用凝結(jié)芽孢桿菌進(jìn)行花粉發(fā)酵的方法及其發(fā)酵產(chǎn)物和應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及微生物發(fā)酵技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種用凝結(jié)芽孢桿菌進(jìn)行花粉發(fā)酵的方法及其發(fā)酵產(chǎn)物和應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]凝結(jié)芽孢桿菌(Bacillus coagulans)是益生菌領(lǐng)域中的后起之秀，屬于腸道乳酸菌，又稱“有孢子性乳酸菌”，是經(jīng)美國(guó)FDA批準(zhǔn)的一種“普遍認(rèn)為安全”的桿菌類乳酸菌。不僅具有乳酸菌和雙歧桿菌的保健功效，還具較強(qiáng)的耐高溫、耐酸、耐膽堿等抗逆性，且對(duì)腸道致病菌有較強(qiáng)抑制作用?？诜笤诿ぁ⒔Y(jié)和直腸定植，發(fā)酵產(chǎn)生大量抗菌凝固素、乳酸、氨基酸、維生素和多種消化酶。研宄表明凝結(jié)芽孢桿菌對(duì)人工胃液的酸性條件耐受性極強(qiáng)，其存活不受影響，明顯優(yōu)于其它微生態(tài)制劑，能順利通過胃進(jìn)入腸道。我國(guó)青島東海藥業(yè)有限公司生產(chǎn)的凝結(jié)芽孢桿菌活菌片(爽舒寶)，2005年獲得國(guó)家食品和藥品監(jiān)督管理局新藥證書，同年轉(zhuǎn)換為非處方藥品。所用菌株生長(zhǎng)旺盛，乳酸產(chǎn)率高，并經(jīng)中國(guó)藥品生物制品檢定所檢定和批準(zhǔn)使用。
[0003]花粉是有花植物雄性器官中所含的生殖細(xì)胞，也稱為植物的“精子”，享有“完全營(yíng)養(yǎng)品”的美譽(yù)。花粉以其豐富而全面、搭配合理的營(yíng)養(yǎng)成分而著稱，含有豐富的蛋白、磷脂及多種微量元素等，以及人體所需的8中必需氨基酸、不飽和脂肪酸、豐富齊全的維生素等?；ǚ凼且环N天然高級(jí)營(yíng)養(yǎng)食品，但沒有經(jīng)過處理的花粉往往附有雜菌，直接食用可能會(huì)致??；花粉帶有特殊氣味，可能會(huì)使某些人不喜歡；花粉具有一層厚壁，不利于營(yíng)養(yǎng)的吸收利用；此外，花粉還會(huì)引起某些敏感體質(zhì)的人產(chǎn)生過敏反應(yīng)。
[0004]當(dāng)前花粉的處理技術(shù)有機(jī)械法、酶解法、乳酸菌發(fā)酵法等，機(jī)械法是目前主要的花粉處理方法，具有過程劇烈、設(shè)備要求高等缺陷。酶解法雖然處理過程緩和，但是對(duì)條件控制要求較高。乳酸菌發(fā)酵法是新近興起的一種花粉處理方法，既能抑菌，又能破壁；既能脫敏，又不破壞其營(yíng)養(yǎng)成分。但是，乳酸菌發(fā)酵法有一大缺陷，就是乳酸菌耐熱性不強(qiáng)，發(fā)酵產(chǎn)物只能采用冷凍干燥的處理方式，能耗很高，提高了處理成本。
[0005]因此，現(xiàn)有技術(shù)還有待發(fā)展。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]鑒于上述現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明的目的在于提供一種用凝結(jié)芽孢桿菌進(jìn)行花粉發(fā)酵的方法及其發(fā)酵產(chǎn)物和應(yīng)用，旨在解決現(xiàn)有花粉處理技術(shù)存在設(shè)備要求高或條件控制要求高等問題。
[0007]本發(fā)明的技術(shù)方案如下:
[0008]一種用凝結(jié)芽孢桿菌進(jìn)行花粉發(fā)酵的方法，其中，包括以下步驟:
[0009]I)將凝結(jié)芽孢桿菌保藏菌種接種于斜面菌種培養(yǎng)基，進(jìn)行活化培養(yǎng)；
[0010]2)用無菌水將斜面菌種洗下，制備菌懸液；
[0011]3)菌懸液轉(zhuǎn)接于液體菌種培養(yǎng)基中，培養(yǎng)制備液體菌種；
[0012]4)將液體菌種轉(zhuǎn)接于花粉中，密封發(fā)酵；
[0013]5)以海藻糖作為保護(hù)劑，對(duì)發(fā)酵產(chǎn)物進(jìn)行噴霧干燥。
[0014]所述的用凝結(jié)芽孢桿菌進(jìn)行花粉發(fā)酵的方法，其中，步驟4)具體為:
[0015]利用無菌水將花粉含水量調(diào)整為60-90%，加入5%-10%的葡萄糖，攪拌均勻；將液體菌種按照5% -10%的比例轉(zhuǎn)接于花粉中，密封，于30-45°C，100-200r/min條件下發(fā)酵8-48h0
[0016]所述的用凝結(jié)芽孢桿菌進(jìn)行花粉發(fā)酵的方法，其中，步驟I)中，凝結(jié)芽孢桿菌菌種于30-45°C進(jìn)行活化培養(yǎng)12-48h ;
[0017]步驟2)中，菌懸液的0D600調(diào)整為1.0。
[0018]所述的用凝結(jié)芽孢桿菌進(jìn)行花粉發(fā)酵的方法，其中，步驟3)中，將菌懸液按5% -10%的比例轉(zhuǎn)接于液體菌種培養(yǎng)基中，于30-45°C，100-200r/min條件下培養(yǎng)12_48h，制備得到液體菌種。
[0019]所述的用凝結(jié)芽孢桿菌進(jìn)行花粉發(fā)酵的方法，其中，步驟5)中，噴霧干燥的具體過程為:
[0020]在發(fā)酵產(chǎn)物中加入5% -20%的海藻糖，攪拌均勻并使其溶解，進(jìn)行噴霧干燥；
[0021]其中，噴霧干燥參數(shù)為進(jìn)風(fēng)溫度100-250°C，出風(fēng)溫度50-150°C，進(jìn)料量5_25mL/
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[0022]所述的用凝結(jié)芽孢桿菌進(jìn)行花粉發(fā)酵的方法，其中，步驟I)中，所述斜面菌種培養(yǎng)基的配方為:蛋白胨5-15g，酵母膏5-15g，梓檬酸氫二錢l_3g，葡萄糖10-30g，吐溫-800.5-2mL，乙酸鈉l-10g，磷酸氫二鉀l_3g，硫酸鎂0.l_lg，硫酸錳0.l_lg，瓊脂15_20g，蒸餾水 100mL，pH 6-7。
[0023]所述的用凝結(jié)芽孢桿菌進(jìn)行花粉發(fā)酵的方法，其中，步驟3)中，所述液體菌種培養(yǎng)基的配方為:蛋白胨5-15g，酵母膏l(xiāng)-10g，梓檬酸氫二錢l_3g，葡萄糖10-30g，吐溫-800.5-2mL，乙酸鈉l-10g，磷酸氫二鉀l_3g，硫酸鎂0.l_lg，硫酸錳0.l_lg，蒸餾水100mL,pH 6-7 ο
[0024]一種花粉的發(fā)酵產(chǎn)物，其中，采用如上所述的用凝結(jié)芽孢桿菌進(jìn)行花粉發(fā)酵的方法制備得到。
[0025]一種如上所述的花粉的發(fā)酵產(chǎn)物的應(yīng)用，其中，將所述花粉的發(fā)酵產(chǎn)物用于保健品、食品的制備。
[0026]有益效果:本發(fā)明提供了一種用凝結(jié)芽孢桿菌進(jìn)行花粉發(fā)酵的方法及其發(fā)酵產(chǎn)物和應(yīng)用，用凝結(jié)芽孢桿菌對(duì)花粉進(jìn)行液體發(fā)酵，可顯著改善花粉的溶解性、口感、風(fēng)味；發(fā)酵后花粉的粗蛋白含量提高10%以上；凝結(jié)芽孢桿菌以芽孢形式存在，抗逆性強(qiáng)、耐高溫、易存儲(chǔ)，產(chǎn)物可采用噴霧干燥，避免了高成本的冷凍干燥，活性芽孢數(shù)達(dá)9 X 109CFU/g以上；芽孢耐胃酸能力強(qiáng)，易于定植腸道；發(fā)酵產(chǎn)物兼具花粉及凝結(jié)芽孢桿菌的功效，提高了花粉的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值，可作為健康食品的理想配料。
【具體實(shí)施方式】
[0027]本發(fā)明提供一種用凝結(jié)芽孢桿菌進(jìn)行花粉發(fā)酵的方法及其發(fā)酵產(chǎn)物和應(yīng)用，為使本發(fā)明的目的、技術(shù)方案及效果更加清楚、明確，以下對(duì)本發(fā)明進(jìn)一步詳細(xì)說明。應(yīng)當(dāng)理解，此處所描述的具體實(shí)施例僅僅用以解釋本發(fā)明，并不用于限定本發(fā)明。
[0028]本發(fā)明所提供的一種用凝結(jié)芽孢桿菌進(jìn)行花粉發(fā)酵的方法，具體地，包括以下步驟:
[0029]I)將凝結(jié)芽孢桿菌保藏菌種接種于斜面菌種培養(yǎng)基，進(jìn)行活化培養(yǎng):
[0030]將保藏菌種接種于斜面菌種培養(yǎng)基，于30-45?進(jìn)行活化培養(yǎng)12_48h，可得斜面菌種。所述斜面菌種培養(yǎng)基的配方(IL)為:蛋白胨5-15g，酵母膏5-15g，檸檬酸氫二銨l-3g，葡萄糖10-30g，吐溫-80 0.5-2mL，乙酸鈉l_10g，磷酸氫二鉀l_3g，硫酸鎂0.l_lg，硫酸錳 0.Ι-lg，瓊脂 15-20g，蒸餾水 100mL, pH 6-7。
[0031]2)用無菌水將斜面菌種洗下，制備菌懸液:
[0032]制成菌懸液，并將其0D600調(diào)整為1.0。
[0033]3)菌懸液轉(zhuǎn)接于液體菌種培養(yǎng)基中，培養(yǎng)制備液體菌種:
[0034]將菌懸液按5% -10%的比例(v/v)轉(zhuǎn)接于液體菌種培養(yǎng)基中，于30_45°C，100-200r/min條件下培養(yǎng)12-48h，可得液體菌種。所述液體菌種培養(yǎng)基的配方(IL)為:蛋白胨5-15g，酵母膏l(xiāng)-10g，朽1檬酸氫二錢l_3g，葡萄糖10-30g，吐溫-80 0.5_2mL，乙酸鈉l-10g，磷酸氫二鉀l_3g，硫酸鎂0.Ι-lg，硫酸錳0.Ι-lg，蒸餾水100mL, pH 6-7。
[0035]4)將液體菌種轉(zhuǎn)接于花粉中，密封發(fā)酵:
[0036]將液體菌種按照5 % -10 %的比例(v/v)轉(zhuǎn)接于花粉中，密封，于30-45 V，100-200r/min條件下發(fā)酵8-48h。所述花粉在發(fā)酵前，預(yù)處理方式為:利用無菌水將花粉含水量調(diào)整為60-90 %，加入5 % -10 %的葡萄糖，攪拌均勻。
[0037]5)以海藻糖作為保護(hù)劑，對(duì)發(fā)酵產(chǎn)物進(jìn)行噴霧干燥:
[0038]發(fā)酵結(jié)束后，在發(fā)酵產(chǎn)物中加入5% -20%的海藻糖，攪拌均勻并使其溶解，進(jìn)行噴霧干燥(噴霧干燥參數(shù)為:進(jìn)風(fēng)溫度100-250 °C，出風(fēng)溫度50-150 °C，進(jìn)料量5-25mL/min)，可得富含活性凝結(jié)芽孢桿菌的花粉發(fā)酵產(chǎn)物。
[0039]本發(fā)明中還提供一種花粉的發(fā)酵產(chǎn)物，所述發(fā)酵產(chǎn)物采用如上所述的用凝結(jié)芽孢桿菌進(jìn)行花粉發(fā)酵的方法制備得到。本發(fā)明中還提供所述發(fā)酵產(chǎn)物的應(yīng)用，可將所述發(fā)酵產(chǎn)物用于制備保健品、食品。
[0040]以下通過