22~26小時(shí)。
[0121] 生產(chǎn)用發(fā)酵劑一2的制備中，發(fā)酵可以在需氧或厭氧中的任一氣氛下進(jìn)行，但從制 備成本的減少、操作簡便性等觀點(diǎn)考慮，優(yōu)選在需氧氣氛下進(jìn)行。
[0122] 另外，在生產(chǎn)用發(fā)酵劑一2的制備中，對(duì)于發(fā)酵中的pH沒有特別限定，但例如優(yōu)選 維持為PH4.6以上，優(yōu)選為5.0~7.0，更優(yōu)選為5.5~6.5。通過如上所述維持pH，可以在不破 壞雌馬酚產(chǎn)生能力的情況下使雌馬酚產(chǎn)生微生物增殖。上述發(fā)酵中的PH控制，可以利用與 上述步驟(1)同樣的方法進(jìn)行。
[0123] 生產(chǎn)用發(fā)酵劑一2可以直接供給到接下來的主發(fā)酵中，根據(jù)需要，也可以使用生產(chǎn) 用發(fā)酵劑一 2作為發(fā)酵劑（1次生產(chǎn)用發(fā)酵劑），在與制備生產(chǎn)用發(fā)酵劑一 2時(shí)的條件相同的 條件下再次實(shí)施發(fā)酵，制備2次生產(chǎn)用發(fā)酵劑，將該2次生產(chǎn)用發(fā)酵劑供給到接下來的主發(fā) 酵中。
[0124] 本步驟（II)中使用的主發(fā)酵用培養(yǎng)基一2以含有上述黃豆苷原類及乳、雌馬酚產(chǎn) 生微生物可以生長、且允許作為食品成分為限，沒有特別的限定。
[0125] 主發(fā)酵用培養(yǎng)基一 2使用的黃豆苷原類與上述第1法的母發(fā)酵劑用培養(yǎng)基一 1中使 用的黃豆苷原類相同，但該第2法的制備方法中，從穩(wěn)定地維持雌馬酚產(chǎn)生微生物的雌馬酚 產(chǎn)生能力的觀點(diǎn)考慮，優(yōu)選為大豆胚軸或其提取物，特別優(yōu)選為大豆胚軸的提取物。
[0126] 主發(fā)酵用培養(yǎng)基一 2中配合的上述黃豆苷原類的配合比例與上述母發(fā)酵劑培養(yǎng) 基一 2相同。
[0127] 另外，作為主發(fā)酵用培養(yǎng)基一2中使用的乳，只要是允許作為食品的乳即可，例如 可以舉出牛奶、山羊奶、羊奶等動(dòng)物奶;脫脂奶;將脫脂奶粉或全奶粉溶解所得的復(fù)原乳等。
[0128] 另外，主發(fā)酵用培養(yǎng)基一2中，為了改善制備的發(fā)酵物的味道，主發(fā)酵用培養(yǎng)基一2 中可以含有新鮮奶油、黃油等乳脂肪含有成分。作為上述乳脂肪含有成分的配合比例，換算 成乳脂肪的量，可以舉出通常為〇. 1~4.5重量％，優(yōu)選為0.5~4.2重量％，更優(yōu)選為1.0~ 3.5重量％。
[0129] 另外，主發(fā)酵用培養(yǎng)基一2中，除上述成分之外可以配合的添加成分的種類及配合 比例與上述母發(fā)酵劑培養(yǎng)基一 2相同。需要說明的是，為了穩(wěn)定地維持雌馬酚產(chǎn)生微生物的 雌馬酚產(chǎn)生能力，主發(fā)酵用培養(yǎng)基一2中也優(yōu)選含有來自酵母的成分，特別是酵母提取物。
[0130] 主發(fā)酵用培養(yǎng)基一 2通過混合規(guī)定量的乳、上述黃豆苷原類、及根據(jù)需要的其他添 加成分，根據(jù)需要使其乳化，然后進(jìn)行殺菌處理而制備。
[0131 ] 本步驟(II)中的主發(fā)酵可以如下進(jìn)行：向主發(fā)酵用培養(yǎng)基一2中添加例如約1~10 容量％、優(yōu)選約1~5容量％上述步驟(1)中得到的母發(fā)酵劑一2或上述生產(chǎn)用發(fā)酵劑一2，在 該微生物可以生長的溫度區(qū)域、優(yōu)選在該微生物的最佳溫度區(qū)域內(nèi)攪拌或靜置20~28小 時(shí)、優(yōu)選為22~26小時(shí)。更具體而言，使用乳酸菌作為雌馬酚產(chǎn)生微生物時(shí)，可以在35~39 °C下發(fā)酵22~26小時(shí)。
[0132] 本步驟(II)中的主發(fā)酵可以在需氧或厭氧中的任一氣氛下進(jìn)行，但從制備成本的 減少、操作簡便性等觀點(diǎn)考慮，優(yōu)選在需氧氣氛下進(jìn)行。
[0133] 另外，在本步驟(II)中的主發(fā)酵中，維持發(fā)酵中的pH為4.6以上，優(yōu)選為5.0~7.0， 更優(yōu)選為5.5~6.5。通過如上所述維持pH，可以在不破壞雌馬酚產(chǎn)生能力的情況下使雌馬 酚產(chǎn)生微生物增殖，且制備后也能夠穩(wěn)定地維持該微生物的雌馬酚產(chǎn)生能力。上述發(fā)酵中 的PH的控制可以通過與上述步驟(1)相同的方法進(jìn)行。
[0134] 本第2法的制備方法中，制備發(fā)酵乳作為發(fā)酵物。在該發(fā)酵物中以不喪失雌馬酚產(chǎn) 生能力的活菌狀態(tài)含有雌馬酚產(chǎn)生微生物。
[0135] 3.發(fā)酵制品
[0136] 進(jìn)而，本發(fā)明提供一種含有使用上述第1法及第2法得到的發(fā)酵物的發(fā)酵制品。即， 使用上述第1法及第2法得到的發(fā)酵物，可以直接或根據(jù)需要配合下述的添加成分并作為發(fā) 酵制品被提供，所述添加成分例如為蔗糖、三氯蔗糖、甜菊等甜味劑;咖啡提取物、紅茶提取 物等調(diào)味劑;香料;大豆粉末、大豆片、果汁、水果片、蔬菜汁、蔬菜片等來自植物的成分;鈉、 鉀、鈣、鋅、鐵等金屬;抗壞血酸等維生素;膠凝劑;葡糖酸等穩(wěn)定劑;水等稀釋劑等。特別優(yōu) 選提供上述第1法中得到的發(fā)酵物作為與含有大豆粉末的水溶液混合所得的發(fā)酵制品。
[0137] 在主發(fā)酵制品中，對(duì)于利用上述第1法及第2法得到的發(fā)酵物的配合比例沒有特別 限定，可以舉出例如為5~100重量％，優(yōu)選為10~100重量％。
[0138] 對(duì)于主發(fā)酵制品的pH沒有特別限定。例如，重視長期穩(wěn)定地維持發(fā)酵制品中的雌 馬酚產(chǎn)生微生物的雌馬酚產(chǎn)生能力時(shí)，優(yōu)選將pH調(diào)節(jié)為4.6以上，優(yōu)選為5.0~7.0，更優(yōu)選 為5.5~6.5。另一方面，由于擔(dān)心在中性區(qū)域中雜菌繁殖而重視抑制雜菌繁殖時(shí)，優(yōu)選將pH 調(diào)節(jié)為5.0以下，優(yōu)選為4.0~4.8,更優(yōu)選為4.2~4.6。
[0139] 主發(fā)酵制品的形態(tài)根據(jù)制備時(shí)使用的主發(fā)酵培養(yǎng)基的種類、采用上述第1法或第2 法得到的發(fā)酵物的種類、發(fā)酵物中配合的添加成分的種類等確定，可以為液態(tài)、半固態(tài)、固 態(tài)、凝膠狀中的任一種。作為主發(fā)酵制品形態(tài)的優(yōu)選例，可以舉出發(fā)酵大豆飲料和食品、發(fā) 酵豆?jié){飲料和食品、發(fā)酵乳等。此處，發(fā)酵乳中包括酸奶(硬型、軟型、飲料型）、乳酸菌飲料 等。
[0140] 由于主發(fā)酵制品中以活菌的狀態(tài)含有雌馬酚產(chǎn)生微生物，因此優(yōu)選在低溫下流 通、銷售。
[0141]由于主發(fā)酵制品以活菌的狀態(tài)含有維持了雌馬酚產(chǎn)生能力的雌馬酚產(chǎn)生微生物， 所以能夠?qū)崿F(xiàn)基于該微生物的各種生理活性和藥理活性。因此，除一般的飲料和食品之外， 主發(fā)酵制品還能夠用作特定保健用飲料和食品、營養(yǎng)補(bǔ)充飲料和食品、功能性飲料和食品、 病人用飲料和食品等。
[0142]例如，主發(fā)酵制品被攝取，在腸內(nèi)可以通過雌馬酚產(chǎn)生微生物的作用生成雌馬酚， 可以有效地享有基于雌馬酚的生理活性，因此在以下的用途中有用:例如更年期障礙、骨質(zhì) 疏松癥、前列腺增生、代謝癥候群等疾病和癥狀的預(yù)防或改善、血中膽固醇值的降低、美白、 痤瘡的改善、調(diào)整腸道、改善肥胖及利尿等。其中，主發(fā)酵制品對(duì)中老年女性中的癥狀不定 的自訴或絕經(jīng)伴有的癥狀(例如骨質(zhì)疏松癥、更年期障礙等)的預(yù)防或改善特別有用。
[0143] 主發(fā)酵乳制品的每日的攝取量根據(jù)主發(fā)酵乳制品中的雌馬酚產(chǎn)生微生物的菌數(shù)、 攝取者的年齡和體重、攝取次數(shù)等而不同，例如，作為成人每1日的攝取量，可以舉出相當(dāng)于 主發(fā)酵制品10~500g的量。
[0144] 4.含有雌馬酚產(chǎn)生微生物的組合物
[0145] 通過向以活菌的狀態(tài)含有雌馬酚產(chǎn)生微生物的組合物中添加選自抗壞血酸、其衍 生物、及它們的鹽中的至少1種，在低PH條件或需氧保存條件下也可以穩(wěn)定地保持雌馬酚產(chǎn) 生微生物的雌馬酚產(chǎn)生能力，即使長期保存，也可以抑制該組合物中雌馬酚產(chǎn)生微生物的 雌馬酚產(chǎn)生能力的喪失。因此，本發(fā)明進(jìn)而提供了一種含有雌馬酚產(chǎn)生微生物的組合物（以 下有時(shí)也簡單記作"本組合物"），所述組合物含有活菌狀態(tài)的雌馬酚產(chǎn)生微生物（以下有時(shí) 也簡單記作"(A)成分"）以及選自抗壞血酸、其衍生物及它們的鹽中的至少1種（以下有時(shí)也 簡單記作"(B)成分"）。
[0146] 本組合物中，作為雌馬酚產(chǎn)生微生物，可以使用分離或粗精制的雌馬酚產(chǎn)生微生 物的活菌，或者也可以使用利用雌馬酚產(chǎn)生微生物使其發(fā)酵所得的發(fā)酵物。
[0147] 本組合物中含有的雌馬酚產(chǎn)生微生物的濃度沒有特別限定，作為一個(gè)例子可以舉 出為I X IO5~101()CFU/g，優(yōu)選為I X IO6~101()CFU/g，更優(yōu)選為I X IO7~101()CFU/g。
[0148] 為了穩(wěn)定地保持雌馬酚產(chǎn)生微生物的雌馬酚產(chǎn)生能力，在本組合物中配合(B)成 分。（B)成分中，關(guān)于抗壞血酸的衍生物沒有特別的限定，只要為通過酯鍵或醚鍵鍵合有取 代基、且允許作為食品成分的衍生物即可，作為具體例，可以舉出抗壞血酸一2,6 -二棕櫚 酸酯、抗壞血酸一 6 -硬脂酸酯、抗壞血酸一 2 -磷酸酯、抗壞血酸一 2 -硫酸酯、抗壞血酸一 2 -葡糖苷、抗壞血酸葡糖胺、抗壞血酸一 6-棕櫚酸酯、L 一抗壞血酸四異棕櫚酸酯、抗壞血 酸四2 -己基癸酸酯等。另外，作為抗壞血酸及它的衍生物的鹽沒有特別限定，只要允許作 為食品成分即可，例如可以舉出鈉等堿金屬鹽。（B)成分中，作為優(yōu)選例可以舉出抗壞血酸 及其鹽。本組合物中，（B)成分可以單獨(dú)使用1種，也可以組合2種以上進(jìn)行使用。
[0149] 作為本組合物中的上述(B)成分的配合比例，可以舉出通常為0.05~5重量％，優(yōu) 選為0.05~2重量％，更優(yōu)選為0.1~2.0重量％。通過滿足上述的配合比例，可以穩(wěn)定地保 持雌馬酚產(chǎn)生微生物的雌馬酚產(chǎn)生能力。
[0150] 關(guān)于本組合物的pH沒有特別限定，可以根據(jù)本組合物的種類等適當(dāng)設(shè)定。從抑制 本組合物中雜菌繁殖的觀點(diǎn)考慮，優(yōu)選將pH調(diào)節(jié)為5.0以下，優(yōu)選為4.0~4.8，更優(yōu)選為4.2 ~4.6是理想的。通常，雌馬酚產(chǎn)生微生物在pH5.0以下的環(huán)境下，喪失雌馬酚產(chǎn)生能力的傾 向變強(qiáng)，不能穩(wěn)定地維持雌馬酚產(chǎn)生能力，但根據(jù)本組合物，通過抗壞血酸及/或其衍生物 的作用，即使在PH5.0以下的條件下，也可以穩(wěn)定地維持雌馬酚產(chǎn)生微生物的雌馬酚產(chǎn)生能 力。
[0151] 本組合物中，根據(jù)需要可以含有下述添加成分:蔗糖、三氯蔗糖、甜菊等甜味劑;咖 啡提取物、紅茶提取物等調(diào)味劑；香料；果汁、水果片、蔬菜汁、蔬菜片等來自植物的成分； 鈉、鉀、鈣、鋅、鐵等金屬;β-胡蘿卜素等維生素;膠凝劑;葡糖酸等穩(wěn)定劑;水等稀釋劑等。此 處，為了不損害保存穩(wěn)定性，本組合物中配合的添加成分優(yōu)選為不被雌馬酚產(chǎn)生微生物同 化的物質(zhì)。
[0152] 關(guān)于本組合物的形態(tài)也沒有特別限制，可以為液態(tài)、半固態(tài)、固態(tài)、凝膠狀等中的 任一種。
[0153] 作為本組合物的優(yōu)選形態(tài)，可以舉出在利用雌馬酚產(chǎn)生微生物進(jìn)行發(fā)酵所得的發(fā) 酵物中配合抗壞血酸及/或其衍生物、并且根據(jù)需要配合了其他添加成分所得的發(fā)酵制品。 此處，作為利用雌馬酚產(chǎn)生微生物進(jìn)行發(fā)酵所得的發(fā)酵物，可以優(yōu)選舉出通過上述第1法及 第2法制備的發(fā)酵物。另外，作為該發(fā)酵制品，具體而言，可以舉出發(fā)酵大豆飲料和食品、發(fā) 酵豆?jié){飲料和食品、發(fā)酵乳等。此處，發(fā)酵乳中包括酸奶(硬型、軟型、飲料型）、乳酸菌飲料 等。上述的發(fā)酵制品中，可以優(yōu)選舉出發(fā)酵大豆飲料和食品及發(fā)酵豆?jié){飲料和食品，更優(yōu)選 舉出發(fā)酵大豆飲料和食品。
[0154] 另外，作為本組合物的其他優(yōu)選形態(tài)，可以舉出含有分離或粗精制的雌馬酚產(chǎn)生 微生物的活菌、抗壞血酸及/或其衍生物、可食用載體及根據(jù)需要添加的其他添加成分的組 合物。此處，作為可食用的載體，例如可以舉出含有大豆粉末的水溶液、豆?jié){、水、可食用凝 膠、乳、各種鹽溶液等。
[0155] 由于本組合物中以活菌的狀態(tài)含有雌馬酚產(chǎn)生微生物，所以優(yōu)選在低溫下流通、 銷售。
[0156] 由于本組合物以作為活菌且維持了雌馬酚產(chǎn)生能力的狀態(tài)含有雌馬酚產(chǎn)生微生 物，所以可以實(shí)現(xiàn)基于該微生物的各種生理活性和藥理活性。因此，本組合物可以在藥物或 飲料和食品的領(lǐng)域中使用。
[0157] 在飲料和食品領(lǐng)域中使用本組合物時(shí)，除一般的飲料和食品之外，本組合物還可 以作為特定保健用飲料和食品、營養(yǎng)補(bǔ)充飲料和食品、功能性飲料和食品、病人用飲料和食 品等被提供。
[0158] 例如，本組合物被攝取，可以在腸內(nèi)通過雌馬酚產(chǎn)生微生物的作用生成雌馬酚，可 以使人們有效地享受基于雌馬酚的生理活性和藥理活性，因此在藥物或飲料和食品的領(lǐng)域 中，優(yōu)選用于尋求享受雌馬酚作用的人。具體而言，本組合物在下述用途中有用：例如更年 期障礙、骨質(zhì)疏松癥、前列腺增生、代謝癥候群等疾病和癥狀的預(yù)防或改善;血中膽固醇值 的降低;美白；痤瘡的改善；調(diào)整腸道;改善肥胖及利尿等。其中，本組合物對(duì)中老年女性中 的癥狀不定的自訴或絕經(jīng)伴有的癥狀(例如骨質(zhì)疏松癥、更年期障礙等)的預(yù)防或改善特別 有用。
[0159] 關(guān)于本組合物的每1日的攝取量，根據(jù)本組合物中的雌馬酚產(chǎn)生微生物的菌數(shù)、攝 取者的年齡或體重、攝取次數(shù)等而不同，例如作為成人每1日的攝取量，可以