專利名稱：具有食欲抑制劑活性的藥物組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及甾類糖苷，涉及包含這種甾類糖苷的組合物，涉及這些甾類糖苷及包含它們的組合物的新用途。進(jìn)而，本發(fā)明涉及從植物原料中提取和分離這些甾類糖苷的方法，涉及合成這些甾類糖苷的方法，涉及所述提取方法和合成方法的產(chǎn)品。
具體而言，本發(fā)明涉及一種食欲抑制劑，涉及合成所述食欲抑制劑的方法，涉及從植物原料中提取食欲抑制劑的方法，涉及包含食欲抑制劑的食欲抑制劑組合物，涉及抑制食欲的方法。
本發(fā)明提供了一種制備Trichocaulon屬或火地亞屬植物提取物的方法，該提取物包含食欲抑制劑，該方法包括以下步驟用溶劑處理收集的植物原料以提取具有食欲抑制劑活性的成分，將提取液與材料原料的其它部分分離，從提取液中除去溶劑，回收提取物。所回收的提取物可進(jìn)一步進(jìn)行提純，如通過適宜的溶劑萃取步驟。
本發(fā)明也提供了一種由包含Trichocaulon屬或火地亞屬植物并具有食欲抑制劑活性的植物制得的植物提取物。
所述提取物可由植物原料如所述Trichocaulon屬或火地亞屬植物的莖和根制得。Trichocaulon屬或火地亞屬植物包括生長在干燥地區(qū)的多汁植物，如在南部非洲發(fā)現(xiàn)的所述植物。在本發(fā)明中，活性食欲抑制劑提取物可由Trichocaulon piliferum種獲得。Trichocaulon officinale種也可用來提供活性食欲抑制劑提取物。在本發(fā)明中，活性食欲抑制劑提取物還可從火地亞currorii、火地亞gordonii和火地亞lugardii種獲得。本申請(qǐng)人在對(duì)大鼠進(jìn)行的生物試驗(yàn)表明，一些提取物具有食欲抑制劑活性。
采用諸如Waring混合機(jī)的裝置，植物原料可在適宜的溶劑存在下進(jìn)行均化，所述溶劑例如為甲醇/二氯甲烷。然后，用適宜的分離步驟如過濾或離心，可將提取液與殘余的植物原料分離。再通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器除去溶劑，優(yōu)選在60℃的水浴中進(jìn)行。分離出的粗提取物可進(jìn)一步用二氯甲烷和水進(jìn)行提取，分離成二氯甲烷提取液和水提取液。優(yōu)選通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器可使二氯甲烷提取液中除去溶劑，形成的提取液可再通過甲醇/己烷萃取而提純。甲醇/己烷提取產(chǎn)物可進(jìn)一步分離成甲醇提取物和己烷提取物。將甲醇提取物進(jìn)行蒸發(fā)以除去溶劑，得到部分提純的活性提取物。
將部分提純的活性提取物溶解于甲醇中，再通過柱色譜進(jìn)行色譜分離，硅膠用作吸附介質(zhì)，氯仿/30％甲醇混合物用作洗脫劑。可獲得多種不同的餾分，采用適宜的生物試驗(yàn)步驟可評(píng)價(jià)每一種餾分，確定其食欲抑制劑活性。
具有食欲抑制劑活性的餾分優(yōu)選可進(jìn)一步通過柱色譜進(jìn)行色譜分離，硅膠用作吸附介質(zhì)，9∶1的氯仿∶甲醇溶劑用作洗脫劑，對(duì)形成的亞餾分進(jìn)行生物試驗(yàn)，以確定其食欲抑制劑活性。如果需要的話，顯示出食欲抑制劑活性的亞餾分可進(jìn)一步進(jìn)行色譜分離和提純，常規(guī)采用柱色譜過程，硅膠用作吸附介質(zhì)，9∶1的氯仿∶甲醇溶劑用作溶劑。形成的經(jīng)提純的餾分可再通過適宜的生物試驗(yàn)過程評(píng)價(jià)其食欲抑制劑活性。
本申請(qǐng)人還發(fā)現(xiàn)，至少一種所述提純的餾分具有優(yōu)良的食欲抑制劑活性，并且，在餾分中的有效成分可通過包括核磁共振在內(nèi)的常規(guī)化學(xué)技術(shù)確認(rèn)，并發(fā)現(xiàn)是具有以下結(jié)構(gòu)式的化合物
按照S.I.命名法，這種有效成分(1)是化合物3-O-[-β-D-吡喃黃夾竹桃糖基-(1→4)-β-D-吡喃磁麻糖基-(1→4)-β-D-吡喃磁麻糖基]-12β-O-甲基巴豆酰氧基-14-羥基-14β-孕-50-烯-20-酮(C47H74O15M+878)。
按照本發(fā)明的另一個(gè)方面，提供了Trichocaulon屬或火地亞屬植物提取物的制備方法，所述提取物包含食欲抑制劑，該方法包括下述步驟壓榨收集到的植物原料以從固體植物原料中分離出汁液，回收不含固體植物原料的汁液以形成提取物。
提取物可干燥而除去水分以形成自由流動(dòng)的粉末，例如可采用噴霧干燥法、冷凍干燥法或真空干燥法。
本發(fā)明還提供具有食欲抑制劑活性的組合物，其包含如上所述的提取物。
所述組合物可含有可藥用賦形劑、稀釋劑或載體，并選擇性地可制備成單位劑量形式。
本發(fā)明還提供了上述提取物在生產(chǎn)具有食欲抑制劑活性的藥物中的用途，提供了用作具有食欲抑制劑活性藥物的提取物，提供了通過向人或動(dòng)物給藥有效劑量的上述組合物來抑制食欲的方法。
化合物(1)是一種新化合物，本發(fā)明提供了具有食欲抑制劑性質(zhì)的化合物(1)和該甾族三糖一些類似物或衍生物。所選作為類似物或衍生物的分子應(yīng)借助于增加活性成分的活性而影響甾族三糖的性質(zhì)。當(dāng)選擇所述類似物時(shí)，應(yīng)考慮下述作用(i)疏水相互作用和親油性活性分子的官能團(tuán)修飾會(huì)改變分子的疏水性和親油性。親油性增加會(huì)導(dǎo)致生物活性增加、水溶性下降、去肟性/細(xì)胞溶解性增強(qiáng)、組織中的貯藏性增強(qiáng)、更為迅速地進(jìn)行代謝和排除、血漿蛋白結(jié)合性增強(qiáng)以及活性開始速度加快。
(ii)電性質(zhì)和電離常數(shù)分子的官能團(tuán)修飾也會(huì)改變酸性和堿性，酸堿性在控制化合物向其作用位點(diǎn)轉(zhuǎn)移并在該靶位處結(jié)合起主要作用。
(iii)氫鍵在活性分子中的羧基和羰基的官能團(tuán)修飾會(huì)改變生物系統(tǒng)中蛋白質(zhì)與化學(xué)修飾的官能團(tuán)間的相互作用。
(iv)空間參數(shù)改變分子的空間特征的目的是增加與受體的結(jié)合性，從而增加其生物活性。
以下對(duì)分子的化學(xué)修飾會(huì)對(duì)分子的疏水性和親油性，電子性能，氫鍵和空間參數(shù)產(chǎn)生影響(a)C-12基團(tuán)的化學(xué)修飾和酯官能度；(b)5，6-雙鍵的化學(xué)修飾，如氫化和遷移；(c)C-20羰基和C-17乙?；幕瘜W(xué)修飾；(d)甾族的“D”環(huán)或糖苷配基環(huán)的化學(xué)修飾；(e)三糖的糖的化學(xué)修飾。
因而，本發(fā)明提供了一種具有以下結(jié)構(gòu)式的化合物
其中，R為烷基；R1為氫、烷基、甲基巴豆?；⒈郊柞；蛉我环N其它的有機(jī)酯基團(tuán)；R2為氫，或6-脫氧糖中的一種或多種，或2，6-二脫氧糖中的一種或多種，或葡萄糖分子，或其組合；其中，虛線代表在C4-C5或C5-C6間可選擇性地存在另一個(gè)鍵。
本發(fā)明也提供了一種如上所述的化合物，其中，在C5-C6間存在另一個(gè)鍵，R為甲基，R1為甲基巴豆?；琑2為3-O-[-β-D-吡喃黃夾竹桃糖基-(1→4)-β-D-吡喃磁麻糖基-(1→4)-β-D-吡喃磁麻糖基]，化合物具有下述結(jié)構(gòu)式
本發(fā)明食欲抑制劑化合物(1)的活性類似物或衍生物為具有下述結(jié)構(gòu)式的化合物
其中，R為烷基；R1為氫、苯甲?；?、甲基巴豆?；蛉我环N其它的有機(jī)酯基團(tuán)；
其中，R為烷基；R1為氫、甲基巴豆酰基、苯甲?；蛉我环N其它的有機(jī)酯基團(tuán)；
其中，R為烷基；R1為氫、甲基巴豆酰基、苯甲酰基或任一種其它的有機(jī)酯基團(tuán)；
其中，R為烷基；R1為氫、甲基巴豆?；?、苯甲?；蛉我环N其它的有機(jī)酯基團(tuán)；
其中，R為烷基；R1為氫、甲基巴豆?；?、苯甲?；蛉我环N其它的有機(jī)酯基團(tuán)；
其中，R為烷基；R1為氫、烷基、甲基巴豆酰基、苯甲酰基或任一種其它的有機(jī)酯基團(tuán)；R2為氫，或6-脫氧糖中的一種或多種，或2，6-二脫氧糖中的一種或多種，或葡萄糖分子，或其組合；其中，虛線代表在C4-C5或C5-C6間可選擇性地存在另一個(gè)鍵；
其中，R為烷基；R1為氫、烷基、甲基巴豆?；?、苯甲酰基或任一種其它的有機(jī)酯基團(tuán)；R2為氫，或6-脫氧糖中的一種或多種，或2，6-二脫氧糖中的一種或多種，或葡萄糖分子，或其組合；其中，虛線代表在C4-C5或C5-C6間存在另一個(gè)鍵；
其中，R為烷基；R1為氫、烷基、甲基巴豆酰基、苯甲酰基或任一種其它的有機(jī)酯基團(tuán)；R2為氫，或6-脫氧糖中的一種或多種，或2，6-二脫氧糖中的一種或多種，或葡萄糖分子，或其組合；其中，虛線代表在C4-C5或C5-C6間可選擇性地存在另一個(gè)鍵；
其中，R為烷基；R1為氫、烷基、甲基巴豆?；?、苯甲?；蛉我环N其它的有機(jī)酯基團(tuán)；R2為氫，或6-脫氧糖中的一種或多種，或2，6-二脫氧糖中的一種或多種，或葡萄糖分子，或其組合；其中，虛線代表在C4-C5、C5-C6或C14-C15間可選擇性地存在另一個(gè)鍵；
其中，R為烷基；R1為氫、烷基、甲基巴豆?；?、苯甲?；蛉我环N其它的有機(jī)酯基團(tuán)；R2為氫，或6-脫氧糖中的一種或多種，或2，6-二脫氧糖中的一種或多種，或葡萄糖分子，或其組合；其中，虛線代表在C4-C5、C5-C6或C14-C15間可選擇性地存在另一個(gè)鍵；
其中，R為烷基；R1為氫、烷基、甲基巴豆?；⒈郊柞；蛉我环N其它的有機(jī)酯基團(tuán)；R2為氫，或6-脫氧糖中的一種或多種，或2，6-二脫氧糖中的一種或多種，或葡萄糖分子，或其組合；其中，虛線代表在C4-C5、C5-C6或C14-C15間可選擇性地存在另一個(gè)鍵；R3為氫、烷基、芳基、?；蚱咸茄趸?glucoxy)。
其中，R為氫、烷基、芳基或在C14位上具有β羥基，或在C12位上具有β羥基官能團(tuán)，或C17位具有?；?，或C5-C6位具有烯鍵或它們的組合的甾族基團(tuán)。
本發(fā)明還提供了具有食欲抑制劑活性的化合物的合成方法。
該方法采用甾族化合物為原料(或作為中間體或前體)，所述甾族化合物具有以下的化學(xué)式
甾族化合物(15)可由式(22)的化合物由下述方法制備，該方法包括下述步驟(i)用微生物德可拉麗赤殼(Calonectria decora)處理具有下式的孕酮
產(chǎn)生下式的化合物12β，15α-二羥基孕酮
(ii)用甲苯磺酰氯和吡啶處理化合物(17)，產(chǎn)生下式的化合物12β-羥基-15α-(對(duì)甲苯磺?；?-孕酮
(iii)在150℃下用可力丁處理化合物(18)，產(chǎn)生下式的化合物12β-羥基-Δ14-孕酮
(iv)在120℃下，用乙酰氯和乙酸酐處理化合物(19)，產(chǎn)生下式的化合物3，12β-二乙酰氧基孕-3，5，14-三烯-20-酮
(v)用乙二醇和催化量的對(duì)甲苯磺酸處理化合物(20)，產(chǎn)生下式的化合物3，12β-二乙酰氧基-20，20-亞乙二氧基孕-3，5，14-三烯
(vi)用NaBH4處理化合物(21)，產(chǎn)生下式的化合物3β，12β-二羥基-20，20-亞乙二氧基孕-5，14-二烯-12-乙酸酯
在第一種供選擇的過程中，本發(fā)明制備甾族化合物(15)的方法包括下述步驟(a)用還原劑如氫化鋁鋰處理化合物(22)，產(chǎn)生下式的化合物3β，12β-二羥基-20，20-亞乙二氧基孕-5，14-二烯
(b)用N-溴乙酰胺(NBA)和堿如吡啶處理化合物(23)，產(chǎn)生下式的化合物3β，12β-二羥基-14，15-環(huán)氧-20，20-亞乙二氧基孕-5-烯
(c)在回流下，用還原劑如氫化鋁鋰處理化合物(24)，產(chǎn)生下式的化合物3β，12β，14β-三羥基-20，20-亞乙二氧基孕-5-烯
(d)用酸如乙酸與水處理化合物(25)，產(chǎn)生甾族中間體化合物3β，12β，14β-三羥基-孕-5-烯(15)。
反應(yīng)路線A說明按照本發(fā)明的“第一種可供選擇的過程”，由化合物(22)制備甾族中間體(15)的過程，為說明起見，包括由化合物(16)制備化合物(22)。反應(yīng)路線A
在第二種可供選擇的過程中，本發(fā)明制備甾族化合物(15)的方法包括下述步驟(a)用對(duì)甲苯磺酰氯和堿如吡啶處理化合物(22)(3β，12β-二羥基-20，20-亞乙二氧基孕-5，14-二烯-12-乙酸酯)，產(chǎn)生下式的化合物3β，12β-二羥基-20，20-亞乙二氧基孕-5，14-二烯-3-甲苯磺?；?12-乙酸酯
(b)用溶劑如丙酮中的乙酸鉀處理化合物(26)，產(chǎn)生下式的化合物6β，12β-二羥基-20，20-亞乙二氧基-3，5α-環(huán)孕-14-烯-12-乙酸酯
(c)用還原劑如氫化鋁鋰和例如四氫呋喃處理化合物(27)，產(chǎn)生下式的化合物6β，12β-二羥基-20，20-亞乙二氧基-3，5α-環(huán)孕-14-烯
(d)用N-溴乙酰胺、選擇性采用的乙酸以及堿如吡啶處理化合物(28)，產(chǎn)生下式的化合物6β，12β-二羥基-14，15-環(huán)氧-3，5α-環(huán)孕烷
(e)用還原劑如氫化鋁鋰和如四氫呋喃處理化合物(29)，產(chǎn)生下式的化合物6β，12β，14β-三羥基-20，20-亞乙二氧基-3，5α-環(huán)孕烷
(f)用酸如鹽酸和溶劑如丙酮處理化合物(30)，產(chǎn)生化合物(15)。
反應(yīng)路線B顯示了按照本發(fā)明的“第二種可供選擇的過程”，由化合物(22)制備甾族中間體(15)的過程。反應(yīng)路線B
化合物(1)可由第一種糖中間體以活化單糖磁麻糖形式合成，所述活化單糖磁麻糖可由式(36)的化合物制備?；衔?36)可由包括下述步驟的方法制備(i)用苯甲醛和氯化鋅處理下式的甲基-α-D-葡萄糖
產(chǎn)生下式的化合物甲基-4，6-O-亞芐基-α-D-吡喃葡糖苷
(ii)在0℃下，用甲苯磺酰氯和吡啶處理化合物(32)，產(chǎn)生下式的化合物甲基-4，6-O-亞芐基-2-O-甲苯磺酰基-α-D-吡喃葡糖苷
(iii)在100℃下，用甲醇鈉處理化合物(33)，產(chǎn)生下式的化合物甲基-4，6-O-亞芐基-3-O-甲基-α-D-吡喃阿卓糖苷
(iv)用N-溴琥珀酰亞胺(NBS)處理化合物(34)，產(chǎn)生下式的化合物6-溴-4-O-苯甲?；?3-O-甲基-6-脫氧-α-D-吡喃阿卓糖苷
(v)用硼氫化鈉和二氯化鎳處理化合物(35)，產(chǎn)生下式的化合物甲基4-O-苯甲?；?3-O-甲基-6-脫氧-α-D-吡喃阿卓糖苷
本發(fā)明還提供了單糖磁麻糖形式的糖中間體的制備方法，該方法包含下述步驟(i)用PhSSiMe3、ZnI2和Bu4+I-處理化合物(36)，產(chǎn)生下式的化合物4-O-苯甲?；?3-O-甲基-6-脫氧-αβ-D-苯硫基阿卓糖苷
(ii)選擇性地，如在0℃下，用二乙氨基三氟化硫(DAST)處理化合物(37)，產(chǎn)生下式的化合物4-O-苯甲?；?3-O-甲基-2-苯硫基-2，6-二脫氧-αβ-D-氟代吡喃磁麻糖苷
或(iii)選擇性地，用溶劑如吡啶中的叔丁基二甲基甲硅烷基氯和咪唑處理化合物(37)，產(chǎn)生下式的化合物4-O-苯甲?；?3-O-甲基-2-O-叔丁基二甲基甲硅烷基-αβ-D-苯硫基阿卓糖苷
其中，Z＝TBDMS＝叔丁基二甲基甲硅烷基；(iv)用堿如甲醇鈉處理化合物(39)，產(chǎn)生下式的化合物3-O-甲基-2-O-叔丁基二甲基甲硅烷基-αβ-D-苯硫基阿卓糖苷
其中，Z＝TBDMS＝叔丁基二甲基甲硅烷基。
反應(yīng)路線C顯示了按照本發(fā)明由化合物(36)合成活化的單糖磁麻糖(40)的過程(為說明起見，包括由化合物(31)制備化合物(36)的過程)。反應(yīng)路線C
化合物(1)的合成也可采用活化單糖黃夾竹桃糖形式的第二種糖中間體，所述單糖黃夾竹桃糖可由式(47)的化合物制備?；衔?47)可通過下述方法制備，該方法包括下述步驟(i)用丙酮和磺酸處理下式的α-D-葡萄糖
產(chǎn)生下式的化合物1，25，6-二-O-亞異丙基-α-D-呋喃葡萄糖
(ii)用氫化鈉和甲基碘處理化合物(42)，產(chǎn)生下式的化合物1，25，6-二-O-亞異丙基-3-O-甲基-α-D-呋喃葡萄糖
(iii)用乙酸處理化合物(43)，產(chǎn)生下式的化合物3-O-甲基-αβ-D-吡喃葡萄糖
(iv)用甲醇和鹽酸處理化合物(44)，產(chǎn)生下式的化合物甲基3-O-甲基-αβ-D-吡喃葡糖苷
(v)用苯甲醛和氯化鋅處理化合物(45)，產(chǎn)生下式的化合物甲基4，6-O-亞芐基-3-O-甲基-αβ-吡喃葡糖苷
(vi)用N-溴琥珀酰亞胺、氯化鎳和硼氫化鈉處理化合物(46)，產(chǎn)生下式的化合物甲基4-O-苯甲?；?3-O-甲基-6-脫氧-αβ-吡喃葡糖苷
本發(fā)明提供了活化的單糖黃夾竹桃糖的制備方法，該方法包含下述步驟(i)用苯硫基三甲基硅烷和三甲基甲硅烷基三氟甲磺酸酯處理化合物(47)，產(chǎn)生下式的化合物4-O-苯甲?；?3-O-甲基-1-苯硫基-6-脫氧-αβ-吡喃葡糖苷
(ii)用新戊酰氯和一種溶劑如吡啶處理化合物(48)，產(chǎn)生下式的化合物4-O-苯甲酰基-3-O-甲基-2-O-新戊?；?1-苯硫基-6-脫氧-αβ-吡喃葡糖苷
(iii)用溴化劑如N-溴琥珀酰亞胺和二乙氨基三氟化硫處理化合物(49)，產(chǎn)生下式的化合物4-O-苯甲?；?3-O-甲基-2-O-新戊?；?1-氟-6-脫氧-β-吡喃葡糖苷，其為立體異構(gòu)體
反應(yīng)路線D顯示了按照本發(fā)明由化合物(48)合成活化的單糖磁麻糖((50A)和50(B))的過程(為說明起見，包括由化合物(41)制備化合物(47)的過程)。反應(yīng)路線D
按照本發(fā)明的另一個(gè)方面，提供了一種合成式(1)化合物和其類似物和衍生物的方法，該方法包括以下步驟合成適宜的甾族中間體或前體，將所需數(shù)量的單糖與甾族中間體進(jìn)行偶聯(lián)。
本發(fā)明也提供了單糖磁麻糖與甾族中間體的偶聯(lián)方法，該方法包括下述步驟(i)在氯化錫存在下，在溶劑如乙醚中，例如在-15℃下，使式(38)的磁麻糖與式(15)的甾族中間體進(jìn)行反應(yīng)，產(chǎn)生下式的化合物3-O-[4-O-苯甲?；?2-苯硫基-β-D-吡喃磁麻糖基]-12，14-β-二羥基孕-5-烯-20-酮
和(ii)用吡啶中的甲基巴豆酰氯然后用堿如甲醇鈉處理化合物(51)，產(chǎn)生下式的化合物3-O-[2-苯硫基-β-D-吡喃磁麻糖基]-12β-甲基巴豆?；?14β-羥基孕-5-烯-20-酮
本發(fā)明提供了一種下述方法，該方法包括下述步驟使單糖磁麻糖與單糖黃夾竹桃糖偶聯(lián)，將形成的二糖與結(jié)合的甾族產(chǎn)物(52)偶聯(lián)形成化合物(1)。
使單糖磁麻糖與單糖黃夾竹挑糖偶聯(lián)，并使形成的二糖與結(jié)合的甾族產(chǎn)物(52)進(jìn)行偶聯(lián)的方法可包括下述步驟(i)采用氯化錫和三氟甲磺酸銀，如在-15℃下，使選擇性保護(hù)的磁麻糖(40)與選擇性保護(hù)的黃夾竹桃糖(50A)偶聯(lián)，產(chǎn)生下式的化合物
其中，Z＝TBDMS＝叔丁基二甲基甲硅烷基；(ii)用四丁基氟化銨處理化合物(53)，產(chǎn)生下式的化合物
(iii)例如在0℃下，用二乙氨基三氟化硫處理化合物(54)，產(chǎn)生下式的化合物
(iv)使化合物(55)與化合物(52)反應(yīng)，產(chǎn)生下式的化合物
和(v)在阮內(nèi)鎳反應(yīng)中處理化合物(56)，再用堿如甲醇鈉處理，產(chǎn)生如上所述的化合物(1)。
反應(yīng)路線E顯示了用于合成中間體(52)和(55)并將它們偶聯(lián)形成化合物(56)的過程。反應(yīng)路線E
按照本發(fā)明，提供了另一種偶聯(lián)磁麻糖和黃夾竹桃糖以形成三糖，并使三糖偶聯(lián)到甾族衍生物上形成式(1)化合物的方法。
偶聯(lián)磁麻糖和黃夾竹桃糖以形成三糖，并使三糖偶聯(lián)到甾族衍生物上形成式(1)化合物的方法包括下述步驟(i)采用氯化錫、AgOTf、Cp2ZrCl2使選擇性保護(hù)的磁麻糖(40)與化合物(45)偶聯(lián)，產(chǎn)生下式的化合物
其中，Z＝TBDMS＝叔丁基二甲基甲硅烷基；(ii)用四丁基氟化銨和二乙氨基三氟化硫處理化合物(57)，產(chǎn)生下式的三糖化合物
(iii)采用氯化錫、AgOTf、Cp2ZrCl2使式(58)的三糖與下式的甾族中間體偶聯(lián)
產(chǎn)生化合物(1)。
反應(yīng)路線F顯示了合成三糖(58)的過程和通過偶聯(lián)三糖(58)與甾族中間體(59)合成化合物(1)的過程。反應(yīng)路線F
如上所述的中間體(23)、(24)、(25)、(27)、(28)、(29)、(30)、(37)、(38)、(39)、(40)、(48)、(49)、(50)、(51)、(53)、(54)、(55)、(56)、(57)和(58)為新化合物，本發(fā)明提供了這些化合物。
現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)化合物(1)3-O-[-β-D-吡喃黃夾竹桃糖基-(1→4)-β-D-吡喃磁麻糖基-(1→4)-β-D-吡喃磁麻糖基]-12β-O-甲基巴豆?；?14-羥基-14β-孕-5-烯-20-酮和其各種類似物和衍生物具有食欲抑制活性。
本發(fā)明也提供了具有食欲抑制劑活性的組合物或制劑，其中，活性成分為由Trichocaulon屬或火地亞屬植物獲得的提取物。
活性成分可為由Trichocaulon屬或火地亞屬植物提取的式(1)的化合物或其衍生物。所述植物可為Trichocaulon piliferum和Trichocaulon officinale種，或火地亞currorii、火地亞gordonii和火地亞lugardii種。
本發(fā)明也提供了具有食欲抑制劑活性的組合物或制劑，其中，活性成分為合成的式(1)化合物或其衍生物或類似物，如前述化合物(2)-(14)。
按照本發(fā)明的另一個(gè)方面，提供了抑制食欲的方法，包括向人或動(dòng)物給藥適宜劑量的含有Trichocaulon屬或火地亞屬植物提取物的食欲抑制劑。所述提取物可摻入組合物或制劑中，組合物或制劑也可含有可藥用的其它成分。
食欲抑制劑為如上所述具有下式的經(jīng)分離的天然化合物或合成的
食欲抑制劑組合物或制劑可由食欲抑制劑與可藥用賦形劑、稀釋劑或載體組成。根據(jù)需要，也可加入包括穩(wěn)定劑在內(nèi)的其它適宜的添加劑。
本發(fā)明還提供了化合物(1)或其衍生物或類似物在生產(chǎn)具有食欲抑制劑活性的藥物中的用途。
本發(fā)明還提供了用作具有食欲抑制劑活性藥物的如前所述化合物(1)或其衍生物或類似物。
本發(fā)明還提供了抑制食欲的方法，包括向人或動(dòng)物給藥有效劑量的如前所述組合物。
本發(fā)明描述了用于從由Trichocaulon屬或火地亞屬植物獲得的植物原料中提取具有食欲抑制劑活性的甾族糖苷的方法。因此，本發(fā)明提供了由Trichocaulon屬或火地亞屬植物原料獲得的提取物，其包含大量的純的式(1)甾族糖苷。
本發(fā)明也提供了食品或飲料，其包含在攝取時(shí)具有食欲抑制劑作用有效量的如前所述式(1)的甾族糖苷或其衍生物或類似物。
分子遺傳學(xué)研究已導(dǎo)致對(duì)食欲、安全性和體重的調(diào)節(jié)的認(rèn)識(shí)有顯著的增加。這些研究已披露了很多種由神經(jīng)肽介導(dǎo)的中樞調(diào)節(jié)途徑。通過能量攝取、食物消耗和能量支出間復(fù)雜的平衡，可實(shí)現(xiàn)保持正常的體積。能量的體內(nèi)平衡受各種因素影響，并最終受大腦的控制。不同的信號(hào)包括諸如氣味和味覺及胃腸信號(hào)如胃腸道膨脹，對(duì)胃粘膜和血生成代謝物如脂肪酸和葡萄糖的化學(xué)信號(hào)。
總體說來，通過菜普亭(leptin)負(fù)向調(diào)節(jié)的神經(jīng)肽“Y”(NPY)已被看作是進(jìn)食行為的正向調(diào)節(jié)器。黑皮質(zhì)素(melanocortin)受體的內(nèi)源性拮抗劑的表達(dá)也顯示出是特定模型(ob/ob鼠)肥胖的基礎(chǔ)。在MC4黑皮質(zhì)素受體中的明顯不足完全與肥胖癥吻合。其它顯示出在能量平衡方面具有作用的傳遞質(zhì)介體包括盤舌蟾素、galonin、高血糖素樣肽-1。
盡管不受理論的限制，但本申請(qǐng)人相信，如前所述的化合物可其類似物可用作黑皮質(zhì)素4受體的激動(dòng)劑。這種作用可調(diào)節(jié)NPY但也會(huì)增加縮膽囊素。其中，縮膽囊肽的作用是抑制胃排空。
因而，本發(fā)明提供了具有食欲抑制劑活性的組合物，其包含黑皮質(zhì)素4受體激動(dòng)劑。
所述激動(dòng)劑可為如前所述的提取物或化合物，特別是式(1)的化合物。該組合物可包含可藥用賦形劑、稀釋劑或載體，并選擇性地制備成單位劑量形式。
本發(fā)明還提供了黑質(zhì)皮素4受體激動(dòng)劑在生產(chǎn)具有食欲抑制劑活性的藥物中的用途，提供了用作具有食欲抑制劑活性的藥物的黑質(zhì)皮素4受體激動(dòng)劑，提供了抑制食欲的方法，包括向人或動(dòng)物給予有效劑量的如前所述含有黑皮質(zhì)素4激動(dòng)劑的組合物，提供了黑質(zhì)皮素4受體激動(dòng)劑在人或動(dòng)物中抑制食欲和/或減肥的用途。
以下，參考下述實(shí)施例和附圖，將對(duì)本發(fā)明和其效力進(jìn)行進(jìn)一步的描述，但它們并不構(gòu)成對(duì)本發(fā)明的限定。
在附圖中，

圖1顯示了從Trichocaulon屬或火地亞屬植物原料中提取第一種粗食欲抑制劑提取物和提純的食欲抑制劑提取物的一般方法的流程圖；圖2顯示了生物試驗(yàn)的圖示說明，所述生物試驗(yàn)采用部分提純的Trichocaulon piliferum的甲醇提取物在大鼠上進(jìn)行的；圖3和圖4均顯示了本發(fā)明優(yōu)選實(shí)施方案用于從Trichocaulon屬或火地亞屬的植物原料生產(chǎn)提取物的方法的圖解的說明；圖5和圖6顯示了在重復(fù)劑量研究中分別在-7至7天和0-7天對(duì)不同組別的大鼠體重變化百分?jǐn)?shù)的圖示說明，實(shí)驗(yàn)中采用了由火地亞gordonii種植物原料的汁液提取物和噴霧干燥的汁液提取物。
實(shí)施例1
從Trichocaulon屬或火地亞屬植物原料中提取第一種粗食欲抑制劑提取物和提純的食欲抑制劑提取物的一般方法由圖1的流程圖說明。
實(shí)施例2采用在實(shí)施例1中所述方法獲得的部分提純的甲醇提取物對(duì)大鼠進(jìn)行生物試驗(yàn)，結(jié)果表明，所述提取物確實(shí)顯示出食欲抑制劑活性?；钚蕴崛∥锏氖秤种苿┗钚钥山柚趫D2，由Trichocaulonpiliferum的甲醇提取物對(duì)大鼠的作用的典型實(shí)例來說明。
從圖2證實(shí)，受試組的服用提取物的大鼠在第5天時(shí)顯示出比以后2天實(shí)際減少了食物攝取，而對(duì)照組并未顯示出可比較的食物攝取減少。從第8天起，受試組的食物攝取正常，事實(shí)上增加了。
實(shí)施例3本發(fā)明用于生產(chǎn)具有食欲抑制劑活性的方法的優(yōu)選實(shí)施方案由圖3和圖4進(jìn)行圖示說明，這兩個(gè)附圖一起說明復(fù)雜的過程。但是，可以采用各種其它過程，如本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的那樣。
參看圖3，通過進(jìn)料管1，將Trichocaulon屬或火地亞屬植物原料加至混合器3如Waring混合器中，經(jīng)進(jìn)料管2加入二氯甲烷/甲醇溶液形式的溶劑。均化的產(chǎn)品經(jīng)管路4加入分離裝置5如過濾器或離心器中，將殘余物的植物原料經(jīng)管路27除去。
經(jīng)管路6將溶劑/提取物混合物加至蒸發(fā)裝置7中，在此，除去溶劑，例如采用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器。干燥后的粗提取物經(jīng)管路8加入另一個(gè)提取裝置9中，再經(jīng)管路29加入二氯甲烷/水溶液進(jìn)行進(jìn)一步提取，然后，經(jīng)管路11加至分離裝置13中，其中，含水餾分經(jīng)管路31除去。溶解后的提取物餾分經(jīng)管路15加至干燥裝置17中，在此，通過例如旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器使溶劑蒸發(fā)。
參看圖4，干燥后的提取物經(jīng)管線10加至提取裝置12中。經(jīng)管路14向提取裝置12中加入甲醇/己烷溶液，以對(duì)干燥后的提取物進(jìn)行進(jìn)一步提純。經(jīng)管路16將提取物/甲醇/己烷混合物加至分離裝置18中，己烷餾分經(jīng)管路20除去，然后，甲醇/提取物混合物經(jīng)管路22加至干燥裝置24中。在干燥裝置24中，通過蒸發(fā)過程如旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器將溶劑除去。
干燥并部分提純的活性提取物經(jīng)管路26與經(jīng)管路28的其余甲醇一起加至溶解裝置30中，溶解的餾分經(jīng)管線36加至色譜柱38中。
在色譜柱38中，甲醇可溶解的餾分進(jìn)一步進(jìn)行色譜分離，采用硅膠和氯仿/30％甲醇溶劑，分成不同的餾分，如餾分I至V所示意說明。按照本申請(qǐng)人進(jìn)行的實(shí)際色譜分離過程，色譜分離過程產(chǎn)生了下述餾分重量I(3.9g)；II(2.6g)；III(2.1g)；IV(1.1g)和V(2.0g)。這些餾分通過適宜的生物試驗(yàn)過程(在未示出的步驟中)逐個(gè)進(jìn)行評(píng)價(jià)，這些餾分確定為餾分I和II，顯示出突出的食欲抑制劑活性，將餾分I和II分別通過進(jìn)料管40和42加至柱44和46中，在柱中它們進(jìn)一步通過柱色譜進(jìn)行色譜分離和提純，再次采用硅膠和9∶1的氯仿∶甲醇體系。
測定時(shí)，從柱44獲得的亞餾分II(A)-(C)顯示出顯著的食欲抑制劑活性，并且，可將其再循環(huán)以進(jìn)行色譜處理。
同時(shí)對(duì)從柱46獲得的亞餾分I(A)-(L)進(jìn)行評(píng)價(jià)(通過未示出的步驟)，亞餾分I(C)顯示出具有突出的食欲抑制劑活性。
經(jīng)管路48將亞餾分I(C)加至柱50中進(jìn)行色譜分離和純化，采用硅膠和9∶1乙酸乙酯∶己烷洗脫液。在形成的提純的餾分中，測定后發(fā)現(xiàn)，餾分I(C)(ii)具有突出的食欲抑制劑活性。
提純后的產(chǎn)物通過核磁共振光譜進(jìn)行鑒別(如下表1和表2)后為化合物(1)。表1化合物(1)的CDCl3數(shù)據(jù)1H(300.13MHzz)n.m.r.
化合物(1)氫原子J(HH)/Hz δH/p.p.m.糖苷配基-3- 3.522 m6 - 5.381 m1211.5，4.1 4.607 dd179.3，9.33.157 dd18- 1.029 s19- 0.951 s21- 2.164 s3*7.1，1.56.888 qq4*7.1，1.21.806 dq5*1.6，1.21.853 dqCym-1′ 9.4，2.14.816 dd2′ 13.8，3.7，2.1 2.055 ddd2′aq13.8，9.4，2.6 1.552 ddd3′ax3.7，2.9，2.6 3.776 ddd4′ 9.4，2.93.179 dd5′ 6.3，9.43.821 dd6′ 6.3 1.279 da3′-OMe - 3.408 sd1″ 9.4，2.14.730 dd2″ 13.8，3.7，2.1 2.108 ddd2″aq13.8，9.4，2.6 1.601 ddd3″ax3.7.2.9，2.63.755 ddd4″ 9.4，2.93.239 dd5″ 6.3，9.43.898 dd6″ 6.3 1.243 db3″-OMe - 3.392 seThev-1 7.7 4.273 d2 7.7，8.03.469 dd3 8.0.2.9 3.099 dd4 9.3，2.93.179 dd5 6.3，9.33.351 dd6 6.3 1.183 d′c3-OMe - 3.622 s在每一欄中a，b，c可互換.在每一欄中d，e可互換*指甲基巴豆酸酯基團(tuán)原子表2在CDCl3中化合物(1)的相對(duì)13C(75.25MHzz)n.m.r.數(shù)據(jù)糖苷配基部分 糖部分碳δC/p.p.m. 碳δC/p.p.m.1 37.04 T cym-1′ 95.84 D2 29.44 T 2′ 35.57 T3 77.24 D 3′ 77.05 D4 38.62 T 4′ 82.57 D5 138.95 S 5′ 68.48 D6 131.90 D 6′ 18.14 Q7 27.30 T 3′-OMe57.93 Q8 35.30 D 1″ 99.54 D9 43.04 D 2″ 35.17 T1037.22 S 3″ 76.99 D1126.04 T 4″ 82.52 D1275.88 D 5″ 68.30 D1353.71 S 6″ 18.36 Q1485.69 S 3″-OMe57.09 Q1534.36 T Thev-1 104.28 D1624.31 T 2 74.62 D1757.18 D 3 85.30 D189.85 Q 4 74.62 D1919.27 Q 5 71.62 D20216.85 S 6 17.75 Q2133.01 Q 3-OMe60.60 Q1*167.60 S2*128.69 D3*137.66 D4*14.41 Q5*12.08 Q*指甲基巴豆酸酯基團(tuán)原子化合物(1)IR數(shù)據(jù)3440cm-1(OH)，2910cm-1(CH)，1700cm-1(C＝0)[αD]20589＝12,67°(C＝3，CHCl3)m.p.147℃-152℃
實(shí)施例4-13說明合成過程，從而中間體化合物和甾族化合物(15)可按照“第一種供選擇的過程”制備。
實(shí)施例412β，15α-二羥基孕酮(17)將包含蔗糖(900g)、碳酸氫二鉀(30g)、蔡氏培養(yǎng)基濃縮液(300mL)、玉米浸泡液(300mL)和蒸餾水(30L)的培養(yǎng)介質(zhì)進(jìn)行接種制得德可拉麗赤殼(ATCC 14767)的培養(yǎng)物(150×500mL燒瓶)。在26℃下振搖5天后，將孕酮(16)(150g)在吐溫80中的懸浮液(0.1％溶液，1.5L)加至燒瓶中。將培養(yǎng)物進(jìn)一步培養(yǎng)5天，然后進(jìn)行離心、潷析及用氯仿萃取，蒸發(fā)，得到二羥基孕酮(17)(75g，45％)。
1H NMR(CDCl3)5,71(1H，s，H-4)；4,12-4,22(1H，m，H-15)4,43(1H，br，s，OH)；3,46-3,53(1H，dd，J＝4,6Hz，H-12)；2,16Hz(3H，s，H-21)；1,18(3H，s，H-19)；0,74(3H，s，H-18)實(shí)施例512β-羥基-15α-(對(duì)甲苯磺酰基)-孕酮(18)將二羥基孕酮(17)(75g，0.22mol)溶解于無水吡啶(300mL)中，并冷卻至0℃。在0℃下，將無水吡啶(200mL)中的對(duì)甲苯磺酰氯(46g，0.24mol)滴加至反應(yīng)混合物中。在0℃下過夜攪拌反應(yīng)混合物，加入水(500mL)使反應(yīng)停止。水層用乙酸乙酯(1L)萃取，有機(jī)層用鹽酸(6M，3×1L)、碳酸氫鈉飽和水溶液(500mL)、氯化鈉飽和水溶液(500mL)和水(500mL)洗滌。有機(jī)層用硫酸鎂干燥，過濾，蒸發(fā)，得到對(duì)甲苯磺?；型?18)(98g，92％)，為粘性暗黃色油。1H NMR(CDCl3)7,7(2H，d，J＝14Hz，H-2,6)；7,34(2H，d，J＝8,4Hz，H-3,5)；5,67(1H，s，H-4)；4,86-4,93(1H，m，H-15)；3,45-3,50(1H，dd，J＝4,6Hz，H-12)；2,44(3H，s，H-4Me)；2,15(3H，s，H-21)1,13(3H，s，H-19)；0,74(3H，s，H-18).
實(shí)施例612β-羥基-Δ14-孕酮(19)將甲苯磺酸化的孕酮(18)(98g，0.19mol)的2，4，6-三甲基吡啶(500mL)溶液在150℃下回流3小時(shí)。將反應(yīng)混合物冷卻，并倒入水(500mL)中。水層用乙酸乙酯(1L)萃取，此后，有機(jī)層用鹽酸(6M，3×1L)、碳酸氫鈉飽和水溶液(500mL)、氯化鈉飽和水溶液(500mL)和水(500mL)洗滌。在用硫酸鎂干燥和過濾后，蒸發(fā)出乙酸乙酯，粗混合物用硅膠色譜提純，用丙酮∶氯仿(1∶10)洗脫，得到Δ14-孕酮(19)(50g，78％)，為暗紅色油。1H NMR(CDCl3)5,73(1H，s，H-4)，5,28(1H，dd，J＝2,2Hz，H-15)，4,41(1H，br，s，OH)，3,49-3,52(1H，dd，J＝4,3Hz，H-12)，2,80-2,84(1H，dd，J＝9,2Hz，H-17)，2,14(3H，s，H-21)，1,19(3H，s，H-19)，0.89(3H，s，H-18).
實(shí)施例73，12β-二乙酰氧基-孕-3，5，14-三烯-20-酮(20)將Δ14-孕酮(19)(50g，0.15mol)在乙酰氯(1.5L)和乙酸酐(750mL)中的溶液回流2小時(shí)。將反應(yīng)混合物倒入冷的乙酸乙酯(1L)中，攪拌下加入飽和碳酸氫鈉水溶液，直至停止冒泡。從碳酸氫鈉層中分離出乙酸乙酯層，用部分碳酸氫鈉水溶液(3×700mL)、再用飽和氯化鈉水溶液(700mL)、最后用水(700mL)洗滌。有機(jī)層用硫酸鎂干燥，過濾，蒸發(fā)，得到3，12β-二乙酰氧基-孕-3，5，14-三烯-20-酮(20)(60g，93％)，為橙色油。1H NMR(CDCl3)5,68(1H，s，H-4)，5,44(1H，m，H-6)，5,31(1H，dd，J＝2,2Hz，H-15)，4,82-4,86(1H，dd，J＝4,5Hz，H-12)，3,10-3,18(1H，t，J＝9,5Hz，H-17)，2,18(3H，s，3-Ac)，2,11(3H，s，12-Ac)，2,08(3H，s，H-21)，1,02(3H，s，H-19)，1,01(3H，s，H-18)
實(shí)施例83，12β-二乙酰氧基-20，20-亞乙二氧基孕-3，5，14-三烯(21)將二乙酰氧基化合物(20)(60g，0.14mol)溶解于苯(1L)中，加入乙二醇(60mL)和對(duì)甲苯磺酸(1g)。(苯預(yù)先用Dean-Stark捕集器進(jìn)行過回流)?；旌衔镌跀嚢柘逻M(jìn)行回流，經(jīng)恒沸除去水16小時(shí)。向冷卻后的溶液中加入飽和碳酸氫鈉水溶液(500mL)。然后，將其用鹽水(500mL)和水(500mL)洗滌，用硫酸鎂干燥。蒸出溶劑，粗混合物用硅膠柱色譜提純，用乙酸乙酯∶己烷(2∶8)洗脫，得到亞乙二氧基孕-3，5，14-三烯(21)(35g，53％)。
1H NMR(CDCl3)5,68(1H，s，H-4)，5,45(1H，m，H-6)，5,31(1H，dd，J＝2,2Hz，H-15)，4,73-4,85(1H，dd，J＝4,4Hz，H-12)，3,78-3,98(4H，m，亞乙二氧基)，2,16(3H，s，3-Ac)，2,04(3H，s，12-Ac)，1,29(3H，s，H-21)，1,12(3H，s，H-19)，1,02(3H，s，H-18).
實(shí)施例93β，12β-二羥基-20，20-亞乙二氧基孕-5，14-二烯-12-乙酸酯(22)將二烯醇乙酸酯(21)(35g，0.077mol)懸浮于乙醇(500mL)中，在0℃下加入硼氫化鈉(2.8g，0.074mol)。將混合物升溫至室溫，攪拌過夜。大多數(shù)的溶劑經(jīng)真空除去，將混合物用水(500mL)稀釋，用乙酸乙酯(500mL)萃取，再用硅膠進(jìn)行色譜處理，用丙酮/氯仿(1∶10)洗脫，得到3β-醇(22)(25g，80％)。
1H NMR(CDCl3)5,41(1H，m，H-6)，5,28(1H，dd，J＝2,2Hz，H-15)，4,72-4,81(1H，dd，J＝4,4Hz，H-12)，3,82-4,02(4H，m，亞乙二氧基)，3,45-3,59(1H，m，H-3)，2,03(3H，s，12-Ac)，1,28(3H，s，H-21)，1,10(3H，s，H-19)，1,01(3H，s，H-18).
實(shí)施例103β，12β-二羥基-20，20-亞乙二氧基孕-5，14-二烯(23)將無水四氫呋喃(300mL)中的3β-醇(22)(25g，60.2mmol)滴加至氫化鋁鋰(2.7g，72.2mmol)的無水四氫呋喃(500mL)懸浮液中。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌24小時(shí)，此后，小心地加入水(2.7mL)，繼續(xù)攪拌10分鐘。再中入氫氧化鈉(15％溶液，2.7mL)，攪拌懸浮液。10分鐘后，加入水(8.1mL)，再攪拌懸浮液10分鐘，過濾，用干燥(硫酸鎂)，蒸出溶劑，得到3β，12β-二羥基-孕-二烯(23)(20g，90％)。
1H NMR(CDCl3)5,36(1H，m，H-6)，5,23(1H，dd，J＝2,2Hz，H-15)，3,94-4,06(4H，m，亞乙二氧基)，3,41-3,52(1H，m，H-3)，3,32-3,36(1H，dd，J＝4,3Hz，H-12)，1,31(3H，s，H)1,01(3H，s，H-19)，0,96(3H，s，H-18).13C NMR(CDCl3)152,4(C-14)，140,2(C-5)，121,1(C-15)119,7(C-6)，111,1(C-20)，79,8(C-12)，71,6(C-3)，63,7 and 63,6(亞乙二氧基)，58,8(C-17)，19,0(C-19)，11,9(C-18).3β，12β-二羥基-14，15-環(huán)氧-20，20-亞乙二氧基孕-5-烯和3β，12β-二羥基-5，6-環(huán)氧-20，20-亞乙二氧基孕-14-烯在0℃下，將N-溴乙酰亞胺(211mg，1.5mmol)加至攪拌中的5，14-二烯(23)(500mg，1.34mol)在丙酮(100mL)、乙酸(2.5mL)和水(5mL)中的溶液中。15分鐘后，向反應(yīng)混合物中加入亞硫酸鈉(5％溶液，50mL)。蒸出丙酮，水層用二氯甲烷(3×50mL)萃取。有機(jī)層用硫酸鎂干燥，過濾，蒸發(fā)。向產(chǎn)物中加入吡啶(1mL)，攪拌0.5小時(shí)。然后，向反應(yīng)混合物中加入二氯甲烷(100mL)，二氯甲烷相用檸檬酸(5％溶液，3×100mL)、飽和碳酸氫鈉(50mL)和水(50mL)洗滌。有機(jī)層用硫酸鎂干燥，過濾，蒸發(fā)，得到14，15-和5，6-環(huán)氧化物的混合物(360mg，69％)，為白色泡沫物。通過硅膠柱色譜不能將環(huán)氧化物的混合物分開。
實(shí)施例113β，12β-二羥基-14，15-環(huán)氧-20，20-亞乙二氧基孕-5-烯(24)將在無水四氫呋喃(200mL)中的14，15-和5，6-環(huán)氧化物的混合物(14.4g，37.0mmol)加至氫化鋁鋰(1.69g，44.4mmol)的無水四氫呋喃(300mL)懸浮液中。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌24小時(shí)，此后，通過加入水(1.69mL)和氫氧化鈉(15％溶液，1.69mL)，按照前述進(jìn)行處理。過濾后，蒸除溶劑，粗產(chǎn)物用硅膠柱色譜提純，采用甲醇/氯仿(1∶9)作為溶劑，得到未反應(yīng)的14，15-環(huán)氧-20，20-亞乙二氧基孕-5-烯(24)(300mg，2.1％)。
1H NMR(CDCl3)5,31(1H，m，H-6)，3,82-3,98(4H，m，亞乙二氧基)，3,43-3,52(1H，m，H-3)，3,41(1H，s，H-15)，3,31-3,35(1H，dd，J＝4,3Hz，H-12)，1,29(3H，s，H-21)，1,17(3H，s，H-19)，1,02(3H，s，H-18).
13C NMR(CDCl3)139,8(C-5)，120,8(C-6)，112,1(C-20)，77,2(C-12)，75,4(C-14)，61,0(C-15)，22,3(C-21)，19,2(C-19)，9,5(C-18).
實(shí)施例123β，12β，14β-三羥基-20，20-亞乙二氧基孕-5-烯(25)將無水四氫呋喃(10mL)中的14，15-環(huán)氧化物(300mg，0.77mmol)加至氫化鋁鋰(300mg，7.89mmol)的四氫呋喃懸浮液中，將反應(yīng)混合物回流48小時(shí)。在加入水(0.3mL)、氫氧化鈉(15％溶液，0.3mL)后，如前所述進(jìn)行過濾，將混合物用硅膠柱色譜純化，采用甲醇∶氯仿(1∶9)作為溶劑，得到三羥基孕烯(25)(250mg，83％)。
1H NMR(CDCl3)5,38(1H，m，H-6)，3,98(4H，m，亞乙二氧基)，3,43-3,53(1H，m，H-3)，3,25-3,32(1H，dd，J＝4,1Hz，H-12)，1,32(3H，s，H-21)，1,01(3H，s，H-19)，0,98(3H，s，H-18)13C NMR CDCl3)139,1(C-5)，122,1(C-6)，112,2(C-20)，85,1(C-14)，75,1(C-12)，71,6(C-3)，23,4(C-21)，19,4(C-19)，8,9(C-18)實(shí)施例133β，12β，14β-三羥基-孕-5-烯(15)將亞乙二氧基孕烯(25)(250mg，0.64mmol)溶解于乙酸(13.4mL)和水中，冷凍干燥后，得到三羥基甾族化合物(15)(200mg，89％)，m.p.228-235℃(lit 225-235℃)，M+348，[αD]20+35°(lit[αD]20+39°)。
1H NMR(CDCl3)5,39(1H，m，H-6)，3,56-3,62(1H，t，J＝8,1Hz，H-17)，3,42-3,51(1H，m，H-3)，3,28-3,39(1H，dd，J＝4,3Hz，H-12)，2,23(3H，s，H-21)，1,01(3H，s，H-19)，0,90(3H，s，H-18)13C NMR(CDCl3)217,7(C-20)，138,9(C-5)，122,2(C-6)，85,5(C-14)，73,6(C-12)，71,6(C-3)，57,0(C-17)，55,1(C-13)，43,6(C-9)，42,1(C-4)，37,3(C-1)，36,8(C-10)，35,9(C-8)，34,5(C-15)，32,9(C-21)，31,5(C-16)，30,1(C-2)，27,4(C-7)，24,4(C-11)，19,4(C-19)，8,3(C-18).
實(shí)施例14-19說明了合成過程，從而中間體化合物和甾族化合物(15)可按照“第二種供選擇的過程”制備。
實(shí)施例1420，20-亞乙二氧基-3β-甲苯-對(duì)-磺酰氧基孕-5，14-二烯-12β-醇乙酸酯(26)在0℃下，將對(duì)甲苯磺酰氯(650mg，3.4mmol)的吡啶(10mL)溶液滴加至20，20-亞乙二氧基孕-5，14-二烯-3β，12β-二醇12-乙酸酯(22)(1.3g，3.1mmol)在吡啶(15mL)中的混合物中。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌24小時(shí)，此后，向反應(yīng)混合物中加入水。溶液用乙酸乙酯萃取(2×50mL)，乙酸乙酯層用檸檬酸(5×50mL)、飽和碳酸氫鈉水溶液(100mL)、飽和氯化鈉水溶液(100mL)和水(100mL)洗滌。乙酸乙酯層用硫酸鎂干燥，過濾，蒸發(fā)，用快速柱色譜提純，采用己烷-乙酸乙酯(8∶2v/v)作為洗脫劑，得到β-O-甲苯磺?；拮寤衔?26)(1.5g，84％)，為黃色油(C32H42O7S的M實(shí)測值570.271，計(jì)算值570.273)。
δH1.021(3H，s，19-H)，1.131(3H，s，18-H)，1.282(3H，s，21-H)，2.021(乙酸酯基OCH3)，2.431(3H，s，Ar-CH3)，3.883(4H，m，OCH2CH2O)，4.750(1H，dd，3J 10.8Hz，5.2Hz，12-H)，4.890(1H，m，30H)，5.281(1H，dd，3 J4.2Hz，2.1Hz，15-H)，5.388(1H，m，6-H)，7.341(2H，d，3J 8.2Hz，ArH)，7.746(2H，d，3J 8.2Hz，ArH).
δC13.493Q(C-18)，19.002Q(C-19)，21.612Q(Ar-甲基)*，21.671Q(C-21)*，24.175Q(乙酸酯甲基)，63.401T(亞乙二氧基)，63.498T(亞乙二氧基)，71.531S(C-13)，80.912D(C-12)，82.531D(C-3)，111.363S(C-20)，120.881D(C-15)，121.461D(C-6)，123.715-133.917(芳基)，139,903S(C-14)，151,722S(C-5)，170.819S(酯羰基)。
*可互換實(shí)施例1520，20-亞乙二氧基-3α，5-環(huán)-5α-孕-14-烯-6β，12β-二醇-12-乙酸酯(27)將3β-甲苯-對(duì)-磺酰氧基孕-5，14-二烯(26)(1.2g，2.1mmol)和乙酸鉀(2.2g，22.4mmol)在水(250mL)和丙酮(500mL)中的溶液在60℃下回流16小時(shí)。蒸出丙酮，水層用乙酸乙酯萃取(200mL)。乙酸乙酯層用硫酸鎂干燥，過濾，蒸發(fā)。對(duì)混合物進(jìn)行快速色譜分離，用氯仿-丙酮(9∶1v/v)作為洗脫劑，得到3α，5-環(huán)衍生物(27)(530mg，61％)，為黃色油(C25H36O5的M實(shí)測值416.262，計(jì)算值416.263)。
δH0.288(1H，dd，3J 8.1Hz，4.9Hz，4-Ha)，0.477(1H，dd，3J 4.4Hz，4.4Hz，4-Hb)，1.025(3H，s，19-H)，1.121(3H，s，18-H)，1.256(3H，s，21-H)，1.989(3H，s，乙酸酯基-CH3)，3.302(1H，dd，3J 2.8Hz 2.8Hz，6-H)，3.784-3.947(4H，m，OCH2CH2O)，4.721(1H，dd，3J8.5Hz，5.6Hz，12-H)，5.232(1H，dd，3J 3.9Hz，1.9Hz，15-H).
δC11.678T(C-4)，12.298Q(C-18)，19.971Q(C-19)，
23.623Q(C-21)，24.153Q(乙酸酯甲基)，63.100T(亞乙二氧基)，63.788T(亞乙二氧基)，73.591D(C-6)，80.551D(C-12)，111.126S(C-20)，118.778D(C-15)，152.959S(C-14)，170.991S(酯羰基)。
實(shí)施例1620，20-亞乙二氧基-3α，5-環(huán)-5α-孕-14-烯-6β，12β-二醇(28)將3α，5-環(huán)衍生物(27)(500mg，1.2mmol)的四氫呋喃(20mL)溶液滴加至氫化鋁鋰(50mg，1.3mmol)的四氫呋喃(10mL)懸浮液中。將反應(yīng)混合物攪拌4小時(shí)，加入水(50μL)使反應(yīng)停止。30分鐘后，加入氫氧化鈉(15％溶液，50μL)，繼續(xù)攪拌30分鐘。加入水(150μL)，將反應(yīng)混合物過濾。四氫呋喃用硫酸鎂干燥，過濾，蒸發(fā)和快速色譜提純，采用氯仿-丙酮(8∶2v/v)作洗脫劑，得到二醇(28)(370mg，83％)，為一種油(C23H34O4的M實(shí)測值374.250，計(jì)算值374.252)。
δH0.298(1H，dd，3J 8.1Hz，4.9Hz，4-H2)，0.510(1H，dd，3J 4.4Hz，4.4Hz，4-Hb)，0.985(3H，s，19-H)，1.055(3H，s，18-H)，1.325(3H，s，21-H)，3.318(1H，dd，3J 3.0Hz，3.0Hz，6-H)，)，3.363(1H，dd，3J 11.4Hz，4.2Hz，12-H)，4.019(4H，m，OCH2Ch2O)4.622(1H，s，OH)，5.255(1H，dd，3J 3.9Hz，1.9Hz，15-H).
δC11.681T(C-4)，12.243Q(C-18)，19.844Q(C-19)，23.604Q(C-21)，63.620T(亞乙二氧基)，63.733T(亞乙二氧基)，73.569D(C-6)，77.478D(C-12)，111.125S(C-20)，118.702D(C-15)，152.912S(C-14).
實(shí)施例1720，20-亞乙二氧基-14，15β-環(huán)氧-3α，5-環(huán)-5α，14β-孕烷-6β，12β-二醇(29)在0℃下，將N-溴乙酰亞胺(150mg，1.1mmol)加至20，20-亞乙二氧基-3α，5-環(huán)-5α-孕-14-烯-6β，12β-二醇(28)(340mg，0.91mmol)的丙酮(20mL)、水(0.25mL)和乙酸(0.25mL)溶液中。15分鐘后，向反應(yīng)混合物中加入亞硫酸鈉(5％溶液，20mL)。減壓蒸出丙酮，殘余的溶液用二氯甲烷(3×30mL)萃取。二氯甲烷層用硫酸鎂干燥，過濾，蒸發(fā)至濃縮體積(50mL)。向混合物中加入吡啶(0.5mL)，繼續(xù)攪拌1小時(shí)，此后，二氯甲烷層用檸檬酸溶液(5％，3×30mL)、飽和碳酸氫鈉水溶液(30mL)和水(30mL)洗滌。二氯甲烷層用硫酸鎂干燥，過濾，蒸發(fā)，用快速柱色譜提純，用氯仿-甲醇(9.5∶0.5v/v)作為洗脫劑，得到環(huán)氧化物(29)(180mg，51％)為一種泡沫物(C23H34O2的M實(shí)測值390.245，計(jì)算值390.247)。
δH0.287(1H，dd，3J 8.1Hz，4.9Hz，4-Ha)，0.501(1H，dd，3J 4.4Hz，4.4Hz，4-Hb)，0.978(3H，s，19-H)，1.048(3H，s，18-H)，1.321(3H，s，21-H)，3.318(1H，dd，3J 3.1Hz，3.1Hz，6-H)，)，3.355(1H，dd，3J11.2Hz，4.1Hz，12-H)，3.491(1H，s，15-H)，4.001(4H，m，OCH2Ch2O)，4.901(1H，s，OH).
δC11.668T(C-4)，11.973Q(C-18)，19.515Q(C-19)，23.519Q(C-21)，59.910D(C-15)，63.601T(亞乙二氧基)，63.713T(亞乙二氧基)，72.501S(C-14)，73.571D(C-6)，77.471D(C-12)，111.085S(C-20).
實(shí)施例1820，20-亞乙二氧基-6β，12β，14-三羥基-3α，5-環(huán)-5α，14β-孕烷(29)將環(huán)氧化物(29)(170mg，0.44mmol)的四氫呋喃(10mL)溶液加至氫化鋁鋰(20mg，0.53mmol)的四氫呋喃(5mL)懸浮液中。將反應(yīng)混合物回流2小時(shí)，此后，加入水(20μL)，繼續(xù)攪拌0.5小時(shí)。加入氫氧化鈉(15％，20μL)，再攪拌0.5小時(shí)。再加入水(60μL)，將懸浮液攪拌1小時(shí)。過濾后，懸浮液用硫酸鎂干燥，過濾，蒸出四氫呋喃。對(duì)形成的混合物進(jìn)行快速色譜分離，用氯仿-甲醇(9∶1v/v)洗脫，得到所需的三醇(30)(90mg，53％)，為一種澄清油(C23H38O5的M實(shí)測值392.261，計(jì)算值392.263)。
δH0.287(1H，dd，3J 8.1Hz，4.9Hz，4-H2)，0.510(1H，dd，3J 4.4Hz，4.4Hz，4-Hb)，0.971(3H，s，19-H)，1.042(3H，s，18-H)，1.319(3H，s，21-H)，3.321(1H，dd，3J 3.0Hz，3.0Hz，6-H)，3.321(1H，dd，3J 11.1Hz，3.9Hz，12-H)，3.561(1H，s，OH)，4.084(4h，m，OCH2Ch2O)4.671(1H，s，OH).
δC11.668T(C-4)，11.971Q(C-18)，19.511Q(C-19)，23.520Q(C-21)，63.612T(亞乙二氧基)，63.711T(亞乙二氧基)，73.483D(C-6)，76.051D(C-12)，84.307S(C-14)，111.099S(C-20).
實(shí)施例193β，12β，14-三羥基-14β-孕-5-烯-20-酮(15)將三醇(30)(80mg，0.20mmo1)在丙酮(20mL)和鹽酸(1M，10mL)中的混合物在60℃下回流2小時(shí)。將反應(yīng)混合物冷卻，加入飽和碳酸氫鈉溶液(20mL)。蒸出丙酮，水層用氯仿(3×20mL)萃取，氯仿層用硫酸鎂干燥，過濾，蒸發(fā)，得到差向異構(gòu)體三羥基甾族化合物(15a，15b)(42mg，61％)。通過快速色譜分離(采用氯仿∶甲醇9∶1(v/v)作洗脫劑)，將差向異構(gòu)體混合物(15a，15b)(15mg)分離開，得到純的17β-差向異構(gòu)體(15a)(10mg)，m.p.224-229℃(丙酮)，(lit 226-223℃)(C21H32O4的實(shí)測值M 348.234；C 72.32；H 9.21％；計(jì)算值C 72.38；H 9.26％；M 348.236)；還得到17α-差向異構(gòu)體(15b)(10mg)，m.p.183-191℃(丙酮)，(lit 184-196℃)。
3β，12β，14-三羥基-14β-孕-5-烯-20-酮(15a)δH0.963(1H，s，19-H)，1.192(3H，s，18-H)，2.236(3H，s 21-H)，3.325(1H，dd，3J 11.2Hz，3.9Hz，12-H)，3.464(1H，s，OH)，3.5140(1H，m，3-H)，3.598(1H，dd，3J 9.6Hz，9.6Hz，17-H)，4.255(1H，s，OH)，5.383(1H，m，5-H).
δC8.275Q(C-18)，19.414Q(C-19)，24.400T(C-11)24.581T(C-16)，27.443T(C-7)，30.062T(C-2)，32.972Q(C-21)，34.543T(C-15)，35.864D(C-8)，36.975S(C-10)，37.337T(C-1)，42.144T(C-4)，43.565D(C-9)，55.101S(C-13)，57.038D(C-17)，71.597D(C-3)，73.558D(C-12)，85.566S(C-14)，122.223D(C-6)，138.932S(C-5)，217.011S(C-20).
3β，12β，14-三羥基-14β-孕-5-烯-20-酮(15b)δH0.996(1H，s，19-H)，1.144(3H，s，18-H)，2.221(3H，s 21-H)，3.339(1H，dd，3J 9.4Hz，9.4Hz，17-H)，3.492(1H，m，3-H)，3.629(1H，dd，3J 11.1Hz，3.9Hz，12-H)，3.712(1H，s，OH)，4.325(1H，s，OH)，5.383(1H，m，5-H).
實(shí)施例20-28說明可制備中間體化合物以形成第一種單糖(40)的過程。
實(shí)施例20甲基-4，6-O-亞芐基-α-D-吡喃葡糖苷(32)將甲基-α-D-吡喃葡糖苷(30g，0.15mol)、苯甲醛(70mL)和氯化鋅(20g)的混合物在室溫下攪拌24小時(shí)。將反應(yīng)產(chǎn)物倒入冰水中，繼續(xù)攪拌15分鐘。濾出白色沉淀，用乙醚洗滌。將固體物質(zhì)與偏亞硫酸氫鈉(10％溶液)一起攪拌15分鐘，過濾，用水洗滌。固體物質(zhì)用氯仿和乙醚進(jìn)行結(jié)晶，得到亞芐基產(chǎn)物(32)(31g，72％)。
實(shí)施例21甲基-4，6-O-亞芐基-2-O-甲苯磺?；?α-D-吡喃葡糖苷(33)0℃下，將吡啶(100mL)中的對(duì)甲苯磺酰氯(25g，1.2當(dāng)量)滴加至亞芐基葡萄糖(32)(31g，0.12mol)的吡啶(100mL)溶液中。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌48小時(shí)。向反應(yīng)混合物中加入冰。形成的白色固體物質(zhì)用水洗滌，用熱乙醇進(jìn)行重結(jié)晶，得到甲苯磺?；钠咸烟?33)(28g，60％)。
實(shí)施例22甲基-4，6-O-亞芐基-3-O-甲基-α-D-吡喃阿卓糖苷(34)在高壓釜中，將在鈉(7g)的甲醇(150mL)溶液中的甲苯磺酰化物(33)(28g，64mmol)在110℃下加熱48小時(shí)。將反應(yīng)容器冷卻，向反應(yīng)混合物中加入固體二氧化碳。過濾后，蒸出甲醇，然后使固體物質(zhì)吸收入水中。水層用氯仿萃取三次。氯仿層用硫酸鎂干燥，過濾，蒸發(fā)。粗混合物用硅膠柱色譜提純，用氯仿∶丙酮(9∶1)洗脫，得到可卓糖苷(34)(10g，52％)。
實(shí)施例23甲基-6-溴-4-O-苯甲?；?3-O-甲基-6-脫氧-α-D-吡喃阿卓糖苷(35)將亞芐基阿卓糖苷(34)(10g，33mmol)加至N-溴琥珀酰亞胺(7.6g)和碳酸鋇(20g)在四氯化碳溶液中，將反應(yīng)混合物在75℃下回流3小時(shí)。將反應(yīng)混合物過濾，四氯化碳層用水洗滌。有機(jī)層用硫酸鎂干燥，過濾，蒸發(fā)，得到6-溴-阿卓糖苷(35)(9g，69％)。
實(shí)施例24甲基-4-O-苯甲?；?3-O-甲基-6-脫氧-α-D-吡喃阿卓糖苷(36)在0℃下，將水(30mL)中的硼氫化鈉(18g)滴加至溴代阿卓糖苷(35)(9g，23mmol)和氯化鎳(18g)的乙醇(300mL)溶液中。將反應(yīng)混合物在75℃下回流1小時(shí)，然后，將其過濾。蒸出乙醇，殘余的水層用氯仿萃取三次，氯仿層用硫酸鎂干燥，過濾，蒸發(fā)，得到6-脫氧-阿卓糖苷(36)(5g，72％)。
實(shí)施例254-O-苯甲酰基-3-O-甲基-6-脫氧-αβ-D-苯硫基吡喃阿卓糖苷(37)在0℃下，將苯硫基三甲基硅烷(5mL)和三甲基甲硅烷基三氟甲烷磺酸酯(2mL)加至6-脫氧-阿卓糖苷(36)(5g，17mmol)的二氯甲烷(200mL)溶液中。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌6小時(shí)。向反應(yīng)混合物中加入飽和碳酸氫鈉溶液。二氯甲烷層用硫酸鎂干燥，過濾，蒸發(fā)。粗混合物用硅膠柱色譜提純，用氯仿∶丙酮(9∶1)洗脫，得到αβ-D-苯硫基阿卓糖苷(37)(4g，63％)。
實(shí)施例264-O-苯甲?；?3-O-甲基-2-苯硫基-2，6-二脫氧-αβ-D-氟代吡喃磁麻糖苷(38)在0℃下，將二乙氨基三氟化硫(0.65g)加至αβ-D-苯硫基阿卓糖苷(37)(0.5g，1.33mmol)的二氯甲烷溶液中。將反應(yīng)混合物在0℃下攪拌0.5小時(shí)，然后加入飽和碳酸氫鈉溶液。從水層中分離出二氯甲烷層，用硫酸鎂干燥，過濾，蒸發(fā)，得到αβ-氟代磁麻糖(38)(450mg，90％)。
實(shí)施例274-O-苯甲酰基-3-O-甲基-2-O-叔丁基二甲基甲硅烷基-αβ-D-苯硫基阿卓糖苷(39)采用吡啶(50mL)中的叔丁基二甲基甲硅烷基氯(3g)和咪唑(3g)使6-脫氧阿卓糖苷(5g)甲硅烷基化。通過用乙酸乙酯進(jìn)行萃取而處理反應(yīng)混合物，用鹽酸(6N)洗滌乙酸乙酯層，然后用碳酸氫鈉溶液洗滌，再用水洗滌。乙酸乙酯層用硫酸鎂干燥，過濾，蒸發(fā)，得到甲硅烷基化的苯甲酰基苯硫基阿卓糖苷(39)(80％)。
實(shí)施例283-O-甲基-2-O-叔丁基二甲基甲硅烷基-αβ-D-苯硫基阿卓糖苷(40)用甲醇鈉(100mL)處理甲硅烷氧基化苯甲酰基苯硫基阿卓糖苷(39)(6g)4小時(shí)。蒸出甲醇，向反應(yīng)混合物中加入水。將水層酸化(pH5，ACOH)，用乙酸乙酯萃取。乙酸乙酯層用水洗滌，用硫酸鎂干燥，過濾，蒸發(fā)，得到甲硅烷基化的甲基苯硫基阿卓糖苷(40)(75％)。
實(shí)施例29-37說明可制備中間體化合物以形成第二種單糖(50)的合成過程。
實(shí)施例291，25，6-二-O-亞異丙基-α-D-呋喃葡萄糖(42)在0℃下，將硫酸(40mL)滴加至α-D-葡萄糖(41)(50g，0.28mol)的丙酮(1L)溶液中。將反應(yīng)混合物攪拌24小時(shí)，然后用氫氧化鈉(6M)中和。蒸出丙酮，水層用氯仿萃取兩次。氯仿層用硫酸鎂干燥，過濾，蒸發(fā)。用環(huán)己烷進(jìn)行結(jié)晶，得到二亞異丙基葡萄糖(42)(41g，57％)。
實(shí)施例301，25，6-二-O-亞異丙基-3-O-甲基-α-D-呋喃葡萄糖(43)將四氫呋喃(300mL)中的α-D-呋喃葡萄糖(42)(41g，0.16mol)滴加至氫化鈉(5g)的四氫呋喃(200mL)懸浮液中。0.5小時(shí)后，向反應(yīng)混合物中滴加入四氫呋喃(100mL)中的甲基碘(25g)，然后攪拌24小時(shí)。向反應(yīng)混合物中加入水，再用乙醚萃取三次。乙醚層用硫酸鎂干燥，過濾，蒸發(fā)，得到甲基保護(hù)的葡萄糖(43)(38g，83％)。
實(shí)施例313-O-甲基-αβ-D-吡喃葡萄糖(44)將甲基二亞異丙基化合物(43)(38g，0.14mol)溶解于乙酸(50％，700mL)中，將溶液回流18小時(shí)。冷卻后，蒸出乙酸。粗產(chǎn)物用柱色譜提純，采用氯仿∶甲醇∶丙酮∶水(70∶27∶2∶1)洗脫，得到3-O-甲基-αβ-D-吡喃葡萄糖(44)(13g，50％)。
實(shí)施例32甲基3-O-甲基-αβ-D-吡喃葡萄糖(45)將3-O-甲基-αβ-D-吡喃葡萄糖(44)(10g)溶解于甲醇(50mL)和鹽酸(濃鹽酸，1mL)中，回流過夜。加入碳酸氫鈉，將反應(yīng)混合物過濾。蒸出甲醇，得到1，3-二-O-甲基-αβ-D-吡喃葡糖苷(45)(95％)。
實(shí)施例33甲基4，6-O-亞芐基-3-O-甲基-αβ-吡喃葡糖苷(46)在室溫下，將吡喃葡糖苷(45)(8g)在苯甲醛(20mL)和氯化鋅(5g)的溶液中攪拌。24小時(shí)后，加入冰，水層用氯仿萃取。氯仿層用硫酸鎂干燥，過濾，蒸發(fā)。真空蒸餾除去苯甲醛，產(chǎn)物用硅膠柱色譜提純，用丙酮∶氯仿(0.5∶9.5)洗脫，得到亞芐基-αβ-吡喃葡萄苷(46)(60％)。
實(shí)施例34甲基4-O-苯甲酰基-3-O-甲基-6-脫氧-αβ-吡喃葡糖苷(47)在80℃下，將亞芐基化合物(46)(5g)在N-溴琥珀酰亞胺(3.7g)和碳酸鋇(4g)在四氯化碳中的混合物中回流。4小時(shí)后，將反應(yīng)混合物過濾，用水洗滌四氯化碳層，用硫酸鎂干燥，過濾，蒸發(fā)，得到溴代化合物(70％)。
在0℃下，將溴代化合物(4.3g)溶解于乙醇(300mL)和氯化鎳(8.6g)的溶液中。向該溶液中在15分鐘內(nèi)滴加入水(50mL)中的硼氫化鈉(8.6g)。將反應(yīng)混合物在100℃下回流45分鐘，冷卻，過濾，蒸發(fā)。加入氯仿，氯仿層用水洗滌，用硫酸鎂干燥，過濾，蒸發(fā)，得到6-脫氧糖(47)(70％)。
實(shí)施例354-O-苯甲?；?3-O-甲基-1-苯硫基-6-脫氧-αβ-吡喃葡糖苷(48)將6-脫氧吡喃葡糖苷(47)(3g)溶解于二氯甲烷(50mL)中。向該溶液中加入苯硫基三甲基硅烷(2g)和三甲基甲硅烷基三氟甲磺酸酯(0.2mL)。將溶液在室溫下攪拌過夜，此后，加入飽和碳酸氫鈉溶液。二氯甲烷層用硫酸鎂干燥，過濾，蒸發(fā)。產(chǎn)物用硅膠柱色譜提純，用乙酸乙酯∶己烷(2∶8)洗脫，得到化合物(48)(60％)。
實(shí)施例364-O-苯甲?；?3-O-甲基-2-O-新戊酰基-1-苯硫基-6-脫氧-αβ-吡喃葡糖苷(49)向吡喃葡糖苷(48)(2g)的吡啶(20mL)溶液中加入新戊酰氯(2mL)。將溶液在室溫下攪拌過夜，此后加入水。水層用乙酸乙酯萃取，有機(jī)層用鹽酸(6N)洗滌。有機(jī)層用硫酸鎂干燥，過濾，蒸發(fā)，得到新戊酰基酯(49)(89％)。
實(shí)施例374-O-苯甲?；?3-O-甲基-2-O-新戊酰基-1-氟-6-脫氧-β-吡喃葡糖苷(50)在0℃下，將N-溴琥珀酰亞胺(1.2g)和二乙氨基三氟化硫(1.2g)加至新戊?；?49)(2g)的二氯甲烷(100mL)溶液中。1小時(shí)后，加入飽和碳酸氫鈉溶液。將二氯甲烷用硫酸鎂干燥，過濾，蒸發(fā)。通過硅膠柱色譜提純?chǔ)?氟吡喃糖苷(50)，用乙酸乙酯∶己烷(2∶8)洗脫。
實(shí)施例38說明制備化合物3-O-[4-O-苯甲?；?2-苯硫基-β-D-吡喃磁麻糖基]-12，14-β-二羥基孕-5-烯-20-酮(51)的合成過程。
實(shí)施例383-O-[4-O-苯甲?；?2-苯硫基-β-D-吡喃磁麻糖基]-12，14β-二羥基孕-5-烯-20-酮(51)在-15℃下，將氯化錫(190mg，1mmol)加至在無水乙醚和4分子篩中的3，12，14β-三羥基孕-5-烯-20-酮(15)(100mg，0.28mmol)和氟代吡喃磁麻糖苷(38)(210mg，0.56mmol)中。將反應(yīng)混合物在-15℃下保持3天。向反應(yīng)混合物中加入飽和碳酸氫鈉溶液。乙醚層用硫酸鎂干燥，過濾，蒸發(fā)。產(chǎn)物用硅膠柱色譜提純，用氯仿∶甲醇(9.5∶0.5)洗脫，得到葡糖苷(51)(30mg，15％)。
實(shí)施例39-41說明偶聯(lián)磁麻糖和黃夾竹桃糖的合成過程。
實(shí)施例39黃夾竹桃糖-磁麻糖二糖(53)將黃夾竹桃糖(50A)(1.5g)、磁麻糖(40)(1.3g)和分子篩4在二氯甲烷中的溶液在室溫下攪拌1小時(shí)。將反應(yīng)混合物冷卻至-15℃，加入氯化錫(II)(0.8g)和三氟甲磺酸銀(1.1g)。將混合物在-15℃下攪拌16小時(shí)，此后，加入三乙胺(0.5mL)。將反應(yīng)產(chǎn)物過濾，蒸出二氯甲烷。將二糖用硅膠柱色譜提純，用乙酸乙酯∶己烷(2∶8)洗脫，收率15％。
實(shí)施例40黃夾竹桃糖-磁麻糖二糖(54)向二糖(53)(200mg)的四氫呋喃(20mL)溶液中加入四丁基氟化銨(0.4mL)。將混合物在室溫下攪拌1小時(shí)，此后加入飽和碳酸氫鈉溶液。將反應(yīng)混合物用乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯層用硫酸鎂干燥，過濾，蒸發(fā)。將二糖用硅膠柱色譜提純，用丙酮∶氯仿(0.5∶9.5)洗脫，收率60％。
實(shí)施例41黃夾竹桃糖-磁麻糖二糖(55)在0℃下，將二糖(54)(80mg)的二氯甲烷(10mL)溶液中加入二乙氨基三氟化硫(80μL)。在0℃下攪拌0.5小時(shí)后，加入飽和碳酸氫鈉溶液和更多的二氯甲烷。二氯甲烷層用硫酸鎂干燥，過濾，蒸發(fā)。用硅膠柱色譜提純(乙酸乙酯∶己烷1∶9)，得到二糖(55)(65％)。
實(shí)施例42以下給出下述三種食欲抑制劑的生物試驗(yàn)結(jié)果。
a)Irwin試驗(yàn)；b)急性毒性試驗(yàn)；和c)口服給藥厭食試驗(yàn)。a)Irwin試驗(yàn)本試驗(yàn)的目的評(píng)價(jià)由前述植物提取物生產(chǎn)的本發(fā)明的食欲抑制劑，采用的方法是用于安定和鎮(zhèn)靜作用的簡化動(dòng)物Irwin試驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)過程由本申請(qǐng)的申請(qǐng)人通過前述的方法從植物原料中提取食欲抑制劑，并將其施用于四組動(dòng)物中的兩組中，每組有三只動(dòng)物，一組不進(jìn)行治療，一組接收溶劑二甲亞砜(DMSO)，一組接收50mg/kg的試驗(yàn)樣品，一組接收300mg/kg的試驗(yàn)樣品。通過腹膜內(nèi)的注射進(jìn)行治療，在特定的時(shí)間間隔進(jìn)行觀察，直至治療后五小時(shí)。除了DMSO治療組的動(dòng)物所觀察到的癥狀之外的癥狀用于結(jié)果的解釋。結(jié)果顯然，溶劑DMSO對(duì)動(dòng)物有顯著的作用，特別是對(duì)熱調(diào)節(jié)機(jī)理而言更是如此。包括單獨(dú)施用DMSO或與試驗(yàn)樣品一起施用DMSO在內(nèi)所有用溶劑給藥的動(dòng)物的體溫均有顯著下降。
與包括對(duì)照組在內(nèi)的所有其它組一樣，低劑量組的動(dòng)物顯示出在籠中的分散性明顯降低。在給藥后15-60分鐘觀察到呼吸減弱。比DMSO組觀察到更大程度的上瞼下垂(眼皮關(guān)閉)。耳廓(耳)反應(yīng)也可看出，還觀察到陽性手指反應(yīng)，表明有恐懼感。在給藥后，體溫下降至32.7℃。
與在其它組一樣，在高劑量組的動(dòng)物顯示出初始籠內(nèi)分散性降低，運(yùn)動(dòng)活性降低，但在死亡之前顯示出分散性及運(yùn)動(dòng)活性增加，在給藥后約1小時(shí)死亡。在給藥后30分鐘發(fā)生嚴(yán)重的陣攣性對(duì)稱抽搐。開始出現(xiàn)呼吸減弱，但在死亡前會(huì)增加。耳廓(耳)反應(yīng)延遲，并觀察到陽性手指反應(yīng)，表明有恐懼感，這些情形在低劑量組的動(dòng)物中也觀察到。在給藥后，體溫降至30.7℃。還觀察到位置被動(dòng)性增加及身體彈性降低。觀察到異常肢體旋轉(zhuǎn)，握力強(qiáng)度降低，存在無疼痛反應(yīng)，發(fā)生翻正反射喪失。討論與對(duì)照組和DMSO給藥組動(dòng)物比較時(shí)，接收低劑量(50mg/kg)的動(dòng)物僅顯示出呼吸減少及上瞼下垂程度增加。而接收高劑量(300mg/kg)試驗(yàn)樣品的動(dòng)物反應(yīng)非常強(qiáng)烈，顯示出抽搐和死亡。所有在這些動(dòng)物中進(jìn)行的其它觀察結(jié)果可歸因于動(dòng)物抽搐和死亡。在試驗(yàn)組中未觀察到可能歸因于試驗(yàn)樣品的鎮(zhèn)靜作用的暗示性跡象，如籠中分散性明顯減少，運(yùn)動(dòng)活性降低和淡漠等。因而，可以得到結(jié)論，當(dāng)采用DMSO作為溶劑經(jīng)腹膜內(nèi)給藥時(shí)，試驗(yàn)樣品是導(dǎo)致300mg/kg組大鼠的致死因子，并對(duì)50mg/kg組的大鼠具有呼吸抑制作用。b)急性毒性試驗(yàn)本試驗(yàn)的目的是得到有關(guān)試驗(yàn)樣品毒性的信息。實(shí)驗(yàn)過程將本發(fā)明按照前述過程制備的并具有食欲抑制劑作用的植物提取物提純，將一種試驗(yàn)樣品在增加劑量下使大鼠口服。每一劑量組使用兩個(gè)大鼠，只是最高劑量組僅使用一個(gè)大鼠。大鼠經(jīng)檢查身體狀態(tài)良好，在給藥日測定它們的體重。
劑量范圍為100mg/kg至3028.5mg/kg。經(jīng)計(jì)算劑量并混入制備的馬鈴薯淀粉中，從而，每一個(gè)大鼠接收總劑量為0.2mL。大鼠13接收0.25mL。馬鈴著淀粉這樣制備將20g的淀粉混入少量冷水中，再向其中加入熱水，補(bǔ)充體積至1升。在服藥前將懸浮液冷卻至室溫。
在第1組和第2組的大鼠在同一天給藥。對(duì)它們觀察24小時(shí)，如果無中毒跡象，則給藥下一組。同樣的研究過程繼續(xù)，直至所有的大鼠給藥。這一過程順序進(jìn)行以保證當(dāng)急性毒性劑量在先前組已達(dá)到時(shí)，不必再給大鼠服藥。
在給藥后和此后的每天，對(duì)即時(shí)中毒(1-2小時(shí))的臨床跡象進(jìn)行觀察。每周測量一次體重，并測量每一支大鼠的總食物和水?dāng)z取量。
在實(shí)驗(yàn)的第14天通過腹膜內(nèi)注射戊巴比通鈉(商購，商品名Euthanaze，Centaur)將存活的大鼠處死。對(duì)這些大鼠進(jìn)行尸體剖檢，同樣對(duì)在實(shí)驗(yàn)過程中死亡的大鼠進(jìn)行尸體剖檢。收集用于病理組織學(xué)的樣品。結(jié)果第1組(對(duì)照組)在14天的觀察期內(nèi)，未觀察到臨床中毒跡象。食物和水?dāng)z取量均在正常范圍內(nèi)。體重的變化也在正常范圍內(nèi)。在肝樣品中無病理組織學(xué)變化。第2組(100mg/kg)在14天的觀察期內(nèi)，未觀察到臨床中毒跡象。食物和水?dāng)z取量均在正常范圍內(nèi)。體重的變化也在正常范圍內(nèi)。在肝樣品中未觀察到肉眼可見的病變，也無病理組織學(xué)變化或形態(tài)學(xué)變化。第3組(200mg/kg)觀察期間，該組的大鼠未顯示出臨床中毒跡象。食物和水?dāng)z取量均在正常范圍內(nèi)。體重的變化也在正常范圍內(nèi)。未觀察到肉眼可見的病變，但經(jīng)檢測，在肝樣品中顯示出病理組織學(xué)變化。在第6號(hào)大鼠中，肝細(xì)胞輕微濁腫，但第5號(hào)大鼠則中等程度濁腫。在第5號(hào)大鼠中還出現(xiàn)中等程度的水腫性變性。第4組(400mg/kg)觀察期間，該組的大鼠未顯示出臨床中毒跡象。在進(jìn)行尸體剖檢期間，未觀察到肉眼可見的病變。在進(jìn)行組織學(xué)觀察時(shí)，發(fā)現(xiàn)中等程度濁腫和輕微的水腫變化。
動(dòng)物7水和食物攝取正常，體重增加正常。動(dòng)物8消耗的食物幾乎比動(dòng)物7多一倍(分別為144.6g和73.9g)，但體重僅增加了0.81g，與2.7g相比。第5組(800mg/kg)一個(gè)大鼠(第10個(gè)大鼠)在給藥3個(gè)小時(shí)后死亡，未顯示任何特殊的跡象。另一個(gè)大鼠(第9個(gè)大鼠)在整個(gè)觀察期存活，未有任何中毒的跡象。存活的大鼠的水?dāng)z取正常(42.42mL)，而食物攝取增大(134.2g)。體重增加了2.85g，這是在實(shí)驗(yàn)中所有大鼠中的最高值。
在對(duì)大鼠10(口服給藥后短期死亡)的尸體剖檢時(shí)，發(fā)現(xiàn)肺充血。無其它外在身體反應(yīng)發(fā)生，這表明了試驗(yàn)材料吸入。大鼠9未發(fā)現(xiàn)肉眼可見的病變。大鼠10存在輕微的細(xì)胞質(zhì)空泡形成(水腫性變性)，但大鼠9則為中等程度。兩個(gè)大鼠肝腺細(xì)胞質(zhì)的外觀均為中等程度。第6組(1600mg/kg)在實(shí)驗(yàn)期間，無任何臨床中毒跡象。在尸體剖檢時(shí)，未觀察到肉眼可見的病變，但在組織生理學(xué)檢測中觀察到大鼠11的肝中存在中等程度的退化。大鼠12顯示出中等程度的濁腫和輕微的肝細(xì)胞水腫性變性。食物與水?dāng)z取正常，體重在實(shí)驗(yàn)期間增加。第7組(3028.5mg/kg)在該劑量下僅給一只大鼠服藥。在觀察期間，未觀察到該只大鼠有中毒跡象，也未觀察到肉眼可見的病變。在組織生理學(xué)檢測中，觀察到中等程度的濁腫和肝細(xì)胞水腫性變性。該大鼠顯示出在觀察期內(nèi)體重降低(-0.82g)，但食物和水?dāng)z取正常。討論由于每一劑量下僅采用了少量的動(dòng)物進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，因而做出任何結(jié)論均是困難的。在低劑量下僅有一只大鼠死亡這一事實(shí)，并不能顯示出任何征兆，從而表明死亡與受試樣品無關(guān)，而歸因于在服藥期間和/或服藥之后的應(yīng)激反應(yīng)。在高劑量組中無大鼠死亡或表現(xiàn)出任何中毒的跡象，這進(jìn)一步支持了這一假設(shè)。
對(duì)第8只大鼠觀察到的食物攝取增加可能是食物過度溢出(spillage)的結(jié)果，而體重只增加很少也反映了這一點(diǎn)。需引起注意的是，在本實(shí)驗(yàn)中的所有大鼠均僅服藥一次，因而，食欲抑制劑對(duì)食物或水的攝取或體積在14天內(nèi)均有顯著影響是不可能的，從實(shí)驗(yàn)結(jié)果看也是如此。
從肝樣品的組織生理學(xué)實(shí)驗(yàn)可以清楚地看出，病理學(xué)變化與劑量有關(guān)，接收高劑量的大鼠顯示出更強(qiáng)烈的變化。所觀察到的病理學(xué)并非自然的代謝，但可能受測試樣品的誘導(dǎo)。變化僅僅是一種退化，因而是可逆的。未觀察到不可逆肝細(xì)胞變化的跡象。
因而，可以得出結(jié)論，僅有一只大鼠在低劑量(800mg/kg)下死亡，但其死亡可能并非與受試樣品有關(guān)。在任何劑量組中的其它大鼠均在給藥后14天的觀察期內(nèi)未有中毒的跡象，或由于給藥導(dǎo)致的死亡。受試樣品的單次口服劑量會(huì)產(chǎn)生可逆的與劑量相關(guān)的肝細(xì)胞變化。c)口服給藥厭食試驗(yàn)本試驗(yàn)的目的是確定按照本發(fā)明制備的植物提取物的活性和最小有效劑量，同時(shí)研究可能產(chǎn)生的副作用如呼吸抑制，如在Irwin試驗(yàn)(如前)中所述的情形。實(shí)驗(yàn)過程采用隨機(jī)選取的方式將大鼠分成幾個(gè)給藥組。每一個(gè)給藥組均由三個(gè)大鼠組成，在對(duì)照組中有6個(gè)大鼠。使測試樣品給藥于已適應(yīng)環(huán)境的100-150g的雌性幼鼠(大鼠)，連續(xù)給藥三天。借助于金屬耳標(biāo)記和高錳酸鉀皮膚標(biāo)記簡便地確認(rèn)大鼠。在標(biāo)準(zhǔn)嚙齒動(dòng)物聚碳酸酯籠中單獨(dú)關(guān)養(yǎng)大鼠，水和粉末狀市售嚙齒動(dòng)物顆粒狀物隨意供給。每天測定水和食物的攝取值并進(jìn)行計(jì)算。為了發(fā)現(xiàn)測試樣品的最小有效劑量，測量了五種劑量。通過口服管飼法給藥，測試樣品懸浮于馬鈴薯淀粉中。
測試的物質(zhì)為化合物(1)，是按照本發(fā)明由植物原料的提取物制備得的顆粒狀粉末，試驗(yàn)量的測試樣品與制備的馬鈴薯淀粉混合，并形成劑型。所述與馬鈴薯的混合物過程在每天給藥前即刻進(jìn)行。在對(duì)每一大鼠排放劑量體積時(shí)，懸浮液用Vortex進(jìn)行充分混合。
測試了五種劑量范圍，對(duì)照組僅接收載體物質(zhì)。劑量的選擇基于在上述Irwin試驗(yàn)中觀察到的作用，它們是第1組0.00mg/kg(對(duì)照組)第2組6.25mg/kg第3組12.50mg/kg第4組25.00mg/kg第5組37.50mg/kg第6組50.00mg/kg結(jié)果在研究期間，所述的給藥并未影響大鼠的健康。在整個(gè)研究期間，在所有劑量組中測試樣品給藥大鼠顯示出平均體重增加值顯著降低，五個(gè)給藥組中的三組大鼠實(shí)際上減少了體重。
對(duì)所有給藥組的平均食物攝取在研究期間下降。高劑量組的大鼠顯示出水消耗增加。
在各劑量組中的大鼠均未表現(xiàn)出對(duì)呼吸率有明顯影響。
在所有劑量組中的大鼠在進(jìn)行尸體剖檢時(shí)其肝臟均是易碎的，但是并無肉眼可見的病變。討論適應(yīng)環(huán)境期間收集的數(shù)據(jù)證實(shí)，實(shí)驗(yàn)中采用的所有的大鼠均屬健康，大鼠間的體重是可以比較的。
某些大鼠的體積增加值降低甚至體重減少以及食物攝取減少強(qiáng)烈地表現(xiàn)出食欲中心的抑制作用。食物攝取減少和體重增加值減少即使在最低劑量組(6.25mg/kg)也發(fā)生，實(shí)際體重減少發(fā)生在12.50mg/kg組。
很重要的一點(diǎn)是，所有的給藥組在飼料消耗減少的同時(shí)，水的消耗量均增加(圖2)。這可能歸因于測試樣品的利尿作用，或者歸因于在大腦中的渴感中心的刺激。
在上述采用腹膜內(nèi)途徑的急性毒性試驗(yàn)中觀察時(shí)無呼吸抑制作用這一事實(shí)可看作值得肯定的方面。這可能歸因于胃腸道吸收減少，從而減少了生物可利用率。但是，在所測試的口服劑量中的生物可利用率對(duì)測試樣品而言足夠有效。在大多數(shù)組中給藥1小時(shí)后呼吸速度方面輕微的降低可看作歸因于胃被劑量體積填充以及隨之而產(chǎn)生的大鼠的被動(dòng)性。
在給藥組中觀察到的易碎的肝臟可能是由于能量代謝中的變化弱于食物攝取的減少，從而引起脂肪代謝增加，肝負(fù)擔(dān)超載。如果這確是事實(shí)，則這些變化可能會(huì)被看作是暫時(shí)的，在達(dá)到穩(wěn)定態(tài)后將會(huì)恢復(fù)，或者在排出測試樣品后會(huì)恢復(fù)。對(duì)肝可能的作用也需要進(jìn)一步研究。
由于本研究對(duì)篩選試驗(yàn)而言僅是初步的，采用了很少的幾組試驗(yàn)動(dòng)物。這全程對(duì)數(shù)據(jù)的滿意解釋還很難，特別是當(dāng)個(gè)體動(dòng)物總體上存在反應(yīng)差異。然而，數(shù)據(jù)也表明，測試樣品具有食欲抑制作用，即使在最低測試劑量(6.25mg/kg)也如此。在測試劑量下未出現(xiàn)呼吸抑制的臨床跡象。
實(shí)施例43將天然產(chǎn)生或人工培養(yǎng)種植的火地亞植物收割后首先在4℃下貯存最多48小時(shí)。將植物在自來水中清洗，然后切成±1cm的片。將切片后的小塊合并，通過300巴壓力的水壓機(jī)壓榨，每次壓榨最少0.5小時(shí)。在壓榨過程中，分別收集植物的汁液。將所述汁液在-18℃下貯存，直至所需的進(jìn)一步加工過程。
在適宜的條件下，將所述汁液進(jìn)行噴霧干燥，獲得一種自由流動(dòng)的粉末。噴霧干燥后粉末中的含水量優(yōu)選小于5％，并且，如果需要的話，可在真空箱內(nèi)進(jìn)一步干燥，或采用流化床干燥器進(jìn)行干燥。
所述汁液和噴霧干燥后的物料均在大鼠的生物試驗(yàn)中顯示出可有效地用作食欲抑制劑。實(shí)驗(yàn)將50kg的火地亞gordonii用自來水清洗，然后切成1cm的片。將切片后的植物用300巴壓力的水壓機(jī)壓榨，每次壓榨最少0.5小時(shí)。收集汁液，采用天然環(huán)境的火地亞gordonii時(shí)，收集到的汁液重量為10kg，而從人工培養(yǎng)的火地亞gordonii植物則可得到20kg。采用下述條件將汁液(500g)進(jìn)行噴霧干燥流速285mL/min入口溫度110℃出口溫度70℃工作室溫度 78℃獲得的噴霧干燥的粉末為自由流動(dòng)的粉末(22g)，含水量為6.9％。
噴霧干燥后的粉末采用HPLC技術(shù)對(duì)活性成分含量進(jìn)行分析。活性成分的含量經(jīng)測定為13g/kg噴霧干燥后的粉末。HPLC分析法洗脫劑乙腈∶水(7∶3)，無梯度洗脫柱反相C-18UV吸收225nm流速 1mL/min注射體積 10μl方法將噴霧干燥的粉末(10mg)溶解于水(0.5mL)和乙腈(0.5mL)中。將10μl的該溶劑注入HPLC中，采用標(biāo)準(zhǔn)曲線測定活性化合物(1)的濃度，所述曲線由純化合物(1)制得。
實(shí)施例44以下給出設(shè)計(jì)用來評(píng)價(jià)化合物(1)在大鼠中可能的減食欲作用的研究結(jié)果。其中，測試的樣品為純汁液(樣品1)、噴霧干燥的汁液(樣品2)和活性成分(樣品3)。樣品1和2分別為汁液和噴霧干燥的汁液，如實(shí)施例43所述。樣品3為溶劑提取的化合物(1)，其純度≥95％。
樣品1-3分別以單次口服劑量給藥于雄性Wistar大鼠。兩組對(duì)照組給藥載體(蒸餾水或DMSO)?？诜o藥芬氟拉明(7.5mg/kg)作為參考標(biāo)準(zhǔn)。
樣品1(純汁液)經(jīng)口服給藥，從統(tǒng)計(jì)結(jié)果看，與用載體給藥的對(duì)照樣相比，在劑量為1600mg/kg和高于該劑量時(shí)，產(chǎn)生依賴劑量的食物消耗量具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的下降。也記錄到體重(或增長率)的相應(yīng)減少。在給藥期間，在給藥3小時(shí)(6400和10000mg/kg)和6小時(shí)(10000mg/kg)后記錄到水消耗量有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的增加。在給藥后24-48小時(shí)間，在劑量為3200mg/kg和高于該劑量時(shí)，記錄到水消耗量有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的下降。
與給藥載體的大鼠相比，樣品2(噴霧干燥的汁液)在以76mg/kg口服給藥時(shí)的食物消耗量和體重也產(chǎn)生統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的減少。未記錄到對(duì)水消耗量有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的影響。
樣品3(活性成分)在以5.0mg/kg口服給藥時(shí)，產(chǎn)生食物消耗量統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的減少。與給藥載體的大鼠相比，活性成分并未在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義上有對(duì)體重的作用，雖然檢測數(shù)據(jù)表明生長稍有延遲。未記錄到對(duì)水消耗量的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的影響。
與給藥載體的對(duì)照組相比，參考標(biāo)準(zhǔn)物芬氟拉明(7.5mg/kg)在給藥6小時(shí)和24小時(shí)后食物消耗有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的減少。未記錄到對(duì)水消耗量的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的影響。
未記錄到與給藥相關(guān)的對(duì)肝臟的影響。
試驗(yàn)物質(zhì)特性 樣品1(純汁液) 樣品2(噴霧干燥的汁液) 樣品3(活性成分)外觀 褪色液體粉末 白色粉末貯存條件暗處-20℃下 暗處室溫下暗處4℃下純度 純汁液 純噴霧干燥的汁液 ≥95％載體 蒸餾水 蒸餾水二甲亞砜(DMSO)實(shí)驗(yàn)過程55只雄性Wistar大鼠用于本研究。
從實(shí)驗(yàn)開始至研究終止的每一天的相同時(shí)間記錄體重、食物消耗量(食物漏斗裝料量)和水消耗量(瓶重)。
在第1天，按照下表使大鼠服用單次口服(管飼法)劑量組 n口服給藥 劑量(mg/kg)15載體(蒸餾水) -24樣品1(純汁液)80035樣品1(純汁液)160045樣品1(純汁液)320055樣品1(純汁液)640065樣品1(純汁液)1000075樣品2(噴霧干燥的汁液)3885樣品2(噴霧干燥的汁液)7695樣品3(活性成分) 2.510 5樣品3(活性成分) 5.011 3芬氟拉明 7.512 3載體(DMSO) -第1-8組以穩(wěn)定劑量體積10mL/kg進(jìn)行給藥，第9-12組采用的劑量體積為1mL/kg。
在第1天給藥后在1、3和6小時(shí)測量食物消耗量和水消耗量。
在第8天測量后，通過二氧化碳窒息法處死大鼠，切除肝臟，并在顯微解剖學(xué)研究前將其置于10％緩沖的福爾馬林中。
取肝臟的石蠟切片4-5μm，用蘇木精和曙紅染色。在低溫恒溫器中取12μm的切片并對(duì)脂肪用油紅O(ORO)進(jìn)行染色。數(shù)據(jù)分析對(duì)P57-給藥的大鼠在每一時(shí)間點(diǎn)處給藥后的食物和水消耗量測量值和體重與相關(guān)的采用載體進(jìn)行類似給藥的對(duì)照組的相應(yīng)數(shù)據(jù)進(jìn)行比較，比較采用方差分析，再對(duì)對(duì)照組比較采用William試驗(yàn)。
采用t檢驗(yàn)法對(duì)芬氟拉明給藥的大鼠的數(shù)據(jù)與載體給藥的對(duì)照組的數(shù)據(jù)進(jìn)行比較。結(jié)果以下各表中列出的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
經(jīng)口服給藥的樣品1(純汁液)在每日的食物消耗量方面產(chǎn)生顯著的與劑量相關(guān)的減少。這種食物消耗量減少的持續(xù)時(shí)間和幅度均與劑量有關(guān)。與載體給藥的對(duì)照組相比，在24小時(shí)給藥后，樣品1(純汁液)在劑量1600mg/kg和更高劑量時(shí)產(chǎn)生食物消耗量統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的減少。樣品1(汁液)的最高劑量(10000mg/kg)最多在給藥5天后每日的食物消耗量也產(chǎn)生統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的減少。
樣品2(噴霧干燥的汁液)和樣品3(活性成分)分別在76和5.0mg/kg的口服劑量時(shí)產(chǎn)生顯著的和統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的減少。在兩種情形下，影響可持續(xù)至給藥后48小時(shí)。
與載體給藥的對(duì)照組(第12組)相比，在6小時(shí)和24小時(shí)給藥后，參考標(biāo)準(zhǔn)物芬氟拉明(7.5mg/kg，p.o.)產(chǎn)生食物消耗量有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的減少。
樣品2(噴霧干燥的汁液)和樣品3(活性成分)并未對(duì)水消耗量產(chǎn)生顯著的與劑量相關(guān)的影響。在給藥的當(dāng)天，在給藥3小時(shí)(6400和10000mg/kg)和6小時(shí)(10000mg/kg)后，純汁液產(chǎn)生統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的水消耗量的增加。但在給藥兩天后，以3200、6400和10000mg/kg的劑量，大鼠接收樣品1(汁液)時(shí)的水消耗量有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的下降。但是，這些下降并不能清楚確認(rèn)與劑量有關(guān)，而僅發(fā)生在給藥后1-2天內(nèi)。因而，這些影響的生物學(xué)意義仍不清楚。
與用載體給藥的對(duì)照組(第1組)相比，樣品1(純汁液)產(chǎn)生與劑量相關(guān)的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的影響。當(dāng)以3200mg/kg和更高的劑量口服給藥時(shí)，與采用載體給藥的大鼠作比較，樣品1(純汁液)在體重或降低生長速度方面均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的減少。這些作用從給藥48小時(shí)直至研究結(jié)束在統(tǒng)計(jì)學(xué)上是有意義的。
與用載體給藥的對(duì)照組(第1組)相比，樣品2(噴霧干燥的汁液)在76mg/kg口服給藥也產(chǎn)生大鼠生長統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的減少。這些作用在第3天(給藥48小時(shí)后)和第5天期間均在統(tǒng)計(jì)學(xué)上是有意義的。
雖然與用載體給藥的對(duì)照組(第12組)相比，樣品3(活性成分)顯示出在最高劑量(5.0mg/kg)時(shí)大鼠生產(chǎn)延遲，但這種作用并不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
與用載體給藥的對(duì)照組(第12組)相比，芬氟拉明(7.5mg/kg)并不對(duì)水消耗量或體重產(chǎn)生顯著的或統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的影響。
未記錄治療對(duì)肝臟的相關(guān)作用。
表1a大鼠口服給藥時(shí)食物消耗量的影響(每日初始劑量數(shù)據(jù))
sd標(biāo)準(zhǔn)偏差表1b大鼠口服給藥對(duì)食物消耗量的影響(每日初始劑量數(shù)據(jù))<
sd標(biāo)準(zhǔn)偏差第2-8組與載體組1比較*p＜0.05，**p1＜0.01第9-11組與載體組12比較p＜0.05，p＜0.01
表2a口服給藥對(duì)大鼠飲水消耗的影響(每天給藥前數(shù)據(jù))
sd標(biāo)準(zhǔn)偏差表2b口服給藥對(duì)大鼠飲水消耗的影響(每天給藥前數(shù)據(jù)
sd標(biāo)準(zhǔn)偏差第1-8組與載體組1比較*p＜0.05第9-11組與載體組12比較(無顯著性)
表3a大鼠口服給藥對(duì)體重的影響(每日初始劑量數(shù)據(jù))
sd標(biāo)準(zhǔn)偏差表3b大鼠口服給藥對(duì)體重的影響(每日初始劑量數(shù)據(jù))
sd標(biāo)準(zhǔn)偏差第1-8組與載體組1比較*p＜0.05第9-11組與載體組12比較(無顯著性)病理組織學(xué)報(bào)告病理組織學(xué)檢測限于肝臟。對(duì)樣品1(液體)、樣品2(噴霧干燥的汁液)、樣品3(活性成分)、芬氟拉明或DMSO對(duì)照組均未檢測出與給藥相應(yīng)的變化。
表微觀病理學(xué)發(fā)生率概要
<p>表(續(xù))
<p>實(shí)施例45以下描述采用如實(shí)施例44所述相同的試驗(yàn)樣品進(jìn)行的另一個(gè)生物實(shí)驗(yàn)。在該研究中的動(dòng)物接受嚴(yán)格的飲食，即動(dòng)物僅在每日的1200至下午300間進(jìn)食。這不同于所有目前進(jìn)行的其它生物學(xué)試驗(yàn)，因而食物可以磅數(shù)供給大鼠。在七天期間(第-7天至第-1天)使大鼠適應(yīng)環(huán)境，從第0天至第6的每天上午9點(diǎn)通過口管飼法給藥?；謴?fù)期從第7天至第13天。劑量組如下表1所述。需要指出，實(shí)際的對(duì)照組標(biāo)記為第09組。第5組為接收相當(dāng)于第4組的飲食的對(duì)照組。設(shè)置該組的目的是評(píng)價(jià)嚴(yán)格限制飲食對(duì)大鼠肝的影響。結(jié)果在研究期間產(chǎn)生的結(jié)果表明，適應(yīng)環(huán)境期間太短。大鼠進(jìn)食主要是在夜間進(jìn)行，突然改變?yōu)樵谌臻g的3個(gè)小時(shí)內(nèi)嚴(yán)格進(jìn)食導(dǎo)致每日攝取食物很少。在大多數(shù)組中，在適應(yīng)環(huán)境期結(jié)束時(shí)，當(dāng)開始采用試驗(yàn)項(xiàng)目給藥時(shí)，每日食物的攝取值仍會(huì)增加。由于這一原因，在給藥期間測試原料的作用對(duì)大鼠食物攝取值的影響變得沒有意義。
表D1和表D2顯示了對(duì)第-7天至第-1天不同組別的平均體重。不同劑量的汁液和噴霧干燥的汁液的作用顯示在附圖中，圖5中涉及第0至第7天體重的變化％，圖6涉及第-7天至第7天體重的變化％。不難看出，體重的減少與劑量相關(guān)，特別是對(duì)于較高劑量時(shí)更是如此。
在接收試驗(yàn)項(xiàng)目的各組中，肝臟的組織病理學(xué)檢驗(yàn)并未顯示出任何有意義的病癥。食物在適應(yīng)環(huán)境期間和研究期間，每天測量食物消耗量。食物每日的供應(yīng)時(shí)間為3小時(shí)，從12點(diǎn)開始至下午3點(diǎn)。在其余時(shí)間，動(dòng)物被禁食。第5組動(dòng)物在第1天接收測量量的食物，相當(dāng)于第4組在第0天的平均食物消耗量。根據(jù)第4組前一天的平均食物消耗量所測定，第5組的這種受控進(jìn)食圖在第1-7天進(jìn)行。水水在標(biāo)準(zhǔn)容器中提供。水(Magalies Water Board Tap Water，適于人飲用)可隨意供給。在食物消耗量測定完之后，在每天的同一時(shí)間測量一次水消耗量。適應(yīng)環(huán)境動(dòng)物在進(jìn)行研究開始之前適應(yīng)環(huán)境7天，在此期間，食物和水消耗量如前所述進(jìn)行測定。在此期間，每天測量體重。研究設(shè)計(jì)和過程表1研究設(shè)計(jì)
給藥方式試驗(yàn)項(xiàng)目采用胃飼管每天給藥。在第一項(xiàng)給藥前均使動(dòng)物禁食18小時(shí)(在9點(diǎn)開始)。給藥持續(xù)時(shí)間動(dòng)物在連續(xù)7天內(nèi)給藥(從第0天至第6天)。每組的三支動(dòng)物在最后給藥24小時(shí)后(第7天)處死。其余的3支動(dòng)物在最后給藥7天后(第13天)處死。該過程適于所有各組，只是第5組中的三支動(dòng)物在最后受控進(jìn)食24小時(shí)后(第8天)處死，其余三支動(dòng)物在最后給藥后7天(第13天)處死。體重在研究期間，在每天的大約相同的時(shí)間測量體重，包括環(huán)境適應(yīng)期。安死術(shù)每組中的三支動(dòng)物在最后給藥24小時(shí)后(第7天)處死。
其余三支動(dòng)物在最后給藥7天后處死。該過程適于所有各組，只是第5組中的三支動(dòng)物在最后受控進(jìn)食24小時(shí)后(第8天)處死，其余三支動(dòng)物在最后給藥后7天(第13天)處死。動(dòng)物在研究結(jié)束時(shí)采用二氧化碳?xì)怏w施以安樂死。檢眼鏡檢查法在試驗(yàn)項(xiàng)目第一次給藥前和試驗(yàn)終止時(shí)，采用檢眼鏡對(duì)所有組別的所有動(dòng)物進(jìn)行檢眼鏡檢查。肉眼可見的病理學(xué)在研究結(jié)束時(shí)，對(duì)每種施以安樂死的動(dòng)物進(jìn)行全尸體剖檢。組織病理學(xué)對(duì)每種動(dòng)物的肝臟進(jìn)行組織病理學(xué)實(shí)驗(yàn)。
表D.1平均體重/組別/星期<
>
表D.2平均體重/組別/星期(續(xù))
<p>表D.3平均體重/組別/星期<
<p>表1來自雄性大鼠的肝切片的組織學(xué)評(píng)價(jià)樣品1
第5組對(duì)照組ELGA OPTION純化水嚴(yán)格食物攝取說明
C＝充血DHS ＝擴(kuò)散水腫細(xì)胞腫脹FHS ＝病灶水腫細(xì)胞腫脹NPL ＝無實(shí)質(zhì)性損害MLC ＝最小淋巴細(xì)胞成套1+ ＝輕微2+ ＝中等3+ ＝嚴(yán)重表2來自雄性大鼠的肝切片的組織學(xué)評(píng)價(jià)樣品2
第9組對(duì)照組ELGA OPTION 4純化水嚴(yán)格食物攝取說明<
C ＝充血DHS ＝擴(kuò)散水腫細(xì)胞腫脹FHS ＝病灶水腫細(xì)胞腫脹NPL ＝無實(shí)質(zhì)性損害MLC ＝最小淋巴細(xì)胞成套1+ ＝輕微2+ ＝中等3+ ＝嚴(yán)重在接收冷凍汁液及噴霧干燥汁液的實(shí)驗(yàn)用大鼠的肝臟切片中未記錄到特別的損害，所述汁液通過口服給藥。在對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組的大鼠中均記錄到的水腫細(xì)胞腫脹表明正常代謝細(xì)胞腫脹和缺氧變化。在某些大鼠中發(fā)現(xiàn)極少量淋巴細(xì)胞血管周成套的病灶，最可能是一種偶然觀察到的現(xiàn)象。在幾個(gè)大鼠中，在肝臟的竇狀隙中存在輕微程度的充血，其應(yīng)被看作是一種偶然觀察到的現(xiàn)象。
通過該研究的結(jié)果表明的本發(fā)明的一個(gè)重要特征是，在整個(gè)測試期間，未顯示出對(duì)任一種樣品的耐受性。這可提供重要功能，特別是采用本發(fā)明的化合物和組合物治療肥胖癥。
本發(fā)明的化合物和組合物主要被描述作食欲抑制劑，應(yīng)當(dāng)指出，“食欲抑制劑”這一描述用于本文中來提示會(huì)限制食欲和/或增加飽滿感，因此，可減少總熱量攝??；從而，可抵消肥胖。相應(yīng)地，本發(fā)明擴(kuò)大至治療、預(yù)防或抵抗人或非人動(dòng)物肥胖的方法，該使所述人或非人動(dòng)物服用治療、預(yù)防或抵抗肥胖有效量的式(2)化合物。本發(fā)明該方面的優(yōu)選實(shí)施方案利用了含式(1)化合物的組合物或提取物。
本發(fā)明中術(shù)語“動(dòng)物”擴(kuò)展至(但不限于)陪伴動(dòng)物，例如家庭寵物和養(yǎng)馴動(dòng)物；這種動(dòng)物的非限定性實(shí)例包括牛、羊、雪貂、豬、駱駝、馬、家禽、魚、兔子、山羊、狗和貓。
作為一種在治療或預(yù)防人體肥胖的減食欲物質(zhì)，式(2)的化合物優(yōu)選式(1)的化合物，或權(quán)利要求9及25-31中任一項(xiàng)定義的組合物，這些化合物或組合物的給藥劑量優(yōu)選為約0.01mg/kg/天至約10mg/kg/天。優(yōu)選劑量范圍為0.05mg/kg/天至約0.5mg/kg/天。當(dāng)采用來自本發(fā)明提取物的噴霧干燥粉末時(shí)，優(yōu)選的劑量范圍為0.1mg/kg/天至約20mg/kg/天。優(yōu)選劑量范圍為0.5mg/kg/天至約5mg/kg/天。
權(quán)利要求
1.一種Trichocaulon屬或火地亞屬植物提取物的制備方法，所述提取物包含食欲抑制劑，該方法包括下述步驟用一種溶劑處理收集到的植物原料以提取具有食欲抑制劑活性的成分，將提取溶液從其余植物原料中分離出來，從提取溶液中除去溶劑，回收提取物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中，Trichocaulon屬植物選自Trichocaulon piliferum和Trichocaulon officinale，火地亞屬植物選自火地亞currorii、火地亞gordonii和火地亞lugardii。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2的方法，包括進(jìn)一步用溶劑進(jìn)行提取以濃縮提取的物料中活性劑的步驟。
4.根據(jù)權(quán)利要求1、2或3的方法，其中，溶劑提取步驟中采用的溶劑為二氯甲烷、水、甲醇、己烷、乙酸乙酯或其混合物中的一種或多種。
5.根據(jù)權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)的方法，包括通過色譜分離法濃縮提取的物料中活性劑的步驟。
6.根據(jù)權(quán)利要求5的方法，其中，色譜分離法采用氯仿、甲醇、乙酸乙酯、己烷中的一種或多種作洗脫劑。
7.根據(jù)權(quán)利要求5或6的方法，包括在色譜柱上進(jìn)行色譜分離，收集來自色譜柱的餾分中的洗脫液，評(píng)價(jià)餾分以測定它們的食欲抑制劑活性，選擇至少一種含有食欲抑制劑的餾分。
8.根據(jù)前述任一項(xiàng)權(quán)利要求的方法，其中，將提取物進(jìn)行處理以形成自由流動(dòng)的粉末。
9.一種由前述任一項(xiàng)權(quán)利要求的方法生產(chǎn)的含有食欲抑制劑的提取物。
10.一種具有食欲抑制劑活性的組合物，其包含權(quán)利要求9的提取物。
11.根據(jù)權(quán)利要求10的組合物，其含有可藥用賦形劑、稀釋劑或載體。
12.根據(jù)權(quán)利要求10或11的組合物，其被制備成單位劑量形式。
13.權(quán)利要求9的提取物在生產(chǎn)具有食欲抑制劑活性的藥物中的用途。
14.用作具有食欲抑制劑活性藥物的權(quán)利要求9的提取物。
15.一種抑制食欲的方法，包括向人或動(dòng)物給藥有效劑量的權(quán)利要求10、11或12的組合物。
16.一種Trichocaulon屬或火地亞屬植物提取物的制備方法，所述提取物包含食欲抑制劑，該方法包括下述步驟壓榨收集到的植物原料以從固體植物原料中分離出汁液，回收不含固體植物原料的汁液以形成提取物。
17.根據(jù)權(quán)利要求16的方法，其中，將提取物干燥形成自由流動(dòng)的粉末。
18.一種由權(quán)利要求16或17的方法生產(chǎn)的含有食欲抑制劑的提取物。
19.一種具有食欲抑制劑活性的組合物，其包含權(quán)利要求18的提取物。
20.根據(jù)權(quán)利要求19的組合物，其含有可藥用賦形劑、稀釋劑或載體。
21.根據(jù)權(quán)利要求19或20的組合物，其被制備成單位劑量形式。
22.權(quán)利要求19的提取物在生產(chǎn)具有食欲抑制劑活性的藥物中的用途。
23.用作具有食欲抑制劑活性藥物的權(quán)利要求18的提取物。
24.一種抑制食欲的方法，包括向人或動(dòng)物給藥有效劑量的權(quán)利要求19、20或21的組合物。
25.一種可由Trichocaulon屬或火地亞屬植物獲得的提取物，其包含具有下式的食欲抑制劑
26.根據(jù)權(quán)利要求25的提取物，其中，Trichocaulon屬植物選自Trichocaulon piliferum和Trichocaulon officinale，火地亞屬植物選自火地亞currorii、火地亞gordonii和火地亞lugardii。
27.根據(jù)權(quán)利要求26的提取物，其中，基本上所有的非活性雜質(zhì)被除去。
28.根據(jù)權(quán)利要求25-27任一項(xiàng)的提取物，該提取物被加工成自由流動(dòng)的粉末。
29.一種具有食欲抑制劑活性的組合物，其包含權(quán)利要求25-28任一項(xiàng)的提取物。
30.根據(jù)權(quán)利要求29的組合物，其含有可藥用賦形劑、稀釋劑或載體。
31.根據(jù)權(quán)利要求29或30的組合物，其被制備成單位劑量形式。
32.權(quán)利要求25-28任一項(xiàng)的提取物在生產(chǎn)具有食欲抑制劑活性的藥物中的用途。
33.用作具有食欲抑制劑活性藥物的權(quán)利要求25-28任一項(xiàng)的提取物。
34.一種抑制食欲的方法，包括向人或動(dòng)物給藥有效劑量的權(quán)利要求29、30或31的組合物。
35.一種具有以下結(jié)構(gòu)式的化合物
其中，R為烷基；R1為氫、烷基、甲基巴豆?；?、苯甲?；蛉我环N其它的有機(jī)酯基團(tuán)；R2為氫，或6-脫氧糖中的一種或多種，或2，6-二脫氧糖中的一種或多種，或葡萄糖分子，或其組合；其中，虛線代表在C4-C5或C5-C6間可選擇性地存在另一個(gè)鍵。
36.根據(jù)權(quán)利要求35的化合物，其中，在C5-C6間存在鍵，R為甲基，R1為甲基巴豆?；?，R2為3-O-[-β-D-吡喃黃夾竹桃糖基-(1→4)-β-D-吡喃磁麻糖基-(1→4)-β-D-吡喃磁麻糖基]，化合物具有下述結(jié)構(gòu)式
37.一種具有下述結(jié)構(gòu)式的化合物
其中，R為烷基；R1為氫、烷基、甲基巴豆?；?、苯甲酰基或任一種其它的有機(jī)酯基團(tuán)；R2為氫，或6-脫氧糖中的一種或多種，或2，6-二脫氧糖中的一種或多種，或葡萄糖分子，或其組合；其中，虛線代表在C4-C5或C5-C6間可選擇性地存在另一個(gè)鍵。
38.一種具有下述結(jié)構(gòu)式的化合物
其中，R為烷基；R1為氫、烷基、甲基巴豆?；?、苯甲?；蛉我环N其它的有機(jī)酯基團(tuán)。
39.一種具有下述結(jié)構(gòu)式的化合物
其中，R為烷基；R1為氫、烷基、甲基巴豆?；⒈郊柞；蛉我环N其它的有機(jī)酯基團(tuán)。
40.一種具有下述結(jié)構(gòu)式的化合物
其中，R為烷基；R1為氫、烷基、甲基巴豆?；?、苯甲?；蛉我环N其它的有機(jī)酯基團(tuán)。
41.一種具有下述結(jié)構(gòu)式的化合物
其中，R為烷基；R1為氫、烷基、甲基巴豆?；?、苯甲酰基或任一種其它的有機(jī)酯基團(tuán)。
42.一種具有下述結(jié)構(gòu)式的化合物
其中，R為烷基；R1為氫、烷基、甲基巴豆?；?、苯甲?；蛉我环N其它的有機(jī)酯基團(tuán)；R2為氫，或6-脫氧糖中的一種或多種，或2，6-二脫氧糖中的一種或多種，或葡萄糖分子，或其組合；其中，虛線代表在C4-C5或C5-C6間可選擇性地存在另一個(gè)鍵。
43.一種具有下述結(jié)構(gòu)式的化合物
其中，R為烷基；R1為氫、烷基、甲基巴豆酰基、苯甲?；蛉我环N其它的有機(jī)酯基團(tuán)；R2為氫，或6-脫氧糖中的一種或多種，或2，6-二脫氧糖中的一種或多種，或葡萄糖分子，或其組合；其中，虛線代表在C4-C5或C5-C6間存在另一個(gè)鍵。
44.一種具有下述結(jié)構(gòu)式的化合物
其中，R為烷基；R1為氫、烷基、甲基巴豆?；⒈郊柞；蛉我环N其它的有機(jī)酯基團(tuán)；R2為氫，或6-脫氧糖中的一種或多種，或2，6-二脫氧糖中的一種或多種，或葡萄糖分子，或其組合；其中，虛線代表在C4-C5或C5-C6間可選擇性地存在另一個(gè)鍵。
45.一種具有下述結(jié)構(gòu)式的化合物
其中，R為烷基；R1為氫、烷基、甲基巴豆?；⒈郊柞；蛉我环N其它的有機(jī)酯基團(tuán)；R2為氫，或6-脫氧糖中的一種或多種，或2，6-二脫氧糖中的一種或多種，或葡萄糖分子，或其組合；其中，虛線代表在C4-C5、C5-C6或C14-C15間可選擇性地存在另一個(gè)鍵。
46.一種具有下述結(jié)構(gòu)式的化合物
其中，R為烷基；R1為氫、烷基、甲基巴豆?；?、苯甲?；蛉我环N其它的有機(jī)酯基團(tuán)；R2為氫，或6-脫氧糖中的一種或多種，或2，6-二脫氧糖中的一種或多種，或葡萄糖分子，或其組合；其中，虛線代表在C4-C5、C5-C6或C14-C15間可選擇性地存在另一個(gè)鍵。
47.一種具有下述結(jié)構(gòu)式的化合物
其中，R為烷基；R1為氫、烷基、甲基巴豆?；?、苯甲?；蛉我环N其它的有機(jī)酯基團(tuán)；R2為氫，或6-脫氧糖中的一種或多種，或2，6-二脫氧糖中的一種或多種，或葡萄糖分子，或其組合；其中，虛線代表在C4-C5、C5-C6或C14-C15間可選擇性地存在另一個(gè)鍵；R3為氫、烷基、芳基、?；蚱咸茄趸?glucoxy)。
48.一種具有下述結(jié)構(gòu)式的化合物
其中，R為氫、烷基、芳基或在C14位上具有β羥基，在C12位上具有β羥基官能團(tuán)，C17位具有?；?，C5-C6位具有烯鍵的甾族基團(tuán)，或其組合。
49.一種制備下式的甾族中間體的方法
該方法包括下述步驟(a)用還原劑處理下述化合物
產(chǎn)生下式的化合物3β，12β-二羥基-20，20-亞乙二氧基孕-5，14-二烯
(b)用N-溴乙酰胺(NBA)和一種堿處理化合物(23)，產(chǎn)生下式的化合物3β，12β-二羥基-14，15-環(huán)氧-20，20-亞乙二氧基孕-5-烯
(c)用一種還原劑處理化合物(24)，產(chǎn)生下式的化合物3β，12β，14β-三羥基-20，20-亞乙二氧基孕-5-烯
(d)用一種酸與水處理化合物(25)，產(chǎn)生化合物(15)。
50.一種用于制備化合物(15)的方法，該方法包括下述步驟(a)用對(duì)甲苯磺酰氯和一種堿處理化合物(22)產(chǎn)生下式的化合物3β，12β-二羥基-20，20-亞乙二氧基孕-5，14-二烯-3-甲苯磺?；?12-乙酸酯
(b)用溶劑中的乙酸鉀處理化合物(26)，產(chǎn)生下式的化合物6β，12β-二羥基-20，20-亞乙二氧基-3，5α-環(huán)孕-14-烯-12-乙酸酯
(c)用一種還原劑處理化合物(27)，產(chǎn)生下式的化合物6β，12β-二羥基-20，20-亞乙二氧基-3，5α-環(huán)孕-14-烯
(d)用N-溴乙酰胺和一種堿處理化合物(28)，產(chǎn)生下式的化合物6β，12β-二羥基-14，15-環(huán)氧-3，5α-環(huán)孕烷
(e)用一種還原劑處理化合物(29)，產(chǎn)生下式的化合物6β，12β，14β-三羥基-20，20-亞乙二氧基-3，5α-環(huán)孕烷
(f)用一種酸和一種溶劑處理化合物(30)，產(chǎn)生化合物(15)。
51.一種單糖磁麻糖形式的糖中間體的制備方法，該方法包含下述步驟(i)用PhSSiMe3、ZnI2和Bu4+I-處理下式的化合物
產(chǎn)生下式的化合物4-O-苯甲?；?3-O-甲基-6-脫氧-αβ-D-苯硫基阿卓糖苷
(ii)選擇性地，用二乙氨基三氟化硫(DAST)處理化合物(37)，產(chǎn)生下式的化合物4-O-苯甲?；?3-O-甲基-2-苯硫基-2，6-二脫氧-αβ-D-氟代吡喃磁麻糖苷
或(iii)選擇性地，用溶劑中的叔丁基二甲基甲硅烷基氯和咪唑處理化合物(37)，產(chǎn)生下式的化合物4-O-苯甲酰基-3-O-甲基-2-O-叔丁基二甲基甲硅烷基-αβ-D-苯硫基阿卓糖苷
其中，Z＝TBDMS＝叔丁基二甲基甲硅烷基；(iv)用一種堿處理化合物(39)，產(chǎn)生下式的化合物單糖3-O-甲基-2-O-叔丁基二甲基甲硅烷基-αβ-D-苯硫基阿卓糖苷
其中，Z＝TBDMS＝叔丁基二甲基甲硅烷基。
52.一種活化黃夾竹桃糖形式的糖中間體的制備方法，該方法包含下述步驟(i)用苯硫基三甲基硅烷和三甲基甲硅烷基三氟甲磺酸酯處理下式的化合物
產(chǎn)生下式的化合物4-O-苯甲?；?3-O-甲基-1-苯硫基-6-脫氧-αβ-吡喃葡糖苷
(ii)用新戊酰氯和一種溶劑處理化合物(48)，產(chǎn)生下式的化合物4-O-苯甲酰基-3-O-甲基-2-O-新戊?；?1-苯硫基-6-脫氧-αβ-吡喃葡糖苷
(iii)用溴化劑和二乙氨基三氟化硫處理化合物(49)，產(chǎn)生下式的化合物4-O-苯甲?；?3-O-甲基-2-O-新戊酰基-1-氟-6-脫氧-β-吡喃葡糖苷，其為立體異構(gòu)體
53.一種由權(quán)利要求49或50的方法生產(chǎn)的式(15)的甾族中間體。
54.一種由權(quán)利要求51的方法生產(chǎn)的式(40)的糖中間體。
55.一種由權(quán)利要求52的方法生產(chǎn)的式(50A)或式(50B)的糖中間體。
56.一種使單糖磁麻糖與甾族中間體進(jìn)行偶聯(lián)的方法，該方法包括下述步驟(i)在氯化錫存在下，在溶劑中，使式(38)的磁麻糖與權(quán)利要求53所述的式(15)的甾族中間體進(jìn)行反應(yīng)，產(chǎn)生下式的化合物3-O-[4-O-苯甲?；?2-苯硫基-β-D-吡喃磁麻糖基]-12，14-β-二羥基孕-5-烯-20-酮
(ii)用吡啶中的甲基巴豆酰氯和用堿處理化合物(51)，產(chǎn)生下式的化合物3-O-[2-苯硫基-β-D-吡喃磁麻糖基]-12β-甲基巴豆酰基-14β-羥基孕-5-烯-20-酮
57.一種權(quán)利要求56的方法生產(chǎn)的式(52)的化合物。
58.一種使單糖磁麻糖與單糖黃夾竹桃糖偶聯(lián)，并使形成的二糖與權(quán)利要求57所述的式(52)的化合物進(jìn)行偶聯(lián)的方法，該方法包括下述步驟(i)采用氯化錫和三氟甲磺酸銀，使如權(quán)利要求54所述的式(40)的選擇性保護(hù)的磁麻糖與如權(quán)利要求55所述式(50A)的單糖黃夾竹桃糖偶聯(lián)，產(chǎn)生下式的化合物
其中，Z＝TBDMS＝叔丁基二甲基甲硅烷基；(ii)用四丁基氟化銨處理化合物(53)，產(chǎn)生下式的化合物
(iii)用二乙氨基三氟化硫處理化合物(54)，產(chǎn)生下式的化合物
(iv)使化合物(55)與如權(quán)利要求57所述的化合物(52)反應(yīng)，產(chǎn)生下式的化合物
(v)在雷內(nèi)鎳反應(yīng)中處理化合物(56)，再用堿處理，產(chǎn)生如權(quán)利要求36所述的化合物(1)。
59.一種形成三糖并使所形成的三糖與甾族中間體偶聯(lián)的方法，該方法包括下述步驟(i)采用氯化錫、AgOTf、Cp2ZrCl2使如權(quán)利要求55所述的式(40)的選擇性保護(hù)的磁麻糖與化合物(45)偶聯(lián)，產(chǎn)生下式的化合物
其中，Z＝TBDMS＝叔丁基二甲基甲硅烷基；(ii)用四丁基氟化銨和二乙氨基三氟化硫處理化合物(57)，產(chǎn)生下式的三糖化合物
(iii)采用氯化錫、AgOTf、Cp2ZrCl2使式(58)的三糖與下式的甾族中間體偶聯(lián)
產(chǎn)生如權(quán)利要求36所述的化合物(1)。
60.一種具有食欲抑制劑活性的組合物，其包含權(quán)利要求35-48任一項(xiàng)的化合物。
61.根據(jù)權(quán)利要求60的組合物，其中，化合物為權(quán)利要求36所述的式(1)的化合物。
62.根據(jù)權(quán)利要求60或61的組合物，其含有可藥用賦形劑、稀釋劑或載體。
63.根據(jù)權(quán)利要求60、61或62的組合物，其被制備成單位劑量形式。
64.權(quán)利要求35-48任一項(xiàng)的化合物在生產(chǎn)具有食欲抑制劑活性的藥物中的用途。
65.權(quán)利要求36所述式(1)的化合物如權(quán)利要求64的用途。
66.用作具有食欲抑制劑活性藥物的權(quán)利要求35-48任一項(xiàng)的化合物。
67.根據(jù)權(quán)利要求66的化合物，其是權(quán)利要求36所述的式(1)的化合物。
68.一種抑制食欲的方法，包括向人或動(dòng)物給藥有效劑量的權(quán)利要求60-63任一項(xiàng)的化合物。
69.一種食品或飲料，其包含當(dāng)攝取時(shí)具有食欲抑制劑作用的權(quán)利要求35-48任一項(xiàng)的有效量化合物。
70.根據(jù)權(quán)利要求69的食品或飲料，其中，化合物為權(quán)利要求36所述的式(1)的化合物。
71.如權(quán)利要求36所述式(1)化合物在用于生產(chǎn)具有食欲抑制劑活性的藥物中的用途，所述式(1)化合物是從Trichocaulon屬或火地亞屬植物分離得到的。
72.根據(jù)權(quán)利要求71的用途，其中，化合物是由Trichocaulonpiliferum或Trichocaulon officinale，或者從火地亞currorii、火地亞gordonii或火地亞lugardii分離得到的。
73.一種具有食欲抑制劑活性的組合物，其包含由Trichocaulon屬或火地亞屬植物分離得到的式(1)化合物。
74.根據(jù)權(quán)利要求73的組合物，其中，化合物是由Trichocaulonpiliferum或Trichocaulon officinale，或者從火地亞currorii、火地亞gordonii或火地亞lugardii分離/提純得到的。
75.根據(jù)權(quán)利要求73的組合物，其中，化合物是由從Trichocaulonpiliferum或Trichocaulon officinale，或者從火地亞currorii、火地亞gordonii或火地亞lugardii的植物得到的提取物中分離/提純得到的。
76.根據(jù)權(quán)利要求73、74或75的組合物，其含有可藥用賦形劑、稀釋劑或載體。
77.根據(jù)權(quán)利要求76的組合物，其被制備成單位劑量形式。
78.用作具有食欲抑制劑活性藥物的、由Trichocaulon屬或火地亞屬植物分離出的權(quán)利要求35的式(1)的化合物。
79.根據(jù)權(quán)利要求78的化合物，其中，化合物是由Trichocaulonpiliferum或Trichocaulon officinale，或者從火地亞currorii、火地亞gordonii或火地亞lugardii種植物分離出的化合物。
80.一種抑制食欲的方法，包括向人或動(dòng)物給藥有效劑量的權(quán)利要求73-77任一項(xiàng)的組合物。
81.一種具有食欲抑制劑活性的組合物，其包含黑皮質(zhì)素(melanocortin)4受體激動(dòng)劑。
82.根據(jù)權(quán)利要求81的組合物，其中，激動(dòng)劑為權(quán)利要求9、18或25中的提取物，或權(quán)利要求35-48中任一項(xiàng)的化合物。
83.根據(jù)權(quán)利要求81或82的組合物，其中，化合物為權(quán)利要求36的式(1)的化合物。
84.根據(jù)權(quán)利要求81、82或83的組合物，其中，其含有可藥用賦形劑、稀釋劑或載體。
85.根據(jù)權(quán)利要求81-84任一項(xiàng)的組合物，其被制備成單位劑量形式。
86.黑皮質(zhì)素4受體激動(dòng)劑在生產(chǎn)具有食欲抑制劑活性的藥物中的用途。
87.權(quán)利要求9、18或25所述的提取物或權(quán)利要求35-48任一項(xiàng)所述的化合物如權(quán)利要求86的用途。
88.權(quán)利要求36所述的式(1)化合物如權(quán)利要求87的用途。
89.用作具有食欲抑制劑活性的藥物的黑皮質(zhì)素4受體激動(dòng)劑。
90.如權(quán)利要求89的黑皮質(zhì)素4受體激動(dòng)劑，其是權(quán)利要求9、18或25的提取物，或?yàn)闄?quán)利要求35-48任一項(xiàng)的化合物。
91.如權(quán)利要求90的黑皮質(zhì)素4受體激動(dòng)劑，其是權(quán)利要求36的式(1)的化合物。
92.一種抑制食欲的方法，包括向人或動(dòng)物給藥有效劑量的權(quán)利要求81-85任一項(xiàng)的組合物。
93.黑皮質(zhì)素4受體激動(dòng)劑抑制人或動(dòng)物食欲和/或減肥的用途。
94.權(quán)利要求9、18或25所述的提取物或權(quán)利要求35-48任一項(xiàng)所述的化合物如權(quán)利要求93的用途。
95.權(quán)利要求36的式(1)的化合物如權(quán)利要求94的用途。
96.一種具有下述結(jié)構(gòu)式的化合物
97.一種具有下述結(jié)構(gòu)式的化合物
98.一種具有下述結(jié)構(gòu)式的化合物
99.一種具有下述結(jié)構(gòu)式的化合物
100.一種具有下述結(jié)構(gòu)式的化合物
101.一種具有下述結(jié)構(gòu)式的化合物
102.一種具有下述結(jié)構(gòu)式的化合物
103.一種具有下述結(jié)構(gòu)式的化合物
104.一種具有下述結(jié)構(gòu)式的化合物
105.一種具有下述結(jié)構(gòu)式的化合物
106.一種具有下述結(jié)構(gòu)式的化合物
107.一種具有下述結(jié)構(gòu)式的化合物
108.一種具有下述結(jié)構(gòu)式的化合物
109.一種具有下述結(jié)構(gòu)式的化合物
110.一種具有下述結(jié)構(gòu)式的化合物
111.一種具有下述結(jié)構(gòu)式的化合物
112.一種具有下述結(jié)構(gòu)式的化合物
113.一種具有下述結(jié)構(gòu)式的化合物
114.一種具有下述結(jié)構(gòu)式的化合物
115.一種具有下述結(jié)構(gòu)式的化合物
116.一種具有下述結(jié)構(gòu)式的化合物
117.一種具有下述結(jié)構(gòu)式的化合物
118.一種人或動(dòng)物減肥方法，包括向人或動(dòng)物給藥減肥有效量的權(quán)利要求9、25、26、27或28任一項(xiàng)的提取物。
119.一種人或動(dòng)物減肥方法，包括向人或動(dòng)物給藥減肥有效量的權(quán)利要求10的組合物。
120.一種人或動(dòng)物減肥方法，包括向人或動(dòng)物給藥減肥有效量的權(quán)利要求35或36的化合物。
121.一種結(jié)構(gòu)式3-O-β-D-黃夾竹桃糖基-(1→4)-β-D-吡喃磁麻糖基-(1→4)-β-D-吡喃磁麻糖苷-12β-O-甲基巴豆?；?14β-羥基-孕-5-烯-20-酮的化合物。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種包含由Trichocaulon屬或火地亞屬植物可獲得的提取物的藥物組合物,所述植物含有(1)的食欲抑制劑。本發(fā)明還公開了獲得提取物的方法和合成化合物(1)和其類似物及衍生物的方法。本發(fā)明也涉及這種提取物和化合物(1)及其類似物在生產(chǎn)具有食欲抑制劑活性的藥物中的用途。本發(fā)明還涉及用于合成化合物(1)的新的中間體。
文檔編號(hào)A23L1/307GK1252000SQ9880416
公開日2000年5月3日 申請(qǐng)日期1998年4月15日 優(yōu)先權(quán)日1997年4月15日
發(fā)明者F·R·范希爾丹, R·烏萊加爾, R·M·霍拉克, R·A·里爾蒙斯, V·瑪哈耶, R·D維塔爾 申請(qǐng)人:Csir公司