含有維持了雌馬酚產(chǎn)生能力的雌馬酚產(chǎn)生微生物的發(fā)酵制品及其制備方法
【專利說(shuō)明】含有維持了雌馬酚產(chǎn)生能力的雌馬酚產(chǎn)生微生物的發(fā)酵制品 及其制備方法
[0001]本申請(qǐng)是申請(qǐng)日為2009年9月18日、發(fā)明名稱為"含有維持了雌馬酚產(chǎn)生能力的雌 馬酚產(chǎn)生微生物的發(fā)酵制品及其制備方法"的中國(guó)發(fā)明專利申請(qǐng)200980136848.4 (國(guó)際申 請(qǐng)?zhí)枮镻CT/JP2009/066413)的分案申請(qǐng)。
技術(shù)領(lǐng)域
[0002] 本發(fā)明涉及一種以活菌的狀態(tài)含有維持了雌馬酚(equol)產(chǎn)生能力的雌馬酚產(chǎn)生 微生物的發(fā)酵制品及其制備方法。本發(fā)明還涉及一種組合物，所述組合物含有活菌狀態(tài)的 雌馬酚產(chǎn)生微生物、且在保存后也能夠穩(wěn)定地維持該微生物的雌馬酚產(chǎn)生能力。
【背景技術(shù)】
[0003] 大豆中含有的異黃酮（大豆異黃酮；黃豆苷原（daidzein)、染料木黃酮 (861^8〖6；[11)、黃豆黃素(8170；^6；[11))與雌二醇結(jié)構(gòu)類似，具有隨著與雌激素受體（以下記 作ER)的結(jié)合而產(chǎn)生的抗雌激素作用及雌激素樣作用。迄今為止，大豆異黃酮的流行病學(xué)研 究和介入研究提示了利用抗雌激素作用得到的乳癌、前列腺癌等激素依賴性癌的預(yù)防效 果，或利用雌激素樣作用得到的更年期障礙、絕經(jīng)后的骨質(zhì)疏松癥、高血脂癥的改善效果。
[0004] 近年，指出了上述大豆異黃酮的生理作用的活性本體可能是黃豆苷原的代謝物雌 馬酚。即，報(bào)道了與大豆異黃酮相比，雌馬酚與ER的結(jié)合能力(特別是與ERP的結(jié)合)強(qiáng)，向乳 房和前列腺組織等目標(biāo)臟器的移行性非常高(參見(jiàn)非專利文獻(xiàn)1 一 4)。另外報(bào)道了在患者一 對(duì)照研究中，乳癌、前列腺癌患者中雌馬酚產(chǎn)生者顯著少，還報(bào)道了分成雌馬酚產(chǎn)生者和非 產(chǎn)生者兩組解析大豆異黃酮對(duì)絕經(jīng)后的骨密度、脂質(zhì)代謝的改善效果時(shí)，雌馬酚產(chǎn)生者中 顯著被改善。
[0005] 雌馬酚由黃豆苷原經(jīng)腸內(nèi)細(xì)菌的代謝而產(chǎn)生，但是報(bào)道了雌馬酚產(chǎn)生能力具有個(gè) 體差異，日本人的雌馬酚產(chǎn)生者的比例約為50%。即，日本人中有約50%不能產(chǎn)生雌馬酚 (雌馬酚非產(chǎn)生者），在這些人中，即使攝取大豆或大豆加工食品，也無(wú)法享受基于雌馬酚的 作用的有用的生理效果。因此認(rèn)為：為了使雌馬酚非產(chǎn)生者呈現(xiàn)基于雌馬酚的作用的有用 生理效果，使其攝取活菌狀態(tài)下的雌馬酚產(chǎn)生微生物是有效的。
[0006] 另一方面，已經(jīng)公知雌馬酚產(chǎn)生微生物，例如，由本發(fā)明人等從人的腸內(nèi)分離出了 擬桿菌E - 23-15(FERM BP - 6435號(hào)）、鏈球菌E - 23-17(FERM BP - 6436號(hào)）、鏈球菌 A6G225(FERM BP - 6437號(hào)）及乳球菌20 - 92(FERM BP -10036號(hào)）（參見(jiàn)專利文獻(xiàn)1 及2)。
[0007] 因此，認(rèn)為如果能夠提供以活菌的狀態(tài)含有雌馬酚產(chǎn)生微生物的發(fā)酵制品，則可 以攝取雌馬酚產(chǎn)生微生物，能夠享受基于雌馬酚產(chǎn)生微生物的有用效果。但是，存在下述問(wèn) 題:使用雌馬酚產(chǎn)生微生物、按照通常的方法制備發(fā)酵制品時(shí)，該微生物的雌馬酚產(chǎn)生能力 喪失，不能得到以活菌的狀態(tài)含有雌馬酚產(chǎn)生微生物的發(fā)酵制品。進(jìn)而，還存在下述問(wèn)題： 雌馬酚產(chǎn)生微生物由于低PH條件或需氧保存等，雌馬酚產(chǎn)生能力容易喪失的傾向強(qiáng)，所以 即使能夠制造維持了該微生物的雌馬酚產(chǎn)生能力的發(fā)酵制品，也不能耐受保存，在流通階 段雌馬酚產(chǎn)生能力被破壞。
[0008] 以上述的現(xiàn)有技術(shù)作為背景，期望開發(fā)以活菌的狀態(tài)含有維持了雌馬酚產(chǎn)生能力 的微生物的發(fā)酵制品。
[0009] 專利文獻(xiàn)1:國(guó)際公開第99/007392號(hào)說(shuō)明書 [0010] 專利文獻(xiàn)2:國(guó)際公開第2005/000042號(hào)說(shuō)明書
[0011] 非專利文獻(xiàn)I :Morito K，HiroseT，Kinjo J，Hirakawa T，0kawa M，Nohara T， Ogawa S，Inoue SjMuramatsu MjMasamune Y. Interaction of phytoestrogens with estrogen receptors a and β.Β?οΙ Pharm Bull 24(4):351-356,2001
[0012] 非專利文獻(xiàn)2:Maubach J，Bracke ME，Heyerick A，Depypere HT，Serreyn RF, Mareel MMjKeukeleire DD.Quantitation of soy -derived phytoestrogens in human breast tissue and biological fluids by high-performance liquid chromatography.J Chromatography B 784:137-144,2003
[0013] 非專利文獻(xiàn)3:Morton MS，Chan PSF，Cheng C，Blacklock N，Matos-Ferreira A， Abranches-Monteiro LjCorreia RjLloyd SjGriffiths K.Lignans and isoflavonoids in plasma and prostatic fluid in men:Samples from Portugal，Hong Kong，and the United Kingdom.Prostate 32:122 - 128,1997
[0014] 非專利文獻(xiàn) 4: Tammy EH ,Paul DM ,Paul GF ,Robert D ,Stephen B ,Kenneth J，Ray MjLorraine GOjKristiina WjHolly MSjKaren JG.Long-term dietary habits affect soy isoflavone metabolism and accumulation in prostatic fluid in Caucasian men.J Nutr 135:1400-1406,2005

【發(fā)明內(nèi)容】

[0015] 因此，本發(fā)明的目的在于提供一種以活菌的狀態(tài)含有維持了雌馬酚產(chǎn)生能力的雌 馬酚產(chǎn)生微生物的發(fā)酵制品。另外，本發(fā)明的另一個(gè)目的在于提供一種含有雌馬酚產(chǎn)生微 生物的組合物，所述組合物以活菌的狀態(tài)含有維持了雌馬酚產(chǎn)生能力的雌馬酚產(chǎn)生微生 物，并且在保存后也能穩(wěn)定地維持雌馬酚產(chǎn)生能力。
[0016] 本發(fā)明人等為了解決上述課題進(jìn)行了深入研究，結(jié)果驚訝地發(fā)現(xiàn)通過(guò)在使用雌馬 酸產(chǎn)生微生物的發(fā)酵中，從母發(fā)酵劑（mother starter)的制備到主發(fā)酵（main fermentation)的各步驟中，根據(jù)使用的原料對(duì)發(fā)酵氣氛及pH等進(jìn)行特別的創(chuàng)新研究，采用 可以適用于工業(yè)規(guī)模的方法，可以得到以活菌的狀態(tài)含有維持了雌馬酚產(chǎn)生能力的雌馬酚 產(chǎn)生微生物的發(fā)酵物。進(jìn)而，本發(fā)明人等發(fā)現(xiàn)通過(guò)向以活菌的狀態(tài)含有雌馬酚產(chǎn)生微生物 的組合物中添加抗壞血酸及/或其衍生物，可以得到能夠穩(wěn)定地保持雌馬酚產(chǎn)生微生物的 雌馬酚產(chǎn)生能力、且保存穩(wěn)定性優(yōu)異的含有雌馬酚產(chǎn)生微生物的組合物。具體而言，本發(fā)明 人等發(fā)現(xiàn)如下發(fā)明。
[0017] ⑴第1法的發(fā)酵物的制備方法
[0018]使用雌馬酚產(chǎn)生微生物，用大豆粉末或豆?jié){作為原料制備發(fā)酵物時(shí)，通過(guò)以下步 驟可以制備以活菌的狀態(tài)含有維持了雌馬酚產(chǎn)生能力的微生物的發(fā)酵物：（1)使用雌馬酚 產(chǎn)生微生物，在黃豆苷原類的存在下、PH5.0以上、厭氧條件下進(jìn)行發(fā)酵，由此制備母發(fā)酵劑 (mother starter); (2)使用上述母發(fā)酵劑，在黃豆苷原類的存在下、pH5.0以上進(jìn)行發(fā)酵， 由此制備生產(chǎn)用發(fā)酵劑(bulk starter); (3)使用上述生產(chǎn)用發(fā)酵劑，在含有大豆粉末或豆 漿的培養(yǎng)基中發(fā)酵制備發(fā)酵物。
[0019] (i i)第2法的發(fā)酵物的制備方法
[0020] 使用雌馬酚產(chǎn)生微生物，用乳作為原料制備發(fā)酵物時(shí)，通過(guò)在黃豆苷原類的存在 下、厭氧條件下使其發(fā)酵制備母發(fā)酵劑，進(jìn)而在使用母發(fā)酵劑使乳原料發(fā)酵時(shí)，通過(guò)在黃豆 苷原類的存在下、PH為4.6以上的條件下進(jìn)行，可以制備以活菌的狀態(tài)含有維持了雌馬酚產(chǎn) 生能力的微生物的發(fā)酵物。另外，該發(fā)酵物能夠長(zhǎng)期保持雌馬酚產(chǎn)生微生物的雌馬酚產(chǎn)生 能力，且保存穩(wěn)定性也優(yōu)異。進(jìn)而，通過(guò)在酵母提取物的存在下實(shí)施從母發(fā)酵劑的制備到乳 原料的發(fā)酵所進(jìn)行的全部發(fā)酵，可以進(jìn)一步提高雌馬酚產(chǎn)生微生物的雌馬酚產(chǎn)生能力的維 持和保存穩(wěn)定性。
[0021] (iii)含有雌馬酚產(chǎn)生微生物的組合物
[0022] 通過(guò)向以活菌的狀態(tài)含有雌馬酚產(chǎn)生微生物的發(fā)酵制品中添加抗壞血酸及/或其 衍生物，可以提供一種在保存后也不喪失雌馬酚產(chǎn)生微生物的雌馬酚產(chǎn)生能力的組合物。
[0023] 本發(fā)明是基于上述的發(fā)現(xiàn)并通過(guò)進(jìn)一步反復(fù)改良而完成的。
[0024] 即，本發(fā)明提供下述方案的發(fā)明。
[0025] 項(xiàng)1. 一種發(fā)酵物的制備方法，包括以下步驟：
[0026] 步驟（1)，在含有選自黃豆苷原糖苷、黃豆苷原及二氫黃豆苷原中的至少1種黃豆 苷原類的培養(yǎng)基中，使用雌馬酚產(chǎn)生微生物，在維持PH5.0以上的狀態(tài)下進(jìn)行厭氧發(fā)酵，由 此制備母發(fā)酵劑；
[0027] 步驟(2)，使用上述步驟（1)中所得的母發(fā)酵劑，在含有上述黃豆苷原類的培養(yǎng)基 中，在維持PH5.0以上的狀態(tài)下進(jìn)行發(fā)酵，由此制備生產(chǎn)用發(fā)酵劑;及
[0028] 步驟(3)，使用上述步驟(2)中所得的生產(chǎn)用發(fā)酵劑，在含有大豆粉末及/或豆?jié){的 培養(yǎng)基中進(jìn)行發(fā)酵，由此得到發(fā)酵物。
[0029] 項(xiàng)2.如項(xiàng)1所述的制備方法，其中，雌馬酚產(chǎn)生微生物為乳酸菌。
[0030] 項(xiàng)3.如項(xiàng)1所述的制備方法，其中，雌馬酚產(chǎn)生微生物為格氏乳球菌。
[0031 ]項(xiàng)4. 一種發(fā)酵物的制備方法，包括以下步驟：
[0032] 步驟（I)，在含有選自黃豆苷原糖苷、黃豆苷原及二氫黃豆苷原中的至少1種黃豆 苷原類的培養(yǎng)基中，使用雌馬酚產(chǎn)生微生物進(jìn)行厭氧發(fā)酵，由此制備母發(fā)酵劑，及
[0033] 步驟(II)，使用上述步驟(1)中得到的母發(fā)酵劑，在含有上述黃豆苷原類及乳的培 養(yǎng)基中，在維持PH4.6以上的狀態(tài)下進(jìn)行發(fā)酵，由此得到發(fā)酵物。
[0034] 項(xiàng)5.如項(xiàng)4所述的制造方法，其中，使用大豆胚軸提取物作為黃豆苷原類。
[0035] 項(xiàng)6.如項(xiàng)4所述的制備方法，其中，上述步驟（I)及（II)中使用的培養(yǎng)基還含有酵 母提取物。
[0036] 項(xiàng)7.如項(xiàng)4所述的制備方法，其中，雌馬酚產(chǎn)生微生物為乳酸菌。
[0037] 項(xiàng)8.如項(xiàng)4所述的制備方法，其中，雌馬酚產(chǎn)生微生物為格氏乳球菌。
[0038] 項(xiàng)9.一種發(fā)酵制品，含有通過(guò)項(xiàng)1~3中任一項(xiàng)所述的制備方法得到的發(fā)酵物。
[0039] 項(xiàng)10.-種發(fā)酵制品，含有通過(guò)項(xiàng)4~8中任一項(xiàng)所述的制備方法得到的發(fā)酵物。
[0040] 項(xiàng)11.如項(xiàng)10所述的發(fā)酵制品，其中，pH為4.6以上。
[0041] 項(xiàng)12. -種含有雌馬酚產(chǎn)生微生物的組合物，含有(A)活菌狀態(tài)的雌馬酚產(chǎn)生微生 物、及(B)選自抗壞血酸、其衍生物、及它們的鹽中的至少1種。
[0042] 項(xiàng)13 .如項(xiàng)12所述的組合物，其中，以0.05~5重量％的配合比例含有上述(B)成 分。
[0043] 項(xiàng)14.如項(xiàng)12所述的組合物，其中，pH為5.0以下。
[0044] 項(xiàng)15.如項(xiàng)12所述的組合物，含有使用雌馬酚產(chǎn)生微生物進(jìn)行發(fā)酵所得的發(fā)酵物 作為活菌狀態(tài)的雌馬酚產(chǎn)生微生物。
[0045] 項(xiàng)16.如項(xiàng)12所述的組合物，其中，所述組合物為發(fā)酵大豆飲料或發(fā)酵豆?jié){。
[0046]項(xiàng)17.如項(xiàng)12所述的組合物，其中，雌馬酚產(chǎn)生微生物為乳酸菌。
[0047]項(xiàng)18.如項(xiàng)12所述的組合物，其中，雌馬酚產(chǎn)生微生物為格氏乳球菌。
[0048] 項(xiàng)19. 一種雌馬酚產(chǎn)生微生物的雌馬酚產(chǎn)生性能的維持方法，其特征在于，向含有 活菌狀態(tài)的雌馬酚產(chǎn)生微生物的組合物中添加選自抗壞血酸、其衍生物、及它們的鹽中的 至少1種。
[0049] 根據(jù)本發(fā)明的制備方法，可以制備以活菌的狀態(tài)含有