態(tài)聚乙二醇等)、植物油、無毒甘油酯、以及它們的適當(dāng)混合物的液體分散介質(zhì)。通過例如形成脂質(zhì)體、在分散液情況下維持所需粒度或使用表面活性劑，可以保持適當(dāng)流動(dòng)性。使用各種不同的抗菌劑和抗真菌劑，例如對(duì)羥苯甲酸酯類、氯丁醇、苯酚、抗壞血酸、硫柳汞等，能夠產(chǎn)生抑微生物作用。在許多情況下，這些劑型優(yōu)選包含有等滲劑，例如糖，緩沖劑或氯化鈉。通過在組合物中使用延遲吸收劑例如一硬脂酸鋁和明膠可以產(chǎn)生延長(zhǎng)注射組合物吸收的作用。
無菌注射液的制備包括在合適溶劑中混合需要量的活性化合物與上文所列舉的其它各種成分(按需選擇)，隨后無菌過濾。在供制備無菌注射液用的無菌粉末情況下，優(yōu)選的制備方法是真空干燥和凍干技術(shù)，從而產(chǎn)生包含活性成分和所述無菌過濾溶液中存在的任何其它所需成分的粉末。
對(duì)于局部給藥，本發(fā)明化合物可以以純凈形式使用(即在它們?yōu)橐后w的情形下)。但通常最好是將它們與皮膚可接受的載體一起配制成組合物或制劑形式施于皮膚，這些組合物或制劑可以是固體或液體形式。
有用的固體載體包括粉碎固體如滑石、粘土、微晶纖維素、硅膠、氧化鋁等。有用的液體載體包括水、醇或二醇類或水-醇/二醇共混物，其中任選地借助無毒表面活性劑來溶解或分散有效量的本發(fā)明化合物。對(duì)于給定用途，可以加入諸如香料和其它抗菌劑之類佐劑以優(yōu)化它們的性質(zhì)。所制液體組合物可以借助吸收墊給藥，用于浸漬繃帶和其它敷料，或用唧筒類或氣霧劑噴霧器噴霧到損傷區(qū)。
為了直接給藥到用者的皮膚上，還可以使用增稠劑(如合成聚合物、脂肪酸、脂肪酸鹽與酯，脂肪醇、改性纖維素或改性無機(jī)材料)與液體載體一起形成可涂敷的糊劑、凝膠劑、軟膏劑、皂液等形式。
Jacquet等(USP 4,608,392)、Geria(USP 4,992,478)、Smith等(USP 4,559,157)和Wortzman(USP 4,820,508)公開了有用的皮用組合物實(shí)例，它們可用于將式I化合物給藥于皮膚。
式I化合物的有效劑量可以通過在動(dòng)物模型中比較它們的體外活性與體內(nèi)活性來測(cè)定。根據(jù)在小鼠和其它動(dòng)物中的有效劑量外推適合人的有效劑量的方法是本領(lǐng)域已知的，參見USP 4,938,949。IV型PDE抑制劑的有效劑量也是本領(lǐng)域已知的，例如，參見USP5,877,180，Col.12。
一般來講，式(I)化合物在液體組合物如洗劑中的濃度為約0.1-25％wt-％，優(yōu)選約0.5-10wt-％。在半固體或固體組合物如凝膠或粉劑中的濃度為約0.1-5wt-％，優(yōu)選約0.5-2.5wt-％。
化合物、或其活性鹽或衍生物的治療需要量不僅隨所選擇的具體鹽而變化，而且還隨給藥途徑、所治療疾病的嚴(yán)重程度以及患者的年齡與健康狀況而變化，并且最終由主治醫(yī)師或臨床醫(yī)師決定。
但一般來講，適宜劑量為每天每千克體重約0.5-約100μg，例如約10-約75μg(比如3-約50μg)，優(yōu)選6-90μg，最優(yōu)選16-60μg/kg/天。
本發(fā)明化合物能夠以單位劑量形式方便地給藥；例如，每單位劑量形式含5-1000μg，適宜含10-750μg，最適宜含50-500μg的活性成分。
理想的情形是，給藥活性成分應(yīng)當(dāng)達(dá)到約0.1-約10nM活性化合物的血峰濃度，優(yōu)選約0.2-10nM，最優(yōu)選約0.5-約5nM。這種情形可以通過例如靜脈注射0.05-5％活性成分溶液(任選溶在生理鹽水中)，或口服給藥含約1-100μg活性成分的藥團(tuán)實(shí)現(xiàn)。所需血藥水平可通過以約0.01-5.0μg/kg/hr速率連續(xù)輸注維持或由含約0.4-15μg/kg活性成分的間歇性輸注液維持。
所需劑量可以很方便地以單劑量或以適當(dāng)時(shí)間間隔給藥的分劑量(例如每天兩個(gè)、三個(gè)、四個(gè)或更多個(gè)小劑量)形式提供。小劑量本身還可以進(jìn)一步細(xì)分成多個(gè)松散間隔開的不連續(xù)給藥形式，例如吹入器的多次吸入或?qū)⒍嗟蔚蝿┑稳胙蹆?nèi)。例如，最好在能引起炎癥的損傷之后靜脈延續(xù)給藥本發(fā)明組合物一段時(shí)期。
本發(fā)明特定化合物作為A2A腺苷受體激動(dòng)劑(或拮抗劑)的能力可以利用本領(lǐng)域公知的藥理學(xué)模型或應(yīng)用下述試驗(yàn)測(cè)定。
本發(fā)明通過下列詳細(xì)描述的實(shí)施例進(jìn)一步說明，但它們僅僅是本發(fā)明的例證，而且本發(fā)明并不局限于此。
實(shí)施例1.反式-(1-[4-羥甲基)環(huán)己基]甲基)-4-甲基苯磺酸酯(5.2).向10g(70mmol)[4-(羥甲基)環(huán)己基]甲烷-1-醇(5.1)在700mL四氫呋喃中的溶液內(nèi)加入氫化鈉(1.68g，70mmol)，攪拌1小時(shí)，然后加入對(duì)-甲苯磺酰氯(13.3g，70mmol)，回流反應(yīng)混合物5小時(shí)。然后冷卻反應(yīng)物至0℃，緩慢加水終止反應(yīng)，直至不再存在活性氫化物為止。氫化物停止反應(yīng)之后，加乙醚(700mL)稀釋反應(yīng)混合物，并用10％碳酸鉀水溶液(700mL)萃取兩次。用硫酸鈉干燥有機(jī)物，然后減壓除去溶劑。產(chǎn)物進(jìn)而通過硅膠柱色譜純化，以丙酮-二氯甲烷(5∶95)洗脫，從而得到5.2(35％)。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ775 (d，J＝8.3Hz，2H)，7.32(d，J＝8.1Hz，2H)，3.79(d，J＝6.35Hz，2H)，3.39(d，J＝6.35Hz，2H)，2.42(s，3H)，1.75(m，4H)，1.59(m，1H)，1.37(m，1H)，0.9(m，4H).13C NMR(300MHz，CDCl3)δ145.3，133.4，130.3，130.3.
128.3，128.3，75.8，68.5，40.6，37.8，28.9，28.9，28.9，28.9，22.1.
實(shí)施例2.(4-丙-2-炔基環(huán)己基)甲烷-1-醇(5.3).向5.2(3g，10mmol)在40mL二甲亞砜中的溶液內(nèi)非常緩慢地加入乙炔鋰乙二胺復(fù)合物(90％)(6.4g，70mmol)。攪拌反應(yīng)混合物5天，然后在0℃下緩慢加水終止反應(yīng)。用乙醚(300mL)稀釋這一混合物，并用氯化銨飽和水溶液(200mL)萃取三次。有機(jī)物用硫酸鈉干燥。減壓除去溶劑，產(chǎn)物進(jìn)而用硅膠柱色譜純化，以乙酸乙酯-己烷(20∶80)洗脫，從而得到5.3(85％)。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ3.41(d，J＝6.5Hz，2H)，2.07(dd，J＝2.5，6.5Hz，2H)，1.96-1.75(m，5H)，1.41(m，2H)，.095(m，4).13C NMR(300MHz，CDCl3)δ83.8，69.6，68.9，40.7，37.7，32.3，32.3，29.6，29.6，26.5.
實(shí)施例3.4-丙-2-炔基環(huán)己烷羧酸(5.4).保持三氧化鉻(1.1g，11mmol)在1.5M硫酸(40mL，27mmol)中的溶液溫度為0℃，2小時(shí)內(nèi)加入5.3(0.46g，3mmol)/80mL丙酮溶液。然后在室溫下另攪拌反應(yīng)物2小時(shí)。加乙醚(200mL)稀釋反應(yīng)混合物，并用水萃取兩次。用硫酸鈉干燥有機(jī)物。減壓除去溶劑，并將產(chǎn)物通過硅膠柱色譜純化，以丙酮-二氯甲烷(70∶30)洗脫，得到5.4(75％)。
1H NMR(300MHz CDCl3)δ2.24(dt，J＝3.66，12.1Hz，1H)，2.10(dd，J＝2.7，6.5Hz，2H)，2.04-1.89(m，5H)，1.76(d，J＝2.3Hz，1H)，1.43(dq，J＝3.28，13.1Hz，2H)，1.03(dq，J＝3.28，13.1Hz，2H).13CNMR(300MHz，CDCl3)δ183.2，83.3，69.9，43.4，36.7，31.8，28.9，26.3.
實(shí)施例4.4-丙-2-炔基環(huán)己烷羧酸甲酯(5.5).向5.4(0.34g，2mmol)在15mL甲醇∶二氯甲烷(3∶7)中的溶液內(nèi)加入(三甲基甲硅烷基)重氮甲烷的己烷溶液(2.0M)(1mL，2mmol)。減壓除去溶劑，起始原料100％轉(zhuǎn)化為產(chǎn)物。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ2.24(dt，J＝3.66，12.1Hz，1H)，2.10(dd，J＝2.7，6.5Hz，2H)，2.06(dd，J＝1.54，6.54Hz，1H)，2.00-1.89(m，3H)，1.76(d，J＝2.3Hz，1H)，1.43(dq，J＝3.28，13.1Hz，2H)，1.03(dq，J＝3.28，13.1Hz，2H).13CNMR(300MHz，CDCl3)δ176.8，83.3，69.8，51.9，43.4，36.7，31.9，29.2，26.3.
實(shí)施例5.乙酸[(2R，3R，4R，5R)-3，4-二乙酰氧基-5-(2-氨基-6-羥基(oxohyro)嘌呤-9-基)氧雜戊環(huán)(oxolan)-2-基]甲基酯(6.2).75℃加熱由113g(0.4mol)無水鳥苷(6.1)、乙酐(240mL，2.5mol)、無水吡啶(120mL)和無水DMF(320mL)組成的懸浮液3.75小時(shí)，期間溫度不超過80℃。然后將所得清亮溶液轉(zhuǎn)移到3LErlenmyer燒瓶?jī)?nèi)，并加入2-丙醇。待溶液冷卻到室溫后進(jìn)行引晶，并在4℃下繼續(xù)進(jìn)行過夜。過濾白色固體，用2-丙醇洗滌，進(jìn)而以2-丙醇重結(jié)晶，得到6.2(96％)。
1H NMR(300Mhz，CDCl3)δ8.20(s，1H，H-8)，6.17(d，J＝5.41Hz，1H，H-1′)5.75(t，J＝5.39Hz，1H，H-2′)，5.56(t，J＝5.0，H-3′)，4.41(m，3H，H-4′，5′)，2.14(s，3H，Ac)，2.11(s，3H，Ac)，2.10(s，3H，Ac).13C NMR(300MHz，CD3OD)δ171.0，170.3，1702，157.7，154.8，152.4，136.7，117.7，85.5，80.4，73.0，71.3，64.0，31.3，21.2，21.0.
實(shí)施例6.乙酸[(2R，3R，4R，5R)-3，4-二乙酰氧基-5-(2-氨基-6-氯嘌呤-9-基)氧雜戊環(huán)-2-基(oxolan-2-yl)]甲基酯(6.3). 在1000mL燒瓶?jī)?nèi)加入80g(0.195mol)乙酸[(2R，3R，4R，5R)-3-4-二乙酰氧基-5-(2-氨基-6-羥基(oxohyro)嘌呤-9-基)氧雜戊環(huán)-2-基(oxolan-2-yl)]甲基酯(6.2)、四甲基氯化銨(44g，0.4mol)、無水乙腈(400mL)和N，N-二甲基苯胺(25mL)。將燒瓶置于冰鹽浴中，冷卻到2℃。向此溶液內(nèi)逐滴加入POCl3(107mL，1.15mol)，控制滴加速度以維持溫度低于5℃(45分鐘)。然后從冰浴中移出燒瓶，配備冷凝器，再置于油浴中，回流10分鐘，溶液顏色變?yōu)榧t/棕色。然后減壓除去溶劑，將所得油狀殘留物轉(zhuǎn)移到含有1000g冰和400mL氯仿的燒杯內(nèi)，攪拌1.5小時(shí)以分解剩余的POCl3。然后移出有機(jī)相，將水相用3×50mL氯仿萃取，并與有機(jī)相混合。合并的有機(jī)物然后再用50mL水萃取，接著與200mL飽和碳酸氫鈉一起攪拌。有機(jī)物進(jìn)一步用碳酸氫鈉萃取至水萃取物呈中性(2X)。最后再用鹽水萃取有機(jī)相，用硫酸鎂干燥16小時(shí)。向此溶液內(nèi)加入800mL 2-丙醇，然后減壓濃縮所得溶液。再向油狀固體中加入200mL 2-丙醇，冷凍所得溶液過夜。過濾結(jié)晶產(chǎn)物，洗滌，干燥過夜后得到6.3(77％).
1H NMR(300MHz，CD3OD)δ8.31(s，1H，H-8)，7.00(s，2H，NH2)6.06(d，J＝5.8Hz，1H，H-1′)，5.83(t，J＝6.16Hz，1H，H-2)，5.67(m，1H，H-3′)，4.29(m，3H，H-4′，5′)，2.07(s，3H，Ac)，1.99(s，3H，Ac)，1.98(s，3H，Ac)，13C NMR(300MHz，CD3OD)δ171.0，170.4，170.2，160.8，154.6，150.8，142.2，124.5，85.8，80.6，72.8，71.2，63.9，21.4，21.3，21.1.
實(shí)施例7.乙酸[(2R，3R，4R，5R)-3，4-二乙酰氧基-5-(6-氯-2-碘嘌呤-9-基)氧雜戊環(huán)-2-基]甲基酯(6.4).向5.12g(12mmol)乙酸[(2R，3R，4R，5R)-3，4-二乙酰氧基-5-(2-氨基-6-氯嘌呤-9-基)氧雜戊環(huán)-2-基]甲基酯(6.3)、I2(3.04g，12mmol)、CH2I2(10mL，124mmol)和CuI(2.4g，12.6mmol)在THF(60mL)中的混合物內(nèi)加入亞硝酸異戊酯(5mL，37mmol)。加熱回流所得混合物45分鐘，然后冷卻到室溫。向此溶液內(nèi)加入100ml飽和Na2S2O3以除去因碘造成的紅色。水相用氯仿萃取3X，收集氯仿，用硫酸鎂干燥并減壓濃縮。產(chǎn)物然后通過硅膠柱純化，使用CHCl3-MeOH(98∶2)洗脫以收集乙酸[(2R，3R，4R，5R)-3，4-二乙酰氧基-5-(6-氯-2-碘嘌呤-9-基)氧雜戊環(huán)-2-基]甲基酯(6.4)(80％，用乙醇結(jié)晶)。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.20(s，1H H-8)，6.17(d，J＝5.41Hz，1H，H-1′).5.75(t，J＝5.39Hz，1H，H-2′)，5.56(t，J＝5.40Hz，1H，H-3′)，4.38(m，3H，H-4′，5′)，2.14(s，1H，Ac)，2.11(s，1H，Ac)，2.10(s，1H，Ac).
實(shí)施例8.(4S，2R，3R，5R)-2-(6-氨基-2-碘嘌呤-9-基)-5-(羥甲基)氧雜戊環(huán)-3，4-二醇(6.5).-78℃下，向含有6.0g(11.1mmol)乙酸[(2R，3R，4R，5R)-3，4-二乙酰氧基-5-(6-氯-2-碘嘌呤-9-基)氧雜戊環(huán)-2-基]甲基酯(6.4)的燒瓶?jī)?nèi)加入100ml液氨，攪拌該溶液6小時(shí)。然后溫?zé)嶂潦覝胤磻?yīng)過夜，同時(shí)發(fā)生NH3蒸發(fā)，最后得到一棕色油狀物。將該產(chǎn)物用熱異丙醇結(jié)晶，得到6.5(80％)，m.p.143-145℃，r.f.＝0.6(20％ MeOH/CHCl3)。
1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ8.24(s，1H)，7.68(s，2H)，5.75(d，J＝6.16，1H)，5.42(d，J＝5.40Hz，1H)，5.16(d，J＝4.62Hz，1H)，4.99(t，J＝5.39Hz，1H)，4.67(d，J＝4.81Hz，1H)，4.06(d，J＝3.37Hz，1H)，3.89(m，1H)，3.54(m，2H).
實(shí)施例9.[(1R，2R，4R，5R)-4-(6-氨基-2-碘嘌呤-9-基)-7-7-二甲基-3，6，8-三氧雜二環(huán)[3.3.0]辛-2-基]甲烷-1-醇(6.6).向2.0g(5.08mmol)(4S，2R，3R，5R)-2-(6-氨基-2-碘嘌呤-9-基)-5-(羥甲基)氧雜戊環(huán)-3，4-二醇(6.6)在100mL丙酮中的溶液內(nèi)加入9.6g對(duì)-甲苯磺酸和5ml二甲氧基丙烷。室溫?cái)嚢璺磻?yīng)物1小時(shí)，接著加入15g NaHCO3，另外攪拌3小時(shí)，爾后過濾殘留物，并用EtOAc洗滌2X。隨后減壓濃縮濾液。殘留物通過硅膠柱層析，以MeOH-CHCl3(1∶99)洗脫，從而得到固體6.6(72％)，m.p.185-187℃。
1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ8.22(s，1H，H-8)，7.69(s，2H)，NH2)，6.00(d，J＝2.70Hz，1H，H-1′)，5.21(m，1H，H-2′)，5.07(bs，1H，OH)，4.88(m，1H，H-3′)，4.13(m，1H，H-4′)，3.47(m，2H，H-5′)，1.49和1.28(s，3H，C(CH3)2)實(shí)施例10.(2S，1R，4R，5R)-4-(6-氨基-2-碘嘌呤-9-基)-7，7-二甲基-3，6，8-三氧雜二環(huán)[3.3.0]辛烷-2-羧酸(6.7)。攪拌下，向1.6g(3.7mmol)[(1R，2R，4R，5R)-4-(6-氨基-2-碘嘌呤-9-基)-7-7-二甲基-3，6，8-三氧雜二環(huán)[3.3.0]辛-2-基]甲烷-1-醇(6.6)在200mL水中的溶液內(nèi)加入0.60g KOH，并逐滴加入1.70g(10.8mml)KMnO4在50mL水中的溶液。所得混合物在室溫下黑暗處放置225小時(shí)。然后冷卻反應(yīng)混合物到5-10℃，用4mL 30％H2O2/16mL水溶液脫色，期間使用冰鹽浴維持溫度低于10℃。混合物通過Celite過濾，減壓濃縮濾液至約10mL，然后用2N HCl酸化至pH 4。濾出所產(chǎn)生的沉淀物，用乙醚洗滌，經(jīng)干燥后得到白色固體6.7(70％)，m.p.187-190℃.
1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ8.11(s，1H，H-8)，7.62(s，2H，NH2)，7.46(s，1H，COOH)，6.22(s，1H，H-1′)，5.42(d，J＝5.71Hz，1H，H-2′)，5.34(d，J＝6.16Hz，1H，H-3′)，4.63(s，1H，H-4′)，1.46和1.30(s，3H，C(CH3)2)。
實(shí)施例11.(2S，3S，4R，5R)-5-(6-氨基-2-碘嘌呤-9-基)-3，4-二羥基氧雜戊環(huán)-2-羧酸(6.8).80℃攪拌1.72g(3.85mol)(2S，1R，4R，5R)-4-(6-氨基-2-碘嘌呤-9-基)-7，7-二甲基-3，6，8-三氧雜二環(huán)[3.3.0]辛烷-2-羧酸(6.7)在80mL 50％HCOOH中的溶液1.5小時(shí)。然后減壓蒸發(fā)反應(yīng)混合物，將殘留物溶于水，并再次蒸發(fā)該溶液。重復(fù)該過程直至殘留物中無甲酸氣味為止。最后用水重結(jié)晶得到1.33g(85％)白色固體6.8，m.p.221-223℃(分解).
1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ8.31(s，1H，H-8)，7.68(s，2H，NH2)，5.90(d，J＝6.55Hz，1H，H-1′)，4.42(m，1H，H-2′)，4.35(d，J＝2.31Hz，1H，H-4′)，4.22(m，1H，H-3′).
實(shí)施例12.[(2S，3S，4R，5R)-5-(6-氨基-2-碘嘌呤-9-基)-3，4-二羥基氧雜戊環(huán)-2-基]-N-乙基甲酰胺(6.9).攪拌下，向1.29g(3.17mmol)(2S，3S，4R，5R)-5-(6-氨基-2-碘嘌呤-9-基)-3，4-二羥基氧雜戊環(huán)-2-羧酸(6.8)在150mL無水乙醇中的冷(5℃)溶液內(nèi)逐滴加入1.15mL冰冷SOCl2。室溫?cái)嚢杌旌衔镞^夜，然后用碳酸氫鈉飽和水溶液調(diào)節(jié)至pH8。過濾混合物，隨后減壓濃縮濾液得到白色固體，進(jìn)而干燥并于-20℃再溶于20mL無水乙胺并保持3小時(shí)，然后室溫放置過夜。將反應(yīng)混合物用無水乙醇稀釋，濾出沉淀產(chǎn)物，用無水乙醚洗滌后得到530mg(72％)純凈固體6.9，m.p.232-234℃.
1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ8.34(s，1H，H-8)，8.12(t，1H，NH)，7.73(s，2H，NH2)，5.85，(d，J＝6.93Hz，1H，H-1′)，4.54(m，1H，H-2′)，4.25(d，J＝1.92Hz，1H，H-4′)，4.13(m，1H，H-3′)，3.28(m，2H，CH2CH3)，1.00(t，J＝7.2Hz，3H，CH2CH3).
實(shí)施例13.甲基-4-(3-{9-[(4S，5S，2R，3R)-5-(N-乙基氨基甲?；?-3，4-二羥基氧雜戊環(huán)-2-基]-6-氨基嘌呤-2-基)}丙-2-炔基)環(huán)己烷羧酸酯(DWH-146e).向25mg(0.063mmol)[(2S，3S，4R，5R)-5-(6-氨基-2-碘嘌呤-9-基)-3，4-二羥基氧雜戊環(huán)-2-基]-N-乙基甲酰胺(6.9)、16.9mg(0.094mmol)(5.5)和0.75mgCuI在5mL三乙胺(TEA)和5mL乙腈中形成的脫氣溶液內(nèi)加入15mgPd(PPh3)4。70℃攪拌所得溶液24小時(shí)，然后將溶液通過硅藻土過濾，并進(jìn)行硅膠層析(MeOH-CHCl3(5∶95))，從而得到DWH-146e(24％)。
實(shí)施例14.乙酸(4-丙-2-炔基環(huán)己基)甲基酯(5.6).向5.3(250mg，1.65mmol)在25mL乙醚中的溶液內(nèi)加入乙酐(0.92mL，8.25mmol)和吡啶(.2mL，2.5mmol)。室溫?cái)嚢璺磻?yīng)物24小時(shí)。向反應(yīng)物中加入水，進(jìn)一步用10％ NaHCO3萃取有機(jī)物。有機(jī)層用硫酸鎂干燥，然后蒸發(fā)。硅膠層析殘留物，以EtOAc-己烷(5∶95)洗脫，得到5.6(47％)。
實(shí)施例15.乙酸[4-(3-{9-(4S，5S，2R，3R)-5-(N-乙基氨基甲?；?-3，4-二羥基氧雜戊環(huán)-2-基]-6-氨基嘌呤-2-基}丙-2-炔基)環(huán)己基]甲基酯(JMR193)。向125mg(0.29mmol)[(2S，3S，4R，5R)-5-(6-氨基-2-碘嘌呤-9-基)-3，4-二羥基氧雜戊環(huán)-2-基]-N-乙基甲酰胺(6.9)、150mg(0.77mmol)(5.6)和1.0mg CuI在1.3mL TEA和4mL DMF中形成的脫氣溶液內(nèi)加入25mg Pd(PPh3)4。60℃攪拌所得溶液72小時(shí)，然后將溶液通過硅藻土過濾，并進(jìn)行硅膠層析(MeOH-CHCl3(5∶95))，從而得到JMR193(10％)。
實(shí)施例16.[(2S，3S，4R，5R)-5-(6-氨基-2-{3-[4-(羥甲基)環(huán)己基]丙-2-炔基}嘌呤-9-基)-3，4-二羥基氧雜戊環(huán)-2-基]-N-乙基甲酰胺.
A.(4-丙-2-炔基環(huán)己基)甲烷-1-醇.向4-甲基苯磺酸反式-[4-(羥甲基)環(huán)己基]甲基酯(3g，10mmol)在40mL二甲亞砜中的溶液內(nèi)非常緩慢地加入乙炔鋰乙二胺復(fù)合物(90％)(6.4g，70mmol)。攪拌反應(yīng)混合物5天，然后在0℃下緩慢加水終止反應(yīng)。用乙醚(300mL)稀釋這一混合物，并用氯化銨飽和水溶液(200mL)洗滌三遍。然后用硫酸鈉干燥有機(jī)物。減壓除去溶劑，產(chǎn)物進(jìn)而用硅膠柱色譜純化，以乙酸乙酯-己烷(20∶80)洗脫，從而得到產(chǎn)物(85％)。
1H NMR(300MHz，CDCl3)d3.41(d，J＝6.5Hz，2H)，2.07(dd，J＝2.5，6.5Hz，2H)，1.96-1.75(m，5H)，1.41(m，2H)，.095(m，4).13C NMR(300MHz，CDCl3)d 83.8，69.6，68.9，40.7，37.7，32.3，32.3，29.6，29.6，26.5.
B.[(2S，3S，4R，5R)-5-(6-氨基-2-{3-[4-(羥甲基)環(huán)己基]-丙-1-炔基}嘌呤-9-基)-3，4-二羥基氧雜戊環(huán)-2-基]-N-乙基甲酰胺(JMR2037)。向28mg(0.065mmol)[(2S，3S，4R，5R)-5-(6-氨基-2-碘嘌呤-9-基)-3，4-二羥基氧雜戊環(huán)-2-基]-N-乙基甲酰胺、30mg(0.20mmol)(4-丙-2-炔基環(huán)己基)甲烷-1-醇和1.0mg CuI在1mL三乙胺(TEA)、1mL DMF和1mL乙腈中形成的脫氣溶液內(nèi)加入10mgPd(PPh3)4。室溫?cái)嚢杷萌芤?0小時(shí)，然后將溶液通過硅藻土過濾，并進(jìn)行硅膠層析(MeOH-CHCl3(7∶93))，從而得到5mg(17％)JMR2037。使用本文描述的結(jié)合測(cè)定方法測(cè)試該標(biāo)題化合物，發(fā)現(xiàn)它能與重組人A2A受體結(jié)合，其Ki為694±69nM。
實(shí)施例17.放射配體結(jié)合研究。利用放射配體125I-ZM241385評(píng)價(jià)與A2A受體的結(jié)合性質(zhì)。圖2B描述了選擇性激動(dòng)劑與重組人A2A腺苷受體結(jié)合的競(jìng)爭(zhēng)特性。DWH-146e對(duì)重組人A2A(hA2A)亞型具有高選擇性。對(duì)A3受體的選擇性(未示出)不太顯著，但仍有約50倍。DWH-146e的效力分別比WRC0470和CGS21680高大約5倍和50倍(

圖1)。一種出人意料但又令人感興趣的發(fā)現(xiàn)就是酯，DWH-146e的效力也是酸，DWH-146a的約50倍(圖1)。
實(shí)施例17A.DWH-146e和JMR193對(duì)嗜中性白細(xì)胞氧化活性的作用A.材料f-met-leu-phe(fMLP)，魯米諾，超氧化物岐化酶，細(xì)胞色素C，血纖蛋白原，腺苷脫氨酶，和臺(tái)盼藍(lán)購自Sigma化學(xué)公司。Ficoll-hypaque購自ICN(Aurora，OH)，和Cardinal Scientific(SantaFe，NM)以及Accurate Chemicals和Scientific(Westerbury，NY)。內(nèi)毒素(脂多糖；大腸桿菌k235)得自List Biologicals(Campbell，CA).Hanks平衡鹽溶液(HBSS)，和鱟阿米巴樣細(xì)胞裂解物分析試劑盒得自Bio Wittaker(Walkersville，MD)。人血清白蛋白(HSA)得自Cutter Biological(Elkhart，IN)。重組人腫瘤壞死因子-α由Dianippin藥物有限公司(Osaka，Japan)提供。ZM241385(4-(2-[7-氨基-2-(2-呋喃基)-[1，2，4]-三唑并[2，3-a][1，3，5]三嗪-5-基氨基]乙基)苯酚)由Zeneca Pharmaceuticals(Cheshire，UK)的SimonPoucher贈(zèng)送。貯存液(1mM和10mM的DMSO溶液)自制并在-20℃貯存。B.人嗜中性白細(xì)胞制品含有＜1個(gè)血小板/5個(gè)嗜中性白細(xì)胞和＜50pg/ml內(nèi)毒素(鱟阿米巴樣細(xì)胞裂解物測(cè)定)的純化嗜中性白細(xì)胞(～98％嗜中性白細(xì)胞和＞95％活細(xì)胞，根據(jù)臺(tái)盼藍(lán)排除法測(cè)定)通過一步Ficoll-hypaque分離法(A.Ferranter等，J.Immunol.Meth.，36，109(1980))由標(biāo)準(zhǔn)肝素化(10U/ml)靜脈血制得。C.由致敏和刺激人嗜中性白細(xì)胞釋放炎性活性氧物質(zhì)化學(xué)發(fā)光法魯米諾增強(qiáng)化學(xué)發(fā)光法(一種測(cè)量嗜中性白細(xì)胞氧化活性的方法)不僅依賴于超氧化物酶的產(chǎn)生，而且還依賴于溶酶體顆粒酶髓過氧化物酶的活動(dòng)化作用。光由激活嗜中性白細(xì)胞產(chǎn)生的不穩(wěn)定性高能氧物質(zhì)發(fā)射。在搖動(dòng)水浴中，在含有0.1％人血清白蛋白(1ml)、含或不含DWH-146a，DWH-146e，CGS21680，或JMR193、含或不含洛利普利以及含或不含腫瘤壞死因子-α(1U/ml)的Hanks平衡鹽溶液中30℃溫育純化嗜中性白細(xì)胞(5-10×105/ml)30分鐘。然后利用ChronologPhotometer(Crono-log Corp.，Havertown，PA)37℃讀取魯米諾(1×10-4M)增強(qiáng)的f-met-leu-phe(1mcM)刺激化學(xué)發(fā)光2-4小時(shí)。化學(xué)發(fā)光以與含腫瘤壞死因子-α和不含DWH，JMR或洛利普利的樣品比較的相對(duì)發(fā)光峰值(＝曲線高度)報(bào)道。D.結(jié)果如圖2所示，與腺苷A2A受體激動(dòng)劑CGS21680相比，JMR193和DWH-146e都能更有效地降低腫瘤壞死因子-α-致敏f-met-leu-phe-刺激人嗜中性白細(xì)胞氧化活性(根據(jù)魯米諾增強(qiáng)化學(xué)發(fā)光法測(cè)定)。橫軸給出CGS21680，DWH-146a，DWH-146e或JMR193的濃度(log nM)?？v軸給出了與未用腫瘤壞死因子-α致敏的對(duì)照樣品相比以刺激釋放的活性氧物質(zhì)相對(duì)量形式產(chǎn)生的峰值人嗜中性白細(xì)胞活性(根據(jù)魯米諾增強(qiáng)化學(xué)發(fā)光法測(cè)定)。均數(shù)SEM(n＝4-5次獨(dú)立實(shí)驗(yàn))。
圖2橫軸下面的數(shù)據(jù)給出了降低人嗜中性白細(xì)胞活性的EC50(基于圖2中數(shù)據(jù))。均數(shù)SEM(n＝4-5次獨(dú)立實(shí)驗(yàn)).*p＜0.05與CGS21680相比降低的IC50。
JMR193和DWH-146e降低刺激嗜中性白細(xì)胞氧化性爆發(fā)，EC50小于1nM(分別為0.8和0.3nM)。相反，游離酸A2A受體激動(dòng)劑DWH-146a和CGS21680在抑制氧化性爆發(fā)方面不那么有效(分別為53和9nM；圖2)。DWH-146e對(duì)刺激嗜中性白細(xì)胞氧化性爆發(fā)的抑制作用被選擇性A2AAR拮抗劑ZM41385所對(duì)抗。
如圖3所示，JMR193(1nM)與洛利普利(100nM)一起協(xié)同降低活性氧物質(zhì)的刺激釋放。人嗜中性白細(xì)胞用腫瘤壞死抑制-α(1U/ml)致敏，并用f-met-leu-phe(1μM)刺激?？v軸給出了按照魯米諾增強(qiáng)化學(xué)發(fā)光法測(cè)定的氧化活性百分抑制率。均數(shù)SEM(n＝4次獨(dú)立實(shí)驗(yàn)，*p＜0.05，與加合活性相比JMR193同洛利普利之間存在的協(xié)同作用。
如圖4所示，高選擇性A2A腺苷受體拮抗劑ZM241385(100nM)(ZM)抵抗JMR193(10nM)抑制人嗜中性白細(xì)胞氧化活性(根據(jù)魯米諾增強(qiáng)化學(xué)發(fā)光法測(cè)定)。4次獨(dú)立實(shí)驗(yàn)的均數(shù)SEM。*p＝.0004，ZM241385對(duì)抗JMR193抑制氧化活性。E.人嗜中性白細(xì)胞[cAMP]1和嗜中性白細(xì)胞對(duì)生物表面的粘連24孔組織培養(yǎng)板在5％CO2中用人血纖蛋白原(5mg/ml，溶在1.5％碳酸氫鈉中；0.5ml/孔；Sigma Chemical)37℃包被過夜。在包被板孔內(nèi)，在含0.1％ HSA和ADA(1U/ml)以及有或無重組人TNFα(10U/ml)，DWH-146e(3-300nM)，洛利普利(300nM)，和/或ZM241385(100nM)存在的0.5ml HBSS中溫育嗜中性白細(xì)胞(3-4×106/0.5ml/樣品)45分鐘。溫育后，向各孔內(nèi)加入0.5ml HCl(0.2N)，再于室溫下溫育45分鐘以萃取cAMP。然后在microfuge中離心樣品2分鐘除去細(xì)胞碎屑。冷凍0.5ml樣品供cAMP分析用(B.Brooker等，Science，194，270(1976))。各孔用生理鹽水洗滌兩次，殘留單層用0.2 ml0.2N NaOH(含SDS)室溫消化2小時(shí)。然后(-70℃)冷凍蛋白樣品供后面測(cè)定相對(duì)PMN粘連程度的蛋白分析用(K.P.Stowell等，Anal.Biochem.，85，572(1978))。結(jié)果DWH-146e 30-300nM)獨(dú)自以及與洛利普利(300nM)協(xié)同作用能增高人嗜中性白細(xì)胞cAMP含量，并且與洛利普利一起能協(xié)同降低嗜中性白細(xì)胞與血纖蛋白原包被表面的粘連(圖5)。DWH-146e(300nM)+洛利普利(300nM)對(duì)嗜中性白細(xì)胞產(chǎn)生和粘附的作用被選擇性A2A腺苷受體拮抗劑，ZM241385(ZM；100nM)所對(duì)抗。5次獨(dú)立實(shí)驗(yàn)的均數(shù)SEM.*p＜0.05，與無DWH-146e相比增加嗜中性白細(xì)胞[cAMP]；**p＜0.05與無DWH-146e相比減少嗜中性白細(xì)胞粘連。F.粘著性人嗜中性白細(xì)胞氧化活性方法.采用E部分的改良法，將Ficoll-Hypaque分離得到的嗜中性白細(xì)胞(2×106/ml)在含0.1人血清白蛋白和腺苷脫氨酶(1U/ml)、洛利普利(300 nM)以及DWH-146e(3-300nM)的0.45mlHanks平衡鹽溶液中37℃溫育15分鐘。溫育后，在有或無重組人腫瘤壞死因子-α(1U/ml)存在下加入細(xì)胞色素C(120μM)和過氧化氫酶(0.062mg/ml)，取200μl這種細(xì)胞懸液等分液立刻轉(zhuǎn)移到預(yù)先用人血纖蛋白原包被過夜的96孔平底組織培養(yǎng)板孔內(nèi)，一式兩孔。在550nm處讀取樣品的光密度，與匹配的超氧化物岐化酶(200U/ml)樣品比較。G.結(jié)果如圖6所示，對(duì)腫瘤壞死因子-α(TNF)-刺激的粘著性人嗜中性白細(xì)胞在血纖蛋白原包被表面釋放超氧化物的抑制由洛利普利(300nM)和DWH-146e實(shí)現(xiàn)。DWH-146e降低粘著嗜中性白細(xì)胞的氧化性爆發(fā)，并且在洛利普利存在下能協(xié)同降低氧化性爆發(fā)，而洛利普利本身并不影響嗜中性白細(xì)胞的氧化活性。橫軸表示以nM為單位的DWH-146e濃度，縱軸表示按照細(xì)胞色素C減少法測(cè)定的嗜中性白細(xì)胞釋放的超氧化物量。其中DWH-146e與IV型PDE抑制劑-洛利普利-存在著顯著協(xié)同作用，能降低腫瘤壞死因子-α-刺激的粘著性人嗜中性白細(xì)胞的氧化活性。4-5次獨(dú)立實(shí)驗(yàn)平行測(cè)定的均數(shù)SEM。*p＜0.05與無DWH-146e情形相比減少超氧化物釋放；**p＜0.05與存在洛利普利但無DWH-146e的情形相比減少超氧化物釋放。
實(shí)施例18用DWH-146e處理腎臟局部缺血/再灌注(I/R)損傷為了測(cè)定DWH-146e誘導(dǎo)A2A腺苷受體活化是否降低大鼠I/R損傷后24與48小時(shí)時(shí)刻血漿肌酸酐含量，將大鼠腎臟進(jìn)行45分鐘局部缺血和24或48小時(shí)再灌注。在I/R前5小時(shí)利用小型泵開始連續(xù)給藥DWH-146e(0.004μg/kg/min)或賦形劑。如圖7所示，在7/7大鼠(P＜0.05)和用DWH-146e處理的6/6大鼠(p＜0.001)中，分別在24和48小時(shí)時(shí)刻DWH-146e能顯著降低血漿肌酸酐量。
為了確定DWH-146e降低I/R大鼠中血漿肌酸酐含量的作用是否由A2A受體介導(dǎo)，對(duì)大鼠腎臟進(jìn)行45分鐘局部缺血，接著再灌注48小時(shí)。局部缺血前5小時(shí)利用小型泵開始連續(xù)給藥DWH-146e(0.004μg/kg/min)。如圖8所示，腎功能由A2A拮抗劑ZM-241385逆轉(zhuǎn)(0.003μg/kg/min-與DWH-146e相比等摩爾給藥速率)(*P＜0.001，賦形劑-DWH；**P＜0.05 DWH-DWH/ZM.N＝5(賦形劑，DW)；N＝6(DWH/ZM).方差分析接著Bonferroni校正)。
DWH-146e在無血液動(dòng)力作用的濃度下能預(yù)防腎水腫、壞死、紅細(xì)胞在內(nèi)部髓質(zhì)中的匯集。
DWH-146e(0.01μg/kg/min s.c.48小時(shí))提供的腎損傷保護(hù)作用與顯著抑制嗜中性白細(xì)胞粘連血管內(nèi)皮的作用有關(guān)。據(jù)信DWH-146e對(duì)嗜中性白細(xì)胞與血管內(nèi)皮之間相互作用的抑制至少能部分地對(duì)腎損傷產(chǎn)生保護(hù)作用。
為了測(cè)定A2A-AR活化是否會(huì)降低I/R大鼠(采用Neurolucida造成)外髓質(zhì)中嗜中性白細(xì)胞，將腎臟在100×mag下觀察，繪制整個(gè)腎臟圖。通過在250×mag下觀察腎臟部分計(jì)數(shù)PMNs。將腎臟部分覆蓋在光學(xué)支架上，在顯微鏡下觀察，并計(jì)數(shù)每一支架內(nèi)的所有PMNs。該系統(tǒng)能防止不止一次地計(jì)數(shù)PMNs。如圖9所示，對(duì)于賦形劑組嗜中性白細(xì)胞的密度為15.65/mm2，而對(duì)于DWH-146e處理組則為3.02/mm2。
實(shí)施例19.DWH-146e對(duì)肺再灌注損傷的作用A.方法.使用全血灌注、換氣兔離體肺模型。在肺動(dòng)脈PGE1之后收集供體兔的肺，注射并用Euro-Collins防腐液沖洗，4℃保存肺18小時(shí)。第I組肺(n＝9)用作對(duì)照受驗(yàn)者。第II組肺(n＝9)用首先通過濾器排除白細(xì)胞的全血再灌注。在第III組(n＝9)中，在再灌注前立刻將DWH-146e加到血液再灌注液(25μg/kg)內(nèi)，并在再灌注期間始終給藥(1μg/kg/min)。將所有肺都再灌注30分鐘，記錄肺動(dòng)脈壓(PAP)、肺血管阻力(PVR)、氣道順應(yīng)性(CPL)和動(dòng)脈氧合作用。記錄髓過氧化物酶活性(MPO)以測(cè)量嗜中性白細(xì)胞的螯合作用，并測(cè)定濕重/干重比率以證明肺水腫。B.結(jié)果.再灌注30分鐘后第II組和第III組中的動(dòng)脈氧合作用顯著高于第I組(514.27±35.80和461.12±43.77對(duì)91.41±20.58mmHg，p＜0.001。如圖10所示，第III組肺顯示灌注期間pO2逐漸遞增。在第II組肺中，白細(xì)胞的排除改進(jìn)了再灌注早期的動(dòng)脈氧合作用。*p＝0.004(第II組對(duì)第I和第III組)；**p＜0.001(第II和第III組對(duì)第I組)。
如圖11所示，第II組的均數(shù)PVR與對(duì)照組肺相比顯著降低(*p＜0.001)。第III組肺的PVR甚至顯著低于用白細(xì)胞-排除血再灌注的肺(**p＜0.001對(duì)第I和II組)。與第II組和第I組相比(31，057±1743和36，911±2173達(dá)因·s·cm-5，p＜0.001)，第III組的肺血管阻力顯著降低(22，783±357達(dá)因·s·cm-5)。與第I組相比，第II和III組的氣道順應(yīng)性得以改善(1.68±0.08和1.68±0.05對(duì)1.36±0.13，p＝0.03)。與第I組中的165.70±21.83Evans藍(lán)染料/gm組織(p＝0.05)相比，第III組中的微脈管滲透性降低到106.82±17.09。如圖12所示，第III組的髓過氧化物酶活性顯著低于第I組(*p＝0.03)。MPO＝髓過氧化物酶。第III組髓過氧化物酶活性為39.88±4.87，而第I組則為88.70±18.69 ΔOD/gm/min(p＝0.03)，并且第II組的髓過氧化物酶活性為56.06±7.46。C.結(jié)論DWH-146e降低肺嗜中性白細(xì)胞的螯合作用，并能明顯改善肺移植物功能。嗜中性白細(xì)胞是再灌注損傷炎癥級(jí)聯(lián)反應(yīng)的重要成分，并且它們的來源可包括循環(huán)血和肺移植物本身。選擇性腺苷-A2A活化能夠阻斷嗜中性白細(xì)胞介導(dǎo)的炎癥應(yīng)答，并降低移植后的肺再灌注損傷。
在18小時(shí)局部缺血貯存期和30分鐘再灌注后，對(duì)照組第I組的肺在光學(xué)顯微鏡下顯示出嚴(yán)重的白細(xì)胞浸潤，并且在肺泡中形成水腫。而對(duì)于用白細(xì)胞-排除血再灌注的第II組肺和再灌注期間接受DWH-146e的第III組肺，這種浸潤作用則非常低。實(shí)施例20.DWH-146e對(duì)動(dòng)脈損傷后新血管內(nèi)膜形成的影響。釋放炎性細(xì)胞因子的白細(xì)胞活化發(fā)生在經(jīng)皮冠狀動(dòng)脈處置之后，并且起著再狹窄的作用。在小鼠中，在完整內(nèi)皮內(nèi)層存在下的健壯新血管內(nèi)膜形成發(fā)生在普通頸動(dòng)脈結(jié)扎之后。使用該模型，利用滲透泵在頸動(dòng)脈結(jié)扎時(shí)對(duì)C57/BL6小鼠隨機(jī)輸注DWH-146e，(n＝7)，或賦形劑(n＝8)7天。
頸動(dòng)脈結(jié)扎后第14天，組織形態(tài)學(xué)證實(shí)，與對(duì)照組相比處理組中的新血管內(nèi)膜面積(0.005±0.004mm2對(duì)0.021±0.014mm2，p＝0.02)和新血管內(nèi)膜與中層面積比(0.13±0.07對(duì)0.647±0.44，p＝0.01)顯著降低。兩組中的中層面積差不多(0.034±0.007mm2對(duì)0.036±0.009mm2，p＝0.81)。這種限制新血管內(nèi)膜生長(zhǎng)的優(yōu)越作用能持續(xù)28天。圖13概述了DWH-146e在小鼠LCCA模型中抑制新血管內(nèi)膜生長(zhǎng)的作用。這些試驗(yàn)表明在小鼠頸動(dòng)脈結(jié)扎模型中，DWH-146e延長(zhǎng)A2A刺激(7天)能夠顯著降低新血管內(nèi)膜形成至少21天，這可能是其對(duì)白細(xì)胞活化與功能的作用之緣故。
實(shí)施例21.對(duì)內(nèi)毒素刺激人單核細(xì)胞TNFα釋放的抑制。A.材料Ficoll-hypaque購自ICN(Aurora，OH)和Cardinal Scientific(Santa Fe，NM)以及Accurate Chemicals and Scientific(Westerbury，NY)。內(nèi)毒素(脂多糖；大腸桿菌011184)得自ListBiologicals(Campbell，CA).Hanks平衡鹽溶液(HBSS)，和鱟阿米巴樣細(xì)胞裂解物分析試劑盒得自Bio Wittaker(Walkersville，MD)。人血清白蛋白(HSA)得自Cutter Biological(Elkhart，IN)。ZM241385(4-(2-[7-氨基-2-(2-呋喃基)[1，2，4]-三唑并[2，3-a][1，3，5]三嗪-5-基氨基]乙基)苯酚)由Zeneca Pharmaceuticals(Cheshire，UK)的Simon Poucher惠贈(zèng)。貯存液(1mM和10mM的DMSO溶液)自制并在-20℃貯存。B.純化人粘連單核細(xì)胞產(chǎn)TNFα.方法在24孔組織培養(yǎng)板中溫育按照Ficoll-Hypaque分離法(A.Ferrante等，J.Immunol.Meth.，36，109(1980))得到的1ml單核白細(xì)胞部分(5×105/ml)(1小時(shí)；37℃；5％ CO2)，制備單核細(xì)胞富積單層(＞65％單核細(xì)胞)。洗滌除去非粘連白細(xì)胞，向含有粘連單核細(xì)胞的孔內(nèi)加入培養(yǎng)基(1ml Hanks平衡鹽溶液，含0.1％人血清白蛋白，腺苷脫氨酶[5U/ml]和1％熱滅活自體血清)。如本文所述加入下列組分(1)內(nèi)毒素(100ng/ml)和A2AAR選擇性拮抗劑ZM241385(100nM)，和(2)A2A腺苷受體選擇性激動(dòng)劑JMR193(1-1000nM)，DWH146e(1-1000nM)和CGS21680(10-1000nM)。然后溫育樣品4小時(shí)(37℃；5％ CO2)，收集上清液。離心除去任何懸浮細(xì)胞，凍存無細(xì)胞樣品(-70℃)。利用ELISA試劑盒(Coulter/Immunotech，Miami，F(xiàn)L)在無細(xì)胞上清液(n＝6)中測(cè)定TNFα。C.結(jié)果.
如圖10、14所示，A2A腺苷受體激動(dòng)劑能降低內(nèi)毒素刺激粘連單核細(xì)胞產(chǎn)生TNFα。A2AAR選擇性拮抗劑ZM241385(100nM)能拮抗JMR193對(duì)TNFα產(chǎn)生的作用(圖15)。
因此，DWH146e和JMR193通過依賴于激動(dòng)劑與A2A腺苷受體結(jié)合的機(jī)理能夠降低LPS內(nèi)毒素刺激人單核細(xì)胞產(chǎn)生TNFα。實(shí)施例22.DWH-146e在鼠腹膜炎模型中的活性試驗(yàn)性腹膜炎的預(yù)備性試驗(yàn)包括注射作為炎癥強(qiáng)效刺激物的酵母多糖(Zym)(Y.Zhang等，Eur.J.Pharmacol.，313，237(1996))。如圖16所示，注射酵母多糖后，在諾依搏爾氏血細(xì)胞計(jì)數(shù)器中測(cè)定的平均白細(xì)胞濃度為7,325±1,893/mm3。在注射酵母多糖前1小時(shí)，腹膜注射2.5μg/kg劑量DWH-146e能抑制腹膜炎的發(fā)展，其均數(shù)±SEM白細(xì)胞濃度6小時(shí)后為2,012±374/mm3(p＜0.05)。因此，這些研究證明在酵母多糖致敏后，A2AAR有助于介導(dǎo)PMN進(jìn)入腹膜。實(shí)施例23.JMR193的抗炎作用介導(dǎo)的心臟保護(hù)作用通過誘導(dǎo)心肌震顫(myocardial stunning)測(cè)試本發(fā)明化合物，這種心肌震顫是一種發(fā)生于冠狀動(dòng)脈供血重復(fù)閉塞引起重復(fù)、瞬變期斷續(xù)冠狀動(dòng)脈血流之后的心臟損傷。A.閉塞-再灌注循環(huán)四次的作用.
分離一組狗的左側(cè)前下行(LAD)冠動(dòng)脈，并用勒除咬合器環(huán)繞4次共計(jì)5分鐘。每次閉塞后恢復(fù)血流10分鐘。每次閉合期后對(duì)一組狗(6只)灌輸含實(shí)施例15中制備的乙酸酯化合物(JMR193)(0.01μg/kg/min)。對(duì)另一組狗(六只)灌輸含賦形劑(載體)的溶液。在最后一次閉塞-再灌注循環(huán)之后，監(jiān)測(cè)動(dòng)物心肌功能3小時(shí)。
結(jié)果由圖17和18說明。圖17顯示6只對(duì)照組狗的收縮期左心室(LV)加強(qiáng)應(yīng)答情況。最后閉塞后3小時(shí)心肌增強(qiáng)被降低大約50％。圖18顯示接受靜脈輸注試驗(yàn)化合物JMR193(0.01μg/kg/min)的6只狗的LV加強(qiáng)應(yīng)答情況，始于基線期間并繼續(xù)通過整個(gè)試驗(yàn)期。心肌功能(輸注JMR193)早在再灌注后90分鐘就基本上恢復(fù)到正常狀態(tài)。B.閉塞-再灌注循環(huán)十次的作用取另外兩組狗進(jìn)行10次(而不是4次)閉塞-再灌注循環(huán)，其中每次閉塞5分鐘，交替5分鐘再灌注。在本實(shí)施例中，在每次閉塞期后對(duì)兩只動(dòng)物輸注含有實(shí)施例15中制備的乙酸酯化合物(JMR193)(0.01μg/kg/min)的溶液。對(duì)另外三只動(dòng)物輸注含賦形劑(載體)的溶液。最后一次閉塞-再灌注循環(huán)之后，監(jiān)測(cè)動(dòng)物心肌功能3小時(shí)。
結(jié)果由圖19和圖20說明。圖19顯示3只對(duì)照組狗的收縮期左心室加強(qiáng)應(yīng)答情況。與實(shí)施例23A相比，這是一種更嚴(yán)重的心肌損傷，結(jié)果在再灌注后早期LV加強(qiáng)作用就完全不存在，并且保持運(yùn)動(dòng)不能狀態(tài)3小時(shí)。圖20示出接受靜脈輸注試驗(yàn)化合物JMR193(0.01μg/kg/min)的2只狗的LV加強(qiáng)應(yīng)答情況，始于基線期間并繼續(xù)通過整個(gè)試驗(yàn)期。與對(duì)照組相比，接受JMR193輸注的狗在再灌注后立刻顯示出顯著的心肌功能改善，并能持續(xù)3小時(shí)。C.閉塞-再灌注期間乙酸酯化合物JMR193對(duì)嗜中性白細(xì)胞攝取的作用對(duì)一些動(dòng)物給藥放射性標(biāo)記的嗜中性白細(xì)胞。(嗜中性白細(xì)胞自狗血中分離得到，用含99mTc的化合物孵育并再注入狗體內(nèi))。靜脈給藥用作標(biāo)志物的99mTc-標(biāo)記的嗜中性白細(xì)胞以測(cè)定四次局部缺血-再灌注循環(huán)后再灌注區(qū)中炎癥水平。閉塞-再灌注循環(huán)產(chǎn)生的炎癥引起放射性嗜中性白細(xì)胞粘連，用γ-照相機(jī)測(cè)定。JMR193能夠抑制嗜中性白細(xì)胞的粘連。結(jié)果由圖21說明，其中進(jìn)行賦形劑處理的狗體內(nèi)99mTc-標(biāo)記嗜中性白細(xì)胞的定位作用(實(shí)心條)大于JMR193處理的狗(斑紋條)。因此，JMR193輸注引起的中央局部缺血區(qū)中放射性標(biāo)記嗜中性白細(xì)胞的減少說明(*)心肌炎癥減輕。
實(shí)施例23A和23B中描述的研究指出，心肌炎癥在引起心肌震顫方面起著明顯的傷害作用。另外，給藥腺苷A2A受體激動(dòng)劑如JMR-193能預(yù)防輕度震顫(圖17和18)或者能顯著減弱伴有嚴(yán)重震顫作用的心肌機(jī)能障礙(圖19和20)。
所有出版物、專利和專利文獻(xiàn)均可以在此引入用作參考，這種引用就象每篇出版物、專利或?qū)＠墨I(xiàn)單獨(dú)引入用作參考的作用一樣。本發(fā)明已經(jīng)利用各種具體和優(yōu)選的實(shí)施方案與方法進(jìn)行了說明，但應(yīng)當(dāng)理解，在本發(fā)明的主題與范圍之內(nèi)可以對(duì)其作出各種改變與修飾。
權(quán)利要求
1.式(I)化合物或其可藥用鹽 其中(a)每一R各自為氫，C1-6烷基，C3-C7環(huán)烷基，苯基或苯基(C1-C3)-烷基；(b)X為-CH2OH，-CO2R2，-OC(O)R2或C(O)NR3R4；(c)R2，R3和R4中的每一個(gè)各自為H，C1-6烷基；被1-3個(gè)C1-6烷氧基、C3-C7環(huán)烷基、C1-6烷硫基、鹵素、羥基、氨基、單(C1-6烷基)氨基、二(C1-6烷基)氨基、或C6-C10-芳基取代的C1-6烷基，其中的芳基可以被1-3個(gè)鹵素、C1-6烷基、羥基、氨基、單(C1-6烷基)氨基、或二(C1-6烷基)氨基取代；C6-C10-芳基；或被1-3個(gè)鹵素、羥基、氨基、單(C1-6烷基)氨基、二(C1-6烷基)氨基、或C1-6烷基取代的C6-10芳基；(d)R1為(X-(Z)-)n[(C3-C10)環(huán)烷基]-(Z′)-，其中Z和Z′各自為任選被1-3個(gè)S或非過氧O間斷的(C1-C6)烷基，或者不存在，并且n為1-3。
2.權(quán)利要求1的化合物，其中X為-CH2OH或-C(O)NR3R4。
3.權(quán)利要求2的化合物，其中R3為H，并且R4為(C1-C4)烷基。
4.權(quán)利要求1的化合物，其中每一R為H或(C1-C4)烷基。
5.權(quán)利要求1的化合物，其中Z′為-CH2-或-CH2-CH2-。
6.權(quán)利要求5的化合物，其中Z為-CH2-或-CH2-CH2-。
7.權(quán)利要求1的化合物，其中R1包括環(huán)己基或環(huán)戊基。
8.權(quán)利要求7的化合物，其中X為(C1-C4)烷氧基羰基，C(O)NR3R4或乙酰氧基甲基。
9.權(quán)利要求7的化合物，其中X為羧基。
10.權(quán)利要求7的化合物，其X-Z與Z′呈反式。
11.權(quán)利要求1的化合物，其中R為H，X為乙基氨基羰基，并且R1為2-(4-甲氧基羰基-環(huán)己基甲基)乙炔基或2-(4-羧基環(huán)己基甲基)乙炔基。
12.權(quán)利要求1的化合物，其中R為H，X為乙基氨基羰基，且R1為2-(4-乙酰氧基甲基-環(huán)己基甲基)乙炔基。
13.乙酸[4-(3-{9-(4S，5S，2R，3R)-5-(N-乙基氨基甲?；?-3，4-二羥基氧雜戊環(huán)-2-基]-6-氨基嘌呤-2-基}丙-2-炔基)環(huán)己基]甲基酯。
14.[(2S，3S，4R，5R)-5-(6-氨基-2-{3-[4-(羥甲基)環(huán)己基]丙-2-炔基}嘌呤-9-基)-3，4-二羥基氧雜戊環(huán)-2-基]-N-乙基甲酰胺。
15.4-(3-{9-[(4S，5S，2R，3R)-5-(N-乙基氨基甲?；?-3，4-二羥基氧雜戊環(huán)-2-基]-6-氨基嘌呤-2-基)}丙-2-炔基)環(huán)己烷羧酸甲酯。
16.4-(3-{9-[(4S，5S，2R，3R)-5-(N-乙基氨基甲酰基)-3，4-二羥基氧雜戊環(huán)-2-基]-6-氨基嘌呤-2-基)}丙-2-炔基)環(huán)己烷羧酸。
17.用于醫(yī)學(xué)治療的式(I)化合物或其可藥用鹽 其中(a)每一R各自為氫，C1-6烷基，C3-C7環(huán)烷基，苯基或苯基(C1-C3)-烷基；(b)X為-CH2OH，-CO2R2，-OC(O)R2或C(O)NR3R4；(c)R2，R3和R4中的每一個(gè)各自為H，C1-6烷基；被1-3個(gè)C1-6烷氧基、C3-C7環(huán)烷基、C1-6烷硫基、鹵素、羥基、氨基、單(C1-6烷基)氨基、二(C1-6烷基)氨基、或C6-C10-芳基取代的C1-6烷基，其中的芳基可以被1-3個(gè)鹵素、C1-6烷基、羥基、氨基、單(C1-6烷基)氨基、或二(C1-6烷基)氨基取代；C6-C10-芳基；或被1-3個(gè)鹵素、羥基、氨基、單(C1-6烷基)氨基、二(C1-6烷基)氨基、或C1-6烷基取代的C6-10芳基；(d)R3和R4中的每一個(gè)各自為氫，C3-7-環(huán)烷基，或R2的任何含義；和(e)R1為(X-(Z)-)n[(C3-C10)環(huán)烷基]-(Z′)-，其中Z和Z′各自為任選被1-3個(gè)S或非過氧O間斷的(C1-C6)烷基，或者不存在，并且n為1-3。
18.權(quán)利要求1-16中任一項(xiàng)的化合物，其中的醫(yī)學(xué)治療是抑制炎癥應(yīng)答。
19.權(quán)利要求17的化合物，其中X為-CH2OH或-C(O)NR3R4。
20.權(quán)利要求19的化合物，其中R3為H，并且R4為(C1-C4)烷基。
21.權(quán)利要求17的化合物，其中每一R為H或(C1-C4)烷基。
22.權(quán)利要求17的化合物，其中Z′為-CH2-或-CH2-CH2-。
23.權(quán)利要求17的化合物，其中Z為-CH2-或-CH2-CH2-。
24.權(quán)利要求17的化合物，其中R1包括環(huán)己基或環(huán)戊基。
25.權(quán)利要求24的化合物，其中X為(C1-C4)烷氧基羰基或乙酰氧基甲基。
26.權(quán)利要求24的化合物，其中X為羧基。
27.權(quán)利要求24的化合物，其X-Z與Z′呈反式。
28.權(quán)利要求17的化合物，其中R為H，X為乙基氨基羰基，并且R′(R1)為2-(4-甲氧基羰基-環(huán)己基甲基)乙炔基或2-(4-羧基環(huán)己基甲基)乙炔基。
29.權(quán)利要求17的化合物，其中R為H，X為乙基氨基羰基，且R2(R1)為2-(4-乙酰氧基甲基-環(huán)己基甲基)乙炔基。
30.權(quán)利要求17的化合物，它為乙酸[4-(3-{9-(4S，5S，2R，3R)-5-(N-乙基氨基甲?；?-3，4-二羥基氧雜戊環(huán)-2-基]-6-氨基嘌呤-2-基}丙-2-炔基)環(huán)己基]甲基酯。
31.權(quán)利要求17的化合物，它為[(2S，3S，4R，5R)-5-(6-氨基-2-{3-[4-(羥甲基)環(huán)己基]丙-2-炔基}嘌呤-9-基)-3，4-二羥基氧雜戊環(huán)-2-基]-N-乙基甲酰胺。
32.權(quán)利要求17的化合物，它為4-(3-{9-[(4S，5S，2R，3R)-5-(N-乙基氨基甲?；?-3，4-二羥基氧雜戊環(huán)-2-基]-6-氨基嘌呤-2-基)}丙-2-炔基)環(huán)己烷羧酸甲酯。
33.權(quán)利要求17的化合物，它為4-(3-{9-[(4S，5S，2R，3R)-5-(N-乙基氨基甲?；?-3，4-二羥基氧雜戊環(huán)-2-基]-6-氨基嘌呤-2-基)}丙-2-炔基)環(huán)己烷羧酸。
34.權(quán)利要求17的化合物，其中的醫(yī)學(xué)治療進(jìn)一步包括使用IV型磷酸二酯酶抑制劑。
35.權(quán)利要求17的化合物，其中的抑制劑為洛利普利。
36.權(quán)利要求18的化合物，其中的炎癥應(yīng)答是由于局部缺血引起。
37.權(quán)利要求18的化合物，其中的炎癥應(yīng)答是由于動(dòng)脈粥樣硬化引起。
38.權(quán)利要求18的化合物，其中的炎癥應(yīng)答是由于自身免疫病引起。
39.權(quán)利要求18的化合物，其中的炎癥應(yīng)答是由于局部缺血/再灌注損傷引起。
40.權(quán)利要求18的化合物，其中的炎癥應(yīng)答發(fā)生于心臟、腎臟或肺。
41.權(quán)利要求18的化合物，其中的炎癥應(yīng)答是由于中風(fēng)、外傷性腦損傷或脊髓損傷引起。
42.權(quán)利要求18的化合物，其中的炎癥應(yīng)答是由于器官、組織或細(xì)胞移植引起。
43.權(quán)利要求18的化合物，其中的炎癥應(yīng)答是由于感染引起。
44.權(quán)利要求18的化合物，其中的炎癥應(yīng)答是由于皮膚病引起。
45.權(quán)利要求18的化合物，其中的炎癥應(yīng)答是由于血管成形術(shù)、移植片固定模放置、分路放置或移植引起。
46.權(quán)利要求18的化合物，其中的炎癥應(yīng)答是由于變應(yīng)性疾病引起。
47.權(quán)利要求18的化合物，其中的炎癥應(yīng)答是由于消耗病引起。
48.權(quán)利要求18的化合物，其中的炎癥應(yīng)答是由于免疫抑制治療引起。
49.權(quán)利要求1-16的化合物在制備用于治療炎癥應(yīng)答的藥物方面的用途。
50.權(quán)利要求49的用途，其中的藥物包括IV型磷酸二酯酶抑制劑。
51.權(quán)利要求50的用途，其中的磷酸二酯酶抑制劑為洛利普利。
52.權(quán)利要求50的用途，其中的藥物包括液體載體。
53.權(quán)利要求50的用途，其中的藥物適于非腸道給藥。
全文摘要
本發(fā)明提供了與某些A2a腺苷受體拮抗劑一起用于治療炎癥性疾病的式(I)化合物及方法。
文檔編號(hào)A61P11/00GK1357002SQ00805509
公開日2002年7月3日 申請(qǐng)日期2000年1月31日 優(yōu)先權(quán)日1999年2月1日
發(fā)明者J·M·林登, G·W·沙利文, I·J·薩雷姆波克, T·麥唐納德, M·奧庫薩, I·L·克倫, W·M·謝爾德 申請(qǐng)人:弗吉尼亞大學(xué)專利基金會(huì)