具體的實施例對本發(fā)明做進一步說明。
[0041]實施例1
[0042]1.將保藏菌種接種于斜面菌種培養(yǎng)基，于30°C進行活化培養(yǎng)48h，可得斜面菌種。所述斜面菌種培養(yǎng)基(IL)為:蛋白胨5g，酵母膏5g，檸檬酸氫二銨lg，葡萄糖10g，吐溫-80
0.5mL，乙酸鈉Ig,磷酸氫二鉀Ig,硫酸鎂0.1g,硫酸猛0.1g,瓊脂15g，蒸飽水lOOOmL，pH
6ο
[0043]2.用無菌水將斜面菌種洗下，制成菌懸液，并將其0D600調(diào)整為1.0。
[0044]3.將菌懸液按5%的比例(v/v)轉(zhuǎn)接于液體菌種培養(yǎng)基中，于30°C，100r/min條件下培養(yǎng)12h，可得液體菌種。所述液體菌種培養(yǎng)基(IL)為:蛋白胨5g，酵母膏l(xiāng)g，檸檬酸氫二銨lg，葡萄糖10g，吐溫-80 0.5mL，乙酸鈉lg，磷酸氫二鉀lg，硫酸鎂0.1g,硫酸錳
0.lg，蒸飽水 1000mL，pH 6。
[0045]4.將液體菌種按照5 %的比例(v/V)轉(zhuǎn)接于花粉中，密封，于30°C，100r/min條件下發(fā)酵48h。所述花粉處理方式為:利用無菌水將花粉含水量調(diào)整為60%，加入5%的葡萄糖，攪拌均勻。
[0046]5.發(fā)酵結(jié)束后，產(chǎn)物中加入5 %的海藻糖，攪拌均勻并使其溶解，進行噴霧干燥(進風(fēng)溫度180°C，出風(fēng)溫度60°C，進料量5mL/min)，可得富含活性凝結(jié)芽孢桿菌的花粉發(fā)酵產(chǎn)物。
[0047]實施例2
[0048]1.將保藏菌種接種于斜面菌種培養(yǎng)基，于37°C進行活化培養(yǎng)24h，可得斜面菌種。所述斜面菌種培養(yǎng)基(IL)為:蛋白胨10g，酵母膏10g，檸檬酸氫二銨2g，葡萄糖15g，吐溫-80 ImL,乙酸鈉4g，磷酸氫二鉀2g，硫酸鎂0.6g，硫酸猛0.5g，瓊脂17g，蒸飽水1000mL，pH 6。
[0049]2.用無菌水將斜面菌種洗下，制成菌懸液，并將其0D600調(diào)整為1.0。
[0050]3.將菌懸液按7%的比例(v/v)轉(zhuǎn)接于液體菌種培養(yǎng)基中，于35°C，150r/min條件下培養(yǎng)24h，可得液體菌種。所述液體菌種培養(yǎng)基(IL)為:蛋白胨10g，酵母膏10g，檸檬酸氫二銨2g，葡萄糖15g，吐溫-80 ImL,乙酸鈉4g，磷酸氫二鉀2g，硫酸鎂0.6g，硫酸錳
0.5g，蒸飽水 1000mL，pH 6。
[0051]4.將液體菌種按照8%的比例(v/v)轉(zhuǎn)接于花粉中，密封，于35°C，150r/min條件下發(fā)酵16h。所述花粉處理方式為:利用無菌水將花粉含水量調(diào)整為80%，加入7%的葡萄糖，攪拌均勻。
[0052]5.發(fā)酵結(jié)束后，產(chǎn)物中加入8 %的海藻糖，攪拌均勻并使其溶解，進行噴霧干燥(進風(fēng)溫度200°C，出風(fēng)溫度70°C，進料量9mL/min)，可得富含活性凝結(jié)芽孢桿菌的花粉發(fā)酵產(chǎn)物。
[0053]實施例3
[0054]1.將保藏菌種接種于斜面菌種培養(yǎng)基，于40°C進行活化培養(yǎng)12h，可得斜面菌種。所述斜面菌種培養(yǎng)基(IL)為:蛋白胨15g，酵母膏15g，檸檬酸氫二銨3g，葡萄糖30g，吐溫-80 2mL，乙酸鈉9g，磷酸氫二鉀3g，硫酸鎂Ig,硫酸猛Ig,瓊脂20g，蒸飽水lOOOmL，pH7。
[0055]2.用無菌水將斜面菌種洗下，制成菌懸液，并將其0D600調(diào)整為1.0。
[0056]3.將菌懸液按10%的比例(v/v)轉(zhuǎn)接于液體菌種培養(yǎng)基中，于40°C，200r/min條件下培養(yǎng)30h，可得液體菌種。所述液體菌種培養(yǎng)基(IL)為:蛋白胨15g，酵母膏10g，檸檬酸氫二銨3g，葡萄糖30g，吐溫-80 2mL，乙酸鈉9g，磷酸氫二鉀3g，硫酸鎂lg，硫酸錳lg，蒸餾水 lOOOmL, pH 7。
[0057]4.將液體菌種按照10%的比例(v/v)轉(zhuǎn)接于花粉中，密封，于40°C，200r/min條件下發(fā)酵20h。所述花粉處理方式為:利用無菌水將花粉含水量調(diào)整為90%，加入10%的葡萄糖，攪拌均勻。
[0058]5.發(fā)酵結(jié)束后，產(chǎn)物中加入15%的海藻糖，攪拌均勻并使其溶解，進行噴霧干燥(進風(fēng)溫度250°C，出風(fēng)溫度80°C，進料量12mL/min)，可得富含活性凝結(jié)芽孢桿菌的花粉發(fā)酵產(chǎn)物。
[0059]采用本發(fā)明所提供的用凝結(jié)芽孢桿菌進行花粉發(fā)酵的方法，用凝結(jié)芽孢桿菌對花粉進行液體發(fā)酵，可顯著改善花粉的溶解性、口感、風(fēng)味；發(fā)酵后花粉的粗蛋白含量提高10%以上；凝結(jié)芽孢桿菌以芽孢形式存在，抗逆性強、耐高溫、易存儲，產(chǎn)物可采用噴霧干燥，避免了高成本的冷凍干燥，活性芽孢數(shù)達9X109CFU/g以上；芽孢耐胃酸能力強，易于定植腸道；發(fā)酵產(chǎn)物兼具花粉及凝結(jié)芽孢桿菌的功效，提高了花粉的營養(yǎng)價值，可作為健康食品的理想配料。
[0060]應(yīng)當(dāng)理解的是，本發(fā)明的應(yīng)用不限于上述的舉例，對本領(lǐng)域普通技術(shù)人員來說，可以根據(jù)上述說明加以改進或變換，所有這些改進和變換都應(yīng)屬于本發(fā)明所附權(quán)利要求的保護范圍。
【主權(quán)項】
1.一種用凝結(jié)芽孢桿菌進行花粉發(fā)酵的方法，其特征在于，包括以下步驟: 1)將凝結(jié)芽孢桿菌保藏菌種接種于斜面菌種培養(yǎng)基，進行活化培養(yǎng)； 2)用無菌水將斜面菌種洗下，制備菌懸液； 3)菌懸液轉(zhuǎn)接于液體菌種培養(yǎng)基中，培養(yǎng)制備液體菌種； 4)將液體菌種轉(zhuǎn)接于花粉中，密封發(fā)酵； 5)以海藻糖作為保護劑，對發(fā)酵產(chǎn)物進行噴霧干燥。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用凝結(jié)芽孢桿菌進行花粉發(fā)酵的方法，其特征在于，步驟4)具體為: 利用無菌水將花粉含水量調(diào)整為60-90%，加入5% -10%的葡萄糖，攪拌均勻；將液體菌種按照5% -10%的比例轉(zhuǎn)接于花粉中，密封，于30-45°C，100-200r/min條件下發(fā)酵8-48h03.根據(jù)權(quán)利要求2所述的用凝結(jié)芽孢桿菌進行花粉發(fā)酵的方法，其特征在于，步驟I)中，凝結(jié)芽孢桿菌菌種于30-45°C進行活化培養(yǎng)12-48h ; 步驟2)中，菌懸液的0D600調(diào)整為1.0。4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的用凝結(jié)芽孢桿菌進行花粉發(fā)酵的方法，其特征在于，步驟3)中，將菌懸液按5% -10%的比例轉(zhuǎn)接于液體菌種培養(yǎng)基中，于30-45°C，100-200r/min條件下培養(yǎng)12-48h，制備得到液體菌種。5.根據(jù)權(quán)利要求1?4任一所述的用凝結(jié)芽孢桿菌進行花粉發(fā)酵的方法，其特征在于，步驟5)中，噴霧干燥的具體過程為: 在發(fā)酵產(chǎn)物中加入5% -20%的海藻糖，攪拌均勻并使其溶解，進行噴霧干燥； 其中，噴霧干燥參數(shù)為進風(fēng)溫度100-250°C，出風(fēng)溫度50-150°C，進料量5_25mL/min。6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的用凝結(jié)芽孢桿菌進行花粉發(fā)酵的方法，其特征在于，步驟I)中，所述斜面菌種培養(yǎng)基的配方為:蛋白胨5-15g，酵母膏5-15g，檸檬酸氫二銨l-3g，葡萄糖10-30g，吐溫-800.5-2mL，乙酸鈉l_10g，磷酸氫二鉀l_3g，硫酸鎂0.Ι-lg,硫酸錳0.Ι-lg，瓊脂 15-20g，蒸餾水 100mL, pH 6-7。7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的用凝結(jié)芽孢桿菌進行花粉發(fā)酵的方法，其特征在于，步驟3)中，所述液體菌種培養(yǎng)基的配方為:蛋白胨5-15g，酵母膏l(xiāng)-10g，檸檬酸氫二銨l-3g，葡萄糖10-30g，吐溫-800.5-2mL，乙酸鈉l_10g，磷酸氫二鉀l_3g，硫酸鎂0.Ι-lg,硫酸錳0.ι-lg，蒸餾水 100mL, pH 6-7。8.一種花粉的發(fā)酵產(chǎn)物，其特征在于，采用如權(quán)利要求1?7任一所述的用凝結(jié)芽孢桿菌進行花粉發(fā)酵的方法制備得到。9.一種如權(quán)利要求8所述的花粉的發(fā)酵產(chǎn)物的應(yīng)用，其特征在于，將所述花粉的發(fā)酵產(chǎn)物用于保健品、食品的制備。
【專利摘要】本發(fā)明公開一種用凝結(jié)芽孢桿菌進行花粉發(fā)酵的方法及其發(fā)酵產(chǎn)物和應(yīng)用，包括以下步驟：將凝結(jié)芽孢桿菌保藏菌種接種于斜面菌種培養(yǎng)基，進行活化培養(yǎng)；用無菌水將斜面菌種洗下，制備菌懸液；菌懸液轉(zhuǎn)接于液體菌種培養(yǎng)基中，培養(yǎng)制備液體菌種；將液體菌種轉(zhuǎn)接于花粉中，密封發(fā)酵；以海藻糖作為保護劑，對發(fā)酵產(chǎn)物進行噴霧干燥。采用本發(fā)明方法，可顯著改善花粉的溶解性、口感、風(fēng)味，且發(fā)酵產(chǎn)物可采用噴霧干燥，避免了高成本的冷凍干燥。
【IPC分類】C12N1/20, A23L1/176, C12R1/07
【公開號】CN104938965
【申請?zhí)枴緾N201510376710
【發(fā)明人】羅楚波, 楊善巖
【申請人】廣東羅特制藥有限公司
【公開日】2015年9月30日
【申請日】2015年6月30日