的 N-末端測序，成熟多肽編碼序列是SEQIDN0:1的核苷酸79-1134、88-1134、223-1134或 238-1134。
[0085] 中嚴(yán)謹(jǐn)度條件：術(shù)語"中嚴(yán)謹(jǐn)度條件"意指對于長度為至少100個核苷酸的探針而 言，遵循標(biāo)準(zhǔn)DNA印跡程序，在42°C在5XSSPE、0. 3%SDS、200微克/ml剪切和變性的鮭精 DNA和35%甲酰胺中預(yù)雜交和雜交12至24小時。載體材料最終使用2XSSC、0. 2%SDS， 在55 °C下洗滌三次，每次15分鐘。
[0086] 中-高嚴(yán)謹(jǐn)度條件：術(shù)語"中-高嚴(yán)謹(jǐn)度條件"意指對于長度為至少100個核苷酸 的探針來說，遵循標(biāo)準(zhǔn)DNA印跡程序，在42°C下在5XSSPE、0. 3%SDS、200微克/毫升剪切 并變性的鮭魚精子DNA以及或者35%甲酰胺中預(yù)雜交和雜交12至24小時。載體材料最終 使用2XSSC、0. 2%SDS，在60°C下洗滌三次，每次15分鐘。
[0087] 突變體：術(shù)語"突變體"意指編碼一種變體的多核苷酸。
[0088] 核酸構(gòu)建體：術(shù)語"核酸構(gòu)建體"意指單鏈-或雙鏈核酸分子，其分離自天然存在 的基因，或其被修飾成以本來在自然界中不存在的方式含有核酸的區(qū)段，或其為合成的，其 包含一個或多個控制序列。
[0089]可操作地連接：術(shù)語"可操作地連接"意指一種配置，其中一個控制序列相對于一 種多核苷酸的編碼序列放置在一個適當(dāng)位置處，以使得控制序列指引編碼序列的表達。
[0090] 親本或親本天冬酰胺酶：術(shù)語"親本"或"親本天冬酰胺酶"意指一種天冬酰胺酶， 對該天冬酰胺酶進行一種改變以產(chǎn)生本發(fā)明的酶變體。親本可以是天然存在的（野生型） 多肽或其變體或片段。
[0091] 序列一致性：兩個氨基酸序列之間或兩個核苷酸序列之間的相關(guān)性由參數(shù)"序列 一致性"描述。
[0092] 出于本發(fā)明的目的，使用如在EMBOSS包（EMBOSS:歐洲分子生物學(xué)開放軟件套件 (TheEuropeanMolecularBiologyOpenSoftwareSuite)，賴斯（Rice)等人，2000,遺 傳學(xué)趨勢（TrendsGenet.) 16:276-277)(優(yōu)選5. 0? 0版或更新版本）的尼德爾（Needle) 程序中所實施的尼德爾曼-翁施（Needleman-Wunsch)算法（尼德爾曼（Needleman)和 翁施（Wunsch)，1970,分子生物學(xué)雜志（J.Mol.Biol.)48:443-453)來測定兩個氨基酸 序列之間的序列一致性。使用的這些參數(shù)是空位開放罰分10、空位延伸罰分〇. 5,以及 EBL0SUM62 (BL0SUM62的EMBOSS版本）取代矩陣。標(biāo)記為"最長一致性"的尼德爾的輸出 (使用_非簡化（nobrief)選項獲得）被用作百分比一致性并且被計算如下：
[0093](一致的殘基X 100V(比對長度-比對中的空位總數(shù)）
[0094] 出于本發(fā)明的目的，使用如在EMBOSS包（EMBOSS:歐洲分子生物學(xué)開放軟件套件， 賴斯等人，2000,同上）（優(yōu)選5. 0. 0版或更新版本）的尼德爾程序中所實施的尼德爾曼-翁 施算法（尼德爾曼和翁施，1970,同上）來測定兩個脫氧核糖核苷酸序列之間的序列一致 性。使用的這些參數(shù)是空位開放罰分10、空位延伸罰分〇. 5以及EDNAFULL(NCBINUC4. 4的 EMBOSS版本）取代矩陣。標(biāo)記為"最長一致性"的尼德爾的輸出（使用-非簡化選項獲 得）被用作百分比一致性并且被計算如下：
[0095](一致的脫氧核糖核苷酸X 100V(比對長度-比對中的空位總數(shù)）
[0096]子序列：術(shù)語"子序列"意指使一個或多個（例如，若干個）核苷酸從成熟多肽編 碼序列的5'端和/或3'端缺少的多核苷酸；其中該子序列編碼具有天冬酰胺酶活性的一 個片段。在一個方面中，子序列包含至少900個核苷酸、至少975個核苷酸或至少1050個 核苷酸。
[0097] Tm:在本發(fā)明的上下文中，術(shù)語"Tm"（解鏈溫度）意指對應(yīng)于溫度自記曲線的信號 的尖端的溫度，如通過差示掃描量熱法0SC)所測量，使用20mM乙酸鈉（pH5.0)作為透析 緩沖液。優(yōu)選地，如實例7地進行DSC。Tm(解鏈溫度）也可以被稱為Td(熱變性溫度）。
[0098] 變體：術(shù)語"變體"意指具有天冬酰胺酶活性的、在一個或多個（例如，若干個）位 置處包含改變（即，取代、插入和/或缺失）的一個多肽。取代意指占據(jù)一個位置的氨基酸 替換不同的氨基酸；缺失意指去除占據(jù)一個位置的氨基酸；并且插入意指在鄰接并且緊隨 占據(jù)一個位置的氨基酸之后添加一個氨基酸。本發(fā)明的這些變體具有SEQIDN0:2的成熟 多肽的至少20 %，例如至少40 %、至少50 %、至少60 %、至少70 %、至少80 %、至少90 %、至 少95%或至少100%的天冬酰胺酶活性。
[0099] 非常高嚴(yán)謹(jǐn)度條件：術(shù)語"非常高嚴(yán)謹(jǐn)度條件"是指對于長度為至少100個核苷酸 的探針而言，遵循標(biāo)準(zhǔn)DNA印跡程序，在42°C下在5XSSPE、0. 3%SDS、200微克/ml剪切并 變性的鮭魚精子DNA和50%甲酰胺中預(yù)雜交和雜交12至24小時。載體材料最終使用2X SSC、0. 2%SDS，在70°C下洗滌三次，每次15分鐘。
[0100] 非常低嚴(yán)謹(jǐn)度條件：術(shù)語"非常低嚴(yán)謹(jǐn)度條件"是指對于長度為至少100個核苷酸 的探針而言，遵循標(biāo)準(zhǔn)DNA印跡程序，在42°C下在5XSSPE、0. 3%SDS、200微克/ml剪切并 變性的鮭魚精子DNA和25%甲酰胺中預(yù)雜交和雜交12至24小時。載體材料最終使用2X SSC、0. 2%SDS，在45°C下洗滌三次，每次15分鐘。
[0101] 野生型天冬酰胺酶：術(shù)語"野生型"天冬酰胺酶意指由見于自然界中的一種天然存 在的微生物（如一種細(xì)菌、酵母或絲狀真菌）表達的一種天冬酰胺酶。
[0102] 變體命名慣例
[0103] 出于本發(fā)明的目的，將SEQIDN0:2中披露的成熟多肽用以確定另一種天冬酰胺 酶中的對應(yīng)的氨基酸殘基。將另一種天冬酰胺酶的氨基酸序列與SEQIDN0:2中披露的 成熟多肽進行比對，并且基于該比對，使用如在EMBOSS包（EMBOSS:歐洲分子生物學(xué)開放軟 件套件，賴斯等人，2000,遺傳學(xué)趨勢16:276-277)(優(yōu)選5. 0. 0版或更新版本）的尼德爾程 序中所實施的尼德爾曼-翁施算法（尼德爾曼和翁施，1970,分子生物學(xué)雜志48:443-453) 來確定與SEQIDN0:2中所披露的成熟多肽中的任何氨基酸殘基相對應(yīng)的氨基酸位置編 號。使用的這些參數(shù)是空位開放罰分10、空位延伸罰分〇. 5,以及EBL0SUM62(BL0SUM62的 EMBOSS版本）取代矩陣。
[0104] 可以通過使用若干計算機程序、使用其對應(yīng)默認(rèn)參數(shù)比對多個多肽序列來確定在 另一種天冬酰胺酶中的相應(yīng)氨基酸殘基的鑒別，所述計算機程序包括但不限于MUSCLE(通 過對數(shù)預(yù)期的多種序列比較；版本3. 5或更新版本；埃德加（Edgar)，2004,核酸研究 (NucleicAcidsResearch)32:1792_1797)、MAFFT(版本 6.857 或更新版本；加藤（Katoh) 和庫馬（Kuma)，2002,核酸研究30:3059-3066 ;加藤等人，2005,核酸研究33:511-518 ; 加藤和都（Toh)，2007,生物信息學(xué)（Bioinformatics) 23:372-374 :加藤等人，2009,分子 牛物學(xué)方法（MethodsinMolecularBiol〇gv)537:39-64:加藤和都，2010,牛物信息學(xué) 26:1899-1900)、以及采用ClustalW(l. 83或更新版本；湯姆斯（Thompson)等人，1994,核酸 研究 22:4673-4680)的EMBOSSEMMA。
[0105] 當(dāng)其他天冬酰胺酶與SEQIDN0:2的成熟多肽相分歧使得傳統(tǒng)的基于序列的比較 方法不能檢測其相互關(guān)系時（林達爾（Lindahl)和埃洛弗松（Elofsson)，2000,分子生物學(xué) 雜志295:613-615)，可以使用其他成對序列比較算法。在基于序列的搜索中的更大靈敏度 可以使用搜索程序來獲得，這些搜索程序利用多肽家族的概率表示（特征曲線）來搜索數(shù) 據(jù)庫。例如，PSI-BLAST程序通過迭代數(shù)據(jù)庫搜索過程來產(chǎn)生多個譜，并且能夠檢測遠距離 同源物（阿特休爾（Atschul)等人，1997,《核酸研究》2